CN105251003B

CN105251003B - 用于治疗dlbcl的装置和方法

Info

Publication number: CN105251003B
Application number: CN201510672546.6A
Authority: CN
Inventors: G·祖格梅尔; D·那高森; J·舍勒
Original assignee: Amgen Research Munich GmbH
Current assignee: Amgen Research Munich GmbH
Priority date: 2010-10-27
Filing date: 2011-10-27
Publication date: 2019-08-02
Anticipated expiration: 2031-10-27
Also published as: IL260774B; IL225924A; HRP20180882T1; HUE037786T2; CY1123251T1; JP2016164192A; LT3412687T; JP5997168B2; HUE027678T2; ES2675299T3; EP2632954B2; CR20130245A; ES2563439T5; IL225924A0; HRP20151444T1; CY1120227T1; KR101889995B1; PL3018145T3; UA111175C2; KR20140019298A

Abstract

本发明提供一种用于治疗弥漫大B细胞性淋巴瘤(DLBCL)的装置和方法。具体而言，施用经由其CD3结合部分结合T细胞并伴随地经由其CD19结合部分(即双特异性T细胞结合器，“BiTE”)结合其(特别是淋巴瘤细胞)表面上的CD19的双特异性CD19×CD3抗体，以用于治疗患者的由DLBCL导致的淋巴网状组织和/或结外淋巴瘤的肿瘤性块。

Description

用于治疗DLBCL的装置和方法

发明领域

本发明提供了用于以CD3结合抗体治疗弥漫大B细胞性淋巴瘤(DLBCL)的装置和方法。具体而言，将经由其CD3结合部分结合T细胞并伴随地经由其CD19结合部分(即双特异性T细胞结合器，“BiTE”)结合其(特别是淋巴瘤细胞)表面上的CD19的双特异性CD19×CD3抗体应用于治疗患者的由DLBCL导致的淋巴网状组织和/或结外淋巴瘤的肿瘤性块。

发明背景

淋巴瘤是淋巴细胞癌。有两种主要的淋巴瘤类型：霍奇金淋巴瘤(HL)和非霍奇金淋巴瘤(NHL)。非霍奇金淋巴瘤(NHL)是最常见的淋巴瘤类型。尽管有超过30种NHL，弥漫大B细胞性淋巴瘤(DLBCL)是最常见的类型，占全部淋巴瘤的约30％。在美国，每年DLBCL影响100,000人中的约7个。

弥漫大B细胞性淋巴瘤是侵袭性淋巴瘤，有时称为高度或中度淋巴瘤。这意味着淋巴瘤快速生长，并迅速扩散到身体的不同部分。弥漫大B细胞性淋巴瘤对50岁以上的人影响最大，但是任何年龄的人都可能患有该疾病。该疾病在男性身上比女性稍微更常见。约2/3患有弥漫大B细胞性淋巴瘤的人在诊断时疾病已经扩散，从而延伸到身体的不同部分。在近半数的患者中，该疾病影响淋巴结以外的身体部分(称为“结外”疾病)。约10-20％的患者会影响到骨髓。如果不经治疗，DLBCL是致命的。在DLBCL中，异常B细胞性淋巴细胞大于正常细胞，并且它们已经停止对通常限制细胞生长和复制的信号进行响应。DLBCL可以从较不侵袭性形式的淋巴瘤发展变化，或者发展为第一次出现淋巴瘤(称为初始的)。

DLBCL的最初迹象通常是颈、腹股沟、或腹部的淋巴结中的快速生长、无痛的块。患者还可能经历发烧、消瘦、夜间盗汗、或其它症状。在约40％的病例中，该癌症并非首先在淋巴结中开始，而是在别处发展出来。这称为结外疾病。结外受患的最常见部位是胃或胃肠道，但实际上该疾病可能在任何组织中出现。大多数患者(约60％)直到该疾病恶化(III或IV期)才被诊断为患有DLBCL。在剩余的40％患者中，该疾病限于横膈膜的一侧(横膈膜上或下)。这称为局限性疾病。

典型地，通常以淋巴结活检进行淋巴瘤的诊断。一旦确诊，进行其他测试以获得关于该疾病在体内扩散程度的更多信息。此过程称为分期。这些测试的结果将有助于确定最有效的疗程。

对弥漫大B细胞性淋巴瘤的患者的管理的讨论可方便地分成3组：表现患有局限性疾病的患者，表现患有转移性疾病的患者，和在初步缓解后淋巴瘤复发的患者。过去和现在，晚期的标准治疗都是基于CHOP的化学疗法。CHOP由四种化学疗法药物组成——环磷酰胺(也称为Cytoxan/Neosar)、阿霉素(也称为羟基柔红霉素)(或亚德里亚霉素)、长春新碱(Oncovin)和泼尼松龙。然而，尽管过去和现在通常应用CHOP治疗，但是报道了开发的新治疗方案，包括M-BACOD(甲氨蝶呤、博来霉素、阿霉素、环磷酰胺、长春新碱、和地塞米松)、MACOP-B(具有亚叶酸解救阿霉素的甲氨蝶呤、环磷酰胺、长春新碱、强的松和博来霉素)和ProMACE/CytaBOM(环磷酰胺、阿霉素、依托泊甙、cytozar、博来霉素、长春新碱、甲氨蝶呤、强的松)，以实现看起来比采用CHOP观察到的好得多的结果。这些所谓的第三代方案似乎代表治疗的重要进展，直到在美国进行的组间试验证明其相比于CHOP并无优越性。

尽管如此，CHOP疗法已发展为化学疗法和免疫疗法的组合，即R-CHOP。R-CHOP是用于侵袭性非霍奇金淋巴瘤(NHL)化学疗法的药物的组合。其在称为CHOP的标准组合中增加了药物利妥昔单抗——一种抗CD20的单克隆抗体。

通常应用的R-CHOP治疗方案如下：在治疗第一天经数个小时施用作为输注液的利妥昔单抗，而CHOP方案的药物可以在第二天开始。通常每三周重复整个过程，重复6-8个循环。通常在一天将CHOP化学疗法方案的前三种药物作为注射液或输注液在静脉内给予，而泼尼松龙作为丸剂服用五天。每三周重复一个循环，重复6-8个循环。CHOP化学疗法用于多种常见类型的侵袭性非霍奇金淋巴瘤，包括弥漫大B细胞性淋巴瘤(DLBCL)。现在，R-CHOP被认为是针对DLBCL患者的标准的一线治疗。

DHAP是有时应用于治疗DLBCL的化学治疗剂的另一组合。DHAP化学治疗剂包括：地塞米松、有时称为Ara-C的阿糖胞苷和含有铂的顺铂。DHAP也可以与利妥昔单抗(商品名)组合，即R-DHAP。

ICE是有时应用于治疗DLBCL的化学治疗剂的另一组合，并且以使用的化学疗法药物异环磷酰胺、卡铂、和依托泊甙的首字母命名。R-ICE还包括单克隆抗体药物利妥昔单抗。

然而，尽管取得了上述重要治疗进展，但大部分患者会复发或经最初的化学免疫疗法后病症仍顽固不缓解。因此，需要用于治疗由DLBCL导致的侵袭性和快速生长的大肿瘤块的替代和/或辅助疗法。相应地，本发明的技术问题旨在满足这一需要。

发明概述

本发明针对这一需要，从而提供了针对该技术问题的解决方案，提供了涉及装置和方法的实施方案，所述装置和方法用于治疗患者的由弥漫大B细胞性淋巴瘤(DLBCL)导致的淋巴结组织和/或结外淋巴瘤的肿瘤性块，其中应用包含CD19×CD3双特异性抗体的组合物。CD19×CD3双特异性(单链)抗体的一个实例是Blinatumomab(MT103)。

Blinatumomab是针对淋巴瘤的重组双特异性单链CD19×CD3抗体，其结合几乎全部B细胞和B肿瘤细胞表面上的CD19，并且可以伴随地结合T细胞，由此触发T细胞杀死靶标B细胞或B肿瘤细胞。其因而是所谓的(双特异性T细胞结合器)抗体。Blinatumomab由四个组装成单多肽链的免疫球蛋白可变结构域组成。所述可变结构域中的两个形成CD19的结合位点，CD19是表达在大多数B细胞和B肿瘤细胞上的细胞表面抗原。另外两个可变结构域形成T细胞上CD3复合物的CD3ε的结合位点。Blinatumomab设计成引导身体的具有细胞毒性或细胞破坏性的T细胞抵抗肿瘤细胞，目前处于临床试验中。

尽管WO 2007/068354提到，CD19×CD3双特异性抗体可用于不同的B细胞性非霍奇金淋巴瘤以治疗DLBCL，但该文献并没有得出任何关于下述情况的结论：即实际存在由要求保护的CD19×CD3双特异性抗体的治疗应用直接和毫无疑义地得到的治疗作用或任何药理作用。当针对难以治疗且为侵袭性的DLBCL时，情况尤为如此。

然而，本发明人意外地发现，在治疗患者的由弥漫大B细胞性淋巴瘤(DLBCL)导致的淋巴网状组织(在本文中还称为淋巴结组织)和/或结外淋巴瘤的肿瘤性块时，CD19×CD3双特异性抗体是有益的。实际上，在临床试验中观察到，CD19×CD3双特异性抗体在治疗患有DLBCL的患者时产生了突出的效果，其中一些患者在给药仅数周后即观察到肿瘤性块的显著消融。值得注意的是，采用CD19×CD3双特异性抗体治疗的患者之前采用各种化学疗法的组合(化学疗法的组合或化学疗法的组合与CD20-特异性抗体利妥昔单抗一起)充分治疗过。然而，采用CD19×CD3双特异性抗体作为DLBCL患者的单独治疗剂的免疫疗法，使病症得到了部分缓解或甚至完全缓解(参见所附实施例，特别是患者153-001、135-001和109-038)。

简而言之，无法预见到本发明人在其临床试验中观察到的突出的效果，原因在于，在治疗癌症、特别是淋巴瘤时，没有适合所有疾病的药物(“魔力弹”)，因而可以说对于每一个临床试验，不存在合理的成功预期，基于此，技术人员高度谨慎且不会直接在人类患者中尝试实验药物。然而，在CD19×CD3双特异性抗体方面具有渊博知识和临床前数据的本发明人冒着风险治疗了或多或少对治疗有抗性的DLBCL患者，并且成功了。因此，CD19×CD3双特异性抗体由此为DLBCL的新治疗铺平了道路。

本发明的方面为：

1.一种包含CD19×CD3双特异性抗体的组合物，其用于治疗患者的由弥漫大B细胞性淋巴瘤(DLBCL)导致的淋巴结组织和/或结外淋巴瘤的肿瘤性块(的方法中)。还有一种治疗由DLBCL导致的淋巴结组织和/或结外淋巴瘤的肿瘤性块的方法，所述方法包括给患有DLBCL的患者施用有效量的CD19×CD3双特异性抗体。

2.根据第1项所述的组合物或方法，其中所述肿瘤性块以尺寸超过10×10mm的肿瘤为特征。

3.根据第1或2项所述的组合物或方法，其中所述淋巴结组织包括淋巴结和/或脾。

4.根据第1或2项所述的组合物或方法，其中所述结外淋巴瘤包括中枢神经系统(CNS)、皮肤组织、乳腺、肺、肝、胃肠道、泌尿生殖道、眼组织、骨髓和/或骨。

5.根据前述项中任一项所述的组合物或方法，其中在第一时间段施用第一剂量的所述组合物，且连续地，在第二时间段施用第二剂量的所述组合物，其中第二剂量超过第一剂量。

6.根据前述项中任一项所述的组合物或方法，其中所述第一时间段超过3天。

7.根据前述项中任一项所述的组合物或方法，其中所述第一时间段为3天至10天。

8.根据前述项中任一项所述的组合物或方法，其中所述第二时间段超过18天。

9.根据前述项中任一项所述的组合物或方法，其中所述第二时间段为18天至81天，优选21天或49天。

10.根据前述项中任一项所述的组合物或方法，其中所述第一时间段为3天至10天，所述第二时间段为18天至81天。

11.根据第10项所述的组合物或方法，其中所述第一时间段为7天，所述第二时间段为21天或49天。

12.根据前述项中任一项所述的组合物，其中所述第一剂量为1μg/m²/d至15μg/m²/d，优选5μg/m²/d、10μg/m²/d或15μg/m²/d。

13.根据前述项中任一项所述的组合物或方法，其中所述第二剂量为15μg/m²/d至60μg/m²/d，优选60μg/m²/d。

14.根据第5项所述的组合物或方法，其还包括在第一和第二时间段的第一和第二剂量之后，在第三时间段施用第三剂量的所述组合物。

15.根据第14项所述的组合物或方法，其中第三时间段超过第一和第二时间段，由此第二剂量超过所述第一剂量。

16.根据第14或15项所述的组合物或方法，其中第三剂量超过第一和第二剂量。

17.根据第14至16项中任一项所述的组合物或方法，其中所述第一时间段超过3天。

18.根据第14至17项中任一项所述的组合物或方法，其中所述第一时间段为3天至10天，优选7天。

19.根据第14项所述的组合物或方法，其中所述第二时间段超过3天。

20.根据第14至19项中任一项所述的组合物或方法，其中所述第二时间段为3天至10天，优选7天。

21.根据第14项所述的组合物或方法，其中所述第三时间段超过8天。

22.根据第14至21项中任一项所述的组合物或方法，其中所述第三时间段为8天至78天，优选14天或42天。

23.根据第14至22项中任一项所述的组合物或方法，其中所述第一时间段为3天至10天，所述第二时间段为3天至10天，所述第三时间段为8天至78天。

24.根据第23项所述的组合物或方法，其中所述第一时间段为7天，所述第二时间段为7天，所述第三时间段为14天或42天。

25.根据第14至24项中任一项所述的组合物或方法，其中所述第一剂量为1μg/m²/d至15μg/m²/d，优选5μg/m²/d。

26.根据第14至25项中任一项所述的组合物或方法，其中所述第二剂量为1μg/m²/d至15μg/m²/d，优选15μg/m²/d。

27.根据第14至26项中任一项所述的组合物或方法，其中所述第三剂量为15μg/m²/d至60μg/m²/d，或15μg/m²/d至90μg/m²/d，或15μg/m²/d至120μg/m²/d，优选60μg/m²/d。

28.根据前述项中任一项所述的组合物或方法，其中所述组合物还包含至少一种化学治疗剂。

29.根据前述项中任一项所述的组合物，其用于治疗有此需要的患者的由弥漫大B细胞性淋巴瘤(DLBCL)导致的淋巴结组织和/或结外淋巴瘤的肿瘤块的方法中，所述方法包括给有此需要的患者施用治疗有效量的所述组合物。

30.一种药物试剂盒，其用于治疗患者的由弥漫大B细胞性淋巴瘤(DLBCL)导致的淋巴结组织和/或结外淋巴瘤的肿瘤块，所述药物试剂盒包括根据前述项中任一项所述的组合物和可选的说明手段(说明书)。

31.根据前述项中任一项所述的组合物用于制备药物组合物的用途，所述药物组合物用于治疗由弥漫大B细胞性淋巴瘤(DLBCL)导致的淋巴结组织和/或结外淋巴瘤的肿瘤块。

32.一种药物包或试剂盒，其包括如前述项中任一项所限定的第一剂量和第二剂量。

33.根据第32项所述的药物包或试剂盒，其还包括如前述项中任一项所限定的第三剂量。

34.根据第32或33项所述的药物包或试剂盒，其还包括给患者施用所述第一和/或第二和/或第三剂量的工具。

除非另有限定，本文使用的全部技术术语、标记和其他科学术语或用辞具有本发明所属领域的技术人员通常理解的含义。在一些情况下，为了清楚和/或易于引用起见，本文限定了具有通常理解的含义的术语，本文包括的这种定义不应一定理解为表示显著区别于本领域通常理解的定义。本领域技术人员使用常规方法学能够充分理解和常规采用本文描述或引用的许多技术和程序。根据情况，除非另有说明，通常根据制造商限定的操作程序和/或参数实施涉及市售试剂盒和试剂使用的程序。

本文提供的一般方法的讨论意在仅用于示例性目的。经阅读本发明内容，其他替代方法和实施方案对于本领域技术人员来说是显而易见的。

除非另有明确说明，与连接词“或”有关的项目组不应理解为需要在所述组内相互排斥，而是应理解为“和/或”。

应注意，除非上下文另有清楚说明，本文所用的单数形式“一个(a)”、“一种(an)”及“某个(种)(the)”均涵盖复数形式。因此，例如，提及“一个(a)试剂”，包括一个或多个这种不同试剂，而提及“所述方法”，包括本领域普通技术人员已知的等效步骤和方法，这些步骤和方法可被改变或取代以用于本文所述方法。

本发明引用的所有出版物和专利都以其全文引用的形式并入。如通过引用并入的资料与本说明书相抵触或不一致，本说明书将优先于任何这种资料。

除非另外说明，在一系列元素之前的术语“至少”应理解为涉及所述系列中的每一个元素。本领域技术人员将认识到或仅利用常规实验就能确定本文描述的本发明的具体实施方案的许多等同物。本发明意在涵盖这些等同物。

除非上下文另外要求，在本说明书和之后的权利要求书中，术语“包括(comprise)”及其变体例如“含有(comprises/comprising)”将理解为意在包括所说明的整体(integer)或步骤或者整体或步骤的组，而不排除任何其他整体或步骤或者整体或步骤的组。当用于本文时，术语“包括(comprising)”可被替换为术语“包含(containing)”，或者有时用于本文时，可被替换为术语“具有(having)”。

当用于本文时，“由……组成”排除未在权利要求元素中指明的任何元素、步骤或成分。当用于本文时，“基本上由……组成”不排除不显著影响权利要求的基本特征和新特征的物质或步骤。在本文的每种情况下，术语“包括/包含”、“基本上由……组成”和“由……组成”中的任一个可被替换为另两个术语中的任一个。

如本文所述，“优选实施方案”指“本发明的优选实施方案”。同样地，如本文所述，“多个实施方案”和“另一个实施方案”分别指“本发明的多个实施方案”和“本发明的另一个实施方案”。本说明书文本全文引用了若干文献。本文引用的上文或下文的每一个文献(包括所有的专利、专利申请、科学出版物、制造商的说明书、说明等)，通过全文引用并入本文。本文没有内容会被理解为承认本发明不应早于在先发明的此类公开内容。

发明详述

本领域中明显的是单独的化学疗法或化学疗法与免疫疗法相组合用于治疗DLBCL。然而，抗体例如利妥昔单抗(CD20-特异性抗体)通常并不用作单独的化合物以用于治疗DLBCL，这可能是因为DLBCL是侵袭性的、快速生长的淋巴瘤，基于此，无法预期需要免疫(效应物)细胞以便发挥CDC和/或ADCC的单独的抗体在单一疗法中有效。因此，通常将化学疗法的组合与利妥昔单抗一起应用。此外，观察到如果B细胞不是Bcl-2阳性的，利妥昔单抗可能不具有所需的治疗作用(Armitage(2007),Blood110(1):29-36)。因而，利妥昔单抗可能在某些情况下具有有些局限的治疗谱。

此外，DLBCL常常呈现大体积肿瘤块，可以合理地假定常规Ig抗体可能无法有效地进入大体积肿瘤块，因而可能无法吸引可以杀死肿瘤细胞的效应物细胞。这是因为，例如利妥昔单抗需要免疫系统的效应物细胞，所述效应物细胞可能无法以充分的数量或质量获得，原因是患者常常在治疗之前用化学疗法充分治疗过，该化学疗法同样伤害免疫细胞。因而，可能理想的是具有有效吸引(结合)可以杀死肿瘤细胞的免疫细胞的可获得的抗体。本发明以CD19×CD3双特异性(单链)抗体提供了这样的抗体。事实上，在临床试验中，本发明人意外地观察到CD19×CD3双特异性(单链)抗体作为单独的治疗剂成功地减小了由DLBCL导致的淋巴结组织和/或结外淋巴瘤的肿瘤性块。事实上，甚至减小了尺寸高达63×47mm或更大的肿瘤，甚至肿瘤完全消除。这一突出的效果是无法预期的，因为例如在本领域中利妥昔单抗并不用作单独的治疗剂。相反，它与化学疗法的组合一起应用。

在应用CD19×CD3双特异性抗体作为单独的治疗剂时，本发明人不仅要处理治疗患者的侵袭性的、快速生长的淋巴瘤的任务，所述患者之前采用化学疗法或化学疗法与免疫疗法(甚至是有力的CD20-特异性抗体)的组合充分治疗过，并至少部分地受累于高肿瘤负荷，并且本发明人还需要解决减轻、优选预防之前采用双特异性抗体观察到的不良作用的问题。换而言之，本发明人一方面要在患有DLBCL的患者(患者之前采用化学疗法和化学免疫疗法治疗过)中观察在之前的(免疫)化学疗法至化学疗法之后的进行性肿瘤的进展和甚至发作，另一方面本发明人还要观察剂量限制性毒性。

事实上，如例如在WO 99/54440中所述，在先前采用CD19×CD3抗体Blinatumomab(以重复静脉推注(bolus infusion)施用于患有B细胞衍生的慢性淋巴白血病(B-CLL)的患者)进行的研究中已观察到不良作用。具体而言，在临床试验中，22个患者中有7个患者表现出早期神经学/精神反应，包括例如混乱、共济失调、语言障碍或定向障碍。为了尽量更好地管理这些不期望的副作用，改变了CD19×CD3双特异性单链抗体的施用模式，其中从静脉推注改成在较长时间段连续静脉内施用所述抗体。然而，在该临床试验过程中仍发现神经学/精神反应。

因而，对于与应用CD19×CD3双特异性单链抗体以治疗由DLBCL导致的淋巴结组织和/或结外淋巴瘤的肿瘤性块相关的临床试验而言，本发明人需要开发有效的且被大多数患者良好耐受的治疗方案。为此，本发明人采用CD19×CD3双特异性单链抗体的逐步应用，其中给患者施用5/15/60μg/m²/24h。由此，不良作用，特别是神经学/精神事件，可以在数量上减少、减轻，甚至阻止。还在CD19×CD3双特异性单链抗体的逐步施用过程中考虑使用两个剂量的治疗方案，例如在患者治疗期间，采用5/15μg/m²/24h、5/60μg/m²/24h、或15/60μg/m²/24h的剂量。可以通过临床医生基于在患者中的效用、耐受性和安全性以及最小的不良作用选择合适的剂量。但是本发明人还考虑了由DLBCL导致的淋巴结组织和/或结外淋巴瘤的肿瘤性块的治疗，以包括不变剂量的连续施用，而不增加至之后的更高剂量。例如，本治疗方案包括施用5μg/m²/24h、15μg/m²/24h、或60μg/m²/24h的CD19×CD3双特异性单链抗体，直到治疗过程结束，所述治疗过程在良好耐受性且无不良作用的情况下持续长达8周[56天]，如果确定安全、有效，甚至可以更长。

还预见到本发明的方法的特征还在于糖皮质激素的施用。这一施用在对DLBCL患者施用CD19×CD3双特异性单链抗体之前及可选地在施用CD19×CD3双特异性单链抗体期间进行。这一伴随施用可以在施用所述抗体之后和可选地在采用所述抗体连续治疗期间进行一天或连续多天。

如在实施例所示，发现糖皮质激素在本发明的治疗方法过程中减轻和/或预防神经学反应。因此预见到本发明的方法(和由此本发明的剂量方案)的特征还在于至少一种糖皮质激素的可选施用。所述施用优选地在采用所述抗体进行第一次治疗之前进行，然后伴随地在治疗开始之后的第二和第三天进行，并且如果发生任何神经学不良事件，还可以在治疗期间晚些时间施用。如果根据本文所述的给药安排治疗方案包括剂量增加，那么糖皮质激素在每次剂量增加之前和伴随地在每次新增加剂量之后第二和第三天施用，并可选地在其他天施用以治疗任何神经学不良事件。

糖皮质激素(GC)为一类结合糖皮质激素受体(GR)的类固醇激素，其存在于几乎全部脊椎动物细胞中，包括人。这些化合物是有效的抗炎剂，无论炎症的原因是什么。糖皮质激素通过抑制编码细胞因子IL-1、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-8和IFN-γ的基因而抑制尤其是细胞介导的免疫性。

如本文使用的，术语“糖皮质激素”至少包括可的松、氢化可的松、氯泼尼醇、强的松、泼尼松龙、甲基泼尼松龙、地夫可特、氟考龙、氟羟泼尼松龙、地塞米松、和倍他米松、丙酸氟替卡松、曲安奈德(triamcinolonacetonide)。地塞米松是优选的，其优选剂量范围为6至40mg/剂。

地塞米松在最常使用的类固醇中具有最高的糖皮质激素效力，还具有最长的半衰期(参见下表)。但是本领域技术人员可以选择一种其他已知的糖皮质激素(本文公开了它们中的一些)，并选择合适、有效的剂量，以减轻或预防可能由采用CD19×CD3双特异性单链抗体治疗DLBCL患者导致的神经学不良事件。

地塞米松还在恶性中枢神经系统(CNS)疾病(例如CNS淋巴瘤或脑转移瘤)中具有有益作用——可能是由于特异进入CNS。其还优先(优于其他类固醇)用于治疗脑水肿。尽管皮质类固醇降低肿瘤本身的毛细管渗透性，但已在动物模型中发现，地塞米松可以有不同的作用，并且通过对从肿瘤流出的块体的作用而减少水肿(Molnar,Lapin,&Goothuis,1995,Neurooncol.1995；25(1):19-28)。

以进一步减少和/或预防不良作用为目标的本发明人发现，在提高CD19×CD3双特异性单链抗体剂量期间(间歇性地)施用地塞米松，可以有助于进一步减轻和/或预防神经学反应。特别地，在提高CD19×CD3双特异性(单链)抗体的剂量期间，施用地塞米松三天。更具体地，地塞米松在第1天以24μg的剂量施用，在第2天以16μg的剂量施用，在第3天以8μg的剂量施用(也可参见实施例8)。尽管已知地塞米松降低包括T-细胞(CD4⁺和CD8⁺T-细胞)的免疫细胞的活性，因为它是已知的免疫抑制剂，因此已预期CD19×CD3双特异性抗体可能不结合有效的(活性)T-细胞，但是本发明人观察到相反情况。实际上，被CD19×CD3双特异性抗体结合的T-细胞是明显有效的，因为在DLBCL患者的临床试验中观察到肿瘤块的显著减小(参见所附实施例)。

鉴于在采用CD19×CD3双特异性抗体的临床试验中成功地治疗了DLBCL患者的肿瘤性块,本发明在第一方面提供了一种包含CD19×CD3双特异性抗体的组合物，其用于治疗患者的由弥漫大B细胞性淋巴瘤(DLBCL)导致的淋巴结组织和/或结外淋巴瘤的肿瘤性块。

同样地，在替换方案中，本发明提供了一种包含CD19×CD3双特异性抗体的组合物，其用于治疗有此需要的患者的由弥漫大B细胞性淋巴瘤(DLBCL)导致的淋巴结组织和/或结外淋巴瘤的肿瘤块的方法中，所述方法包括给有此需要的患者施用治疗有效量的所述组合物。

并且，在替换方案中，本发明提供了包含CD19×CD3双特异性抗体的组合物用于制备药物组合物的用途，所述药物组合物用于治疗由弥漫大B细胞性淋巴瘤(DLBCL)导致的淋巴网状组织和/或结外淋巴瘤的肿瘤块。

此外，在替换方案中，本发明提供了一种治疗患者的由弥漫大B细胞性淋巴瘤(DLBCL)导致的淋巴结组织和/或结外淋巴瘤的肿瘤性块的方法，所述方法包括给所述患者施用治疗有效量的CD19×CD3双特异性抗体。所述抗体优选地包含在组合物中，所述组合物优选地为药物组合物。

DLBCL是淋巴结组织的肿瘤形成，从B细胞形成。在临床、形态和基因上，它是异源类别的大淋巴B细胞的恶性增殖，占成人非霍奇金淋巴瘤的大约40％(25,000病例/年)。DLBCL的两种预后上不同的亚类被鉴定为具有不同的基因表达谱，该基因表达谱具有正常生发中心B细胞或活化记忆性B细胞的特征。相比于活化B细胞样(ABC或非-GC)亚类的预后(5-年存活：16％)，生发中心B-细胞样(GC)亚类与显著更好的预后相关(5-年存活：76％)(Alizadeh等人,(2000)Nature 403:503-51 1；Shipp等人,(2002)Nat Med 8:68-74)。

DLBCL的最初迹象(症状)通常是颈、腹股沟或腹部的淋巴结中的快速生长、无痛的块。患者还可能经历发烧、消瘦、夜间盗汗或其它症状。

如本文使用的，“CD19×CD3双特异性抗体”(包括CD19×CD3双特异性单链抗体——这两个术语有时在本文可互换地使用)表示包含两个结合结构域(domain)的单多肽链。这种CD19×CD3双特异性单链抗体在本发明的方法/剂量方案的上下文中是优选的。每个结合结构域包含来自抗体重链(“VH或H区”)的至少一个可变区，其中第一结合结构域的VH区特异地结合CD3ε分子，第二结合结构域的VH区特异地结合CD19。这两个结合结构域可选地通过短多肽间隔物彼此连接。多肽间隔物的非限制性实例为Gly-Gly-Gly-Gly-Ser(G-G-G-G-S)及其重复片段。每个结合结构域可另外地包含来自抗体轻链(“VL或L区”)的一个可变区，在第一和第二结合结构域中的每一个内的VH区和VL区经由多肽连接物彼此连接,例如在EP623679B1中公开和要求保护的类型，但是在任何情况下，所述多肽连接物足够长以允许第一结合结构域的VH区和VL区与第二结合结构域的VH区和VL区彼此配对，使得它们一起能够特异地结合各自的第一和第二结合结构域。这种CD19CD3双特异性单链抗体在WO99/54440、WO 2004/106381和WO2008/119565有详细描述。

与本发明有关的术语“结合结构域”表征特异地结合给定靶结构/抗原/表位或与给定靶结构/抗原/表位相互作用的多肽的结构域。因而，所述结合结构域为“抗原相互作用位点”。根据本发明，术语“抗原相互作用位点”限定多肽的基序，其能够特异地与特定抗原或特定抗原组相互作用，例如不同物种中的等同抗原。所述结合/相互作用也可理解为限定“特异识别”。根据本发明，术语“特异地识别”指抗体分子能够特异地与抗原的至少两个、优选至少三个、更优选至少四个氨基酸相互作用，和/或结合抗原的至少两个、优选至少三个、更优选至少四个氨基酸，所述抗原例如如本文限定的人CD3抗原。这种结合可例示为“锁钥原理(lock-and-key-principle)”的特异性。因而，所述结合结构域的氨基酸序列中的特定基序和所述抗原由于它们的一级、二级或三级结构以及由于所述结构的二级修饰而彼此结合。所述抗原相互作用位点与其特异抗原的特异相互作用也可导致所述位点与抗原的简单结合。此外，结合结构域/抗原相互作用位点与其特异抗原的特异相互作用例如由于抗原构象改变的诱导、抗原的寡聚化等而可替换地导致信号的触发(initiation)。符合本发明的结合结构域的优选实例是抗体。所述结合结构域可以是单克隆或多克隆抗体或衍生自单克隆或多克隆抗体。术语“抗体”包括仍保持结合特异性的衍生物或其功能片段。用于制备抗体的技术是本领域熟知的，并且在例如Harlow和Lane"antibodies,A LaboratoryManual",Cold Spring Harbor Laboratory Press,1988以及Harlow和Lane"UsingAntibodies:A Laboratory Manual"Cold Spring Harbor Laboratory Press,1999中有所描述。术语“抗体”还包括不同类别(即IgA、IgG、IgM、IgD和IgE)和亚类(例如lgG1、lgG2等)的免疫球蛋白(Ig's)。

术语“抗体”的定义还包括例如下述的实施方案：嵌合、单链和人源化抗体，以及抗体片段，如(特别是)Fab片段。抗体片段或衍生物还包括F(ab')2、Fv、scFv片段或单结构域抗体、单个可变结构域抗体或包含仅一个可变结构域的免疫球蛋白单个可变结构域，所述可变结构域可以是独立于其他V区或结构域的特异地结合抗原或表位的VH或VL；参见，例如，上文引用的Harlow和Lane(1988)和(1999)。这种免疫球蛋白单个可变结构域不仅涵盖分离的抗体单个可变结构域多肽，还涵盖包含抗体单个可变结构域多肽序列的一个或多个单体的较长多肽。如本文使用的，CD3ε表示作为T细胞受体的一部分表达的分子，并且具有现有技术认为其通常具有的含义。在人类中，CD3ε涵盖单独或独立组合形式的全部已知CD3亚基，例如CD3ε、CD3δ、CD3γ、CD3ζ、CD3α和CD3β。人CD3ε在GenBank登录号NM_000733中示出。

人CD19蛋白在GenBank登录号AAA69966中示出。

优选地，应用于本发明的方法/剂量方案的双特异性抗体具有结构域排列：VL(CD19)-VH(CD19)-VH(CD3)-VL(CD3)。

然而，还预见到本发明的方法可以采用具有其他结构域排列CD19×CD3双特异性单链抗体实施，例如

VH(CD19)-VL(CD19)-VH(CD3)-VL(CD3)、

VL(CD19)-VH(CD19)-VL(CD3)-VH(CD3)、

VH(CD19)-VL(CD19)-VL(CD3)-VH(CD3)、

VL(CD3)-VH(CD3)-VH(CD19)-VL(CD19)、

VH(CD3)-VL(CD3)-VH(CD19)-VL(CD19)、

VL(CD3)-VH(CD3)-VL(CD19)-VH(CD19)、或

VH(CD3)-VL(CD3)-VL(CD19)-VH(CD19)。

应用于本发明的方法的优选CD19×CD3双特异性抗体包含：

(a)示出为SEQ ID NO:11(GYTFTRYTMH)的CD3CDR-H1、SEQ ID NO:12(YINPSRGYTNYNQKFKD)的CD3CDR-H2和SEQ ID NO:13(YYDDHYCLDY)的CD3CDR-H3的重链的抗-CD3CDR；和/或

(b)示出为SEQ ID NO:14(RASSSVSYMN)的CD3CDR-L1、SEQ ID NO:15(DTSKVAS)的CD3CDR-L2和SEQ ID NO:16(QQWSSNPLT)的CD3CDR-L3的轻链的抗-CD3CDR；和/或

(c)示出为SEQ ID NO:17(GYAFSSYWMN)的CD19CDR-H1、SEQ ID NO:18(QIWPGDGDTNYNGKFKG)的CD19CDR-H2和SEQ ID NO:19(RETTTVGRYYYAMDY)的CD19CDR-H3的重链的抗-CD19CDR；和/或

(d)示出为SEQ ID NO:20(KASQSVDYDGDSYLN)的CD19CDR-L1、SEQ ID NO:21(DASNLVS)的CD19CDR-L2、SEQ ID NO:21(DASNLVS)的CD19CDR-L2和SEQ ID NO:22(QQSTEDPWT)的CD19CDR-L3的轻链的抗-CD19CDR。

更优选的是，应用于本发明的方法的CD19×CD3双特异性单链抗体包含所述重链和轻链的CD3CDR。甚至更优选地，应用于本发明的方法的CD19×CD3双特异性抗体包含所述重链和轻链的CD3CDR以及所述重链和轻链的CD19CDR。在本文中涉及的CDR符合Kabat编号体系。Kabat编号方案是广泛采用的用于以一致方式给抗体中的残基进行编号的标准(Kabat等人,Sequences of Proteins of Immunological Interest,1991)。

或者，优选的是，应用于本发明的方法的CD19×CD3双特异性单链抗体包含：

(a)示于SEQ ID NO:3的CD19可变重链(核苷酸序列示于SEQ ID NO:4)；和/或

(b)示于SEQ ID NO:5的CD19可变轻链(核苷酸序列示于SEQ ID NO:6)；和/或

(c)示于SEQ ID NO:7的CD3可变重链(核苷酸序列示于SEQ ID NO:8)；和/或

(d)示于SEQ ID NO:9的CD3可变轻链(核苷酸序列示于SEQ ID NO:10)。

更优选地，应用于本发明的方法的CD19×CD3双特异性单链抗体包含CD19可变重链和轻链和/或CD3可变重链和轻链。甚至更优选地，应用于本发明的方法的CD19×CD3双特异性单链抗体包含CD19可变重链和轻链以及CD3可变重链和轻链。在另一个替代方案中，还优选的是，所述双特异性单链抗体包含选自由下述序列组成的组中的氨基酸序列：

(a)如SEQ ID NO:1中所述的氨基酸序列；

(b)由如示于SEQ ID NO:2的核酸序列编码的氨基酸序列；

(c)由与(b)的核酸序列具有至少70％、80％、90％、95％或99％同一性的核酸序列编码的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列能够特异地结合CD3和CD19；和

(d)由遗传密码简并成(b)的核苷酸序列的核酸序列编码的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列能够特异地结合CD3和CD19。

应理解的是，序列同一性是以完整氨基酸序列确定的。对于序列比对，例如可以使用程序Gap或BestFit(Needleman和Wunsch J.Mol.Biol.48(1970),443-453；Smith和Waterman,Adv.Appl.Math 2(1981),482-489)，其包含于GCG软件包(Genetics ComputerGroup,575Science Drive,Madison,Wisconsin,USA 53711(1991))中。测定和识别与本文所述的CD19×CD3双特异性抗体(优选MT103)的氨基酸序列具有例如70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的氨基酸序列，对于本领域技术人员来说是一种常规方法。例如，根据克里克的摆动假说，反密码子的5’碱基不像另外两个碱基有空间局限，因而可能发生非标准的碱基配对。换而言之：三联密码子的第三位是可变的，以使得两个在第三位不同的三联密码子可编码相同的氨基酸残基。所述假说是本领域技术人员熟知的(参见例如http://en.wikipedia.org/wiki/Wobble_Hypothesis；Crick,J Mol Biol 19(1966):548–55)。确定与本文所述的CD19×CD3双特异性单链抗体的核苷酸或氨基酸序列具有例如70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的氨基酸序列的细胞毒性活性，对于本领域技术人员来说也是一种常规方法。CD19×CD3双特异性单链抗体或与CD19×CD3双特异性单链抗体的氨基酸序列具有例如70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的抗体构建体的细胞毒性活性可以通过如例如WO 99/54440中示例的方法确定。

特别优选的，所述CD19×CD3双特异性单链抗体具有示于SEQ ID NO:1的氨基酸序列。

还特别优选的是描述于WO 99/54440的CD19×CD3双特异性抗体MT103以及描述于WO 2004/106381或WO2008/119565的那些CD19×CD3双特异性抗体。

进一步优选的是描述于WO2008/119565的CD19×CD3双特异性抗体。此双特异性抗体的CD3结合部分能够结合人和非人灵长类动物，例如恒河猴(rhesus apes)和猕猴(macaques)，由此具有物种交叉特异反应性。因此，其可用于临床前和临床研究，这是高度有利的，因为不需要替代抗体，并且在临床前研究中获得的结果可直接应用和适于用于人中。典型地，通常在从疑似发展和/或具有淋巴瘤、特别是DLBCL的患者中获得的样品中进行淋巴瘤的诊断。

根据本发明，术语“样品”是指从人患者获得的任何生物样品，其含有多核苷酸或多肽或其部分。生物样品包括体液(例如血液、血清、血浆、尿液、唾液、滑液和脊髓液)和发现恶性CD19阳性淋巴细胞的组织源。用于从患者获得活组织检查样品和体液的方法是本领域熟知的。通常，包括外周血单核细胞(PBMC)、特别是B细胞和T细胞的生物样品优选作为来源。

包括外周血单核细胞(PBMC)、特别是B细胞和T细胞的样品优选从人患者的外周血获得。其他优选样品是全血、血清、血浆或滑液，血浆或血清是最优选的。

从患者获得的另一种优选样品是淋巴结活组织检查样品。淋巴结活组织检查样品是例如采用异常淋巴结切除的活组织检查或所涉及器官的普通内切活组织检查获得的。在一些情况下，切割针刺活组织检查可以提供用于诊断的足够组织。此外，可以进行充分的骨髓活组织检查。诊断可以通过基因表达分析进行补充。更优选地，由在诊断淋巴瘤、特别是DLBCL中具有经验的血液病理学家进行诊断，其优选通过应用WHO的淋巴赘生物分类(参见Armitage在Blood(2007),Vol.110(1):29-36中公开的第30页上的表1)进行诊断。有时还优选进行免疫组织化学，并有时应用细胞遗传学或荧光原位杂交(FISH)，以便使最初的诊断清楚。

鉴于此，本发明的优选实施方案是，根据前述症状和/或通过应用前述手段和方法例如淋巴结活组织检查、免疫组织化学、细胞遗传学、基因分析和/或FISH诊断DLCBL。

当进行诊断且优选确诊时，由另一位有经验的血液病理学家进行其他试验，例如通过再次的活组织检查进行再分期，和/或进行其他成像研究，包括胸部、腹部和/或骨盆的计算机断层扫描、超声成像、和/或PET扫描，以获得关于疾病在体内扩散程度的更多信息。该过程称为分期。这些试验的结果将有助于确定最有效的治疗过程。

有多种分期试验来帮助确定身体的那些部分已被滤泡性淋巴瘤影响。可以进行的试验包括：CT扫描、血液测试、骨髓活组织检查和/或PET扫描。

分期涉及根据诊断时淋巴系统中有多少被涉及而将患者分成组(期)。分期帮助确定人的预后和治疗选择。淋巴瘤的各期定义如下：

第I期——仅涉及一个淋巴结区，或仅涉及一个淋巴结构。

第II期——涉及横膈膜的同一侧上的两个或更多个淋巴结区或淋巴结结构。

第III期——涉及横膈膜的两侧上的淋巴结区或结构。

第IV期——除了淋巴结区或结构之外，广泛扩散涉及多个器官或组织，例如肝、肺、或骨髓。当指定了期之后，还包括选择字母A或B以表示是否存在发热、消瘦或夜间盗汗。“A”表示不存在这些症状；“B”表示存在这些症状。例如，具有第1B期疾病的人具有在一个淋巴结区的癌症迹象且具有“B”症状(发热、消瘦或夜间盗汗)。

在本发明中，DLBCL优选根据Cheson等人(2007),J.Clin.Oncol.25(5):579-586中列出的标准进行分期。

当用于本文时，“包含CD19×CD3双特异性抗体的组合物”优选涵盖药物组合物。因而，CD19×CD3双特异性抗体优选为药物的形式。因此，术语当“药物组合物”和“药物”用于本文时，两者是可以互换的。

在本说明书中，术语“药物”应具有其最广的含义，并包括用于治疗患者的DLBCL的化合物。优选地，用于治疗DLCBL的化合物为CD19×CD3双特异性抗体。因此，药物组合物优选包含CD19×CD3双特异性抗体和可选的药学上可接受的载体。

药学上可接受的载体包括用于临时制备无菌的可注射溶液或分散体的无菌水性溶液或分散体和无菌粉末。用于药物活性物质的这种介质和试剂的使用是本领域已知的。除非任何常规介质和试剂与活性化合物不相容，还考虑了其在本发明的药物组合物中的使用。可以例如通过使用包衣材料例如卵磷脂、通过在分散体的情况下保持所需粒径、和通过使用表面活性剂而保持适当的流动性。

含有所述抗体的药物组合物还可以包含药学上可接受的抗氧化剂，例如(1)水溶性抗氧化剂，例如抗坏血酸、半胱氨酸盐酸盐、硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、亚硫酸钠等等；(2)油溶性抗氧化剂，例如抗坏血酸棕榈酸酯、丁基化羟基茴香醚(BHA)、丁基化羟基甲苯(BHT)、卵磷脂、没食子酸丙酯、α-生育酚等等；和(3)金属螯合剂，例如柠檬酸、乙二胺四乙酸(EDTA)、山梨醇、酒石酸、磷酸等等。本发明的药物组合物还可以在所述组合物中包含等渗剂(isotonicity agent)，例如糖、多元醇例如甘露醇、山梨醇、甘油或氯化钠。

药学上可接受的稀释剂包括盐水和水性缓冲溶液。含有所述抗体的药物组合物还可以含有适于所选施用途径的一种或多种佐剂，例如防腐剂、润湿剂、乳化剂、分散剂、防腐剂或缓冲剂，该佐剂可提高所述药物组合物的保存期限或有效性。本发明的化合物可以例如与下述物质混合：乳糖、蔗糖、粉末(例如，淀粉粉末)、烷酸的纤维素酯、硬脂酸、滑石、硬脂酸镁、氧化镁、磷酸和硫酸的钠盐和钙盐、阿拉伯树胶、明胶、海藻酸钠、聚乙烯吡咯烷酮和/或聚乙烯醇。佐剂的其他实例为QS21、GM-CSF、SRL-172、二盐酸组胺、胸腺卡汀、Tio-TEPA、单磷酰脂(monophosphoryl-lipid)A/微生物组合物、矾、弗氏不完全佐剂、montanideISA、ribi佐剂体系、TiterMax佐剂、syntex佐剂制剂、免疫刺激复合物(ISCOM)、gerbu佐剂、CpG寡脱氧核苷酸、脂多糖和聚肌胞(polyinosinic polycytidylic acid)。

包含CD19×CD3双特异性抗体的(药物)组合物例如描述于WO2007/068354。

可以通过灭菌程序和通过包含各种抗细菌剂和抗真菌剂来确保防止微生物的存在，所述抗细菌剂和抗真菌剂为例如对羟基苯甲酸酯(paraben)、氯丁醇、苯酚、山梨酸等等。此外，可以通过包含延缓吸收的试剂例如单硬脂酸铝和明胶来产生可注射药物形式的延长的吸收。因此，含有所述抗体且包含本发明的化合物的药物组合物还包括合适的盐。任何合适的盐，例如任何适宜形式的碱土金属盐(例如缓冲盐)，可用于本发明的化合物的稳定化。合适的盐通常包括氯化钠、琥珀酸钠、硫酸钠、氯化钾、氯化镁、硫酸镁和氯化钙。在一个实施方案中，铝盐可用于稳定本发明的药物组合物中的本发明的化合物，当这种组合物施用给患者时，该铝盐还可用作佐剂。含有所述抗体的药物组合物可为多种适宜的形式。此类形式包括，例如液体、半固体和固体剂型，例如液体溶液(例如可注射和难溶溶液(infusible solution))、分散体或悬液、乳液、微乳液、凝胶、乳膏(cream)、颗粒、粉末、片剂、丸剂、粉末、脂质体、聚合物(dendrimer)和其他纳米颗粒(参见例如Baek等人,MethodsEnzymol.362,240-9(2003)；Nigavekar等人,Pharm Res.21(3),476-83(2004))微颗粒和栓剂。

“药学上可接受的盐”是指保持母体化合物所期望的生物活性并且不赋予任何不期望的毒理效应的盐(参见例如Berge,S.M.等人,J.Pharm.Sci.66,1-19(1977))。这种盐的实例包括酸加成盐和碱加成盐。酸加成盐包括衍生自无毒性无机酸以及无毒性有机酸的那些盐，所述无毒性无机酸例如盐酸、硝酸、磷酸、硫酸、氢溴酸、氢碘酸、亚磷酸等等，所述无毒性有机酸例如脂肪族单羧酸和二羧酸、苯基取代的烷酸、羟基烷酸、芳族酸、脂肪族和芳香族磺酸等等。碱加成盐包括衍生自碱土金属以及无毒性有机胺的那些盐，所述碱土金属例如钠、钾、镁、钙等等，所述无毒性有机胺例如N’,N’-二苄基乙二胺、N-甲基葡糖胺、氯普鲁卡因、胆碱、二乙醇胺、乙二胺、普鲁卡因等等。

药学上可接受的载体包括生理上与本发明的化合物相容的任何和全部合适的溶剂、分散体介质、包衣、抗细菌剂和抗真菌剂、等渗剂、抗氧化剂和吸收延缓剂等等。可用于本发明的药物组合物的合适的水性和非水性载体的实例包括水、盐水、磷酸盐缓冲盐水、乙醇、葡萄糖、多元醇(例如甘油、丙二醇、聚乙二醇等等)、及其合适的混合物；植物油，例如橄榄油、玉米油、花生油、棉籽油和芝麻油；羧甲基纤维素胶体溶液、黄蓍胶和可注射有机酯，例如油酸乙酯；和/或各种缓冲剂。药物领域熟知其它载体。

预见到本发明的药物组合物可用于协同治疗方法中，即与其它药剂或药物共同施用，例如用于治疗患者的恶性CD19阳性淋巴细胞的其他药物和/或可能在本发明的方法上下文中有益的任何其他治疗剂。共同施用的药剂或药物的实例为化学治疗剂，例如地塞米松。然而，如本文所述，尽管地塞米松还已知是化学治疗剂，其优选地用于本发明的上下文中，作为辅助减轻和/或避免/预防不良作用的化合物，所述不良作用例如特别是神经学作用，如本文其他地方所述。

与一种或多种其他治疗剂“组合”施用包括同时施用和以任何顺序连续施用。

“治疗”在本文限定为给患者应用或施用CD19×CD3双特异性抗体，或给来自患者的分离的组织或细胞系应用或施用CD19×CD3双特异性抗体，其中所述患者患有DLBCL或处于形成DLBCL、DLBCL的症状、或倾向DLBCL的风险中，该治疗过程的目的是治愈、恢复、缓解、解除、改变、改进、减轻、改善、或影响DLBCL、DLBCL的症状、或DLBCL的倾向。“治疗”还意在给患者应用或施用包含CD19×CD3双特异性抗体的药物组合物，或给来自患者的分离的组织或细胞系应用或施用包含CD19×CD3双特异性抗体的药物组合物，所述患者具有疾病、疾病的症状、或疾病的倾向，该治疗过程的目的是治愈、恢复、缓解、解除、改变、改进、减轻、改善、或影响所述疾病、所述疾病的症状或所述疾病的倾向。应用于本发明的药物组合物优选包含“治疗有效量”的CD19×CD3双特异性抗体。

在一个实施方案中，针对DLBCL的组合物的“治疗有效量”或“有效量”可互换地是指，相比于不存在所述组合物，能够延缓、降低、缓和、减轻、稳定、预防和/或逆转与DLBCL相关的一个或多个症状(例如，临床症状、生化症状等等)所需要的组合物的量。这包括使用必要的剂量和时间段，以实现所期望的治疗结果。术语“延缓”症状是指增大暴露于CD19×CD3双特异性抗体与如本文所述的一个或多个症状发作之间的时间段。术语“消除”症状是指使如本文所述的一个或多个症状达到40％、50％、60％、70％、80％、90％或甚至100％减少。治疗有效量还包括其中治疗有效作用超过所述组合物的任何毒性或有害作用的量。

“预防有效量”是指有效的量，以必要的剂量和时间段实现所期望的预防结果，由于在疾病较早期阶段之前或处于较早期阶段时对受试者施用预防剂量，因此所述预防有效量可小于治疗有效量。具体剂量可以通过临床试验及根据例如施用途径、疾病状态、个体的年龄、性别和体重(例如毫克药物/kg体重)而容易地确定。当在干细胞疗法、优选自体干细胞疗法之前对患者给药时，可以例如通过应用如本文所述的CD19×CD3双特异性抗体实现预防，以便消除(耗竭)恶性CD19细胞表达。剂量将在下文进一步讨论。

确切剂量将取决于治疗目的，并可被本领域技术人员采用已知技术确定。如本领域已知和上文所述的，针对年龄、体重、一般健康、性别、饮食、药物相互作用和病况的严重性进行调整可能是必要的，并且可被本领域技术人员采用常规实验确定。本发明的各个方法或方法步骤的治疗作用另外可通过指示治疗作用的全部已建立的方法和方案进行检测。例如，预见到通过对被影响的组织/器官进行外科切除或活组织检查，之后再通过免疫组化(IHC)或相当的免疫学技术进行分析，来检测治疗作用。或者还预见到，检测患者血清中的肿瘤标志物(如果存在)，以便诊断治疗方案是否已经产生效果。另外或可替代地，还可以评估相应患者的一般情况(健康、幸福感、肿瘤介导疾病的减轻等)，所述一般情况同样有助于技术从业者评估是否已产生治疗效果。技术人员了解使得他或她能够观察本发明化合物的治疗作用的许多其他方式。

“治疗或预防有效剂量”或“治疗或预防有效量”还意指CD19×CD3双特异性抗体的量，针对DLBCL患者或具有与CD19表达细胞相关的恶化前病况的患者的治疗，当施用所述量时产生阳性治疗反应。合适的剂量已在本文其他地方更详细地描述。因而，通常优选的是，针对DLBCL患者或具有与CD19表达细胞相关的恶化前病况的患者的治疗，包含CD19×CD3双特异性抗体的组合物能够产生阳性治疗反应。

针对DLBCL或与其相关的恶化前病况的“阳性治疗反应”意指与CD19×CD3双特异性抗体的治疗活性相关的DLBCL或与其相关的恶化前病况的改善，和/或与DLBCL或与其相关的恶化前病况相关的症状的改善。也就是说，可以观察到抗增殖作用、肿瘤进一步自然生长的预防、肿瘤尺寸的减小、肿瘤细胞数量的减少和/或与CD19表达细胞相关的一个或多个症状的减少。因而，例如，阳性治疗反应是指下述疾病改善中的一个或多个：(1)肿瘤尺寸的减小；(2)癌(即，赘生性)细胞数量的减少；(3)赘生性细胞死亡的增加；(4)赘生性细胞存活的抑制；(4)肿瘤生长的抑制(即减缓到一定程度，优选停止)；(5)癌细胞浸润到周边器官中的抑制(即减缓到一定程度，优选停止)；(6)肿瘤转移的抑制(即减缓到一定程度，优选停止)；(7)肿瘤进一步自然生长的预防；(8)患者存活率上升；和(9)与DLBCL相关的一个或多个症状的一定程度的减轻。

可以通过针对任何给定恶性肿瘤的标准化反应标准确定在该恶性肿瘤中的阳性治疗反应。可以使用拍摄(screening)技术评估肿瘤反应以确定肿瘤在形态学(即，整体肿瘤负荷、肿瘤尺寸等等)上的变化，上述拍摄技术例如磁共振成像(MRI)扫描、x-射线成像、计算机断层(CT)扫描、骨扫描成像、内镜检查、和包括骨髓穿刺(BMA)和循环中对肿瘤细胞计数的肿瘤活组织检查采样。除了这些阳性治疗反应，采用CD19×CD3双特异性抗体进行治疗的患者可体验到与所述疾病相关的症状改善的有益效果。因而对于DLBCL，所述患者可感受到如本文所述的所谓B症状例如夜间盗汗、发热、消瘦和/或风疹的减少。

所述疾病的改善可表征为完全的反应。“完全的反应”意指采用先前规范化的任何异常成像研究例如射线研究表明，无临床上可检测的疾病。这种反应优选在根据本发明的治疗之后，持续至少4至8周，有时6至8周或超过8、10、12、14、16、18或20周或更长。或者，所述疾病的改善可分类为部分反应。“部分反应”意指，在无新损伤情况下，全部可测量肿瘤负荷(即，患者存在的恶性细胞数量，或测量的肿瘤块体积)至少约50％减少，并且持续4至8周或超过8、10、12、14、16、18或20周或更长。然而，“完全反应”并不一定指示DLBCL已治愈，因为患者可能会复发。然而，如果复发，患者可以再次采用如本文所述的包含CD19×CD3双特异性抗体的组合物治疗。对于NHL患者使用根据Cheson等人,1999,J.Clin.Oncol.Apr；17(4):1244的缓解和反应的详细定义。

在一些实施方案中，所述患者已有利地采用化学疗法例如CHOP或DHAP、实验化学疗法和/或化学免疫疗法例如R-CHOP、R-DHAP、R-ICE、R-VIPE、R-Treo/氟达拉滨(Flud)进行预治疗，或已经自体干细胞疗法(SCT)治疗。“预治疗过的”或“预治疗”意指所述患者在接受包含CD19×CD3双特异性抗体的组合物之前，已接受一种或多种其他DLBCL疗法(即，采用至少一种其他DLBCL疗法治疗)。“预治疗过的”或“预治疗”包括患者在开始采用包含CD19×CD3双特异性抗体的组合物治疗之前的2年内、18个月内、1年内、6个月内、2个月内、6周内、1个月内、4周内、3周内、2周内、1周内、6天内、5天内、4天内、3天内、2天内、或甚至1天内，已采用至少一种其他DLBCL疗法治疗。所述患者不一定对之前的DLBCL预治疗做出反应。因而，接受包含CD19×CD3双特异性抗体的组合物的患者可能对之前采用DLBCL疗法的预治疗或对之前DLBCL疗法中的一个或多个(其中预治疗包含多个DLBCL疗法)已做出反应，或者未做出反应(即DLBCL是难治的)。

此外，在其他实施方案中，所述患者在她/他经历SCT之前根据本发明的装置和方法进行治疗。

在一些实施方案中，所述患者对于化学疗法治疗或实验化学疗法治疗是难治的，和/或处于在采用化学疗法治疗或实验化学疗法治疗之后的复发中。

在一些前述实验方案中，所述患者抗标准的化学疗法或实验化学疗法治疗。

“患者”是将采用或正采用CD19×CD3双特异性抗体治疗的人个体(或受试者)。根据本发明，所述患者疑似/假定包含或已经包含恶性CD19阳性淋巴细胞(特别是B细胞)。在后一情况下，所述患者已经诊断为(优选地，如上文所述)包含此类细胞并因而为DLBCL患者。这些恶性CD19阳性淋巴细胞(特别是B细胞)存在于形成和/或患有DLBCL的患者中。根据本发明，因而患者需要恶性CD19阳性淋巴细胞的治疗。

“恶性”描述了促成逐步恶化的疾病、特别是DLBCL的淋巴细胞(特别是B细胞)。该术语在描述癌症(本文为DLCBL)时最为熟悉。恶性CD19阳性淋巴细胞(特别是B细胞)在其生长时无自我限制，能够侵袭入相邻组织中，并且能够扩散至远处的组织(转移)。当用于本文时，恶性与癌性同义。

然而，由于“正常”(非恶性)淋巴细胞(特别是B细胞)也表达CD19，因此预期CD19×CD3双特异性抗体也结合这些正常淋巴细胞(特别是B细胞)，并且经募集细胞毒性的T细胞(由于所述双特异性CD19×CD13抗体的第二特异性)耗竭这些正常B细胞。然而，预期这些正常B细胞群在无CD19×CD3双特异性抗体的情况下被重建。Leandro和同事在类风湿性关节炎患者中观察到，在它们被抗-CD20抗体耗竭之后B细胞被重建(ArthritisRheum.2006Feb；54(2):613-20)。如CD20，同样CD19在几乎全部B细胞上表达，可以预期B细胞同样在被双特异性CD19×CD3抗体耗竭后重建。

以其全部语法形式表示的术语“施用”表示作为单独的治疗剂或与另一种治疗剂组合的CD19×CD3双特异性抗体的施用(以药物组合物的形式)。因此，在本发明的上下文中，“CD19×CD3双特异性抗体的施用”或“施用CD19×CD3双特异性抗体”或其任何其他语法形式的表述意指CD19×CD3抗体为组合物的形式，优选药物组合物，其可选地包含药学上可接受的载体。因此，应理解的是，给人患者施用包含CD19×CD3双特异性抗体的组合物，优选药物组合物。当给患者施用时，优选给患者施用治疗有效剂量的包含CD19×CD3双特异性抗体的组合物。因此，本发明的组合物优选包含“治疗有效量”或“预防有效量”的CD19×CD3双特异性抗体。

类似地，还优选的是，所述包含CD19×CD3双特异性抗体的组合物具有抗肿瘤活性。“抗肿瘤活性”意指恶性CD19表达细胞增殖或累积的速率降低，因此现存的肿瘤或在治疗期间出现的肿瘤的生长速率降低，和/或现存的赘生性(肿瘤)细胞或新形成的赘生性细胞被破坏，因此治疗期间肿瘤的整体尺寸减小。采用至少一种CD19×CD3双特异性抗体的疗法引起针对疾病状态治疗有益的生理反应。

如本文使用的“肿瘤”指恶性CD19表达B细胞的所有赘生性细胞的生长和增殖，和产生DLBCL的所有癌前和癌性B细胞和组织。肿瘤导致肿瘤性块，特别是由DLBCL导致的淋巴结组织和/或结外淋巴瘤的肿瘤性块。如本文使用的“赘生性的”是指导致异常组织生长的任何形式的调节异常或未经调节的细胞生长。因而，“赘生性细胞”包括具有调节异常或未经调节的细胞生长的恶性B细胞。

术语“癌症”和“癌性”是指或描述患者的典型特征为未经调节的细胞生长的生理情况。在本发明的上下文中，所述癌症优选为DLBCL。

所述由DLBCL导致的淋巴结组织和/或结外淋巴瘤的肿瘤性块的优选特征在于，肿瘤的尺寸超过10×10mm、优选超过15×15mm，甚至更优选超过20×20mm或甚至更大。同样地，如果以三维测定，所述由DLBCL导致的淋巴结组织和/或结外淋巴瘤的肿瘤性块的优选特征在于，肿瘤的尺寸超过10×10×10mm，更优选超过15×15×15mm，甚至更优选超过20×20×20mm或甚至更大。

淋巴结组织优选包括淋巴结(包括淋巴结区和/或淋巴结构)和脾。淋巴结区可限定为淋巴结的区域和周围组织。实例包括颈中的颈部淋巴结、腋窝中的淋巴结、腹股沟中的腹股沟淋巴结、和/或胸部中的纵膈淋巴结。淋巴结构可限定为作淋巴系统的一部分的器官或结构，例如淋巴结、脾和胸腺。因此，在一些前述实验方案中，所述患者尤其具有至少一个、两个、三个、四个、五个或更多个扩大的淋巴结。

“结外淋巴瘤”：在常规分期程序之后，当不存在或仅存在“极少”淋巴结的转移以及存在通常必须采用主要治疗的临床上“主要”的结外组分时，淋巴瘤可以被认为是结外的。优选地，结外淋巴瘤包括中枢神经系统(CNS)、皮肤组织、乳腺、肺、肝、胃肠道、泌尿生殖道、眼组织、骨髓和/或骨。

优选地，在本文中药物组合物优选通过静脉内施用。其可以持续(连续)施用。持续施用是指基本上无间断的施用。“基本上无间断”包括通常不具有无间断的流或空间扩展的持续施用。

在优选实施方案中，在第一时间段施用第一剂量的所述(药物)组合物，且连续地，在第二时间段施用第二剂量的所述组合物，其中第二剂量超过第一剂量。

术语“超过”表示，第二时间段比第一时间段长至少一天。

必须理解的是，本文提供的剂量或天数的范围通过一、二、三、四或五的增量示例。然而，在增量超过一的情况下，这些范围还涵盖较小的增量，例如通过增量为一而例示的那些范围(10至30包括例如10、11、12、13、13等直至30)或通过更小的增量例如小数点之后的数值而例示的那些范围。

在本发明的另一个优选实施方案中，预见到所述第一时间段为至少3天长，由此不排除甚至更长的时间段，例如8、9、10、11、12、13或14天。“更长”由此不限于(一个)完整的天作为最小时间单位，即1/2天，或还可考虑完整的小时。然而优选的是，最小的时间单位为一个完整的天。

因此，所述第一时间段超过3天。更优选地，预见到所述第一时间段为3天至10天，7天为特别优选的。

如本文使用的，限定为“X至Y”的时间区间等同于限定为“X和Y之间”的时间区间。这两种时间区间具体都包括上限和下限。这意味着例如时间区间为“3至10天”或在“3至10天”之间包括1、2、3、4、5、6、7和/或8天的时间段。

鉴于例如人患者的年龄、性别、体重等，第一时间段的持续时间、第二时间段的持续时间可以是可变的。

因此，在本发明的另一个优选实施方案中，预见到所述第二时间段为至少18天长，由此不排除甚至更长的时间段，例如19、20、25、30、35、40、45、49、50、55、60、65、60、65、70、75、80、81、82、83、84、85、86、87、88或90天。“更长”由此不限于(一个)完整的天作为最小时间单位，即1/2天，或还可考虑完整的小时。然而优选的是，最小的时间单位为一个完整的天。

因此，所述第二时间段超过18天。更优选地，预见到所述第二时间段为18天至81天，21或49天为特别优选的。

如本文使用的，限定为“X至Y”的时间区间等同于限定为“X和Y之间”的时间区间。这两种时间区间具体都包括上限和下限。这意味着例如时间区间为“18至81天”或在“18至81天”之间包括1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60、61、62、63和/或64天的时间段。

在本发明的更优选的实施方案中，所述第一时间段为3天至10天，所述第二时间段为18至81天。

在甚至更优选的实施方案中，所述第一时间段为7天，所述第二时间段为21或49天。

因此，在本发明的方法/剂量方案的其他优选实施方案中，所述第一剂量为1至15μg/m²/d，即1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15μg/m²/d。特别优选的是5或15μg/m²/d的剂量。

如本文使用的，限定为“X和Y之间”的剂量区间等同于限定为“X至Y”的剂量区间。这两种剂量区间具体都包括上限和下限。这意味着例如剂量区间为“在1和15之间”或“1至15”包括1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15μg/m²/d。

在其他优选实施方案中，本发明涵盖所述抗体的不变剂量的连续施用，而不增加至之后的更高剂量。例如，本施用包括施用60μg/m²/24h、15μg/m²/24h或5μg/m²/24h的CD19×CD3双特异性单链抗体，直到治疗过程结束，所述治疗过程持续长达8周[56天]，如果确定安全、有效，甚至可以更长。“d”表示一天。

“m²”表示患者体表的平方米(BSA)。成人的“正常”平均BSA通常约1.73m²，新生儿为约0.25m²，2岁儿童为约0.5m²，9岁儿童为约1.07m²，10岁儿童为约1.14m²，12-13岁儿童为约1.33m²，男性为约1.9m²，女性为约1.6m²。然而，还可以通过下述公式中的一个更精确地计算BSA(这些公式中的每一个均可在计算BSA时应用)：

——Mosteller公式(Mosteller,N Engl J Med 1987Oct 22；317(17):1098)：

BSA(m²)＝([高度(cm)×重量(kg)]/3600)^1/2或以英寸和磅计：

BSA(m²)＝([高度(in)×重量(lbs)]/3131)^1/2

——DuBois公式(DuBois,Arch Int Med 191617:863-871)：

BSA(m²)＝0.007184x高度(cm)^0.725×重量(kg)^0.425

——Haycock公式(Haycock,The Journal of Pediatrics 1978 93:1:62-66)：

BSA(m²)＝0.024265×高度(cm)^0.3964×重量(kg)^0.5378

——Gehan公式(Gehan,Cancer Chemother Rep 197054:225-35)：

BSA(m²)＝0.0235x高度(cm)^0.42246×重量(kg)^0.51456

——Boyd公式(Boyd,University of Minnesota Press,1935)

BSA(m²)＝0.0003207×高度(cm)^0.3×重量(克)^{(0.7285-(0.0188×log10(克)}

通常优选的是本文公开的每一个剂量均可通过将相应的剂量乘以因子1.9而从(μg)/m²/d的量转化成μg/d。因此，本文公开的每一个剂量均可通过将其乘以因子1.9而应用于所述方法和用途。例如，5μg/m²/d的剂量转化成9.5μg/d，15μg/m²的剂量转化成28.5μg/m²/，60μg/m²/的剂量转化成114μg/m²。优选的是将相乘得到的十进制数分别向上或向下取整以得到整数。例如，9.5μg/d的剂量可以向下取整为9μg/d，28.5μg/m²的剂量可以向下取整为28μg/d。同样地，9.5μg/d的剂量可以向上取整为10μg/d，28.5μg/m²的剂量可以向上取整为29μg/d。

术语“μg”包括“μg的CD19×CD3双特异性抗体制备物”。优选的是，不超过10％的所述CD19×CD3双特异性抗体制备物不能正确折叠。而在优选实施方案中，90％、91％、92％、93％、94％或甚至95％的CD19×CD3双特异性抗体正确折叠，参见，例如，WO 2005/052004。还可想到，所述抗体制备物还可以可选地包含其他成分，例如冻干保护剂(lyoprotectant)、表面活性剂、填料、粘结剂和/或填充剂(bulking agent)等。这种其他成分的量优选不包括在本发明的“剂量”和/或方法(剂量方案)的上下文中使用的术语“μg”中。

例如1μg/m²/d的剂量表示针对相应患者的每平方米体表，在全天均一或连续地施用1μg的所述CD19×CD3双特异性抗体。“在全天连续地”是指允许持续无间断进行的输注。

优选的实施方案是，所述第二剂量为15至60μg/m²/d，即15、20、25、30、35、40、45、50、55和60μg/m²/d。特别优选的是60μg/m²/d的剂量。所述第二剂量因而是有治疗活性的。在优选实施方案中，所述第一剂量为5至15μg/m²/d，所述第二剂量为15至60μg/m²/d。

如本文使用的，限定为“X和Y之间”的剂量区间等同于限定为“X至Y”的剂量区间。这两种剂量区间具体都包括上限和下限。这意味着例如剂量区间为“在15和60之间”或“15至60”包括15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59和/或60μg/m²/d的剂量。

必须理解的是，本文提供的范围通过五的增量示例。然而，这些范围还涵盖较小的增量，例如通过增量为一而例示的那些范围(10至30包括例如10、11、12、13、13等直至30)或更小的增量例如小数点之后的数值而例示的那些范围。

优选地，不包括在应用CD19×CD3双特异性抗体的本发明的用途和方法中的是下述施用方案：

(i)一天施用5μg/m²的所述双特异性抗体，然后在剩余时间段(第二天和其他每一连续天)作为每日剂量施用15μg/m²；和/或

(ii)一天施用15μg/m²的所述双特异性抗体，然后在剩余时间段(第二天和其他每一连续天)作为每日剂量施用45μg/m²；和/或

(iii)一天施用5μg/m²的所述双特异性抗体，然后一天施用15μg/m²，之后在剩余时间段(第三天和其他每一连续天)作为每日剂量施用45μg/m²；和/或

(iv)一天施用少于10-80μg/m²的所述双特异性抗体，然后(第二天和其他每一连续天)施用10-80μg/m²的剂量；和/或

(v)一天施用少于10-80μg/m²的所述双特异性抗体，然后一天施用少于10-80μg/m²的剂量，之后(第三天和其他每一连续天)施用少于10-80μg/m²的剂量。

在本申请的另一个优选实施方案中，在第一和第二时间段施用第一和第二剂量之后，在第三时间段施用第三剂量的所述抗体。因此，本发明提供了应用于本文所述的用途和方法的三阶段(三步骤)施用方案(剂量方案)。

所述第三剂量优选静脉内施用。有利地，其可以连续施用。

在本发明的优选实施方案中，所述第三时间段超过所述第一和第二时间段。术语“超过”表示第三时间段比第一和第二时间段长至少一天。同样地，鉴于例如人患者的年龄、性别、体重等，第一和第二时间段的持续时间、第三时间段的持续时间可以是可变的。

在本发明的三阶段施用方案中，预见到所述第一时间段为至少3天长，由此不排除甚至更长的时间段，例如8、9、10、11、12、13或14天。“更长”由此不限于(一个)完整的天作为最小时间单位，即1/2天，或还可考虑完整的小时。然而优选的是，最小的时间单位为一个完整的天。因此，所述第一时间段超过3天。更优选地，预见到所述第一时间段为3天至10天，7天为特别优选的。

在本发明的三阶段施用方案中，预见到所述第二时间段为至少3天长，由此不排除甚至更长的时间段，例如8、9、10、11、12、13或14天。“更长”由此不限于(一个)完整的天作为最小时间单位，即1/2天，或还可考虑完整的小时。然而优选的是，最小的时间单位为一个完整的天。因此，所述第一时间段超过3天。更优选地，预见到所述第一时间段为3天至10天，7天为特别优选的。

在本发明的三阶段施用方案中，预见到所述第三时间段为至少8天长，由此不排除甚至更长的时间段，例如8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70和/或71天。“更长”由此不限于(一个)完整的天作为最小时间单位，即1/2天，或还可考虑完整的小时。然而优选的是，最小的时间单位为一个完整的天。因此，所述第一时间段超过8天。更优选地，预见到所述第一时间段为8天至78天，14或42天为特别优选的。

如本文使用的，限定为“X至Y”的时间区间等同于限定为“X和Y之间”的时间区间。这两种时间区间具体都包括上限和下限。这意味着例如时间区间为“18至78天”或在“18至78天”之间包括1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60、61、6263、64、65、66、67、68、69、70和/或71天的时间段。

在本发明的三阶段施用方案的更优选实施方案中，所述第一时间段为3天至10天，所述第二时间段为3天至10天，所述第三时间段为8天至78天。

在甚至更优选实施方案中，所述第一时间段为7天，所述第二时间段为7天，所述第三时间段为14或42天。

在本发明的三阶段施用方案的优选实施方案中，所述第三剂量超过所述第一和第二剂量。所述第二和第三剂量优选是有治疗活性的。值得注意的是，所述第二剂量超过所述第一剂量。

因此，在本发明的三阶段施用方案的其他优选实施方案中，所述第一剂量为1至15μg/m²/d，优选5至15μg/m²/d，即1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15μg/m²/d。特别优选的是5或10μg/m²/d。

在本发明的三阶段施用方案的其他优选实施方案中，所述第二剂量为1至15μg/m²/d，优选5至15μg/m²/d，即1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15μg/m²/d。特别优选的是15μg/m²/d。

如本文使用的，限定为“X和Y之间”的剂量区间等同于限定为“X至Y”的剂量区间。这两种剂量区间具体都包括上限和下限。这意味着例如剂量区间为“在1和15之间”或“1至15”包括1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15μg/m²/d的剂量。

在本发明的三阶段施用方案的其他优选实施方案中，所述第三剂量为15至120μg/m²/d，更优选15至90μg/m²/d，即15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85和90μg/m²/d，甚至更优选所述第三剂量为15至60μg/m²/d，甚至还更优选20至60μg/m²/d，即15、20、25、30、35、40、45、50、55和60μg/m²/d。特别优选的是60μg/m²/d或90μg/m²/d的剂量。

在本发明的三阶段施用方案的优选实施方案中，所述第一剂量为1至15μg/m²/d，所述第二剂量为1至15μg/m²/d，所述第三剂量为15至60μg/m²/d或15至90μg/m²/d或15至120μg/m²/d。特别优选的，所述第一剂量为5μg/m²/d，所述第二剂量为15μg/m²/d，所述第三剂量为60或90μg/m²/d。

如本文使用的，限定为“X和Y之间”的剂量区间等同于限定为“X至Y”的剂量区间。这两种剂量区间具体都包括上限和下限。这意味着例如剂量区间为“在15和60之间”或“15至60”包括15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59和/或60μg/m²/d的剂量。类似地，这意味着例如剂量区间为“在15和90之间”或“15至90”包括15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、86、87、88、89或90μg/m²/d的剂量。

在优选实施方案中，地塞米松与所述CD19×CD3双特异性抗体一起施用。具体而言，这一施用包括在施用第一剂量的CD19×CD3双特异性单链抗体之前采用地塞米松的一个或多个预治疗步骤。在三阶段施用方案中，在第一剂量之前和在增加至第二和/或第三剂量的CD19×CD3双特异性单链抗体之前，施用地塞米松。此外，可选地在第一剂量之后和在每个顺序剂量增加之后的另1或2天施用地塞米松。如上所述，观察到地塞米松治疗减少或缓解(不良)神经学作用/反应，例如混乱、共济失调、定向障碍、言语障碍(dysphasia)、失语、语言障碍(speech impairment)、小脑症状、震颤、失用、癫痫、癫痫大发作抽搐(grandmal convulsion)、瘫痪和/或平衡障碍。

更具体地，在三阶段施用方案中，在施用第一剂量的CD19×CD3双特异性抗体之前6至48小时，更优选在第一剂量施用之前6至12小时、更优选在第一剂量施用之前12小时，施用地塞米松。然后在施用第一剂量的抗体之前大约1小时(范围15min-2h，包括30min、45min、60min、75min、90min)，再次给所述患者施用一定剂量的地塞米松。然后，在第一剂量的抗体之后1天或更多天、优选2至3天，优选在第一抗体施用之后的两天和在每次剂量增加之后的2天或更多天、优选在施用剂量增加的抗体之后的2天，施用地塞米松。每次地塞米松的剂量优选为6至40mg，优选为约20或24mg/剂。

6至48小时的时间范围包括地塞米松剂量的施用，并且表示在第一次施用抗体之前的时间为6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47和48小时。类似地，6至12小时的优选时间范围包括在第一次施用抗体之前的地塞米松剂量的施用，并且包括6、7、8、9、10、11和12小时。

在其他实施方案中，在两、三、四或五天的时间段施用地塞米松，在此期间增加所述CD19×CD3双特异性抗体的剂量。例如，在剂量为6至40mg或6至48mg、优选20、24、28、32、36、40、44或48mg(20或24mg是优选的)的第一时间点，在剂量优选为8、12、16、20或24mg(16mg是优选的)的第二时间点和/或在剂量优选为2、4、6、8、10或12mg(8mg是优选的)的第三时间点，施用地塞米松。还可以在剂量优选为2、4、6、8、10或12mg(8mg是优选的)的第四时间点或第四和第五时间点，施用地塞米松。

在其他实施方案中，如本文所述，当在第一和第二时间段之间或在第二和第三时间段之间分别增加CD19×CD3双特异性抗体的剂量期间施用地塞米松时，其在第n-3、n-2、n-1、n、n+1、n+2和/或n+3天施用，其中n分别为第一或第二时间段的最后一天，并且其中在第n-3至第n+3天期间的最大天数为3、4或5天，3或4天是优选的。例如，可以在第n-3至第n+1天期间、即5天，或者在第n-3至第n天期间、即4天，或者在第n-2至第n+1天期间、即4天，或者在第n-1至第n+1天期间、即3天，施用地塞米松。

因此，如果施用地塞米松3、4或5天，预见到优选应用上述施用方案：

——在剂量优选为20、24、28、32、36、40、44或48μg(24μg是优选的)的第一时间点(可以施用相同剂量，但是以mg而非μg计)，

——在剂量优选为8、12、16、20或24μg(16μg是优选的)的第二时间点(可以施用相同剂量，但是以mg而非μg计)，

——在剂量优选为2、4、6、8、10或12μg(8μg是优选的)的第三时间点(可以施用相同剂量，但是以mg而非μg计)，

——在剂量优选为2、4、6、8、10或12μg(8μg是优选的)的第四时间点(可以施用相同剂量，但是以mg而非μg计)，和/或

——在剂量优选为2、4、6、8、10或12μg(8μg是优选的)的第五时间点(可以施用相同剂量，但是以mg而非μg计)。

或者，地塞米松的剂量在每次施用时可以是相同的[6-40mg]，优选20或24mg/剂。

还优选预见到，在施用CD19×CD3双特异性抗体时如观察到神经学作用，则在所述第一、第二和/或第三时间段期间的任何天施用地塞米松。

本发明的可替代实施方案是施用不变或恒定剂量的抗体，而不增加至如上所述的之后的更高剂量。例如，本施用包括施用5μg/m²/24h、15μg/m²/24h或60μg/m²/24h的CD19×CD3双特异性单链抗体，直到治疗过程结束，所述治疗过程持续长达8周[56天]，如果确定安全、有效，甚至可以更长。在本实施方案中，在施用第一剂量的抗体之前6至48小时、优选6至12小时、更优选6或12小时，并且在不晚于1小时(15min-2h，包括30min、45min、60min、75min、90min)再次地，施用地塞米松。优选地，在施用所述抗体之后并且如果观察到神经学作用，在1天或更多天、优选2-3天施用地塞米松。

尽管已知地塞米松降低包括T-细胞(CD4⁺和CD8⁺T-细胞)的免疫细胞的活性，因为它是已知的免疫抑制剂，因而预期CD19×CD3双特异性抗体可能不结合有效的(活性)T-细胞，但是本发明人观察到相反情况。实际上，被CD19×CD3双特异性抗体结合的T-细胞是明显有效的，因为在DLBCL患者的临床试验中观察到肿瘤块的显著减小(参见所附实施例)。

在另一方面，本发明涉及一种药物试剂盒，其用于治疗患者的由弥漫大B细胞性淋巴瘤(DLBCL)导致的淋巴结组织和/或结外淋巴瘤的肿瘤块，所述药物试剂盒包括前述权利要求中任一个所述的组合物和可选的说明手段(说明书)。

在又一方面，本发明涉及一种(药物)试剂盒或药物包，其包括如本文所述的第一剂量和第二剂量。

在另一方面，本发明涉及一种(药物)试剂盒或药物包，其包括如本文所述的第一剂量和第二剂量以及如在三阶段剂量方案/方法的上下文中所限定的第三剂量。

在又一方面，所述(药物)试剂盒或药物包包括如在三阶段剂量方案/方法的上下文中所限定的全部三个剂量，即所述第一、第二和第三剂量。

所述第一、第二和第三剂量由此一起包装在一个密封的药物包或试剂盒中。应理解的是，在此方面，“第一剂量”、“第二剂量”和“第三剂量”涵盖在给定时间段(第一或第二时间段)所使用的相应的单剂数量。这例如意味着，本发明的药物包或试剂盒中包括的“第一剂量”或“第二剂量”包含例如7个分开的日剂量。包装的日剂量数由此反映了预期的时间段(如果所述时间段为X天则含X个日剂量，如果时间段为Y天则含Y个日剂量等等)。在这些实施方案中，(药物)试剂盒或药物包在单个包装中包括在分开的容器中的日剂量。

或者，还预见到，预期的第一剂量和/或第二剂量和/或第三剂量没有分成各自的日剂量数，而是全部或部分地被包含在一个单独容器中(例如在一个输注包中)，其包含第一和/或第二时间段的部分(例如1至3天)所需的剂量或全部(即第一或第二时间段)所需的剂量。这意味着，一个单独容器包含例如“第一剂量”(要在第一时间段期间使用)的7个日剂量等。

应理解的是，本发明的(药物)试剂盒或药物包还可以或多或少包括各时间段所需的日剂量(不论是否分开)。或者，(药物)试剂盒或药物包被制备成使其包括本文所限定的第一和第二时间段所需的日剂量数(不论是否分开)，即“第一剂量”、“第二剂量”和“第三剂量”在一个单独包装中。这样的包装在理想情况下足够患者的一个完整治疗(包括第一和第二时间段)。本发明的试剂盒及包的部分可单独包装于小瓶或瓶子里，或者组合包装于容器或多容器装置中。试剂盒的生产优选遵循本领域技术人员已知的标准程序。

在另一方面，本发明涉及如上文所述的药物包或试剂盒和其根据本发明方法顺序使用的书面说明。所述药物包或试剂盒还可以包括标签或印迹，以用于指示内含物可用于治疗人患者的淋巴瘤或白血病中存在的恶性CD19阳性淋巴细胞；或用于缓解或预防由给患者施用CD19×CD3双特异性抗体而介导的不良作用。

还预见到，本发明的药物包或试剂盒还包括用于给患者施用第一和/或第二剂量和/或第三剂量的工具，和/或通常用于输注治疗剂的缓冲剂、小瓶、特氟龙袋或输注袋。“工具”由此包括由选自注射器、皮下注射针头、套管、导管、用于静脉内施用的输注袋、静脉内注射工具(intravenous vehicle)、小瓶、缓冲剂、稳定剂、有助于技术人员准备本发明的相应剂量和输注液的书面说明组成的组中的一种或多种。

还预见到，本发明的药物包或试剂盒还包括化学治疗剂。

在另一方面，本发明提供了一种药物包或试剂盒，其中所述第一和/或第二剂量设置为使其适用于(被制备用于)施用根据前述权利要求中任一项的方法的剂量方案。

实施例

现在仅通过实施例的方式更详细地描述本发明的各个方面和实施方案。可以理解，在不偏离本发明的范围的情况下，可以进行细节的改变。值得注意的是，所有患者均宣称同意参与临床试验。

缩写

根据Cheson等人,(2007),J.Clin.Oncol.25(5):579-586进行患者的分期

CR：完全缓解

CRu：完全缓解(未确定)

DLT：剂量限制性毒性

EOS：研究结束

LDH：乳酸脱氢酶

PD：进行性疾病

PR：部分缓解

SAE：严重副作用

SCT：干细胞疗法

SD：稳定的疾病

SPD：直径和

实施例1

患者109-033

●女性，42岁，DLBCL，具有腹部的块

●期：IVBE

●B:T细胞比率：0:141(低)

●之前治疗：

1.6×R-CHOP 05/09-08/09

2.2×R-DHAP 10/09-11/09

3.l×R-ICE 12/09

●之前治疗的日期：12/09

●治疗开始的日期：8.3.2010

●主要涉及：

腹部的块12×10×11cm

●4月7日CT：具有腹部的块的肿瘤发展

—从12×10×11cm增加至16×15×12cm

—脾和右肾极的额外浸润，同时LDH上升

→治疗停止

●治疗持续时间：29+3d

●完成60μg/m²/d，无神经学不良事件

●SAE：淋巴球减少症

●DLT：无

实施例2

患者153-001

●男性，47岁，DLBCL

●期：IVA

●B:T细胞比率：0:524(低)

●第一次诊断：09/2009

●之前治疗：

1.6×R-CHOP

2.2×R-VIPE

3.腹部块切除手术之后的状态

●最后一次之前治疗的日期：09/09-12/09

●治疗开始：29.3.2010

●主要涉及：

小损害2.3×1.7cm，膀胱区

●无神经学不良事件。

●4周之后CT：边界线SD

●6周之后CT(另外的)：相比于4周之后CT，有显著减小。

●8周之后CT：具有SPD-64,9的PR

●DLT：无

●12.7.2010重新开始治疗

●低BT：0:291

●计划CT：8月11日

实施例3

患者109-034

●男性，40岁，DLBCL

●II NE期

●B:T细胞比率：0:501(低)

●第一次诊断：06/07

●之前治疗：

1.8×R-CHOEP 06-10/07

2.2×DHAP 05-06/09

3.1×R-ICE 07/09

4.R-Treo/氟达拉滨(Flud)08/09

5.自体SCT 09/09

●最后一次之前治疗的日期：09/09

●治疗开始：19.4.2010

●主要涉及：

腹部：5.1×2.2cm和4.8×2.2cm

●治疗开始：19.4。

●无神经学不良事件

●SAE：嗜中性白血球减少症

●4周之后CT：SD/PD？(31.1％的SPD增加)

→仍有待于被参照放射线学者确认

→有争议的胃涉入；待确认

●由于临床有益效果持续治疗

●8周之后CT：PD+43.4％

●DLT：无

实施例4

患者109-035(3位中的1位)

●女性，67岁，DLBCL

●IIB期

●B:T细胞比率：0:1808

●第一次诊断：09/06

●之前治疗：

1.6×R-CHOP 09/06-04/07

+2×利妥昔单抗作为巩固

2.2×R-DHAP 01/09-08/09

3.Zevalin BEAM 10/09

4.自体SCT 11/09

●最后一次治疗的日期：11/09

●治疗开始：26.04.2010

●主要涉及：

1.右乳房

2.左腹股沟

3.左小腿

●在d2级，2个CNS事件(CTCAE 2级)

-主要是失用，仅有轻度的语言障碍。

→治疗停止

●停止之后12h，神经学症状完全去除

-MRT不明显，无法进行CSF的FACS分析

-尽量在固定的CSF样品上染CD19，未成功

●患者接受CSF预防

→在CSF中活的B细胞，不太可能引起并发症

●患者同时接受其他治疗

●效用：N/A

●DLT：无

实施例5

患者135-001(3位中的1位)

●男性，52岁，DLBCL

●期：IVA

●B:T细胞比率：0:565(低)

●第一次诊断：1986作为FL

→转变(transformation)第一次诊断DLBCL 01/2008

●之前治疗：

1.R-BEAM(BCNU，依托泊甙，AraC和美法仑，降低至75％)

2.自体SCT 10/09

●最后一次之前治疗的日期：10/09

●治疗开始：10.5.2010

●主要涉及：

横膈膜下(infradiaphragmal)

●在5μg震颤和失用(书写困难)，其在类固醇疗法下消除。

●在5月17日增加至15μg，在5月24日增加至60μg

→无CNS并发症

●4天之后增加(20:00时(hrs))至60μg

-具有失语和定向障碍的CNS并发症

-治疗停止(星期四晚上)

-事件在24小时内完全消除，在EEG和MRT无发现；患者在星期六出院

-在星期六下午：假性幻觉(“见面部”)

●假性幻觉在6月2日开始改善

●6月9日：完全消除(第12天发生)

●CT：PR？

●DLT：是

●EOS：28.6.10

实施例6

患者109-038(3位中的1位)

●女性，65岁，DLBCL

●初始阶段：IE

●B:T细胞比率：高：576:863

●第一次诊断：1997

●之前治疗：

1.6×CHOP

2.2×R-DHAP

3.1×R-Dexa-Beam

4.高剂量Beam与自体SCT

●最后一次之前治疗的日期：09/05

●治疗开始：7.6.2010

●主要涉及：

1.右乳房

2.右腋窝，左锁骨上

3.腹膜后和腹部

●6月7日开始治疗

-在5μg无神经学不良事件

●6月14日剂量增加至15μg

-无神经学不良事件

●6月21日剂量增加至60μg

-在类固醇治疗下消除轻度神经学事件

●DLT：无

●4周CT：CRu

●持续Tm，计划8月4日8周CT

●4周CT：-左锁骨上：20×13mm→12×10mm

17×13mm→11×7mm

11×11mm→9×7mm

-腹膜后：38×l9mm→20×9mm

-主动旁脉(paraaortal)：40×24mm→20×1lmm

63×47mm→45×26mm

48×45mm→未清楚鉴定

实施例7

采用5/15/60μg/m²/24h治疗的DLBCL患者总结

实施例8

MT103(CD19×CD3双特异性抗体)-地塞米松

治疗剂地塞米松(Dex)是有益的(神经学症状消失，无需停止治疗)：

●109-038高风险患者在第15天患有DLBCL(在60μg)；抵抗意向震颤

●Dex预防对患有DLBCL的低风险患者135-002起效，其在第2周仅具有轻微震颤。

实施例9

DLBCL患者135-001接受5μg/m²/d的抗体一周，在第2周接受15μg/m²/d的抗体，再接受60μg/m²/d的抗体4天。患者在5μg/m²/d的第3天(3×8mg)接受地塞米松，以便治疗震颤，然后以减少的剂量继续接受地塞米松少于一周。在增加至15μg之后无神经学事件，这可以通过地塞米松的预防作用解释。然而，在进入60μg/m²/d之后的第4天，所述患者由于神经学不良事件发生得过快以至于干扰地塞米松而不得不停止。

实施例10

DLBCL患者109-038接受5μg/m²/d的抗体一周，在第2周接受15μg/m²/d的抗体，在治疗的剩余6周接受60μg/m²/d的抗体。所述患者在第15天形成意向震颤，该意向震颤在施用地塞米松(静脉内3×8mg。同时继续抗体治疗)之后消除。

实施例11

DLBCL患者135-002接受5μg/m²/d的抗体一周，在第2周接受15μg/m²/d的抗体，在剩余2周接受60μg/m²/d的抗体，此外接受地塞米松预防治疗(在抗体治疗开始当天和在剂量增加步骤的天，剂量：3×8mg)。所述患者由于神经学/精神不良事件而并不必要停止采用抗体的治疗。

实施例12

在患有各种B-NHL包括DLBCL的患者中进行I期临床试验，以在DLBCL患者中评估所述CD19×CD3双特异性抗体构建体。通过连续静脉内施用所述抗体以及下述逐步给药方案：第一周5μg/m²/d、第二周15μg/m²/d、剩余治疗时间60μg/m²/d，而治疗患者。召集了各具有6位DLBCL患者的两组患者。所述两组患者的唯一区别在于糖皮质激素药物施用的剂量和方案，所述糖皮质激素药物在抗体输注开始时施用以缓解不良事件。12位患者中，5位为男性，7位为女性。中值年龄为57岁(范围为24至78岁)。患者已接受4个之前方案(范围为2-6)的中值。所有患者均暴露于利妥昔单抗。12位患者中有8位进行ASCT。在筛选(screening)时国际预后指数(IPI)为1至3，中值为2。在第一组中，在开始之前1小时施用100mg泼尼松龙；而在第二组中，患者在第1、2和3天接受地塞米松(3×8mg)。在治疗开始之前，在第二组中，在施用CD19×CD3双特异性抗体构建体之前的12小时和1小时施用20mg地塞米松。尽管在泼尼松龙DLBCL组中仅发生1例DLT(可逆CNS事件，3级)，因而所述组被认为是安全的，但开放应用预防性地塞米松的另一DLBCL组(在输注开始或剂量增加时施用3×8mg，然后分别在之后的2天减少至3×6mg或3×4mg)，以优化CNS事件的管理。鉴于前两位患者中有一位由于可逆CNS不良事件而具有DLT，引入修改的“早期地塞米松”方案(在输注开始或剂量增加时，在-12至-6小时和-1小时为20mg，然后在之后的2天期间为3×8mg)，以试验较早和更强化的施用地塞米松是否可以减轻CNS不良事件。在进行这种地塞米松方案的调节之后，没有再观察到DLT。因而，地塞米松组以及“早期地塞米松施用”均被认为是安全的。在总共5位采用“早期地塞米松方案”治疗的DLBCL患者中，没有观察到DLT。因此，可以得出结论，即另外施用“早期地塞米松”是给DLBCL患者施用blinatumomab的最安全的方式。对于采用“早期地塞米松”的患者，已观察到客观疗效。

Claims

1.一种包含CD19×CD3双特异性抗体的组合物在制备用于治疗患者的由弥漫大B细胞性淋巴瘤(DLBCL)导致的淋巴结组织和/或结外淋巴瘤的肿瘤性块的药物中的用途，所述患者对于化学疗法治疗或实验化学疗法是难治的，和/或处于在采用化学疗法治疗或实验化学疗法治疗之后的复发中。

2.根据权利要求1所述的用途，其中所述肿瘤性块以尺寸超过10×10mm的肿瘤为特征。

3.根据权利要求1或2所述的用途，其中所述淋巴结组织包括淋巴结和/或脾。

4.根据权利要求1或2所述的用途，其中所述结外淋巴瘤包括中枢神经系统(CNS)、皮肤组织、乳腺、肺、肝、胃肠道、泌尿生殖道、眼组织、骨髓和/或骨。

5.根据权利要求1或2所述的用途，其中在第一时间段施用第一剂量的所述组合物，且连续地，在第二时间段施用第二剂量的所述组合物，其中所述第二剂量超过所述第一剂量。

6.根据权利要求5所述的用途，其中所述第一剂量为1μg/m²/d至15μg/m²/d。

7.根据权利要求5所述的用途，其中所述第二剂量为15μg/m²/d至60μg/m²/d。

8.根据权利要求5所述的用途，其还包括在第一和第二时间段的第一和第二剂量之后，在第三时间段施用第三剂量的所述组合物。

9.根据权利要求8所述的用途，其中所述第三时间段超过所述第一和第二时间段，由此所述第二剂量超过所述第一剂量。

10.根据权利要求8或9所述的用途，其中所述第三剂量超过所述第一和第二剂量。

11.根据权利要求8所述的用途，其中所述第一剂量为1μg/m²/d至15μg/m²/d。

12.根据权利要求11所述的用途，其中所述第一剂量为5μg/m²/d。

13.根据权利要求8所述的用途，其中所述第二剂量为15μg/m²/d至60μg/m²/d。

14.根据权利要求13所述的用途，其中所述第二剂量为15μg/m²/d。

15.根据权利要求8所述的用途，其中所述第三剂量为15μg/m²/d至60μg/m²/d。

16.根据权利要求15所述的用途，其中所述第三剂量为60μg/m²/d。

17.根据权利要求1或2所述的用途，其中在治疗期间，所述抗体以选自下述剂量组成的组中的恒定剂量给药：5μg/m²/d、15μg/m²/d或60μg/m²/d。

18.根据权利要求17所述的用途，其中所述恒定剂量为60μg/m²/d。