CN109908183A - 一种用于蛙类免疫的粘质沙雷氏菌免疫增强剂 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种用于蛙类免疫的粘质沙雷氏菌免疫增强剂，包括以下成分：粘质沙雷氏菌菌剂、维生素C、花青素、柠檬酸、二氢辣椒素和甘油；其中粘质沙雷氏菌菌剂作为主要成分，起到增强蛙类免疫能力的作用，而加入花青素和二氢辣椒素具有协同作用，可以提升免疫效果。

Description

一种用于蛙类免疫的粘质沙雷氏菌免疫增强剂

技术领域

本发明涉及水产养殖技术领域，尤其涉及一种用于蛙类免疫的粘质沙雷氏菌免疫增强剂。

背景技术

粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens)又称灵杆菌，一种产生鲜红色素的细菌，存在于空气和水中，可生长在动、植物性食品中。为细菌中最小者，约0.5×(0.5～1.0)微米。近球形短杆菌，但形态多样。粘质沙雷氏菌广泛分布于自然界，是水和土壤中的常居菌群，亦是临床上常见的条件致病菌，在机体免疫功能降低时可引起肺部和尿道感染以及败血症。

中国发明专利CN1465353A公开了一种治疗用粘质沙雷氏菌菌苗，该专利公开了粘质沙雷氏菌菌苗治疗与免疫功能密切相关的一些疾病疗效，粘质沙雷氏菌具有提高细胞免疫及体液免疫的功能。但是目前尚没有相关研究说明该菌种可以应用于蛙类免疫。

提高鱼、虾、蟹、蛙类免疫力的常见措施有：注射疫苗，使养殖动物体内产生抗体，以增强其免疫力；泼洒生物制剂改良水质是最常见的增强免疫力的方法，其原理是利用益生菌消除水体中的氨氮和亚硝酸盐等有害成分，使养殖水体得到净化，从而使鱼、虾、蟹、蛙类在优良的水环境下保持良好的健康状态以增强其免疫力；在人工饲料中添加微量元素，利用微量元素调节鱼、虾、蟹、蛙类体内免疫酶的活性，合使疫力得到增强；在人工饲料中添加Vc等维生素含量，增强肌体的抗病能力；在人工饲料中添加β-葡聚糖、虾青素等促进免疫器官发育的免疫调节剂，使鱼、虾、蟹、蛙类的免疫能力得到提高；增加鱼、虾、蟹、蛙类的营养供给，确保肌体的营养平衡，以提高其免疫力；通过种植水草、改良底质、降低养殖密度、调整养殖模式和合理投喂等技术措施的应用，可改良鱼、虾、蟹、蛙类的生存环境，提高其抗应急能力和降低其发病率。

上述技术措施主要是通过改良鱼、虾、蟹、蛙类养殖环境和调节其营养状况来达到提高免疫能力的目的，但当鱼、虾、蟹、蛙类出现体质状况欠佳的病症时，传统的免疫调节措施的抵御疾病效果将会受到影响。还有一些免疫增强剂长期使用后，水产容易产生抗药性，故本发明根据粘质沙雷氏菌的特性，研究了一种用于蛙类免疫的粘质沙雷氏菌免疫增强剂。

发明内容

基于背景技术存在的技术问题，本发明提出了一种用于蛙类免疫的粘质沙雷氏菌免疫增强剂。

本发明的技术方案如下：

一种用于蛙类免疫的粘质沙雷氏菌免疫增强剂，包括以下成分：粘质沙雷氏菌菌剂、维生素C、花青素、柠檬酸、二氢辣椒素和甘油。

优选的，所述的用于蛙类免疫的粘质沙雷氏菌免疫增强剂，由以下重量百分比的成分组成：粘质沙雷氏菌菌剂5-25％、维生素C 5-20％、花青素2-10％、柠檬酸5-30％、二氢辣椒素1-2％和甘油余量。

优选的，所述的用于蛙类免疫的粘质沙雷氏菌免疫增强剂，由以下重量百分比的成分组成：粘质沙雷氏菌菌剂10-20％、维生素C 8-15％、花青素3-8％、柠檬酸10-20％、二氢辣椒素1-2％和甘油余量。

优选的，所述的粘质沙雷氏菌菌剂中活菌总浓度≥10⁹其分CFU/mL。

优选的，所述的用于蛙类免疫的粘质沙雷氏菌免疫增强剂，在饲料中的添加量为2-10g/kg。

维生素C的结构类似葡萄糖，是一种多羟基化合物，其分子中第2及第3位上两个相邻的烯醇式羟基极易解离而释出H+,故具有酸的性质，又称抗坏血酸。维生素C具有很强的还原性，很容易被氧化成脱氢维生素C,但其反应是可逆的，并且抗坏血酸和脱氢抗坏血酸具有同样的生理功能,但脱氢抗坏血酸若继续氧化，生成二酮古乐糖酸，则反应不可逆而完全失去生理效能。

花青素(anthocyanidins),又称花色素，是自然界一类广泛存在于植物中的水溶性天然色素，是花色苷(anthocyains)水解而得的有颜色的背元。水果、蔬菜、花卉中的主要呈色物质大部分与之有关。在植物细胞液泡不同的PH值条件下，花青素使花瓣呈现五彩缤纷的颜色。已知花青素有20多种，食物中重要的有6种，即天竺葵色素、矢车菊色素、飞燕草色素、芍药色素、牵牛花色素和锦葵色素。自然状态的花青素都以糖苷形式存在，称为花色苷，很少有游离的花青素存在。花青素主要用于食品着色方面，也可用于染料、医药、化妆品等方面。

柠檬酸是一种重要的有机酸，又名枸橼酸，无色晶体，常含一分子结晶水，无臭，有很强的酸味，易溶于水。其钙盐在冷水中比热水中易溶解，此性质常用来鉴定和分离柠檬酸。结晶时控制适宜的温度可获得无水柠檬酸。在工业，食品业，化妆业等具有极多的用途。

二氢辣椒素具有杀菌消毒的作用，可作为食品防腐剂。用于医疗上，具有强而持久的消炎镇痛作用和抗菌、抗肿瘤作用；还可促进胃肠蠕动及胃液分泌，帮助消化。

本发明的有益之处在于：本发明的用于蛙类免疫的粘质沙雷氏菌免疫增强剂，包括以下成分：粘质沙雷氏菌菌剂、维生素C、花青素、柠檬酸、二氢辣椒素和甘油；其中粘质沙雷氏菌菌剂作为主要成分，起到增强蛙类免疫能力的作用，而加入花青素和二氢辣椒素具有协同作用，可以提升免疫效果。

具体实施方式

实施例1：

一种用于蛙类免疫的粘质沙雷氏菌免疫增强剂，由以下重量百分比的成分组成：粘质沙雷氏菌菌剂18％、维生素C 12％、花青素5％、柠檬酸16％、二氢辣椒素1.5％和甘油余量。

所述的粘质沙雷氏菌菌剂中活菌总浓度≥10⁹其分CFU/mL。

所述的粘质沙雷氏菌菌剂从北京华越洋生物生物科技有限公司购买。

实施例2：

一种用于蛙类免疫的粘质沙雷氏菌免疫增强剂，由以下重量百分比的成分组成：粘质沙雷氏菌菌剂20％、维生素C 8％、花青素8％、柠檬酸10％、二氢辣椒素2％和甘油余量。

所述的粘质沙雷氏菌菌剂中活菌总浓度≥10⁹其分CFU/mL。

所述的粘质沙雷氏菌菌剂从北京华越洋生物生物科技有限公司购买。

实施例3：

一种用于蛙类免疫的粘质沙雷氏菌免疫增强剂，由以下重量百分比的成分组成：粘质沙雷氏菌菌剂10％、维生素C 15％、花青素3％、柠檬酸20％、二氢辣椒素1％和甘油余量。

所述的粘质沙雷氏菌菌剂中活菌总浓度≥10⁹其分CFU/mL。

所述的粘质沙雷氏菌菌剂从北京华越洋生物生物科技有限公司购买。

实施例4：

一种用于蛙类免疫的粘质沙雷氏菌免疫增强剂，由以下重量百分比的成分组成：粘质沙雷氏菌菌剂12％、维生素C 12％、花青素6％、柠檬酸15％、二氢辣椒素1.8％和甘油余量。

所述的粘质沙雷氏菌菌剂中活菌总浓度≥10⁹其分CFU/mL。

所述的粘质沙雷氏菌菌剂从北京华越洋生物生物科技有限公司购买。

实施例5：

一种用于蛙类免疫的粘质沙雷氏菌免疫增强剂，由以下重量百分比的成分组成：粘质沙雷氏菌菌剂20％、维生素C 10％、花青素5％、柠檬酸13％、二氢辣椒素1.8％和甘油余量。

所述的粘质沙雷氏菌菌剂中活菌总浓度≥10⁹其分CFU/mL。

所述的粘质沙雷氏菌菌剂从北京华越洋生物生物科技有限公司购买。

对比例1

将实施例1中的花青素去除，其余配比不变。

对比例2

将实施例1中的二氢辣椒素去除，其余配比不变。

以下为具有的免疫力对比实验：实验方法：将制得的免疫增强剂5g与1Kg基础牛蛙饲料原料(含鱼粉30％、菜籽粕10％、豆粉25％、花生粉25％、面粉3％、玉米粉3％、复合维生素1％)混合，制成含免疫增强剂的免疫饲料。各种原料分别粉碎过60目筛，准确称重后逐级充分混匀，以褐藻酸钠作为粘合剂，加适量水用小型绞肉机挤压制成颗粒饲料，在40℃条件下烘干至水分含量10％以下，分袋包装，于4℃冰箱中保存备用。

健康牛蛙600尾，实验牛蛙初始体重为80-100g，随机为实施例1组、对比例1-2和对照组4个处理组，每个处理组有3个平行，每个平行组养殖牛蛙50尾。实施例1和对比例1-2连续4天投喂免疫饲料，3天投喂基础饲料，7天一个循环，直至实验结束。对照组在整个实验阶段一直投喂基础饲料。每日投喂饲料4次，日投饵量约为10-15克/尾，投喂1h后吸去剩余饲料，并根据残饵的多少调节投饵量。免疫饲料养殖21天后，进行白斑综合征病毒(WhiteSpot Syndrome Virus，WSSV)人工注射感染实验。感染前1天停止投喂饲料，次日每尾牛蛙在第2腹节处注射50μL WSSV粗提液(浓度为0.16g/mL)，以PBS溶液为阴性对照组。攻毒后各组继续投喂相应饲料，每天及时捡出死虾，记录死亡数量，14d后结束感染实验。各实验组和对照组每日平均累计死亡率结果见表1。

表1：实施例、对比例和对照例的免疫力对比实验数据；

3d

4d

5d

7d

8d

10d

12d

实施例1

5.5±1.1

7.8±1.7

11.2±2.1

14.2±2.4

16.1±2.6

17.3±2.4

17.9±1.7

对比例1

5.8±1.1

8.9±1.9

14.5±2.6

19.2±2.8

25.3±3.2

28.3±2.7

30.5±1.3

对比例2

5.6±1.2

8.2±1.9

18.8±2.9

30.5±3.6

36.7±2.4

40.3±2.2

43.7±1.2

对照例

7.9±1.3

25.7±2.8

39.2±4.5

68.2±9.8

84.6±5.2

94.8±3.5

100±0

实验结果显示在感染4d内，各实验组与对照组累积死亡率为差异不显著(P>0.05)；从第5d始各组均呈明显的上升趋势，对照组累积死亡率较实验组差异显著(P<0.05)；至感染实验结束前1天对照组的累积死亡率为100％，实施例1组的累积死亡率低于20％；而对比例1和对比例2组的累积死亡率相比实施例1组均有显著提升。

以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。

Claims (5)

1.一种用于蛙类免疫的粘质沙雷氏菌免疫增强剂，其特征在于，包括以下成分：粘质沙雷氏菌菌剂、维生素C、花青素、柠檬酸、二氢辣椒素和甘油。

2.如权利要求1所述的用于蛙类免疫的粘质沙雷氏菌免疫增强剂，其特征在于，由以下重量百分比的成分组成：粘质沙雷氏菌菌剂 5-25%、维生素C 5-20%、花青素 2-10%、柠檬酸5-30%、二氢辣椒素 1-2%和甘油 余量。

3.如权利要求1所述的用于蛙类免疫的粘质沙雷氏菌免疫增强剂，其特征在于，由以下重量百分比的成分组成：粘质沙雷氏菌菌剂 10-20%、维生素C 8-15%、花青素 3-8%、柠檬酸10-20%、二氢辣椒素 1-2%和甘油 余量。

4.如权利要求1-3任一所述的用于蛙类免疫的粘质沙雷氏菌免疫增强剂，其特征在于，所述的粘质沙雷氏菌菌剂中活菌总浓度≥10⁹其分CFU/mL。

5.如权利要求1-4任一所述的用于蛙类免疫的粘质沙雷氏菌免疫增强剂，其特征在于，所述的用于蛙类免疫的粘质沙雷氏菌免疫增强剂，在饲料中的添加量为2-10g/kg。