CN105198958A - 一种那西肽精粉的提取方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种那西肽精粉的提取方法，将灭活后的那西肽发酵液，加入助滤剂离心处理后，取所得滤渣加入二氯乙烷，并于45-50℃搅拌0.5-1小时，过滤，滤液静置分层后，取有机相得那西肽提取液，再经减压蒸馏回收二氯乙烷，于室温下加入去离子水，过滤，滤饼经水洗、干燥、研磨得那西肽精粉，蒸馏出的二氯乙烷可以直接回收套用。采用本发明所述方法所得那西肽精粉效价970ug/mg，产品不含菌丝体，收率高达93%。本发明所述的那西肽提取工艺简单，提取效率高，所用的二氯乙烷溶剂可经回收循环使用，从而减少废水污染，降低生产成本，适合工业化生产。

Description

一种那西肽精粉的提取方法

技术领域

本发明属于兽药制备技术领域，具体涉及一种那西肽精粉的提取方法。

背景技术

那西肽又名诺西肽、诺肽菌素和诺肽霉素，是一种含硫多肽类抗生素，分子式为C₅₁H₄₃N₁₃O₁₂S₆。它是由放线菌菌株发酵产生，为淡黄色至淡褐色结晶性粉末，不溶于水和石油醚，微溶于甲醇、乙醇、乙酸乙酯和苯，可溶于氯仿、吡啶、二甲基甲酰胺，熔点为310-320℃(伴随分解)。那西肽的作用机制是阻碍细菌的蛋白质合成，在低浓度时呈抑菌作用，在高浓度时呈杀菌作用。由于那西肽阻抑了肠内有害细菌的生长，使肠道管壁吸收机能正常，从而促进了动物的生长，提高了饲料利用率。那西肽是一种毒性极低的物质，其在动物体内残留极少且不被消化道吸收。那西肽与其它抗生素类饲料添加剂相比，具有用量少、无药物残留、毒性小，且对环境影响小等特点，是一种新型、高效、绿色的饲料添加剂。因此，近年来那西肽倍受畜禽行业和养殖行业的关注。

那西肽是一种脂溶性抗生素，主要存在于菌体细胞内，仅有少量分泌到细胞外。对于主要存在于细胞内的脂溶性抗生素最有效的提取方法是有机溶剂萃取。李霞等(饲料添加剂那西肽的分离提取和精制，工业微生物，1991,21(1):19-22)采用乙醇浸提那西肽发酵液，再经正丁醇反萃取得到那西肽粗品，精制后得那西肽精品。该法存在的主要缺点为：1、正丁醇萃取液浓缩温度高，而那西肽在高温下不稳定，所以给提取工作带来很大困难；2、正丁醇萃取时容易产生大量乳化层，分离乳化层使产品的收率大大降低(粗品70％，精品50％)，因此不适合工业化生产。为此需要开发一种适合工业化生产的那西肽提取工艺，以期推动在这一领域的发展。

发明内容

为了解决现有的那西肽提取工艺中存在的问题，本发明提供了一种那西肽精粉的提取方法，工艺简单，设备常规，制得那西肽精粉收率高，效价高，且不含菌丝体。

本发明解决技术问题所采用的技术方案为：

一种那西肽精粉的提取方法，包括以下步骤：

(1)取灭活后的那西肽发酵液，加入助滤剂，采用卧式螺旋沉降离心机离心处理；

(2)取步骤(1)所得那西肽滤渣，向其中加入二氯乙烷，并于45-50℃搅拌0.5-1小时，过滤，滤液静置分层，取有机相，得那西肽提取液；

(3)取步骤(2)所得滤渣，向其中加入二氯乙烷，并于45-50℃搅拌0.5-1小时，过滤，滤液静置分层，取有机相，得那西肽提取液；

(4)将步骤(2)、(3)所得那西肽提取液合并，减压蒸馏回收二氯乙烷，再于室温下加入去离子水，过滤，滤饼经水洗、干燥、研磨得那西肽精粉，蒸馏出的二氯乙烷可以直接回收套用。

作为优选，所述助滤剂为硅藻土，其用量为那西肽发酵液的1％。为了防止二氯乙烷提取时菌丝体沉淀结团的现象，更有利于菌丝体中那西肽的溶出，加入少量助滤剂，能防止滤渣菌丝体堆积过于密实，使过滤顺利进行。

作为优选，步骤(2)所述二氯乙烷溶剂的用量为那西肽滤渣质量的3-5倍。

作为优选，步骤(3)所述二氯乙烷溶剂的用量为滤渣质量的1-2倍。

作为优选，步骤(4)所述去离子水为那西肽提取液总质量的1-1.5倍。

那西肽是一种脂溶性抗生素，主要存在于菌体细胞内，仅有少量分泌到细胞外，因此可以通过将那西肽发酵液离心去除上清液，收集滤渣菌体采用有机溶剂萃取的方法提取。本发明采用卧式螺旋沉降离心机对发酵液进行离心处理，相比于传统的板框过滤发酵液方法，单位时间处理量更大，分离效果更好。利用那西肽溶于二氯乙烷的性质，先将步骤(1)所得那西肽滤渣采用二氯乙烷溶剂提取，溶解那西肽，除去菌丝体，得到那西肽提取液；由于那西肽在水中不溶，向那西肽提取物中加入去离子水，那西肽晶体析出，其他杂质溶于水中，从而达到对那西肽精制的目的，提高那西肽效价和品质。

本发明的有益效果为：

1、采用本发明所述方法所得那西肽精粉效价970ug/mg，产品不含菌丝体，收率高达93％。

2、本发明所述的那西肽提取工艺简单，提取效率高，适合工业化生产。

3、本发明所用的二氯乙烷溶剂可经回收循环使用，从而减少废水污染，降低生产成本。

具体实施方式

以下结合实施例来进一步解释本发明，但实施例并不对本发明做任何形式的限定。

实施例1

(1)取灭活后的那西肽发酵液3000g，加入硅藻土30g，采用卧式螺旋沉降离心机离心处理，得到120g含那西肽的滤渣(含水)；

(2)取步骤(1)所得那西肽滤渣，向其中加入360g二氯乙烷溶剂，并于45℃搅拌0.5小时，过滤、分层，取有机相，得364g那西肽提取液和116g菌丝体滤渣；

(3)取步骤(2)所得局菌丝体滤渣，向其中加入116g二氯乙烷，并于45℃搅拌0.5小时，过滤、分层，取有机相，得117.5g那西肽提取液；

(4)将步骤(2)、(3)所得西肽提取液合并，减压蒸馏至干，室温下向其中加入去离子水481.5g去离子水，过滤，滤饼经水洗、干燥、研磨得5.42g那西肽精粉。

实验结果如表1所示：

表1：

实施例2

(1)取灭活后的那西肽发酵液3000g，加入硅藻土30g，采用卧式螺旋沉降离心机离心处理，得到120g含那西肽的滤渣(含水)；

(2)取步骤(1)所得那西肽滤渣，向其中加入480g二氯乙烷溶剂，并于48℃搅拌0.8小时，过滤、分层，取有机相，得512g那西肽提取液和88g菌丝体滤渣；

(3)取步骤(2)所得局菌丝体滤渣，向其中加入132g二氯乙烷，并于48℃搅拌0.8小时，过滤、分层，取有机相，得122g那西肽提取液；

(4)将步骤(2)、(3)所得西肽提取液合并，减压蒸馏至干，室温下向其中加入去离子水698g去离子水，过滤，滤饼经水洗、干燥、研磨得5.86g那西肽精粉。

实验结果如表2所示：

表2：

实施例3

(1)取灭活后的那西肽发酵液3000g，加入硅藻土30g，采用卧式螺旋沉降离心机离心处理，得到120g含那西肽的滤渣(含水)；

(2)取步骤(1)所得那西肽滤渣，向其中加入600g二氯乙烷溶剂，并于50℃搅拌1小时，过滤、分层，取有机相，得615g那西肽提取液和105g菌丝体滤渣；

(3)取步骤(2)所得局菌丝体滤渣，向其中加入210g二氯乙烷，并于50℃搅拌1小时，过滤、分层，取有机相，得223g那西肽提取液；

(4)将步骤(2)、(3)所得西肽提取液合并，减压蒸馏至干，室温下向其中加入1257g去离子水，过滤，滤饼经水洗、干燥、研磨得5.79g那西肽精粉。

实验结果如表3所示：

表3：

以上仅列举了本发明的优选实施方案，本发明的保护范围并不限制于此，本领域技术人员在本发明权利要求范围内所作的任何改变均落入本发明保护范围内。

Claims (5)

1.一种那西肽精粉的提取方法，其特征在于，所述提取方法包括以下步骤：

(1)取灭活后的那西肽发酵液，加入助滤剂，采用卧式螺旋沉降离心机离心处理；

(2)取步骤(1)所得那西肽滤渣，向其中加入二氯乙烷，并于45-50℃搅拌0.5-1小时，过滤，滤液静置分层，取有机相，得那西肽提取液；

(3)取步骤(2)所得滤渣，向其中加入二氯乙烷，并于45-50℃搅拌0.5-1小时，过滤，滤液静置分层，取有机相，得那西肽提取液；

(4)将步骤(2)、(3)所得那西肽提取液合并，减压蒸馏回收二氯乙烷，再于室温下加入去离子水，过滤，滤饼经水洗、干燥、研磨得那西肽精粉。

2.如权利要求1所述的那西肽精粉的提取方法，其特征在于，所述助滤剂为硅藻土，其用量为那西肽发酵液质量的1%。

3.如权利要求1所述的那西肽精粉的提取方法，其特征在于，步骤(2)中所述二氯乙烷的用量为那西肽滤渣的3-5倍。

4.如权利要求1所述的那西肽精粉的提取方法，其特征在于，步骤(3)中所述二氯乙烷的用量为那西肽滤渣的1-2倍。

5.如权利要求1所述的那西肽精粉的提取方法，其特征在于，步骤(4)中所述去离子水为那西肽提取液总质量的1-1.5倍。