CN105288418B - 一种治疗小儿腹泻的微乳凝胶膏剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种治疗小儿腹泻的微乳凝胶膏剂，该微乳凝胶膏剂由背衬材料、涂布于背衬材料上的膏体和盖衬材料组成，所述的膏体由0.5～1.4wt％的有效成分、6.5～12.6wt％的乳化剂和86.2～92.4wt％基质制成，其中，所述有效成分由以下重量百分比的挥发油组成：砂仁挥发油20.5～25.2wt％、苍术挥发油20.7～25.2wt％、肉桂挥发油17.0～21.2wt％和丁香挥发油29.1～35.4wt％，所述的膏体是先将乳化剂加入至有效成分中制成油相，再加入水制成O/W型微乳，然后将O/W型微乳与剩余的基质混合制成。本发明所述的微乳凝胶膏剂与常规中药贴剂相比，具有指标成分透皮吸收速度快、累计透过率高、制剂稳定性佳、皮肤相容性好的优点。

Description

一种治疗小儿腹泻的微乳凝胶膏剂及其制备方法

技术领域

本发明涉及含有双子叶植物纲苍术属植物的未确定结构的医药配制品，还涉及以非有效成分为特征的凝胶膏剂，该凝胶膏剂可用于治疗腹泻。

背景技术

小儿腹泻是一组由多病原、多因素引起的以大便次数增多和大便性状改变为特点的儿科常见病，6个月--2岁婴幼儿发病率高，是造成小儿营养不良、生长发育障碍和死亡的主要原因之一。据世界卫生组织(WHO)统计，全世界每年大约有10亿5岁以下儿童患腹泻，其中有400万～500万儿童死于腹泻；2009年联合国一项报告指出，全世界每5起儿童死亡个案中就有一人死于腹泻。国内小儿腹泻感染性强，发病率高，主要病原体是肠致病性大肠杆菌和轮状病毒，其次是志贺菌、沙门菌、空肠弯曲菌和某些条件致病菌如场球菌等。卫生部将其列为儿科重点防治的“四病”之一，防控需投入庞大的公共卫生资源。

目前西药治疗小儿腹泻多口服吡哌酸、庆大霉素、氨苄青霉素、红霉素，或丁胺卡那霉素等抗生素。抗生素对肠道菌群平衡产生强烈的影响，它们可抑制或杀灭敏感菌，促进非敏感菌过度增殖，增加二重感染机会；肠道正常菌种的数量、位置、比例发生改变，导致菌群失调；还可使葡萄糖吸收减少，双糖酶活力下降而发生腹泻；在大量杀灭细菌时，菌体裂解，产生了高浓度的内毒素，内毒素入血可增加通透性和过氧化损伤，破坏肠道屏障功能，抑制肝脏网状内皮系统的吞噬功能和全身免疫力，从而加重腹泻或使腹泻迁延。病原体的变异及新病原的出现、新型抗生素价格昂贵，亦使抗生素为主的治疗模式面临巨大挑战。

中医药防治小儿腹泻积累了丰富的临床经验，其中独特的中药敷脐疗法占有一席之地。通过对国内常用的儿科药物查询，目前市场上中药敷脐止泻药品主要有丁桂儿脐贴、儿泻康贴膜、小儿止泻贴、小儿敷脐止泻散、小儿暖脐膏和十香暖脐膏。《中国药典》2010年版收载的小儿脐部外敷制剂有两种，它们分别为小儿腹泻外敷散、小儿敷脐止泻散。但是，上述散剂与贴膏剂均为传统剂型，工艺多为药材粉碎，或分散于蜂蜡、凡士林、羊毛脂等脂溶性基质中制备所得，存在有效成分透皮吸收速度慢、累计透过率低、患儿顺应性不佳等缺陷，治疗小儿腹泻的效果仍不十分理想。

发明内容

鉴于现有技术存在上述不足，本发明要解决的技术问题是提供一种治疗小儿腹泻的凝胶膏剂，该凝胶膏剂具有有效成分透皮吸收速度快、累计透过率高和治疗效果显著的优点。

本发明解决上述技术问题方案如下：

一种治疗小儿腹泻的微乳凝胶膏剂，该微乳凝胶膏剂由背衬材料、涂布于背衬材料上的膏体和盖衬材料组成，所述的膏体由0.5～1.4wt％的有效成分、6.5～12.6wt％的乳化剂和86.2～92.4wt％基质制成，其中，

所述有效成分由以下重量百分比的挥发油组成：砂仁挥发油20.5～25.2wt％、苍术挥发油20.7～25.2wt％、肉桂挥发油17.0～21.2wt％和丁香挥发油29.1～35.4wt％；

所述的乳化剂由聚乙二醇十二羟基硬脂酸锂(英文名为Solutol HS15)和1,2-丙二醇组成，二者的重量比为1︰1；

所述的基质由以下重量百分比的原料组成：聚丙烯酸钠4.8～8.1wt％，甘羟铝0.39～0.57wt％，甘油29.3～44.5wt％，聚乙烯吡咯烷酮1.9～3.3wt％，乙二胺四乙酸二钠0.09～0.16wt％，酒石酸0.008～0.02wt％，维生素E0.58～0.80wt％，其余为水；

所述的膏体是先将乳化剂加入至有效成分中制成油相，再加入水制成O/W型微乳，然后将O/W型微乳与剩余的基质混合制成；

上述中药挥发油由以下方法制得：取砂仁、苍术、肉桂和丁香的药材粉末，分别加入15倍量水浸泡30分钟，在100℃的条件下回流提取；收集挥发油，分别得到砂仁挥发油、苍术挥发油、肉桂挥发油和丁香挥发油。

上述微乳凝胶膏剂中，所述的有效成分的最佳配比为砂仁挥发油23.4wt％、苍术挥发油23.9wt％、肉桂挥发油20.1wt％和丁香挥发油32.6wt％。

上述膏体中，所述的微乳油相最佳方案由重量比为有效成分：乳化剂＝1：10的有效成分和乳化剂组成。

本发明所述治疗小儿腹泻的微乳凝胶膏剂，其中，所述的背衬材料为无纺布；所述的盖衬材料为铝箔-聚乙烯复合膜。

上述微乳凝胶膏剂的制备方法包括以下步骤：

(1)将聚乙烯吡咯烷酮溶解于水后，加入乙二胺四乙酸二钠，制得组分B；

(2)将聚丙烯酸钠、甘羟铝、甘油、维生素E，搅拌均匀，制得组分A；

(3)将乳化剂加入到有效成分中，混匀，滤过，得油相；将所得油相与剩余的水混合并充分乳化，制成O/W型微乳；

(4)先将组分A与组分B混均后加入O/W型微乳，搅拌混均后，加入酒石酸，继续搅拌均匀，制得膏体；

(5)将膏体涂布于背衬材料上，盖上盖衬材料，即可。

本发明将有效成分制成水包油型微乳(O/W)再分散于水溶性基质制备粘性适宜的微乳凝胶膏剂(巴布剂)，提高了药物透皮吸收速度,改善患儿顺应性，具有显著的治疗优越性。

此外，本发明所述的微乳凝胶膏剂按中医的配伍原则由砂仁、苍术、肉桂和丁香四味的挥发油组成，具有化湿运脾，温中止泻的效果。与现有的丁桂儿脐贴相比，本发明可显著抑制对番泻叶所致小鼠腹泻的作用。

附图说明

图1为桂皮醛的HPLC图谱(230nm)。

图2为丁香酚的HPLC图谱(230nm)。

具体实施方式

实施例1(挥发油的制备例)

称取砂仁、苍术、肉桂和丁香药的药材粉末(中粉)各10kg，分别加入15倍量水浸泡30分钟，在100℃的条件下回流提取；收集挥发油，分别得到砂仁挥发油400ml、苍术挥发油150ml、肉桂挥发油200ml和丁香挥发油500ml。所制得的四种挥发油分别密封避光保存，供下述实施例2～4使用。

实施例2

(1)处方

(1.1)有效成分：砂仁挥发油39.8g，苍术挥发油40.6g，肉桂挥发油34.2g，丁香挥发油55.4g。本例中四种挥发油的总重量是170g。

(1.2)乳化剂：Solutol HS15 850g，1,2-丙二醇850g。

(1.3)基质：NP700 1000g，PVP K90 400g，甘羟铝80g，甘油6000g，EDTA-2Na20g，维生素E100g，酒石酸2g，水8130g。

(2)制备膏体

(2.1)取上述处方量的四种挥发油，混合均匀，制得有效成分。

(2.2)将聚丙烯酸钠、甘羟铝、甘油、维生素E，搅拌均匀，制得组分A；

(2.3)将聚乙烯吡咯烷酮溶解于6000g水后，加入乙二胺四乙酸二钠，制得组分B；

(2.4)将乳化剂加入到有效成分中，混匀，滤过，得油相；将所得油相与剩余的水混合并在常温条件下，1400r/min搅拌20分钟，制成O/W型微乳；

(2.5)先将组分A与组分B混均后加入O/W型微乳，搅拌混均后，加入酒石酸，继续搅拌均匀，制得膏体；

(2.6)将膏体2.5g以半径约为2.5cm或者以面积5×5cm²涂布于无纺布上，盖上铝箔-聚乙烯复合膜，即可。

实施例3

(1)处方

(1.1)有效成分：砂仁挥发油27g，苍术挥发油28g，肉桂挥发油26g，丁香挥发油43g。本例中四种挥发油的总重量是124g。

(1.2)乳化剂：Solutol HS15 660g，1,2-丙二醇660g。

(1.3)基质：NP700 840g，PVP K90 355g，甘羟铝68g，甘油5009g，EDTA-2Na14.5g，维生素E97g，酒石酸1.5g，水9776g。

(2)制备膏体

(2.1)取上述处方量的四种挥发油，混合均匀，制得有效成分。

(2.2)将聚丙烯酸钠、甘羟铝、甘油，维生素E，搅拌均匀，制得组分A；

(2.3)将聚乙烯吡咯烷酮溶解于7214g水后，加入乙二胺四乙酸二钠，制得组分B；

(2.4)将乳化剂加入到有效成分中，混匀，滤过，得油相；将所得油相与剩余的水混合并在常温条件下，1400r/min搅拌20分钟，制成O/W型微乳；

(2.5)先将组分A与组分B混均后加入O/W型微乳，搅拌混均后，加入酒石酸，继续搅拌均匀，制得膏体；

(2.6)将膏体2.5g以半径约为2.5cm或者以面积5×5cm²涂布于无纺布上，盖上铝箔-聚乙烯复合膜，即可。

实施例4

(1)处方

(1.1)有效成分：砂仁挥发油52g，苍术挥发油52g，肉桂挥发油41g，丁香挥发油67g。本例中四种挥发油的总重量是212g。

(1.2)乳化剂：Solutol HS15 1012g，1,2-丙二醇1012g。

(1.3)基质：NP700 1229g，PVP K90 492g，甘羟铝86g，甘油6685g，EDTA-2Na23g，维生素E121g，酒石酸2.9g，水6730g。

(2)制备膏体

(2.1)取上述处方量的四种挥发油，混合均匀，制得有效成分。

(2.2)将聚丙烯酸钠、甘羟铝、甘油，维生素E，搅拌均匀，制得组分A；

(2.3)将聚乙烯吡咯烷酮溶解于4967g水后，加入乙二胺四乙酸二钠，制得组分B；

(2.4)将乳化剂加入到有效成分中，混匀，滤过，得油相；将所得油相与剩余的水混合并在常温条件下，1400r/min搅拌20分钟，制成O/W型微乳；

(2.5)先将组分A与组分B混均后加入O/W型微乳，搅拌混均后，加入酒石酸，继续搅拌均匀，制得膏体；

(2.6)将膏体2.5g以半径约为2.5cm或者以面积5×5cm²涂布于无纺布上，盖上铝箔-聚乙烯复合膜，即可。

实施例5(透皮吸收效果的研究)

1实验材料

1.1试验药物

1.1.1样品

实施例2制备的微乳凝胶膏剂。

1.1.2对照药物

按7:2称取羊毛脂、白蜂蜡9.903g，置70℃水浴锅，水浴加热至熔融状态，取出放至适宜温度，加入实施例2有效成分0.097g，混合均匀，放冷，将膏体2.5g以半径约为2.5cm或者以面积5×5cm²涂布于无纺布上，盖上铝箔-聚乙烯复合膜，即可。

1.2实验动物

1.2.1离体鼠皮的制备

取体重20g左右的雄性小鼠，处死后用电动剃须刀剃除鼠毛，剪下腹部皮肤，除去皮下脂肪层、血管及残留物，用生理盐水洗净，并检查其完整性，用生理盐水漂洗后，置-20℃冰箱中冷冻保存备用。

2桂皮醛、丁香酚含量测定方法的建立

2.1仪器与试剂

岛津LC-20A高效液相色谱仪，UV检测器，LC-20AT泵，SIL-20A自动进样器，Labsolution色谱工作站；十万分之一分析天平(Mettler Toledo CP225D)；万分之一分析天平(Mettler Toledo AB204-N)。桂皮醛对照品(批号110710-201016，纯度＞99％)；丁香酚对照品(批号110725-201112，纯度＞99％)均购于中国食品药品检定研究院。高效液相用甲醇(Merck)为色谱纯，水为超纯水，其余试剂为分析纯。

2.2色谱条件经优化色谱柱、流动相等色谱条件，确定以Phenomenex C₁₈柱(4.6mm×250mm，5μm)为固定相；以乙腈-水按照下表1-1进行梯度洗脱；检测波长：230nm；柱温为室温；流速：1.0ml·min^-1。

表1-1流动相时间梯度表

2.3标准曲线的绘制

2.3.1标准品溶液的制备

桂皮醛对照品溶液制备精密称取桂皮醛对照品0.27550g，置50ml棕色量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得(0.0551mg·ml^-1)。

丁香酚对照品溶液制备精密称取丁香酚对照品0.53500g，置50ml棕色量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得(0.107mg·ml^-1)。

分别精密吸取上述对照品溶液2，4，8，10，16，20μl注入液相色谱仪，记录峰面积及色谱图，该色谱图如图1和图2所示。

3贴剂有效成分中桂皮醛、丁香酚含量测定

称取“实施例2”有效成分约20mg两份，精密称定，置具塞锥形瓶中，分别精密加入甲醇25ml，称定重量，超声10min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。吸取上述各供试品溶液适量，微孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液，液相色谱仪测定，并计算贴剂有效成分中桂皮醛、丁香酚的百分含量，即贴剂有效成分中桂皮醛百分含量β₁、丁香酚百分含量β₂。

4样品与对照药物透皮吸收比较实验

实验装置采用改良的Franz扩散池，其供给池内径2cm，有效扩散面积3.14cm²，膏体涂抹厚度2mm，接受池容积为18ml。将新鲜离体鼠皮固定在供给池下端，角质层面向上，在角质层上涂抹样品膏体(1.100g、1.120g、1.100g)或对照药物膏体(0.758g、0.765g、0.767g)，使膏体与皮肤接触而无气泡。然后将供给池固定在接受池上，接受池内充满接收液(含30％乙醇-生理盐水)，整个系统置于(32.0±0.2℃)的恒温水浴中，磁力搅拌，转速200r/min。分别于2，4，6，8，10，12，24h时精密吸取1ml接收液，随即补回相应量的空白接收液。吸取的接收液经微孔滤膜(0.45μm)滤过后按“2.2项下”方法直接进行HPLC分析，并计算桂皮醛、丁香酚累积渗透量Q_n(μg.cm^-2)、稳态渗透速率常数J_s(μg·cm^-2·h^-1)和累积透过率W(％)。以上透皮吸收实验平行3次。

X＝0.97％D

S＝Xβ

其中，C_n为t时间浓度的测量值，C_i为t时间以前浓度的测量值，V₀为接收液总体积，V_i为每次取样体积，A为皮肤扩散面积，Q_n为单位面积累积透过量，系数0.97％为贴剂膏体中有效成分的百分含量，D为角质层上涂抹的膏体的重量，X为角质层上涂抹的膏体中有效成分的重量，β为贴剂有效成分中桂皮醛百分含量β₁或丁香酚百分含量β₂，S为角质层上涂抹的膏体中桂皮醛或丁香酚含量，W为累计透过率，以扩散平衡后的Q_n对渗透时间t进行线性回归，所得的直线斜率即为稳态渗透速率常数J_s(μg·cm^-2·h^-1)即下文所述的透皮速率。

5实验记录及结果

5.1标准曲线的绘制

桂皮醛的峰面积测定结果(见表1-2)，以进样质量为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线，计算回归方程为：Y＝2512873.9135X+25910.2632，r＝0.9997，表明在0.1102～1.1020μg范围内峰面积与桂皮醛含量呈良好的线性关系。

丁香酚的峰面积测定结果(见表1-3)，以进样质量为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线，计算回归方程为：Y＝2059477.1174X-17741.0526，r＝0.9999，表明在0.2136～2.1360μg范围内峰面积与丁香酚含量呈良好的线性关系。

表1-2桂皮醛的峰面积测定结果(230nm)

表1-3丁香酚的峰面积测定结果(230nm)

5.2贴剂有效成分中桂皮醛、丁香酚含量测定

测定“实施例2”有效成分中桂皮醛、丁香酚的百分含量β(见表1-4)，即贴剂有效成分中桂皮醛百分含量β₁＝12.0％、丁香酚百分含量β₂＝17.9％。

表1-4“实施例2”有效成分中桂皮醛、丁香酚的含量测定结果

5.3样品与对照药物透皮吸收比较实验结果

测定样品、对照药物中桂皮醛、丁香酚的单位面积累积透过量Q_n和累积透过率W，将单位面积累积累积透过量Q_n对时间t作图，并对数据进行动力学方程拟合，比较两者的透皮吸收情况，结果如下表。

表1-5样品中桂皮醛、丁香酚单位面积累计渗透量和累积透过率(n＝3)

表1-6对照药物中桂皮醛、丁香酚单位面积累计渗透量和累积透过率(n＝3)

将单位面积累积渗透量Q_n与时间t进行拟合，求出拟合方程，结果见下表1-7。

表1-7样品与对照药物中桂皮醛、丁香酚累积渗透量Q_n与时间t拟合结果(n＝3)

表1-8样品与对照药物透皮速率和24h累积透过率结果比较(n＝3)

结论：由表1-8可得，样品与对照药物比较，桂皮醛、丁香酚透皮吸收速率分别提高了3.54、4.05倍；24h累积透过率分别提高了2.86、2.84倍，提示将处方挥发油制备成凝胶膏剂有明显的促渗透作用。

实施例6(抗腹泻的药效实验)

1、实验动物及分组

50只NIH小鼠，由广东省医学实验动物中心提供，SPF级，实验动物质量许可证号：SCXK(粤)2008-0020，雄性，体重18～22g。饲养环境：室温23±2℃，相对湿度为75±10％。50只小鼠随机分成实验组1、实验组2、实验组3、阳性对照组和模型组，每组10只。

2、实验方法

给药前各组动物禁食，同时给予蒸馏水喂养，4小时后，称定重量并给药。其中，模型组、阳性对照组、实验组1、实验组2、实验组3按0.2g/只在NIH小鼠的腹部分别涂抹按“实施例2”制备不含有效成分的膏体(模型组)、亚宝药业集团股份有限公司生产的丁桂儿脐贴(阳性对照组)、实施例2、3、4所述的膏体(实验组)，并控制涂抹面积为3cm²。施药两个小时后，各组均按小鼠的体重给以番泻叶浸出液0.3ml/10g灌胃。灌胃的小鼠单笼观察，下铺吸水纸作湿粪计数，每隔一小时记录累计湿粪数并及时更换吸水纸，以湿粪多少表示腹泻程度，连续观察4小时。

上述番泻叶浸出液的制备方法如下：取番泻叶药材粉末10.5g(20目)，置200ml量瓶中，加10倍量的蒸馏水，90℃浸泡0.5小时，滤过，取续滤液，即得。

将记录的实验数据以χ±s表示，采用t检验，使用SPSS17.0软件统计包进行统计学分析，实验结果见下表1-9。

表1-9各组与模型组止泻效果比较(n＝10)

注：与模型组比较：*表示P<0.05；**表示P<0.01；***表示P<0.001。

3、结论

由表1-9可见，实验组1、2、3效果均优于阳性对照组。

实施例7(有效成分不同含量及剂型的药效比较)

1实验材料

1.1试验药物

1.1.1样品

“实施例2”制备的微乳凝胶膏剂。

1.1.2对照药物1

按7:2称取羊毛脂、白蜂蜡9.903g，置70℃水浴锅，水浴加热至熔融状态，取出放至适宜温度，加入“实施例2”有效成分0.097g，混合均匀，放冷，将膏体2.5g以半径约为2.5cm或者以面积为5×5cm²涂布于无纺布上，盖上铝箔-聚乙烯复合膜，即得(含有效成分0.97％)。

1.1.3对照药物2

按“1.1.2对照药物1”的制备方法制备含10％“实施例2”有效成分的对照药物2(含有效成分10％)。

1.1.4其他药物

亚宝药业集团股份有限公司生产的丁桂儿脐贴，生理盐水。

1.2实验动物及分组

50只NIH小鼠，由广东省医学实验动物中心提供，SPF级，实验动物质量许可证号：SCXK(粤)2008-0020，雄性，体重18～22g。饲养环境：室温23 2℃，相对湿度为75 10％。50只小鼠随机分成实验组、丁桂儿脐贴组、对照药物组1、对照药物组2和模型组，每组10只。

2、实验方法

给药前各组动物禁食，同时给予蒸馏水喂养，4小时后，称定重量并给药。其中，模型组、丁桂儿脐贴组、对照药物组1、对照药物组2、实验组按0.2g/只在NIH小鼠的腹部分别涂抹生理盐水、丁桂儿脐贴、对照药物1、对照药物2、样品所述的膏体，并控制涂抹面积为3cm²。施药两个小时后，各组均按小鼠的体重给以番泻叶浸出液0.3ml/10g灌胃。灌胃的小鼠单笼观察，下铺吸水纸作湿粪计数，每隔一小时记录累计湿粪数并及时更换吸水纸，以湿粪多少表示腹泻程度，连续观察4小时。

上述番泻叶浸出液的制备方法如下：取番泻叶药材粉末10.5g(20目)，置200ml量瓶中，加10倍量的蒸馏水，90℃浸泡0.5小时，滤过，取续滤液，即得。

将记录的实验数据以χ±s表示，采用SPSS 17.0软件对数据进行单因素方差分析(one way-ANOVA)和LSD多重比较分析处理，数据用均数±标准差(±s)表示，实验结果见下表1-10。

表1-10各组间药效比较

*注：与模型组比较：*表示P<0.05；**表示P<0.01；***表示P<0.001。

与实验组比较：+表示P<0.05；++表示P<0.01；+++表示P<0.001。

3结论

结果显示，在第4h时候，与模型组比较，对照药物组1未显示药效；实验组、对照药物组2显示极显著药效(P<0.001)、丁桂儿脐贴组显示较显著药效(P<0.01)。

与实验组比较，实验组药效显著优于对照药物组1，表明将有效成分制备成微乳凝胶膏剂剂型具有药效优势；对照药物组2与实验组基本等效，表明将低剂量(0.97％)的有效成分制备成微乳凝胶膏剂可达到高剂量(10％)的有效成分普通贴膏膏剂的近似药效，亦可提示将有效成分制备成微乳凝胶膏剂的剂型优势。

实施例8(皮肤刺激性及过敏性实验)

按照《中药、天然药物局部刺激性和溶血性研究技术指导原则》规范，探讨受试药物含5％、12.5％、20％有效成分的微乳凝胶膏剂对家兔完整皮肤的刺激性；考察含12.5％有效成分的微乳凝胶膏剂对豚鼠的过敏性。

1实验材料

1.1试验药物

1.1.1受试药物含5％(g/g)有效成分的微乳凝胶膏剂制备

按“实施例2”制备含5％(g/g)有效成分的微乳凝胶膏剂(含有效成分0.05g/g)。

1.1.2受试药物含12.5％(g/g)有效成分的微乳凝胶膏剂制备

按“实施例2”制备含12.5％(g/g)有效成分的微乳凝胶膏剂(含有效成分0.125g/g)。

1.1.3受试药物含20％(g/g)有效成分的微乳凝胶膏剂制备

按“实施例2”制备含20％(g/g)有效成分的微乳凝胶膏剂(含有效成分0.20g/g)。

1.1.4对照试验组

2,4-二硝基氯代苯。

1.1.5空白对照组

按“实施例2”制备不含有效成分的膏体(空白基质)。

1.2实验动物

豚鼠，体质量(220±30)g，雌雄各半，广州中医药大学动物实验中心提供SPF级动物；5～8个月龄健康雄性新西兰家兔，体重2.0～2.5Kg，由广州中医药大学动物实验中心提供。

1.3试验仪器

宠物电推剪，电动剃须刀，手术刀。

1.4实验环境

广州中医药大学动物实验环境设施SPF级动物房。

2实验方法

单次及多次给药对家兔完整皮肤的刺激性实验：按照《中药、天然药物局部刺激性和溶血性研究技术指导原则》规范开展。

豚鼠过敏性实验：选用体重在220±3g豚鼠9只，随机均分为3组(n＝3)，分别为空白对照组、受试药物组、阳性对照组。试验前24小时，将其背部对称两侧脱毛，脱毛面积每侧为3cm×3cm，并作如下试验：

(1)致敏接触：将上述三组动物左侧脱毛区分别涂抹空白基质0.2g、含10％有效成分微乳凝胶膏剂0.2g和阳性致敏物(1％的2,4-二硝基氯代苯)0.2mL。接触时间持续6小时，并于给药后7、14天重复上述给药过程。其中阳性对照组给药后用一层消毒油纸和两层消毒纱布覆盖，胶布固定。

(2)激发接触：于致敏接触阶段末次给药后14天重复上述给药过程，给药部位为右侧脱毛区，其中阳性致敏物浓度为1％的2,4-二硝基氯代苯0.2mL。激发6小时后洗净药物，即刻观察，然后于24，48，72小时再次观察皮肤过敏反应，根据《中药、天然药物免疫毒性(过敏性、光变态反应)研究的技术指导原则》的评分标准进行评价。

过敏反应平均值＝(红斑形成总分+水肿形成总分)/合计动物数

致敏发生率＝出现红斑、水肿或全身性过敏反应的动物例数/合计动物数

*注：出现红斑、水肿或全身性过敏反应的动物例数,应不论程度轻重。

(3)皮肤过敏反应程度评分标准如下表1-11和表1-12所示：

表1-11皮肤过敏反应程度的评分标准

表1-12皮肤致敏性评价标准

3实验结果

3.1单次给药家兔完整皮肤刺激性试验

表1-13完整皮肤单次给药试验皮肤反应积分值

由表1-13可见，含有效成分5％、12.5％、20％微乳凝胶膏剂单次给药在去除药物后1、24、48和72小时均未见家兔背部完整皮肤受试区出现红斑、水肿等现象。实验结果提示，在单次给药家兔完整皮肤刺激性试验中，受试药物均未见皮肤刺激性现象。

3.2多次给药家兔完整皮肤刺激性试验

表1-14完整皮肤多次给药试验皮肤反应平均积分值及刺激强度

由表1-14可见，完整皮肤多次给药试验中，空白基质及含有效成分5％、12.5％的微乳凝胶膏剂未见刺激性，含有效成分20％微乳凝胶膏剂显示可恢复的轻微刺激性。

3.3含有效成分12.5％微乳凝胶膏剂的皮肤过敏性

按照《中药、天然药物免疫毒性(过敏性、光变态反应)研究的技术指导原则》规范，探讨含有效成分12.5％微乳凝胶膏剂对豚鼠的皮肤过敏性。实验结果如下：

表1-15受试药物的皮肤过敏性评价

表1-16受试药物的皮肤过敏性评价

结果显示，在试验过程中，各组动物均未出现哮喘、站立不稳或休克等严重全身性过敏反应。其中阳性对照组在0h、24h、48h和72h致敏反应平均分值为1.3、3.7、5和6，致敏率为100％。空白对照组和含有效成分12.5％微乳凝胶膏剂组致敏反应平均分均值皆为0，致敏率为0％，提示含有效成分12.5％微乳凝胶膏剂组对皮肤未见致敏性。

结论

本实验选取实施例2的有效成分，探讨受试药物含有效成分5％、12.5％、20％微乳凝胶膏剂对家兔完整皮肤的刺激性及过敏性。结果表明，空白基质及含有效成分5％、12.5％的微乳凝胶膏剂未见刺激性，含有效成分20％微乳凝胶膏剂显示可恢复的轻微刺激性。空白对照组和含有效成分12.5％微乳凝胶膏剂组致敏反应平均分均值皆为0，致敏率为0％，对皮肤无致敏性。动物刺激性与过敏性实验表明，本发明受试药物未见刺激性和过敏性反应。

实施例9(临床效果考察)

1一般资料

本组150例患儿均来自2012～2013年到妇幼保健院就诊的患儿。严格按照“中国腹泻病诊断治疗方案”的诊断标准选择病例，其中男85例，女65例，年龄6～40个月，平均22个月，病程2～30d。

上述病例的临床表现为大便次数多，每日5～15次，大便均呈蛋花水样或黄色稀水样，多伴轻度脱水、发热，大便常规检查未见脓细胞、吞噬细胞，且红细胞、白细胞在每视野15个以下，血常规均未见异常。将患者随机分为对照组1、对照组2和治疗组，每组50例。对照组1采取传统的治疗方法，口服思密达的蒙脱石散；对照组2采用丁桂儿脐贴贴敷患儿神阙穴；治疗组选用含上述实施例2的微乳凝胶膏剂贴敷患儿神厥穴。两组患儿在年龄、性别、体重、病情、病程等方面无显著性差异(P>0.05)，具有可比性。

2治疗方法

对照组1仅进行常规治疗，即调整饮食，禁食6～12h，口服思密达的蒙脱石散。轻度脱水患者口服补液盐(ORS)，中重度脱水者静脉补液，纠正脱水和电解质紊乱。对照组2采用丁桂儿脐贴贴敷患儿神阙穴，一次1贴，24小时换药一次。治疗组采用上述实施例2的微乳凝胶膏剂，每日1次，一次1贴，24小时换药一次。三组均以3d为一个疗程，一个疗程后进行疗效评价。贴敷期间，若出现使用不适情况如脐部发红、破溃、起泡则禁用；治疗期间忌食辛辣、海鲜、羊肉、蘑菇等发物。

3疗效评价

本实验采用以下标准，显效：经过一个疗程的治疗，患儿每日大便次数少于两次，大便的性状以及便常规检查趋于正常，临床症状完全消失；有效：经过一个疗程的治疗，患儿每日大便次数少于四次，大便的性状以及便常规检查有所改善，临床症状基本消失；无效：经过一个疗程的治疗，患儿临床症状没有任何改善甚至出现加重趋势。

4统计学处理

采用统计学软件SPSS 17.0建立数据库，通过t检验和χ²检验进行统计学分析，(P<0.05)表示差异有显著性意义。

5结果

两组临床疗效比较见表1-17，治疗组总有效率为90％(45/50)，对照组1总有效率为68％(34/50)，对照组2总有效率为76％(38/50)且给药期间患者均没有出现使用不适情况，两组比较差异有统计学意义(P<0.05)，治疗组疗效优于对照组。结果表明，本发明所述脐贴具有显著的临床疗效。

表1-17两组患儿临床治疗效果比较[例(％)]

*注：与对照组比较：*表示P<0.05；总有效率＝(显效例数+有效例数)/总例数×l00％。

Claims (3)

1.一种治疗小儿腹泻的微乳凝胶膏剂，该微乳凝胶膏剂由背衬材料、涂布于背衬材料上的膏体和盖衬材料组成，所述的膏体由0.5～1.4wt％的有效成分、6.5～12.6wt％的乳化剂和86.2～92.4wt％基质制成，其中，

所述有效成分由以下重量百分比的挥发油组成：砂仁挥发油20.5～25.2wt％、苍术挥发油20.7～25.2wt％、肉桂挥发油17.0～21.2wt％和丁香挥发油29.1～35.4wt％；

所述的乳化剂由聚乙二醇十二羟基硬脂酸锂和1,2-丙二醇组成，二者的重量比为1︰1；

所述的基质由以下重量百分比的原料组成：聚丙烯酸钠4.8～8.1wt％，甘羟铝0.39～0.57wt％，甘油29.3～44.5wt％，聚乙烯吡咯烷酮1.9～3.3wt％，乙二胺四乙酸二钠0.09～0.16wt％，酒石酸0.008～0.02wt％，维生素E0.58～0.80wt％，其余为水；

所述的膏体是先将乳化剂加入至有效成分中制成油相，再加入水制成O/W型微乳，然后将O/W型微乳与剩余的基质混合制成；

上述中药挥发油由以下方法制得：取砂仁、苍术、肉桂和丁香的药材粉末，分别加入15倍量水浸泡30分钟，在100℃的条件下回流提取；收集挥发油，分别得到砂仁挥发油、苍术挥发油、肉桂挥发油和丁香挥发油。

2.根据权利要求1所述的一种治疗小儿腹泻的微乳凝胶膏剂，其特征在于，所述的有效成分由以下重量百分比的挥发油组成：砂仁挥发油23.4wt％、苍术挥发油23.9wt％、肉桂挥发油20.1wt％和丁香挥发油32.6wt％。

3.一种权利要求1或2所述的治疗小儿腹泻的微乳凝胶膏剂的制备方法，该方法包括以下步骤：

(1)将聚乙烯吡咯烷酮溶解于水后，加入乙二胺四乙酸二钠，制得组分B；

(2)将聚丙烯酸钠、甘羟铝、甘油，维生素E，搅拌均匀，制得组分A；

(3)将乳化剂加入到有效成分中，混匀，滤过，得油相；将所得油相与剩余的水混合并充分乳化，制成O/W型微乳；

(4)先将组分A与组分B混均后加入O/W型微乳，搅拌混均后，加入酒石酸，继续搅拌均匀，制得膏体；

(5)将膏体涂布于背衬材料上，盖上盖衬材料，即可。