一种用于初级纤毛相关疾病致病基因筛查的基因芯片
技术领域
本发明属于基因诊断领域,涉及一种基因芯片,具体涉及一种用于初级纤毛相关疾病致病基因筛查的基因芯片及其应用。
背景技术
初级纤毛相关疾病是一组临床表型和基因型相互重叠的疾病,其病因在于初级纤毛缺陷。纤毛相关疾病涉及人体多种器官比如肾脏、脑部、四肢、眼部、耳、肝脏、骨骼等。其表型包括多囊肾、肝胆疾病、多指/趾、认知障碍、视网膜退化、骨骼异常、肥胖、内脏转位等。初级纤毛相关疾病包括:Bardet-Biedl综合症(BBS)、青少年消耗性肾病(NPHP)、Senior-Loken综合症(SLNS)、Alstrom综合症(ALMS)、Meckel-Grubber综合症(MKS)、Joubert综合症(JBTS)、1型口面指综合症(OFD1)、埃利伟氏综合症(EVC)及先天性利伯氏黑矇(LCA)、多囊肾病(PKD)等。
比较基因组学和蛋白质组学分析指出:纤毛上存在超过1400种多肽,仅纤毛轴丝上的被识别蛋白就可达200种。因此,相关基因的异常将破坏初级纤毛的组装、解聚的平衡过程,或是直接影响其信号通路,阻断其传导、感受功能,导致初级纤毛异常,出现多种发育和细胞信息缺陷,从而产生初级纤毛疾病。
目前来说,初级纤毛疾病尚无可靠而确切的治疗方法,其诊断仍然依赖临床表型,考虑到其临床表型的复杂性,单纯的表型诊断会带来一定的干扰。新一代测序技术(NGS)是近年来兴起的一种能够省时有效的识别疾病致病基因的手段,NGS针对的是经过严格筛选的相关候选基因。基于基因芯片外显子捕获和NGS的基因诊断平台可以同时检测成百上千个基因,使得基因检测变得相对简单和快速。
发明内容
为了克服现有技术中存在的不足,本发明的目的之一在于提供一种用于初级纤毛相关疾病致病基因筛查的基因芯片。本发明的基因芯片操作步骤简单,检测特异性高,稳定性好,时间短,成本低。
本发明的目的之二在于提供了上述基因芯片的用途。
为了实现上述目的,本发明采取了以下技术方案:
本发明提供了一种用于初级纤毛相关疾病致病基因筛查的基因芯片,所述基因芯片包括固相载体和固定于所述固相载体上的探针;所述探针序列如SEQIDNO.1-113所示。
所述探针可以被修饰,修饰方法可以是5’-NH2修饰、5’-SH修饰、5’-PolyT(A、C或G)修饰、5’-生物素修饰、3’-NH2修饰、3’-SH修饰、3’-PolyT(A、C或G)修饰和3’-生物素修饰等。
本发明中所述固相载体可选用领域周知的载体,只要所述载体与反应物相容,不会影响检测结果就可以。优选地,所述固相载体选自载玻片、硅片、膜或高分子材料中的任意一种。优选地,所述膜选自硝酸纤维素膜、尼龙膜、聚苯乙烯膜中的任意一种。
芯片制备方法主要包括两种类型:(1)点样法:首先是探针库的制备,根据基因芯片的分析目标从相关的基因数据库中选取特异的序列进行PCR扩增或直接人工合成寡核苷酸序列,然后通过计算机控制的三坐标工作平台用特殊的针头和微喷头分别把不同的探针溶液逐点分配在玻璃、尼龙以及其它固相基片表面的不同位点上,通过物理和化学的方法使之固定,该方法各技术环节均较成熟,且灵活性大,适合于研究单位根据需要自行制备点阵规模适中的基因芯片。(2)原位合成法:该法是在玻璃等硬质表面上直接合成寡核苷酸探针阵列,目前应用的主要有光去保护并行合成法,压电打印合成法等,其关键所述探针可通过连接臂固定于固相载体上。连接臂可以为探针形成双链的部分提供一个自由的空间以减少空间位阻,有助于杂交反应的进行[AfanassievV,HanemannV,WolflS.PreparationofDNAandproteinmicroarraysonglassslidescoatedwithanagarosefilm.NucleicAcidsRes.2000,28:e66;USAPatentNo.5556752]。连接臂越长,杂交效率越高。典型的连接臂包括15-30个功能基团长度。连接臂可以选用适当形式的功能基团,如PolyT(A、C或G)、C原子或聚乙烯乙二醇与PolyT(A、C或G)的嵌合体、聚乙醇、聚酷、聚氨、聚硫酸酷和其组合物。是高空间分辨率的模板定位技术和高合成产率的DNA化学合成技术,适合制作大规模DNA探针芯片,实现探针芯片的标准化和规模化生产。
进一步,本发明的基因芯片的制备使用原位合成法。本领域技术人员熟知利用原位合成法制备基因芯片的步骤,可以利用常规的技术手段完成本发明的基因芯片的制备。
本发明还提供了上述基因芯片的使用方法,包括以下步骤:
(a)制备样品DNA片段;
(b)荧光标记上述DNA片段;
(c)洗脱上述标记产物;
(d)将标记产物与所述基因芯片杂交;
(e)扫描检测基因芯片的杂交信号,获得结果。
所述样品DNA片段制备可包括扩增的步骤,用分离的靶样本中含核酸的细胞直接扩增,也可用抽提的靶核酸直接扩增。如用磁珠从全血中分离白细胞,直接用分离的白细胞或用全血抽提的核酸作模板,扩增目的核酸序列。扩增得到的DNA可含有荧光或生物素标记,标记的DNA可不经纯化直接用于杂交。
样品DNA片段可使用任何适当的扩增方法进行富集,如:聚合酶链反应(polymerasechainreaction,PCR),多重PCR,连接酶链反应(ligasechainreaction,LCR),滚环扩增(rollingcycleamplification,RCA),基于核酸序列的扩增(nucleicacidsequence-basedamplification,NASBA),链置换扩增(stranddisplacementamplification,SDA)和转录介导的扩增(transcriptionmedicatedamplification,TMA)等。
所述探针或样本DNA都适合用于标记。探针在合成引入标记,样本DNA可以在扩增中引入标记,或者扩增后用合适的方法引入标记。
合适的标记包括荧光标记、放射性同位素标记、发色团、发光体、FRET、酶、生物素或有特殊结合配体的配基。
本发明还提供了一种用于初级纤毛相关疾病致病基因筛查的工具。所述工具包括前面所述的基因芯片。优选地,所述工具是试剂盒。
进一步,上述筛查试剂盒除了包含前面所述的基因芯片之外,还可包含提取DNA的试剂、标记DNA的试剂、洗脱和纯化DNA的试剂等用于基因芯片检测过程中的试剂。
本发明还提供了上述基因芯片在制备初级纤毛相关疾病致病基因筛查工具中的应用。所述工具包括前面所述的基因芯片。优选地,所述工具是试剂盒。进一步,上述筛查试剂盒除了包含前面所述的基因芯片之外,还可包含提取DNA的试剂、标记DNA的试剂、洗脱和纯化DNA的试剂等用于基因芯片检测过程中的试剂。
本发明的优点和有益效果:
(1)本发明的基因芯片可以同时检测成百个基因,简单快速;
(2)本发明的基因芯片对致病基因的检测准确度达100%;
(3)采用本发明的基因芯片能够帮助医生更加透彻的了解初级纤毛相关疾病的分子机理,对合理有效的治疗有极大的指导意义。
具体实施方式
下面结合具体实施例,进一步阐述本发明。应理解,这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法,通常按照常规条件,例如Sambrook等分子克隆:实验室手册见NewYorkColdSpringHarborLaboratory出版社1989年版中所述的条件,或按照制造厂商所建议的条件。实施例中的实验试剂,如无特殊说明,均可从商业途径获得。
实施例1基因芯片的制备和探针的保存
1、探针的合成
利用原位合成技术根据探针序列设计合成相应长度的探针,探针序列如SEQIDNO.1-113所示,采用HPLC技术对合成的探针进行纯化。
2、洗脱探针
将带探针的芯片浸泡于5ml35%氨水中,封闭好放到恒温旋转器上,旋转2小时以上,将探针从芯片上洗脱下来,转移到离心管2.0中。
3、离心抽干
将洗脱的探针利用真空浓缩仪进行旋转真空浓缩,至没有液体后停止。
4、探针的溶解
将浓缩好的探针管中加入200μl的无RNA及DNA酶的去离子水,漩涡震荡1分钟以上,并合并所有溶解好的探针至一个管中保存。
5、生物素标记
将生物素利用基因扩增技术标记到已经纯化好的探针上,并利用柱式DNA回收试剂盒将已经标记的生物素探针进行纯化和洗脱。
6、定量检测
利用Nanodrop对已经做好生物素标记的探针进行定量检测,其探针浓度大于150ng/μl,并利用凝胶电泳实验对探针的片段进行检测,条带清晰、干净方为合格,合格后保存到-20℃以下,长期保存置于-80℃冰箱中。
实施例2基因芯片的使用方法
(1)样品DNA片段的制备
取患者、正常人血液,采用常规方法抽提全基因组DNA(gDNA)。
将水浴锅温度调到37℃和65℃,溶化10×缓冲液C(见下表),短暂涡旋震荡后离心数秒。
对每个反应来说,将gDNA加入到适当的无核酸酶的PCR管中,并加入无核酸酶的水使反应体积达到10.1μl。
在冰上准备酶切混合母液,按表1中的顺序加入试剂:
表1
试剂 |
每个反应(μl) |
×16rxns(μl) |
水 |
1.0 |
17.0 |
10×缓冲液C |
1.3 |
22.1 |
乙酰化BSA(10μg/μl) |
0.1 |
1.7 |
Alu I(10U/μl) |
0.25 |
4.25 |
Rsa I(10U/μl) |
0.25 |
4.25 |
终体积 |
2.9 |
49.3 |
其中,10×缓冲液C由RsaI提供;乙酰化BSA由AluI提供;AluI的货号为Promegap/nR6281;RsaI的货号为Promegap/nR6371。
将2.9μl酶切反应液加入到gDNA反应管中,使之体积达到13μl。上下颠倒使之混匀。进行PCR反应,反应程序为:37℃运行2小时,65℃运行20分钟。
反应后将反应管转移到冰上,取2μl酶切好的gDNA,配置0.8%琼脂糖胶,用SYBRGold染色,跑电泳检测酶切是否完全。
(2)DNA的荧光标记
在每个反应管中加入2.5μl随机引物(AgilentGenomicDNALabelingKit,Agilentp/n5188-5309),使之体积达到13.5μl,轻轻上下颠倒进行混匀。进行PCR反应,反应程序为:95℃变性3分钟。将反应管转移至冰上5min。
准备标记混合母液,按表2中的顺序加入试剂:
表2
将11.5μL标记反应液加入到gDNA反应管中,使之体积达到25μl。轻轻上下颠倒使之混匀。进行PCR反应,反应程序为:37℃运行2小时,65℃运行10分钟。将反应管转移到冰上。其中Cy3-dUTP标记正常人gDNA,Cy5-dUTP标记患者gDNA。
(3)标记gDNA的洗脱
加入430μl的1×TE(pH8.0)到每个反应管中。将一个MicroconYM-30过滤柱(Milliporep/n42410)放入一个1.5ml离心管中,并且将标记好的gDNA加到滤膜上。室温下8000g离心10min。弃滤液。加入480μl的1×TE(pH8.0)到每个过滤柱中。室温下8000g离心10min。弃滤液。
倒置过滤柱,放入一个新的1.5ml离心管中。室温下8000g离心1min收集纯化样本。检查并记录每管洗出液的体积。如果体积超出10μl,将洗出液重新加到滤膜上,室温下8000g离心1min。弃滤液。
重复上述两步直到样本体积均小于等于10μl。加入1×TE(pH8.0)使最终体积达到10μl。从每个样本中取1.5μl检测产量和比活,使用NanoDropND-1000UV-VIS分光光度计(由ThermoFisherScientificInc提供)测量。
将等量的分别用Cy5和Cy3标记的两种样本在一个新的1.5ml耐高温的离心管中混合,达到最终体积158μl。
(4)样品的预处理
向装有10×封闭试剂冻干粉的小瓶中加入1350μl无核酶的水。在使用或保存之前,室温放置60min,涡旋振荡混匀。
将水浴锅调至95℃和37℃。
在一个无核酶的离心管中按表3中的顺序加入试剂:
表3杂交混合液的配制
试剂 |
体积(μl)/每次杂交反应 |
Cy5和Cy3标记的gDNA混合液 |
16 |
Cot-1DNA(1.0mg/ml) |
2 |
Agilent 10×封闭试剂 |
4.5 |
其中,Cot-1DNA的货号为Invitrogenp/n15279-011;
10×封闭试剂与2×杂交缓冲液的货号为Agilentp/n5188-5220。
上下颠倒混合样品,随后短暂离心。将样品管转移到95℃水浴锅中水浴保温3min。立即将样品管转移到37℃水浴锅中水浴保温30min。将样品管拿出水浴锅,17900g离心1分钟,收集管底样品。
(5)杂交反应
将步骤(4)制备的杂交混合液置于基因芯片上的探针区域,并盖上盖玻片(防止水分在杂交过程中蒸发),置于65℃的杂交炉内24小时。
(6)洗脱和扫描
将杂交后的基因芯片放入盛放有洗脱缓冲液1(AgilentOligoaCGHWashBuffer1,Agilentp/n5188-5221)的染色缸中,洗脱5min。之后将芯片放入盛有洗脱缓冲液2(AgilentOligoaCGHWashBuffer2,Agilentp/n5188-5222)的染缸中,洗脱1min。将芯片取出立即扫描检测。
实施例3基因芯片对初级纤毛相关疾病致病基因的检测准确率
1、实验对象的选择:选择具有初级纤毛相关疾病临床表征的50个病例作为检测对象,已经使用基因表达谱和基因测序技术确定了上述检测对象的致病基因。
2、利用本发明的基因芯片检测病例的致病基因
根据实施例2描述的方法进行上述病例的致病基因的确定。结果显示:包含SEQIDNO.1-113所示的探针序列的基因芯片检测出的50例病人的致病基因与使用基因表达谱和基因测序技术获得的检测结果相同,该基因芯片对初级纤毛相关疾病致病基因的检测准确率达100%。
3、对比实验
为SEQIDNO.1-113探针序列对应的初级纤毛相关疾病的候选相关基因再设计两套探针组,利用原位合成法制备基因芯片。对比基因芯片1上包含表4中列出的探针组,对比基因芯片2上包含表5中列出的探针组。分别使用对比基因芯片1和2检测上述病例的致病基因。结果显示:对比基因芯片1检测出了40例病人的致病基因与使用基因表达谱和基因测序技术获得的检测结果相同,对比基因芯片1对初级纤毛相关疾病致病基因的检测准确率达80%;使用对比基因芯片2检测出了42例病人的致病基因与使用基因表达谱和基因测序技术获得的检测结果相同,对比基因芯片2对初级纤毛相关疾病致病基因的检测准确率达84%。
上述实验结果表明,包含SEQIDNO.1-113所示的探针序列的基因芯片对初级纤毛相关疾病致病基因的检测准确率极高。
表4对比基因芯片1上的探针序列
编号 |
探针序列(5’-3’) |
1 |
TCTCCGGCGACTGGCTGAGGAGGCGAGCCTCGTACCTGCTGCGCGCCGGGGCGCCTGCTGCTTCCTCCTCGGCATGAT |
2 |
CTCACGGGTTGGTCGTGGACAGGATGAACATGGAGCTATAGGGAGGCATTGGCTTAGGGCCGTCTTCCCCACGGTTTT |
3 |
GCTTTGAAGACAGTTCTGAGAGGAAGTGGAAATCTCCTTAGACAGCTAAACAAAAGTGGCACTACACAGAATGGTATG |
4 |
GTAGCAGGACCAAGGCTACCTCCAGTTCTCTCAGAATTCCTGACTGTCCGCAGGTTTCCAAATCCTCCAGCGCTTGAG |
5 |
GTGAAAAGTGCAGCTGCAACCAATCTCTCAGCCCTGTATTATATGGTAAGTTTTTTTACTACTAAGAGTTAATCATAT |
6 |
TTATATCGTCATAAAAACCTTATTGCAAAAGGATTTTAATATTAGTTATTTCACTTACCAAAATGCAGTCCACTTTAG |
7 |
GAAAGATACCTTCTTATCTACAGGTGTTAAACGTTGTCTTGGTTTAGGTCTTGGTGCCTAAGACAAACCAACCAATGT |
8 |
GTGGCCAGCTGGGGGAGGGGACATACCTAGCACATTGTGAATGGAACTCTGCTGGCTGAACCCTTCCAGACGGTCCAA |
9 |
GAGGACAGAGGGCTTCTGTGACGTCAGGACGCTGGCAATCTAGAAGGTCGGAAAGAAAAACCCACTTTAGAGGCACCA |
10 |
ATTTTATGCTTGGCGGAGCAGATTAAATTCACTGAAGATGTAGAAAATGCTATTAAAGATCATAGTCTTCATCAGATT |
11 |
TTTCAAAGTTTTTCTAATATCATCAGCATCAGGAAAATGGTGATGACCTGCAGCCCCATAAGGAAATCCTGGACGAAC |
12 |
ATGTTCTCGTCCGTGGCGCACCTGGCGCGGGCGAACCCCTTCAACACGCCACATCTGCAGCTGGTGCACGATGGTCTC |
13 |
CTGCAGGGTCTGCACGGCCAGGTAGCGGGCAAAGCAGCGCCGCTCACCTGGCTTCAGGAACCCAGGGCCCACCATGTA |
14 |
GTATGCAATAAAATCATCTTTCTAATGAGCTTTGTGGGCAACTGTGGGACATTCACAAGAGGCTACCGAGCCATGGTT |
15 |
CAGCACCTCGCAGATTTGCTCCTGTACCTGTTTCAAGGGATGATGAACTATCAAAGAGGGAAAATCTTTTGGAAGAAA |
16 |
TTTCTCAAATCCCAACTCATGGGCTGAATTAGAAGCCTGCTGAAAAGTTTCCATTTGCTCTTGTTCATCATGTATGTC |
17 |
GGACTTCTCCTTCAGCTTTGATTGGAGTAGTGTGTGTTCCACAATGCCAATTCTAATGTCCATCTCTACAGTTTCTTG |
18 |
CTGCACCAGATTTCAAACTGGACTCCACCTCCAGGCACGAGGCCCTGTGCAGAGAAAGCACTTAGTAGGAGCCTTTGC |
19 |
AGCCTACGAGAAATGTGACCGTGACCTGGATGAATTGATTGTACAGCACTACACAGAATTGACGACAGCCATTCGCAC |
20 |
GTGTAAACTGTGAATTGGAAATTGACGAATGTTGGTCCCAGCCTTGTTTAAATGGTGCAACTTGTCAGGATGCTCTGG |
21 |
GACTGATGGTCTATCCCTAGGATTTCTTTTAAATAACTGAGACACCAAACTGCGGAGATCATAGGAATAATGCAAAGA |
22 |
CTGATGGTTCTGTTGGCGTCCTCGTGGTCTGGGTCTGGATCTTGCATCTCGCCACTGTCGTTCTGGCACTCTGCCATT |
23 |
TATTAGGTAGCAAAACGAGACATGATTAACAAGACAGAAGATGCCCGCCTCTGAAATCGCTTTCTGAACAGCACTCCA |
24 |
AGATGAGGTAGCTGCCAGGTGCCATGGGGGTATAGGTGACGCGGTAGCCCTCAGGGCACTCCTGGCAATCCATCTTCA |
25 |
CCGGCTGTGCGACTCCAGGATCTGTGTGCAGGCCGACTTGGTCAGCATCTCAGATGCACTCAGCTCTTCCAGGAGCAA |
26 |
TGCACCTGTACAGAGACCCAGCTCTTCTGGGTCTCCGCTGTCCCCTGTATCCCAGCTTCCCAGAGGAAGCAGCACTGG |
27 |
GTACACTATGGAGAACTATTTCCCCGAGCTGGATCGCCCCGATGTGCCCCAGGGCCTCCGCGGTCAGCGTGCCCACCT |
28 |
CAGGTGAGGCCAAGGAGATGGGATATGACTTGACTTTCTGGTATTTTATGGCAGACCATGGCTTTAACCAAATGGTGT |
29 |
AGGTTGGCGTCGTGCGAGGCCACGCCCGGGGACCGTGGGCCACAGGGCACCGGGTGTGGCGGGCAGAGGGGCTCCGGG |
30 |
CAGGTTGAGGAGGAGCCGCTCCCGCCGGGCGGCCACCATCTGCCGCAAGAAGTCCCAGAGCCGTGCCACGTTGTGCTG |
31 |
CTCATTATGGTTTCTTGACTGATGCTACCAAAAATCCAGAAATAATTGGAGAGACATATCCTTACCAGTACAGCTTGT |
32 |
GCAAAATGCTTCAGCAATTAATTGAAGTTCTGTTTGAGTACATTCATCATCTTTGAGAATGCTTTCTGGGTCGTTGTG |
33 |
CATATCTTGGTTAAGTTCTGGTAGTGCCTTATTTGGACTTGTAGGAGCACAAAGTGGGGTATAATGGGTGTTGCCACT |
34 |
GGACAATCTGTGAAACTACCATTGGTTCCTGTGGCAAGAACTCCTGCCAACATGGAGGTATTTGCCATCAGGACCCTA |
35 |
CGCGCTCTGAGGCCAGCCGCTCGATGGGGATCTGGGCGCCGGCCTGTGTCTGGAATGCCATCGAGGCCACCTTGGTGG |
36 |
ATGTATACACCATTTAAATTGTCAGCTACCATTTTGAGTAAATAAAAACAAGCTAAAAGTTTCTCTGAGAATAACTGA |
37 |
TATTCTTTCAATTGCAAAGTGGCAACAGCTTTTATATGCTAAGTCTGACAAGTTTGCAGTCAGTGAATGATGGCACAT |
38 |
GGAGCCGCGAAGAGCCGCAGGAGGTACTCCACGGTGAAGATCATGACGCACGCCGTGTCCAGGCAGAAGAAGGCCACC |
39 |
CCCATCTTCTGGGGCGTTCTGTGTGTCATCAGCGCCCTCTGAGAGCAGGGCTGCCCTGTCTGCCATGGATGTGTTGGA |
40 |
TACTTCCTGGCCAAGATCAAGCAGGCAGATGTAGCACTACTGGAGGAGACAGCTGATGAGGAGGAGCCAGAGCTCACT |
41 |
AGCAAGGGGCTCGTCATGCAGTGTTCCCAGCTGCTGGTGAAGCCTATCTCTGCGGACCAAATGTTCGTGTCGGCCCCT |
42 |
GCAAGGGCTCTCCCGTGACAGACTCTGAGATCCAGCAATCATTTCAGATAGGATGGATTGGAGTGCCATTGCTGTGGA |
43 |
TTTTACTTCAATTTCACAAAATTCTTCAACAGAAATACTCCGTGGTCTTGTGTGTTCTTCAATGCCCTCTGCTCCTTT |
44 |
CCCAAGTGATGAAGATCCAGGTCTTGGCTGTTGACAACAGTGTCCCCCAAATCGCAGTGAATAAGGGGGCCTCTACAC |
45 |
GCCGCGGGGCCTCCGGGCTCAGGCTTTCTTCTTCATGCCCACTGAGGGTAGCAAAGGGATCAGCCTGTCGCACAGCGG |
46 |
AAAGTGAAACAGAATGAAAAAAGCTTACCTGGGCACCACCTGCACTTTCCCAAACTGTGAAGCTCTGGAACAGAGTGG |
47 |
TAGTAGAGTGCCTGCATTCTCAGTGCTTCCACATTTTGGCTATCTTGGAGCAGCAACCTGCAGGAAAACAATTTAGTT |
48 |
ACGAGAGCAGTGAGTGCTGCCAAGGCCAGGTCTGGCTCTTACGCTCTGCGGGGTCCTGGAGAAGCGGGTGCAGGAGGG |
49 |
TGACTGGGGAAACAGTATTAAGGAATGTATGGGGTAACTCACATGAGGACTGCCTCCTTGGGTTTACCAGCTCTGATG |
50 |
CCTTATTGATTGTTTAGATTCCATTGAAGACACCAAAGGAAATAATGGAGATAGAGGTGAGTATATTTTTAAATGTAT |
51 |
CATAGATAATCTGTATTTGTCTCTTTTGCCAGGTTTATGACACCTCTGATGGCACCTTACTTCAGCCCCTCAAGGGAC |
52 |
TGAAATCCCAGAAGATCAAAATTCCCTCCGAGATGGCCACCAACCTCATGATTCTGCACAGCTATATACTAGTAAAGG |
53 |
TTCAAGATATTTTGACAAGATTTATTCTGACCATTTCTTTCCTCAGTTCCACCTGGAGTTGCTACTGCAACTGAACCG |
54 |
CTGATGTTCTGTAGAATCTTAACTTTAACCTTTTTGCCAGTGCCTCAGCTTCCTCACTGCACATCAATTTAAAAAAAA |
55 |
TCTTTCCTCTTTTACCTAATAGGTGGCCAGCATCGAAATGTTCAGCCTTTTAGTGATGAAGATGCATCAATTGAAACA |
56 |
GGTCGGAGATGTGGCGACCGGTGAGGACTCTCCCGGCCCGGGGCGCCCGAGATCCTGCACACCAGCCCCAGAGACCCG |
57 |
AAAATCTCATCAAAACATCTATATTAAGGGAGTACTTACTTAAGAATCATAGTCATTGTTTCTTTTCGATCTTTTCCT |
58 |
GGTCTCTCGCCTGGGCAGGTCATCATAGTACGGGGACTGGTCTTGCAAGAGCCGAAGCAGTAAGTATCCAGCATCTAA |
59 |
CACAGGCCTCAGATGAGGGCACTCTGGGAGGATCCCCCACCAAGAAGGCAGTAACCTTCGACCTCAGTGACATGGACA |
60 |
GGCTTGATTCACTGGCATGGGCGTCATAGGTATTGGGTATAAAGGCTTGAGAGAATTAAAAAAAAAATTAACATTAGG |
61 |
GCTCAGAAATTCTGTTTGAAATTACATGACCGGCTGTTATTATAGGGCACTGAAGAACTTGAAGTGCGAATTCTGGTG |
62 |
AGACACAGTGACCTGCACCAGGGCTCGAGGTTTCTCTAGGGAACCCACCTCTTAGAATCATCCAGAAACAAGTCACTC |
63 |
CCTCAGGCCCAGGCCCTGAAATGGATTAAGAACATGGAAGGAGGCCAGGTGTGAGGCTGGGGGGTCAGGTTAGCCCCC |
64 |
GCTGGGCCGAGGCGGGAGCGCGGATGGGGCCGCGGGTCGGCGTCCTCACCAGTTCTTGACCAGCTCCCGGTAGCGTGG |
65 |
GATGGTGTGCCCACAGGTGATGGTCGGGAGCACGGTCAGCGGGGCTGACAGGCCCAGCTCCTGAACACGGAGGTGCCA |
66 |
GGAAGCTTAGCCCACCCTCTCTGGTCCCTGCCTTCTTACCTGGATGAGGGCCATGTTCCCAGTGATCATCCGCCAGAG |
67 |
GAACAAGCCTATCAGCAAGAAGGAAATGATTCAGAGGTCCAAACGGTAAGACCAAGAAAACAAGAGTACGTATACAAG |
68 |
CCTCCACTCCCCTTCCTGCGTGCCCCGGAGCCGCCAAGCGGCTACGTTCTTCTCGGCCCGCCGAGATGGCGCTCGACC |
69 |
TCCATCTGGAGCCCAGGCAACTGAAGTAATGGGATGCTCATGAGGTTGTGAATTGTACAGTGGGCGGCCGTAACTATC |
70 |
GTATTGCACCTTGACTATCTTGGATGACACTCAGTATCCGGTAATTGAAGGACTGGAGACATTTGTGGTTTTCCTCAG |
71 |
CCTTACCTGGCACAGCGGCACCATCCCGCCTAGGACAGCGGGACCGAATCACGGCCGCAAAGGCGCAGGCGCGGGCTC |
72 |
CTGGTGATATTATTTCTCAACATAAAAACAGAATTACAGACTTACCAGAGACTTATATTTCGTTTCAAGAAGTCTTAA |
73 |
ATGGCACAGTCTGGCAGTGCTGGGGAGCTGGTAAGATACACACAGGCACCTATGGAACAAAAGAAATATTTGAAGTTC |
74 |
ATAGTAAGATTTAAATTGACATTCAAAAAGAGCATTCTTACCTCTTGTTCCTCAAAAATGGGCTGATATTTCTCAAGT |
75 |
TCTGCAGCGTCCTTGTGCTTCCCCTCCCCAGATAGAACAGGAGCGGCTGGACAAGGTGTGGCCCAAGCTGAGGGTGCT |
76 |
GCTGTGTCTTGCCTGGTGCTGGGCACCGAGAACAAGGAGCTCCTGGTGCTTGACCCCGAGGCCTTCACCATTTTAGCC |
77 |
GGGCATGTCTTTAACTTCAGAATGGTTTGCAAAGTATTTGCAATCATCAGCAGCTGCATGTTGGGTAAGTTTGGAAGA |
78 |
ACAGGGTGAAGAATAAGTCATCCAAGTGCCCCGTGATGGGCTTCTGGAGGCGAGGCTTTCGGAGAGCGTCGCCTGAAA |
79 |
GGATCGGGATGTCCGTTTCGACCTGTCCGCGCAGTGAGTTTCCAAGATTCCCGAGGGATCTTCAACCCTGTAGAGGGC |
80 |
CGAGAAGCTGCCCAGACTGCCATCATCATTGCCAGAGAAGAGCAGTCTGCAGGTAGGTCCGTGATACGTATGTGTTAC |
81 |
TAGAATCTTAACTTTAACCTTTTTGCCAGTGCCTCAGCTTCCTCACTGCACATCAATTTAAAAAAAAATGCTTTACAA |
82 |
TGGCGACCGGTGAGGACTCTCCCGGCCCGGGGCGCCCGAGATCCTGCACACCAGCCCCAGAGACCCGAGACCCGCAAG |
83 |
TGGGCAGGTCATCATAGTACGGGGACTGGTCTTGCAAGAGCCGAAGCAGTAAGTATCCAGCATCTAAGTGGAGGGGAG |
84 |
CTGGCATGGGCGTCATAGGTATTGGGTATAAAGGCTTGAGAGAATTAAAAAAAAAATTAACATTAGGCACCTATGATA |
85 |
GTCACTCTTCATCTGTCCAACAAAGGCCTGCTGAGAGGTGCACAGTGTCTTGAGTCCAAGCTGCGCCAAGGCGGCAGG |
86 |
AGCGTGGGCCCAGGAACCGGGTCACCATCGCGGCGGAGTCGCACCCTCAGGATGACCCTGTCCAGCTGACCCGGCTAC |
87 |
CCAGAGCTCCTTGGGTGTGTCCATGTGTCCAATGTTGGCCTGGGAAAGGGAGGGCAAGGGGCTGGAGCTTCAGGCTGG |
88 |
TCGACCCCGCAGGTACCGGGGCGGGAAGCGGGGTTTGCCGAGGGGCCTCGCCCCGGGTCTCACGCCGCGGGCCATGCG |
89 |
CCTCAGCTCAGCACAAGGAGCCGAACTGACCAAACCCTTCCAGGCAGTCATTGCAATTAATGACACATTCCAAGATGG |
90 |
TCTTAATACTGTAGTTCTGCTATAATGTGCATGCTAAAATTAAAAGGAAATGATATTTAATACTCAAGCTGTGCCACT |
91 |
TCAAGTGATAATTTCTTAAGGATTCCAGTCAGTTCATCTTCAAGATGGAAAGGTGAAAAAAAAACAACACATTTTAGA |
92 |
CGGGCGGGAGGACAACACCCTCATCATGACCACTCGAGGTGAGTGGAGTCAGACCTGGCAAGGGCTTTGAAGTCGGGA |
93 |
TCCTTCGTCCCTGACATCATCTCTGTGCACTGATAATAACCCTGCAGGTAAGAAAGTGGTCATTCTTCTTTCCTTAGA |
94 |
GGACTGCTTGTCGTTGATGGTCCACCGGAAGACCATGTCCGAGCCGGCCTCCACCACGGGGCTGTACCTCTGCGGGGG |
95 |
TCCCTTCGGGGCTGGTGGCTGACTTGCTGAACTTGCCGTTGGCTGGGTCAAAGTACCTGGCAAGGAGAGGCCAAGCCA |
96 |
ATAGTCTGTACGGGCTTGGTATCATACACTACCCTTCCTGCAATTTTTATTCCATTCTTCCTATGGATGGCTGGCTAA |
97 |
CAGCTTCTCCTGGCGGATGAGCTCGGTGCGCAGGGCCAGCTCACGCTCGTGCTCCGCCTTCTCCAGCCGCTCCCAAGC |
98 |
CACTAGAGGCTGCAGAAGTTGAGAGTGGGATGAAGACTTCCATTTTCTTGTCCAATTTCATTCCAAGTGGTGCTTCCA |
99 |
ACGCAAGCTGTAACTGAGCTCCGCGGCGGTGGTGCCTGCACCGCACAGCGCGAGCAGCAGGAGCAGGTGGAGGCGCAT |
100 |
ACTGGAGTAAAGAAACCTAACATAGCCATTGTAGAAATGAAGTCAGAAAAAAAGGATCCTCCTCAGCTTACTGTGCAG |
101 |
GAAGTGGAATATGATGAACTAAGTGCTGCATTAAAGCAGGTCTTTGAAGAGGCCAATTATGAAATTATACCCAATCAG |
102 |
GAAGGGCCTGCTGGCAAGATGCTGGCAGGGAACCAGTAATCAGTCCTTCCGGGAATTTCTGAGCTAAGACTTTTAGAC |
103 |
TGTGAAGAGGTCTACAACCCAGGTGGCAGACAGTGGCTATCAGCGGGGGGAGAACGTTACTGTGGAGAACCAACCAAG |
104 |
ACGACACAGAACTCTGAGATTTGCTCAGGCCAGGCCCCCACTCCCGACCAGCCAGACACCTCCAAGCGTTCAAAGTGA |
105 |
TCATCTGCGTGGGTGACGCAACATCCTTGCTGGAGGGAGACGAGGCCACCCAGGAGAGTTGTGGGTCGTCATCACCAT |
106 |
AGCCGCAAGGCCATGGCTACCCGGTCAGCTCAGGATCAAGGACCCAAGGGGAACGCGCTGGGCGCCCGCCGCCACGAC |
107 |
GAATGTGCCCGCAATGGAGACTGGCTCTGTTTGAAGAACTTACATCTTGTGGTATCTTGGCTGCCAGTTCTGGAAAAG |
108 |
AACCACTTGCCTTTTTCTGGGCAATTGCAGCTCGCTGCAGTTTCTCCTTAGCTTGATTGTACTTTTCTTCTCTGTCTG |
109 |
GATCACAGAAAGCTGGAGCTCTGTATGAATGAACAAAGAGAGCGTGGGGACGAATCTGAAAGTCTTCAAAGGTGGCGG |
110 |
TACCTTGCACAGGCGGATGGCATTCTTGAAGGCCTGTGCCCGGGTGTAGAAGTGCACCGCCTGCCCGACCTCCTCCTG |
111 |
CAGTTTGATGTCCAGTTTCTCTATCAGTTTTGCTGTCTCCTCTTTCTTGAAATTCATGATCGCATCAAACACCTACAT |
112 |
AAAGGCTGTGCCTGGGATCATTGATGAGGAAAGCAGTGGAAACAATGCCCAGTGAGTGTGTTTTCTGATGCCACATGA |
113 |
GCGCCCCCAGGAAGCAGCGGCGGGAGCGCACCACCTTCACCCGGAGCCAACTGGAGGAGCTGGAGGCACTGTTTGCCA |
表5对比基因芯片2上的探针序列
编号 |
探针序列(5’-3’) |
1 |
TTGAATGCAAACACTGTCCACTCCATGGCAGTGCAGGCTGGGGTCCCGTGGCATAACTGCATAGATTTAAAAAAATCT |
2 |
GGGTTGGTCGTGGACAGGATGAACATGGAGCTATAGGGAGGCATTGGCTTAGGGCCGTCTTCCCCACGGTTTTTGGCA |
3 |
AGCCTGCTGAATATAGAAATAATCTTGAAAATTGGATTGGAGATTATTTTGAAAAGGCTTTACAATGGGTTCTAAAGC |
4 |
CTCACCATCTGTCTGTTTCTTAATTTTCAAGGTGACAGTCTCTCCTGCCATCTGTAACAAATGGATGGCTTCACTCAG |
5 |
TTTCCTGAAACTTCACGCAATCCTACGAAACAGTGCCGAAGTTCTTTACCAGATAGCAAATATGTATCTTATTTGAAA |
6 |
TCATCCTTTCTCTCTCTCTTTTAATCAGCCCCAATTTGTTACCTCGGAGAGCTCCCCAGACAGTCTCAGAGAGGAGTA |
7 |
ACATACTGTTCCACTTTGAGTTCATAATCTTGCTGCAAATTTTCCATCTTACGGGTCACTGCCTCAACCTCCATCTAC |
8 |
AAAGTCACCTTGAAGGATCCTGGTATCCGTACATAGGAGAGGTCCTCCAGTTCCAGAGAACCGCCAATGAAAAACCTC |
9 |
TCGACTTCCCAGTGTCAACATCGATGACACCATAGCAGCCTGGCTCAGTGACACCGAACGCCCAGTGAAAGAAGGACT |
10 |
CTGCAGTTTCATTTCTTCTAAATCTTTAGTTTTCTCTACTAATTCTCCTCTTAGTTCTTCAAGCAGGAGCTGAAGTTT |
11 |
TCTTCGGTCCTCAGCCAGCTTCATGACGTAACCAATCTTTCTACCCCTACTCACGCAATTCTCTCTGCTGCCAATCCT |
12 |
GTGTAGATGCCCCTGATCCAGGTGCAGACCCGCTGGCTAGCAGTGTGAACGGCATGTGCCTGGATATTCCTGCTCACC |
13 |
GCTGAAGTTCGGGACCTGGACTTTGCCAATGATGCCAGCAAGGTGCTGGGCTCCATTGCTGGGAAGCTAGAGAAGGGC |
14 |
ATCCTGAAGATCTTCGTGGACAATCTCTTTGCTATCGTCCTGCTGAAGCAGGCCACAGCTGTGCGCTGCTTGGACATG |
15 |
GCCAACACATTTTAAAGCTGATCTCATCAGTTACTTGATGGCTTATAATGCCCCTTCTCTCAAGGAGTGGATAGATGT |
16 |
ATGGCCCGCGGCGGGGCGGCCTGCAAGAGCGACGCGCGGCTGCTGCTGGGGCGGGACGCGCTGCGGCCGGCGCCCGCC |
17 |
ACAGTAGGAGTTTTGTAGCAGTACTTCTTATAACTGGACTAGGAGTTGAAAAAAGCTTGAAAATAACTTCATCTAAAA |
18 |
TGGCTGCCGCTGGGGGCGCCCGGCTGCTGCGCGCCGCTTCTGCTGTCCTCGGCGGCCCGGCCGGCCGGTGGCTGCACC |
19 |
AATGAAAAGGTTAAAGAGATGAGTGATTATTCACTACTAAAAGAAGAGAAACTGGAGCTTCTGGCACAAAATAAATTA |
20 |
AAAACAGAATCTTGGCATTGTCTTCCTCAAGAAATGGACTCTTCCCAAACCTTGGATACATCCCAGACTAGGTTTAAT |
21 |
ACACAACTTCGAAACCAGCTAATTCATGAGTTGATGCACCCTGTATTGAGTGGAGAACTGCAGCCTCGGTCCATTTCA |
22 |
ATGAGCCCACTGTTCCTTTCACTATCATTGTCATCACTCCCTTCTTCCATGACCACATCAGACTCTGCCCCAGGGCTA |
23 |
GGCACTCCGCGGCAACGCCCTGGCCACCCTGACGCAGATGCGGCTATCGGGGAAGAAGCACCTCCTGCAGGAGCTGCG |
24 |
CTGGGGACCTCCGATGACAAACCGCCCACTGGGCTGCAGGTGGTAGACGGTGTCTTCGTCCAGGTACTTGGCCGGCAC |
25 |
GGTCACCCGGGACGCCTTCTGGAACTGCAGAGCAACAAGCGACTGTGCAAAGCCTCCCTCCTGTGCCTCCATCCGCTG |
26 |
CGACATGGTGAGGAAGATCATCGAGCCGATGGCTTGCGATGGCCTCCGCACCATCTGCATCGCCTACCGGGACTTCTC |
27 |
CTGGTTGTGAGGGAGGGCTGCTCACTGCCCTGGATGTGGATCGTGCTGAGCTCTTGCATGCTGCGCAGGCGAGTAGCT |
28 |
GCCGTCATAGGTCACCTCCACCTCATAGGGCCCTTCCTCACGGGGCAGGAAGCGCACCACACTGTTGTCAGCCCCCAG |
29 |
CTTTGGGATTTTTGCTCCTAGGTCTTGATACTGCTTTGGGTTTTTCAAGAAATTCACAAATTCCATGATCTCTAGCTT |
30 |
CAGCTCTGCAGCCACGGCGTCCACTGCCTGCACCCGGCCGCTGTAGGCCACGATGTCCGTCTCAATGGCTTCGTGCTT |
31 |
ACCTAGAGGCCTGTTTATGGGAGTTCGTTAGCTACTATGACATGTCAGAACTCCTTGCTGACTGTGGTGGCACCATTG |
32 |
ATCGGGCCCGGAGGCGGAGCTCAGGGCGCTGCGCTCGCCCTCGACGGCGCACAGCCAGTCGCGCACCTTTCGGCCTGC |
33 |
TGGAGATTTGCTGTGTGCAGTTTCAGGGATGCCTGGGAAGAGGAGGAACCTGCTTCCCAGATGCACGTTAAGGACCCA |
34 |
TCTGTGAGATAGATCACGATGAGTGTGCTTCCAGCCCTTGCCAAAATGGGGCCGTGTGCCAGGATGGAATTGATGGTT |
35 |
AGTCCACCAGAAAGATGAGCTGCACCACGTCACTGAGGTTGGCCAGGGCCCCGCTGAAAGCCTCGGGGATGGAGAAGT |
36 |
GTCAGCTTTATCAAATGCCCCACATCTTGTTTGTATCTTATATCCCAATAATGGATTGATAAACACTGATGAAAAAGT |
37 |
CCTCCAGGTGGCAAATGGAAGTGGACAACGAAACACCTTTTGTGACCAGCACAATTGCTACTGGAAGCCTCAACTTTT |
38 |
GTGCCGCACGGCACCGTCTCCACCACGTTGGTGATGACCGAGACAGCGATGAAGAAGCCAGTCACGTAGTAGAAGACC |
39 |
ACTGTGGTGTGAGCTGGGCTTGGGGACCATCTGAGGAGGCACCTGCTGCGGGGCCATCTGCATTGGGATCTGCACCGG |
40 |
CTTAAGGTAGGTCATGTTGGCCCCCTCCAAATTGGACAAGCTGTTAAGAAGCCCCGGACAGTTAACGTGGAAGATTCC |
41 |
CCCAAACATGGCCTCACTTCGGGCAGTGCCAGTCCCCCTCCTCCAGCCTTGCCACTCTACCCAGACCCTGTGAGGCTC |
42 |
GAGCTCCTGGAGTTACTGACTGACTCTGAAGGGTCATTCCCAAACAGTTGCCGTAAGAATGAGAATTGTTCATTGACA |
43 |
TGTAGTATTGGCTATAGGAGCCAAACATTTTTTCTCACCATCTTGAACTGAATTATTATCGTCTGGATGATCTTGCCA |
44 |
GCAAAATATTGAAAGTGGAGGACAGAGACAGCTTACACATTTCTCTTAGATTTATCGTGACAGAGGCCCCTCAACATG |
45 |
TCTGAGGGATTTCTCTGTGGGTCTGTCTCTCCAGGAACTGGAAATTAGTGAACACATGAAGGAACCACAGCTCTCAGA |
46 |
ATTTGTTTTAAAATGGTCACCTTGAGAGCCCAGTGTAGATACTTGGGTTCTGGGCTGAAAAAAGGCGAATGGTTCACG |
47 |
TCTATATCCCCCTCTCTACACACATAGTAGAGTGCCTGCATTCTCAGTGCTTCCACATTTTGGCTATCTTGGAGCAGC |
48 |
TTGTTACCTGCCTAATTACCGGTCCGTCCAGCCACTTGAGGACACACTGGAATGCCGTGGATTCCTTCCAAGGCTGGC |
49 |
CACCAATTGTCTGCAGCGTGGTCAACAGCAGCTTCCAGGAGTCCCAGCTTATTAAGCAGTCTAACTGCAGCCTCTCCT |
50 |
AGATTCAAAATTTGGTTTAGCTCTTGTCATAGAAAGCTCTCAGCAGGTAAGATCTTGTATATTTTTATTAATCTTTGA |
51 |
AAATGTAAGACTTTCCATTTTACAAACACTTTTAGGCAAGCGCTTTGCTTCTGGATCAGCTGACAAAAGCGTTATTAT |
52 |
TGGACGGTGTGTCCACATTGTGACTTCCCTGCTCTATACTCAGAATTGAAGATGTAAGTGTGCATCACGTCACTCAGT |
53 |
TGAGAAACAACAAATAATACCTTTCACAACACAGTGTCTGAGTCTCTGGTGAAGAGAGTGATATTTGTCTCTTAAAGG |
54 |
CTGCCATTGAAGTAAAAATAAAGTACATAATAATAATTGTTATAAGAATATAATCAAGAGGGAAAACCTGAAAAAAAA |
55 |
AATTACGATGGCTGTTTTATATTATTTCTTAGGACCAGAAGTCCTTGATGAGGAAGGAACTCAAGAAGACCTAGAGTA |
56 |
CCATCATCCTGCGGGACGACGCCGCCATGAGGGCGCACGCAGCCGCACTGGGGGTGCAAGGTGAGGGGGTGCAAGGTG |
57 |
AGTATTTCATTTATCTATACCCTTTGTGATAAAATATTTTACTTACAGTTTGTGGGTTAATCTCCTCCTCTCCCATAG |
58 |
GGCCACCAGCATGAACCAGCAGGCCCTGGAGCAGCTGCGGGAGCTCCGGATCAGTGGAAGTGTCCAGCTCTACTGTGT |
59 |
ACCACTGCCCATTTCTGAGTCCTGTCCCCATGCTCTTCCAGCTGGCATCCCGCTGCTCAGCAACAGCCCCACCCCGCT |
60 |
CTTTAAATCATCAATCTGTTTTCTATGTTCAGAAACAACTGGTGATATACCTGTAAAATTAAGAACTGTTAAGACACA |
61 |
TTCCCTTGCCGATAGGAAGTTCTTTGCTGGTGGAGTGTGTAGAACAAATGTGCAGCTTCCTGGCAAGGTAGTGGTGAT |
62 |
CCAGTAGAGTCCTCACCTCAGCGTGGAGGCCTGAGAACGTGAGGAAGGAGCTGTCCAGCACGGACGAGTCCAGGCAGC |
63 |
TCTACATCACCACCAAGCTCTCCAACCCCCACTACAGCCCAGAGACCTCAGCCAAGACCACCATCGTCAACTTTGCTG |
64 |
CTCTGGTGCCCGGCGACTGATGCCTGTTCCTGGATGGGTCCGCAGGCCACTCCCAGAAGAGACGGGGGTGGAACTGCT |
65 |
CATGCGGGCAAAGGTGAACGCCTCCTCATCGTTGCTCTTGAACCACTTGTCCACCACCTGAGCAGGACCCCACCACAG |
66 |
CCTCCCAGCCAGGATACTCACTGCAGTGGAAAGCCTTGATGCCAGGGTCATTTCCAGGTTCCCTTTGAGCCCCAGCAG |
67 |
GAGAAGAAGAGAAGAGAAAATCAGAATATAAGTCATACCGGCTGCGAGCCCAGCTATATAAAAAGGTCAGTGGGTCCT |
68 |
GAGCCTCAGGTGCCTGACTTGGTGGAAGAAGCCACTGTGGCAACCTACCCCCCTGGAGTCCACAGCTGCATACATAAT |
69 |
AATAAGATCATTGACCGAGTTCCAATCTACTTTTAAAATAATGCCATCATGAGCTTTCCACTGTGAGAAAAAAGAATA |
70 |
TCTCTCTGCTTTCCTGCCCAGGAATCCAGACAGACAGCGTGCTCTCTGCAAGGCTTCAGATAATAAGAATCTACATTC |
71 |
GAGCCCTGCAGCGGGCAGCTCCGCAGCAGGAGGCCCCGCAGCAGCTGCGCGCCGGGACGGAGCATGACTAGGCCGAGG |
72 |
ACACCGCTAGGTTTTATGCTGGCATACATTGGGAGGGGACTTACTTCTCTGGATGACGAATCCAGAAAGATGGAGCTT |
73 |
TTGATATGCTGGTATCTTGGGTTCTGTGGTATCCTTTTCATCAGATACTAAAAAATAAGGAAATTCACAATTAATTGG |
74 |
CTGATGATTGCCGGAGACCTAAAATGCTTTTAGAAAAGCCCCACACTCACCATGGTTGTCAATAACGTGTCTTCCTTT |
75 |
TCTCCCACTTGCCCTTCGCAGATTGTCATCGTCCAGTTTGGCGGGAAGCCCTTCAGCTGCTCCCCACTATCCACAGAA |
76 |
CTTTGGCCGGTACGGGCGGGAGGACAACACCCTCATCATGACCACTCGAGGTGAGTGGAGTCAGACCTGGCAAGGGCT |
77 |
CAGCTCAGAGATGCCCACCTCAGATGACAGAACAATGAGGGTGATGCTGTGGAATGGAAGTGAGAAGAATGAGTCAAG |
78 |
GGCTGGCGCGCTCTCTGTGGGTGGGGAGGGACAAGCACGTTTTGGGTGAAGATCCTGTGCCAGTCGTTCATCCTGCCC |
79 |
TTGGTTTAGCTCTTGTCATAGAAAGCTCTCAGCAGGTAAGATCTTGTATATTTTTATTAATCTTTGATTTTTAAAACT |
80 |
TCCACATTGTGACTTCCCTGCTCTATACTCAGAATTGAAGATGTAAGTGTGCATCACGTCACTCAGTCTCACTGATTT |
81 |
TCCAAAAATTATGAAACCAGAATCTATTCCAGCTGAATGAAGAGCTTTATCTAAACTAAAAAAAATTACAAAGAATGA |
82 |
GAGACACGGCATTTAAATCACCAAACTGCAAAACAATAGTCATTTGTGCAATAGTTAATATAGGGCAGAATAAAATAA |
83 |
AGCTCGGGGATGGCCAGGGAGGGGTGGGTGTCATTGAGCTGGATGGCCACCTGGGGTAGGGGGAGGGGTCAGTCTGGG |
84 |
GCTCCAGGTCCTTCTCTTTGTGTTCGCCATTCACTTTAGCACTGATAGCAGAGTCAGTAAAAGCATCTGCAAAGAATG |
85 |
GCTGGACACCAGGCCAACAGCGACTGTGTCGACGCTCAGCGGGCTCAGCCTGGACACATGCCCCGTGCTGTGTGGAGG |
86 |
ACTCCTCGAACACGTGGCCCCGCTTCCTGTTCAAAACCCCGTAGATGCCACCGACCACCTGCTCTGGACACTGCCAGA |
87 |
GGAAAGTGAAGTATCTCCGTCAAGAAGAAGAAAAATGTCCCCCTTGGTAAGTATCAACTTTTCCAAGTTGACAAAGCA |
88 |
AGGAATCGAAGCTGGTGTAGCCGTGGTCGGGGTTCTCGCCTGCCTTTAGGCACCGGTAGCCCTCCGGACATGTCCTGC |
89 |
TTAAAAGTGTTTTACGGGAACTGGTCACATACCTCCTTTTTCTCATAGTCTTGTGCATCTGTAAGTAGAATATTTCCT |
90 |
GAAAGAGTAGGAATATGATTTTCCCTAGAAAGAAAGTATGACTCCAAATACTTAGCTGAAAAAAAAGGGAAAACATAA |
91 |
AGTCCATGCTGCTGCCGTTAATGGAGATAAGGGTGCTCTACAGAGGCTCATCGTAGGTAAGCAGTCCCCTTAAGTACA |
92 |
AGTAACAAGGGCATCTCAGACATCATCAAGGTAGGCCCCGCACTTGTACCACGTGGAAGGTGAGCAGGACCCTGGGGA |
93 |
GTTCTGGGGACAGTTAGCAGCGTAGTGGTCCCACTGCAGCAAAAGTTTGAAATTCATTTTCTTCAGGTAAGGTTGATC |
94 |
CCTTCTTCTAACGTAGAAATCTTGTTGTTGCTTATATCCCTGGAAGAGACGGGGGATTCGGCAAAGCTGATGGAAGCC |
95 |
TGCTGGCGGGAGGTGCCGCTGACGGCGTCGTGATGCTGGAGCACAGCCATCGCCTCATCTGCTCATAGACAATGAGTC |
96 |
TTTGTATATTTCGGGTCAACAGTCCAACCTCAGCAGCCAAACGAATGTGTCGGCCATCCTCCGTGACATGTACACTTC |
97 |
TCTGCTCTTCGTGGATCTCAAAGCGTGAGCCTGGGGAGCTCAGTGGAGTCTGGACGTCAGCTTGGAGAACTCATGCTG |
98 |
TAAATTATGTGTTAGTTTCTGTTGGCTTTGTTTAAACGCAATGAGGTTTTCAAGTGGGATAAGTTGTGTTTTTTTGCA |
99 |
AGTGCTCTCAGACACGCTGTCCACACCGCCCACCCCAAAAGGATGCTCTGGCTCTTCCTCTTCAGTTGGAGACAAGTC |
100 |
GAAATGTGCTCAGCATGAAGCTGTTCTTTCCCAAACCCATACTAATGTTCATATGCAGACCATCGAAAGACTGGTTAA |
101 |
CGATTGGTTTCCCTTTCTGTGTGTGCAGTCCCCCCTTGCCAACACACCCTTCCTTGGTTACTTCTATCATGGTGCTGT |
102 |
CTGCCCGCTCTTCTCGGACAGCTCCTTCTCCAGGTGCTCCAGCCGGCTGGACACTCGCACGATGTCCTCGTTGAGGGC |
103 |
GTGGCGGCCGATCTCCTCAGCCTTGTCTCCAGCGTAGGCCTTCTGGAGCCGGTGGCCGTCGTCCTGCACCTGCTGGAC |
104 |
CCCACTGTTGGAATAGTTGCTGATGGGGGACTGTTGGCTGCTGCATGAAGACTGACCACCAGGGCTTGGCTGAGATGT |
105 |
AGGCGCGCACGCTCACAGGCACCTGCTGCGTCAGGTTCTCGAAGGCATTAGATGCCAGCACGGTCAGGAGGTACTCAC |
106 |
AGCCGGCCCCGCCCTGGGGTGCCCGCCGCTTACCCCGCGGGACGGTGTACCGAAGCTCCTCAGTAAGATGGACGCCAT |
107 |
GGCCCAGAAGATCCCTTACAATACCTGAGAGGTCTTGTTGCCCGTGCCCTTGCAATACAGGTATGCCTAAATTATTTA |
108 |
TGAAAAAATAAAAGGAAAATCTTCGCTAAAATCATACCTGTTTTAGGTCAGAATTTTCATTTTTTTCCTTCTCTGCAT |
109 |
CAGTATACAATGGGACAGAAAGATGCTCTAAGAACAGTTTTAAAGCAAAAGTAAGTTTCATTTACAGAAAATAATTGG |
110 |
CCCACCAGCCCTGGTGGGGACACTCACTTATCCTTCATTTTATTCACGTAGAGCTCCAGGGACGGCAGGTCCTCCGAC |
111 |
GTGGCAGCTTCTTCCCTTCGGGGCTGGTGGCTGACTTGCTGAACTTGCCGTTGGCTGGGTCAAAGTACCTGGCAAGGA |
112 |
AACCACTCCAGCTCATCCAGCCTCAGTTTGAGACGCCGCTGCCAACCCTTCAGCCTGCGGTGAGTAGGTGTGCTTGGG |
113 |
CTTCAATATGTTTTTCCTTTCTATTTGCGACTTCTCTGAATGTATAGATATGCTTTTCAGCCCTGTGATTTTCTGAAC |
本文中所描述的具体实施例仅仅是对本发明精神作举例说明。本发明所属技术领域的技术人员可以对所描述的具体实施例做各种各样的修改或补充或采用类似的方式替代,但并不会偏离本发明的精神或者超越所附权利要求书所定义的范围。