CN105237619A

CN105237619A - 咪唑并吡啶-6-甲酰-Met-Ser-OBzl，其合成，活性和应用

Info

Publication number: CN105237619A
Application number: CN201410327789.1A
Authority: CN
Inventors: 赵明; 彭师奇; 吴建辉; 王玉记; 张薪; 赵欣尉; 吕希佳
Original assignee: Capital Medical University
Current assignee: Capital Medical University
Priority date: 2014-07-10
Filing date: 2014-07-10
Publication date: 2016-01-13

Abstract

本发明公开了下式的3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-6-甲酰-Met-Ser-OBzl。公开了它的制备方法、公开了它的抗血栓活性及应用。

Description

咪唑并吡啶-6-甲酰-Met-Ser-OBzl，其合成，活性和应用

发明领域

本发明涉及3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-6-甲酰-Met-Ser-OBzl，涉及它们的制备方法，进一步涉及它们对SD大鼠的抗血栓活性，因而本发明涉及它们作为抗血栓药物的应用。本发明属于生物医药领域。

背景技术

血栓性疾病是一种严重威胁人类健康的心脑血管疾病，每年均会有3‰的人发生不同程度的血栓性疾病，其发病率及致死率均较高。

目前临床上治疗血栓性疾病的药物主要分为抗血小板药物、溶栓药物及抗凝血药物三类。从防治角度来看，抗栓药物更能针对疾病本身，减轻临床治疗压力，从而得到广泛应用。但由于传统的抗血栓药物的安全性及依从性都有待优化，研究疗效更高且毒副作用更低的新型药物已成为抗栓药物研究的热点。从天然产物中发现咪唑并吡啶类衍生物具有广泛的生物学活性，以此作为先导结构对其进行结构优化，以期得到疗效更好安全性更高的抗栓药物。

发明人曾经公开下式代表的3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-6-甲酰-AA-OBzl(其中AA代表甘氨基酸或其它L-氨基酸残基)在1μmol/kg剂量下显示良好的抗肿瘤活性。通过进一步研究发明人认识到，将Met-Ser-OBzl代替3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-6-甲酰-AA-OBzl中的AA-OBzl，可以使抗肿瘤活性化合物转变为抗血栓活性化合物。根据这些认识，发明人提出了本发明。

发明内容

本发明的第一个内容是提供3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-6-甲酰-Met-Ser-OBzl。

本发明的第二个内容是提供3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-6-甲酰-Met-Ser-OBzl的合成方法，该方法包括：

(1)L-组氨酸在稀硫酸催化下与甲醛进行Pictet-Spengler缩合生成6S-4，5，6，7-四氢-3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-6-羧酸；

(2)6S-4，5，6，7-四氢-3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-6-羧酸转化为6S-4，5，6，7-四氢-3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-6-甲酸甲酯；

(3)6S-4，5，6，7-四氢-3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-6-甲酯用高锰酸钾氧化为3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-6-甲酸甲酯；

(4)3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-6-甲酸甲酯在NaOH溶液(2N)中皂化成3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-6-甲酸；

(5)Boc-Met-OH与丝氨酸苄酯偶联得到Boc-Met-Ser-OBzl；

(6)Boc-Met-Ser-OBzl在4N氯化氢的乙酸乙酯溶液中得到H-Met-Ser-OBzl；

(7)3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-6-甲酸与L-Met-Ser-OBzl偶联得到3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-6-甲酰-Met-Ser-OBzl。

本发明的第三个内容是评价3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-6-甲酰-Met-Ser-OBzl对SD大鼠的抗血栓作用。

本发明的第四个内容是评价3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-6-甲酰-Met-Ser-OBzl在制备抗血栓药物中的应用。

附图说明

图1.3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-6-甲酰-Met-Ser-OBzl的合成路线.i)HCHO，H₂O，H₂SO₄，65℃；ii)MeOH，SOCl₂，0℃；iii)DMF，三乙胺，KMnO₄；iv)NaOH，H₂O，0℃；v)二环己基碳二亚胺(DCC)，1-羟基苯并三唑(HOBt)，N-甲基吗啉(NMM)，四氢呋喃(THF)；vi)4N氯化氢的乙酸乙酯溶液，0℃；vii)二环己基碳二亚胺(DCC)，1-羟基苯并三唑(HOBt)，N-甲基吗啉(NMM)，DMF。

具体实施方式

为了进一步阐述本发明，下面给出一系列实施例。这些实施例完全是例证性的，它们仅用来对本发明进行具体描述，不应当理解为对本发明的限制。

实施例1化合物6S-4，5，6，7-四氢-3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-6-羧酸(1)的制备

10.00g(64.5mmol)L-组氨酸，30mL水混合于100mL茄瓶中，冰浴下，用恒压漏斗逐滴加入2mL浓硫酸，随浓硫酸的加入，原料逐渐溶解，待其完全溶解后，向反应液中加入40％的甲醛溶液10mL，在微波加速反应仪65℃下反应5小时。反应完毕后，冰浴下缓慢滴加浓氨水调溶液pH＝6-7，有大量白色沉淀析出，减压过滤，得到无色固体10.76g(99.2％)。ESI-MS(m/z)：168[M+H]⁺。

实施例2化合物6S-4，5，6，7-四氢-3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-6-甲酸甲酯(2)的制备

冰浴下在100mL茄瓶里加15.6mL甲醇，冰浴下，用恒压漏斗缓慢滴加1.56mL二氯亚砜，30min后加入1.00g(6mmol)6S-4，5，6，7-四氢-3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-6-羧酸(2)，室温反应3天后，TLC监测反应完全，反应混合物减压浓缩，残留物加甲醇溶解并减压浓缩。该操作重复3次得白色泡状固体，再加乙醚抽干重复3次得无色粉末，最后用甲醇/乙醚重结晶得0.58g(53％)标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/z)181[M+H]⁺。

实施例3化合物3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-6-甲酸甲酯(3)的制备

冰浴下在100mL茄瓶里加1.1g(6.1mmol)6S-4，5，6，7-四氢-3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-6-甲酸甲酯(3)，加DMF使溶解。向该溶液中滴加1mL三乙胺调pH到8，分三次加入1.2g(7.6mmol)高锰酸钾。反应6小时后，TLC监测反应完毕。反应物吹干，得到的黑色固体用1NHCl溶液溶解，冰浴下滴加2NNaOH溶液调pH到7，析出大量无色固体。该固体以二氯甲烷/甲醇为洗脱剂用硅胶柱纯化，得0.68g(63.2％)标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/z)177[M+H]⁺。

实施例4化合物3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-6-羧酸(4)的制备

冰浴下在100mL茄瓶里加40mLNaOH溶液(2N)，10min后加入5.30g(29.9mmol)3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-6-甲酸甲酯(4)，反应1小时后TLC显示反应完毕，冰浴下向反应液中滴加2NHCl溶液调pH到7，析出大量无色固体。该固体以二氯甲烷/甲醇为洗脱剂用硅胶柱纯化，得1.50g(30％)标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/z)162[M-H]^-。

实施例5化合物Boc-Met-Ser-OBzl的制备

称取3.49g(14.0mmol)Boc-Met-OH于250mL茄形瓶中，加入50mLTHF。在冰浴和搅拌下依次加入2.39g(17.7mmol)HOBt及3.44g(16.7mmol)DCC，活化30min。称取5.65g(15.4mmol)HClSer-OBzl于50mL小三角瓶中，用THF溶解后，用NMM调pH至7，然后将该溶液滴加至茄形瓶的反应液中，最后用NMM调反应液pH值至8。室温反应过夜，TLC显示反应完毕后，反应混合物减压浓缩至干，残留物加20mL二氯甲烷溶解，过滤除去二环己基脲(DCU)，滤液层依次用饱和NaHCO₃溶液(20mL×3)和饱和NaCl溶液(20mL×3)各洗三遍，有机层用无水CaCl₂干燥，过滤、滤液减压浓缩至干，得到的黄色油状物经硅胶柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇为洗脱剂)，得到的淡黄色固体，经二氯甲烷/石油醚重结晶得5.5g(92.1％)标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/z)：427[M+H]⁺；¹H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ/ppm＝8.33(d，J＝6Hz，1H)，7.34(m，5H)，5.13(s，2H)，4.37(m，1H)，4.11(m，1H)，3.77(m，1H)，3.66(m，1H)，2.02(s，3H)，1.64(m，4H)，1.37(s，9H)。

实施例7化合物HCl·H-Met-Ser-OBzl的制备

称取4.6g(10.8mmol)Boc-Met-Ser-OBzl于250mL茄形瓶中，加入40.6mL4N氯化氢的乙酸乙酯溶液并在冰浴下搅拌，在瓶口安装干燥管，室温下反应，TLC显示反应完毕后，减压抽干溶剂，依次加入乙酸乙酯，减压抽干，重复两次，加入无水乙醚磨洗，减压抽干，重复三次。得2.90g(74.4％)标题化合物。ESI-MS(m/z)：363.5[M+H]⁺。

实施例8化合物3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-6-甲酰-Met-Ser-OBzl(5)的制备

称取400mg(2.45mmol)3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-6-羧酸于250mL茄形瓶中，加入120mLDMF。在冰浴和搅拌下依次加入416mg(3.08mmol)HOBt及597mg(2.90mmol)DCC，活化30min。称取1.05g(2.89mmol)HClMet-Ser-OBzl于50mL小三角瓶中，用DMF溶解后，用NMM调pH至7，然后将该溶液滴加至茄形瓶的反应液中，最后用NMM调反应液pH值至8。室温反应过夜，TLC显示反应完毕后，反应混合物减压浓缩至干，残留物加20mL二氯甲烷溶解，过滤除去二环己基脲(DCU)，滤液层依次用饱和NaHCO₃溶液(20mL×3)和饱和NaCl溶液(20mL×3)各洗三遍，有机层用无水CaCl₂干燥，过滤、滤液减压浓缩至干，得到的黄色块状物经硅胶柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇为洗脱剂)，得到的淡黄色固体，经二氯甲烷/石油醚重结晶得89mg(7.7％)标题化合物，为淡黄色色固体。ESI-MS(m/z)：472[M+H]⁺；Mp：171-172℃；[α]_D ²⁵＝-10.3(c＝0.10，甲醇)；IR(KBr)：3271，3078，2916，2850，1739，1651，1558，1524，1454，1249，949，694；¹H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ/ppm＝8.97(s，1H)，8.80(d，J＝9Hz，1H)，8.68(d，J＝6Hz，1H)，8.51(s，1H)，8.24(s，1H)，7.36(m，5H)，5.15(s，2H)，4.77(m，J＝6Hz，1H)，4.47(m，J＝3Hz，1H)，3.79(m，1H)，2.50(m，2H)，2.05(m，5H)。

实验例9化合物5的动静脉旁路循环抗血栓实验

1)聚乙烯管的组装：将聚乙烯管拉成一端为斜口的细管，定长为10.0cm，分别为右经静脉(管径较粗)及左颈动脉(管径较细)插管；中段聚乙烯管定长为8.0cm，血栓线压在颈动脉插管方向，插管前需在管中充满肝素。

2)手术：以20nmol/kg的剂量进行灌胃给药，30分钟后腹腔注射20％的乌拉坦进行麻醉。仰卧位将大鼠固定于鼠板上，剪开颈部皮肤，分离右颈总动脉及左颈静脉，血管下压线，结扎远心端，静脉靠远心端处剪一小口，进行静脉端插管，注射肝素，系线固定，再用动脉夹夹住动脉近心端，靠近远心端方向剪一小口，进行动脉端结扎，系线固定后松开动脉夹，建立体外循环旁路。循环15分钟后先剪断静脉端观察血液循环是否正常，若正常从动脉端取出血栓线，在纸上沾干浮血后称量并记录其湿重，大鼠断颈处死。每组大鼠15只，最后进行数据统计并评价化合物活性。数据列入表1。从表1可以看出，化合物5治疗大鼠的血栓重量明显小于含吐温80的生理盐水治疗大鼠的血栓重量。表明化合物5在20nmol/kg的剂量下有抗动脉血栓生成活性。

表1.化合物5的抗栓活性

a，与空白对照(NS)比较p＜O.01；

b，与空白对照(NS)比较p＜0.01，与阳性对照相比p＞0.05。

Claims

1.下式的3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-6-甲酰-Met-Ser-OBzl。

2.权利要求1的3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-6-甲酰-Met-Ser-OBzl的制备方法，该方法包括：

(5)Boc-Met-OH与丝氨酸苄酯偶联得到Boc-Met-Ser-OBzl；

(6)Boc-Met-Ser-OBzl在4N氯化氢的乙酸乙酯溶液中得到L-Met-Ser-OBzl；

(7)3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-6-甲酸与L-Met-Ser-OBzl残基偶联得到3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-6-甲酰-Met-Ser-OBzl。

3.权利要求1的3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-6-甲酰-Met-Ser-OBzl对SD大鼠的抗血栓作用。

4.权利要求1的3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-6-甲酰-Met-Ser-OBzl作为抗血栓药物的应用。