CN109679873A - 一种粘质沙雷氏菌代谢产物及作为水产免疫增强剂的应用 - Google Patents

一种粘质沙雷氏菌代谢产物及作为水产免疫增强剂的应用 Download PDF

Info

Publication number
CN109679873A
CN109679873A CN201910032527.5A CN201910032527A CN109679873A CN 109679873 A CN109679873 A CN 109679873A CN 201910032527 A CN201910032527 A CN 201910032527A CN 109679873 A CN109679873 A CN 109679873A
Authority
CN
China
Prior art keywords
serratia marcescens
sucrose
flag
metabolite
culture medium
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201910032527.5A
Other languages
English (en)
Inventor
杨移斌
艾晓辉
董靖
杨秋红
胥宁
刘永涛
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Yangtze River Fisheries Research Institute CAFS
Original Assignee
Yangtze River Fisheries Research Institute CAFS
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Yangtze River Fisheries Research Institute CAFS filed Critical Yangtze River Fisheries Research Institute CAFS
Priority to CN201910032527.5A priority Critical patent/CN109679873A/zh
Publication of CN109679873A publication Critical patent/CN109679873A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K61/00—Culture of aquatic animals
    • A01K61/10—Culture of aquatic animals of fish
    • A01K61/13—Prevention or treatment of fish diseases
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P1/00—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes
    • C12P1/04—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes by using bacteria
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/425—Serratia
    • C12R2001/43—Serratia marcescens
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A40/00—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production
    • Y02A40/80—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production in fisheries management
    • Y02A40/81—Aquaculture, e.g. of fish

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Biodiversity & Conservation Biology (AREA)
  • Animal Husbandry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Marine Sciences & Fisheries (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明公开了一种粘质沙雷氏菌代谢产物及作为水产免疫增强剂的应用，利用粘质沙雷氏菌ATCC14756获得代谢产物，无需纯化分离，可直接作为水产免疫增强剂使用，对水产动物具有极好的免疫保护效果。本发明避免了繁琐的提取纯化过程，产物制备效率高，适于产业化推广。

Description

一种粘质沙雷氏菌代谢产物及作为水产免疫增强剂的应用
技术领域
本发明涉及一种粘质沙雷氏菌代谢产物，具体涉及一种粘质沙雷氏菌代谢产物及作为水产免疫增强剂的应用，属于水产养殖技术领域。
背景技术
对于水产养殖来说，提高养殖动物的免疫力非常重要。目前提高养殖动物免疫力的常见措施如下：
1、注射疫苗，使养殖动物体内产生抗体，以增强其免疫力；
2、泼洒生物制剂改良水质，通常是利用益生菌消除水体中的氨氮和亚硝酸盐等有害成分，使养殖水体得到净化，从而使养殖动物在优良的水环境下保持良好的健康状态以增强其免疫力；
3、在饲料中添加微量元素，利用微量元素调节养殖动物体内免疫酶的活性，合使疫力得到增强；
4、在饲料中添加Vc等维生素含量，增强抗病能力；
5、在饲料中添加β-葡聚糖、虾青素等促进免疫器官发育的免疫调节剂，以提高免疫力；
6、增加营养供给，确保营养平衡，以提高免疫力；
7、通过种植水草、降低养殖密度和合理投喂等技术措施的应用，可改良养殖动物的生存环境，提高其抗应急能力和降低其发病率。
这些技术措施主要是通过改良养殖环境和调节动物营养状况来实现提高免疫力，免疫力提高程度有限，而且一旦在养殖体系内出现病症，会很难抵御疾病的扩散。
目前有报道粘质沙雷氏菌的红色代谢产物灵菌红素，其是一类具有多吡咯环的天然红色素的总称，分子结构通常都有3个吡咯环组成的甲氧基吡咯骨架结构，具有抗肿瘤、免疫抑制、抗菌性、抗疟疾性等多种生物学活性。但是，一方面灵菌红素的提取纯化过程繁琐且效率低下，不适于产业化推广；另一方面灵菌红素对水产生物的免疫增强作用有限，故申请人对粘质沙雷氏菌代谢产物应用于水产免疫增强剂进行了更深层次的研究。
发明内容
本发明的目的是为克服上述现有技术的不足，提供一种粘质沙雷氏菌代谢产物及作为水产免疫增强剂的应用。
为实现上述目的，本发明采用下述技术方案：
一种粘质沙雷氏菌代谢产物，是通过以下方法制备得到的：粘质沙雷氏菌ATCC14756活化后接种于种子培养基中，27～33℃培养12～18小时，得菌株种子液；取菌株种子液接种于发酵培养基中，27～33℃、180～200rpm/min振荡培养，离心，收集发酵上清液，沉淀，即得一种粘质沙雷氏菌代谢产物；
其中，种子培养基的配方为：胰蛋白胨8～12g，酪蛋白胨8～10g，可溶性淀粉6～9g，6波美麦芽汁400～500mL，海水晶3～5g，醋酸铵2～4g，FeSO4 0.2～0.3g，CaCl2 3～4g，蒸馏水900～1100mL，pH＝6.8～7.2，121℃灭菌20～30分钟；发酵培养基的配方为：酵母浸膏4～6g，13C标记蔗糖0.2～0.3g，MgSO4·7H2O 5～8g，NaNO3 5～8g，KCl 8～12g，蒸馏水900～1100mL，pH＝6.8～7.2，121℃灭菌20～30分钟；13C标记蔗糖耗尽时结束培养。
优选的，利用LB培养基进行活化处理，具体方法是：将粘质沙雷氏菌ATCC14756从保藏菌种的试管斜面中取出转移至LB培养基上，28℃恒温箱中倒置培养24～72小时即可。
进一步优选的，粘质沙雷氏菌ATCC14756转移至LB培养基的接种量为体积百分数2～3％。
优选的，发酵培养为通气培养，其空气通量为10～12L/min。
优选的，菌株种子液在发酵培养基中的接种量为体积百分数6～8％。
优选的，制备发酵培养基时先加入1/2配方量的13C标记蔗糖，振荡培养过程中监测13C标记蔗糖的用量，13C标记蔗糖耗尽时分批补加剩余量的13C标记蔗糖，直至所有的13C标记蔗糖全部耗尽，培养结束。
进一步优选的，13C标记蔗糖的补加次数为3～5次，每次补加量相同。
优选的，离心条件为：8000～12000rpm/min离心15～20分钟。
优选的，沉淀方法为：利用质量浓度50～80％硫酸铵进行沉淀并收集。
上述一种粘质沙雷氏菌代谢产物作为水产免疫增强剂的应用。
优选的，所述水产免疫增强剂适用于鱼、虾、蟹。
本发明的有益效果：
本发明利用粘质沙雷氏菌ATCC14756获得代谢产物，无需纯化分离，可直接作为水产免疫增强剂使用，对水产动物具有极好的免疫保护效果。本发明避免了繁琐的提取纯化过程，产物制备效率高，适于产业化推广。
本发明调整了种子培养基和发酵培养基的配方组成，调节粘质沙雷氏菌ATCC14756的代谢反应方向和代谢程度，特别在发酵培养步骤，通过13C标记蔗糖的消耗控制培养节奏和发酵程度，获得本发明特有的一种代谢产物(混合物)，经试验验证，该代谢产物对水产动物具有良好的免疫增强作用。
另外，制备发酵培养基时先加入一部分13C标记蔗糖，振荡培养过程中监测13C标记蔗糖的用量，13C标记蔗糖耗尽时分批补加剩余量的13C标记蔗糖，直至所有的13C标记蔗糖全部耗尽，培养结束。如此操作可以进一步优化代谢节奏，所得代谢产物对水产动物的免疫增强效果更佳。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明进行进一步的阐述，应该说明的是，下述说明仅是为了解释本发明，并不对其内容进行限定。
本发明的粘质沙雷氏菌ATCC14756，购自上海北诺生物科技有限公司。
实施例1：
一种粘质沙雷氏菌代谢产物，是通过以下方法制备得到的：粘质沙雷氏菌ATCC14756活化后接种于种子培养基中，27℃培养12小时，得菌株种子液；取菌株种子液接种于发酵培养基中，27℃、180rpm/min振荡培养，离心，收集发酵上清液，沉淀，即得一种粘质沙雷氏菌代谢产物；
其中，种子培养基的配方为：胰蛋白胨8g，酪蛋白胨8g，可溶性淀粉6g，6波美麦芽汁400mL，海水晶3g，醋酸铵2g，FeSO4 0.2g，CaCl2 3g，蒸馏水900mL，pH＝6.8，121℃灭菌20分钟；发酵培养基的配方为：酵母浸膏4g，13C标记蔗糖0.2g，MgSO4·7H2O 5g，NaNO3 5g，KCl8g，蒸馏水900mL，pH＝6.8，121℃灭菌20分钟；13C标记蔗糖耗尽时结束培养。
利用LB培养基进行活化处理，具体方法是：将粘质沙雷氏菌ATCC14756从保藏菌种的试管斜面中取出转移至LB培养基上，28℃恒温箱中倒置培养24小时即可。粘质沙雷氏菌ATCC14756转移至LB培养基的接种量为体积百分数2％。
发酵培养为通气培养，其空气通量为10L/min。
菌株种子液在发酵培养基中的接种量为体积百分数6％。
离心条件为：8000rpm/min离心15分钟。
沉淀方法为：利用质量浓度50％硫酸铵进行沉淀并收集。
实施例2：
一种粘质沙雷氏菌代谢产物，是通过以下方法制备得到的：粘质沙雷氏菌ATCC14756活化后接种于种子培养基中，33℃培养18小时，得菌株种子液；取菌株种子液接种于发酵培养基中，33℃、200rpm/min振荡培养，离心，收集发酵上清液，沉淀，即得一种粘质沙雷氏菌代谢产物；
其中，种子培养基的配方为：胰蛋白胨12g，酪蛋白胨10g，可溶性淀粉9g，6波美麦芽汁500mL，海水晶5g，醋酸铵4g，FeSO4 0.3g，CaCl2 4g，蒸馏水1100mL，pH＝7.2，121℃灭菌30分钟；发酵培养基的配方为：酵母浸膏6g，13C标记蔗糖0.3g，MgSO4·7H2O 8g，NaNO3 8g，KCl 12g，蒸馏水1100mL，pH＝7.2，121℃灭菌30分钟；13C标记蔗糖耗尽时结束培养。
利用LB培养基进行活化处理，具体方法是：将粘质沙雷氏菌ATCC14756从保藏菌种的试管斜面中取出转移至LB培养基上，28℃恒温箱中倒置培养72小时即可。粘质沙雷氏菌ATCC14756转移至LB培养基的接种量为体积百分数3％。
发酵培养为通气培养，其空气通量为12L/min。
菌株种子液在发酵培养基中的接种量为体积百分数8％。
离心条件为：12000rpm/min离心20分钟。
沉淀方法为：利用质量浓度80％硫酸铵进行沉淀并收集。
实施例3：
一种粘质沙雷氏菌代谢产物，是通过以下方法制备得到的：粘质沙雷氏菌ATCC14756活化后接种于种子培养基中，27℃培养18小时，得菌株种子液；取菌株种子液接种于发酵培养基中，27℃、200rpm/min振荡培养，离心，收集发酵上清液，沉淀，即得一种粘质沙雷氏菌代谢产物；
其中，种子培养基的配方为：胰蛋白胨8g，酪蛋白胨10g，可溶性淀粉6g，6波美麦芽汁500mL，海水晶3g，醋酸铵4g，FeSO4 0.2g，CaCl2 4g，蒸馏水900mL，pH＝7.2，121℃灭菌20分钟；发酵培养基的配方为：酵母浸膏6g，13C标记蔗糖0.2g，MgSO4·7H2O 8g，NaNO3 5g，KCl12g，蒸馏水900mL，pH＝7.2，121℃灭菌20分钟；13C标记蔗糖耗尽时结束培养。
利用LB培养基进行活化处理，具体方法是：将粘质沙雷氏菌ATCC14756从保藏菌种的试管斜面中取出转移至LB培养基上，28℃恒温箱中倒置培养72小时即可。粘质沙雷氏菌ATCC14756转移至LB培养基的接种量为体积百分数2％。
发酵培养为通气培养，其空气通量为12L/min。
菌株种子液在发酵培养基中的接种量为体积百分数6％。
制备发酵培养基时先加入1/2配方量的13C标记蔗糖，振荡培养过程中监测13C标记蔗糖的用量，13C标记蔗糖耗尽时分批补加剩余量的13C标记蔗糖，直至所有的13C标记蔗糖全部耗尽，培养结束。13C标记蔗糖的补加次数为5次，每次补加量相同。
离心条件为：8000rpm/min离心20分钟。
沉淀方法为：利用质量浓度50％硫酸铵进行沉淀并收集。
实施例4：
一种粘质沙雷氏菌代谢产物，是通过以下方法制备得到的：粘质沙雷氏菌ATCC14756活化后接种于种子培养基中，33℃培养12小时，得菌株种子液；取菌株种子液接种于发酵培养基中，33℃、180rpm/min振荡培养，离心，收集发酵上清液，沉淀，即得一种粘质沙雷氏菌代谢产物；
其中，种子培养基的配方为：胰蛋白胨12g，酪蛋白胨8g，可溶性淀粉9g，6波美麦芽汁400mL，海水晶5g，醋酸铵2g，FeSO4 0.3g，CaCl2 3g，蒸馏水1100mL，pH＝6.8，121℃灭菌30分钟；发酵培养基的配方为：酵母浸膏4g，13C标记蔗糖0.3g，MgSO4·7H2O 5g，NaNO3 8g，KCl8g，蒸馏水1100mL，pH＝6.8，121℃灭菌30分钟；13C标记蔗糖耗尽时结束培养。
利用LB培养基进行活化处理，具体方法是：将粘质沙雷氏菌ATCC14756从保藏菌种的试管斜面中取出转移至LB培养基上，28℃恒温箱中倒置培养24小时即可。粘质沙雷氏菌ATCC14756转移至LB培养基的接种量为体积百分数3％。
发酵培养为通气培养，其空气通量为10L/min。
菌株种子液在发酵培养基中的接种量为体积百分数8％。
制备发酵培养基时先加入1/2配方量的13C标记蔗糖，振荡培养过程中监测13C标记蔗糖的用量，13C标记蔗糖耗尽时分批补加剩余量的13C标记蔗糖，直至所有的13C标记蔗糖全部耗尽，培养结束。13C标记蔗糖的补加次数为3次，每次补加量相同。
离心条件为：8000～12000rpm/min离心20分钟。
沉淀方法为：利用质量浓度50％硫酸铵进行沉淀并收集。
实施例5：
一种粘质沙雷氏菌代谢产物，是通过以下方法制备得到的：粘质沙雷氏菌ATCC14756活化后接种于种子培养基中，30℃培养15小时，得菌株种子液；取菌株种子液接种于发酵培养基中，30℃、200rpm/min振荡培养，离心，收集发酵上清液，沉淀，即得一种粘质沙雷氏菌代谢产物；
其中，种子培养基的配方为：胰蛋白胨9g，酪蛋白胨9g，可溶性淀粉8g，6波美麦芽汁450mL，海水晶4g，醋酸铵3g，FeSO4 0.25g，CaCl2 3.5g，蒸馏水1000mL，pH＝7，121℃灭菌25分钟；发酵培养基的配方为：酵母浸膏5g，13C标记蔗糖0.25g，MgSO4·7H2O 6g，NaNO3 7g，KCl 10g，蒸馏水1000mL，pH＝6.8～7.2，121℃灭菌25分钟；13C标记蔗糖耗尽时结束培养。
利用LB培养基进行活化处理，具体方法是：将粘质沙雷氏菌ATCC14756从保藏菌种的试管斜面中取出转移至LB培养基上，28℃恒温箱中倒置培养48小时即可。粘质沙雷氏菌ATCC14756转移至LB培养基的接种量为体积百分数2％。
发酵培养为通气培养，其空气通量为11L/min。
菌株种子液在发酵培养基中的接种量为体积百分数7％。
制备发酵培养基时先加入1/2配方量的13C标记蔗糖，振荡培养过程中监测13C标记蔗糖的用量，13C标记蔗糖耗尽时分批补加剩余量的13C标记蔗糖，直至所有的13C标记蔗糖全部耗尽，培养结束。13C标记蔗糖的补加次数为4次，每次补加量相同。
离心条件为：8000～12000rpm/min离心18分钟。
沉淀方法为：利用质量浓度60％硫酸铵进行沉淀并收集。
对比例1
一种粘质沙雷氏菌代谢产物，是通过以下方法制备得到的：粘质沙雷氏菌ATCC14756活化后接种于种子培养基中，27℃培养12小时，得菌株种子液；取菌株种子液接种于发酵培养基中，27℃、180rpm/min振荡培养，离心，收集发酵上清液，沉淀，即得一种粘质沙雷氏菌代谢产物；
其中，种子培养基的配方为：胰蛋白胨8g，酪蛋白胨8g，6波美麦芽汁400mL，海水晶3g，醋酸铵2g，FeSO4 0.2g，CaCl2 3g，蒸馏水900mL，pH＝6.8，121℃灭菌20分钟；发酵培养基的配方为：酵母浸膏4g，13C标记蔗糖0.2g，MgSO4·7H2O 5g，NaNO3 5g，KCl 8g，蒸馏水900mL，pH＝6.8，121℃灭菌20分钟；13C标记蔗糖耗尽时结束培养。
利用LB培养基进行活化处理，具体方法是：将粘质沙雷氏菌ATCC14756从保藏菌种的试管斜面中取出转移至LB培养基上，28℃恒温箱中倒置培养24小时即可。粘质沙雷氏菌ATCC14756转移至LB培养基的接种量为体积百分数2％。
发酵培养为通气培养，其空气通量为10L/min。
菌株种子液在发酵培养基中的接种量为体积百分数6％。
离心条件为：8000rpm/min离心15分钟。
沉淀方法为：利用质量浓度50％硫酸铵进行沉淀并收集。
对比例2
一种粘质沙雷氏菌代谢产物，是通过以下方法制备得到的：粘质沙雷氏菌ATCC14756活化后接种于种子培养基中，27℃培养12小时，得菌株种子液；取菌株种子液接种于发酵培养基中，27℃、180rpm/min振荡培养，离心，收集发酵上清液，沉淀，即得一种粘质沙雷氏菌代谢产物；
其中，种子培养基的配方为：胰蛋白胨8g，酪蛋白胨8g，可溶性淀粉6g，6波美麦芽汁400mL，醋酸铵2g，FeSO4 0.2g，CaCl2 3g，蒸馏水900mL，pH＝6.8，121℃灭菌20分钟；发酵培养基的配方为：酵母浸膏4g，13C标记蔗糖0.2g，MgSO4·7H2O 5g，NaNO3 5g，KCl 8g，蒸馏水900mL，pH＝6.8，121℃灭菌20分钟；13C标记蔗糖耗尽时结束培养。
利用LB培养基进行活化处理，具体方法是：将粘质沙雷氏菌ATCC14756从保藏菌种的试管斜面中取出转移至LB培养基上，28℃恒温箱中倒置培养24小时即可。粘质沙雷氏菌ATCC14756转移至LB培养基的接种量为体积百分数2％。
发酵培养为通气培养，其空气通量为10L/min。
菌株种子液在发酵培养基中的接种量为体积百分数6％。
离心条件为：8000rpm/min离心15分钟。
沉淀方法为：利用质量浓度50％硫酸铵进行沉淀并收集。
对比例3
一种粘质沙雷氏菌代谢产物，是通过以下方法制备得到的：粘质沙雷氏菌ATCC14756活化后接种于种子培养基中，27℃培养12小时，得菌株种子液；取菌株种子液接种于发酵培养基中，27℃、180rpm/min振荡培养24小时，离心，收集发酵上清液，沉淀，即得一种粘质沙雷氏菌代谢产物；
其中，种子培养基的配方为：胰蛋白胨8g，酪蛋白胨8g，可溶性淀粉6g，6波美麦芽汁400mL，海水晶3g，醋酸铵2g，FeSO4 0.2g，CaCl2 3g，蒸馏水900mL，pH＝6.8，121℃灭菌20分钟；发酵培养基的配方为：酵母浸膏4g，蔗糖0.2g，MgSO4·7H2O 5g，NaNO3 5g，KCl 8g，蒸馏水900mL，pH＝6.8，121℃灭菌20分钟。
利用LB培养基进行活化处理，具体方法是：将粘质沙雷氏菌ATCC14756从保藏菌种的试管斜面中取出转移至LB培养基上，28℃恒温箱中倒置培养24小时即可。粘质沙雷氏菌ATCC14756转移至LB培养基的接种量为体积百分数2％。
发酵培养为通气培养，其空气通量为10L/min。
菌株种子液在发酵培养基中的接种量为体积百分数6％。
离心条件为：8000rpm/min离心15分钟。
沉淀方法为：利用质量浓度50％硫酸铵进行沉淀并收集。
试验例
选择有五年养殖历史的南美白对虾养殖池塘，池塘底质为沙土，隔离成相同尺寸的9个小池塘，其中任选一个小池塘不做任何处理作为对照组，剩余的小池塘随机投放实施例1～5或对比例1～3所得粘质沙雷氏菌代谢产物，投放量为每立方米水1.5g，投苗饲养，养殖周期为60天，养殖周期结束后，考察各个小池塘内南美白对虾的养殖情况，计算各组的成活率以及免疫保护率，免疫保护率＝(1-实验组死亡率/对照组死亡率)×100％，结果见表1。
表1.南美白对虾的养殖情况
成活率(％) 亩产量(kg/亩) 平均单只重量(g) 免疫保护率(％)
实施例1 98.5 1025 35 96.7
实施例2 98.5 1026 35 96.7
实施例3 99.2 1155 42 98.2
实施例4 99.3 1158 42 98.4
实施例5 99.5 1165 45 98.9
对比例1 85.3 871 23 67.2
对比例2 86.2 873 24 69.2
对比例3 88.9 899 30 75.2
对照组 55.2 143 18 --
由表1可知，实施例1～5所得粘质沙雷氏菌代谢产物处理后的小池塘具有更高的南美白对虾亩产量，而且平均单只重量也较大，远远优于对照组和对比例1～3。对比例1种子培养基略去可溶性淀粉，对比例2种子培养基略去海水晶，对比例3发酵培养基用普通蔗糖替代13C标记蔗糖，发酵培养时间为24小时，其免疫增强效果明显变差。
上述虽然对本发明的具体实施方式进行了描述，但并非对本发明保护范围的限制，在本发明的技术方案的基础上，本领域技术人员不需要付出创造性劳动即可做出的各种修改或变形仍在本发明的保护范围以内。

Claims (10)

1.一种粘质沙雷氏菌代谢产物，其特征在于，是通过以下方法制备得到的：粘质沙雷氏菌ATCC14756活化后接种于种子培养基中，27～33℃培养12～18小时，得菌株种子液；取菌株种子液接种于发酵培养基中，27～33℃、180～200rpm/min振荡培养，离心，收集发酵上清液，沉淀，即得一种粘质沙雷氏菌代谢产物；
其中，种子培养基的配方为：胰蛋白胨8～12g，酪蛋白胨8～10g，可溶性淀粉6～9g，6波美麦芽汁400～500mL，海水晶3～5g，醋酸铵2～4g，FeSO4 0.2～0.3g，CaCl2 3～4g，蒸馏水900～1100mL，pH=6.8～7.2，121℃灭菌20～30分钟；发酵培养基的配方为：酵母浸膏4～6g，13C标记蔗糖0.2～0.3g，MgSO4·7H2O 5～8g，NaNO3 5～8g，KCl 8～12g，蒸馏水900～1100mL，pH=6.8～7.2，121℃灭菌20～30分钟；13C标记蔗糖耗尽时结束培养。
2.根据权利要求1所述的一种粘质沙雷氏菌代谢产物，其特征在于，利用LB培养基进行活化处理，具体方法是：将粘质沙雷氏菌ATCC14756从保藏菌种的试管斜面中取出转移至LB培养基上，28℃恒温箱中倒置培养24～72小时即可。
3.根据权利要求2所述的一种粘质沙雷氏菌代谢产物，其特征在于，粘质沙雷氏菌ATCC14756转移至LB培养基的接种量为体积百分数2～3%。
4.根据权利要求1所述的一种粘质沙雷氏菌代谢产物，其特征在于，发酵培养为通气培养，其空气通量为10～12L/min。
5.根据权利要求1所述的一种粘质沙雷氏菌代谢产物，其特征在于，菌株种子液在发酵培养基中的接种量为体积百分数6～8%。
6.根据权利要求1所述的一种粘质沙雷氏菌代谢产物，其特征在于，制备发酵培养基时先加入1/2配方量的13C标记蔗糖，振荡培养过程中监测13C标记蔗糖的用量，13C标记蔗糖耗尽时分批补加剩余量的13C标记蔗糖，直至所有的13C标记蔗糖全部耗尽，培养结束。
7.根据权利要求6所述的一种粘质沙雷氏菌代谢产物，其特征在于，13C标记蔗糖的补加次数为3～5次，每次补加量相同。
8.根据权利要求1所述的一种粘质沙雷氏菌代谢产物，其特征在于，离心条件为：8000～12000rpm/min离心15～20分钟。
9.根据权利要求1所述的一种粘质沙雷氏菌代谢产物，其特征在于，沉淀方法为：利用质量浓度50～80%硫酸铵进行沉淀并收集。
10.权利要求1～9中任一项所述的一种粘质沙雷氏菌代谢产物作为水产免疫增强剂的应用。
CN201910032527.5A 2019-01-14 2019-01-14 一种粘质沙雷氏菌代谢产物及作为水产免疫增强剂的应用 Pending CN109679873A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910032527.5A CN109679873A (zh) 2019-01-14 2019-01-14 一种粘质沙雷氏菌代谢产物及作为水产免疫增强剂的应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910032527.5A CN109679873A (zh) 2019-01-14 2019-01-14 一种粘质沙雷氏菌代谢产物及作为水产免疫增强剂的应用

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN109679873A true CN109679873A (zh) 2019-04-26

Family

ID=66192380

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201910032527.5A Pending CN109679873A (zh) 2019-01-14 2019-01-14 一种粘质沙雷氏菌代谢产物及作为水产免疫增强剂的应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN109679873A (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109908183A (zh) * 2019-03-27 2019-06-21 中国水产科学研究院长江水产研究所 一种用于蛙类免疫的粘质沙雷氏菌免疫增强剂
CN110402854A (zh) * 2019-08-09 2019-11-05 武汉中科瑞华生态科技股份有限公司 一种圆口铜鱼鱼苗的高存活率培育方法

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101973593A (zh) * 2010-09-29 2011-02-16 重庆合川盐化工业有限公司 海水晶
CN102002469A (zh) * 2010-09-28 2011-04-06 嘉兴学院 生产灵菌红素的菌株及其方法

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102002469A (zh) * 2010-09-28 2011-04-06 嘉兴学院 生产灵菌红素的菌株及其方法
CN101973593A (zh) * 2010-09-29 2011-02-16 重庆合川盐化工业有限公司 海水晶

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
SIVASAMY SETHUPATHY ET AL.: "Vanillic acid from Actinidia deliciosa impedes virulence in Serratia marcescens by affecting S-layer，flagellin and fatty acid biosynthesis proteins", 《SCIENTIFIC REPORTS》 *
刘伯雅: "灵菌红素的高效制备工艺及其除藻、抑藻活性研究", 《万方学位论文》 *
赵银娟等: "粘质沙雷氏菌NJZT-1产灵菌红素培养条件的优化", 《林业科技开发》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109908183A (zh) * 2019-03-27 2019-06-21 中国水产科学研究院长江水产研究所 一种用于蛙类免疫的粘质沙雷氏菌免疫增强剂
CN110402854A (zh) * 2019-08-09 2019-11-05 武汉中科瑞华生态科技股份有限公司 一种圆口铜鱼鱼苗的高存活率培育方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN101829159B (zh) 一种富硒猴头菌菇胶囊的制备方法
CN106754619A (zh) 一种在谷物培养基中添加中药组分促进益生菌生长的方法
CN101611767A (zh) 一种海参用微生物发酵饵料的生产方法
CN106011022B (zh) 一种玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基及其制备和发酵方法
CN106867933A (zh) 对凡纳滨对虾养殖中水质净化的微生态制剂及制备与应用
CN108277177B (zh) 细黄链霉菌固体发酵培养基、制备方法及其发酵方法、发酵产物、生防产品和应用
CN107828698A (zh) 一种复合菌制剂及其制备方法和应用
CN102925527A (zh) 一种金针菇、灵芝混菌发酵的方法
CN109566269A (zh) 一种提高蛹虫草中虫草素含量的培养基
CN109679873A (zh) 一种粘质沙雷氏菌代谢产物及作为水产免疫增强剂的应用
CN101993843B (zh) 一种坚强芽孢杆菌菌株及其应用
CN108060096A (zh) 一种益生菌组合及其在凡纳滨对虾苗种培育中的应用
CN107712462A (zh) 一种水产用高效活性生物发酵饵料及其制备方法和应用
CN107628894A (zh) 提高土壤肥力的复合生物菌剂及其制备方法和应用
CN105907674A (zh) 一种复合微生态制剂的制备方法及其应用
CN106497842A (zh) 一种乳酸菌与黑曲霉混合固态发酵制剂的制备方法与应用
CN104087539B (zh) 细黄链霉菌固体发酵培养基、制备方法及其发酵方法
TWI385248B (zh) 一種蟲草屬培養基之配方
CN105838621B (zh) 一种灰树花液体菌种的培养液以及培育方法
CN107916229B (zh) 一株桦褐孔菌及其应用
CN110713956A (zh) 一株赖氨酸芽孢杆菌s12及其应用
WO2022100701A1 (zh) 一种罗伯茨虫草的培养方法
CN104894028A (zh) 一种渔用海洋微生态制剂及其制备方法
CN1322109C (zh) 一种固体海洋红酵母的淀粉吸附流化床干燥生产方法
CN1536069B (zh) 大规模生产虫草菌和灵芝菌的方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20190426

RJ01 Rejection of invention patent application after publication