CN102972302A - 一种甜瓜白粉病菌的保存方法 - Google Patents

一种甜瓜白粉病菌的保存方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开一种甜瓜白粉病菌的保存方法。首先将感病的甜瓜或黄瓜品种的种子播种，待植株5片真叶长出后备用。在超净工作台上，剪取带1片展开真叶的幼苗茎尖，茎尖灭菌后用无菌水冲洗3次。用灭菌镊子将茎尖扦插在盛有苯并咪唑-甘露醇琼脂培养基的500毫升三角瓶内，用灭菌的洗耳球将纯化培养的甜瓜白粉病菌吹到茎尖的叶片上。将三角瓶放入光照培养箱，白粉病菌菌落生成后调整培养条件，可有效保存约200天。本发明提供的甜瓜白粉病菌的保存方法，保存周期长可达200天以上，大大提高保存效率，获得良好的应用效果。

Description

一种甜瓜白粉病菌的保存方法
技术领域
本发明涉及一种生物病原菌的保存方法技术领域，具体的说，本发明涉及一种甜瓜白粉病菌的保存方法技术领域。
背景技术
甜瓜是葫芦科(Cucurbitaceae)甜瓜属(Cucumis Linn)一年生蔓性草本植物，在国内外广泛栽培，是一种重要的经济作物。据统计，我国甜瓜播种面积约为15．3万公顷，年总产量在300万吨以上，居世界首位(刘君璞等，2000)。目前，各种病虫害对甜瓜的生产造成了不同程度的影响，甜瓜白粉病是甜瓜生产中重要的病害之一，我国露地和保护地甜瓜每年都因甜瓜白粉病造成大量减产，并严重的影响到了产品的品质。据资料报道，瓜类白粉病主要由瓜单囊壳(S．fuliginea)和二孢白粉菌(E．cichoracearum)引起，我国以瓜单囊壳危害较为普遍(吕佩珂，1996)。
甜瓜白粉病是一种广泛发生的世界性病害，在我国各甜瓜产区普遍发生。白粉病菌主要侵染甜瓜植株的叶片，在甜瓜植株幼苗期和成株期都可发病。在适宜的条件下，甜瓜白粉病发展很快，几天或一周时间蔓延到整个瓜田或温室，造成叶片发黄、失去功能、渐渐枯死，严重影响了甜瓜果实的产量和品质。
由于是专性寄生菌，甜瓜白粉病菌无性世代只能在活体上繁殖保存。传统的保存方法是将白粉病菌接种到感病的甜瓜植株上，将接种后的植株放置在合适的条件下。传统的保存方法时间短，现有技术报道的采用不同贮藏方法处理新鲜的白粉病菌，用摩擦接种法和喷雾法将该病原接种于叶片上，观察不同接种方法对白粉病发病的影响，结果显示用阴干低温4℃方法贮藏白粉病菌可保持3周左右，现有技术报道中最多仅能保存一个月左右，而且容易造成病菌污染，因此掌握一种合适的甜瓜白粉病菌的保存方法十分重要。
发明内容
针对上述现有技术中甜瓜白粉病菌保存时间太短的技术现状，本发明的目的旨在于提供一种保存甜瓜白粉病菌的方法，可以使甜瓜白粉病菌的保存时间更长、保存效率更高。
本发明的主要技术方案：
采用感病的甜瓜或黄瓜品种的种子播种至5片真叶长出，在超净工作台上取幼苗茎尖，茎尖带1片展开的真叶，茎尖用3%双氧水消毒2分钟，再用无菌水冲洗3次；用灭菌镊子将茎尖扦插在盛有苯并咪唑-甘露醇琼脂培养基的500毫升三角瓶内，用灭菌的洗耳球将纯化培养的甜瓜白粉病菌吹到茎尖的叶片上；将三角瓶放入光照培养箱，白粉病菌菌落生成后调整培养条件，可有效保存约200天。
本发明具体提供一种甜瓜白粉病菌的保存方法，具体保存方法步骤如下：
（1）感病的甜瓜或黄瓜品种播种至5片真叶长出，在超净工作台上取幼苗茎尖，茎尖带1片展开的真叶，茎尖用3%双氧水消毒2分钟，再用无菌水冲洗3次；用灭菌镊子将茎尖扦插在盛有苯并咪唑-甘露醇琼脂培养基的500毫升三角瓶内，用灭菌的洗耳球将纯化培养的甜瓜白粉病菌吹到茎尖的叶片上；将三角瓶放入光照培养箱，白粉病菌菌落生成后调整培养条件，可有效保存约200天。
（2）上述步骤中的苯并咪唑-甘露醇琼脂培养基每升含有：甘露醇10克，苯并咪唑150克，每毫克5000个单位的Nystatin 50 毫克，溶剂为酒精、体积百分比浓度为0.1%的Botran75W 2.5毫升，琼脂8克。
（3）上述步骤（1）中的扦插茎尖培养条件：白粉病菌菌落生成前，光周期，12小时光照/12小时暗培养；光照强度，2000勒克斯；温度，12小时光照时22℃/12小时暗培养时18℃;白粉病菌菌落生成后，光周期，12小时光照/12小时暗培养；光照强度，1500勒克斯；温度，12小时光照时20℃/12小时暗培养时15℃。
通过实施本发明具体的发明内容，可以达到以下有益效果：
本发明与传统方法比较，无需每隔一个月播种感病品种得到幼苗，并将白粉病菌每隔一个月转接在感病品种幼苗上。本发明具有不易污染、保存时间长、保存效率高等优点。为甜瓜抗白粉病新品种选育奠定基础。
具体实施方式
下面，举实施例说明本发明，但是，本发明并不限于下述的实施例。
本发明中选用的所有原辅材料和用具、设备都为本领域熟知选用的，但不限制本发明的实施，其他本领域熟知的一些试剂和设备都可适用于本发明以下实施方式的实施。
实施例一：甜瓜白粉病菌的保存方法
甜瓜白粉病菌的保存方法具体步骤如下：
（1）感病的甜瓜或黄瓜品种播种至5片真叶长出，在超净工作台上取幼苗茎尖，茎尖带1片展开的真叶，茎尖用3%双氧水消毒2分钟，再用无菌水冲洗3次；用灭菌镊子将茎尖扦插在盛有苯并咪唑-甘露醇琼脂培养基的500毫升三角瓶内，用灭菌的洗耳球将纯化培养的甜瓜白粉病菌吹到茎尖的叶片上；将三角瓶放入光照培养箱，白粉病菌菌落生成后调整培养条件，可有效保存约200天。
（2）上述步骤中的苯并咪唑-甘露醇琼脂培养基每升含有：甘露醇10克，苯并咪唑150克，每毫克5000个单位的Nystatin 50 毫克，溶剂为酒精、体积百分比浓度为0.1%的Botran75W 2.5毫升，琼脂8克。
（3）上述步骤（1）中的扦插茎尖培养条件：白粉病菌菌落生成前，光周期，12小时光照/12小时暗培养；光照强度，2000勒克斯；温度，12小时光照时22℃/12小时暗培养时18℃;白粉病菌菌落生成后，光周期，12小时光照/12小时暗培养；光照强度，1500勒克斯；温度，12小时光照时20℃/12小时暗培养时15℃。
上述提供的技术方案与现有技术提供的方法比较，无需每隔一个月播种感病品种得到幼苗，并将白粉病菌每隔一个月转接在感病品种幼苗上，本发明提供的技术方案具有不易污染、保存时间长、保存效率高等优点。

Claims (1)

1.一种甜瓜白粉病菌的保存方法，其特征在于，具体保存方法步骤如下：
（1）感病的甜瓜或黄瓜品种播种至5片真叶长出，在超净工作台上取幼苗茎尖，茎尖带1片展开的真叶，茎尖用3%双氧水消毒2分钟，再用无菌水冲洗3次；用灭菌镊子将茎尖扦插在盛有苯并咪唑-甘露醇琼脂培养基的500毫升三角瓶内，用灭菌的洗耳球将纯化培养的甜瓜白粉病菌吹到茎尖的叶片上；将三角瓶放入光照培养箱，白粉病菌菌落生成后调整培养条件，可有效保存约200天；
（2）上述步骤中的苯并咪唑-甘露醇琼脂培养基每升含有：甘露醇10克，苯并咪唑150克，每毫克5，000个单位的Nystatin 50 毫克，溶剂为酒精、体积百分比浓度为0.1%的Botran75W 2.5毫升，琼脂8克；
（3）上述步骤（1）中的扦插茎尖培养条件：白粉病菌菌落生成前，光周期，12小时光照/12小时暗培养；光照强度，2000勒克斯；温度，12小时光照时22℃/12小时暗培养时18℃；白粉病菌菌落生成后，光周期，12小时光照/12小时暗培养；光照强度，1500勒克斯；温度，12小时光照时20℃/12小时暗培养时15℃。
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