CN105311644A - 甘草酸修饰紫杉醇脂质体的制备方法 - Google Patents
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Abstract
甘草酸修饰紫杉醇脂质体的制备方法属于药品技术领域，尤其涉及一种紫杉醇脂质体的合成方法。本发明提供一种操作简单，效率高且环境友好的一种甘草酸修饰紫杉醇脂质体的制备方法。甘草酸修饰紫杉醇脂质体的制备方法，包括下步骤。（1）在冰水浴冷却下，向GL与DM的混合溶液中滴加卞基二环己基异脲与DMF的混合溶液。（2）称取紫杉醇60mg溶于适量磷酸缓冲液，另取注射用豆磷脂1.8g、胆固醇0.6g及适量的磷脂酰甘油、水溶性维生素E溶于5mL乙醇中，（3）精密吸取样品液0.05mL，上葡聚糖凝50色谱柱，以蒸馏水为洗脱液，每份收集2mL，收集30份。（4）取GLOST-PTX脂质体适量，置透析袋中，悬置于盛50mL释放介质的具塞锥形瓶中。
Description
技术领域
本发明属于药品技术领域，尤其涉及一种紫杉醇脂质体的合成方法。
背景技术
脂质体(1iposome)是一种新型药物载体，可将难溶性紫杉醇包封在脂质体磷脂双分子层中，改善药物的溶解性。紫杉醇是从紫杉（红豆杉）属植物中提取出的二萜类化合物，是近年来广泛应用的抗肿瘤新药。然而紫杉醇存在水溶性差的缺点，给它的使用带来了不便，尤其静脉给药。而且应用脂质体作为抗肿瘤药物的载体，可明显地增加药物疗效、降低毒副作用。但是，作为药物载体，脂质体也存在一些问题，如对组织器官特异性差、选择性低等。在脂质体上连接一种识别分子（配体），利用配体分子的特异性和专一性，通过受体介导的内吞作用主动靶向药物至靶区释放药物，可增加药物靶向的特异性和选择性，减少对非靶组织器官损伤，进一步提高疗效。甘草酸（glycyrrhizin,GL）是甘草的主要成分之一，Negishi在20世纪90年代初证实了大鼠肝细胞膜库索细胞组分中含有大量甘草酸特异结合位点，甘草酸与该位点的结合呈受体特有的可饱和性、高度特异性，一些研究结果也表明以甘草次酸或甘草酸修饰的载体材料具有趋肝性，国内也有相关文献报道用甘草酸作为肝靶向配体来修饰药物载体，以提高药物对肝脏的靶向性。由此本文拟采取甘草酸在卞基二环己基碳异脲保护其糖基上的游离羧基条件下与硬脂醇发生酯化反应，最后氢化脱保护合成甘草酸的脂肪长链修饰物（GLOST），将其作为脂质体配体，对紫杉醇脂质体进行表面修饰。
现有的甘草酸修饰紫杉醇脂质体的制备方法步骤复杂，效率低且对环境造成污染。
发明内容
本发明就是针对上述问题，提供一种操作简单，效率高且环境友好的一种甘草酸修饰紫杉醇脂质体的制备方法。
为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案。
甘草酸修饰紫杉醇脂质体的制备方法，包括下步骤。
（1）在冰水浴冷却下，向GL与DM的混合溶液中滴加卞基二环己基异脲与DMF的混合溶液，反应液在冰水浴冷却下搅拌过夜，生成白色沉淀，反应液过滤，滤液减压浓缩。经硅胶柱层析，得纯化产物6,6-二卞基甘草酸。将硬脂醇与二环己基烃化二亚胺的混合物在CuCl催化下于85℃搅拌2小时，向混合物中滴加二卞基甘草酸与DMF的混合液，反应液于50℃搅拌3小时。过滤，滤饼用乙酸乙酯润洗，滤液合并，真空干燥得粗品，经硅胶柱层析纯化得化合物-二卞基-30-硬酯醇基甘草酸，将二卞基-硬酯醇基甘草酸与异丙醇-乙酸乙酯的混合液在5%Pd-C催化下常压氢解，反应完毕后，过滤，滤液真空干燥得到目标产物GLOST。
（2）称取紫杉醇60mg溶于适量磷酸缓冲液，另取注射用豆磷脂1.8g、胆固醇0.6g及适量的磷脂酰甘油、水溶性维生素E溶于5mL乙醇中，置250mL茄形瓶中，待完全溶解后，65℃旋转薄膜蒸发仪减压蒸馏除去乙醇，在瓶壁上形成均匀的类脂薄膜。带膜的茄形瓶减压干燥8小时，加70mL磷酸缓冲液溶解，将GLOST适量（用无水乙醇溶解）注入其中,探头超声水合20min，过0.22μm滤膜2次，高压均质二次，即得甘草酸修饰紫杉醇脂质体。
（3）精密吸取样品液0.05mL，上葡聚糖凝50色谱柱，以蒸馏水为洗脱液，每份收集2mL，收集30份，加脂质体消解液4mL，摇匀、离心,吸取20μL注入液相色谱，计算峰面积，绘制洗脱曲线。1－6mL是空白洗脱液，7-20mL有乳光带的是脂质体部分，26-32mL是游离药物，脂质体与药物能够完全分离，取三批样品，上柱分离，收集前20mL洗脱液测定PTX含量，脂质体包封率＝系统中包封药量/系统中包封与未包封总药量×100%，测定包封率均值为86.12%。
（4）取GLOST-PTX脂质体适量，置透析袋中，悬置于盛50mL释放介质的具塞锥形瓶中，密塞，置37℃水浴恒温振荡，定时取样，测定PTX含量，以药物累积释放度对时间线性拟合。
作为一种优选方案，标准品溶液制备取紫杉醇标准品适量，精密称定，加甲醇配成浓度为1.0mg·mL的溶液，即得。
本发明有益效果。
本发明本文通过采用化学法合成甘草酸修的脂肪长链饰物（GLOST），再用GLOST的对紫杉醇脂质体进行表面修饰，制备对肝脏具有靶向效应GLOST-PTX脂质体。用GLOST对脂质体进行修饰，一定程度上会增加脂质体的粒径。肝窦状隙的平均孔径约为106nm，最大可达200～300nm。采用薄膜分散法制备甘草酸修饰紫杉醇脂质体，粒径达到（105.2±23.5）nm，90%粒子粒径<150nm。因此，所得的GLOST-PTX脂质体能透过肝窦状隙，利用葡聚糖凝胶柱和高效液相色谱检测脂质体的包封率。是一种效果好且操作简单的甘草酸修饰紫杉醇脂质体的制备方法。
具体实施方式
甘草酸修饰紫杉醇脂质体的制备方法，包括下步骤。
（1）在冰水浴冷却下，向GL与DM的混合溶液中滴加卞基二环己基异脲与DMF的混合溶液，反应液在冰水浴冷却下搅拌过夜，生成白色沉淀，反应液过滤，滤液减压浓缩。经硅胶柱层析，得纯化产物6,6-二卞基甘草酸。将硬脂醇与二环己基烃化二亚胺的混合物在CuCl催化下于85℃搅拌2小时，向混合物中滴加二卞基甘草酸与DMF的混合液，反应液于50℃搅拌3小时。过滤，滤饼用乙酸乙酯润洗，滤液合并，真空干燥得粗品，经硅胶柱层析纯化得化合物-二卞基-30-硬酯醇基甘草酸，将二卞基-硬酯醇基甘草酸与异丙醇-乙酸乙酯的混合液在5%Pd-C催化下常压氢解，反应完毕后，过滤，滤液真空干燥得到目标产物GLOST。
（2）称取紫杉醇60mg溶于适量磷酸缓冲液（PH=5.6），另取注射用豆磷脂1.8g、胆固醇0.6g及适量的磷脂酰甘油、水溶性维生素E溶于5mL乙醇中，置250mL茄形瓶中，待完全溶解后，65℃旋转薄膜蒸发仪减压蒸馏除去乙醇，在瓶壁上形成均匀的类脂薄膜。带膜的茄形瓶减压干燥8小时，加70mL磷酸缓冲液溶解，将GLOST适量注入其中,探头超声水合20min，过0.22μm滤膜2次，高压均质二次，即得甘草酸修饰紫杉醇脂质体。
（3）精密吸取样品液0.05mL，上葡聚糖凝50色谱柱，以蒸馏水为洗脱液，每份收集2mL，收集30份，加脂质体消解液4mL，摇匀、离心,吸取20μL注入液相色谱，计算峰面积，绘制洗脱曲线。1－6mL是空白洗脱液，7-20mL有乳光带的是脂质体部分，26-32mL是游离药物，脂质体与药物能够完全分离，取三批样品，上柱分离，收集前20mL洗脱液测定PTX含量，脂质体包封率＝系统中包封药量/系统中包封与未包封总药量×100%，测定包封率均值为86.12%。
（4）取GLOST-PTX脂质体适量，置透析袋中，悬置于盛50mL释放介质的具塞锥形瓶中，密塞，置37℃水浴恒温振荡，定时取样，测定PTX含量，以药物累积释放度对时间线性拟合。
标准品溶液制备取紫杉醇标准品适量，精密称定，加甲醇配成浓度为1.0mg·mL的溶液，即得。
Claims (2)
1.甘草酸修饰紫杉醇脂质体的制备方法，其特征在于，包括下步骤；
（1）在冰水浴冷却下，向GL与DM的混合溶液中滴加卞基二环己基异脲与DMF的混合溶液，反应液在冰水浴冷却下搅拌过夜，生成白色沉淀，反应液过滤，滤液减压浓缩；经硅胶柱层析，得纯化产物6,6-二卞基甘草酸；将硬脂醇与二环己基烃化二亚胺的混合物在CuCl催化下于85℃搅拌2小时，向混合物中滴加二卞基甘草酸与DMF的混合液，反应液于50℃搅拌3小时；过滤，滤饼用乙酸乙酯润洗，滤液合并，真空干燥得粗品，经硅胶柱层析纯化得化合物-二卞基-30-硬酯醇基甘草酸，将二卞基-硬酯醇基甘草酸与异丙醇-乙酸乙酯的混合液在5%Pd-C催化下常压氢解，反应完毕后，过滤，滤液真空干燥得到目标产物GLOST；
（2）称取紫杉醇60mg溶于适量磷酸缓冲液，另取注射用豆磷脂1.8g、胆固醇0.6g及适量的磷脂酰甘油、水溶性维生素E溶于5mL乙醇中，置250mL茄形瓶中，待完全溶解后，65℃旋转薄膜蒸发仪减压蒸馏除去乙醇，在瓶壁上形成均匀的类脂薄膜；带膜的茄形瓶减压干燥8小时，加70mL磷酸缓冲液溶解，将GLOST适量（用无水乙醇溶解）注入其中,探头超声水合20min，过0.22μm滤膜2次，高压均质二次，即得甘草酸修饰紫杉醇脂质体；
（3）精密吸取样品液0.05mL，上葡聚糖凝50色谱柱，以蒸馏水为洗脱液，每份收集2mL，收集30份，加脂质体消解液4mL，摇匀、离心,吸取20μL注入液相色谱，计算峰面积，绘制洗脱曲线；1－6mL是空白洗脱液，7-20mL有乳光带的是脂质体部分，26-32mL是游离药物，脂质体与药物能够完全分离，取三批样品，上柱分离，收集前20mL洗脱液测定PTX含量，脂质体包封率＝系统中包封药量/系统中包封与未包封总药量×100%，测定包封率均值为86.12%；
（4）取GLOST-PTX脂质体适量，置透析袋中，悬置于盛50mL释放介质的具塞锥形瓶中，密塞，置37℃水浴恒温振荡，定时取样，测定PTX含量，以药物累积释放度对时间线性拟合。
2.根据权利要求1所述甘草酸修饰紫杉醇脂质体的制备方法，其特征在于，标准品溶液制备取紫杉醇标准品适量，精密称定，加甲醇配成浓度为1.0mg·mL的溶液，即得。
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Cited By (1)
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|---|---|---|---|---|
| CN104984350A (zh) * | 2015-06-15 | 2015-10-21 | 南方医科大学南方医院 | 一种增加紫杉醇溶解度的方法 |
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2014
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