CN105198960B

CN105198960B - 咪唑并吡啶-6-甲酰-Met-AA-OBzl,其合成,活性和应用

Info

Publication number: CN105198960B
Application number: CN201410271659.0A
Authority: CN
Inventors: 赵明; 彭师奇; 吴建辉; 王玉记; 陈海燕; 李关宇; 刘文超
Original assignee: Capital Medical University
Current assignee: Capital Medical University
Priority date: 2014-06-13
Filing date: 2014-06-13
Publication date: 2018-10-19
Anticipated expiration: 2034-06-13
Also published as: CN105198960A

Abstract

本发明公开了4种3H‑咪唑并[4，5‑c]吡啶‑6‑甲酰‑Met‑AA‑苄酯及其制备方法，公开了它们对肿瘤生长的抑制作用，进一步公开了它们的抗血栓活性，因而本发明公开了它们作为抗肿瘤药物和抗血栓药物的双重应用。

Description

咪唑并吡啶-6-甲酰-Met-AA-OBzl，其合成，活性和应用

发明领域

本发明涉及4种3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-6-甲酰-Met-AA-OBzl，涉及它们的制备方法，涉及它们对肿瘤细胞增殖的抑制作用，进一步涉及它们对肿瘤增长的抑制作用，进一步涉及它们的抗血栓活性，因而本发明涉及它们作为抗肿瘤药物和抗血栓药物的双重应用。本发明属于生物医药领域。

背景技术

癌症是一组可影响身体任何部位的多种疾病的通称。使用的其它术语为恶性肿瘤和赘生物。据世界卫生组织统计，癌症是世界上的头号死因之一，尤其是在发展中国家。而全世界癌症死亡人数预计将继续上升，到2030年将超过1310万。因此，开发新的高效，低毒，毒副作用小的抗肿瘤药物一直是新药研究的重要课题之一。

随着对肿瘤特性和发病本质的认识，发明人曾经公开下式代表的3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-6-甲酰-AA-OBzl(其中AA代表甘氨基酸或其它L-氨基酸残基)在1μmol/kg剂量下显示良好的抗肿瘤活性。通过进一步研究发明人认识到，在3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-6-甲酰-AA-OBzl的6-甲酰基和AA-OBzl基之间插入Met残基，不仅可以延缓它的代谢达到提高抗肿瘤活性的目的，而且可以增加抗血栓活性。血栓是危害肿瘤患者预后的并发症。通过这种修饰，获得具有抗肿瘤和抗血栓双重活性的化合物，具有良好的临床应用前景。根据这些认识，发明人提出了本发明。

发明内容

本发明的第一个内容是提供下式的3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-6-甲酰-Met-AA-OBzl(式中AA选自L-Ala，L-Val，L-Met，L-Asp(OBzl)残基)。

本发明的第二个内容是提供3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-6-甲酰-Met-AA-OBzl(式中AA选自L-Ala，L-Val，L-Met，L-Asp(OBzl)残基)的合成方法，该方法包括：

(1)L-组氨酸在稀硫酸催化下与甲醛进行Pictet-Spengler缩合生成6S-4，5，6，7-四氢-3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-6-羧酸；

(2)6S-4，5，6，7-四氢-3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-6-羧酸转化为6S-4，5，6，7-四氢-3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-6-甲酸甲酯；

(3)6S-4，5，6，7-四氢-3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-6-甲酯用高锰酸钾氧化为3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-6-甲酸甲酯；

(4)3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-6-甲酸甲酯在NaOH溶液(2N)中皂化成3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-6-甲酸；

(5)Boc-Met与氨基酸苄酯在偶联得到Boc-Met-AA-OBzl(式中AA选自L-Ala，L-Val，L-Met，L-Asp(OBzl)残基)；

(6)Boc-Met-AA-OBzl在4N氯化氢的乙酸乙酯溶液中得到Met-AA-OBzl(式中AA选自L-Ala，L-Val，L-Met，L-Asp(OBzl)残基)；

(7)3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-6-甲酸与Met-AA-OBzl偶联得到3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-6-甲酰-Met-AA-OBzl(式中AA选自L-Ala，L-Val，L-Met，L-Asp(OBzl)残基)。

本发明的第三个内容是评价3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-6-甲酰-Met-AA-OBzl(式中AA选自L-Ala，L-Val，L-Met，L-Asp(OBzl)残基)对肿瘤细胞增殖的抑制作用。

本发明的第四个内容是评价3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-6-甲酰-Met-AA-OBzl(式中AA选自L-Ala，L-Val，L-Met，L-Asp(OBzl)残基)对肿瘤生长的抑制作用。

本发明的第五个内容是评价3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-6-甲酰-Met-AA-OBzl(式中AA选自L-Ala，L-Val，L-Met，L-Asp(OBzl)残基)对血栓形成的抑制作用。

附图说明

图1.3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-6-甲酰-Met-Pro-OBzl的合成路线.i)HCHO，H₂O，H₂SO₄，65℃；ii)MeOH，SOCl₂，0℃；iii)DMF，三乙胺，KMnO₄；iv)NaOH，H₂O，0℃；v)二环己基碳二亚胺(DCC)，1-羟基苯并三唑(HOBt)，N-甲基吗啉(NMM)，四氢呋喃(THF)；vi)4N氯化氢的乙酸乙酯溶液，0℃；vii)二环己基碳二亚胺(DCC)，1-羟基苯并三唑(HOBt)，N-甲基吗啉(NMM)，DMF.5a中AA＝L-Ala残基，5b中AA＝L-Val残基，5c中AA＝L-Met残基，5d中AA＝L-Asp(OBzl)残基。

具体实施方式

为了进一步阐述本发明，下面给出一系列实施例。这些实施例完全是例证性的，它们仅用来对本发明进行具体描述，不应当理解为对本发明的限制。

实施例1制备6S-4，5，6，7-四氢-3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-6-羧酸(1)

10.00g(64.5mmol)L-组氨酸，30mL水混合于100mL茄瓶中，冰浴下，用恒压漏斗逐滴加入2mL浓硫酸，随浓硫酸的加入，原料逐渐溶解，待其完全溶解后，向反应液中加入40％的甲醛溶液10mL，在微波加速反应仪65℃下反应5小时。反应完毕后，冰浴下缓慢滴加浓氨水调溶液pH6-7，有大量无色沉淀析出，减压过滤，得到10.76g(99.2％)标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/z)：168[M+H]⁺。

实施例2制备6S-4，5，6，7-四氢-3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-6-甲酸甲酯(2)

冰浴下在100mL茄瓶里加15.6mL甲醇，用恒压漏斗缓慢滴加1.56mL二氯亚砜，30min后加入1.00g(6mmol)6S-4，5，6，7-四氢-3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-6-羧酸(2)，室温反应3天后，TLC监测反应完全，反应混合物减压浓缩，残留物加甲醇溶解并减压浓缩。该操作重复3次得无色泡状固体，再加乙醚抽干重复3次得无色粉末，最后用甲醇/乙醚重结晶得0.58g(53％)标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/z)181[M+H]⁺。

实施例3制备3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-6-甲酸甲酯(3)

冰浴下在100mL茄瓶里加1.1g(6.1mmol)6S-4，5，6，7-四氢-3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-6-甲酸甲酯(3)，加DMF使溶解。向该溶液中滴加1mL三乙胺调pH到8，分三次加入1.2g(7.6mmol)高锰酸钾。反应6小时后，TLC监测反应完毕。反应物吹干，得到的黑色固体用1NHCl溶液溶解，冰浴下滴加2N NaOH溶液调pH到7，析出大量无色固体。该固体以二氯甲烷/甲醇为洗脱剂用硅胶柱纯化，得0.68g(63.2％)标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/z)177[M+H]⁺。

实施例4制备3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-6-羧酸(4)

冰浴下在100mL茄瓶里加40mL NaOH溶液(2N)，10min后加入5.30g(29.9mmol)3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-6-甲酸甲酯(4)，反应1小时后TLC显示反应完毕，冰浴下向反应液中滴加2N HCl溶液调pH到7，析出大量无色固体。该固体以二氯甲烷/甲醇为洗脱剂用硅胶柱纯化，得1.50g(30％)标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/z)162[M-H]^-。

实施例5制备Boc-Met-Ala-OBzl

称取3.72g(14.93mmol)Boc-Met于250mL茄瓶中，加入50mLTHF。在冰浴和搅拌下依次加入1.92g(14.93mmol)HOBt及3.52g(17.08mmol)DCC，活化30min。称取5g(14.24mmol)Tos·Ala-OBzl于100mL小三角瓶中，用THF溶解后，于冰浴下用NMM调pH至7，然后将该溶液滴加至茄形瓶的反应液中，最后用NMM调反应液pH值至8。室温反应过夜，TLC显示反应完毕后，反应混合物减压浓缩至干，残留物加60mL乙酸乙酯溶解，过滤除去二环己基脲(DCU)，滤液层依次用饱和NaHCO₃水溶液(20mL×3) 和饱和NaCl水溶液(20mL×3)各洗三遍，有机层用无水Na₂SO₄干燥，过滤，滤液减压浓缩至干，得到的黄色油状物经硅胶柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇为洗脱剂)，得到3g(51.37％)标题化合物，为淡黄色油状物。ESI-MS(m/z)：410.94[M+H]⁺；¹H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ/ppm＝8.31(d，J＝6.0Hz，1H)，7.31(m，5H)，6.93(d，J＝9.0Hz，1H)，5.11(s，2H)，4.33(m，1H)，4.02(m，1H)，2.44(t，J＝9.0Hz，2H)，2.01(s，3H)，1.78(m，2H)1.37(s，9H)，1.31(d，J＝6.0Hz，3H)。

实施例6制备Boc-Met-Val-OBzl

按照实施例6的方法，从750mg(3mmol)Boc-Met和1.364g(3.6mmol)Tos·Val-OBzl得到1.202g(91.1％)标题化合物，为无色固体。

实施例7制备Boc-Met-Met-OBzl

按照实施例6的方法，从1.272g(5mmol)Boc-Met和2.466g(6mmol)Tos·Met-OBzl得到1.875g(79.8％)标题化合物，为淡黄色固体。

实施例8制备Boc-Met-Asp(OBzl)-OBzl

按照实施例6的方法，从4.78g(19.2mmol)Boc-Met和5.06g(16.2mmol)HCl·Asp(OBzl)-OBzl得7.78g(88.5％)标题化合物，为无色固体。¹H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ/ppm＝8.40(d，J＝6.0Hz，1H)，7.33～7.39(m，10H)，6.98(d，J＝9.0Hz，1H)，5.09(s，2H)，5.08(s，2H)，4.77(dd，J₁＝12.0Hz，J₂＝6.0Hz，1H)，4.04(dd，J₁＝12.0Hz，J₂＝6.0Hz，1H)，2.92(dd，J₁＝18.0Hz，J₂＝6.0Hz，1H)，2.81(dd，J₁＝18.0Hz，J₂＝6.0Hz，1H)，2.43(t，J＝6.0Hz，2H)，1.77(m，2H)，1.37(s，9H)。

实施例9制备HCl·Met-Ala-OBzl

将3g Boc-Met-Ala-OBzl置于100mL茄瓶中，用15mL干燥乙酸乙酯将其完全溶解，于冰浴下搅拌并加入30mL4N氯化氢的乙酸乙酯溶液，立即盖上干燥管，于冰浴下进行搅拌反应共1.5h有白色固体析出。TLC显示反应完毕后，将反应液于37℃温水浴下减压抽干，用乙酸乙酯(10mL×3)复溶，抽干。将残留物用无水乙醚(10mL×3)减压带干得到白色固体1.997g(79.88％)。

实施例10制备HCl·Met-Val-OBzl

按照实施例10的方法，从1.202g Boc-Met-Val-OBzl得到标题化合物1.005g(97.8％)，为淡黄色固体。ESI-MS(m/z)：339[M+H]⁺

实施例11制备HCl·Met-Met-OBzl

按照实施例10的方法，从1.030g(2mmol)Boc-Met-Met-OBzl得到0.752g(84.4％)标题化合物，为黄色油状物。

实施例12制备HCl·Met-Asp(OBzl)-OBzl

按照实施例10，从2.17g(4.0mmol)Boc-Met-Asp(OBzl)-OBzl，得到1.68g(87.5％)标题化合物，为无色固体。

实施例13制备3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-6-甲酰-Met-Ala-OBzl(5a)

称取163mg(1mmol)3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-6-甲酸于100mL茄瓶中，加入15mLDMF。在冰浴和搅拌下加入380mg(1mmol)HATU，活化30min。称取345.5mg(1mmol)HCl·Met-Ala-OBzl于50mL小三角瓶中，用DMF溶解后，然后将该溶液滴加至茄形瓶的反应液中，最后用NMM调反应液pH值至8。室温反应过夜，TLC显示反应完毕后，将反应混合物浓缩至干，残留物加60mL乙酸乙酯溶解，过滤除去不溶物，滤液层依次用饱和NaHCO₃水溶液(20mL×3)和饱和NaCl水溶液(20mL×3)各洗三遍，有机层用无水Na₂SO₄干燥，过滤、滤液减压浓缩至干，得到的黄色油状物经硅胶柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇为洗脱剂)，得到的淡黄色油状物，经TLC薄层层析进行纯化，得到40mg(8.7％)标题化合物，为淡黄色固体。ESI-MS(m/z)：455.94[M+H]⁺；Mp：68～71℃；[α]_D ²⁵＝-11.00(c＝0.1，甲醇)；IR(KBr)：3255，2958，2916，1735，1654，1577，1508，1458，1384，1334，1253，1037，736，694；¹H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ/ppm＝12.93(s，1H)，9.00(s，1H)，8.76(d，J＝9.0Hz，1H)，8.70(d，J＝6.0Hz，1H)，8.55(s，1H)，8.25(s，1H)，7.35(m，5H)，5.13(s，2H)，4.70(m，1H)，4.38(m，1H)，2.49(t，J＝9.0Hz，2H)，2.01(m，5H)，1.36(d，J＝6.0Hz，3H)。

实施例14制备3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-6-甲酰-Met-Val-OBzl(5b)

称取称取564.6g(3.4mmol)3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-6-羧酸于250mL茄形瓶中，加入50mL DMF。在冰浴和搅拌下依次加入374.6mg(2.8mmol)HOBt及685.8mg(3.2mmol)DCC，活化30min。称取1.0654mg(2.8mmol)HCl·Met-Val-OBzl于25mL小三角瓶中，用DMF溶解后，用NMM调pH至7，然后将该溶液滴加至茄形瓶的反应液中，最后用NMM调反应液pH值至8。室温反应过夜，TLC显示反应完毕后，反应混合物减压浓缩至干，残留物加20mL乙酸乙酯溶解，过滤除去二环己基脲(DCU)，滤液层依次用饱和NaHCO₃水溶液(30mL×3)、饱和NaCl水溶液(30mL×3)洗三遍、5％KHSO₄水溶液(30mL×3)洗三遍，饱和NaCl水溶液(30mL×3)洗三遍，饱和NaHCO₃溶液(30mL×3)、饱和NaCl溶液(30mL×3)洗三遍，有机层用无水Na₂SO₄干燥，过滤、滤液减压浓缩至干，得到的黄色油状物经减压柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇为洗脱剂)，得到372mg(28.7％)标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/z)：484[M+H]+；Mp：126～128℃；[α]_D ²⁵＝-13.67(c＝0.1，甲醇)；IR(KBr)：3333，3217，3086，2963，2840，1736，1651，1620，1523，1462，1338，1258，1192，755，702；¹H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ/ppm＝13.17(s，1H)，9.00(s，1H)，8.82(d，J＝9Hz，1H)，8.55(s，1H)，8.47(d，J＝9Hz，1H)，8.25(s，1H)，7.33(m，5H)，5.15(dd，J₁＝12Hz，J₂＝15Hz，2H)，4.78(dd，J₁＝6Hz，J₂＝12Hz，1H)，4.28(dd，J₁＝6Hz，J₂＝9Hz，1H)，2.48(m，2H)，2.16(m，1H)，2.08(m，2H)，2.02(s，3H)，0.89(dd，J₁＝3Hz，J₂＝6Hz，6H)。

实施例15制备3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-6-甲酰-Met-Met-OBzl(5c)

按照实施例15的方法，从344mg(2mmol)3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-6-羧酸和976mg(2.4mmol)HCl·Met-Met-OBzl得到30mg(2.9％)标题化合物，为淡黄色固体。ESI-MS(m/z)：516[M+H]⁺；Mp：210～212℃；[α]_D ²⁵＝-16.66(c＝0.1，甲醇)；IR(KBr)：3251，3036，2932，2855，1744，1659，1574，1558，1524，1447，1404，1331，1300，1250，1219，1169，891，798，756，698，667；¹H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ/ppm＝8.90(d，1H)，8.77(d，J＝9.0Hz，1H)，8.65(d，J＝9.0Hz，1H)，8.39(s，1H)，8.20(s，1H)，7.35(m，5H)，5.14(s，2H)，4.68(m，1H)，4.50(m，1H)，2.04(s，6H)，1.85(m，4H)，1.24(m，4H)。

实施例16制备3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-6-甲酰-Met-Asp(OBzl)-OBzl(5d)

按照实施例15的方法，从0.786g(4.8mmol)3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-6-羧酸和1.92g(4.0mmol)HCl·Met-Asp(OBzl)-OBzl得到753mg(32.0％)标题化合物，为无色固体。

ESI-MS(m/z)：589.98[M+H]⁺；Mp：52～54℃；[α]_D ²⁵＝-12.00(c＝0.1，甲醇)；IR(KBr)：3564，，3445，3414，3383，2904，2839，1747，1732，1643，1558，1539，1519，1446，1396，1339，1211，1169，1087，737，687；¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)：δ/ppm＝12.79(s，1H)，9.00(s，1H)，8.82(d，J＝6.0Hz，1H)，8.80(d，J＝9.0Hz，1H)，8.55(s，1H)，8.26(s，1H)，7.21(m，10H)，5.10(s，2H)，5.07(s，2H)，4.81(dd，J₁＝12.0Hz，J₂＝6.0Hz，1H)，4.69(m，1H)，2.96(dd，J₁＝18.0Hz，J₂＝6.0Hz，1H)，2.83(dd，J₁＝18.0Hz，J₂＝9.0Hz，1H)，2.47(t，J＝9.0Hz，2H)，2.03(m，2H)，2.00(s，3H)。

实验例1评价化合物5a-d抗肿瘤细胞增殖的活性

本发明的化合物5a～d均用含1％DMSO的PBS配制成所需浓度。共使用了MCF-7(人乳腺癌细胞)，U₂OS(人骨肉瘤细胞)，SH-Sy5y(神经母细胞瘤细胞)，HaCaT(人永生化表皮细胞)，HL60(人早幼粒细胞白血病细胞)，K562(人白血病慢性粒细胞)6株肿瘤细胞。

将生长状态良好，处于对数生长期的细胞按照5×10⁴个/mL的密度接种于96孔板，每孔100μl。在37℃、5％CO₂培养箱中培养4小时，按预设的浓度梯度100μM，50μM，25μM，12.5μM，6.25μM，加入经灭菌处理的本发明的化合物，采用阿霉素作对照。继续培养48小时后，每孔加25μl浓度为5mg/mL的MTT溶液，置于37℃孵育4小时，小心除去上清液(悬浮细胞经离心后除去上清液)后每孔加入100μl DMSO(二甲基亚砜)，振荡约15min溶解沉淀。立即于酶标仪上570nm波长下测定O.D.(吸光度)值。计算IC₅₀。结果列入表1。结果表明，化合物5a～d抑制肿瘤细胞增殖的IC₅₀几乎都大于100μM，说明它们没有明显的细胞毒作用。

表1 化合物5a～d的体外抗肿瘤细胞增殖活性(IC₅₀，μM)

实验例2评价化合物5a～d抑制瘤生长的活性

测定前将化合物5a～d加吐温80助溶，溶于生理盐水。无菌条件下取接种于ICR小鼠7-10天的S180肉瘤，加入适量生理盐水配制成瘤细胞悬液，细胞数为2×10⁷/mL，接种于健康雄性ICR小鼠前肢腋皮下，每只小鼠注射0.2mL。肿瘤接种24h后，治疗组小鼠每日腹腔注射0.2ml5a～d的水溶液，连续给药7天，剂量为100nmol/kg和20nmol/kg。空白组小鼠每日腹腔注射0.2ml生理盐水。以阿霉素(剂量为2μmol/kg)作阳性对照。实验进行至第8天，称小鼠体重，乙醚麻醉并剖取各组小鼠的肿瘤称重，最后统计各组动物的抑瘤率。实体瘤的疗效以瘤重抑制百分率表示，计算如下：瘤重抑制率％＝(1-给药组瘤重/空白组瘤重)×100％。以瘤重或百分抑瘤率表示化合物的活性，数据列入表2。

由表2可以看出，在100nmol/kg和20nmol/kg的剂量下，化合物8治疗小鼠的瘤重明显小于含吐温80的生理盐水治疗小鼠的瘤重，说明化合物8的有效剂量低达20nmol/kg。这个有效剂量比发明人曾经公开的3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-6-甲酰-AA-OBzl(其中AA代表甘氨基酸或其它L-氨基酸残基)的有效剂量1μmol/kg低50倍。

实验观察到，在低于2μmol/kg剂量下，阿霉素不显示抗肿瘤作用。在2μmol/kg剂量下，阿霉素虽然显示抗肿瘤作用。相反，0.1μmol/kg和0.02μmol/kg剂量下5a～5d全部显示优秀的抗肿瘤作用。

表2 化合物5a～d对S180荷瘤小鼠的瘤重的影响

瘤重为均值±SD g；生理盐水是含吐温80的生理盐水；a)与含吐温80的生理盐水组比p＜0.01，与0.02μrnol/kg化合物比p＜0.05；b)与含吐温80的生理盐水组比较p＜0.01。

实验例3评价化合物5a-d的抗栓活性

1)聚乙烯管的组装：将聚乙烯管拉成一端为斜口的细管，定长为10.0cm，分别为右经静脉(管径较粗)及左颈动脉(管径较细)插管；中段聚乙烯管定长为8.0cm，血栓线压在颈动脉插管方向，插管前需在管中充满肝素。

2)手术：测定前将化合物5a～d加吐温80助溶，溶于生理盐水。化合物5a～5d以20nmol/kg的剂量灌胃，阿司匹林以167μmol/kg的剂量灌胃30分钟后腹腔注射20％的乌拉坦进行麻醉。仰卧位将大鼠固定于鼠板上，剪开颈部皮肤，分离右颈总动脉及左颈静脉，血管下压线，结扎远心端，静脉靠远心端处剪一小口，进行静脉端插管，注射肝素，系线固定，再用动脉夹夹住动脉近心端，靠近远心端方向剪一小口，进行动脉端结扎，系线固定后松开动脉夹，建立体外循环旁路。循环15分钟后先剪断静脉端观察血液循环是否正常，若正常从动脉端取出血栓线，在纸上沾干浮血后称量并记录其湿重，大鼠乙醚麻醉，断颈处死。每组大鼠10只，最后进行数据统计并评价化合物活性。以栓重表示化合物的活性，数据列入表3。从表3可以看出，化合物5治疗大鼠的血栓重量明显小于含吐温80的生理盐水治疗大鼠的血栓重量。表明化合物5在发挥体内抗肿瘤作用的剂量下，还具有体内抗动脉血栓生成的活性。

表3 化合物5a～5d对SD大鼠血栓重量的影响

n＝10；生理盐水是含吐温80的生理盐水；a)与含吐温80的生理盐水比p＜0.01；b)与含吐温80的生理盐水比p＜0.01，与阿司匹林比p＞0.05。

Claims

1.下式的3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰-Met-AA-OBzl，

式中AA选自L-Ala,L-Val,L-Met,L-Asp(OBzl)残基。

2.权利要求1的3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰-Met-AA-OBzl的制备方法，该方法包括：

(1)L-组氨酸在稀硫酸催化下与甲醛进行Pictet-Spengler缩合生成6S-4,5,6,7-四氢-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-羧酸；

(2)6S-4,5,6,7-四氢-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-羧酸转化为6S-4,5,6,7-四氢-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酸甲酯；

(3)6S-4,5,6,7-四氢-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酸甲酯用高锰酸钾氧化为3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酸甲酯；

(4)3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酸甲酯在2N的NaOH溶液中皂化成3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酸；

(5)Boc-Met-OH与氨基酸苄酯偶联得到Boc-Met-AA-OBzl；

(6)Boc-Met-AA-OBzl在4N氯化氢的乙酸乙酯溶液中得到Met-AA-OBzl；

(7)3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酸与4种Met-AA-OBzl残基偶联得到3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰Met-AA-OBzl。

3.权利要求1的3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰-Met-AA-OBzl在制备抗肿瘤药物中的应用。

4.权利要求1的3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰-Met-AA-OBzl在制备抗血栓药物中应用。

5.权利要求1的3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰-Met-AA-OBzl在制备具有抗肿瘤和抗血栓双重疾病药物中应用。