CN105198849A - 灯盏乙素苷元胺基类衍生物及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及医药技术领域，具体涉及一类灯盏乙素苷元胺基类衍生物以及它的制备方法和在防治血栓药物中的应用。药理实验结果表明，本发明提供的灯盏乙素苷元胺基类衍生物与灯盏乙素相比，具有更好的抗凝血、抑制PC12细胞氧化损伤等药理作用，尤其是具有优异的水溶性和生物利用度，提高药效。本发明提供的灯盏乙素苷元胺基类衍生物的制备方法，可以设计合理，可操作性强，产率高，可实现工业化生产。本发明提供的灯盏乙素苷元胺基类衍生物可用于由于血栓而导致的一系列疾病的治疗，例如心肌梗死、老年痴呆症、脑梗塞等由缺血性损伤引起的其他各种疾病等。

Description

灯盏乙素苷元胺基类衍生物及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及医药技术领域，具体涉及一类新型的灯盏乙素苷元胺基类衍生物，以及它的制备方法和在防治由于血栓而导致的一系列疾病的应用，例如心肌梗死、老年痴呆症、脑梗塞等由缺血性损伤引起的其他各种疾病等。

背景技术

灯盏乙素是菊科短亭飞蓬类植物灯盏花中的一个黄酮类化合物，灯盏花又名灯盏细辛，别称灯盏菊、土细辛、地顶草、细辛草、东菊等，灯盏花性寒、微苦、甘温辛，具有散寒解表、祛风除湿、活血化瘀、通经活络、消炎止痛的功效。灯盏花素是从天然植物灯盏花中提取的黄酮类活性成份，有灯盏甲素、灯盏乙素等的混合物，主要为灯盏乙素(含量占有95％以上)(陈一岳,王胜涛,曾文珊,朱颖虹,傅咏梅,江涛.灯盏花素对大鼠主动脉肌环的松弛作用.中药新药与临床药理.1994,5(2),15-19)。上世纪从70年代起灯盏花素制剂就开始应用于临床，通过近30年的临床应用和广深入的药理研究，其独特的疗效和安全低毒的特点已得到社会认可，现代药物研究证明，灯盏花素具有增加血流量，改善微循环、扩张血管、降低血粘度、降血脂、促纤溶、抗血栓、抗血小板聚集等作用，其注射剂和片剂已成为临床常用药品，在治疗心脑血管疾病、风湿性关节炎和中风后遗症等方面有显著的疗效。

现代临床研究发现，灯盏花素临床应用过程中生物利用度比较低，一方面是溶解性差，文献报道灯盏花素在水中的溶解度仅为0.16mg·mL^-1(张海燕,平其能,郭健新,操锋.灯盏花素及其β-环糊精包合物在大鼠体内的药代动力学.药学学报,2005,40(6),563-567)，其次灯盏花素脂溶性也很差在pH4.2的PBS溶液中，logP为-2.56(操锋,郭健新,平其能,邵云,梁静.灯盏乙素酯类前药的合成、理化性质及降解研究.药学学报,2006,41(7),595-602)。另外研究还发现，灯盏花素生物利用度比较低的原因除了溶解性差，很难吸收以外，还有一个重要的原因是其主要成分灯盏乙素在体内很容易代谢，葛庆华等人研究发现不论口服还是静脉给药，灯盏乙素在动物体内代谢消除速度快，Beagle犬口服绝对生物利用度仅(0.40±0.19)％(葛庆华,周臻,支晓瑾,马丽丽,陈秀华.灯盏花素在犬体内的药动学和绝对生物利用度研究.中国医药工业杂志,2003,34(12),618-621)，而家犬静注消除半衰期短，为(52±29)min(蒋学华,李素华,兰轲,杨俊毅,周静.灯盏花素在家犬体内的药代动力学.药学学报.2003,38(5),371-373)。冯芳等人研究了人体口服60mg小剂量灯盏乙素滴丸后的药动学参数，发现灯盏乙素在体内消除很快，生物半衰期仅为(2.27±0.58)min(冯芳,沈于兰.人血浆中痕量灯盏乙素SPE-HPLC/MS/MS的建立及药动学研究.中国药学杂志.2006,41(6),457)，姚新生等人发现灯盏乙素在小鼠体内大量代谢成为灯盏乙素苷元6甲基化产物，灯盏乙素苷元6葡萄糖醛酸基化产物(HongJunXIA,FengQIU,ShanZHU,TieYingZHANG,GeXiaQU,andXinShengYAO,IsolationandIdentificationofTenMetabolitesofBreviscapineinRatUrine,Biol.Pharm.Bull.2007,30(7),1308—1316.)，其代谢途径如图3所示。

因此通过化学方法在灯盏乙素苷元6位引入含有氮原子的胺基侧链，一方面可以提高其水溶性，从而有利于吸收，另一方面由于灯盏乙素苷元6位羟基被含氮侧链占据，在体内可以阻止代谢成6位甲基化或6位葡萄糖醛酸化产物，从而可以提高这些胺基类衍生物在体内的代谢稳定性，提高其生物利用度。在心脑血管疾病药物研究方面，将具有非常重大的意义。

发明内容：

发明目的：本发明所要解决的技术问题是，克服现有技术灯盏花素生物利用度低，代谢快，稳定性差的不足，以灯盏乙素为原料经过苷水解、氯甲醚选择性保护苷元4'位和7位羟基、苷元6位选择性醚化、甲醚脱保护从而合成系列具有药用价值且溶解性好、生物利用度高、不良反应低、用药安全的灯盏乙素苷元胺基类衍生物，本发明另一个目的是提供灯盏乙素苷元胺基类衍生物的制备方法和其在制备防治血栓疾病药物中的应用。

技术方案：为了实现以上目的，本发明提供的灯盏乙素苷元胺基类衍生物的通式如下：

其中R₁和R₂相同或不同，各自独立的代表C1～C10的烷基；

或者R₁代表氢，R₂代表吗啉基、哌啶基、哌嗪基或取代哌嗪基；

X代表亚甲基或羰基；

n为1～4的整数。

作为优选方案，以上所述的灯盏乙素苷元胺基类衍生物，所述的烷基为甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基或异丁基。

作为优选方案，以上所述的灯盏乙素苷元胺基类衍生物，所述的取代哌嗪基为甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、正戊基、异戊基取代的哌嗪基。

本发明提供的灯盏乙素苷元胺基类衍生物的制备方法，具体包括以下步骤：

a、取灯盏乙素1为起始原料，在浓硫酸的催化下，于体积浓度95％乙醇溶液中加热水解，得到灯盏乙素苷元2，备用；

b、取步骤a得到的灯盏乙素苷元2在丙酮溶液中，与氯甲醚反应得到灯盏乙素苷元甲醚衍生物3、4、5，其中二醚衍生物4备用；

c、当X＝CH₂,n＝1,2,3,4时，取二胺基化合物首先与氯取代醇反应得到胺基醇化合物，然后胺基醇化合物在二氯亚砜作用下，经过醇羟基氯化得到氯取代胺基边链，备用；

当X＝CO,n＝0时，取二胺基化合物直接与三光气反应得到氯取代胺基边链，备用；

当X＝CO,n＝1,2,3,4时，取二胺基化合物直接与氯取代酰氯化合物反应得到氯取代胺基边链，备用；

d、取步骤b得到的二醚衍生物4在DMF溶液中，与步骤c得到的氯取代胺基边链反应得到6备用；

e、取步骤d得到的灯盏乙素苷元化合物(6)，在盐酸的作用下，脱去甲醚保护基得到灯盏乙素苷元胺基类衍生物(I)

作为优选方案，以上所述的灯盏乙素苷元胺基类衍生物的制备方法，，步骤a中所用的浓硫酸的摩尔浓度为0～3mol/L，灯盏乙素(1)与95％乙醇的用量比为5g/100ml～10g/100ml，反应温度为70～90℃；反应时间为12～48小时。

作为优选方案，以上所述的灯盏乙素苷元胺基类的制备方法，步骤b中所用的氯甲醚摩尔当量为1：2～4；反应催化剂为碳酸钾、碳酸钠、氢氧化钾、氢氧化钠等碱，反应催化剂的摩尔当量为1：2～4，反应温度为回流，反应溶剂为丙酮，反应时间为4～12小时。

作为优选方案，以上所述的灯盏乙素苷元胺基类的制备方法，步骤c中X＝CH₂,n＝1,2,3,4时，氯取代醇当量为1：1.2～1.5，反应温度为回流，反应溶剂为四氯化碳、苯，反应时间为8～16小时；醇氯化时反应催化剂为SOCl₂，摩尔当量为1：5～8，反应温度为回流，反应溶剂为四氯化碳、苯，反应时间为6-10小时。

步骤c中X＝CO,n＝0时，三光气摩尔当量为1：1.5～2.0；反应催化剂为DMF，摩尔当量为1：0.2～0.8，反应温度为回流，反应溶剂为四氯化碳、苯，反应时间为10～24小时；

步骤c中X＝CO,n＝1,2,3,4时，氯取代酰氯摩尔当量为1：1.2～2.0，反应温度为回流，反应溶剂为四氯化碳、苯，反应时间为12～24小时。

作为优选方案，以上所述的灯盏乙素苷元胺基类的制备方法，步骤d中所用的氯取代胺基边链的摩尔当量为1：1.2～2，反应催化剂为碳酸钾、碳酸钠、氢氧化钾、氢氧化钠等碱，其摩尔当量为1：1.2～2，反应温度为20℃～30℃，反应溶剂为DMF，反应时间为6～24小时。

作为优选方案，以上所述的灯盏乙素苷元胺基类的制备方法，步骤e中所用的盐酸浓度为1.0～3.0M，反应温度为0℃～30℃，反应溶剂为乙醚、二氯甲烷或两种溶剂的混合溶剂，反应时间为1～6小时。

本发明通过大量实验筛选，作为优选方案，以上所述的灯盏乙素苷元胺基类衍生物(I)的制备方法，步骤a中所用的浓硫酸的摩尔浓度为0～3mol/L，作为更优的方案，浓硫酸的摩尔浓度为3mol/L，灯盏乙素(1)与95％乙醇的用量比为5g/100ml～10g/100ml，反应温度为70～90℃；反应时间为24～48小时，可以更加高效的灯盏乙素水解得到灯盏乙素苷元。

作为更加优选方案，以上所述的灯盏乙素苷元胺基类衍生物(I)的制备方法，步骤b中灯盏乙素苷元2与K₂CO₃的摩尔用量比为1：2.2～3.8，灯盏乙素苷元2与氯甲醚的用量摩尔比为1：2.2～3.5，反应温度为回流，反应溶剂为丙酮，反应时间为4～12小时。

作为更加优选方案，以上所述的灯盏乙素苷元胺基类衍生物(I)的制备方法，步骤c中X＝CH₂,n＝1,2,3,4时，氯取代醇当量为1：1.2～1.3，反应温度为回流，反应溶剂为苯，反应时间为8～14小时；醇氯化时反应催化剂为SOCl₂，当量为1：6～7，反应温度为回流，反应溶剂为四氯化碳，反应时间为8-10小时。步骤c中X＝CO,n＝0时，三光气当量为1：1.2～1.8，反应催化剂为DMF，当量为1：0.4～0.6，反应温度为回流，反应溶剂为四氯化碳，反应时间为14～18小时；步骤c中X＝CO,n＝1,2,3,4时，氯取代酰氯当量为1：1.4～1.6，反应温度为回流，反应溶剂为苯，反应时间为16～20小时。

作为更加优选方案，以上所述的灯盏乙素苷元胺基类衍生物(I)的制备方法，步骤d中所用的氯取代边链当量为1：1.4～1.8，反应催化剂为碳酸钾，其当量为1：1.6～2.0，反应温度为20℃～25℃，反应溶剂为DMF，反应时间为8～16小时。

作为更加优选方案，以上所述的灯盏乙素苷元胺基类衍生物(I)的制备方法，步骤e中反应溶剂为乙醚、二氯甲烷或两种溶剂的混合溶剂，反应催化剂为盐酸，其中盐酸的浓度为1～3M，反应温度为0～25℃，反应时间为1～3小时。

本发明提供的灯盏乙素苷元胺基类衍生物在制备防治心肌梗死、缺血性损伤等血栓性疾病药物中的应用，作为优选方案，灯盏乙素苷元胺基类衍生物分子结构中存在多个羟基，从而显示一定的酸性，可以把灯盏乙素苷元胺基类衍生物和碱金属、碱土金属氢氧化物、碱金属碳酸盐或碱土金属碳酸盐、碱金属碳酸氢盐或碱土金属碳酸氢盐反应形成盐。

作为优选方案，灯盏乙素苷元胺基类衍生物分子边链中含有氮原子，从而具有一定的弱碱性，可以与盐酸、硫酸、磷酸反应形成盐。

作为进一步优选方案，将灯盏乙素苷元胺基类衍生物盐和药学上可接受的载体制成片剂、胶囊剂、颗粒剂、喷雾剂、注射剂、微囊、软膏剂或透皮控释贴剂剂型的药物。

本发明提供的灯盏乙素苷元胺基类衍生物盐制成片剂时，把灯盏乙素苷元胺基类衍生物盐和载体乳糖或玉米淀粉，需要时加入润滑剂硬脂酸镁，混合均匀，然后压片制成片剂。

本发明提供的灯盏乙素苷元胺基类衍生物盐制成胶囊剂时把灯盏乙素苷元胺基类衍生物盐和载体乳糖或玉米淀粉混合均匀，整粒，然后装胶囊制成胶囊剂。

本发明提供的灯盏乙素苷元胺基类衍生物盐制成颗粒剂时，把灯盏乙素苷元胺基类衍生物盐和稀释剂乳糖或玉米淀粉混合均匀，整粒，干燥，制成颗粒剂。

本发明提供的灯盏乙素苷元胺基类衍生物盐制成注射液时，取灯盏乙素苷元胺基类衍生物盐加入增溶剂，搅拌均匀，80℃加热30分钟，过滤，调节PH值，用垂熔玻璃漏斗或其它滤器过滤至澄明，灌装，在100至115℃灭菌30分钟制成注射液。

有益效果：本发明提供的灯盏乙素苷元胺基类衍生物和现有技术现比具有以下优点：

1、本发明提供的系列灯盏乙素苷元胺基类衍生物，通式如图1所示，通过在灯盏乙素苷元羟基选择性的连接水溶性官能团，得到的灯盏乙素苷元胺基类衍生物溶解性好，可大大提高人体服用后生物利用度，增强抗血栓药理活性，且不良反应低，用药更安全，且灯盏乙素苷元胺基类衍生物可以和多种酸或碱反应制备得到盐化物，并可制成多种药物剂型，提高溶解性，方便临床用药。

2、本发明提供的灯盏乙素苷元胺基类衍生物的制备方法，工艺流程如图2所示，通过大量实验筛选出最佳的工艺路线，整个工艺设计合理，本发明以灯盏乙素苷为原料经过苷水解、选择性保护与脱保护、选择性烷基化从而合成系列具有药用价值且溶解性好，生物利用度高的灯盏乙素苷元胺基类的新衍生物，本发明提供的制备方法，可操作性强，生产效率高，成本低，且成品得率高、纯度高，具有重要的应用价值。

附图说明

图1为本发明提供的灯盏乙素苷元胺基类衍生物的结构通式。

图2为本发明提供的灯盏乙素苷元胺基类衍生物的制备工艺流程图。

图3为灯盏乙素在大鼠体内的代谢途径过程示意图。

具体实施方式

根据下述实施例，可以更好地理解本发明。然而，本领域的技术人员容易理解，实施例所描述的具体的物料配比、工艺条件及其结果仅用于说明本发明，而不应当也不会限制权利要求书中所详细描述的本发明。

实施例15,6,7-三羟基-2-(4-羟基苯基)-4H-色酮(2)的制备

取灯盏乙素(1)(5g，10.82mmol)加入到3mol·L^-1的90％的浓硫酸乙醇溶液50mL中，120℃以N₂保护反应48h，反应结束后冷却，反应液倒入8倍量的水中，抽滤，滤饼水洗至中性，50℃干燥。滤饼以80％、50％的乙醇反复重结晶得2粗品。2粗品经硅胶柱色谱分离(二氯甲烷：甲醇＝60：1)得到产物790mg。黄色粉末，产率25.5％。¹HNMR(300MHz,DMSO-d₆)δ:6.73(s,1H,3-H),6.78(s,1H,8-H),6.92(d,2H,J＝8.8Hz,3′,5′-H),7.92(d,2H,J＝8.8Hz,2′,6′-H),8.71(s,1H,6-OH),10.30(s,1H,4′-OH),10.44(s,1H,7-OH),12.79(s,1H,5-OH)；ESI-MS:m/z285[M-H]^-。

实施例25,6-二羟基-7-(甲氧基甲氧基)-2-(4-(甲氧基甲氧基)苯基)-4H-色酮(4)的制备

取(2g，7mmol)1投入到100mL的干燥的丙酮中，加热使其充分溶解。冰浴和氮气保护下加入(3.48g，25.2mmol，3.6equiv)K₂CO₃，冰浴和氮气保护下反应30分钟后加入(1.78mL,23.8mmol,3.4equiv)的MOMCl，回流8小时。反应液抽滤，滤饼以丙酮洗涤，合并滤液浓缩。硅胶柱层析分离纯化，洗脱剂石油醚：乙酸乙酯(4：1)。得黄色固体1.13g(化合物4)，产率43.2％。¹HNMR(300MHz,DMSO-d₆)δ:3.52(s,3H,-OCH₃),3.61(s,3H,-OCH₃),5.22(s,2H,-OCH₂),5.35(s,2H,-OCH₂),6.61(s,1H,3-H),6.69(s,1H,8-H),7.05(d,2H,J＝8.6Hz,3′,5′-H),8.01(d,2H,J＝8.6Hz,2′,6′-H),12.76(s,1H,5-OH)；ESI-MS:m/z373[M-H]^-.

实施例36-(2-(二甲基胺基)乙氧基)-5-羟基-7-(甲氧基甲氧基)-2-(4-(甲氧基甲氧基)苯基)-4H-色酮(6-1-1)的制备

取二甲胺(6.63ml,0.1mol)加入到20ml甲苯溶液中，然后室温下滴加2-氯-1-乙醇(0.05mol,3.4ml)，回流反应3小时后，将反应液抽滤，甲苯洗涤。接着将二氯亚砜(10ml)加入到滤液中，再回流反应2小时，反应结束后，将滤液减压浓缩，残留物用无水乙醇重结晶，得到的固体2-氯-N,N-二甲基乙胺直接用于下步反应。取化合物4(100mg,0.27mmol)加入到DMF(20mL)溶液中，冰浴下依次加入K₂CO₃(44mg,0.32mmol)和KI(11mg,0.07mmol)，然后加入2-氯-N,N-二甲基乙胺(35mg,0.32mmol)，室温反应12小时后，反应液用乙酸乙酯萃取(50ml×3)，饱和食盐水(100nl)洗涤，干燥，浓缩，残留物柱层析分离纯化，洗脱剂石油醚：乙酸乙酯(4：1)。得黄色固体89.87mg(6-1-1)，产率74.8％。¹HNMR(300MHz,DMSO-d₆)δ:1.96(s,6H,2×-CH₃),2.72-2.74(t,2H,J＝3Hz,-NCH₂),3.51(s,3H,-OCH₃),3.62(s,3H,-OCH₃),4.13-4.15(t,2H,J＝3Hz,-OCH₂),5.23(s,2H,-OCH₂),5.36(s,2H,-OCH₂),6.86(s,2H,3-H),7.01(s,1H,8-H),7.07(d,2H,J＝6Hz,3′,5′-H),8.00(d,2H,J＝6Hz,2′,6′-H),12.88(s,1H,5-OH)；ESI-MS:m/z446[M+H]⁺。

实施例46-(2-(二甲基胺基)乙氧基)-5,7-二羟基-2-(4-羟基苯基)-4H-色酮(I-1-1)的制备

取6-1-1(44.5mg,0.10mmol)加入到5ml二氯甲烷和5ml乙醚的混合溶液中，冰浴冷却下加入盐酸(1ml)，室温反应2小时后，反应液加入水20ml，乙酸乙酯提取(20ml×3)，饱和食盐水(20ml)洗涤，干燥，浓缩，残留物柱层析分离纯化，洗脱剂石油醚：乙酸乙酯(4：1)。得黄色固体31.63mg(I-1-1)，产率88.6％。¹HNMR(300MHz,DMSO-d₆)δ:1.94(s,6H,2×-CH₃),2.70-2.72(t,2H,J＝3Hz,-NCH₂),4.15-4.17(t,2H,J＝3Hz,-OCH₂),6.88(s,2H,3-H),7.03(s,1H,8-H),7.06(d,2H,J＝6Hz,3′,5′-H),7.96(d,2H,J＝6Hz,2′,6′-H),10.04(s,1H,4′-OH),10.22(s,1H,7-OH),13.09(s,1H,5-OH)；ESI-MS:m/z358[M+H]⁺。

实施例55-羟基-7-(甲氧基甲氧基)-2-(4-(甲氧基甲氧基)苯基)-6-(2-吗啉基乙氧基)-4H-色酮(6-1-4)的制备

取吗啉(8.7ml,0.1mol)加入到20ml甲苯溶液中，然后室温下滴加2-氯-1-乙醇(0.05mol,3.4ml)，回流反应3小时后，将反应液抽滤，甲苯洗涤。接着将二氯亚砜(10ml)加入到滤液中，再回流反应2小时，反应结束后，将滤液减压浓缩，残留物用无水乙醇重结晶，得到的固体4-(2-氯乙基)吗啉直接用于下步反应。取化合物4(100mg,0.27mmol)加入到DMF(20mL)溶液中，冰浴下依次加入K₂CO₃(44mg,0.32mmol)和KI(11mg,0.07mmol)，然后加入4-(2-氯乙基)吗啉(48mg,0.32mmol)，室温反应12小时后，反应液用乙酸乙酯萃取(50ml×3)，饱和食盐水(100nl)洗涤，干燥，浓缩，残留物柱层析分离纯化，洗脱剂石油醚：乙酸乙酯(4：1)。得黄色固体109.4mg(6-1-4)，产率83.2％。¹HNMR(300MHz,DMSO-d₆)δ:1.32-1.36(2H,J＝5.4Hz,-NCH₂),1.38-1.41(4H,J＝5.4Hz,-NCH₂),3.52(s,3H,-OCH₃),3.61(s,3H,-OCH₃),4.00-4.04(2H,J＝5.2Hz,-OCH₂),4.15-4.19(4H,J＝5.2Hz,-OCH₂),5.21(s,2H,-OCH₂),5.35(s,2H,-OCH₂),6.88(s,1H,3-H),6.97(s,1H,8-H),7.12(d,2H,J＝8.7Hz,3′,5′-H),8.04(d,2H,J＝8.7Hz,2′,6′-H),12.88(s,1H,5-OH).ESI-MS:m/z488[M+H]⁺。

实施例65,7-二羟基-2-(4-羟基苯基)-6-(2-吗啉基乙氧基)-4H-色酮(I-1-4)的制备

取6-1-4(48.7mg,0.10mmol)加入到5ml二氯甲烷和5ml乙醚的混合溶液中，冰浴冷却下加入盐酸(1ml)，室温反应2小时后，反应液加入水20ml，乙酸乙酯提取(20ml×3)，饱和食盐水(20ml)洗涤，干燥，浓缩，残留物柱层析分离纯化，洗脱剂石油醚：乙酸乙酯(4：1)。得黄色固体35.6mg(I-1-4)，产率89.2％。¹HNMR(300MHz,DMSO-d₆)δ:1.30-1.35(2H,J＝5.4Hz,-NCH₂),1.36-1.39(4H,J＝5.4Hz,-NCH₂),4.01-4.05(2H,J＝5.2Hz,-OCH₂),4.13-4.17(4H,J＝5.2Hz,-OCH₂),6.93(s,1H,3-H),6.99(s,1H,8-H),7.11(d,2H,J＝8.7Hz,3′,5′-H),8.06(d,2H,J＝8.7Hz,2′,6′-H),12.89(s,1H,5-OH).ESI-MS:m/z400[M+H]⁺。

实施例75-羟基-7-(甲氧基甲氧基)-2-(4-(甲氧基甲氧基)苯基)-6-(2-(4-甲基哌嗪基)乙氧基)-4H-色酮(6-1-5)的制备

取甲基哌嗪(11ml,0.1mol)加入到20ml甲苯溶液中，然后室温下滴加2-氯-1-乙醇(0.05mol,3.4ml)，回流反应3小时后，将反应液抽滤，甲苯洗涤。接着将二氯亚砜(10ml)加入到滤液中，再回流反应2小时，反应结束后，将滤液减压浓缩，残留物用无水乙醇重结晶，得到的固体1-(2-氯乙基)-4-甲基哌嗪直接用于下步反应。取化合物4(100mg,0.27mmol)加入到DMF(20mL)溶液中，冰浴下依次加入K₂CO₃(44mg,0.32mmol)和KI(11mg,0.07mmol)，然后加入4-(2-氯乙基)吗啉(48mg,0.32mmol)，室温反应12小时后，反应液用乙酸乙酯萃取(50ml×3)，饱和食盐水(100nl)洗涤，干燥，浓缩，残留物柱层析分离纯化，洗脱剂石油醚：乙酸乙酯(4：1)。得黄色固体100.3mg(6-1-4)，产率74.3％。¹HNMR(300MHz,DMSO-d₆)δ:1.08(s,3H,-NCH₃),1.23-1.26(t,4H,J＝4.5Hz),1.28-1.31(t,2H,J＝4.2Hz),1.35-1.38(t,4H,J＝4.5Hz),3.53(s,3H,-OCH₃),3.64(s,3H,-OCH₃),4.02-4.05(t,2H,J＝4.2Hz),5.22(s,2H,-OCH₂),5.36(s,2H,-OCH₂),6.95(s,1H,3-H),6.98(s,1H,8-H),7.11(d,2H,J＝5.1Hz,3′,5′-H),8.05(d,2H,J＝5.1Hz,2′,6′-H),12.95(s,1H,5-OH).ESI-MS:m/z501[M+H]⁺。

实施例85,7-二羟基-2-(4-羟基苯基)-6-(2-(4-甲基哌嗪基)乙氧基)-4H-色酮(I-1-5)的制备

取6-1-5(50mg,0.10mmol)加入到5ml二氯甲烷和5ml乙醚的混合溶液中，冰浴冷却下加入盐酸(1ml)，室温反应2小时后，反应液加入水20ml，乙酸乙酯提取(20ml×3)，饱和食盐水(20ml)洗涤，干燥，浓缩，残留物柱层析分离纯化，洗脱剂石油醚：乙酸乙酯(4：1)。得黄色固体35.6mg(I-1-5)，产率86.5％。¹HNMR(300MHz,DMSO-d₆)δ:1.06(s,3H,-NCH₃),1.25-1.28(t,4H,J＝4.5Hz),1.30-1.33(t,2H,J＝4.2Hz),1.36-1.39(t,4H,J＝4.5Hz),4.01-4.04(t,2H,J＝4.2Hz),6.94(s,1H,3-H),6.99(s,1H,8-H),7.10(d,2H,J＝5.1Hz,3′,5′-H),8.06(d,2H,J＝5.1Hz,2′,6′-H),12.92(s,1H,5-OH).ESI-MS:m/z413[M+H]⁺。

实施例95-羟基-7-(甲氧基甲氧基)-2-(4-(甲氧基甲氧基)苯基)-4H-色酮-二甲胺基甲酸酯(6-2-1)的制备

室温下，取二甲胺(66.3ml,1mol)加入到500ml四氯化碳溶液中，然后加入DMF(7.73ml,0.1mol)，30分钟后，滴加三光气(119.1g,0.4mol)溶解在200ml四氯化碳的溶液，回流反应6小时后，反应液浓缩，减压蒸馏得到的液体二甲胺基甲酰氯直接用于下步反应。取化合物4(100mg,0.27mmol)加入到干燥DMF中，冰浴冷却下依次加入碳酸钾(44mg,0.32mmol)，碘甲烷(11mg,0.07mmol)，二甲胺基甲酰氯(35mg,0.32mmol)，室温反应12小时后，向反应液加水50ml，乙酸乙酯提取(50ml×3)，饱和食盐水(100ml)洗涤，干燥，浓缩，残留物柱层析分离纯化，洗脱剂石油醚：乙酸乙酯(4：1)。得黄色固体94.32g(6-2-1)，产率78.5％。δ:2.59(s,6H,-CH₃),3.51(s,3H,-OCH₃),3.63(s,3H,-OCH₃),5.24(s,2H,-OCH₂),5.36(s,2H,-OCH₂),6.74(s,2H,3-H),7.11(s,1H,8-H),7.24(d,2H,J＝9Hz,3′,5′-H),8.02(d,2H,J＝9Hz,2′,6′-H),12.89(s,1H,5-OH)；ESI-MS:m/z446[M+H]⁺。

实施例105,7-二羟基-2-(4-羟基苯基)-4H-色酮-二甲胺基甲酸酯(I-2-1)的制备

取6-2-1(44.5mg,0.10mmol)加入到5ml二氯甲烷和5ml乙醚的混合溶液中，冰浴冷却下加入盐酸(1ml)，室温反应2小时后，反应液加入水20ml，乙酸乙酯提取(20ml×3)，饱和食盐水(20ml)洗涤，干燥，浓缩，残留物柱层析分离纯化，洗脱剂石油醚：乙酸乙酯(1：1)。得黄色固体31.7g(I-2-1)，产率88.9％。¹HNMR(300MHz,DMSO-d₆)δ:2.61(s,6H,-CH₃),6.71(s,2H,3-H),7.10(s,1H,8-H),7.19(d,2H,J＝9Hz,3′,5′-H),8.05(d,2H,J＝9Hz,2′,6′-H),10.50(s,1H,4′-OH),10.67(s,1H,7-OH),13.07(s,1H,5-OH)；ESI-MS:m/z358[M+H]⁺。

实施例115-羟基-7-(甲氧基甲氧基)-2-(4-(甲氧基甲氧基)苯基)-4H-色酮-吗啉基甲酸酯(6-2-4)的制备

室温下，取吗啉(87ml,1mol)加入到500ml四氯化碳溶液中，然后加入DMF(7.73ml,0.1mol)，30分钟后，滴加三光气(119.1g,0.4mol)溶解在200ml四氯化碳的溶液，回流反应6小时后，反应液浓缩，减压蒸馏得到的液体吗啉甲酰氯直接用于下步反应。取化合物4(100mg,0.27mmol)加入到干燥DMF中，冰浴冷却下依次加入碳酸钾(44mg,0.32mmol)，碘甲烷(11mg,0.07mmol)，吗啉基甲酰氯(48mg,0.32mmol)，室温反应12小时后，向反应液加水50ml，乙酸乙酯提取(50ml×3)，饱和食盐水(100ml)洗涤，干燥，浓缩，残留物柱层析分离纯化，洗脱剂石油醚：乙酸乙酯(4：1)。得黄色固体106.8mg(6-2-4)，产率81.2％。¹HNMR(300MHz,DMSO-d₆)δ:3.36-3.51(m,8H,-CH₂),3.55(s,3H,-OCH₃),3.65(s,3H,-OCH₃),5.23(s,2H,-OCH₂),5.37(s,2H,-OCH₂),6.72(s,1H,3-H),6.86(s,1H,8-H),7.12(d,2H,J＝9Hz,3′,5′-H),7.99(d,2H,J＝9Hz,2′,6′-H),12.74(s,1H,5-OH).ESI-MS:m/z488[M+H]⁺。

实施例125,7-二羟基-2-(4-羟基苯基)-4H-色酮-吗啉基甲酸酯(I-2-4)的制备

取6-2-4(49mg,0.10mmol)加入到5ml二氯甲烷和5ml乙醚的混合溶液中，冰浴冷却下加入盐酸(1ml)，室温反应2小时后，反应液加入水20ml，乙酸乙酯提取(20ml×3)，饱和食盐水(20ml)洗涤，干燥，浓缩，残留物柱层析分离纯化，洗脱剂石油醚：乙酸乙酯(4：1)。得黄色固体33.3mg(I-2-4)，产率83.4％。¹HNMR(300MHz,DMSO-d₆)δ:3.39-3.52(m,8H,-CH₂),6.71(s,1H,3-H),6.89(s,1H,8-H),7.16(d,2H,J＝9Hz,3′,5′-H),7.91(d,2H,J＝9Hz,2′,6′-H),10.41(s,1H,4′-OH),10.64(s,1H,7-OH),12.73(s,1H,5-OH).ESI-MS:m/z400[M+H]⁺。

实施例135-羟基-7-(甲氧基甲氧基)-2-(4-(甲氧基甲氧基)苯基)-4H-色酮-甲基哌嗪基甲酸酯(6-2-5)的制备

室温下，取甲基哌嗪(111ml,1mol)加入到500ml四氯化碳溶液中，然后加入DMF(7.73ml,0.1mol)，30分钟后，滴加三光气(119.1g,0.4mol)溶解在200ml四氯化碳的溶液，回流反应6小时后，反应液浓缩，减压蒸馏得到的液体甲基哌嗪甲酰氯直接用于下步反应。取化合物4(100mg,0.27mmol)加入到干燥DMF中，冰浴冷却下依次加入碳酸钾(44mg,0.32mmol)，碘甲烷(11mg,0.07mmol)，甲基哌嗪甲酰氯(52mg,0.32mmol)，室温反应12小时后，向反应液加水50ml，乙酸乙酯提取(50ml×3)，饱和食盐水(100ml)洗涤，干燥，浓缩，残留物柱层析分离纯化，洗脱剂石油醚：乙酸乙酯(4：1)。得黄色固体112mg(6-2-5)，产率83.1％。¹HNMR(300MHz,DMSO-d₆)δ:2.13(s,3H,-CH₃),2.15-2.21(m,4H,-CH₂),3.32-3.38(m,4H,-CH₂),3.53(s,3H,-OCH₃),3.64(s,3H,-OCH₃),5.21(s,2H,-OCH₂),5.35(s,2H,-OCH₂),6.62(s,1H,3-H),6.88(s,1H,8-H),6.98(d,2H,J＝9Hz,3′,5′-H),7.95(d,2H,J＝9Hz,2′,6′-H),12.32(s,1H,5-OH).ESI-MS:m/z501[M+H]⁺。

实施例145,7-二羟基-2-(4-羟基苯基)-4H-色酮-甲基哌嗪基甲酸酯(I-2-5)的制备

取6-2-5(50mg,0.10mmol)加入到5ml二氯甲烷和5ml乙醚的混合溶液中，冰浴冷却下加入盐酸(1ml)，室温反应2小时后，反应液加入水20ml，乙酸乙酯提取(20ml×3)，饱和食盐水(20ml)洗涤，干燥，浓缩，残留物柱层析分离纯化，洗脱剂石油醚：乙酸乙酯(4：1)。得黄色固体34mg(I-2-5)，产率82.5％。¹HNMR(300MHz,DMSO-d₆)δ:2.12(s,3H,-CH₃),2.14-2.20(m,4H,-CH₂),3.30-3.36(m,4H,-CH₂),6.60(s,1H,3-H),6.86(s,1H,8-H),6.92(d,2H,J＝9Hz,3′,5′-H),7.96(d,2H,J＝9Hz,2′,6′-H),12.29(s,1H,5-OH).ESI-MS:m/z413[M+H]⁺。

按以上方法分别制备得到I-1-2、I-1-3、I-1-6、I-2-2、I-2-3和I-2-6，结构式如下：

实施例15灯盏乙素苷元胺基类衍生物对凝血时间的影响

目前，抗血栓化合物的筛选常规方法是考察化合物抑制血小板聚集的活性和对凝血时间的影响，本发明通过测定化合物对凝血时间的影响来考察各化合物抗血栓活性。

具体方法：取健康雄性家兔，30mg/kg家兔体重的戊巴比妥钠生理盐水溶液耳缘静脉注射麻醉，手术分离颈总动脉取血，收集于塑料离心管中，3.8％枸橼酸钠水溶液抗凝(血与抗凝剂体积比为9:1)。800r/min离心10min，制备富血小板血浆(Platelet-richplasma，PRP)，3000r/min离心10min，制备贫血小板血浆(Platelet-poorplasma，PPP)。

将灯盏乙素苷作为对照组，灯盏乙素苷元胺基类衍生物作为实验组，将样品溶于80％乙醇中，配成初始浓度分别约为1.2mg/ml、0.6mg/ml、0.3mg/ml、0.15mg/ml、0.075mg/ml的溶液。

PT(凝血酶原时间)的测定：

原理：凝血活酶与钙离子混合物能使凝血酶原转变为凝血酶，凝血酶使纤维蛋白原转变为纤维蛋白凝块，凝块形成的时间与血浆中的外源性凝血因子含量呈负相关。

方法：测试杯中加入溶媒或受试样品10μL、PPP50μL，在37℃预温孔内预温3min，将测试杯转入测试通道，加入37℃预温的诱导剂PT试剂100μL，记录PPP凝固的时间。

APTT(活化部分凝血活酶时间)的测定：

原理：待测血浆加入活化部分凝血活酶溶液，纤维蛋白原转变为纤维蛋白，测定凝固所需的时间，即为待测血浆活化部分凝血活酶时间(APTT)。如果内源性途径有缺陷，凝固时间即延长，并与单因子缺乏的程度成正比。同样也与内源性途径所需因子的累积缺乏成正比。

方法：测试杯中溶媒或受试样品10μL、加入PPP50μL和预温的APTT试剂50μL，在37℃预温孔内预温5min，将测试杯转入测试通道，加入37℃预温的诱导剂CaCl₂试剂50μL，记录PPP凝固的时间。

TT(凝血酶时间)的测定：

原理：待测血浆加入标定的凝血酶溶液，纤维蛋白原转变为纤维蛋白，测定凝固所需的时间，即为待测血浆凝血酶时间(TT)。

方法：测试杯中加入溶媒或受试样品10μL、PPP50μL，在37℃预温孔内预温3min，将测试杯转入测试通道，加入室温的诱导剂TT试剂50μL，记录PPP凝固的时间。

FIB(纤维蛋白原)的测定：

原理：定量测定纤维蛋白原是普遍使用的经典方法，这种方法是在加入凝血酶后测定稀释血浆的凝集时间。

方法：①：标准曲线的制备：将复溶后的定值血浆分别制成1:5、1:10、1:15、1:20、1:30的稀释血浆。取不同浓度的稀释血浆各200μL，37℃预温3分钟，然后分别加入FIB试剂100μL，测定凝固时间，由血凝仪自动生成曲线并保存。②：测试杯中加入溶媒或受试样品10μL、PPP50μL，在37℃预温孔内预温3min，将测试杯转入测试通道，加入室温的凝血酶(FIB)50μL，记录PPP凝固的时间或浓度。

以上所有实验数据以表示，组间均数比较采用t检验，具体实验结果如表1所示。

表1部分化合物对凝血酶时间的影响情况

从以上数据可以看出，灯盏乙素苷元胺基类衍生物I-1-1、I-1-2、I-1-3、I-1-4、I-1-5与I-1-6、I-2-4、I-2-5抗凝血活性要比灯盏乙素强，其中I-1-1、I-1-2、I-1-3、I-1-4、I-1-5、I-1-6的TT、PT、APTT比灯盏乙素长，而FIB比灯盏乙素低。I-2-4、I-2-5的TT、PT、APTT比灯盏乙素长，而FIB比灯盏乙素高。灯盏乙素苷元胺基类衍生物I-2-6抗凝血活性与灯盏乙素活性相当，其TT、PT比灯盏乙素长，APTT比灯盏乙素短，FIB比灯盏乙素高。

实施例16灯盏乙素苷元胺基类衍生物体外PC12细胞氧化损伤模型的保护活性实验

实验原理：

灯盏乙素对心脑缺血再灌注后损伤保护作用机制目前尚不清楚。有研究认为是心脑组织缺血再灌注后，组织中的氧化自由基(ROS)大量产生，从而造成细胞的氧化损伤。分化的PC12细胞在形态和功能上具有典型的神经内分泌细胞的特征，被广泛用于研究神经元细胞死亡机制、神经生长因子的作用机制、神经用药的疗效和毒理作用等。H₂O₂是氧化自由基(ROS)的主要成分之一，是一种常用的细胞氧化应激诱导剂，广泛用于诱导细胞凋亡模型的研究。

研究发现灯盏乙素对过氧化氢(H₂O₂)和谷氨酸诱导的PC12细胞氧化损伤有显著的保护作用，能显著改善PC12细胞氧化还原能力、抑制H₂O₂诱导的细胞膜磷脂酰丝氨酸外翻、抑制H₂O₂诱导的DNA氧化断裂、抑制caspase-3活性、促进Bcl-2基因的mRNA表达、降低细胞内活性氧自由基(ROS)和Ca²⁺的浓度、稳定线粒体膜电位等。研究广泛认为灯盏乙素可以提高脑缺血病理状态下神经细胞氧化还原的能力，防治脑缺血神经细胞损伤。在灯盏乙素的活性评价体系中常以PC12细胞为体外模型，以H₂O₂与PC12细胞作用模拟细胞的氧化损伤，研究灯盏乙素苷元胺基类衍生物对PC12细胞拟缺血性损伤的保护作用。

MTT法是利用活细胞线粒体中存在的与NADP相关的脱氢酶能使外源性的溴化四氮唑蓝(MTT)还原，生成成难溶性的蓝紫色结晶物(Formazan)并沉积在细胞中，死细胞无此功能。二甲基亚砜(DMSO)或三联液(10％SDS-5％异丁醇-0.01mol/LHCl)能够溶解细胞中的紫色结晶物，用酶联免疫检测仪在570nm波长处测定其吸光值间接反映其活细胞数量。

操作方法：取同一代PC12细胞，消化后按5×10⁴·mL^-1接种于96孔板中，每孔100μL，放入培养箱继续培养24h。将实验分为空白对照组和H₂O₂损伤模型，每组设5个复孔。空白对照组为无血清的DMEM培养液。H₂O₂损伤模型组为选取400μmol·L^-1的H₂O₂损伤时间1小时后，加入100μL受试药物，考察受试药物浓度分别为400μmol·L^-1(高)、200μmol·L^-1(中)、100μmol·L^-1(低)时对PC12细胞氧化损伤模型的保护活性。

MTT法检测细胞活力：加入20μLMTT(5mg·mL^-1)，置培养箱中孵育4h后避光加入150μLDMSO，轻轻振摇10分钟，使结晶物充分溶解。用酶标仪检测在570nm处的吸光度(OD值)。

样品以DMSO溶解，培养液稀释至2.5％，受试药的终浓度为100μmol·L^-1，灯盏乙素作为阳性对照；数据均以表示，组间用t检验，实验结果见表2。

从以上活性数据可以看出，灯盏乙素苷元胺基类衍生物I-1-3、I-1-5、I-1-6对H₂O₂诱导的PC12细胞氧化损伤的保护作用与灯盏乙素相当，在50μM浓度下，其抑制率分别为72.16％、70.89％、68.75％，在25μM浓度下，其抑制率分别为49.63％、47.52％、46.28％，灯盏乙素在50μM浓度和25μM浓度下的抑制率分别为79.07％、53.01％。其他衍生物I-1-1、I-1-2、I-1-4、I-2-2也具有较强的氧化损伤保护作用，在50μM浓度下，其抑制率分别为66.23％、67.15％、64.77％、63.52％，在25μM浓度下，其抑制率分别为44.17％、45.32％、43.18％、42.36％。

表2PC12细胞氧化损伤抑制率及其水溶性检测结果

实施例17灯盏乙素苷元胺基类衍生物溶解性测定

药物溶解性等理化性质可以影响药物的吸收及其生物利用度，灯盏乙素由于其水溶性酯溶性差、体内容易代谢而影响了其生物利用度，为了考查灯盏乙素苷元胺基类衍生物在水中的溶解度，采用紫外分光光度法测定。

取灯盏乙素及其苷元胺基类衍生物各1mg，用少量甲醇溶解，然后加甲醇定容至100ml容量瓶中，即得化合物10μg/ml的标准溶液。

各取对照品标准溶液3、4、5、6、7、8ml，分别置于25ml容量瓶中，加甲醇至刻度，配制浓度为1.2、1.6、2.0、2.4、2.8、3.2μg/ml的对照品工作溶液6份，用UV分光光度计测定333nm处的吸光度，然后将吸光度与对照品溶液浓度进行线性回归，得到标准曲线方程。

取待测化合物分别置于10ml容量瓶中，分别加入纯水6ml，20℃下密闭涡旋10min，进行离心处理，转速为30000r/min，吸取上层水溶液，测定吸光度，通过得到的吸光度计算化合物在水的浓度，结果见表2。

通过表2可以看出，灯盏乙素在水中的溶解度分别为7.62μg/ml，而本发明制备得到的灯盏乙素苷元胺基类衍生物的水溶性比灯盏乙素得到了明显的提高，所有化合物的水溶性都比灯盏乙素提高了至少1.7倍，例如I-1-4、I-1-5、I-1-6、I-2-4、I-2-5、I-2-6在水中的溶解度分别为15.04μg/ml、14.85μg/ml、14.62μg/ml、15.08μg/ml、15.53μg/ml、15.31μg/ml，水溶性比灯盏乙素分别提高1.97倍、1.95倍、1.92倍、1.98倍、2.04倍、2.01倍，因此具有更好的溶解性，可大大改善生物利用度，取得了很好的技术效果。

实施例18灯盏乙素苷元胺基类衍生物在正常和模型大鼠体内的药动学测定

清洁级雄性Wiatar大鼠，7-8周龄，体重(220±20)g，由上海斯莱克实验动物有限责任公司提供。取健康雄性Wistar大鼠32只，随机分为4组，分为灌胃+正常组，灌胃+模型组，尾静脉+正常组，尾静脉+模型组。每组8只。实验前禁食过夜(12h)，可自由饮水。模型组于实验前24h经反复双侧颈总结扎复制脑缺血再灌注模型，实验时灌胃和尾静脉给药相同剂量，即34mg·kg^-1。

大鼠反复脑缺血再灌注模型：用10％水合氯醛0.35mL/100g腹腔注射麻醉，固定，用体积分数为0.75的乙醇消毒，从颈正中切口分离出双侧颈总动脉，在两侧动脉下分别放置两根手术线，使动物静卧2min以平稳因分离颈动脉和迷走神经时引起的血压波动。然后打活结，30min后松开手术线，15min后分别结扎两侧的两根手术线，如此反复2次，缝合皮肤放回笼内，继续饲养，保持室温，21h后用于以下实验。假手术组只分离不结扎。

血浆样品采集和处理：大鼠尾静脉注射给药后，分别于1，5，15，30min，1，1.5，2.0，3.0，4.0，5.0，7.0，10.0，12.0，15.0，24.0h后经眼底颈静脉丛取血0.5mL置肝素化的离心管中，离心后取上层血浆200μL，依次加入10μl内标氯霉素工作液、1mol·L-1醋酸100μL，摇匀，加入3mL乙酸乙酯，涡旋1min，3000r·min^-1离心5min，取上清液2mL，离心浓缩，用200μL60％乙腈溶解残渣，13000r·min^-1离心10min，取上清液作为供试品。大鼠灌胃给药后，分别于1，5，15，30min，1，1.5，2.0，3.0，4.0，5.0，7.0，10.0，12.0，15.0，24.0h后经眼底颈静脉丛取血0.5mL置肝素化的离心管中，离心后取上层血浆200μL，依次加入10μL内标氯霉素工作液、1mol·L-1醋酸100μL，摇匀，加入3mL乙酸乙酯，涡旋1min，3000r·min^-1离心5min，取上清液2mL，离心浓缩，用200μL60％乙腈溶解残渣，13000r·min^-1离心10min，取上清液作为供试品。

数据处理：血药浓度-时间数据用DAS2.0药动学软件对血药浓度数据进行药动学分析。

表3灯盏乙素(1)和灯盏乙素胺基类衍生物药动学参数

通过以上表3的灌胃和尾静脉注射给药途径药动学结果，所有灯盏乙素苷元胺基类衍生物的生物利用度全部比灯盏乙素高，而灯盏乙素在大鼠体内代谢迅速，例如灌胃给药时，在正常组中的T_1/2仅为(13.58±1.64)h，在模型组中仅为(10.28±2.19)。尾静脉注射给药时，灯盏乙素在正常组中的T_1/2仅为(0.43±0.05)h，在模型组中仅为(0.63±0.03)。本发明所合成的所有灯盏乙素苷元衍生物的T_1/2均比灯盏乙素长。灯盏乙素灌胃给药时，在正常组中的AUC_(0-t)为(559.76±43.78)ngh/ml，在模型组中为(675.74±69.89)ngh/ml。尾静脉注射给药时，灯盏乙素在正常组中的AUC_(0-t)为(810.31±39.35)ngh/ml，在模型组中为(970.56±92.63)ngh/ml。并且本发明所合成的所有灯盏乙素苷元衍生物的AUC_(0-t)均比灯盏乙素大。灯盏乙素灌胃给药时，在正常组中的生物利用度F(％)为2.57％，在模型组中为3.22％。尾静脉注射给药时，灯盏乙素在正常组中的生物利用度F(％)为2.62％，在模型组中为3.43％。以上结果表明本发明所合成的所有灯盏乙素苷元衍生物的生物利用度均比灯盏乙素高，取得了非常好的技术效果，可克服现有技术的不足。

由以上表实验结果表明，和对照组灯盏乙素相比，本发明提供的具有通式Ⅰ的灯盏乙素苷元胺基类衍生物能提高抗凝血活性、PC12细胞氧化损伤保护活性、水溶性以及更高的生物利用度。且可以把灯盏乙素苷元胺基类衍生物和酸或碱反应制备得到系列盐化物，以进一步改善水溶性，从而制备成不同剂型，因此本发明提供的灯盏乙素苷元胺基类衍生物及其盐化物有望进一步开发成为治疗心肌梗塞、缺血性损伤、中风等血栓性疾病的药物。

Claims (10)

1.灯盏乙素苷元胺基类衍生物，其特征在于，它们是具有通式(Ⅰ)所示的衍生物：

其中R₁和R₂相同或不同，各自独立的代表C1～C10的烷基；

或者R₁代表氢，R₂代表吗啉基、哌啶基、哌嗪基或取代哌嗪基；

X代表亚甲基或羰基；

n为1～4的整数。

2.根据权利要求1所述的灯盏乙素苷元胺基类衍生物，其特征在于，所述的烷基为甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基或异丁基。

3.根据权利要求1所述的灯盏乙素苷元胺基类衍生物，其特征在于，所述的取代哌嗪基为甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、正戊基、异戊基取代的哌嗪基。

4.权利要求1所述的灯盏乙素苷元胺基类衍生物的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

a、取灯盏乙素1为起始原料，在浓硫酸的催化下，于体积浓度95％乙醇溶液中加热水解，得到灯盏乙素苷元2，备用；

b、取步骤a得到的灯盏乙素苷元2在丙酮溶液中，与氯甲醚反应得到灯盏乙素苷元甲醚衍生物3、4、5，其中二醚衍生物4备用；

c、X＝CH₂,n＝1,2,3,4时，胺基边链采用下面反应路线，即二胺基化合物首先与氯取代醇反应得到胺基醇化合物，然后胺基醇化合物在二氯亚砜作用下，经过醇羟基氯化得到氯取代胺基边链；

X＝CO,n＝0时，胺基边链采用下面反应路线，即二胺基化合物直接与三光气反应得到氯取代胺基边链；

X＝CO,n＝1,2,3,4时，胺基边链采用下面反应路线，即二胺基化合物直接与氯取代酰氯化合物反应得到氯取代胺基边链；

d、取步骤b得到的二醚衍生物4在DMF溶液中，与步骤c得到的氯取代胺基边链，反应得到灯盏乙素苷元化合物6，备用；

e、取步骤d得到的灯盏乙素苷元化合物6，在盐酸的作用下，脱去甲醚保护基得到灯盏乙素苷元胺基类衍生物；

结构式如下通式(Ⅰ)：

5.根据权利要求4所述的灯盏乙素苷元胺基类衍生物的制备方法，其特征在于，步骤a中所用的浓硫酸的摩尔浓度为0～3mol/L，灯盏乙素(1)与95％乙醇的用量比为5g/100ml～10g/100ml，反应温度为70～90℃；反应时间为12～48小时。

6.根据权利要求4所述的灯盏乙素苷元胺基类衍生物的制备方法，其特征在于，步骤b中所用的氯甲醚摩尔当量为1：2～4；

反应催化剂为碳酸钾、碳酸钠、氢氧化钾、氢氧化钠，催化剂摩尔当量为1：2～4；

反应温度为回流，反应时间为4～12小时。

7.根据权利要求4所述的灯盏乙素苷元胺基类衍生物的制备方法，其特征在于，步骤c中X＝CH₂,n＝1,2,3,4时，氯取代醇摩尔当量为1：1.2～1.5，反应温度为回流，反应溶剂为四氯化碳或苯，反应时间为8～16小时；醇氯化时反应催化剂SOCl₂的当量为1：5～8，反应温度为回流，反应溶剂为四氯化碳或苯，反应时间为6-10小时；

步骤c中X＝CO,n＝0时，三光气的摩尔当量为1：1.5～2.0，反应催化剂为DMF，DMF摩尔当量为1：0.2～0.8，反应温度为回流，反应溶剂为四氯化碳或苯，反应时间为10～24小时；

步骤c中X＝CO,n＝1,2,3,4时，氯取代酰氯的摩尔当量为1：1.2～2.0，反应温度为回流，反应溶剂为四氯化碳或苯，反应时间为12～24小时。

8.根据权利要求4所述的灯盏乙素苷元胺基类衍生物的制备方法，其特征在于，步骤d中所用的氯取代胺基边链的摩尔当量为1：1.2～2；

反应催化剂为碳酸钾、碳酸钠、氢氧化钾或氢氧化钠，反应催化剂摩尔当量为1：1.2～2，反应温度为20℃～30℃，反应溶剂为DMF，反应时间为6～24小时。

9.根据权利要求4所述的灯盏乙素苷元胺基类衍生物的制备方法，其特征在于，步骤e中所用的盐酸浓度为1.0～3.0M，反应温度为0℃～30℃，反应溶剂为乙醚、二氯甲烷或两种溶剂的混合溶剂，反应时间为1～6小时。

10.权利要求1至3任一项所述的灯盏乙素苷元胺基类衍生物在制备防治心肌梗死、缺血性损伤血栓性疾病药物中的应用。