CN105316264A

CN105316264A - 一株解淀粉芽孢杆菌及其应用

Info

Publication number: CN105316264A
Application number: CN201510884654.XA
Authority: CN
Inventors: 赵晓燕; 尚巧霞; 周阳薇; 刘正坪; 魏艳敏
Original assignee: Beijing University of Agriculture
Current assignee: Jinhe Agricultural Biotechnology Co. Ltd. (Beijing)
Priority date: 2015-12-04
Filing date: 2015-12-04
Publication date: 2016-02-10
Anticipated expiration: 2035-12-04
Also published as: CN105316264B

Abstract

本发明提供了一株解淀粉芽孢杆菌及其应用。本发明的解淀粉芽孢杆菌的保藏编号为CGMCC？No.9876。本发明的解淀粉芽孢杆菌可用于制备针对植物病原真菌的生防菌剂和微生物菌肥。本发明的解淀粉芽孢杆菌具有对植物病原真菌的抑菌活性并且具有较宽的抑菌谱。

Description

一株解淀粉芽孢杆菌及其应用

技术领域

本发明涉及一株解淀粉芽孢杆菌及其应用。

背景技术

芽孢杆菌(Bacillusspp.)是内生芽孢的革兰氏阳性细菌，是目前生防细菌中研究较多的一类，因其能够产生耐热、耐旱、抗紫外线和有机溶剂的内生孢子，是理想的生防菌筛选对象。研究表明，目前应用于防治植物病害的芽孢杆菌属细菌有枯草芽孢杆菌(B.subtilis)、解淀粉芽孢杆菌(B.amyloliquefaciens)、地衣芽孢杆菌(B.licheniformis)等。植物根际土壤作为受植物活根影响的土壤微区，含有大量的微生物，包括真菌、细菌、放线菌、藻类、原生动物等。在植物根际微生物中，细菌生长快，也最常见，并且种类繁多，在土壤营养元素循环、有机物质的形成和分解、肥力的保持和提高、生态环境的改善、植物的生长发育等方面均起着极其重要的作用，被认为是良好的有益微生物资源库。近些年来，利用土壤中的有益细菌及其代谢产物防治植物病害更是成为国内外研究的热点。

发明内容

本发明提供了一株解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)及其应用。

本发明的解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)采集自北京市延庆县大榆树村，命名为DJ1，已于2014年10月30日保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心(地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所)，保藏编号为CGMCCNo.9876。DJ1菌落为圆形或近圆形，白色，边缘不光滑，表面有明显褶皱。

本发明的解淀粉芽孢杆菌具有针对植物病原真菌的抑菌活性。所述植物病原真菌为立枯丝核菌、尖孢镰刀菌、胶孢炭疽菌、拟盘多毛孢菌、美澳型核果褐腐病菌、富克葡萄孢盘菌、葡萄座腔菌、茄病镰孢菌、芸薹链格孢菌。

本发明的解淀粉芽孢杆菌可用于制备针对植物病原真菌的生防菌剂或微生物菌肥。

其中，所述植物病原真菌为立枯丝核菌、尖孢镰刀菌、胶孢炭疽菌、拟盘多毛孢菌、美澳型核果褐腐病菌、富克葡萄孢盘菌、葡萄座腔菌、茄病镰孢菌、芸薹链格孢菌。

本发明还提供了针对植物病原真菌的生防菌剂或微生物菌肥，其中所述生防菌剂或微生物菌肥的活性成分为本发明的解淀粉芽孢杆菌。

本发明的解淀粉芽孢杆菌具有对植物病原真菌的抑菌活性并且具有较宽的抑菌谱。

附图说明

图1显示三株菌的菌落形态，

其中，左：DJ1,中：TR2，右：ZT4-2。

图2显示淀粉酶检测结果，

其中，左上：ZT4-2，右上：TR2，左下：DJ1，右下：E.coliJM109。

图3显示蛋白酶检测结果，

其中，左上：ZT4-2，右上：TR2，左下：DJ1，右下：E.coliJM109。

图4显示纤维素酶检测结果，

其中，上：ZT4-2，中右：TR2，下：DJ1，中左：E.coliJM109。

图5显示脂肪酶检测结果，

其中，左：DJ1，中：ZT4-2，右：TR2。

图6显示葡萄糖发酵检测结果，

其中，由左至右依次为对照、TR2、ZT4-2和DJ1。

图7显示蔗糖发酵检测结果，

其中，由左至右依次为对照、TR2、ZT4-2和DJ1。

图8显示乳糖发酵检测结果，

其中，由左至右依次为对照、TR2、ZT4-2和DJ1。

图9显示甘露醇发酵检测结果，

其中，由左至右依次为对照、TR2、ZT4-2和DJ1。

图10显示肌醇发酵检测结果，

其中，由左至右依次为对照、TR2、ZT4-2和DJ1。

图11显示革兰氏染色结果

其中，由左至右依次为ZT4-2、TR2、DJ1和E.coliJM109。

图12显示芽孢染色结果

其中，由左至右依次为ZT4-2、TR2和DJ1。图13显示16SrDNA的扩增的电泳图，

其中，M为分子量Marker，1.ZT4-2，2.TR2，3.DJ1。

图14显示gyrA基因的扩增的电泳图，

其中，M为分子量Marker，1.ZT4-2；2.TR2；3.DJ1。

图15显示鞭毛蛋白基因的扩增的电泳图，

M为分子量Marker，1.ZT4-2；2.TR2；3.DJ1。

具体实施方式

实施例1.菌株ZT4-2、DJ1、TR2的分离及鉴定

(一)菌株ZT4-2、DJ1、TR2的分离

采集来自北京地区的不同植物根际的土样，土样具体信息见表1。土样采自植物根际土壤10cm处，样品采集后置于密封袋中，实验室4℃冰箱保存。称取土壤样品10g，放入盛有90mL无菌水的三角瓶中，振荡约20min。取土壤悬浮液1mL逐级稀释至10^-7倍，分别取10^-5、10^-6、10^-7浓度的土壤悬浮液均匀地涂于NA平板上，每个浓度梯度重复3皿，在27℃恒温下培养1～2d。从平板上挑取不同培养性状的单菌落，继续在NA平板上划线纯化，获得细菌纯培养，给菌株编号并保存。

表1土样采集信息

三株细菌的菌落形态如图1所示，菌株DJ1的菌落为圆形或近圆形，白色，边缘不光滑，表面有明显褶皱。菌株TR2的菌落形态和DJ1比较相似，菌落为圆形或近圆形，白色，边缘不光滑，表面有明显褶皱。菌株ZT4-2的菌落形态为圆形或近圆形，白色，平铺，边缘不整齐，表面褶皱较少。

(二)菌株ZT4-2、DJ1、TR2的鉴定

1菌株ZT4-2、DJ1、TR2生理生化鉴定

1.1淀粉酶的检测

检测培养基：淀粉酶选择培养基(LB培养基+1.0％可溶性淀粉)：蛋白胨10g，酵母膏5g，NaCl5g，可溶性淀粉10g，琼脂20g，蒸馏水1000mL，pH7.8。

检测方法：取10μL摇培的待测菌株(ZT4-2、TR2、DJ1和E.coliJM109，E.coliJM109为大肠杆菌对照菌株，不具有淀粉水解酶活性)滴加到检测平板上，晾干后28℃恒温培养24-48h，然后用稀碘液覆盖染色，清水冲洗，观察透明圈大小。

检测结果：如图2所示，可以看出，在三个菌株ZT4-2、TR2和DJ1的周围都有透明圈产生，说明它们都能产生淀粉酶，淀粉水解阳性。E.coliJM109的周围无透明圈产生菌株，不具有淀粉水解酶活性。

1.2蛋白酶检测

检测平板：含10％的脱脂牛奶水琼脂培养基(琼脂粉，1g/100mL水)，选用三元脱脂牛奶，先微波炉加热，如果有脂肪膜则去掉，再用移液枪吸取10mL加到100mL已灭菌冷凉的水琼脂培养基内。

检测方法：将待测菌株(ZT4-2、TR2、DJ1和E.coliJM109)在NA培养基中摇培过夜，取10μL滴加到检测平板上，晾干后28℃恒温培养，12h后观察蛋白降解圈。

检测结果：如图3所示，从图3可以看出，在三个菌株ZT4-2、TR2和DJ1的周围都有较明显的透明圈产生，说明它们都能产生蛋白酶，蛋白酶水解阳性。E.coliJM109的周围也有较明显的透明圈产生，也具有一定的蛋白水解酶活性。

1.3纤维素酶检测

检测平板：半LB培养基(碳源、氮源的量减半)，加0.2％的羧甲基纤维素钠。

检测方法：将待测菌株(ZT4-2、TR2、DJ1和E.coliJM109)在NA培养基中摇培过夜，取10μL滴加到检测平板上，晾干后于28℃恒温培养24h，洗掉菌落，加入1g/L刚果红溶液染色1h，然后用1MNaCl溶液浸泡洗涤2次进行脱色，每次浸泡30min，观察菌落周围有无纤维素水解圈。

检测结果：如图4所示，可以看出，在三个菌株ZT4-2、TR2和DJ1的周围都能产生白色透明圈，说明它们都能产生纤维素酶，纤维素酶水解阳性。E.coliJM109菌株的周围也能产生白色透明圈，也具有纤维素水解酶活性。

1.4脂肪酶检测

检测培养基：油脂培养基：蛋白胨10g、牛肉膏5g、花生油或香油10g、1.6％中性红水溶液1mL、琼脂15g、蒸馏水1000mL、pH7.2。

检测方法：配制油脂培养基，灭菌后备用。倒平板前，将油脂培养基充分震荡使油脂均匀分布，再倒入培养皿中。平板凝固后将待测菌(ZT4-2、TR2和DJ1)滴加到平板上，晾干后28℃恒温培养24h。观察平板底层的菌落，如果出现红色斑点，即说明脂肪酸被水解，为阳性反应。

检测结果：如图5所示，可以看出，菌株TR2和DJ1的平板底层的菌落周围出现红色斑点，脂肪酸被水解，说明它们都能产生脂肪酶，脂肪酶水解阳性。菌株ZT4-2的平板底层的菌落周围无红色斑点出现，说明它不能产生脂肪酶，脂肪酶水解阴性。

1.5糖醇发酵实验

检测培养基：糖发酵基础培养基：蛋白胨10g、NaCl5g、蒸馏水1000mL，调pH7.6，加入1.6％溴甲酚紫乙醇溶液。

检测方法：糖发酵基础培养基按照分别加入葡萄糖(1％)、乳糖(0.75％)、蔗糖(0.75％)、甘露醇(0.75％)、肌醇(0.75％)，分装试管后，每管放入一杜氏发酵管，将待测菌株(TR2、ZT4-2和DJ1)分别接入含糖培养液中，以不接种的培养液作为对照，30℃培养7d，观察各试管颜色的变化及杜氏发酵管中有无气泡产生。指示剂溴甲酚紫的指示范围为pH5.2(黄色)～6.8(紫色)。

检测结果：

葡萄糖发酵实验结果如图6所示，从图中可以看出，TR2、ZT4-2和DJ1的试管培养基颜色均由紫色变为黄色，杜氏管中无气泡产生，说明TR2、ZT4-2、DJ1均能分解葡萄糖，产酸不产气。

蔗糖发酵实验结果如图7所示，从图中可以看出，TR2、ZT4-2、DJ1的试管培养基颜色均由紫色变为黄色，杜氏管中无气泡产生，说明TR2、ZT4-2、DJ1均能分解蔗糖，产酸不产气。

乳糖发酵实验结果如图8所示，从图中可以看出，TR2、ZT4-2、DJ1的试管培养基颜色都没有变化，杜氏管中无气泡产生，说明TR2、ZT4-2、DJ1均不能分解乳糖。

甘露醇发酵实验结果如图9所示，从图中可以看出，TR2、ZT4-2、DJ1的试管培养基颜色均由紫色变为黄色，杜氏管中无气泡产生，说明TR2、ZT4-2、DJ1均能分解甘露醇，产酸不产气。

肌醇发酵实验结果如图10所示，从图中可以看出，TR2、ZT4-2、DJ1的试管培养基颜色都没有变化，杜氏管中无气泡产生，说明TR2、ZT4-2、DJ1均不能分解肌醇。

2菌株ZT4-2、DJ1、TR2的革兰氏染色

染色液和试剂：结晶紫、卢戈氏碘液、95％酒精、番红。

染色方法：菌株ZT4-2、DJ1、TR2和E.coliJM109在LB平板上培养48h，取干净载玻片一块，在载玻片的左、右各加一滴蒸馏水，按无菌操作法取菌涂片，左边涂待测菌(菌株ZT4-2、DJ1或TR2)，右边涂大肠杆菌(E.coliJM109)，制成浓菌悬液。再取干净载玻片一块将刚制成的待测菌菌悬液挑1-2环涂在左边制成薄的涂面，将大肠杆菌的浓菌液取1-2环涂在右边制成薄涂面。让涂片自然晾干，手持玻片一端，让菌膜朝上，通过火焰2-3次固定。加适量(以盖满细菌涂面)的结晶紫染色液染色1min，倾去染色液，用水小心的冲洗。滴加卢戈氏碘液，媒染1min。用水洗去碘液，将玻片倾斜，连续点滴95％乙醇通过涂面涂色20-25s至流出液无色，立即水洗。滴加番红复染3-5min。用水洗去涂片上的番红染色液。将染色的涂片放空气中晾干。

镜检：先用低倍，再用高倍，最后用油镜观察，并判断菌体的革兰氏染色反应性。

实验结果

革兰氏染色的结果如图11所示，从图中可以看出，菌株ZT4-2、DJ1、TR2的菌体均为短杆状，两端钝圆，经染色细胞为紫色，说明是革兰氏阳性菌。而对照E.coliJM109经染色为红色，为革兰氏阴性菌。

3菌株ZT4-2、DJ1、TR2的芽孢染色

染色液和试剂：5％孔雀绿水溶液、0.5％番红水溶液。

染色方法：加1-2滴无菌水于小试管中，用接种环挑取2-3环菌体(菌株ZT4-2、DJ1、TR2和E.coliJM109)于试管中并充分混匀，制成浓稠的菌液。加5％孔雀绿水溶液2-3滴于小试管中，用接种环搅拌使染料与菌液充分混合。将此试管浸于沸水浴，加热15-20min。用接种环从试管底部挑取数环菌液于洁净的载玻片上，制成涂面，晾干。将涂面通过火焰2-3次固定。用水冲洗至流出液无色，滴加番红水溶液染色5min。用水洗去涂片上的番红染色液。将染色的涂片放空气中晾干。

镜检：先用低倍，再用高倍，最后用油镜观察。

实验结果：

芽孢染色的结果如图12所示，从图中可以看出，3株芽孢杆菌ZT4-2、DJ1、TR2的细胞中芽孢经染色为绿色，说明3株芽孢杆菌都能产生芽孢，并且大部分的芽孢为中生。

4菌株ZT4-2、DJ1、TR2的分子鉴定

4.1基因组DNA的提取：用接种环挑取试管斜面中培养的细菌(ZT4-2、DJ1、TR2)于NA液体培养基中，25℃，150r/min培养过夜。采用DNA提取试剂盒提取细菌的基因组DNA。

4.216SrDNA的PCR扩增：

对3株细菌(ZT4-2、DJ1、TR2)进行基因组DNA的提取，并以这3株细菌基因组DNA为模板，选用细菌16SrDNA通用引物27f和1492r进行PCR扩增。

PCR扩增所用引物：

27f：5′-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3′，

1492r：5′-TACGGCTACCTTGTTACGACTT-3′。

PCR扩增所用反应体系：DNA模板(100ng/μL)2μL，上下游引物(10μmol/L)各1μL，PCRMix12.5μL，用无菌ddH₂O补足25μL体系。

PCR反应程序：94℃5min；94℃1min，54℃1min，72℃1min，35个循环；72℃5min；保温：4℃2h。

PCR扩增产物通过电泳检测，片段长度约为1500bp，结果如图13所示。

4.3gyrA基因的PCR扩增

对3株细菌(ZT4-2、DJ1、TR2)进行基因组DNA的提取，并以这3株细菌基因组DNA为模板，选用细菌gyrA基因通用引物42f和1066r进行PCR扩增。

PCR扩增所用引物：

42f：5’-CAGTCAGGAAATGCGTACGTCCTT-3’，

1066r：5’-CAAGGTAATGCTCCAGGCATTGCT-3’。

PCR扩增所用反应体系：DNA模板(100ng/μL)2μL，引物(10μM)各1μL，PCRMix12.5μL，用无菌ddH₂O补足25μL体系。

PCR反应程序：94℃2min；94℃1min，54℃45s，68℃1min，40个循环；68℃10min；保温：4℃2h。

PCR扩增产物通过电泳检测，片段长度约为1000bp，结果如图14所示。

4.4鞭毛蛋白基因的PCR扩增

对3株细菌(ZT4-2、DJ1、TR2)进行基因组DNA的提取，并以这3株细菌基因组DNA为模板，选用鞭毛蛋白基因扩增引物M288909和M288910进行PCR扩增。

PCR扩增所用引物：

M288909：5′-ATGAGAATTAACCACAATAT-3′，

M288910：5′-GTTGGTTTGCTTGAGCAAGC-3′。

PCR扩增所用反应体系：DNA模板(100ng/μL)2μL，上下游引物(10μM)各1μL，PCRMix12.5μL，用无菌ddH2O补足25μL体系。

PCR扩增所用反应程序：94℃5min；94℃1min，45.2℃1min，72℃2min，35个循环；72℃5min；保温4℃2h。

PCR扩增产物通过电泳检测，片段长度约为900bp，结果如图15所示。

4.5序列分析与分子鉴定

琼脂糖凝胶电泳验证PCR产物并送于生工生物工程(上海)有限公司测序。所获得序列通过与NCBI网站GenBank数据库中的序列进行比对，获得16SrDNA序列、gyrA基因序列或鞭毛蛋白基因序列相似度最高的菌株种类。

对3株菌株(ZT4-2、DJ1、TR2)的16SrDNA、gyrA基因和鞭毛蛋白基因PCR扩增片段进行测序，结果如下。

菌株TR2的16SrDNA序列如序列表中序列1所示。

菌株DJ1的16SrDNA序列如序列表中序列2所示。

菌株ZT4-2的16SrDNA序列如序列表中序列3所示。

菌株TR2的gyrA基因序列如序列表中序列4所示。

菌株DJ1的gyrA基因序列如序列表中序列5所示。

菌株ZT4-2的gyrA基因序列如序列表中序列6所示。

菌株TR2的鞭毛蛋白基因序列如序列表中序列7所示。

菌株DJ1的鞭毛蛋白基因序列如序列表中序列8所示。

菌株ZT4-2的鞭毛蛋白基因序列如序列表中序列9所示。

将3株菌株(ZT4-2、DJ1、TR2)16SrDNA和gyrA基因PCR产物测序后将所得序列于NCBI的数据库中进行BLAST分析，比对结果见表2。

由表2可知，3株菌株与多个公开发表的芽孢杆菌属细菌的16SrDNA序列相似度为99％，其中，与菌株TR2、DJ1的16SrDNA序列相似度为99％的种有解淀粉芽孢杆菌(B.amyloliquefaciens)、枯草芽孢杆菌(B.subtilis)、甲基营养型芽孢杆菌(B.methylotrophicus)，与菌株ZT4-2的16SrDNA序列相似度为99％的种有枯草芽孢杆菌(B.subtilis)，地衣芽孢杆菌(B.licheniformis)，龙舌兰芽孢杆菌(B.tequilensis)。根据结果可知，根据16SrDNA序列，不能确定这三个菌株的分类地位，将其初步鉴定为枯草芽孢杆菌近缘种群菌株。

由表2可知，菌株DJ1与解淀粉芽孢杆菌亚种(B.amyloliquefacienssubsp.plantarum)UCMB5036的gyrA基因序列的序列相似度为99％；菌株TR2与解淀粉芽孢杆菌(B.amyloliquefaciens)CC178的gyrA基因序列的序列相似度为99％；菌株ZT4-2与枯草芽孢杆菌(B.subtilis)株系H1的gyrA基因序列相似度为99％。

由表2可知，菌株DJ1与解淀粉芽孢杆菌亚种(B.amyloliquefacienssubsp.plantarum)UCMB5036的鞭毛蛋白基因基因序列的序列相似度为99％；菌株TR2与解淀粉芽孢杆菌亚种(B.amyloliquefacienssubsp.plantarum)NJN-6的鞭毛蛋白基因序列的序列相似度为99％；菌株ZT4-2与枯草芽孢杆菌亚种(B.subtilissubsp.subtilis)RO-NN-1的鞭毛蛋白基因序列相似度为99％。

根据三种基因的相似性，将菌株ZT4-2鉴定为枯草芽孢杆菌(B.subtilis)，将菌株DJ1和TR2鉴定为解淀粉芽孢杆菌(B.amyloliquefaciens)。

表23株芽孢杆菌属细菌分子鉴定

注：表中菌株号为与待测菌株基因序列相似性在99％及以上的菌株。

菌株ZT4-2，其分类命名为枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)，保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心(地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所)，保藏日期2014年10月30日，保藏编号为CGMCCNo.9874。

菌株TR2，其分类命名为解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)，保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心(地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所)，保藏日期2014年10月30日，保藏编号为CGMCCNo.9875。

菌株DJ1，其分类命名为解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)，保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心(地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所)，保藏日期2014年10月30日，保藏编号为CGMCCNo.9876。

实施例2.菌株ZT4-2CGMCCNo.9874、DJ1CGMCCNo.9876、TR2CGMCCNo.9875的抑菌活性测定

采用对峙培养法，以11种植物病原真菌(11种植物病原真菌见表3，由北京农学院植物病理学实验室提供，按照形态学及分子鉴定方法和柯赫氏法则进行鉴定)为靶标菌，分别测定菌株ZT4-2CGMCCNo.9874、DJ1CGMCCNo.9876、TR2CGMCCNo.9875的拮抗活性。

取PDA平板上扩大培养的真菌菌饼(d＝8mm)接入PDA平板中央，在其四周等距离处接入细菌，以不接任何细菌的培养为对照(CK)，每处理重复3次，27℃恒温培养7d后，观察细菌对不同病原真菌生长的抑制情况，并测量抑菌带宽度。

表3.11种植物病原真菌

菌株名称	分类地位	引起的病害
			立枯丝核菌Rhizoctonia solani	半知菌类丝核菌属	草莓根腐病
巴西毛壳菌Chaetomium brasiliense	子囊菌门毛壳属	草莓根腐病
			尖孢镰刀菌Fusarium oxysporum	半知菌类镰刀菌属	草莓根腐病
胶孢炭疽菌Colletotrichum gloeosporioides	子囊菌门炭疽菌属	草莓根腐病
			拟盘多毛孢菌Pestalotiopsis photiniae	半知菌类拟盘多毛孢属	草莓根腐病
林栖腐霉菌Pythium sylvaticum	卵菌门腐霉属	草莓根腐病
			富克葡萄孢盘菌Botryotinia fuckeliana	子囊菌门葡萄孢盘菌属	番茄灰霉病
美澳型核果褐腐病菌Monilinia fructicola	子囊菌门链核盘菌属	桃褐腐病
			芸薹链格孢菌Alternaria brassicae	半知菌类链格孢属	白菜黑斑病
茄病镰孢菌Fusarium solani	半知菌类镰孢属	马铃薯干腐病
			葡萄座腔菌Botryosphaeria dothidea	子囊菌门葡萄座腔菌属	苹果轮纹病

通过对峙培养法，分别测得菌株ZT4-2CGMCCNo.9874、DJ1CGMCCNo.9876、TR2CGMCCNo.9875对11种植物病原真菌的抑菌活性，测定结果如表4所示。由实验结果可知，菌株ZT4-2CGMCCNo.9874、DJ1CGMCCNo.9876、TR2CGMCCNo.9875都具有不同程度的抑菌活性，最大抑菌圈直径可达12.1mm。菌株ZT4-2CGMCCNo.9874、DJ1CGMCCNo.9876、TR2CGMCCNo.9875对林栖腐霉菌(Pythiumsylvaticum)均无抑菌活性，对巴西毛壳菌(Chaetomiumbrasiliense)菌落生长的抑菌效果和其他真菌不同，虽有抑菌带产生，但抑菌圈区域内基质菌丝能够继续生长，菌落塌陷。

从抑菌谱来看，菌株ZT4-2CGMCCNo.9874、DJ1CGMCCNo.9876、TR2CGMCCNo.9875都有较宽的抑菌谱，DJ1CGMCCNo.9876、TR2CGMCCNo.9875对供试的除林栖腐霉菌和巴西毛壳菌之外的9种植物病原真菌表现出不同程度的抑菌活性，其中TR2CGMCCNo.9875为抑菌活性较强的菌株，对9种植物病原菌的抑菌作用与其他菌株相比都有显著差异。ZT4-2CGMCCNo.9874的抑菌谱次之，对供试的8种植物病原真菌表现出不同程度的抑菌活性。

表4.对植物病原真菌的抑菌活性的测定结果

注：B类指有抑菌圈存在，但真菌菌丝生长仅有塌陷产生，存在继续生长情况；C类指无明显抑菌圈，菌丝塌陷不明显。表中值为抑菌带平均值±标准偏差，同列数字后面标有的不同小写字母表示同种菌株对不同植物病原菌抑菌带宽度的差异显著性。

以上说明对本发明而言只是说明性的，而非限制性的，本领域普通技术人员理解，在不脱离所附权利要求所限定的精神和范围的情况下，可做出许多修改、变化或等效，但都将落入本发明的保护范围内。

Claims

1.一株解淀粉芽孢杆菌，其特征在于，所述解淀粉芽孢杆菌的保藏编号为CGMCCNo.9876。

2.根据权利要求1所述的解淀粉芽孢杆菌，其特征在于，所述解淀粉芽孢杆菌具有针对植物病原真菌的抑菌活性。

3.根据权利要求2所述的解淀粉芽孢杆菌，其特征在于，所述植物病原真菌为立枯丝核菌、尖孢镰刀菌、胶孢炭疽菌、拟盘多毛孢菌、美澳型核果褐腐病菌、富克葡萄孢盘菌、葡萄座腔菌、茄病镰孢菌、芸薹链格孢菌。

4.解淀粉芽孢杆菌在制备针对植物病原真菌的生防菌剂或微生物菌肥中的应用，其特征在于，所述解淀粉芽孢杆菌的保藏编号为CGMCCNo.9876。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述植物病原真菌为立枯丝核菌、尖孢镰刀菌、胶孢炭疽菌、拟盘多毛孢菌、美澳型核果褐腐病菌、富克葡萄孢盘菌、葡萄座腔菌、茄病镰孢菌、芸薹链格孢菌。

6.一种针对植物病原真菌的生防菌剂，其特征在于，所述生防菌剂的活性成分为解淀粉芽孢杆菌CGMCCNo.9876。

7.根据权利要求6所述的生防菌剂，其特征在于，所述植物病原真菌为立枯丝核菌、尖孢镰刀菌、胶孢炭疽菌、拟盘多毛孢菌、美澳型核果褐腐病菌、富克葡萄孢盘菌、葡萄座腔菌、茄病镰孢菌、芸薹链格孢菌。

8.一种针对植物土传病害的微生物菌肥，其特征在于，所述生微生物菌肥的活性成分为解淀粉芽孢杆菌CGMCCNo.9876。

9.根据权利要求8所述的微生物菌肥，其特征在于，导致所述植物土传病害的植物病原真菌为立枯丝核菌、尖孢镰刀菌、胶孢炭疽菌、拟盘多毛孢菌、富克葡萄孢盘菌、茄病镰孢菌、芸薹链格孢菌。