CN104719634A - 一种制备那西肽预混剂的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种制备那西肽预混剂的方法，涉及医药技术领域。该方法将发酵液pH值调至中性后，加入二氯甲烷，常温搅拌2-4h，进行浸提，经过两次浸提后，将一次浸提液和二次浸提液混合，加入食盐水洗涤至水洗液无色，然后减压蒸馏，得到淡黄色固体，与辅料进行混合制粒，即得到那西肽预混剂。本发明所提供的制备那西肽预混剂的方法，法规符合度高，工序短，收率高，适于推广应用。

Description

一种制备那西肽预混剂的方法
技术领域
本发明属于医药技术领域，具体涉及一种制备那西肽预混剂的方法。
背景技术
那西肽是有12个氨基酸及其衍生物组成的多肽，属于大分子物质，在体内不吸收，是一种新型的在动物体内不残留的饲料添加剂。
那西肽作为一种新型的饲料添加剂不但能促进畜禽生长，提高饲料效率，而且还具有不易产生耐药性，无残留，对环境影响小，对人畜安全，这些特点完全符合人们对饲料添加剂的要求，而且它不仅能广泛应用于畜禽业而且还能广泛应用于水产业，具有一定的社会效益和经济效益。
目前那西肽预混剂的生产方法主要有以下两种：(1)发酵液经过干燥后，菌丝体与辅料混合。(2)发酵液经过提取得到粗品，然后与辅料混合。其中前者是较为常用的方法，但是与法规有所相悖，已经逐渐被后者取代。而后者工艺的关键是以更加经济的方法从发酵液中得到粗品，常用的方法有两种：(1)选择与水互溶的溶剂对菌丝进行浸提，该方法浸提效果好，但选择性差，杂质含量高，后续处理较为复杂。(2)选择与水不互溶的溶剂对菌丝进行浸提，经过固液分离、有机溶剂浓缩后，用乙醚等溶剂洗涤，然后用硅胶柱层析得到纯品，再与辅料进行混合，该方法工艺复杂。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种从那西肽发酵液中制剂提取那西肽粗品，进行制备那西肽预混剂的方法，该方法工序短、收率高、操作简单，解决了现有技术中制备那西肽预混剂不符合法规要求和工艺复杂、收率低的问题。
为解决上述技术问题，本发明所采取的技术方案是：
一种制备那西肽预混剂的方法，其特征在于：包括以下操作步骤：
(1)向那西肽发酵液中加入酸性物质至pH值为中性；
(2)向步骤(1)所得的发酵液中加入二氯甲烷，在20-25℃搅拌2-4h，然后进行固液分离，收集液体，静置分层，二氯甲烷相收集，为一次浸提液；
(3)向固液分离后的菌丝加入与步骤(2)中二氯甲烷等体积的水和二氯甲烷，20-25℃搅拌2-4h，然后进行固液分离，收集液体，静置分层，二氯甲烷相收集，得到二次浸提液；
(4)将步骤(2)和步骤(3)所得到的一次浸提液和二次浸提液混合，加入饱和食盐水进行洗涤2-3次，至水洗液无色，然后进行减压蒸馏，得到淡黄色固体，将该淡黄色固体与玉米粉进行混合制粒，即得到那西肽预混剂。
进一步的技术方案在于：所述步骤(1)加入的酸性物质调pH至6.5-7.5，所述酸性物质为草酸。
进一步的技术方案在于：所述步骤(2)中发酵液与二氯甲烷的体积比为1:0.8-1.1。
进一步的技术方案在于：所述步骤(3)中二氯甲烷与水的体积比为0.9-1.1:1。
进一步的技术方案在于：所述步骤(4)中一次浸提液和二次浸提液混合后与饱和食盐水的体积比为1:0.7-1.0，淡黄色固体与玉米粉的质量比为1:98.5-99.5。
进一步的技术方案在于：所述步骤(2)中所述固液分离方法为：板框过滤、离心过滤中的任意一种。
采用上述技术方案所产生的有益效果在于：
本发明所述制备那西肽预混剂的方法，使那西肽在酸性或碱性条件下较为稳定，减少了二氯甲烷的挥发，除去了大量的水溶性杂质，步骤大大简化，法规符合度高，工序短，收率高，适于推广应用。
具体实施方式
下面对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本发明，但是本发明还可以采用其他不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本发明内涵的情况下做类似推广，因此本发明不受下面公开的具体实施例的限制。
实施例1
取那西肽的发酵液(效价2023ug/mL)10L调节pH值至7.14，加入10L二氯甲烷，常温搅拌4h，然后进行板框过滤，滤液静置1h分层，下层为二氯甲烷相，收集二氯甲烷相10.1L，备用。
板框过滤后的菌丝加入10L水和10L二氯甲烷进行二次浸提，常温搅拌4h，然后进行板框过滤，滤液静置1h分层，下层为二氯甲烷相，收集二氯甲烷相10.2L，备用。
将一次浸提液和二次浸提液混合，共20.3L，加入16L的饱和食盐水进行洗涤，重复两次，得到19.9L二氯甲烷溶液，然后进行减压蒸馏，得到淡黄色固体21.32g，HPLC检测纯度为93.1％，则粗品收率为98.1％。粗品加入177.2g辅料，制备1％那西肽预混剂。
实施例2
取那西肽的发酵液(效价1879ug/mL)10L调节pH值至6.83，加入9.6L二氯甲烷，常温搅拌3h，然后进行板框过滤，滤液静置1h分层，下层为二氯甲烷相，收集二氯甲烷相9.7L，备用。
板框过滤后的菌丝加入9.9L水和9.8L二氯甲烷进行二次浸提，常温搅拌4h，然后进行板框过滤，滤液静置1h分层，下层为二氯甲烷相，收集二氯甲烷相9.9L，备用。
将一次浸提液和二次浸提液混合，共19.6L，加入15L的饱和食盐水进行洗涤，重复两次，得到19.4L二氯甲烷溶液，然后进行减压蒸馏，得到淡黄色固体19.68g，HPLC检测纯度为92.6％，则粗品收率为97.0％。粗品加入162.5g辅料，制备1％那西肽预混剂。
实施例3
取那西肽的发酵液(效价2173ug/mL)5L调节pH值至7.01，加入5.1L二氯甲烷，常温搅拌4h，然后进行板框过滤，滤液静置50min分层，下层为二氯甲烷相，收集二氯甲烷相5.17L，备用。
板框过滤后的菌丝加入4.9L水和5.0L二氯甲烷进行二次浸提，常温搅拌4h，然后进行离心过滤，滤液静置48min分层，下层为二氯甲烷相，收集二氯甲烷相5.04L，备用。
将一次浸提液和二次浸提液混合，共10.21L，加入8.0L的饱和食盐水进行洗涤，重复两次，得到10.07L二氯甲烷溶液，然后进行减压蒸馏，得到淡黄色固体11.09g，HPLC检测纯度为94.0％，则粗品收率为95.9％。粗品加入93.16g辅料，制备1％那西肽预混剂。
本发明所述制备那西肽预混剂的方法，先将那西肽的发酵液调节pH值至中性，目的：那西肽在酸性或碱性条件下不稳定，在中性条件较为稳定。
然在发酵液中加入等体积的二氯甲烷，常温搅拌2-4h，然后进行固液分离，收集液体，静置分层，大量水溶性杂质被留在水相中，二氯甲烷相含有的水溶性杂质较少，为一次浸提液。
为了提高收率，固液分离后的菌丝加入等量的水和二氯甲烷进行二次浸提，其步骤与一次浸提相同，得到二次浸提液。在进行浸提的过程中加入了水，一方面减少了二氯甲烷的挥发，另一方面除去了大量的水溶性杂质。
将一次浸提液和二次浸提液混合，加入一定量的饱和食盐水进行洗涤2-3次，除去了绝大部分杂质，使后续步骤大大简化，可以直接进行减压蒸馏，得到淡黄色固体，将该固体按照一定的比例与辅料进行混合制粒，即得到那西肽预混剂。
本发明所述那西肽的发酵液可以采用本领域常用菌种经过发酵后得到的发酵液。本发明所提供的制备那西肽预混剂的方法，法规符合度高，工序短，收率高，适于推广应用。

Claims (6)

1.一种制备那西肽预混剂的方法，其特征在于：包括以下操作步骤：
(1)向那西肽发酵液中加入酸性物质至pH值为中性；
(2)向步骤(1)所得的发酵液中加入二氯甲烷，在20-25℃搅拌2-4h，然后进行固液分离，收集液体，静置分层，二氯甲烷相收集，为一次浸提液；
(3)向固液分离后的菌丝加入与步骤(2)中二氯甲烷等体积的水和二氯甲烷，20-25℃搅拌2-4h，然后进行固液分离，收集液体，静置分层，二氯甲烷相收集，得到二次浸提液；
(4)将步骤(2)和步骤(3)所得到的一次浸提液和二次浸提液混合，加入饱和食盐水进行洗涤2-3次，至水洗液无色，然后进行减压蒸馏，得到淡黄色固体，将该淡黄色固体与玉米粉进行混合制粒，即得到那西肽预混剂。
2.根据权利要求1所述的一种制备那西肽预混剂的方法，其特征在于：所述步骤(1)加入的酸性物质调pH至6.5-7.5，所述酸性物质为草酸。
3.根据权利要求1所述的一种制备那西肽预混剂的方法，其特征在于：所述步骤(2)中发酵液与二氯甲烷的体积比为1:0.8-1.1。
4.根据权利要求1所述的一种制备那西肽预混剂的方法，其特征在于：所述步骤(3)中二氯甲烷与水的体积比为0.9-1.1:1。
5.根据权利要求1所述的一种制备那西肽预混剂的方法，其特征在于：所述步骤(4)中一次浸提液和二次浸提液混合后与饱和食盐水的体积比为1:0.7-1.0，淡黄色固体与玉米粉的质量比为1:98.5-99.5。
6.根据权利要求1所述的一种制备那西肽预混剂的方法，其特征在于：所述步骤(2)中所述固液分离方法为：板框过滤、离心过滤中的任意一种。
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