CN105255743A - 一种白粉病保存养装置及利用其保存白粉病的方法 - Google Patents

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玉山江·麦麦提
杨渡
韩盛
吐尔逊·阿合买提
丁新华
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一种白粉病保存养装置及利用其保存白粉病的方法，它涉及一种白粉病保存养装置及利用其保存白粉病的方法。它解决了低温离体保存孢子萌发率低；离体叶片保湿保存要不停的换叶片、工作量大；以及活体保存易失去活力、白粉菌提供量小等问题。白粉病保存养装置由底盘和透明罩体组成。保存方法：一、出苗；二、接种；三、每隔170～180天放入新出苗的南瓜苗，一同培养；四、重复步骤三，即实现白粉病的永久性保存。本发明方法通过白粉病孢子自然侵染的方式进行白粉病的繁殖和保存，方法简单、方便、可靠，而且可以做到无限期的永久性保存。

Description

一种白粉病保存养装置及利用其保存白粉病的方法
技术领域
本发明涉及一种白粉病保存养装置及利用其保存白粉病的方法。
背景技术
甜瓜白粉病是一种专性活体寄生菌，目前国内外使用的甜瓜白粉病保存方法有离体保存与活体保存两种。
离体保存根据保存条件又分为低温保存(液氮内保存与-80℃)和离体叶片保湿保存。
低温离体保存：将白粉菌孢子侵泡于防冻液中，然后放到液氮或者-80℃冰箱里保存。该方法虽然比较简单，可是保存的孢子萌发率低，发病率下降，甚至导致白粉菌病原菌退化；使用本方法需要使用低温冰箱并不断补充液氮。
离体叶片保湿保存：将病叶上的白粉菌接种到易感病的离体甜瓜叶片上，待叶片上产生新的白粉层后，挑出单个孢子或单条孢子梗接种到无菌苗的离体叶片上，要不停的更换新鲜叶片。该方法虽然对设备要求低，但要不停的要更换叶片，工作量大且需在光照培养条件下进行操作。
活体保存方法：将感病的甜瓜或黄瓜品种的种子播种，待植株5片真叶长出后备用。在超净工作台上剪取带1片展开真叶的幼苗茎尖，茎尖灭菌后用无菌水冲洗3次；再用灭菌镊子将茎尖扦插在盛有苯并咪唑-甘露醇琼脂培养基的500毫升三角瓶内，用灭菌的洗耳球将纯化培养的甜瓜白粉病菌吹到茎尖的叶片上。然后将三角瓶放入光照培养箱，白粉病菌菌落生成后调整培养条件，可有效保存约200天。虽然该方法提高了保存效率，仍存在以下缺点：1.该方法操作较复杂，需准备黄瓜苗，之后剪去带片展开真叶的幼苗茎尖，要消毒并插到培养基，接完菌后，放到低温光照培养箱进行培养；2.该方法500毫升三角瓶内只能放剪取带1片展开真叶的幼苗茎尖，并对其进行白粉菌侵染，随着幼苗茎尖的生长，白粉病菌只寄生于植株下面的叶片，随着叶片的老化掉落，白粉病菌失去活力；3.该方法提供的菌量较少，不能及时满足大量白粉病菌的需求；4.该保存方法必须在光照培养箱内低温保存；5.对光照培养箱依赖性强，没有光照培养箱无法保存。因此采用该方法长期保存甜瓜白粉病耗电量巨大。
发明内容
本发明是为了解决低温离体保存孢子萌发率低、发病率下降，需要使用低温冰箱并不断补充液氮；离体叶片保湿保存要不停的换叶片、工作量大，需在光照培养条件培养；以及活体保存方法操作复杂、易失去活力、繁殖量低、白粉菌提供量小，需要光照培养箱等问题，而提供的一种白粉病保存养装置及利用其保存白粉病的方法。
本发明白粉病保存养装置由底盘和透明罩体组成，底盘和透明罩体间紧配合连接在一起。
利用上述白粉病保存养装置保存白粉病的方法：
一、将营养钵中装入土，然后浇饱和的水，再播种经过催芽处理的南瓜种子，置于25±3℃的环境中培养至出苗；
二、将白粉病分离纯化的分生孢子接种于步骤一长出的南瓜苗上，然后将南瓜苗连同营养钵放入白粉病保存养装置中继续培养；
三、每隔170～180天向白粉病保存养装置中放入新出苗的南瓜苗，一同培养3～10天，然后移除长势较弱的老苗；
四、重复步骤三，即实现白粉病的永久性保存。
本发明白粉病保存养装置具有结构简单，投资成本低，效果好的优点。
本发明方法通过白粉病孢子自然侵染的方式进行白粉病的繁殖和保存，方法简单、方便、可靠，而且可以做到无限期的永久性保存。
本发明方法对于设备的要求低，无需低温冰箱或液氮，采用室温和自然光照就可以实现白粉病的长期保存；由于孢子处于一个封闭的环境中，因此白粉病侵染率高，菌量多，随着南瓜苗的生长可以大量的提供白粉病菌，病原菌纯、无小种交叉感；而且所提供的白粉病菌具有孢子萌发率高、发病率高、不退化的特点。
本发明方法具有人工量少、节省能源。
附图说明
图1是具体实施方式四步骤二中南瓜苗连同营养钵放入白粉病保存养装置中培养的图片。
图2是具体实施方式一白粉病保存养装置的图片。
图3是实施例1中南瓜苗接种部位图片。
图4是实施例1中保存了180天的白粉病及南瓜苗图片。
图5是实施例1中保存了180天的南瓜苗白粉病发病局部图片。
图6是具体实施方式四步骤三每隔170～180天向白粉病保存养装置中放入新出苗的南瓜苗图片。
图7是实施例1中保存了540天的白粉病及南瓜苗图片。
图8是实施例1中保存了540天南瓜苗茎部白粉病发病局部图片。
图9是实施例1中保存了540天南瓜苗叶片白粉病发病局部图片。
具体实施方式
本发明技术方案不局限于以下所列举具体实施方式，还包括各具体实施方式间的任意组合。
具体实施方式一：本实施方式白粉病保存养装置由底盘和透明罩体组成，底盘和透明罩体间紧配合连接在一起。
本实施方式透明罩体可由PVC塑料板或玻璃制作。
本实施方式白粉病保存养装置形成一个只允许空气交流的封闭环境，将罩体内环境与罩体外病原菌隔离，保证了白粉病病原菌的纯度。
本实施方式白粉病保存养装置如图2所示。
具体实施方式二：本实施方式与具体实施方式一的不同点是：透明罩体外形为圆台形、圆柱型或倒圆台形。其它与实施方式一相同。
具体实施方式三：本实施方式与具体实施方式一或二的不同点是：透明罩体侧壁设置有孔以及与孔对应的透明孔塞。其它与实施方式一或二相同。
通过本实施方式透明罩体侧壁的孔对内部的植株进行浇灌。
具体实施方式四：本实施方式与具体实施方式一的不同点是：白粉病按以下步骤进行保存：
一、将营养钵中装入土，然后浇饱和的水，再播种经过催芽处理的南瓜种子，之后放入本发明白粉病保存养装置中，置于25±3℃的环境中培养至出苗；
二、将白粉病分离纯化的分生孢子接种于步骤一长出的南瓜苗上，然后将南瓜苗连同营养钵放入白粉病保存养装置中继续培养(如图1所示)；
三、每隔170～180天向白粉病保存养装置中放入新出苗的南瓜苗(如图6所示)，一同培养3～10天，然后移除长势较弱的老苗；
四、重复步骤三，即实现白粉病的永久性保存。
本实施方式选择叶片大、茎较粗，容易培养，耐弱光和低温的南瓜品种种植，如日本南瓜。
具体实施方式五：本实施方式与具体实施方式四的不同点是：步骤一置于25±3℃环境中培养的时间为14天。其它步骤及参数与实施方式四相同。
培养14天，南瓜苗一般可以长出3片真叶。
具体实施方式六：本实施方式与具体实施方式四或五的不同点是：步骤二中培养温度为室温，光照为自然光照。其它步骤及参数与实施方式四或五相同。
具体实施方式七：本实施方式与具体实施方式四至六之一的不同点是：步骤二中用含有多效唑的水溶液灌浇南瓜苗。其它步骤及参数与实施方式四至六之一相同。
本实施方式中多效唑水溶液的浓度为50mg/L。浇灌保证土壤湿度控制在50％左右。
具体实施方式八：本实施方式与具体实施方式四至七之一的不同点是：步骤一每个营养钵中播种经过催芽处理的南瓜种子3～5粒。其它步骤及参数与实施方式四至七之一相同。
具体实施方式九：本实施方式与具体实施方式四至八之一的不同点是：步骤一每个白粉病保存养装置中放置营养钵1～3个。其它步骤及参数与实施方式四至八之一相同。
具体实施方式十：本实施方式与具体实施方式四至九之一的不同点是：步骤二中放入的新南瓜苗为2～3棵。其它步骤及参数与实施方式四至九之一相同。
具体实施方式十一：本实施方式与具体实施方式四至十之一的不同点是：步骤二中放入的新苗为出苗8～10天南瓜苗。其它步骤及参数与实施方式四至十之一相同。
具体实施方式十二：本实施方式与具体实施方式四至十一之一的不同点是：步骤一营养钵中装入的土为营养土。其它步骤及参数与实施方式四至十一之一相同。
实施例1
白粉病按以下步骤进行保存：
一、将营养钵中装入土，然后浇饱和的水，再播种经过催芽处理的南瓜种子，之后放入本发明白粉病保存养装置中，置于25±3℃的环境中培养至出苗；
二、将白粉病分离纯化的分生孢子接种于步骤一长出的南瓜苗上(如图3所示，黑色圈内为南瓜苗接种部位)，然后将南瓜苗连同营养钵放入白粉病保存养装置中继续培养；
三、每隔180天向白粉病保存养装置中放入新出苗的南瓜苗，一同培养3～10天，然后移除长势较弱的老苗；
四、重复步骤三2次，观察保存了540天(180*3)的白粉病及南瓜苗。
本实施例中保存了180天的白粉病及南瓜苗如图4所示，南瓜苗白粉病发病局部照片如图5所示。本实施例中保存了540天的白粉病及南瓜苗如图7所示，南瓜苗白粉病发病局部照片如图8和9所示。
表1采用实施例1方法保存白粉病菌的孢子萌发率和发病率
实施例2
一、将营养钵中装入土，然后浇饱和的水，再播种经过催芽处理的南瓜种子，之后放入本发明白粉病保存养装置中，置于25±3℃的环境中培养至出苗；
二、将白粉病分离纯化的分生孢子接种于步骤一长出的南瓜苗上，然后将南瓜苗连同营养钵放入白粉病保存养装置中继续培养；
三、每隔180天向白粉病保存养装置中放入新出苗的南瓜苗，一同培养3～10天，然后移除长势较弱的老苗；
四、重复步骤三4次，观察保存了900天(180*5)的白粉病及南瓜苗。
本实施例所保存白粉病菌孢子的萌发率和发病率如表2所示，用浓度0.8％的琼脂培养基、在-80℃环境下保存的白粉病菌孢子的萌发率和发病率如表3所示。白粉病菌孢子的萌发率和发病率实验证明，本发明的方法保存的白粉病菌具有孢子萌发率高、发病率高、不退化的特点。
表2
表3
保存时间(天) 20天 40天 60天 80天 100天
孢子萌发率(％) 26.7 16.7 6.7 0 0
发病率(％) 20.0 10.0 0 0 0

Claims (10)

1.一种白粉病保存养装置，其特征在于白粉病保存养装置由底盘和透明罩体组成，底盘和透明罩体间紧配合连接在一起。
2.根据权利要求1所述的一种白粉病保存养装置，其特征在于透明罩体外形为圆台形、圆柱型或倒圆台形。
3.根据权利要求1所述的一种白粉病保存养装置，其特征在于透明罩体侧壁设置有孔以及与孔对应的透明孔塞。
4.利用权利要求1所述白粉病保存养装置保存白粉病的方法，其特征在于白粉病按以下步骤进行保存：
一、将营养钵中装入土，然后浇饱和的水，再播种经过催芽处理的南瓜种子，置于25±3℃的环境中培养至出苗；
二、将白粉病分离纯化的分生孢子接种于步骤一长出的南瓜苗上，然后将南瓜苗连同营养钵放入白粉病保存养装置中继续培养；
三、每隔170～180天向白粉病保存养装置中放入新出苗的南瓜苗，一同培养3～10天，然后移除长势较弱的老苗；
四、重复步骤三，即实现白粉病的永久性保存。
5.根据权利要求4所述的保存白粉病的方法，其特征在于步骤一置于25±3℃环境中培养的时间为14天。
6.根据权利要求4所述的保存白粉病的方法，其特征在于步骤二中培养温度为室温，光照为自然光照。
7.根据权利要求4所述的保存白粉病的方法，其特征在于步骤二中用含有多效唑的水溶液灌浇南瓜苗。
8.根据权利要求4所述的保存白粉病的方法，其特征在于步骤一每个营养钵中播种经过催芽处理的南瓜种子3～5粒。
9.根据权利要求4所述的保存白粉病的方法，其特征在于步骤一每个白粉病保存养装置中放置营养钵1～3个。
10.根据权利要求4所述的保存白粉病的方法，其特征在于步骤二中放入的新南瓜苗为2～3棵。
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