CN105153119A - 吡啶嘧啶胺类化合物或吡啶吡啶胺类化合物及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种式Ⅰ所示的吡啶嘧啶胺类化合物或吡啶吡啶胺类化合物及其在制备抗肿瘤药物中的应用，属于药物技术领域。该类化合物可以选择性抑制CDK4和CDK6，使肿瘤细胞的G1期细胞生长停止和S期细胞减少，能有效降低肿瘤抑制蛋白Rb在Ser780位点的磷酸化，从而能够用于CDK4和CDK6所参与的细胞周期控制失调导致的各种疾病，特别适用于恶性肿瘤的治疗，具有选择性高、活性高和抗肿瘤细胞增殖作用强的特点。

Description

吡啶嘧啶胺类化合物或吡啶吡啶胺类化合物及其应用
技术领域
本发明涉及药物化学技术领域，特别是涉及一种吡啶嘧啶胺类化合物和吡啶吡啶胺类化合物及其制备方法和应用。
背景技术
周期蛋白依赖性蛋白激酶(cyclin-dependentkinase，CDK)和周期蛋白(cyclin)是细胞周期调控中的重要因子。CDK可以和cyclin结合形成异二聚体，其中CDK为催化亚基，cyclin为调节亚基，形成各种cyclin-CDK复合物，使不同底物磷酸化，对细胞周期不同的时相起推进和转化作用。
在哺乳动物中至少存在9种CDK。细胞由G1期向S期转化主要受G1期CDK激酶控制。与G1期cyclin结合的CDK激酶主要包括CDK2、CDK4和CDK6。CyclinD主要与CDK4和CDK6结合并调节后者活性；CyclinE在G1/S期与CDK2结合，呈现CDK2的激酶活性促进细胞进入S期。G2/M期主要受CDK1激酶调控，CyclinA、cyclinB与CDK1结合，CDK1使底物蛋白磷酸化，如将组蛋白H1磷酸化则导致染色体凝缩，如将核纤层蛋白磷酸化则使核膜解体。在M期，M期促发因子(MPF)激活后期促进因子APC，将泛素连接在cyclinA和cyclinB上，通过多泛素化作用，使它们被蛋白酶体降解，完成一个细胞周期(MalumbresM.etal.，NatCellBiol11:1275,2009；MalumbresM.etal.，NatRevCancer9:153,2009)。
细胞周期失控是人体肿瘤的一大共同特征。肿瘤细胞通常发生非常规增殖、基因组不稳定性(DNA突变增加和染色体畸变)和染色体不稳定性(增加染色体数量)。细胞周期受CDKs家族激酶调控。肿瘤细胞由于CDKs本身或它们的调制物或促有丝分裂的上游通路相关基因和表观遗传基因改变，导致CDKs活性异常(CicenasJ.J.，CancerResClinOncol147:1409,2011；RizzolioF,etal.，CurrDrugTargets.11:279,2010)。过去十年来，CDK抑制剂作为抗肿瘤新药开发成为全球药业的一个热点，有超过20个CDK抑制剂进入临床开发。尽管CDK抑制剂抗肿瘤临床前药效学结果显著，但是早前多数临床试验结果不尽人意。主要问题包括在实体瘤缺乏疗效和毒性较大(Guha,M.NatRevDrugDis11:892,2012)。CDK抑制剂AG-24322、ZK-304709、SNS-032、R547、Seliciclib和AZD5438因为疗效和毒性原因导致临床研究终止。而在分析产生严重毒副作用的原因后发现，这些药物对CDK亚型抑制缺乏选择性，因此产生了严重的毒副作用。
近年来研究表明，CDK抑制剂的毒副作用与CDK1和CDK2的抑制有关(PatrickJ，etal.,JNatlCancerInst104:476,2012)。CDK1和CDK2参与正常细胞周期调控，在其它CDKs被抑制的情况下，保留CDK1活性足以维持正常细胞周期。复合物CyclinE-CDK2为正常细胞从G1期进入S期的关键激酶复合物，在细胞从G1期进入S期过程中起重要作用。与此相反，CDK4和CDK6亚型不是哺乳细胞周期所必需，它们仅仅对特殊细胞类型增殖起重要作用，其成为抑制肿瘤的关键靶点。CDK4和CDK6是两个密切相关的激酶，在肿瘤细胞周期中与cyclinD结合促使G1期进入S期，是DNA复制和细胞分裂的细胞周期进程所必需的。而超过90％的人类肿瘤中，均发现通过各种的基因和生化适应导致G1-S期的过渡控制机制改变。P16和人视网膜母细胞瘤抑制蛋白(retinoblastoma，Rb)是重要的肿瘤抑制蛋白，能调控细胞周期。P16基因蛋白抑制CDK4、cyclinD1和Rb的反馈回路，并通过调节Rb的蛋白活性，从而防止细胞过度增殖，以达到抑制肿瘤的目的。已经证明在人体肿瘤中(如乳腺癌和骨髓瘤)，CDK4和CDK6激活导致细胞周期改变发生。而抑制CDK4和CDK6，可阻止肿瘤抑制蛋白Rb的失活和干扰肿瘤细胞周期进展(ChoiY.JandAndersL，Oncogene33：1890，2014)。
最近的研究还发现，CDK6作为转录复合物的一部分，诱导肿瘤抑制基因p16INK4a和促血管生成因子VEGF-A的表达。CDK6可以通过增强细胞增殖和血管生成刺激发挥其肿瘤的促进作用(KarolineK.etal,CancerCell24:167,2013)。
Palbociclib(PD-0332991)能够选择性的抑制CDK4和CDK6，恢复细胞周期控制，从而阻断肿瘤细胞增殖。2015年2月美国FDA批准palbociclib联合来曲唑(letrozole)用于治疗ER+/HER2-绝经后晚期乳腺癌。根据辉瑞II期研究，在绝经后女性雌激素受体阳性(ER+)、人表皮生长因子受体2阴性(HER2-)局部晚期或转移性乳腺癌患者中，与标准治疗药物来曲唑治疗组相比，palbociclib和来曲唑联合用药组的疾病无进展生存期(PFS)取得了统计学意义上的显著延长(20.2个月vs10.2个月，p＝0.0004)，达到了研究的主要终点。与非选择性CDK抑制剂不同，CDK4/6抑制剂PD-0332991的副作用较少。主要包括白细胞减少和疲劳(PfizerPressRelease2014.4.6)的副作用较少。
除Palbociclib以外，选择性CDK4和CDK6抑制剂LY2835219和LEE011也已进入用于治疗晚期乳腺癌的三期临床试验。由于CDK4/6在各种实体肿瘤和血液肿瘤的细胞周期控制失调中起关键作用，目前，这些药物的临床评价还包括转移性乳腺癌、脂肪肉瘤、非小细胞肺癌、成神经细胞瘤，肝癌、卵巢癌、胶质母细胞瘤、黑素瘤、多发性骨髓瘤和淋巴瘤。
发明内容
基于此，本发明的目的在于提供一种吡啶嘧啶胺类化合物或吡啶吡啶胺类化合物，该类化合物能够选择性的抑制周期蛋白依赖性蛋白激酶(CDKs)CDK4和CDK6，可用于CDK4和CDK6参与的细胞周期控制失调导致的各种疾病，特别是恶性肿瘤的治疗中。
实现上述发明目的的具体技术方案如下：
具有式Ⅰ结构的吡啶嘧啶胺类化合物或吡啶吡啶胺类化合物或者其药学上可接受的盐或立体异构体或其前药分子：
其中：
X和Y分别独立选自：CR7R8,C＝O,O,N或S，且X和Y不能同时是杂原子；
W选自：C或N；
R1选自：H，C1-C6烷基，C3-C6环烷基，C3-C6环烷基取代甲基；
R2和R3分别独立选自：H或卤素；
R4选自：H，C1-C6烷基；
当Y选自CR7R8,C＝O时，R5选自如下基团：
当Y选自O，N或S时，R5选自：
其中：
Z选自：C，N或O，且当Z是O时，R6不存在；
m选自：0，1或2；
n选自：1，2或3；
R6选自：H，C1-C6烷基，C3-C6环烷基，C3-C6环烷基取代C1-C6烷基，苯甲基，乙酰基，C1-C6烷基磺基，卤素取代C1-C6烷基，羟基取代C1-C6烷基，C1-C6烷氧基取代C1-C6烷基，氨基取代C1-C6烷基，C1-C6烷基胺基取代C1-C6烷基，C1-C6烷基砜取代C1-C6烷基，C1-C6烷基取代胺基，C3-C6环胺基；
R7和R8分别独立选自：H,C1-C6烷基，C3-C6环烷基。
在其中一些实施例中，X-Y选自：NH-CH2，CR7R8-NH，O-CH2，或CH2-O。
在其中一些实施例中，R5选自：
其中：Z选自N；m选自：0，1或2；n选自：1，2或3。
在其中一些实施例中，
X-Y选自：NH-CH2，CH2-NH，O-CH2或CH2-O；
R5选自：
其中：Z选自N；m选自：1；n选自：2。
在其中一些实施例中，R6选自：H，C1-C6烷基，羟基取代C1-C6烷基，C1-C6烷氧基取代C1-C6烷基，C3-C6环烷基取代C1-C6烷基。
在其中一些实施例中，R6选自：H，甲基，乙基，丙基，2-羟基乙基，3-羟基丙基，2-甲氧基乙基，环丙基甲基。
在其中一些实施例中，R1选自C1-C6烷基。
在其中一些实施例中，R2和R3分别独立选自卤素。
在其中一些实施例中，R4选自C1-C3烷基。
在其中一些实施例中，
W选自C；
R1选自C1-C6烷基；
R2和R3均选自卤素；
R4选自C1-C6烷基；
X-Y选自：O-CH2；
R5选自：
其中：Z选自N；m选自1；n选自2；
R6选自：C1-C6烷基。
在其中一些实施例中，
W选自N；
R1选自异丙基或丙基；
R2和R3均选自氟；
R4选自C1-C6烷基；
X-Y选自：NH-CH2，CH2-NH，O-CH2，或CH2-O；
R5选自：
其中：Z选自N；m选自1；n选自2；
R6选自：C1-C6烷基，羟基取代C1-C6烷基，C1-C6烷氧基取代C1-C6烷基。
在其中一些实施例中，所述化合物选自：
本发明的另一目的是提供上述化合物的应用。
实现上述目的的具体技术方案如下：
上述吡啶嘧啶胺类化合物或吡啶吡啶胺类化合物或者其药学上可接受的盐或立体异构体或其前药分子在制备CDK4和CDK6抑制剂中的应用。
上述吡啶嘧啶胺类化合物或吡啶吡啶胺类化合物或者其药学上可接受的盐或立体异构体或其前药分子在制备防治肿瘤的药物中的应用。
在其中一些实施例中，所述肿瘤为实体肿瘤和血液肿瘤。
在其中一些实施例中，所述实体肿瘤和血液肿瘤包括乳腺癌，肠癌，脂肪肉瘤，非小细胞肺癌，肝癌，卵巢癌，胶质母细胞瘤，成神经细胞瘤，黑素瘤，膀胱癌，口腔癌，子宫癌，多发性骨髓瘤和淋巴瘤
在其中一些实施例中，所述乳腺癌包括：在绝经后女性雌激素受体阳性和/或人表皮生长因子受体2阴性的局部晚期或转移性乳腺癌。
本发明的另一目的是提供一种防治肿瘤的药物组合物。
实现上述目的的具体技术方案如下：
一种防治肿瘤的药物组合物，其特征在于，包括作为活性成份的上述的吡啶嘧啶胺类化合物或吡啶吡啶胺类化合物或者其药学上可接受的盐或立体异构体或其前药分子，以及药学上可接受的载体。
在其中一些实施例中，所述肿瘤包括乳腺癌，肠癌，脂肪肉瘤，非小细胞肺癌，肝癌，卵巢癌，胶质母细胞瘤，成神经细胞瘤，黑素瘤，膀胱癌，口腔癌，子宫癌，多发性骨髓瘤和淋巴瘤。
本发明的式Ⅰ所示的吡啶嘧啶胺类化合物或吡啶吡啶胺类化合物，是一系列新的化合物，该类化合物可以选择性抑制CDK4和CDK6，使肿瘤细胞的G1期细胞生长停止和S期细胞减少，能有效降低肿瘤抑制蛋白Rb在Ser780位点的磷酸化，从而能够用于CDK4和CDK6所参与的细胞周期控制失调导致的各种疾病，特别适用于恶性肿瘤的治疗。
特别是其中部分化合物具有选择性高、活性高和抗肿瘤细胞增殖作用强的特点，对CDK4和CDK6抑制的IC50能达到50nM以下，甚至10nM以下，而对CDK2抑制的IC50大于500nM，几乎无抑制活性。
附图说明
图1为实施例31中的蛋白免疫印迹实验中Rb蛋白磷酸化实验结果；
图2为化合物5对大鼠灌胃给药后的药代动力学曲线图；
图3为化合物7对大鼠灌胃给药后的药代动力学曲线图；
图4为化合物20对大鼠灌胃给药后的药代动力学曲线图；
图5为化合物29对大鼠灌胃给药后的药代动力学曲线图。
具体实施方式
本发明所述化合物中，当任何变量(例如R1、R2等)在任何组分中出现超过一次，则其每次出现的定义独立于其它每次出现的定义。同样，允许取代基及变量的组合，只要这种组合使化合物稳定。自取代基划入环系统的线表示所指的键可连接到任何能取代的环原子上。要理解本领域普通技术人员可选择本发明化合物的取代基及取代型式而提供化学上稳定的并可通过本领域技术和下列提出的方法自可容易获得的原料容易的合成的化合物。如果取代基自身被超过一个基团取代，应理解这些基团可在相同碳原子上或不同碳原子上，只要使结构稳定。
本文所用术语“烷基”意指包括具有特定碳原子数目的支链的和直链的饱和脂肪烃基。例如，“C1-C6烷基”中“C1-C6”的定义包括以直链或支链排列的具有1、2、3、4、5或6个碳原子的基团。术语“环烷基”指具有特定碳原子数目的单环饱和脂肪烃基。例如“环烷基”包括环丙基、甲基-环丙基、2,2-二甲基-环丁基、2-乙基-环戊基、环己基等。
正如本领域技术人员所理解的，本文中所用“卤素”意指包括氯、氟、溴和碘。
本发明包括式Ⅰ-Ⅲ化合物的游离形式，也包括其药学上可接受的盐及立体异构体。本文中一些特定的示例性化合物为胺类化合物的质子化了的盐。术语“游离形式”指以非盐形式的胺类化合物。包括在内的药学上可接受盐不仅包括本文所述特定化合物的示例性盐，也包括所有式Ⅰ-Ⅲ化合物游离形式的典型的药学上可接受的盐。可使用本领域已知技术分离所述化合物特定盐的游离形式。例如，可通过用适当的碱稀水溶液例如NaOH稀水溶液、碳酸钾稀水溶液、稀氨水及碳酸氢钠稀水溶液处理该盐使游离形式再生。游离形式在某些物理性质例如在极性溶剂中溶解度上与其各自盐形式多少有些区别，但是为发明的目的这种酸盐及碱盐在其它药学方面与其各自游离形式相当。
可通过常规化学方法自含有碱性部分或酸性部分的本发明化合物合成本发明的药学上可接受的盐。通常，通过离子交换色谱或通过游离碱和化学计算量或过量的所需盐形式的无机或有机酸在适当溶剂或多种溶剂的组合中反应制备碱性化合物的盐。类似的，通过和适当的无机或有机碱反应形成酸性化合物的盐。
因此，本发明化合物的药学上可接受的盐包括通过碱性本发明化合物和无机或有机酸反应形成的本发明化合物的常规无毒盐。例如，常规的无毒盐包括自无机酸例如盐酸、氢溴酸、硫酸、氨基磺酸、磷酸、硝酸等制备的盐，也包括自有机酸例如乙酸、丙酸、琥珀酸、乙醇酸、硬脂酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、抗坏血酸、扑酸、马来酸、羟基马来酸、苯乙酸、谷氨酸、苯甲酸、水杨酸、对氨基苯磺酸、2一乙酰氧基一苯甲酸、富马酸、甲苯磺酸、甲磺酸、乙烷二磺酸、草酸、羟乙基磺酸、三氟乙酸等制备的盐。
如果本发明化合物为酸性的，则适当的“药学上可接受的盐”指通过药学上可接受的无毒碱包括无机碱及有机碱制备的盐。得自无机碱的盐包括铝盐、铵盐、钙盐、铜盐、铁盐、亚铁盐、锂盐、镁盐、锰盐、亚锰盐、钾盐、钠盐、锌盐等。特别优选铵盐、钙盐、镁盐、钾盐和钠盐。得自药学上可接受的有机无毒碱的盐，所述碱包括伯胺、仲胺和叔胺的盐，取代的胺包括天然存在的取代胺、环状胺及碱性离子交换树脂例如精氨酸、甜菜碱、咖啡因、胆碱、N,N'－二苄基乙二胺、二乙胺、2一二乙基氨基乙醇、2一二甲基氨基乙醇、氨基乙醇、乙醇胺、乙二胺、N一乙基吗啉、N一乙基哌啶、葡萄糖胺、氨基葡萄糖、组氨酸、羟钴胺、异丙基胺、赖氨酸、甲基葡萄糖胺、吗啉、哌嗪,哌啶、呱咤、多胺树脂、普鲁卡因、嘌呤、可可碱、三乙胺、三甲胺、三丙胺、氨基丁三醇等。
除在文献中已知的或在实验程序中例证的标准方法外，可采用如下合成方案(方案1-6)中的方法制备本发明化合物。结合下述的合成方案，能够对本发明中所述的化合物以及合成方法进行更好的理解。所述的合成方案描述了可以用于制备本发明中所述的化合物的方法，所述的方法仅仅是为说明目的的说明性方案描述，并不构成对本发明所具有的范围的限制。
方案1
方案2
方案3
方案4
方案5
方案6
以下结合实施例对本发明做进一步的描述，但该实施例并非用于限制本发明的保护范围。
实施例1：N2-(5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)嘧啶-2-基)-N5-(哌啶-4-甲基)吡啶-2，5-二胺(N2-(5-fluoro-4-(4-fluoro-1-isopropyl-2-methyl-1H-benzo[d]imidazol-6-yl)pyrimidin-2-yl)-N5-(piperidin-4-ylmethyl)pyridine-2,5-diamine)(化合物1)的制备
步骤1a:N-异丙基乙酰胺(N-Isopropyl-acetamide)(化合物102-1)的制备
将异丙胺(10克，0.169摩尔，1.0当量)和三乙胺(23.58毫升，0.338摩尔，2.0当量)预先混合于100毫升的二氯甲烷中。冷却至0℃，缓慢地往反应液中滴加乙酸酐(16.15毫升，0.338摩尔，2.0当量)，室温反应过夜。减压浓缩，浓缩液用乙酸乙酯萃取，有机相用无水硫酸钠干燥。将有机相减压浓缩，即得到化合物N-异丙基乙酰胺(15.05克，收率：88％)。1HNMR(500MHz,CDCl3)δ8.19(s,1H),4.05–3.87(m,1H),1.84(s,3H),1.04(s,3H),1.02(s,3H).
步骤1b:N-(4-溴-2,6-二氟苯基)-N'-异丙基乙脒(N-(4-Bromo-2,6-difluoro-phenyl)-N'-isopropylacetamidine(化合物103-1)的制备
将4-溴-2,6-二氟-苯胺(13克，62.8毫摩尔，1.0当量)，化合物102-1(12.7克，125.7毫摩尔，2.0当量)，三氯氧磷(6.70毫升，128.5摩尔，2.05当量)预先混合于150毫升甲苯中。在氮气保护下，加入三乙胺(13毫升，128.5毫摩尔，2.05当量)。然后将反应体系加热至回流，搅拌反应3小时。冷却至室温，旋干溶剂。用乙酸乙酯萃取，有机相用饱和的碳酸氢钠溶液洗涤多次，以除去残留的酸，再用无水硫酸钠干燥，浓缩。浓缩物用硅胶柱分离(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝10/1至8/1)后得到黄色固体N-(4-溴-2,6-二氟苯基)-N'-异丙基乙脒(18克，收率：99％)。LCMS(ESI):m/z292[M+H]+。
步骤1c:6-溴-4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑(6-Bromo-4-fluoro-1-isopropyl-2-methyl-1H-benzoimidazole)(化合物104-1)的制备
首先将化合物103-1(16.5克，56.9毫摩尔，1.0当量)溶解于250毫升四氢呋喃中，在氮气保护下，加热至回流。将溶有叔丁醇钾(6.38克，56.9毫摩尔，1.0当量)的20毫升四氢呋喃溶液慢慢滴加到反应体系中，回流反应1小时。冷却至室温，用乙酸乙酯萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，旋干。粗品通过柱层析纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝10/1至3/1)，即得到化合物6-溴-4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑(10.53克，收率：69％)。LCMS(ESI):m/z272[M+H]+。
步骤1d:4-氟-1-异丙基-2-甲基-6-硼酸频哪醇酯-1H-苯并咪唑(4-fluoro-1-isopropyl-2-methyl-6-(4,4,5,5-tetramethyl-[1,3,2]dioxaborolan-2-yl)-1H-benzoimidazole)(化合物105-1)的制备
首先将化合物104-1(3克，11毫摩尔)，双联频哪醇硼酯(4.215克，17毫摩尔，1.5当量)，三环己基磷(0.54克，1.87毫摩尔，0.17当量)，醋酸钾(3.27克，33毫摩尔，3.0当量)混合于100毫升二甲基亚砜中。在氮气保护下，加入醋酸钯(0.24克，1.0毫摩尔，0.1当量)，加热至100℃，反应2小时。冷却至室温，乙酸乙酯萃取，有机相用饱和食盐水洗涤多次，无水硫酸钠干燥，旋干即得到化合物4-氟-1-异丙基-2-甲基-6-硼酸频哪醇酯-1H-苯并咪唑，直接用于下一步。
步骤1e:6-(2-氯-5-氟-嘧啶-4-基)-4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑(6-(2-Chloro-5-fluoro-pyrimidin-4-yl)-4-fluoro-1-isopropyl-2-methyl-1H-benzoimidazole)(化合物107-1)的制备
将2,4-二氯-5-氟-嘧啶(106-1)(1克，3.14毫摩尔，1.0当量)，双三苯基磷二氯化钯(0.42克，0.314毫摩尔，0.1当量)，无水碳酸钠(1.6克，7.85毫摩尔，2.5当量)混合于5毫升水和50毫升N，N-二甲基甲酰胺中，氮气保护下加热至90℃。然后将化合物105-1(2.5克，7.86摩尔，2.5当量)的10毫升N,N-二甲基甲酰胺溶液滴加到反应体系中，90℃反应1小时。冷却至室温，用乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗涤多次，有机相用无水硫酸钠干燥，减压浓缩。粗品通过柱层析纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝5/1至1/1)得到黄色固体，即化合物6-(2-氯-5-氟-嘧啶-4-基)-4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑(1.04克，收率：54％)。LCMS(ESI):m/z323[M+H]+。
步骤1f：4-(6-硝基吡啶-3-基)氨甲基哌啶-1-甲酸叔丁酯(tert-butyl4-(((6-nitropyridin-3-yl)amino)methyl)piperidine-1-carboxylate)(化合物108B-1)的制备
氮气保护下，将4-氨甲基哌啶-1-甲酸叔丁酯(108A-1)(637毫克，2.98毫摩尔，1.2当量)，2-硝基-5溴吡啶(500毫克，2.48毫摩尔，1当量)，碳酸铯(1.62克，5毫摩尔，2当量)，4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(145毫克，0.25毫摩尔，0.1当量)和三(二亚苄基丙酮)二钯(183毫克，0.25毫摩尔，0.25当量)加入到装有甲苯的反应瓶中，加热到70摄氏度，反应5小时。将反应液冷却到室温，过滤，滤饼分别用甲苯、水冲洗，固体减压干燥得黄色固体4-(6-硝基吡啶-3-基)氨甲基哌啶-1-甲酸叔丁酯(600毫克，收率：72.2％)。LCMS(ESI):m/z337[M+H]+。
步骤1g：4-((叔丁氧羰基)(6-硝基吡啶-3-基))氨甲基哌啶-1-甲酸叔丁酯(tert-butyl4-(((tert-butoxycarbonyl)(6-nitropyridin-3-yl)amino)methyl)piperidine-1-carboxylate)(化合物108C-1)的制备
氮气保护下，将氢化钠(52毫克，2.15毫摩尔，1.2当量)加入到装有干燥四氢呋喃(10毫升)的反应器中，反应温度降到零摄氏度，将4-(6-硝基吡啶-3-基)氨甲基哌啶-1-甲酸叔丁酯(108B-1)(600毫克，1.79毫摩尔，1.0当量)加入，然后搅拌30分钟，再将二碳酸二叔丁基甲酯(491毫克，2.15毫摩尔，1.2当量)缓慢加入到反应中，接着搅拌1小时。用少量水淬灭反应，然后用乙酸乙酯萃取反应液，有机相用饱和食盐水洗，减压浓缩得淡黄色固体4-((叔丁氧羰基)(6-硝基吡啶-3-基))氨甲基哌啶-1-甲酸叔丁酯(800毫克，收率：100％)。LCMS(ESI):m/z437[M+H]+。
步骤1h：4-((叔丁氧羰基)(6-胺基吡啶-3-基))氨甲基哌啶-1-甲酸叔丁酯(tert-butyl4-(((6-aminopyridin-3-yl)(tert-butoxycarbonyl)amino)methyl)piperidine-1-carboxylate)(化合物108-1)的制备
氢气氛围下，将4-((叔丁氧羰基)(6-硝基吡啶-3-基))氨甲基哌啶-1-甲酸叔丁酯(108C-1)(800毫克，1.83毫摩尔，1.0当量)和钯碳(80毫克，10％)加入到装有甲醇(20毫升)的反应瓶中，常温下搅拌3小时。过滤后，滤液减压浓缩得灰黑色固体4-((叔丁氧羰基)(6-胺基吡啶-3-基))氨甲基哌啶-1-甲酸叔丁酯(600毫克，收率：80.9％)。LCMS(ESI):m/z407[M+H]+。
步骤1i：4-((叔丁氧羰基)(6-(5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑-6-基)嘧啶-2-基)胺基吡啶-3-基))氨甲基哌啶-1-甲酸叔丁酯(tert-butyl4-(((tert-butoxycarbonyl)(6-((5-fluoro-4-(4-fluoro-1-isopropyl-2-methyl-1H-benzo[d]imidazol-6-yl)pyrimidin-2-yl)amino)pyridin-3-yl)amino)methyl)piperidine-1-carboxylate)(化合物109-1)的制备
氮气保护下，将4-((叔丁氧羰基)(6-胺基吡啶-3-基))氨甲基哌啶-1-甲酸叔丁酯(108-1)(243毫克，0.6毫摩尔，1.3当量)，6-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑(107-1)(150毫克，0.48毫摩尔，1当量)，4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(30毫克，0.048毫摩尔，0.1当量)，叔丁醇钾(108毫克，0.96毫摩尔，2当量)和三(二亚苄基丙酮)二钯(45毫克，0.048毫摩尔,0.1当量)加入到装有甲苯的反应器中，加热到回流，反应3小时，反应液冷却至室温，减压浓缩得到黑色粗品，通过硅胶柱层析分离(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝100/1)提纯得到黄色固体4-((叔丁氧羰基)(6-(5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑-6-基)嘧啶-2-基)胺基吡啶-3-基))氨甲基哌啶-1-甲酸叔丁酯(120毫克，0.173毫摩尔，收率：37.6％)。LCMS(ESI):m/z693[M+H]+。
步骤1j：N2-(5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)嘧啶-2-基)-N5-(哌啶-4-甲基)吡啶-2，5-二胺(N2-(5-fluoro-4-(4-fluoro-1-isopropyl-2-methyl-1H-benzo[d]imidazol-6-yl)pyrimidin-2-yl)-N5-(piperidin-4-ylmethyl)pyridine-2,5-diamine)(化合物110-1，即化合物1)的制备
将4-((叔丁氧羰基)(6-(5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑-6-基)嘧啶-2-基)胺基吡啶-3-基))氨甲基哌啶-1-甲酸叔丁酯(109-1)(120毫克，0.173毫摩尔)溶于二氯甲烷(10毫升)中，加入盐酸(5毫升，6M水溶液)，搅拌反应6小时。将反应液pH值用饱和碳酸钠水溶液调节到9-10，用二氯甲烷(30毫升)萃取，有机相减压浓缩后经柱层析(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝50/1)得黄色固体4-(6-(5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑-6-基)嘧啶-2-基)胺基吡啶-3-基)氨甲基哌啶(50毫克，收率：58.6％)。LCMS(ESI):m/z493[M+H]+；1HNMR(500MHz,MeOD)δ8.41(d,J＝4.0Hz,1H),8.29(d,J＝1.2Hz,1H),7.91(d,J＝8.9Hz,1H),7.73(dd,J＝12.1,7.8Hz,2H),7.11(dd,J＝8.9,3.0Hz,1H),4.86(dt,J＝13.8,6.9Hz,1H),3.34(s,1H),3.06(d,J＝12.4Hz,2H),2.99(d,J＝6.7Hz,2H),2.67(s,3H),2.59(td,J＝12.4,2.6Hz,2H),1.82(d,J＝13.9Hz,2H),1.76(m,1H),1.69(d,J＝6.9Hz,6H),1.22(m,2H)。
实施例2：2-[4-({6-[5-氟-4-(7-氟-2-甲基-3-丙基-3H-苯并咪唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-吡啶-3-基氨基}-甲基)-哌啶-1-基]-乙醇(2-[4-({6-[5-Fluoro-4-(7-fluoro-2-methyl-3-propyl-3H-benzoimidazol-5-yl)-pyrimidin-2-ylamino]-pyridin-3-ylamino}-methyl)-piperidin-1-yl]-ethanol)(化合物2)的制备
步骤2a:N-正丙基乙酰胺(N-propylacetamide)(化合物102-2)的制备
将正丙胺(5克，0.085摩尔，1.0当量)和三乙胺(11.79毫升，0.169摩尔，2.0当量)溶于100毫升的二氯甲烷，降温至0度，往里滴加乙酸酐(8.67克，0.085摩尔，1.0当量)。室温反应过夜，旋干溶剂，浓缩物氧化铝柱层析纯化(洗脱剂：乙酸乙酯)得到无色油状液体N-正丙基乙酰胺(7.5克，收率：88％)。LCMS(ESI):m/z102[M+H]+。
步骤2b:N'-(4-溴-2,6-二氟苯基)-N-正丙基乙脒(N'-(4-bromo-2,6-difluorophenyl)-N-propylacetimidamide)(化合物103-2)的制备:将4-溴-2,6-二氟苯胺(2克，10毫摩尔，1.0当量)，三乙胺(1.5克，15毫摩尔，1.5当量)，N-正丙基乙酰胺(102-2)(2克，20毫摩尔，2.0当量)和1.5毫升三氯氧磷溶于50毫升甲苯，氮气保护条件下，回流反应3小时。冷却到室温，旋干溶剂，溶于乙酸乙酯，饱和碳酸钠洗涤，干燥，旋干溶剂，浓缩物硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯10/1)得到黄色固体N'-(4-溴-2,6-二氟苯基)-N-正丙基乙脒(2.8克，收率：96％)。LCMS(ESI):m/z291[M+H]+。
步骤2c:6-溴-4-氟-2-甲基-1-正丙基-1氢-苯并咪唑(6-bromo-4-fluoro-2-methyl-1-propyl-1H-benzo[d]imidazole)(化合物104-2)的制备
将叔丁醇钾(1.2克，10.6毫摩尔，1.1当量)和N'-(4-溴-2,6-二氟苯基)-N-正丙基乙脒(103-2)(2.8克，9.6毫摩尔，1.0当量)溶于50毫升的N,N-二甲基甲酰胺溶液中，氮气保护条件下，100℃反应过夜。冷却到室温，倒入水中，乙酸乙酯萃取，干燥，旋干溶剂，浓缩物硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯5/1)得到白色固体6-溴-4-氟-2-甲基-1-正丙基-1氢-苯并咪唑(1.8克，收率：69％)。LCMS(ESI):m/z271[M+H]+。
步骤2d：4-氟-2-甲基-1-正丙基-1氢-苯并咪唑-6-硼酸频那醇酯(4-fluoro-2-methyl-1-propyl-6-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)-1H-benzo[d]imidazole)(化合物105-2)的制备
将6-溴-4-氟-2-甲基-1-正丙基-1氢-苯并咪唑(104-2)(300毫克，1毫摩尔，1.0当量)，双联硼酸频那醇酯(2300克，1.2毫摩尔，1.2当量)，四三苯基膦钯(120毫克，0.1毫摩尔，0.1当量)和乙酸钾(300毫克，3毫摩尔，3.0当量)溶于20毫升甲苯，氮气保护条件下，回流反应4小时。冷却到室温，旋干溶剂，得到粗品4-氟-2-甲基-1-正丙基-1氢-苯并咪唑-6-硼酸频那醇酯直接用于下一步反应。
步骤2e：6-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-4-氟-2-甲基-1-丙基-1H-苯并咪唑(6-(2-Chloro-5-fluoro-pyrimidin-4-yl)-4-fluoro-2-methyl-1-propyl-1H-benzoimidazole)(化合物107-2)的制备
在氮气保护下，将2,4-二氯-5-氟嘧啶(106-1)(316毫克，1.89毫摩尔，1.1当量)，4-氟-2-甲基-1-丙基-6-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧硼戊环-2-基)-1H-苯并咪唑(547毫克，1.72毫摩尔，1.0当量)，双三苯基膦二氯化钯(121毫克，0.172毫摩尔，0.1当量)和碳酸钠(456毫克，4.3毫摩尔，2.5当量)加入到50毫升N,N-二甲基甲酰胺中，加入5毫升水，于85℃下，反应1小时。通过液相检测，原料反应完全，冷却至室温，加入100毫升乙酸乙酯，饱和食盐水洗三次，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，经柱层析分离(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇100/1至15/1)纯化得到黄色固体6-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-4-氟-2-甲基-1-丙基-1H-苯并咪唑(487毫克，收率：87.9.0％)。LCMS(ES+):m/z323[M+H]+。
步骤2f：4-[(叔丁氧基羰-{6-[5-氟4-(7-氟-2-甲基-3-丙基-3H-苯并咪唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-吡啶-3-基}-氨基)-甲基]-哌啶-1-羧酸叔丁基酯(4-[(tert-Butoxycarbonyl-{6-[5-fluoro-4-(7-fluoro-2-methyl-3-propyl-3H-benzoimidazol-5-yl)-pyrimidin-2-ylamino]-pyridin-3-yl}-amino)-methyl]-piperidine-1-carboxylicacidtert-butylester)(化合物109-2)的制备
氮气保护下，化合物4-((叔丁氧羰基)(6-胺基吡啶-3-基))氨甲基哌啶-1-甲酸叔丁酯(108-1)(120毫克，0.29毫摩尔，1.2当量)，6-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-4-氟-1-丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑(107-2)(78毫克，0.24毫摩尔，1.0当量)，4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(12毫克，0.022毫摩尔，0.09当量)，碳酸铯(156毫克，0.48毫摩尔，2.0当量)和三(二亚苄基丙酮)二钯(11毫克，0.012毫摩尔，0.05当量)加入到装有甲苯的反应瓶中，加热到回流，搅拌6小时后，反应液减压浓缩得到的粗品通过硅胶柱层析分离提纯(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝100/1至12/1)得到黄色胶状体4-[(叔丁氧基羰-{6-[5-氟4-(7-氟-2-甲基-3-丙基-3H-苯并咪唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-吡啶-3-基}-氨基)-甲基]-哌啶-1-羧酸叔丁基酯(153毫克，收率：92％)。LCMS(ESI):m/z693[M+H]+。
步骤2g：2-[4-({6-[5-氟-4-(7-氟-2-甲基-3-丙基-3H-苯并咪唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-吡啶-3-基氨基}-甲基)-哌啶-1-基]-乙醇(2-[4-({6-[5-Fluoro-4-(7-fluoro-2-methyl-3-propyl-3H-benzoimidazol-5-yl)-pyrimidin-2-ylamino]-pyridin-3-ylamino}-methyl)-piperidin-1-yl]-ethanol)(化合物2)的制备
将化合物4-[(叔丁氧基羰-{6-[5-氟4-(7-氟-2-甲基-3-丙基-3H-苯并咪唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-吡啶-3-基}-氨基)-甲基]-哌啶-1-羧酸叔丁基酯(109-2)(153毫克，0.221毫摩尔,1.0当量)溶于二氯甲烷(30毫升)中，缓慢滴入盐酸甲醇溶液(5毫升)，搅拌3小时后，用饱和碳酸钠水溶液将反应液的pH值调节到10左右，用二氯甲烷萃取，有机相减压浓缩得到黄色固体。将黄色固体和碳酸钾(61毫克，0.442毫摩尔，2.0当量)加入到装有乙腈(30毫升)的反应瓶中，随后加入2-溴乙醇(41毫克，0.331毫摩尔，1.5当量)，在室温搅拌过夜，反应液在乙酸乙酯和水中萃取分层，有机相浓缩后通过硅胶柱层析分离(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝100/1至10/1)提纯得到化合物2-[4-({6-[5-氟-4-(7-氟-2-甲基-3-丙基-3H-苯并咪唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-吡啶-3-基氨基}-甲基)-哌啶-1-基]-乙醇(30毫克，收率：25.3％)。LCMS(ESI):m/z537[M+H]+；熔点：124.7-127.3摄氏度；1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.36(s,1H),8.58(d,J＝3.8Hz,1H),8.07(s,1H),7.87(d,J＝8.9Hz,1H),7.73(d,J＝2.8Hz,1H),7.66(d,J＝12.4Hz,1H),7.03(dd,J＝8.9,2.9Hz,1H),5.55(t,J＝5.8Hz,1H),4.32(s,1H),4.25(t,J＝7.1Hz,2H),3.50(d,J＝4.1Hz,2H),2.91(t,J＝6.2Hz,4H),2.61(m,3H),2.37(m,2H),1.90(d,J＝53.6Hz,2H),1.79(ddd,J＝32.6,20.0,9.5Hz,4H),1.54(s,1H),1.23(d,J＝9.3Hz,2H),0.92(t,J＝7.4Hz,3H)。
实施例3：N5-(1-苄基哌啶-4-基甲基)-N2-[5-氟-4-(7-氟-3-异丙基-2-甲基-3H-苯并咪唑-5-基)-嘧啶-2-基]-吡啶-2,5-二胺(N5-(1-Benzyl-piperidin-4-ylmethyl)-N2-[5-fluoro-4-(7-fluoro-3-isopropyl-2-methyl-3H-benzoimidazol-5-yl)-pyrimidin-2-yl]-pyridine-2,5-diamine)(化合物3)的制备
将化合物4-((叔丁氧羰基)(6-(5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑-6-基)嘧啶-2-基)胺基吡啶-3-基))氨甲基哌啶-1-甲酸叔丁酯(109-1)(217毫克，0.313毫摩尔,1.0当量)溶于二氯甲烷(50毫升)中，缓慢滴入盐酸甲醇溶液(8毫升)，搅拌4小时后。反应液直接真空浓缩得到褐色固体。将得到的固体和碳酸钾(56毫克，0.406毫摩尔，1.4当量)加入到装有乙腈(30毫升)的反应瓶中，随后加入卞氯(31毫克，0.244毫摩尔，0.8当量)，在室温搅拌过夜，反应液在乙酸乙酯和水中萃取分层，有机相浓缩后通过硅胶柱层析分离提纯(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝100/1至10/1)得到化合物N5-(1-苄基哌啶-4-基甲基)-N2-[5-氟-4-(7-氟-3-异丙基-2-甲基-3H-苯并咪唑-5-基)-嘧啶-2-基]-吡啶-2,5-二胺(36毫克，收率：30.5％)。LCMS(ESI):m/z583[M+H]+；熔点：195-197.3摄氏度；1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.41(s,1H),8.57(d,J＝3.9Hz,1H),8.26(d,J＝0.9Hz,1H),7.87(d,J＝8.8Hz,1H),7.73(d,J＝2.8Hz,1H),7.65(d,J＝12.2Hz,1H),7.30(m,4H),7.23(m,1H),7.02(dd,J＝8.9,2.9Hz,1H),5.56(t,J＝5.8Hz,1H),4.84(m,1H),3.44(s,2H),2.92(t,J＝6.2Hz,2H),2.82(d,J＝11.4Hz,2H),2.64(s,3H),1.91(t,J＝10.6Hz,2H),1.74(d,J＝10.9Hz,2H),1.61(d,J＝6.9Hz,6H),1.55(m,1H),1.23(qd,J＝12.5,3.7Hz,2H)。
实施例4：N5-[(1-乙基哌啶-3-基)甲基]-N2-[5-氟-4-(7-氟-3-异丙基-2-甲基-3H-苯并咪唑-5-基)-嘧啶-2-基]吡啶-2,5-二胺(N5-((1-ethylpiperidin-3-yl)methyl)-N2-(5-fluoro-4-(7-fluoro-3-isopropyl-2-methyl-3H-benzo[d]imidazol-5-yl)pyrimidin-2-yl)pyridine-2,5-diamine)(化合物4)的制备
步骤4a：3-[(6-硝基吡啶-3-基氨基)甲基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(tert-butyl3-((6-nitropyridin-3-ylamino)methyl)piperidine-1-carboxylate)(化合物108B-4)的制备
在氮气氛围下，将化合物3-氨甲基哌啶-1-羧酸叔丁酯(108-A4)(1.49克，6.96毫摩尔，1.0当量)、5-溴-2-硝基吡啶(1.42克，6.96毫摩尔，1.0当量)、碳酸铯(4.54克，13.92毫摩尔，2.0当量)、4,5-双(二苯基膦)-9,9-二甲基氧杂蒽(0.40克，0.696毫摩尔，0.1当量)和三(二亚苄基丙酮)二钯(0.64克，0.696毫摩尔，0.1当量)混合于甲苯(60毫升)中，然后在90℃下搅拌反应4小时。反应结束后，减压浓缩，所得浓缩物通过硅胶柱层析分离提纯(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝10/1至5/1)，得到目标化合物叔丁基3-[(6-硝基吡啶-3-基氨基)甲基]哌啶-1-羧酸叔丁酯为黄色固体(2.13克，收率：90.8％)。LCMS(ESI):m/z337[M+H]+。
步骤4b：3-((叔丁氧基羰基(6-硝基吡啶-3-基)氨基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(tert-butyl3-((tert-butoxycarbonyl(6-nitropyridin-3-yl)amino)methyl)piperidine-1-carboxylate)(化合物108C-4)的制备
将3-[(6-硝基吡啶-3-基氨基)甲基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(108B-4)(2.13克，6.339毫摩尔，1.0当量)溶解于四氢呋喃(200毫升)中，在氮气保护下冷却到0℃，加入氢化钠(0.39克，12.678毫摩尔，2当量)，搅拌10分钟后再加入二碳酸二叔丁酯(1.66克，7.607毫摩尔，1.2当量)，撤去冰浴在室温反应4小时。反应结束时加入水终止反应，然后用二氯甲烷(100毫升*3)萃取，合并有机相，浓缩得到的浓缩物通过柱层析分离纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝10/1)，得到的化合物3-((叔丁氧基羰基(6-硝基吡啶-3-基)氨基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(2.81克,收率：100％)为黄色固体。LCMS(ESI):m/z437[M+H]+。
步骤4c：3-(((6-氨基吡啶-3-基)(叔丁氧基羰基)氨基)甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(tert-butyl3-(((6-aminopyridin-3-yl)(tert-butoxycarbonyl)amino)methyl)piperidine-1-carboxylate)(化合物108-4)的制备
将化合物3-((叔丁氧基羰基(6-硝基吡啶-3-基)氨基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(108C-4)(1.01克，2.316毫摩尔，1.0当量)溶于甲醇(50毫升)里，然后逐渐加进10％的钯碳(100毫克)，最后反应混合物在氢气氛围下室温搅拌4小时。通过硅藻土过滤，浓缩滤液得到黄色固体化合物3-(((6-氨基吡啶-3-基)(叔丁氧基羰基)氨基)甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(0.94克，收率：99.5％)。LCMS(ESI):m/z407[M+H]+。
步骤4d：3-((叔丁氧基羰基)5-(6-(5-氟-4-(7-氟-3-异丙基-2-甲基-3H-苯并咪唑-5-基)-嘧啶-2-胺基)吡啶-3-基)氨基)甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(tert-butyl3-((tert-butoxycarbonyl(6-(5-fluoro-4-(7-fluoro-3-isopropyl-2-methyl-3H-benzo[d]imidazol-5-yl)pyrimidin-2-ylamino)pyridin-3-yl)amino)methyl)piperidine-1-carboxylate)(化合物109-4)的制备
在氮气保护下，将化合物3-(((6-氨基吡啶-3-基)(叔丁氧基羰基)氨基)甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(108-4)(201.5毫克，0.496毫摩尔，1.0当量)、6-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑(107-1)(160.3毫克，0.496毫摩尔，1.0当量)、三(二亚苄基丙酮)二钯(45.4毫克，0.0496毫摩尔，0.1当量)、4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(28.7毫克，0.0496毫摩尔，0.1当量)和碳酸铯(323.3毫克，0.993毫摩尔，2.0当量)溶解于干燥的甲苯(50毫升)中，然后在90℃下搅拌反应4小时。反应混合物降至室温，过滤，真空浓缩。得到的浓缩物通过柱层析纯化(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝70/1)得到黄色固体化合物3-((叔丁氧基羰基)5-(6-(5-氟-4-(7-氟-3-异丙基-2-甲基-3H-苯并咪唑-5-基)-嘧啶-2-胺基)吡啶-3-基)氨基)甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(296.4毫克，收率：86.0％)。LCMS(ESI):m/z694[M+H]+。
步骤4e：N2-[5-氟-4-(7-氟-3-异丙基-2-甲基-3H-苯并咪唑-5-基)-嘧啶-2-基]-N5-(哌啶-3-甲基)吡啶-2,5-二胺盐酸盐(N2-(5-fluoro-4-(7-fluoro-3-isopropyl-2-methyl-3H-benzo[d]imidazol-5-yl)pyrimidin-2-yl)-N5-(piperidin-3-ylmethyl)pyridine-2,5-diaminehydrochloride)(化合物110-4)的制备
化合物3-((叔丁氧基羰基)5-(6-(5-氟-4-(7-氟-3-异丙基-2-甲基-3H-苯并咪唑-5-基)-嘧啶-2-胺基)吡啶-3-基)氨基)甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(109-4)(296.4毫克，0.428毫摩尔，1.0当量)溶解于二氯甲烷(50毫升)中，然后冰浴冷却。向反应液滴加4M盐酸甲醇溶液(5毫升)，然后在室温搅拌过夜。反应结束后，将反应液浓缩得到黄色固体N2-[5-氟-4-(7-氟-3-异丙基-2-甲基-3H-苯并咪唑-5-基)-嘧啶-2-基]-N5-(哌啶-3-甲基)吡啶-2,5-二胺盐酸盐(279.4克，收率：100％)。LCMS(ESI):m/z493[M+H]+。
步骤4f:N5-[(1-乙基哌啶-3-基)甲基]-N2-[5-氟-4-(7-氟-3-异丙基-2-甲基-3H-苯并咪唑-5-基)-嘧啶-2-基]吡啶-2,5-二胺(N5-((1-ethylpiperidin-3-yl)methyl)-N2-(5-fluoro-4-(7-fluoro-3-isopropyl-2-methyl-3H-benzo[d]imidazol-5-yl)pyrimidin-2-yl)pyridine-2,5-diamine)(化合物4)的制备
将N2-[5-氟-4-(7-氟-3-异丙基-2-甲基-3H-苯并咪唑-5-基)-嘧啶-2-基]-N5-(哌啶-3-甲基)吡啶-2,5-二胺盐酸盐(110-4)(279.4毫克，0.428毫摩尔，1.0当量)、溴乙烷(93.2毫克，0.856毫摩尔，2.0当量)和碳酸钾(324.8毫克，2.354毫摩尔，5.5当量)混合在乙腈(50毫升)中，在室温下搅拌48小时。反应结束时加入100毫升水终止反应，然后用二氯甲烷(100毫升*3)萃取，合并有机相，浓缩得到的浓缩物通过柱层析分离纯化(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇70/1至20/1)，得到黄色固体化合物N5-[(1-乙基哌啶-3-基)甲基]-N2-[5-氟-4-(7-氟-3-异丙基-2-甲基-3H-苯并咪唑-5-基)-嘧啶-2-基]吡啶-2,5-二胺(60.1克，收率：27.0％)。LCMS(ESI):m/z521[M+H]+；熔点：87.3-91.4摄氏度；1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.46(s,1H),8.59(d,J＝3.8Hz,1H),8.24(s,1H),7.91(d,J＝8.8Hz,1H),7.76(d,J＝2.5Hz,1H),7.66(d,J＝12.0Hz,1H),7.08(dd,J＝8.8,2.6Hz,1H),5.73(d,J＝16.8Hz,1H),4.84(dt,J＝13.8,6.9Hz,1H),3.52(d,J＝11.1Hz,1H),3.43(s,1H),3.09(s,2H),3.01(m,2H),2.76(s,1H),2.64(s,4H),2.10(s,1H),1.89(d,J＝13.1Hz,2H),1.72(d,J＝31.6Hz,2H),1.62(d,J＝6.9Hz,6H),1.24(s,3H)。
实施例5：N5-((1-乙基哌啶-4-基)甲基)-N2-(5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑-6-基)嘧啶-2-基)吡啶-2,5-二胺(N5-((1-ethylpiperidin-4-yl)methyl)-N2-(5-fluoro-4-(4-fluoro-1-isopropyl-2-methyl-1H-benzo[d]imidazol-6-yl)pyrimidin-2-yl)pyridine-2,5-diamine)(化合物5)的制备
步骤5a：4-(6-硝基吡啶-3-基)胺甲基哌啶(6-nitro-N-(piperidin-4-ylmethyl)pyridin-3-amine)(化合物201-5)的制备
将4-(6-硝基吡啶-3-基)胺甲基哌啶-1-甲酸叔丁酯(108B-1)(500毫克，0.896毫摩尔)溶于二氯甲烷(20毫升)中，缓慢滴入三氟乙酸(10毫升)，搅拌6小时后，用饱和碳酸钠水溶液将反应液的pH值调节到10左右，用二氯甲烷萃取，有机相减压浓缩得到4-(6-硝基吡啶-3-基)胺甲基哌啶(410毫克，收率：100％)。LCMS(ESI):m/z237[M+H]+。
步骤5b：N-((1-乙基哌啶-4-基)甲基)-6-硝基吡啶-2-胺(N-((1-ethylpiperidin-4-yl)methyl)-6-nitropyridin-3-amine)(化合物202-5)的制备
将4-(6-硝基吡啶-3-基)胺甲基哌啶(201-5)(410毫克，0.895毫摩尔，1当量)和碳酸钾(371毫克，2.69毫摩尔，3.0当量)加入到装有乙腈(15毫升)的反应瓶中，随后加入碘乙烷(154毫克，0.99毫摩尔，1.1当量)，搅拌3小时后，在乙酸乙酯和水中萃取分层，有机相浓缩后通过硅胶柱层析分离提纯(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝20/1)得到N-((1-乙基哌啶-4-基)甲基)-6-硝基吡啶-2-胺(247毫克，收率：100％).LCMS(ESI):m/z265[M+H]+。
步骤5c：(6-硝基吡啶-3-基)((1-乙基哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(tert-butyl(6-nitropyridin-3-yl)((1-ethylpiperidin-4-yl)methyl)carbamate)(化合物203-5)的制备
氮气保护下，将氢化钠(45毫克，1.5毫摩尔，1.5当量)加入到冰浴冷却下的干燥的四氢呋喃(10毫升)中，搅拌均匀，将N-((1-乙基哌啶-4-基)甲基)-6-硝基吡啶-2-胺(202-5)(260毫克，1毫摩尔，1当量)加入，搅拌30分钟后，加入二碳酸二叔丁基甲酯(262毫克，1.2毫摩尔)，搅拌1小时。用少量水淬灭反应，反应液在水和乙酸乙酯中萃取分层，有机相浓缩后通过硅胶柱层析分离提纯(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝30/1)得到(6-硝基吡啶-3-基)((1-乙基哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(360毫克，收率：99％)。LCMS(ESI):m/z365[M+H]+。
步骤5d：(6-胺基吡啶-3-基)((1-乙基哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(tert-butyl(6-aminopyridin-3-yl)((1-ethylpiperidin-4-yl)methyl)carbamate)(化合物204-5)的制备
氢气环境下，将(6-硝基吡啶-3-基)((1-乙基哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(203-5)(360毫克，1毫摩尔，1当量)和钯碳(36毫克，10％)加入到装有甲醇(30毫升)的反应瓶中，搅拌16小时后，过滤后滤液减压浓缩得到的灰黑色固体(6-胺基吡啶-3-基)((1-乙基哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(247毫克，收率：74％)。LCMS(ESI):m/z335[M+H]+。
步骤5e：((1-乙基哌啶-4-基)甲基)(6-((5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑-6-基)嘧啶-2-基)胺基)吡啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯(tert-butyl((1-ethylpiperidin-4-yl)methyl)(6-((5-fluoro-4-(4-fluoro-1-isopropyl-2-methyl-1H-benzo[d]imidazol-6-yl)pyrimidin-2-yl)amino)pyridin-3-yl)carbamate)(化合物205-5)的制备
氮气保护下，(6-胺基吡啶-3-基)((1-乙基哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(204-5)(187毫克，0.559毫摩尔，1.2当量)，6-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑(107-1)(150毫克，0.466毫摩尔)，4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(27毫克，0.046毫摩尔，0.1当量)，碳酸铯(334毫克，1.03毫摩尔，2.2当量)和三(二亚苄基丙酮)二钯(43毫克，0.047毫摩尔，0.1当量)加入到装有甲苯的反应瓶中，加热到回流，搅拌6小时后，反应液减压浓缩得到的粗品通过硅胶柱层析分离提纯(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇50/1)得到换色固体((1-乙基哌啶-4-基)甲基)(6-((5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑-6-基)嘧啶-2-基)胺基)吡啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯(120毫克，收率：41.6％)。LCMS(ESI):m/z521[M+H]+。
步骤5f：N5-((1-乙基哌啶-4-基)甲基)-N2-(5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑-6-基)嘧啶-2-基)吡啶-2,5-二胺(N5-((1-ethylpiperidin-4-yl)methyl)-N2-(5-fluoro-4-(4-fluoro-1-isopropyl-2-methyl-1H-benzo[d]imidazol-6-yl)pyrimidin-2-yl)pyridine-2,5-diamine)(化合物5)的制备
将((1-乙基哌啶-4-基)甲基)(6-((5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑-6-基)嘧啶-2-基)胺基)吡啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯(205-5)溶于二氯甲烷(10毫升)，加入盐酸(5毫升，6M水溶液)，搅拌3小时后，用饱和碳酸钠水溶液将反应液的pH值调节到10左右，用二氯甲烷萃取。有机相减压浓缩得到黄色固体N5-((1-乙基哌啶-4-基)甲基)-N2-(5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑-6-基)嘧啶-2-基)吡啶-2,5-二胺(80毫克，收率：79.4％)。熔点169-170℃；LCMS(ESI):m/z421[M+H]+；1HNMR(500MHz,MeOD)δ8.41(d,J＝4.0Hz,1H),8.28(s,1H),7.92(d,J＝8.9Hz,1H),7.73(d,J＝11.6Hz,2H),7.13(dd,J＝8.9,2.8Hz,1H),4.88(dt,J＝13.9,6.9Hz,1H),3.25(d,J＝11.8Hz,2H),3.05(d,J＝6.7Hz,2H),2.76(q,J＝7.1Hz,2H),2.67(s,3H),2.42(t,J＝11.8Hz,2H),1.97(d,J＝13.4Hz,2H),1.79(m,1H),1.69(d,J＝6.9Hz,6H),1.44(m,2H),1.21(t,J＝7.3Hz,3H)。
实施例6：2-(4-(((6-((5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑-6-基)嘧啶-2-基)胺基)吡啶-3-基)胺基)甲基)哌啶-1-基)乙烷-1-醇(2-(4-(((6-((5-fluoro-4-(4-fluoro-1-isopropyl-2-methyl-1H-benzo[d]imidazol-6-yl)pyridin-2-yl)amino)pyridin-3-yl)amino)methyl)piperidin-1-yl)ethan-1-ol)(化合物6)的制备
步骤6a：2-(4-(6-硝基吡啶-3-基)胺甲基哌啶-1-基)乙烷-1醇(2-(4-(((6-nitropyridin-3-yl)amino)methyl)piperidin-1-yl)ethan-1-ol)(化合物202-6)的制备
将4-(6-硝基吡啶-3-基)胺甲基哌啶(201-5)(200毫克，0.85毫摩尔，1当量)和碳酸钾(352毫克，2.55毫摩尔，3当量)加入到装有乙腈(15毫升)的反应瓶中，2-溴乙醇(210毫克，1.7毫摩尔，2当量)加入到反应器中，加热到80摄氏度搅拌3小时。反应液倒入水相和乙酸乙酯相中，有机相用饱和食盐水洗，浓缩后通过硅胶柱层析分离提纯(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝3/1)得2-(4-(6-硝基吡啶-3-基)胺甲基哌啶-1-基)乙烷-1醇(221毫克，收率：92.9％)。LCMS(ESI):m/z281[M+H]+。
步骤6b：(6-硝基吡啶-3-基)((1-(2-羟乙基)哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(tert-butyl((1-(2-hydroxyethyl)piperidin-4-yl)methyl)(6-nitropyridin-3-yl)carbamate)(化合物203-6)的制备
氮气保护下，将氢化钠(47毫克，1.98毫摩尔，2.5当量)加入到装有无水四氢呋喃(10毫升)的反应瓶中，置于冰水浴中，缓慢滴入2-(4-(6-硝基吡啶-3-基)胺甲基哌啶-1-基)乙烷-1醇(202-6)(221毫克，0.79毫摩尔，1当量)，搅拌30分钟后，将二碳酸二叔丁基甲酯(189毫克，0.869毫摩尔，1.1当量)滴入反应液中，搅拌1小时。用少量水淬灭反应，在水和乙酸乙酯中萃取分层，有机相浓缩后通过硅胶柱层析分离提纯(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝6/1)得到灰黑色固体(6-硝基吡啶-3-基)((1-(2-羟乙基)哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(266毫克，收率：88.6％)。LCMS(ESI):m/z381[M+H]+。
步骤6c：(6-胺基吡啶-3-基)((1-(2-羟乙基)哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(tert-butyl(6-aminopyridin-3-yl)((1-(2-hydroxyethyl)piperidin-4-yl)methyl)carbamate)(化合物204-6)的制备
氢气氛围下，(6-硝基吡啶-3-基)((1-(2-羟乙基)哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(203-6)(500毫克，1.32毫摩尔)和钯碳(50毫克，10％)加入到装有甲醇(30毫升)的反应瓶中，搅拌16小时。过滤后，滤液浓缩得到(6-胺基吡啶-3-基)((1-(2-羟乙基)哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(460毫克，收率：99.9％)。LCMS(ESI):m/z351[M+H]+。
步骤6d：2-(4-(((6-((5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑-6-基)嘧啶-2-基)胺基)吡啶-3-基)胺基)甲基)哌啶-1-基)乙烷-1-醇(2-(4-(((6-((5-fluoro-4-(4-fluoro-1-isopropyl-2-methyl-1H-benzo[d]imidazol-6-yl)pyridin-2-yl)amino)pyridin-3-yl)amino)methyl)piperidin-1-yl)ethan-1-ol)(化合物6)的制备
氮气保护下，(6-胺基吡啶-3-基)((1-(2-羟乙基)哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(204-6)(196毫克，0.56毫摩尔，1.2当量)，6-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑(107-1)(150毫克，0.466毫摩尔，1当量)，4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(27毫克，0.047毫摩尔，0.1当量)，碳酸铯(334毫克，1.03毫摩尔，2.2当量)和三(二亚苄基丙酮)二钯(43毫克，0.047毫摩尔，0.1当量)加入到装有25毫升甲苯的反应瓶中，加热到回流，搅拌6小时后，反应液减压浓缩得到的粗品通过硅胶柱层析分离提纯(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝80/1)得到黄色固体((1-乙基哌啶-4-基)甲基)(6-((5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑-6-基)嘧啶-2-基)胺基)吡啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯(205-6)(70毫克，收率：23.9％)。将得到的固体(70毫克，0.11毫摩尔)溶于二氯甲烷(10毫升)，将盐酸(5毫升，6M水溶液)加入反应液中，搅拌3小时后，用饱和碳酸钠水溶液将反应液pH值调节到10左右。用二氯甲烷萃取后，有机相减压浓缩得到淡黄色固体2-(4-(((6-((5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑-6-基)嘧啶-2-基)胺基)吡啶-3-基)胺基)甲基)哌啶-1-基)乙烷-1-醇(30毫克，收率：50.9％)。熔点80.6-83.9℃；LCMS(ESI):m/z536[M+H]+；1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.41(s,1H),8.57(d,J＝3.9Hz,1H),8.26(s,1H),7.87(d,J＝8.8Hz,1H),7.73(d,J＝2.8Hz,1H),7.65(d,J＝12.1Hz,1H),7.03(dd,J＝8.9,2.9Hz,1H),5.56(t,J＝5.7Hz,1H),4.84(dt,J＝13.9,6.9Hz,1H),4.29(s,1H),3.48(dd,J＝11.6,6.0Hz,2H),3.39(m,2H),2.90(m,4H),2.64(s,3H),2.37(s,2H),1.93(s,2H),1.73(d,J＝11.8Hz,2H),1.62(d,J＝6.9Hz,6H),1.53(d,J＝4.1Hz,1H).
实施例7：N2-(5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑-6-基)嘧啶-2-基)-N5-((1-(2-甲氧基乙基)哌啶-4-基)甲基)吡啶-2,5-二胺(N2-(5-fluoro-4-(4-fluoro-1-isopropyl-2-methyl-1H-benzo[d]imidazol-6-yl)pyrimidin-2-yl)-N5-((1-(2-methoxyethyl)piperidin-4-yl)methyl)pyridine-2,5-diamine)(化合物7)的制备
步骤7a：N-((1-(2-甲氧基乙基)哌啶-4-基)甲基)-6-硝基吡啶-3-胺(N-((1-(2-methoxyethyl)piperidin-4-yl)methyl)-6-nitropyridin-3-amine)(化合物202-7)的制备
将4-(6-硝基吡啶-3-基)胺甲基哌啶(201-5)(234毫克，1毫摩尔，1.0当量)溶于20毫升乙腈中，加入碳酸钾(281毫克，2.03毫摩尔，2.0当量)。在氮气保护下，加入3毫升的2-溴乙基甲基醚(0.176毫升，1.88毫摩尔，1.9当量)乙腈溶液，加热至80℃，反应过夜。冷却至室温，旋干。最后用柱层析纯化(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝100/1至50/1)得到黄色固体，即化合物N-((1-(2-甲氧基乙基)哌啶-4-基)甲基)-6-硝基吡啶-3-胺(340毫克，收率：42％)。LCMS(ESI)：m/z295[M+H]+。
步骤7b：(1-(2-甲氧基乙基)哌啶-4-基)甲基-(6-硝基吡啶-3基)-氨基甲酸叔丁酯(tert-butyl(1-(2-methoxyethyl)piperidin-4-yl)methyl(6-nitropyridin-3-yl)carbamate)(化合物203-7)的制备：在氮气保护下，将氢化钠(92毫克，3.83毫摩尔，3.3当量)分散于10毫升的四氢呋喃中。在0℃下，缓慢的滴加3毫升N-((1-(2-甲氧基乙基)哌啶-4-基)甲基)-6-硝基吡啶-3-胺(202-7)(340毫克，1.15毫摩尔，1.0当量)四氢呋喃溶液，反应15分钟，然后滴加1毫升二碳酸二叔丁酯(378毫克，1.73毫摩尔，1.5当量)四氢呋喃溶液，室温反应半小时。甲醇淬灭，旋干。所得到的粗品直接用于下一步。LCMS(ESI)：m/z395[M+H]+。
步骤7c：(1-(2-甲氧基乙基)哌啶-4-基)甲基-(6-胺基吡啶-3基)-氨基甲酸叔丁酯(tert-butyl4-(6-aminopyridin-3-yl)piperidine-1-carboxylate)(化合物204-7)的制备
将(1-(2-甲氧基乙基)哌啶-4-基)甲基-(6-硝基吡啶-3基)-氨基甲酸叔丁酯(203-7(400毫克，粗品)溶于50毫升的甲醇中，加入20毫克10％钯碳。在氢气条件下室温反应3小时。过滤，除去钯碳，将滤液旋干。最后通过柱层析纯化(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝100/1至30/1)得到黄色粘稠液，即化合物(1-(2-甲氧基乙基)哌啶-4-基)甲基-(6-胺基吡啶-3基)-氨基甲酸叔丁酯(263毫克，收率：65％)。LCMS(ESI)：m/z365[M+H]+。
步骤7d.(6-((5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑-6-基)嘧啶-2-基)胺基)吡啶-3-基)((1-(2-甲氧基乙基)哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(tert-butyl(6-(5-fluoro-4-(4-fluoro-1-isopropyl-2-methyl-1H-benzo[d]imidazol-6-yl)pyrimidin-2-ylamino)pyridin-3-yl)((1-(2-methoxyethyl)piperidin-4-yl)methyl)carbamate)(化合物205-7)的制备
将6-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑(107-1)(0.15克，0.46毫摩尔，1.2当量)，(1-(2-甲氧基乙基)哌啶-4-基)甲基-(6-胺基吡啶-3基)-氨基甲酸叔丁酯(204-7)(0.14克，0.38毫摩尔，1.0当量)，碳酸铯(0.305克，0.93毫摩尔，2.5当量)，4,5-双二苯基磷-9,9-二甲基氧杂蒽(0.025毫克，0.043毫摩尔，0.1当量)分散于50毫升甲苯中。在氮气保护下，加入Pd2(dba)3(0.02克，0.02毫摩尔，0.05当量)。将该反应体系置于预先加热的130℃油浴中加热回流，搅拌反应3小时。反应完成后，冷却至室温，减压浓缩。最后用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇100/1至30/1)得到黄色固体，即(6-((5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑-6-基)嘧啶-2-基)胺基)吡啶-3-基)((1-(2-甲氧基乙基)哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(302毫克，收率：99％)。LCMS(ESI)：m/z651[M+H]+。
步骤7e：N2-(5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑-6-基)嘧啶-2-基)-N5-((1-(2-甲氧基乙基)哌啶-4-基)甲基)吡啶-2,5-二胺(N2-(5-fluoro-4-(4-fluoro-1-isopropyl-2-methyl-1H-benzo[d]imidazol-6-yl)pyrimidin-2-yl)-N5-((1-(2-methoxyethyl)piperidin-4-yl)methyl)pyridine-2,5-diamine)(化合物7)的制备
将(6-((5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑-6-基)嘧啶-2-基)胺基)吡啶-3-基)((1-(2-甲氧基乙基)哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(205-7)(0.302克，0.464毫摩尔)溶于50毫升二氯甲烷中，加入6毫升6摩尔每升的盐酸，在室温下搅拌反应2小时。往反应液加入饱和碳酸氢钠溶液，使pH值调为8-9。然后过滤，以除去产生的无机盐，将滤液减压浓缩。最后用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝100/1至15/1)得到黄色固体，即化合物N2-(5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑-6-基)嘧啶-2-基)-N5-((1-(2-甲氧基乙基)哌啶-4-基)甲基)吡啶-2,5-二胺(137毫克，收率：53％)。熔点196.1-197.0℃；LCMS(ESI)：m/z551[M+H]+；1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.41(s,1H),8.57(d,J＝3.9Hz,1H),8.26(d,J＝1.0Hz,1H),7.87(d,J＝8.8Hz,1H),7.73(d,J＝2.8Hz,1H),7.65(d,J＝12.1Hz,1H),7.02(dd,J＝8.9,2.9Hz,1H),5.56(t,J＝5.8Hz,1H),4.84(m,1H),3.41(t,J＝6.0Hz,2H),3.22(s,3H),2.90(m,4H),2.64(s,3H),2.44(t,J＝6.0Hz,2H),1.92(t,J＝10.7Hz,2H),1.72(d,J＝11.3Hz,2H),1.62(d,J＝6.9Hz,6H),1.51(m,1H),1.20(m,2H)。
实施例8：3-[4-({6-[5-氟-4-(7-氟-3-异丙基-2-甲基-3H-苯并咪唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-吡啶-3-基氨基}-甲基)-哌啶-1-基]-丙烷-1-醇(3-[4-({6-[5-Fluoro-4-(7-fluoro-3-isopropyl-2-methyl-3H-benzoimidazol-5-yl)-pyrimidin-2-ylamino]-pyridin-3-ylamino}-methyl)-piperidin-1-yl]-propan-1-ol)(化合物8)的制备
步骤8a:3-{4-[(6-硝基吡啶-3-基氨基)-甲基]-哌啶-1-基}-丙烷-1-醇(3-{4-[(6-Nitro-pyridin-3-ylamino)-methyl]-piperidin-1-yl}-propan-1-ol)(化合物202-8)的制备
将4-(6-硝基吡啶-3-基)胺甲基哌啶(201-5)(187毫克，0.50毫摩尔，1.0当量)和碳酸钾(207毫克，1.5毫摩尔，3.0当量)加入到装有乙腈(30毫升)的反应瓶中，随后加入3-溴丙-1-醇(139毫克，1.0毫摩尔，2.0当量)，在室温搅拌过夜，反应液在乙酸乙酯和水中萃取分层，有机相浓缩后通过硅胶柱层析分离提纯(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝100/1至10/1)得到化合物3-{4-[(6-硝基吡啶-3-基氨基)-甲基]-哌啶-1-基}-丙烷-1-醇(211毫克，粗品)。LCMS(ESI):m/z295[M+H]+。
步骤8b:3-(4-{[叔丁氧基羰基-(6-硝基吡啶-3-基)-氨基]-甲基}-哌啶-1-基)-丙基碳酸叔丁酯(Carbonicacid3-(4-{[tert-butoxycarbonyl-(6-nitro-pyridin-3-yl)-amino]-methyl}-piperidin-1-yl)-propylestertert-butylester)(化合物203-8)的制备
氮气保护，冰浴中，将氢化钠(70毫克，2.9毫摩尔，5.0当量)加入到干燥的四氢呋喃(10毫升)中，搅拌均匀，将3-{4-[(6-硝基吡啶-3-基氨基)-甲基]-哌啶-1-基}-丙烷-1-醇(202-8)(172毫克，0.58毫摩尔，1.0当量)加入，搅拌30分钟后，加入二碳酸二叔丁基甲酯(316毫克，1.45毫摩尔,2.5当量)，搅拌1小时。用少量水淬灭反应，反应液在水和乙酸乙酯中萃取分层，有机相浓缩后通过硅胶柱层析分离提纯(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝100/1至20/1)得到化合物3-(4-{[叔丁氧基羰基-(6-硝基吡啶-3-基)-氨基]-甲基}-哌啶-1-基)-丙基碳酸叔丁酯(155毫克，收率：54％)。LCMS(ESI):m/z495[M+H]+.。
步骤8c:3-(4-{[(6-氨基吡啶-3-基)-叔丁氧羰基-氨基]-甲基}-哌啶-1-基)-丙基碳酸叔丁酯(Carbonicacid3-(4-{[(6-amino-pyridin-3-yl)-tert-butoxycarbonyl-amino]-methyl}-piperidin-1-yl)-propylestertert-butylester)(化合物204-8)的制备
氢气环境下，将3-(4-{[叔丁氧基羰基(6-硝基吡啶-3-基)-氨基]-甲基}-哌啶-1-基)-丙基碳酸叔丁酯(203-8)(155毫克，1.0毫摩尔，1.0当量)和钯碳(15毫克，10％)加入到装有甲醇(30毫升)的反应瓶中，搅拌16小时后，过滤后滤液减压浓缩得到的浓缩物通过硅胶柱层析分离提纯(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝100/1至10/1)得到化合物3-(4-{[(6-氨基吡啶-3-基)-叔丁氧羰基氨基]-甲基}-哌啶-1-基)-丙基碳酸叔丁酯(40毫克，收率：27.8％)。LCMS(ESI):m/z465[M+H]+。
步骤8d:3-{4-[(叔丁氧基羰-{6-[5-氟-4-(7-氟-3-异丙基-2-甲基-3H-苯并咪唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-吡啶-3-基}-氨基)-甲基]-哌啶-1-基}-丙基碳酸叔丁酯(Carbonicacid3-{4-[(tert-butoxycarbonyl-{6-[5-fluoro-4-(7-fluoro-3-isopropyl-2-methyl-3H-benzoimidazol-5-yl)-pyrimidin-2-ylamino]-pyridin-3-yl}-amino)-methyl]-piperidin-1-yl}-propylestertert-butylester)(化合物205-8)的制备
氮气保护下，3-(4-{[(6-氨基吡啶-3-基)-叔丁氧羰基氨基]-甲基}-哌啶-1-基)-丙基碳酸叔丁酯(204-8)(40毫克，0.086毫摩尔，1.2当量)，6-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑(107-1)(23毫克，0.072毫摩尔，1.0当量)，4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(4毫克，0.006毫摩尔，0.09当量)，碳酸铯(47毫克，0.144毫摩尔，2.0当量)和三(二亚苄基丙酮)二钯(3毫克，0.004毫摩尔，0.05当量)加入到装有甲苯的反应瓶中，加热到回流，搅拌6小时后，反应液减压浓缩得到的粗品通过硅胶柱层析分离提纯(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝100/1至20/1)得到黄色胶状体3-{4-[(叔丁氧基羰-{6-[5-氟-4-(7-氟-3-异丙基-2-甲基-3H-苯并咪唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-吡啶-3-基}-氨基)-甲基]-哌啶-1-基}-丙基碳酸叔丁酯(47毫克，收率：87％)。LCMS(ESI):m/z751[M+H]+。
步骤8e:3-[4-({6-[5-氟-4-(7-氟-3-异丙基-2-甲基-3H-苯并咪唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-吡啶-3-基氨基}-甲基)-哌啶-1-基]-丙烷-1-醇(3-[4-({6-[5-Fluoro-4-(7-fluoro-3-isopropyl-2-methyl-3H-benzoimidazol-5-yl)-pyrimidin-2-ylamino]-pyridin-3-ylamino}-methyl)-piperidin-1-yl]-propan-1-ol)(化合物8)的制备
将化合物3-{4-[(叔丁氧基羰-{6-[5-氟-4-(7-氟-3-异丙基-2-甲基-3H-苯并咪唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-吡啶-3-基}-氨基)-甲基]-哌啶-1-基}-丙基碳酸叔丁酯(205-8)(47毫克，0.063毫摩尔，1.0当量)溶于二氯甲烷(10毫升)，加入盐酸甲醇溶液(5毫升)，搅拌3小时后，用饱和碳酸钠水溶液将反应液的pH值调节到10左右，用二氯甲烷萃取。有机相减压浓缩得到的浓缩物通过硅胶柱层析分离提纯(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝100/1至8/1)得到黄色固体3-[4-({6-[5-氟-4-(7-氟-3-异丙基-2-甲基-3H-苯并咪唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-吡啶-3-基氨基}-甲基)-哌啶-1-基]-丙烷-1-醇(17毫克，收率：49.1％)。LCMS(ESI):m/z551[M+H]+.熔点：197.2-199.5摄氏度；1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.41(s,1H),8.57(d,J＝3.9Hz,1H),8.26(d,J＝1.1Hz,1H),7.87(d,J＝8.8Hz,1H),7.73(d,J＝2.8Hz,1H),7.65(d,J＝12.1Hz,1H),7.03(dd,J＝8.9,2.9Hz,1H),5.58(t,J＝5.8Hz,1H),4.84(dt,J＝13.9,6.9Hz,1H),3.44(t,J＝6.2Hz,2H),2.93(t,J＝6.2Hz,4H),2.64(s,3H),2.51(s,2H),2.42(s,2H),1.97(s,1H),1.78(d,J＝12.7Hz,2H),1.61(t,J＝9.4Hz,9H),1.24(s,2H).
实施例9：N5-((1-乙基氮杂丁烷-3-基)甲基)-N2-(5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑-6-基)嘧啶-2-基)吡啶-2,5-二胺(N5-((1-ethylazetidin-3-yl)methyl)-N2-(5-fluoro-4-(4-fluoro-1-isopropyl-2-methyl-1H-benzo[d]imidazol-6-yl)pyrimidin-2-yl)pyridine-2,5-diamine)(化合物9)的制备
步骤9a.3-((6-硝基吡啶-3-基氨基)甲基)氮杂丁烷-1-甲酸叔丁酯(tert-butyl3-((6-nitropyridin-3-ylamino)methyl)azetidine-1-carboxylate)(化合物108B-9)的制备
将2-硝基-5溴吡啶(1克，4.95毫摩尔，1.0当量)，3-氨甲基氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(108A-9)(1.1克，5.9毫摩尔，1.2当量)，碳酸铯(3.21克，9.85毫摩尔，2.0当量)，三(二亚苄基丙酮)二钯(0.18克，0.2毫摩尔，0.04当量)，4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(0.23克，0.4毫摩尔，0.08当量)混合于50毫升甲苯中。在氮气保护下，置于预先加热好的100℃油浴中加热，反应过夜，冷却至室温，减压浓缩。最后用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝5/1至1/1)得到黄色固体，即产品3-((6-硝基吡啶-3-基氨基)甲基)氮杂丁烷-1-甲酸叔丁酯(0.72克，收率：48％)。LCMS(ESI)m/z309[M+H]+。
步骤9b:N-(氮杂丁烷-3-甲基)-6-硝基吡啶-3-胺(N-(azetidin-3-ylmethyl)-6-nitropyridin-3-amine)(化合物201-9)的制备
将3-((6-硝基吡啶-3-基氨基)甲基)氮杂丁烷-1-甲酸叔丁酯(108B-9)(0.72克，2.34毫摩尔，1.0当量)溶解于50毫升二氯甲烷中，往溶液中加入5毫升三氟乙酸，室温反应2h。反应完成后，加入饱和的碳酸氢钠溶液，使反应体系的pH为8-9，过滤除去产生的盐，将滤液减压浓缩。最后用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇100/1至15/1)得到黄色固体N-(氮杂丁烷-3-甲基)-6-硝基吡啶-3-胺(450毫克，收率：92％)。LCMS(ESI)m/z209[M+H]+。
步骤9c:N-((1-乙基氮杂丁烷-3-基)甲基)-6-硝基吡啶-3-胺(N-((1-ethylazetidin-3-yl)methyl)-6-nitropyridin-3-amine)(化合物202-9)的制备
将N-(氮杂丁烷-3-甲基)-6-硝基吡啶-3-胺(201-9)(450毫克，2.16毫摩尔，1.0当量)和碳酸钾(597毫克，4.32毫摩尔，2.0当量)混合于50毫升乙腈中，在氮气保护下，往里滴加溶于3毫升乙腈的2-溴乙烷(259毫克，2.37毫摩尔，1.1当量)溶液，室温搅拌反应过夜。反应完成后，减压浓缩。最后用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝100/1至15/1)得到黄色固体，即产品N-((1-乙基氮杂丁烷-3-基)甲基)-6-硝基吡啶-3-胺(260毫克，收率：51％)。LCMS(ESI)m/z237[M+H]+。
步骤9d:(1-乙基氮杂丁烷-3-基)甲基)-(6-硝基吡啶-3-基)-氨基甲酸叔丁酯(tert-butyl(1-ethylazetidin-3-yl)methyl(6-nitropyridin-3-yl)carbamate)(化合物203-9)的制备
将氢化钠(88毫克，2.2毫摩尔，2.0当量)混合于10毫升的四氢呋喃中，冷却至0℃。在氮气保护下，滴加溶于10毫升四氢呋喃的N-((1-乙基氮杂丁烷-3-基)甲基)-6-硝基吡啶-3-胺(202-9)(260毫克，1.1毫摩尔，1.0当量)溶液，搅拌15分钟，然后滴加溶于1毫升四氢呋喃的二碳酸二叔丁酯(288毫克，1.32毫摩尔，1.2当量)溶液，自然升温至室温，反应0.5小时，加甲醇淬灭，减压浓缩。最后用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝100/1至30/1)得到黄色固体，即产品(1-乙基氮杂丁烷-3-基)甲基)-(6-硝基吡啶-3-基)-氨基甲酸叔丁酯(220毫克，收率：59％)。LCMS(ESI)m/z337[M+H]+。
步骤9e:(6-胺基吡啶-3-基)-((1-乙基氮杂丁烷-3-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(tert-butyl(6-aminopyridin-3-yl)((1-ethylazetidin-3-yl)methyl)carbamate)(化合物204-9)的制备
将(1-乙基氮杂丁烷-3-基)甲基)-(6-硝基吡啶-3-基)-氨基甲酸叔丁酯(203-9)(220毫克，0.65毫摩尔，1.0当量)溶于50毫升甲醇中，加入25毫克钯碳(含量10％)。在氢气条件下，室温反应3小时。过滤，除去钯碳，将滤液减压浓缩。最后用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝100/1至15/1)得到黄色油状液体，即产品(6-胺基吡啶-3-基)-((1-乙基氮杂丁烷-3-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(120毫克，收率：60％)。LCMS(ESI)m/z307[M+H]+。
步骤9f:((1-乙基氮杂丁烷-3-基)甲基)-(6-(5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑-6-基)嘧啶-2-基胺基)吡啶-3基)-氨基甲酸叔丁酯(tert-butyl((1-ethylazetidin-3-yl)methyl)(6-(5-fluoro-4-(4-fluoro-1-isopropyl-2-methyl-1H-benzo[d]imidazol-6-yl)pyrimidin-2-ylamino)pyridin-3-yl)carbamate)(化合物205-9)的制备
将6-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑(107-1)(0.12克，0.37毫摩尔，1.0当量)，(6-胺基吡啶-3-基)-((1-乙基氮杂丁烷-3-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(204-9)(0.12克，0.39毫摩尔，1.05当量)，碳酸铯(0.241克，0.74毫摩尔，2.0当量)，三(二亚苄基丙酮)二钯(0.014克，0.015毫摩尔，0.04当量)，4，5-双二苯基膦-9，9-二甲基氧杂蒽(0.017克，0.03毫摩尔，0.08当量)溶于30毫升甲苯中。在氮气保护下，置于预先加热好的120℃油浴中加热，反应3小时，冷却至室温。减压浓缩，粗产品最后用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇100/1至15/1)得到黄色固体((1-乙基氮杂丁烷-3-基)甲基)-(6-(5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑-6-基)嘧啶-2-基胺基)吡啶-3基)-氨基甲酸叔丁酯(161毫克，收率：73％)。LCMS(ESI)m/z593[M+H]+。
步骤9g:N5-((1-乙基氮杂丁烷-3-基)甲基)-N2-(5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑-6-基)嘧啶-2-基)吡啶-2,5-二胺(N5-((1-ethylazetidin-3-yl)methyl)-N2-(5-fluoro-4-(4-fluoro-1-isopropyl-2-methyl-1H-benzo[d]imidazol-6-yl)pyrimidin-2-yl)pyridine-2,5-diamine)(化合物9)的制备
将((1-乙基氮杂丁烷-3-基)甲基)-(6-(5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑-6-基)嘧啶-2-基胺基)吡啶-3基)-氨基甲酸叔丁酯(205-9)(0.302克，0.464毫摩尔，1.0当量)溶于50毫升二氯甲烷中，加入3毫升三氟乙酸，反应2小时。反应完成后，加入饱和的碳酸氢钠溶液，使pH为8-9。过滤，将滤液浓缩。最后用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝100/1至15/1)得到黄色固体N5-((1-乙基氮杂丁烷-3-基)甲基)-N2-(5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑-6-基)嘧啶-2-基)吡啶-2,5-二胺(70毫克，收率：52％)。LCMS(ESI)m/z493[M+H]+.；熔点：186.1-187.2摄氏度；1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.43(s,1H),8.58(d,J＝3.9Hz,1H),8.26(s,1H),7.88(d,J＝8.8Hz,1H),7.72(d,J＝2.8Hz,1H),7.66(d,J＝12.1Hz,1H),7.03(dd,J＝8.9,2.9Hz,1H),5.55(t,J＝5.7Hz,1H),4.84(dt,J＝13.9,6.9Hz,1H),3.20(m,4H),2.84(t,J＝5.9Hz,2H),2.64(s,3H),2.58(dd,J＝13.7,6.7Hz,1H),2.36(q,J＝7.1Hz,2H),1.62(d,J＝6.9Hz,6H),0.85(t,J＝7.1Hz,3H).
实施例10:N-(6-(5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑-6-基)嘧啶-2-胺基)吡啶-3-基)哌嗪-1-甲酰胺(N-(6-(5-fluoro-4-(4-fluoro-1-isopropyl-2-methyl-1H-benzo[d]imidazol-6-yl)pyrimidin-2-ylamino)pyridin-3-yl)piperazine-1-carboxamide)(化合物10)的制备
步骤10a：3-氨基-6-硝基吡啶(6-nitropyridin-3-amine)(化合物302)的制备
首先将2-硝基-5-氯吡啶(5克，31.5毫摩尔，1.0当量)和三苯基磷(16.5克，63毫摩尔，2.0当量)溶于120毫升二甲基亚砜中，加热至120℃。往反应体系中缓慢分批加入叠氮化钠(4克，62毫摩尔，2.0当量)，直至2-硝基-5-氯吡啶全部反应完。然后缓慢的滴加50毫升水溶液(1摩尔每升)，在120度搅拌半小时。将混合物用乙酸乙酯萃取，有机相用饱和食盐水洗涤多次，无水硫酸钠干燥，旋干。最后快速柱层析纯化(洗脱剂：乙酸乙酯/石油醚＝1/1)，即得到化合物3-胺基-6-硝基吡啶(6克，粗品)。LCMS(ESI):m/z140[M+H]+。
步骤10b：6-硝基吡啶-3-胺基甲酸苯酯(phenyl6-nitropyridin-3-ylcarbamate)(化合物303)的制备
将3-胺基-6-硝基吡啶(302)(5克，36毫摩尔，1.0当量)溶于100毫升乙腈中，加入20毫升吡啶。在0℃下，缓慢地滴加氯甲酸苯酯(6毫升，46.8毫摩尔，1.3当量)，搅拌反应1小时。加水淬灭，乙酸乙酯萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，旋干。最后通过快速柱层析纯化(洗脱剂：乙酸乙酯/石油醚＝1/1)，即得到化合物6-硝基吡啶-3-胺基甲酸苯酯(9.31克，粗品)。LCMS(ESI):m/z260[M+H]+。
步骤10c：4-(6-硝基吡啶-3-胺甲酰基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(tert-butyl4-(6-nitropyridin-3-ylcarbamoyl)piperazine-1-carboxylate)(化合物305-10)的制备
将6-硝基吡啶-3-胺基甲酸苯酯(303)(5克，19.3毫摩尔，1.0当量)溶于100毫升的甲醇中，然后加入1-甲酸叔丁酯-哌嗪(304-10)(4克，21.4毫摩尔，1.1当量)，加热至50℃，反应3小时。冷却至室温，旋干。最后柱层析纯化(洗脱剂：乙酸乙酯/石油醚＝1/3至1/1)即得到化合物4-(6-硝基吡啶-3-胺甲酰基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(6.5克，收率：96％)。LCMS(ESI):m/z352[M+H]+。
步骤10d：4-(6-胺基吡啶-3-胺甲酰基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(tert-butyl4-(6-aminopyridin-3-ylcarbamoyl)piperazine-1-carboxylate)(化合物306-10)
首先将4-(6-硝基吡啶-3-胺甲酰基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(305-10)(6.5克，18.5毫摩尔，1.0当量)溶于200毫升的甲醇中，加入10％钯碳(0.65克，10％)。在氢气条件下，室温反应过夜。过滤，除去钯碳，将滤液旋干。最后柱层析纯化(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝100/1至20/1)，即得到化合物4-(6-胺基吡啶-3-胺甲酰基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(4.96克，收率：83％)。LCMS(ESI):m/z322[M+H]+。
步骤10e:N-(6-(5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑-6-基)嘧啶-2-胺基)吡啶-3-基)哌嗪-1-甲酰胺(N-(6-(5-fluoro-4-(4-fluoro-1-isopropyl-2-methyl-1H-benzo[d]imidazol-6-yl)pyrimidin-2-ylamino)pyridin-3-yl)piperazine-1-carboxamide)(化合物10)的制备
将6-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑(107-1)(0.3克，0.93毫摩尔，1.0当量)，4-(6-胺基吡啶-3-胺甲酰基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(306-10)(0.45克，1.553毫摩尔，1.6当量)，碳酸铯(0.61克，1.87毫摩尔，2.0当量)，三(二亚苄基丙酮)二钯(0.036克，0.04毫摩尔，0.04当量)，4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(0.048克，0.083毫摩尔，0.09当量)溶于50毫升甲苯中。在氮气保护下，在预先加热好的130℃油浴中加热，搅拌反应2小时。冷却至室温，旋干。最后柱层析纯化(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇100/1至20/1)，得到黄色固体，即化合物4-(6-(5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑-6-基)嘧啶-2-胺基)吡啶-3-胺甲酰基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(385毫克，收率：68％)。LCMS(ESI):m/z608[M+H]+。将上述所得化合物(0.385克，0.634毫摩尔)溶于50毫升二氯甲烷中，加入6毫升6摩尔每升的盐酸溶液，在室温下搅拌反应2小时。往反应液加入饱和碳酸氢钠溶液，使pH值调为8-9。然后过滤，以除去产生的无机盐，将滤液减压浓缩。最后用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝100/1至15/1)得到黄色固体，即化合物N-(6-(5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑-6-基)嘧啶-2-胺基)吡啶-3-基)哌嗪-1-甲酰胺(100毫克，收率：31％)。分解点194.6～196.5℃；LCMS(ESI):m/z508[M+H]+；1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.84(s,1H),8.65(d,J＝3.8Hz,1H),8.50(s,1H),8.40(d,J＝2.5Hz,1H),8.29(s,1H),8.13(d,J＝9.0Hz,1H),7.86(dd,J＝9.0,2.6Hz,1H),7.68(d,J＝12.1Hz,1H),4.85(dt,J＝13.8,6.8Hz,1H),3.39(m,4H),2.72(m,4H),2.65(d,J＝9.3Hz,3H),1.63(d,J＝6.9Hz,6H)。
实施例11:4-乙基-N-(6-(5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑-6-基)嘧啶-2-胺基)吡啶-3-基)哌嗪-1-甲酰胺(4-ethyl-N-(6-((5-fluoro-4-(4-fluoro-1-isopropyl-2-methyl-1H-benzo[d]imidazol-6-yl)pyrimidin-2-yl)amino)pyridin-3-yl)piperazine-1-carboxamide)(化合物11)的制备
将N-(6-(5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑-6-基)嘧啶-2-胺基)吡啶-3-基)哌嗪-1-甲酰胺(化合物10)(76毫克，0.15毫摩尔，1.0当量)和碳酸钾(42毫克，0.3毫摩尔，2.0当量)分散于20毫升N,N-二甲基甲酰胺中。在氮气保护下，向反应体系中滴加溶于3毫升N,N-二甲基甲酰胺的碘乙烷(0.012毫升，0.15毫摩尔，1.2当量)溶液，室温搅拌反应过夜。待反应完全后，减压浓缩，最后用柱层析纯化(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝100/1至20/1)得到黄色固体，即化合物4-乙基-N-(6-(5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑-6-基)嘧啶-2-胺基)吡啶-3-基)哌嗪-1-甲酰胺(42毫克，收率：52.5％)。熔点192.1-193.1℃；LCMS(ESI)：m/z536[M+H]+；1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.85(s,1H),8.65(d,J＝3.8Hz,1H),8.56(s,1H),8.40(d,J＝2.4Hz,1H),8.29(s,1H),8.13(d,J＝9.0Hz,1H),7.86(dd,J＝9.0,2.6Hz,1H),7.68(d,J＝12.1Hz,1H),4.85(dt,J＝13.8,6.9Hz,1H),3.45(s,4H),2.64(s,3H),2.38(s,6H),1.63(d,J＝6.9Hz,6H),1.03(t,J＝7.2Hz,3H).
实施例12:N-(6-((5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑-6-基)嘧啶-2-基)胺基)吡啶-3-基)哌啶-1-甲酰胺(N-(6-((5-fluoro-4-(4-fluoro-1-isopropyl-2-methyl-1H-benzo[d]imidazol-6-yl)pyrimidin-2-yl)amino)pyridin-3-yl)piperidine-1-carboxamide)(化合物13)的制备
步骤12a：(6-硝基吡啶-3-基)-氨甲酰基哌啶(N-(6-nitropyridin-3-yl)piperidine-1-carboxamide)(化合物305-13)的制备
将(6-硝基吡啶-3-基)-氨基甲酸苯酯(303)(500毫克，1.93毫摩尔，1.0当量)，哌啶盐酸盐(304-13)(467毫克，3.86毫摩尔，2.0当量)和碳酸钾(532毫克，3.86毫摩尔，2.0当量)溶解在60毫升的甲醇中，然后反应溶液在50℃条件下搅拌反应3小时。冷却至室温，减蒸浓缩得到黄色浓缩物，通过柱层析纯化(洗脱剂：乙酸乙酯/石油醚＝20/1至1/1)得到黄色固体(6-硝基吡啶-3-基)-氨甲酰基哌啶(480毫克，收率：99.4％)。LCMS(ESI):m/z251[M+H]+.。
步骤12b：(6-胺基吡啶-3-基)-氨甲酰基哌啶(N-(6-aminopyridin-3-yl)piperidine-1-carboxamide)(化合物306-13)的制备
将化合物(6-硝基吡啶-3-基)-氨甲酰基哌啶(305-13)(480毫克，1.92毫摩尔，1.0当量)溶解在60毫升的甲醇中，然后加入质量分数10％的钯碳(48毫克)，反应混合液在氢气氛围下室温搅拌反应3小时。过滤，减蒸浓缩得到棕色浓缩物，通过柱层析纯化(洗脱剂：甲醇/二氯甲烷100/1至10/1)得到白色固体(6-胺基吡啶-3-基)-氨甲酰基哌啶(210毫克，收率：49.7％)。LCMS(ESI):m/z221[M+H]+.。
步骤12c：N-(6-((5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑-6-基)嘧啶-2-基)胺基)吡啶-3-基)哌啶-1-甲酰胺(N-(6-((5-fluoro-4-(4-fluoro-1-isopropyl-2-methyl-1H-benzo[d]imidazol-6-yl)pyrimidin-2-yl)amino)pyridin-3-yl)piperidine-1-carboxamide)(化合物13)的制备
在氮气保护下，将化合物6-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑(107-1)(200毫克，0.62毫摩尔，1.2当量)，(6-胺基吡啶-3-基)-氨甲酰基哌啶(306-13)(115毫克，0.52毫摩尔，1.0当量)，三(二亚苄基丙酮)二钯(24毫克，0.026毫摩尔，0.05当量)，4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(27毫克，0.047毫摩尔，0.09当量)和碳酸铯(339毫克，1.04毫摩尔，2.0当量)溶解于干燥的甲苯(25毫升)中，然后油浴加热回流4小时。反应混合物降至室温，过滤，真空浓缩。得到的浓缩物通过柱层析纯化(洗脱剂：甲醇/二氯甲烷＝100/1至10/1)得到黄色固体化合物N-(6-((5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑-6-基)嘧啶-2-基)胺基)吡啶-3-基)哌啶-1-甲酰胺(65毫克，收率：24.7％)。熔点210.3-217.8℃；LCMS(ESI):m/z507[M+H]+.；1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.83(s,1H),8.65(d,J＝3.7Hz,1H),8.48(s,1H),8.40(d,J＝2.1Hz,1H),8.29(s,1H),8.12(d,J＝9.0Hz,1H),7.86(dd,J＝8.9,2.3Hz,1H),7.68(d,J＝12.1Hz,1H),4.85(dt,J＝13.7,6.8Hz,1H),3.43(m,4H),2.64(s,3H),1.61(dd,J＝24.1,5.8Hz,8H),1.51(d,J＝3.8Hz,4H)。
实施例13:N-(6-((5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑-6-基)嘧啶-2-基)胺基)吡啶-3-基)-4-吡咯烷基哌啶-1-甲酰胺(N-(6-((5-fluoro-4-(4-fluoro-1-isopropyl-2-methyl-1H-benzo[d]imidazol-6-yl)pyrimidin-2-yl)amino)pyridin-3-yl)-4-(pyrrolidin-1-yl)piperidine-1-carboxamide)(化合物14)的制备
步骤13a：(6-硝基吡啶-3-基)-氨甲酰基-(4-吡咯烷基)哌啶(4-Pyrrolidin-1-yl-piperidine-1-carboxylicacid(6-nitro-pyridin-3-yl)-amide)(化合物305-14)的制备
将(6-硝基吡啶-3-基)氨基甲酸苯酯(303)(500毫克，1.93毫摩尔，1.0当量)，4-吡咯烷基哌啶盐酸盐(734毫克，3.86毫摩尔，2.0当量)和碳酸钾(532毫克，3.86毫摩尔，2.0当量)溶解在50毫升的四氢呋喃和10毫升的水中，然后反应溶液在50℃下搅拌反应5小时。冷却至室温，减蒸浓缩得到黄色浓缩物，通过柱层析纯化(洗脱剂：甲醇/二氯甲烷＝100/1至10/1)得到无色油状化合物(6-硝基吡啶-3-基)-氨甲酰基-(4-吡咯烷基)哌啶(310毫克，收率：50.3％)。LCMS(ESI):m/z320[M+H]+.。
步骤13b：(6-胺基吡啶-3-基)-氨甲酰基-(4-吡咯烷基)哌啶(4-Pyrrolidin-1-yl-piperidine-1-carboxylicacid(6-amino-pyridin-3-yl)-amide)(化合物306-14)的制备
将(6-硝基吡啶-3-基)-氨甲酰基-(4-吡咯烷基)哌啶(305-14)(310毫克，0.97毫摩尔，1.0当量)溶解在60毫升的甲醇中，然后加入质量分数10％的钯碳(31毫克)，反应混合液在氢气氛围下室温搅拌反应12小时。过滤，减压浓缩得到白色固体(6-胺基吡啶-3-基)-氨甲酰基-(4-吡咯烷基)哌啶(234毫克，收率：83.4％)。LCMS(ESI):m/z290[M+H]+.。
步骤13c：N-(6-((5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑-6-基)嘧啶-2-基)胺基)吡啶-3-基)-4-吡咯烷基哌啶-1-甲酰胺(N-(6-((5-fluoro-4-(4-fluoro-1-isopropyl-2-methyl-1H-benzo[d]imidazol-6-yl)pyrimidin-2-yl)amino)pyridin-3-yl)-4-(pyrrolidin-1-yl)piperidine-1-carboxamide)(化合物14)的制备
在氮气保护下，将化合物(6-胺基吡啶-3-基)-氨甲酰基-(4-吡咯烷基)哌啶(306-14)(120毫克，0.415毫摩尔，1.0当量)，6-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑(107-1)(157毫克，0.49毫摩尔，1.2当量)，三(二亚苄基丙酮)二钯(18毫克，0.02毫摩尔，0.05当量)，4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(21毫克，0.037毫摩尔，0.09当量)和碳酸铯(270毫克，0.83毫摩尔，2.0当量)溶解于干燥的甲苯(15毫升)中，然后油浴加热回流4小时。反应混合物降至室温，过滤，真空浓缩。得到的浓缩物通过柱层析纯化(洗脱剂：甲醇/二氯甲烷＝100/1至10/1)得到黄色固体化合物N-(6-((5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑-6-基)嘧啶-2-基)胺基)吡啶-3-基)-4-吡咯烷基哌啶-1-甲酰胺(65毫克，收率：27.2％)。熔点187.9-201.3℃；LCMS(ESI):m/z576[M+H]+.；1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.85(s,1H),8.66(m,2H),8.41(s,1H),8.29(s,1H),8.13(d,J＝8.9Hz,1H),7.87(d,J＝8.6Hz,1H),7.68(d,J＝12.0Hz,1H),4.84(dd,J＝13.5,6.7Hz,1H),4.19(d,J＝11.9Hz,2H),3.03(s,5H),2.84(t,J＝12.3Hz,2H),2.64(s,3H),2.01(d,J＝9.9Hz,2H),1.85(s,4H),1.60(dd,J＝35.4,8.3Hz,8H)。
实施例14:5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑-6-基)-N-(5-((哌啶-4-氨基)甲基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺(5-fluoro-4-(4-fluoro-1-isopropyl-2-methyl-1H-benzo[d]imidazol-6-yl)-N-(5-((piperidin-4-ylamino)methyl)pyridin-2-yl)pyrimidin-2-amine)(化合物17)的制备
步骤14a：6-氨基烟酸甲酯(methyl6-aminonicotinate)(化合物402)的制备
将6-氨基烟酸(2.0克，14.5毫摩尔，1.0当量)加入到30毫升无水甲醇中，室温搅拌溶解，滴加二氯亚砜(1.55毫升，21.4毫摩尔，1.5当量)和三滴N,N-二甲基甲酰胺，反应体系加热回流，反应3小时。反应液减压浓缩，向所得浓缩物加入100毫升乙酸乙酯，用饱和碳酸钠水溶液洗两次，饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到微黄色固体6-氨基烟酸甲酯(2.4克，收率：87.5％)。LCMS(ESI):m/z153[M+H]+.
步骤14b：2-氨基-5-羟甲基吡啶(6-aminopyridin-3-yl)methanol)(化合物403)的制备
在氮气保护下，将四氢铝锂(0.80克，21.1毫摩尔，2.3当量)加入到45毫升四氢呋喃中。在冰浴中冷却，滴加6-氨基烟酸甲酯四氢呋喃溶液(1.38克，9.1毫摩尔，1.0当量)，反应体系于室温下搅拌2小时。冰浴冷却至0℃，依次加入0.8毫升水，0.8毫升15％氢氧化钠水溶液，2.4毫升水，搅拌15分钟后，升至室温，加入无水硫酸钠搅拌。过滤，滤液减压浓缩得到微黄色固体2-氨基-5-羟甲基吡啶(0.9克，收率：80.0％)。LCMS(ESI):m/z125[M+H]+.
步骤14c：(6-((5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑-6-基)嘧啶-2-基)氨基)吡啶-3-基)甲醇((6-((5-fluoro-4-(4-fluoro-1-isopropyl-2-methyl-1H-benzo[d]imidazol-6-yl)pyrimidin-2-yl)amino)pyridin-3-yl)methanol)(化合物404-17)的制备
在氮气保护下，将2-氯-5-氟-4-(7-氟-2-甲基-3-异丙基-3H-苯并咪唑-5-基)嘧啶(107-1)(0.322克，1.00毫摩尔，1.0当量)，2-氨基-5-羟甲基吡啶(403)(0.248克，2.00毫摩尔，2.0当量)，碳酸铯(0.978克，3.0毫摩尔，3.0当量)，4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(58毫克，0.1毫摩尔，0.1当量)和三(二亚苄基丙酮)二钯(25毫克，0.03毫摩尔，0.03当量)加入到15毫升甲苯中，加热回流3小时。反应液减压浓缩，经硅胶柱层析纯化分离(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝30/1至10/1)得到微黄色固体(6-((5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑-6-基)嘧啶-2-基)氨基)吡啶-3-基)甲醇(0.27克，收率：65.8％)。LCMS(ESI):m/z411[M+H]+。
步骤14d：6-((5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑-6-基)嘧啶-2-基)氨基)吡啶甲醛(6-((5-fluoro-4-(4-fluoro-1-isopropyl-2-methyl-1H-benzo[d]imidazol-6-yl)pyrimidin-2-yl)amino)nicotinaldehyde)(化合物405-17)的制备
于室温下，将(6-((5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑-6-基)嘧啶-2-基)氨基)吡啶-3-基)甲醇(404-17)(105毫克，0.26毫摩尔，1.0当量)下加入到三氯甲烷中。搅拌下，加入二氧化锰(230毫克，2.6毫摩尔，10.0当量)，室温反应4小时，过滤，用甲醇洗滤饼三次，无水硫酸钠干燥滤液，减压浓缩得到米白色固体6-((5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑-6-基)嘧啶-2-基)氨基)吡啶甲醛(140毫克，粗品)。LCMS(ESI):m/z409[M+H]+。
步骤14e：5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑-6-基)-N-(5-((哌啶-4-氨基)甲基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺(5-fluoro-4-(4-fluoro-1-isopropyl-2-methyl-1H-benzo[d]imidazol-6-yl)-N-(5-((piperidin-4-ylamino)methyl)pyridin-2-yl)pyrimidin-2-amine)(化合物17)的制备
于室温下，将6-((5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑-6-基)嘧啶-2-基)氨基)吡啶甲醛(405-17)(100毫克，0.25毫摩尔，1.0当量)和N-羰基甲氧基-4-氨基哌啶(406-17)(75毫克，0.37毫摩尔，1.5当量)加入到二氯甲烷中，滴加乙酸(15毫克，0.25毫摩尔，1.0当量)。冰浴冷却下，搅拌30分钟，分批加入三乙酰基硼氢化钠(159毫克，0.74毫摩尔，3.0当量)，自然升温至室温，搅拌过夜。反应液中加入水，用饱和碳酸钠水溶液调水相pH值至10左右，水相由二氯甲烷萃取三次，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，经硅胶柱层析分离纯化(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝30/1至10/1)得到微黄色固体4-(((6-((5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑-6-基)嘧啶-2-基)氨基)吡啶-3-基)甲基)氨基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(170毫克，粗品)LCMS(ESI):m/z592[M+H]+。上述所得化合物(170毫克，0.29毫摩尔，1.0当量)溶解于20毫升无水甲醇中，于室温下加入浓盐酸(4毫升，0.08摩尔，276.0当量)，室温搅拌，反应4小时。反应液减压浓缩，加入二氯甲烷和水，用饱和碳酸钠水溶液调水相pH值至7，用二氯甲烷洗水相两次，再次调水相pH值至10左右，用二氯甲烷萃取三次，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到微黄色固体5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑-6-基)-N-(5-((哌啶-4-氨基)甲基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺(91毫克，收率：64.5％)。熔点172-174℃；LCMS(ESI):m/z492[M+H]+。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ10.05(s,1H),8.69(s,1H),8.23(dd,J＝38.3,19.2Hz,3H),7.71(dd,J＝17.7,10.2Hz,2H),4.85(m,1H),3.69(s,2H),2.90(d,J＝11.4Hz,2H),2.64(s,3H),2.39(m,4H),1.76(d,J＝11.1Hz,2H),1.63(d,J＝6.5Hz,6H),1.12(d,J＝10.5Hz,2H)。
实施例15:N-(5-(((1-乙基哌啶-4-基)氨基)甲基)吡啶-2-基)-5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑-6-基)嘧啶-2-胺(N-(5-(((1-ethylpiperidin-4-yl)amino)methyl)pyridin-2-yl)-5-fluoro-4-(4-fluoro-1-isopropyl-2-methyl-1H-benzo[d]imidazol-6-yl)pyrimidin-2-amine)(化合物18)的制备
于室温下，将2-[5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑-6-基)嘧啶-2-基]氨基-5-吡啶甲醛(405-17)(60毫克，0.15毫摩尔，1.0当量)和1-乙基-4-氨基哌啶(406-18)(100毫克，0.78毫摩尔，5.2当量)加入到二氯甲烷中，滴加乙酸(9毫克，0.15毫摩尔，1.0当量)。冰浴冷却下，搅拌30分钟，分批加入三乙酰基硼氢化钠(95毫克，0.45毫摩尔，3.0当量)，自然升温至室温，搅拌过夜。反应液中加入水，用饱和碳酸钠水溶液调水相pH值至10左右，水相由二氯甲烷萃取三次，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，经硅胶柱层析分离纯化(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝40/1至10/1)得到微黄色固体N-(5-(((1-乙基哌啶-4-基)氨基)甲基)吡啶-2-基)-5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑-6-基)嘧啶-2-胺(60毫克，收率76.9％)。LCMS(ESI):m/z521[M+H]+.；熔点：175-177摄氏度；1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.97(s,1H),8.68(s,1H),8.25(m,3H),7.73(s,2H),4.85(s,1H),3.72(s,2H),2.81(s,2H),2.64(s,3H),2.31(s,3),1.82(s,4H),1.64(s,6H),1.29(s,2H,0.98(s,3H)。
实施例16:2-(4-(((6-((5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑-6-基)嘧啶-2-基)胺基)吡啶-3-基)甲基)胺基)哌啶-1-基)乙醇(2-(4-(((6-((5-fluoro-4-(4-fluoro-1-isopropyl-2-methyl-1H-benzo[d]imidazol-6-yl)pyrimidin-2-yl)amino)pyridin-3-yl)methyl)amino)piperidin-1-yl)ethanol)(化合物19)的制备
步骤16a：(2-(4-胺基哌啶-1-基)乙烷-1-醇)(2-(4-aminopiperidin-1-yl)ethan-1-ol)(化合物406-19)的制备
将化合物(哌啶-4-基)胺基甲酸叔丁酯(1克，5毫摩尔，1当量)，碳酸钾(1.38克，10毫摩尔，2当量)，碘化钾(83毫克，0.5毫摩尔，0.1当量)和2-溴乙醇(750毫克，6毫摩尔，1.2当量)的乙腈(20毫升)溶液在40℃下搅拌反应16小时。反应冷却至室温，然后过滤，滤液减压浓缩，得到黄色油状物。所得黄色油状物溶解于二氯甲烷(5毫升)，然后在冰浴下滴加入浓盐酸(2毫升)。混合物在室温下搅拌2小时。反应结束后，用碳酸钾调节pH至8-9，过滤，滤液浓缩，所得油状物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇50/1)，得到黄色油状物2-(4-胺基哌啶-1-基)乙烷-1-醇(520毫克，收率：80.55％)。LCMS(ESI):m/z145[M+H]+。
步骤16b：2-(4-(((6-((5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑-6-基)嘧啶-2-基)胺基)吡啶-3-基)甲基)胺基)哌啶-1-基)乙醇(2-(4-(((6-((5-fluoro-4-(4-fluoro-1-isopropyl-2-methyl-1H-benzo[d]imidazol-6-yl)pyrimidin-2-yl)amino)pyridin-3-yl)methyl)amino)piperidin-1-yl)ethanol)(化合物19)的制备
于室温下，将化合物2-[5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑-6-基)嘧啶-2-基]氨基-5-吡啶甲醛(405-17)(20毫克，0.05毫摩尔，1当量)和化合物2-(4-胺基哌啶-1-基)乙烷-1-醇(406-19)(14.4毫克，0.1毫摩尔，2当量)加入到二氯甲烷(5毫升)中，滴加乙酸(8.8毫克,0.11毫摩尔，2.2当量)。冰浴冷却下，搅拌30分钟，分批加入氰基硼氢化钠(7.855毫克,0.125毫摩尔，2.5当量)，自然升温至室温，搅拌过夜。反应液中加入水，用饱和碳酸钠水溶液调水相pH值至10左右，水相由二氯甲烷萃取三次，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，经硅胶柱层析分离纯化(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇80/1)得到微黄色固体2-(4-(((6-((5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑-6-基)嘧啶-2-基)胺基)吡啶-3-基)甲基)胺基)哌啶-1-基)乙醇(15毫克，收率：57.1％)。LCMS(ESI):m/z537[M+H]+；熔点：170-173摄氏度；1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.95(s,1H),8.68(d,J＝3.8Hz,1H),8.30(d,J＝1.0Hz,1H),8.24(d,J＝1.9Hz,1H),8.19(d,J＝8.5Hz,1H),7.71(m,2H),4.86(dd,J＝13.8,6.9Hz,1H),4.30(s,1H),3.70(s,2H),3.46(dd,J＝11.0,6.0Hz,2H),2.80(d,J＝11.6Hz,2H),2.64(s,3H),2.35(t,J＝6.4Hz,3H),1.95(t,J＝10.8Hz,2H),1.79(d,J＝11.5Hz,2H),1.63(d,J＝6.9Hz,6H),1.28(dd,J＝20.1,6.7Hz,2H)。
实施例17:N-(5-((1-乙基哌啶-4-基)氧甲基)吡啶-2-基)-5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑-6-基)嘧啶-2-胺(N-(5-(((1-ethylpiperidin-4-yl)oxy)methyl)pyridin-2-yl)-5-fluoro-4-(4-fluoro-1-isopropyl-2-methyl-1H-benzo[d]imidazol-6-yl)pyrimidin-2-amine)(化合物20)的制备
步骤17a:(6-溴吡啶-3-基)甲醇((6-bromopyridin-3-yl)methanol)(化合物502)的制备
2-溴-5-醛基吡啶(2克，10.7毫摩尔，1.0当量)溶解于120毫升甲醇中，冷却至0℃，分批加入硼氢化锂(470毫克，21.5毫摩尔，2.0当量)。反应1小时，减压浓缩，将所得到的浓缩物用乙酸乙酯溶解，萃取，加水洗涤多次。有机相用无水硫酸钠干燥，减压旋干得到黄色固体，即产品(6-溴吡啶-3-基)甲醇(2克，粗品)。LCMS(ESI)m/z188[M+H]+。
步骤17b:2-溴-5-(氯甲基)吡啶(2-bromo-5-(chloromethyl)pyridine)(化合物503)的制备
将(6-溴吡啶-3-基)甲醇(502)(2克，粗品)溶解于120毫升的三氯甲烷中，冷却至0℃。在氮气保护下，缓慢滴加12毫升二氯亚砜，自然升至室温。加热，回流，反应2小时，冷却至室温，减压浓缩。将得到的浓缩物溶解于二氯甲烷中，用饱和碳酸氢钠溶液洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，减压旋干得到黄色固体，即产品2-溴-5-(氯甲基)吡啶(2.143克，粗品)。LCMS(ESI)m/z206[M+H]+。
步骤17c:4-((6-溴吡啶-3-基)甲氧基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(tert-butyl4-((6-bromopyridin-3-yl)methoxy)piperidine-1-carboxylate)(化合物505-20)的制备
将N-叔丁氧羰基-4-羟基哌啶(504-20)(3.15克，15.6毫摩尔，1.0当量)溶解于60毫升四氢呋喃中，冷却至0℃。在氮气保护下，一次性加入氢化钠NaH(1.07克，27毫摩尔，1.7当量)，反应半小时。然后滴加溶于5毫升四氢呋喃的2-溴-5-(氯甲基)吡啶(2.143克，粗品)溶液，自然升至室温，搅拌半小时。往反应体系中加入20毫升N，N-二甲基甲酰胺，加热至80℃，反应过夜。冷却至室温，乙酸乙酯萃取，分别用水和饱和食盐水洗涤多次，有机相用无水硫酸钠干燥，减压浓缩。最后用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝5/1)得到黄色油状液体，即产品4-((6-溴吡啶-3-基)甲氧基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(2.34克，收率：65％)。LCMS(ESI):m/z371[M+H]+。
步骤17d:2-溴-5-((哌啶-4-基)氧甲基)吡啶(2-bromo-5-(((piperidin-4-yl)oxy)methyl)pyridine)(化合物506-20)的制备
将4-((6-溴吡啶-3-基)甲氧基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(505-20)(2.34克，6.3毫摩尔，1.0当量)溶解于100毫升二氯甲烷中，加入6毫升三氟乙酸，反应1小时。反应完成后，加入饱和的碳酸氢钠溶液，将pH调至8-9，二氯甲烷萃取。有机相用无水硫酸钠干燥，减压浓缩。最后用硅胶柱层析纯化得到黄色固体2-溴-5-((哌啶-4-基)氧甲基)吡啶(1.5克，收率：88％)。LCMS(ESI):m/z271[M+H]+。
步骤17e:2-溴-5-((1-乙基哌啶-4-基)氧甲基)吡啶(2-bromo-5-(((1-ethylpiperidin-4-yl)oxy)methyl)pyridine)(化合物507-20)的制备
将2-溴-5-((哌啶-4-基)氧甲基)吡啶(506-20)(500毫克，1.85毫摩尔，1.0当量)，溴乙烷(242毫克，2.22毫摩尔，1.2当量)和碳酸钾(511毫克，3.70毫摩尔，2.0当量)溶于30毫升乙腈，室温条件下反应过夜，过滤，旋干溶剂，浓缩物硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝1/1)得到无色液体2-溴-5-((1-乙基哌啶-4-基)氧甲基)吡啶(420毫克，收率：76％)。LCMS(ESI):m/z299[M+H]+。
步骤17f:5-((1-乙基哌啶-4-基)氧甲基)吡啶-2-胺(5-(((1-ethylpiperidin-4-yl)oxy)methyl)pyridin-2-amine)(化合物508-20)的制备
将2-溴-5-((1-乙基哌啶-4-基)氧甲基)吡啶(506-20)(420毫克，1.41毫摩尔，1.0当量)，Cu2O(20毫克，0.141毫摩尔，0.1当量)和氨水(5毫升)溶于甲醇(10毫升)，在闷罐中，氮气保护条件下升温到80℃反应过夜。反应液冷却到室温，旋干溶剂，浓缩物硅胶柱层析纯化(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝20/1)得到无色液体5-((1-乙基哌啶-4-基)氧甲基)吡啶-2-胺(200毫克，收率：61％)。LCMS(ESI):m/z236[M+H]+。
步骤17g:N-(5-((1-乙基哌啶-4-基)氧甲基)吡啶-2-基)-5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑-6-基)嘧啶-2-胺(N-(5-(((1-ethylpiperidin-4-yl)oxy)methyl)pyridin-2-yl)-5-fluoro-4-(4-fluoro-1-isopropyl-2-methyl-1H-benzo[d]imidazol-6-yl)pyrimidin-2-amine)(化合物20)的制备
将5-((1-乙基哌啶-4-基)氧甲基)吡啶-2-胺(508-20)(100毫克，0.426毫摩尔，1.0当量)，6-(2-氯-5-氟-嘧啶-4-基)-4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑(107-1)(137毫克，0.426毫摩尔，1.0当量)，碳酸铯(280毫克，0.852毫摩尔，2.0当量)，三(二亚苄基丙酮)二钯(20毫克，0.0213毫摩尔，0.05当量)和4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(25毫克，0.0426毫摩尔，0.1当量)溶于10毫升甲苯，氮气保护条件下，升温到110℃反应4小时。冷却到室温，旋干溶剂，浓缩物硅胶柱层析纯化(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝80/1)得到黄色固体N-(5-((1-乙基哌啶-4-基)氧甲基)吡啶-2-基)-5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑-6-基)嘧啶-2-胺(190毫克，收率：86％)。LCMS(ESI):m/z522[M+H]+；熔点：178-180摄氏度；1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ10.05(s,1H),8.70(s,1H),8.26(dd,J＝25.7,12.9Hz,3H),7.70(t,J＝10.5Hz,2H),4.85(s,1H),4.48(s,2H),3.39(s,1H),2.65(s,5H),2.29(d,J＝6.2Hz,2H),2.02(s,2H),1.86(s,2H),1.63(d,J＝5.7Hz,6H),1.49(s,2H),0.98(s,3H)。
实施例18:2-(4-((6-(5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑-6-基)嘧啶-2-胺基)吡啶-3-基)甲氧基)哌啶-1-基)乙醇(2-(4-((6-((5-fluoro-4-(4-fluoro-1-isopropyl-2-methyl-1H-benzo[d]imidazol-6-yl)pyrimidin-2-yl)amino)pyridin-3-yl)methoxy)piperidin-1-yl)ethan-1-ol)(化合物21)的制备
步骤18a:2-(4-((6-溴吡啶-3-基)甲氧基)哌啶-1-基)乙醇(2-(4-((6-bromopyridin-3-yl)methoxy)piperidin-1-yl)ethanol)(化合物507-21)的制备
将2-溴-5-((哌啶-4-基)氧甲基)吡啶(206-20)(200毫克，0.74毫摩尔，1.0当量)溶解于40毫升乙腈中，加入碳酸钾(204毫克，1.48毫摩尔，2.0当量)。在氮气保护下，加入溶于1毫升乙腈的(2-溴乙氧基)-叔丁基二苯基硅烷(322毫克,0.89毫摩尔，1.2当量)溶液，加热至80℃，反应过夜。冷却至室温，二氯甲烷萃取，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，即得到黄色油状液体(500毫克，粗品)。LCMS(ESI)m/z553[M+H]+。将其(500毫克，粗品)溶解于50毫升甲醇中，加入四丁基氟化铵(354毫克，1.35毫摩尔，2.0当量)，室温搅拌反应过夜。减压浓缩，最后用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝100/1至30/1)得到黄色油状液体2-(4-((6-溴吡啶-3-基)甲氧基)哌啶-1-基)乙醇(200毫克，收率：86％)。LCMS(ESI):m/z315[M+H]+。
步骤18b:2-(4-((6-胺基吡啶-3-基)甲氧基)哌啶-1-基)乙醇(2-(4-((6-aminopyridin-3-yl)methoxy)piperidin-1-yl)ethanol)(化合物508-21)的制备
将2-(4-((6-溴吡啶-3-基)甲氧基)哌啶-1-基)乙醇(507-21)(200毫克，0.64毫摩尔，1.0当量)溶解于15毫升甲醇中，加入氧化亚铜(10毫克，0.064毫摩尔，0.1当量)和10毫升氨水，在闷罐中80℃反应过夜。反应完成后，冷却至室温，减压浓缩。最后用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝100/1至15/1)得到黄色油状液体2-(4-((6-胺基吡啶-3-基)甲氧基)哌啶-1-基)乙醇(92毫克，收率：57％)。LCMS(ESI):m/z252[M+H]+。
步骤18c:2-(4-((6-(5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑-6-基)嘧啶-2-胺基)吡啶-3-基)甲氧基)哌啶-1-基)乙醇(2-(4-((6-((5-fluoro-4-(4-fluoro-1-isopropyl-2-methyl-1H-benzo[d]imidazol-6-yl)pyrimidin-2-yl)amino)pyridin-3-yl)methoxy)piperidin-1-yl)ethan-1-ol)(化合物21)的制备
将6-(2-氯-5-氟-嘧啶-4-基)-4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑(107-1)(70毫克，0.217毫摩尔，1.0当量)，2-(4-((6-胺基吡啶-3-基)甲氧基)哌啶-1-基)乙醇(508-21)(92毫克，0.366毫摩尔，1.7当量)，碳酸铯(142毫克，0.434毫摩尔，2.0当量)，三(二亚苄基丙酮)二钯(9毫克，0.009毫摩尔，0.04当量)，4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(11毫克，0.018毫摩尔，0.08当量)溶解于20毫升甲苯中。在氮气保护下，置于预先加热的120℃油浴中加热，反应2小时。冷却至室温，减压浓缩。最后用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝100/1至20/1)得到黄色固体2-(4-((6-(5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑-6-基)嘧啶-2-胺基)吡啶-3-基)甲氧基)哌啶-1-基)乙醇(17毫克，收率：14％)。LCMS(ESI):m/z538[M+H]+；1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ10.05(s,1H),8.70(d,J＝3.8Hz,1H),8.30(d,J＝1.0Hz,1H),8.25(dd,J＝15.8,5.3Hz,2H),7.71(m,2H),4.85(m,1H),4.48(s,2H),4.30(t,J＝5.4Hz,1H),3.47(dd,J＝11.8,6.2Hz,2H),3.39(m,1H),2.71(m,2H),2.65(s,3H),2.36(t,J＝6.3Hz,2H),2.10(t,J＝9.5Hz,2H),1.85(d,J＝9.5Hz,2H),1.63(d,J＝6.9Hz,6H),1.49(m,2H)。
实施例19:5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑-6-基)-N-(5-((1-(2-甲氧基乙基)哌啶-4-基)氧甲基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺(5-fluoro-4-(4-fluoro-1-isopropyl-2-methyl-1H-benzo[d]imidazol-6-yl)-N-(5-((1-(2-methoxyethyl)piperidin-4-yloxy)methyl)pyridin-2-yl)pyrimidin-2-amine)(化合物22)的制备
步骤19a:2-溴-5-((1-(2-甲氧基乙基)哌啶-4-基)氧甲基)吡啶(2-bromo-5-(((1-(2-methoxyethyl)piperidin-4-yl)oxy)methyl)pyridine)(化合物507-22)的制备
将2-溴-5-((哌啶-4-基)氧甲基)吡啶(506-20)(250毫克，0.925毫摩尔，1.0当量)溶解于40毫升乙腈中，加入碳酸钾(255毫克，1.85毫摩尔，2.0当量)。然后加入溶解于1毫升乙腈的2-溴乙基甲醚(0.18毫升，1.9毫摩尔，2.1当量)溶液，加热至60℃，反应过夜。冷却至室温，减压浓缩。最后用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝100/1至30/1)得到黄色油状液体2-溴-5-((1-(2-甲氧基乙基)哌啶-4-基)氧甲基)吡啶(233毫克，收率：76％)。LCMS(ESI):m/z329[M+H]+。
步骤19b:5-((1-(2-甲氧基乙基)哌啶-4-基)氧甲基)吡啶-2-胺(5-((1-(2-methoxyethyl)piperidin-4-yloxy)methyl)pyridin-2-amine)(化合物508-22)的制备
将2-溴-5-((1-(2-甲氧基乙基)哌啶-4-基)氧甲基)吡啶(507-22)(233毫克，0.64毫摩尔，1.0当量)溶解于15毫升甲醇中，加入氧化亚铜(10毫克，0.064毫摩尔，0.1当量)和10毫升氨水，在闷罐中，加热至80℃，反应过夜。冷却至室温，减压浓缩，最后用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇100/1至15/1)得到黄色油状液体5-((1-(2-甲氧基乙基)哌啶-4-基)氧甲基)吡啶-2-胺(160毫克，收率：85％)。LCMS(ESI):m/z266[M+H]+。
步骤19c:5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑-6-基)-N-(5-((1-(2-甲氧基乙基)哌啶-4-基)氧甲基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺(5-fluoro-4-(4-fluoro-1-isopropyl-2-methyl-1H-benzo[d]imidazol-6-yl)-N-(5-((1-(2-methoxyethyl)piperidin-4-yloxy)methyl)pyridin-2-yl)pyrimidin-2-amine)(化合物22)的制备
将6-(2-氯-5-氟-嘧啶-4-基)-4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑(107-1)(60毫克，0.186毫摩尔，1.0当量)，5-((1-(2-甲氧基乙基)哌啶-4-基)氧甲基)吡啶-2-胺(508-22)(80毫克，0.3毫摩尔，1.6当量)，碳酸铯(121毫克，0.372毫摩尔，2.0当量)，三(二亚苄基丙酮)二钯(8毫克，0.009毫摩尔，0.04当量)，4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(10毫克，0.018毫摩尔，0.08当量)溶解于20毫升甲苯中。在氮气保护下，置于预先加热的120℃油浴中加热，反应2小时。冷却至室温，减压浓缩。最后用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝100/1至15/1)得到黄色固体5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑-6-基)-N-(5-((1-(2-甲氧基乙基)哌啶-4-基)氧甲基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺(46毫克，收率：45％)。LCMS(ESI):m/z552[M+H]+；熔点：168.1-169.2摄氏度；1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ10.06(s,1H),8.69(s,1H),8.26(dd,J＝25.5,13.5Hz,3H),7.70(t,J＝10.7Hz,2H),4.85(m,1H),4.48(s,2H),3.40(d,J＝5.6Hz,3H),3.22(s,3H),2.70(s,2H),2.65(s,3H),2.44(s,2H),2.11(s,2H),1.84(s,2H),1.63(d,J＝6.6Hz,6H),1.48(d,J＝9.3Hz,2H).
实施例20:5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑-6-基)-N-(5-((1-甲基哌啶-4-基)氧甲基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺(5-fluoro-4-(4-fluoro-1-isopropyl-2-methyl-1H-benzo[d]imidazol-6-yl)-N-(5-((1-methylpiperidin-4-yloxy)methyl)pyridin-2-yl)pyrimidin-2-amine)(化合物23)的制备
步骤20a:2-溴-5-((1-甲基哌啶-4-基)氧甲基)吡啶(2-bromo-5-((1-methylpiperidin-4-yloxy)methyl)pyridine)(化合物507-23)的制备
将1-甲基-4-哌啶醇(300毫克，2.6毫摩尔，1.1当量)溶解于20毫升四氢呋喃中，冷却至0℃。在氮气保护下，加入氢化钠(288毫克，7.8毫摩尔，3.3当量)，搅拌反应半小时。然后滴加溶于1毫升四氢呋喃的2-溴-5-(氯甲基)吡啶(503)(500毫克，2.4毫摩尔)溶液，自然升温至室温，反应半小时。往反应体系中加入10毫升N,N-二甲基甲酰胺，加热至80℃，反应过夜。冷却至室温，乙酸乙酯萃取，有机相用水和饱和食盐水洗涤多次，无水硫酸钠干燥，减压浓缩。最后用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝100/1至50/1)得到黄色油状液体2-溴-5-((1-甲基哌啶-4-基)氧甲基)吡啶(200毫克，收率：29％)。LCMS(ESI):m/z285[M+H]+。
步骤20b:5-((1-甲基哌啶-4-基)氧甲基)吡啶-2-胺(5-((1-methylpiperidin-4-yloxy)methyl)pyridin-2-amine)(化合物508-23)的制备
将化合物2-溴-5-((1-甲基哌啶-4-基)氧甲基)吡啶(507-23)(200毫克，0.704毫摩尔，1.0当量)溶解于15毫升甲醇中，加入氧化亚铜(11毫克，0.07毫摩尔，0.1当量)和10毫升氨水。在闷罐中，加热至80℃，反应过夜。冷却至室温，减压浓缩，最后用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝100/1至15/1)得到黄色油状液体5-((1-甲基哌啶-4-基)氧甲基)吡啶-2-胺(76毫克，收率：49％)。LCMS(ESI):m/z222[M+H]+。
步骤20c:5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑-6-基)-N-(5-((1-甲基哌啶-4-基)氧甲基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺(5-fluoro-4-(4-fluoro-1-isopropyl-2-methyl-1H-benzo[d]imidazol-6-yl)-N-(5-((1-methylpiperidin-4-yloxy)methyl)pyridin-2-yl)pyrimidin-2-amine)(化合物23)的制备
将6-(2-氯-5-氟-嘧啶-4-基)-4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑(107-1)(60毫克，0.186毫摩尔，1.0当量)，5-((1-甲基哌啶-4-基)氧甲基)吡啶-2-胺(508-23)(92毫克，0.366毫摩尔，2.0当量)，碳酸铯(121毫克，0.372毫摩尔，2.0当量)，三(二亚苄基丙酮)二钯(7毫克，0.009毫摩尔，0.04当量)，4，5-双二苯基膦-9，9-二甲基氧杂蒽(9毫克，0.018毫摩尔，0.08当量)溶解于20毫升甲苯中。在氮气保护下，置于预先加热的120℃油浴中加热，反应2小时。冷却至室温，减压浓缩。最后用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝100/1至30/1)得到黄色固体5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑-6-基)-N-(5-((1-甲基哌啶-4-基)氧甲基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺(67毫克，收率：71％)。LCMS(ESI):m/z508[M+H]+；熔点：185.2-187.3摄氏度；1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ10.06(s,1H),8.70(d,J＝3.8Hz,1H),8.26(m,3H),7.71(dd,J＝16.1,7.3Hz,2H),4.85(dt,J＝13.8,6.9Hz,1H),4.48(s,2H),3.38(dd,J＝8.6,4.4Hz,1H),2.61(m,5H),2.13(s,3H),2.01(t,J＝9.7Hz,2H),1.85(d,J＝9.3Hz,2H),1.63(d,J＝6.9Hz,6H),1.50(dd,J＝18.3,9.2Hz,2H)。
实施例21:5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑-6-基)-N-(5-((哌啶-4-基)氧甲基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺(5-fluoro-4-(4-fluoro-1-isopropyl-2-methyl-1H-benzo[d]imidazol-6-yl)-N-(5-((piperidin-4-yloxy)methyl)pyridin-2-yl)pyrimidin-2-amine)(化合物24)的制备
步骤21a:4-((6-胺基吡啶-3-基)甲氧基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(tert-butyl4-((6-aminopyridin-3-yl)methoxy)piperidine-1-carboxylate)(化合物508-24))的制备
将4-((6-溴吡啶-3-基)甲氧基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(505-20)(1克，2.7毫摩尔，1.0当量)溶解于30毫升甲醇中，加入氧化亚铜(39毫克，0.27毫摩尔，0.1当量)和10毫升氨水。在闷罐中，加热至80度，反应过夜。冷却至室温，减压浓缩，最后用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝100/1至30/1)得到黄色油状液体4-((6-胺基吡啶-3-基)甲氧基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(490毫克，收率：57％)。LCMS(ESI):m/z308[M+H]+。
步骤21b:5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑-6-基)-N-(5-((哌啶-4-基)氧甲基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺(5-fluoro-4-(4-fluoro-1-isopropyl-2-methyl-1H-benzo[d]imidazol-6-yl)-N-(5-((piperidin-4-yloxy)methyl)pyridin-2-yl)pyrimidin-2-amine)(化合物24)的制备:将6-(2-氯-5-氟-嘧啶-4-基)-4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑(107-1)(150毫克，0.46毫摩尔，1.0当量)，4-((6-胺基吡啶-3-基)甲氧基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(508-24)(300毫克，0.977毫摩尔，2.1当量)，碳酸铯(300毫克，0.92毫摩尔，2.0当量)，三(二亚苄基丙酮)二钯(16毫克，0.018毫摩尔，0.04当量)，4，5-双二苯基膦-9，9-二甲基氧杂蒽(21毫克，0.036毫摩尔，0.08当量)溶解于20毫升甲苯中。在氮气保护下，置于预先加热的120℃油浴中加热，反应2小时。冷却至室温，减压浓缩。最后用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝100/1至30/1)得到黄色固体4-((6-(5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑-6-基)嘧啶-2-胺基)吡啶-3-基)甲氧基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(123毫克，收率：44％)。LCMS(ESI)m/z594[M+H]+。将上述所得的化合物(123毫克，0.207毫摩尔，1.0当量)溶解于30毫升二氯甲烷中，加入2毫升三氟乙酸，反应2小时。反应完成后，加入饱和的碳酸氢钠溶液，将pH调至8-9，过滤，将滤液减压浓缩。最后用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝100/1至15/1)得到黄色固体5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑-6-基)-N-(5-((哌啶-4-基)氧甲基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺(52毫克，收率：55％)。LCMS(ESI):m/z494[M+H]+；熔点：115.1-115.9摄氏度；1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ10.05(s,1H),8.70(d,J＝3.8Hz,1H),8.27(m,3H),7.71(m,2H),4.85(m,1H),4.49(s,2H),3.43(m,1H),2.93(dt,J＝12.5,4.1Hz,2H),2.65(s,3H),2.46(m,2H),1.86(m,2H),1.63(d,J＝6.9Hz,6H),1.34(ddd,J＝13.2,10.0,3.9Hz,2H)。
实施例22:N-(5-((1-环丙基甲基哌啶-4-基)氧甲基)吡啶-2-基)-5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑-6-基)嘧啶-2-胺(N-(5-((1-(cyclopropylmethyl)piperidin-4-yloxy)methyl)pyridin-2-yl)-5-fluoro-4-(4-fluoro-1-isopropyl-2-methyl-1H-benzo[d]imidazol-6-yl)pyrimidin-2-amine)(化合物25)的制备
步骤22a:2-溴-5-((1-环丙基甲基哌啶-4-基)氧甲基)吡啶(2-bromo-5-((1-(cyclopropylmethyl)piperidin-4-yloxy)methyl)pyridine)(化合物507-25)的制备:将2-溴-5-((哌啶-4-基)氧甲基)吡啶(506-20)(200毫克，0.74毫摩尔，1.0当量)溶解于40毫升乙腈中，加入碳酸钾(204毫克，1.85毫摩尔，2.0当量)。然后加入溶解于1毫升乙腈的(溴甲基)环丙烷(200毫克，1.48毫摩尔，2.0当量)溶液，加热至60℃，反应5小时。冷却至室温，减压浓缩。最后用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝100/1至30/1)得到黄色油状液体2-溴-5-((1-环丙基甲基哌啶-4-基)氧甲基)吡啶(200毫克，收率：83％)。LCMS(ESI):m/z325[M+H]+。
步骤22b:5-((1-环丙基甲基哌啶-4-基)氧甲基)吡啶-2-胺(5-((1-(cyclopropylmethyl)piperidin-4-yloxy)methyl)pyridin-2-amine)(化合物508-25)的制备
将2-溴-5-((1-环丙基甲基哌啶-4-基)氧甲基)吡啶(507-25)(200毫克，0.62毫摩尔,1.0当量)溶解于15毫升甲醇中，加入氧化亚铜(10毫克，0.062毫摩尔，0.1当量)和10毫升氨水，在闷罐中，加热至80℃，反应过夜。冷却至室温，减压浓缩，最后用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝100/1至15/1)得到黄色油状液体5-((1-环丙基甲基哌啶-4-基)氧甲基)吡啶-2-胺(85毫克，收率：52％)。LCMS(ESI):m/z262[M+H]+。
步骤22c:N-(5-((1-环丙基甲基哌啶-4-基)氧甲基)吡啶-2-基)-5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑-6-基)嘧啶-2-胺(N-(5-((1-(cyclopropylmethyl)piperidin-4-yloxy)methyl)pyridin-2-yl)-5-fluoro-4-(4-fluoro-1-isopropyl-2-methyl-1H-benzo[d]imidazol-6-yl)pyrimidin-2-amine)(化合物25)的制备
将6-(2-氯-5-氟-嘧啶-4-基)-4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑(107-1)(70毫克，0.186毫摩尔，1.0当量)，5-((1-环丙基甲基哌啶-4-基)氧甲基)吡啶-2-胺(508-25)(85毫克，0.32毫摩尔，1.7当量)，碳酸铯(142毫克，0.434毫摩尔，2.0当量)，三(二亚苄基丙酮)二钯(8毫克，0.009毫摩尔，0.04当量)，4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(11毫克，0.018毫摩尔，0.08当量)溶解于20毫升甲苯中。在氮气保护下，置于预先加热的120℃油浴中加热，反应2小时。冷却至室温，减压浓缩。最后用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝100/1至15/1)得到黄色固体N-(5-((1-环丙基甲基哌啶-4-基)氧甲基)吡啶-2-基)-5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑-6-基)嘧啶-2-胺(46毫克，收率：45％)。LCMS(ESI):m/z548[M+H]+；熔点：190.3-192.6摄氏度；1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ10.05(s,1H),8.70(d,J＝3.8Hz,1H),8.26(dd,J＝25.7,13.6Hz,3H),7.70(t,J＝11.2Hz,2H),4.85(dt,J＝14.1,7.2Hz,1H),4.48(s,2H),3.39(s,1H),2.77(s,2H),2.65(s,3H),2.13(m,4H),1.88(d,J＝9.9Hz,2H),1.63(d,J＝6.9Hz,6H),1.50(d,J＝9.8Hz,2H),0.81(s,1H),0.45(t,J＝6.2Hz,2H),0.05(d,J＝4.6Hz,2H).
实施例23:N-(5-((1-(2,2-二氟乙基)哌啶-4-基)氧甲基)吡啶-2-基)-5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑-6-基)嘧啶-2-胺(N-(5-((1-(2,2-difluoroethyl)piperidin-4-yloxy)methyl)pyridin-2-yl)-5-fluoro-4-(4-fluoro-1-isopropyl-2-methyl-1H-benzo[d]imidazol-6-yl)pyrimidin-2-amine)(化合物26)的制备
步骤23a：2-溴-5-((1-(2,2-二氟乙基)哌啶-4-基)氧甲基)吡啶(2-bromo-5-((1-(2,2-difluoroethyl)piperidin-4-yloxy)methyl)pyridine)(化合物507-26)的制备
将2-溴-5-((哌啶-4-基)氧甲基)吡啶(506-20)(300毫克，1.11毫摩尔，1.0当量)溶解于40毫升N,N-二甲基甲酰胺中，加入碳酸铯(426毫克，2.22毫摩尔，2.0当量)。然后加入溶解于1毫升N,N-二甲基甲酰胺的1,1-二氟-2-碘代乙烷(426毫克，2.22毫摩尔，2.0当量)溶液，加热至80℃，反应过夜。冷却至室温，减压浓缩。最后用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝100/1至30/1)得到黄色油状液体2-溴-5-((1-(2,2-二氟乙基)哌啶-4-基)氧甲基)吡啶(200毫克，收率：54％)。LCMS(ESI):m/z335[M+H]+。
步骤23b：5-((1-(2,2-二氟乙基)哌啶-4-基)氧甲基)吡啶-2-胺(5-((1-(2,2-difluoroethyl)piperidin-4-yloxy)methyl)pyridin-2-amine)(化合物508-26)的制备:将2-溴-5-((1-(2,2-二氟乙基)哌啶-4-基)氧甲基)吡啶(507-26)(200毫克，0.60毫摩尔,1.0当量)溶解于15毫升甲醇中，加入氧化亚铜(10毫克，0.062毫摩尔，0.1当量)和10毫升氨水，在闷罐中，加热至80℃，反应过夜。冷却至室温，减压浓缩，最后用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝100/1至15/1)得到黄色油状液体5-((1-(2,2-二氟乙基)哌啶-4-基)氧甲基)吡啶-2-胺(90毫克，收率：55％)。LCMS(ESI):m/z272[M+H]+。
步骤23c：N-(5-((1-(2,2-二氟乙基)哌啶-4-基)氧甲基)吡啶-2-基)-5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑-6-基)嘧啶-2-胺(N-(5-((1-(2,2-difluoroethyl)piperidin-4-yloxy)methyl)pyridin-2-yl)-5-fluoro-4-(4-fluoro-1-isopropyl-2-methyl-1H-benzo[d]imidazol-6-yl)pyrimidin-2-amine)(化合物26)的制备
将6-(2-氯-5-氟-嘧啶-4-基)-4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑(107-1)(70毫克，0.217毫摩尔，1.0当量)，5-((1-(2,2-二氟乙基)哌啶-4-基)氧甲基)吡啶-2-胺(508-26)(90毫克，0.33毫摩尔，1.5当量)，碳酸铯(142毫克，0.434毫摩尔，2.0当量)，三(二亚苄基丙酮)二钯(8毫克，0.009毫摩尔，0.04当量)，4，5-双二苯基膦-9，9-二甲基氧杂蒽(11毫克，0.018毫摩尔，0.08当量)溶解于20毫升甲苯中。在氮气保护下，置于预先加热的120℃油浴中加热，反应2小时。冷却至室温，减压浓缩。最后用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝100/1至15/1)得到黄色固体N-(5-((1-(2,2-二氟乙基)哌啶-4-基)氧甲基)吡啶-2-基)-5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑-6-基)嘧啶-2-胺(40毫克，收率：34％)。LCMS(ESI):m/z558[M+H]+；熔点：150.5-151.2摄氏度；1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ10.06(s,1H),8.70(d,J＝3.8Hz,1H),8.27(m,3H),7.71(m,2H),6.10(tt,J＝55.8,4.4Hz,1H),4.85(m,1H),4.48(s,2H),3.41(m,1H),2.77(m,2H),2.70(td,J＝15.7,4.3Hz,2H),2.64(d,J＝5.4Hz,3H),2.30(m,2H),1.86(d,J＝9.8Hz,2H),1.63(d,J＝6.9Hz,6H),1.51(ddd,J＝18.0,10.9,3.5Hz,2H)。
实施例24:N-(5-((1-乙基哌啶-4-基)甲氧基)吡啶-2-基)-5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑-6-基)嘧啶-2-胺(N-(5-((1-ethylpiperidin-4-yl)methoxy)pyridin-2-yl)-5-fluoro-4-(4-fluoro-1-isopropyl-2-methyl-1H-benzo[d]imidazol-6-yl)pyrimidin-2-amine)(化合物29)的制备
步骤24a:4-(((甲磺酰基)氧)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(tert-butyl4-(((methylsulfonyl)oxy)methyl)piperidine-1-carboxylate)(化合物602-29)的制备
4-(羟甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(601-1)(6克，27.9毫摩尔，1当量)和三乙胺(5.64克，55.8毫摩尔，2当量)溶于四氢呋喃(100毫升)，冰浴下缓慢滴加甲磺酰氯(3.85克，33.5毫摩尔，1.2当量)搅拌30分钟。反应液在水箱和乙酸乙酯相中萃取分离，有机相用饱和氯化钠溶液洗涤后干燥浓缩得到的产物4-(((甲磺酰基)氧)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯直接用于下一步反应。
步骤24b:4-(((6-溴吡啶-3-基)氧)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(tert-butyl4-(((6-bromopyridin-3-yl)oxy)methyl)piperidine-1-carboxylate)(化合物604-29)的制备
氮气保护下，将上一步得到的4-(((甲磺酰基)氧)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(602-29)，碳酸钾(6.38毫克，46.2毫摩尔，2当量)和2-溴5-羟基吡啶(603)(4克，23.1毫摩尔，1当量)加入到N,N二甲基甲酰胺(100毫升)中加热到65摄氏度搅拌反应16小时。反应液冷却后在水相和乙酸乙酯相中萃取分离，有机相用饱和氯化钠溶液洗涤后干燥浓缩得到4-(((6-溴吡啶-3-基)氧)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(6.92克，18.7毫摩尔,收率：81.0％)。LCMS(ESI):m/z371[M+H]+。
步骤24c:2-溴-5-(哌啶-4-基甲氧基)吡啶(2-bromo-5-(piperidin-4-ylmethoxy)pyridine)(化合物605-29)的制备
将4-(((6-溴吡啶-3-基)氧)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(604-29)(6克，16.2毫摩尔，1当量)溶于二氯甲烷中，加入盐酸(5毫升，6摩尔每升水溶液)搅拌过夜，用饱和碳酸钠水溶液将反应液酸碱度调节到10左右，用二氯甲烷萃取，有机相合并干燥后减压浓缩得到2-溴-5-(哌啶-4-基甲氧基)吡啶(4.2克，15.6毫摩尔，收率：96.3％)。LCMS(ESI):m/z271[M+H]+。
步骤24d:2-溴-5-((1-乙基哌啶-4-基)甲氧基)吡啶(2-bromo-5-((1-ethylpiperidin-4-yl)methoxy)pyridine)(化合物606-29)的制备
将化合物2-溴-5-((1-乙基哌啶-4-基)甲氧基)吡啶(605-29)(1.5克，5.55毫摩尔，1当量)溶解于乙腈(150毫升)中，然后将碳酸钾(1.53克，11.1毫摩尔，2当量)和2-溴乙烷(0.726克，6.66毫摩尔，1当量)加入其中。混合物在室温下搅拌16小时。反应结束后过滤，滤液减压浓缩得到白色固体。(1.42克，crude)。LCMS(ESI):m/z299[M+H]+。
步骤24e:5-((1-乙基哌啶-4-基)甲氧基)吡啶-2-胺(5-((1-ethylpiperidin-4-yl)methoxy)pyridin-2-amine)(化合物607-29)的制备
在闷罐中，将化合物2-溴-5-((1-乙基哌啶-4-基)甲氧基)吡啶(606-29)(1.42克，4.76毫摩尔，1当量),氨水(5毫升)和氧化亚铜(68毫克，0.476毫摩尔，0.1当量)的甲醇(10毫升)溶液置于80℃的油浴锅中，搅拌反应16小时。反应结束后，冷却至室温，过滤，减压浓缩，所得固体用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝80/1)，得到白色固体(600毫克，收率：53.57％)。LCMS(ESI):m/z236[M+H]+。
步骤24f:N-(5-((1-乙基哌啶-4-基)甲氧基)吡啶-2-基)-5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑-6-基)嘧啶-2-胺(N-(5-((1-ethylpiperidin-4-yl)methoxy)pyridin-2-yl)-5-fluoro-4-(4-fluoro-1-isopropyl-2-methyl-1H-benzo[d]imidazol-6-yl)pyrimidin-2-amine)(化合物29)的制备
在氮气氛围下，将化合物6-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑(107-1)(685毫克，2.127毫摩尔，1当量)，化合物5-((1-乙基哌啶-4-基)甲氧基)吡啶-2-胺(607-29)(500毫克，2.127毫摩尔，1.2当量)，碳酸铯(1382毫克，4.254毫摩尔，2当量),4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(110.4毫克，0.191毫摩尔，0.09当量)和三(二亚苄基丙酮)二钯(97.4毫克，0.106毫摩尔，0.05当量)的甲苯(15毫升)溶液放置于100℃的油浴锅中，搅拌反应2.5小时。反应结束后，冷却至室温，减压浓缩，所得固体用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝100/1)，得到黄色固体(430毫克，收率：38.8％)。LCMS(ESI):m/z522[M+H]+。；熔点：86～88摄氏度；1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.82(s,1H),8.64(d,J＝3.8Hz,1H),8.25(s,1H),8.10(d,J＝9.1Hz,1H),8.04(d,J＝3.0Hz,1H),7.67(d,J＝12.1Hz,1H),7.41(dd,J＝9.0,3.0Hz,1H),4.84(m,1H),3.88(d,J＝6.0Hz,2H),2.88(d,J＝11.2Hz,2H),2.64(s,3H),2.31(q,J＝7.2Hz,2H),1.86(t,J＝11.1Hz,2H),1.74(dd,J＝15.4,6.7Hz,3H),1.62(d,J＝6.9Hz,6H),1.29(ddd,J＝16.7,13.2,4.3Hz,2H),0.99(t,J＝7.2Hz,3H)。
实施例25：N-(5-((1-(环丙基甲基)哌啶-4-基)甲氧基)吡啶-2-基)-5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑-6-基)-嘧啶-2-胺(N-(5-((1-(cyclopropylmethyl)piperidin-4-yl)methoxy)pyridin-2-yl)-5-fluoro-4-(4-fluoro-1-isopropyl-2-methyl-1H-benzo[d]imidazol-6-yl)pyrimidin-2-amine)(化合物31)的制备
步骤25a：2-溴-5-((1-(环丙基甲基)哌啶-4-基)甲氧基)吡啶(2-bromo-5-((1-(cyclopropylmethyl)piperidin-4-yl)methoxy)pyridine)(化合物606-31)的制备
将2-溴-5-(哌啶-4-基甲氧基)吡啶(605-29)(500毫克，1.85毫摩尔,1当量)和碳酸钾(510毫克，3.7毫摩尔，2当量)放置到有乙腈(30毫升)的反应器中，搅拌后将溴甲基环丙烷(297毫克，2.22毫摩尔，1.2当量)加入反应液中，加热到50摄氏度反应4小时。反应液在水相和乙酸乙酯相中萃取分离，有机相用饱和氯化钠溶液洗涤后，干燥浓缩得到2-溴-5-((1-(环丙基甲基)哌啶-4-基)甲氧基)吡啶(550毫克，1.7毫摩尔,收率：91.9％)。LCMS(ESI):m/z325[M+H]+。
步骤25b：5-((1-(环丙基甲基)哌啶-4-基)甲氧基)吡啶-2-胺(5-((1-(cyclopropylmethyl)piperidin-4-yl)methoxy)pyridin-2-amine)(化合物607-31)的制备
将2-溴-5-((1-(环丙基甲基)哌啶-4-基)甲氧基)吡啶(606-31)(550毫克，1.70毫摩尔，1当量)，氧化亚铜(55毫克，10％)和氨水(2毫升)加入到装有甲醇(20毫升)的闷罐中，加热到80摄氏度反应16小时。反应液在水相和乙酸乙酯相中萃取分层，有机相用饱和氯化钠溶液洗涤后干燥浓缩得到5-((1-(环丙基甲基)哌啶-4-基)甲氧基)吡啶-2-胺(418毫克，1.60毫摩尔，收率：94.1％)。LCMS(ESI):m/z262[M+H]+。
步骤25c：N-(5-((1-(环丙基甲基)哌啶-4-基)甲氧基)吡啶-2-基)-5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑-6-基)-嘧啶-2-胺(N-(5-((1-(cyclopropylmethyl)piperidin-4-yl)methoxy)pyridin-2-yl)-5-fluoro-4-(4-fluoro-1-isopropyl-2-methyl-1H-benzo[d]imidazol-6-yl)pyrimidin-2-amine)(化合物31)的制备
氮气保护下，将5-((1-(环丙基甲基)哌啶-4-基)甲氧基)吡啶-2-胺(607-31)(117毫克，0.45毫摩尔，1.2当量)，6-(2-氯-5-氟-嘧啶-4-基)-4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑(107-1)(120毫克，0.373毫摩尔，1当量)，4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(22毫克，0.037毫摩尔，0.1当量)，N，N-二异丙基乙胺(121毫克，0.933毫摩尔，2.5毫摩尔)和三(二亚苄基丙酮)二钯(34毫克，0.037毫摩尔,0.1当量)置于正丁醇(25毫升)中，加热到90摄氏度反应4小时。将反应液浓缩后通过硅胶柱层析(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝100/1至30/1)梯度洗脱分离提纯浓缩得到黄色固体N-(5-((1-(环丙基甲基)哌啶-4-基)甲氧基)吡啶-2-基)-5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑-6-基)-嘧啶-2-胺(50毫克，0.091毫摩尔，收率：24.4％)。MS(ESI):m/z548[M+H]+。熔点：85.7-89.1摄氏度；1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.82(s,1H),8.64(d,J＝3.8Hz,1H),8.25(d,J＝0.8Hz,1H),8.11(d,J＝9.0Hz,1H),8.04(d,J＝3.0Hz,1H),7.67(d,J＝12.2Hz,1H),7.41(dd,J＝9.1,3.0Hz,1H),4.84(dt,J＝13.9,6.9Hz,1H),3.88(d,J＝6.1Hz,2H),2.98(d,J＝11.2Hz,2H),2.64(s,3H),2.16(d,J＝6.5Hz,2H),1.92(t,J＝11.0Hz,2H),1.73(dd,J＝23.6,11.6Hz,3H),1.62(d,J＝6.9Hz,6H),1.32(m,2H),0.82(m,1H),0.45(m,2H),0.06(q,J＝4.9Hz,2H)。
实施例26:2-(4-(((6-((5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑-6-基)嘧啶-2-基)胺基)吡啶-3-基)氧)甲基)哌啶-1-基)乙烷-1-醇(2-(4-(((6-((5-fluoro-4-(4-fluoro-1-isopropyl-2-methyl-1H-benzo[d]imidazol-6-yl)pyrimidin-2-yl)amino)pyridin-3-yl)oxy)methyl)piperidin-1-yl)ethan-1-ol)(化合物32)的制备
步骤26a：2-(4-(((6-溴吡啶-3-基)氧)甲基)哌啶-1-基)乙烷-1-醇(2-(4-(((6-bromopyridin-3-yl)oxy)methyl)piperidin-1-yl)ethan-1-ol)(化合物606-32)的制备
将2-溴-5-(哌啶-4-基甲氧基)吡啶(605-29)(500毫克，1.85毫摩尔,1当量)和碳酸钾(510毫克，3.7毫摩尔，2当量)放置到有乙腈(30毫升)的反应器中，搅拌后将2-溴乙醇(278毫克，2.22毫摩尔，1.2当量)加入反应液中，加热到50摄氏度反应4小时。反应液在水相和乙酸乙酯相中萃取分离，有机相用饱和氯化钠溶液洗涤后，干燥浓缩得到2-(4-(((6-溴吡啶-3-基)氧)甲基)哌啶-1-基)乙烷-1-醇(520毫克，1.66毫摩尔,收率：89.7％)。LCMS(ESI):m/z315[M+H]+。
步骤26b：2-(4-(((6-胺基吡啶-3-基)氧)甲基)哌啶-1-基)乙烷-1-醇(2-(4-(((6-aminopyridin-3-yl)oxy)methyl)piperidin-1-yl)ethan-1-ol)(化合物607-32)的制备
将2-(4-(((6-溴吡啶-3-基)氧)甲基)哌啶-1-基)乙烷-1-醇(606-32)(520毫克，1.66毫摩尔，1当量)，氧化亚铜(52毫克，10％)和氨水(2毫升)加入到装有甲醇(20毫升)的闷罐中，加热到80摄氏度反应16小时。反应液在水相和乙酸乙酯相中萃取分层，有机相用饱和氯化钠溶液洗涤后干燥浓缩得到2-(4-(((6-胺基吡啶-3-基)氧)甲基)哌啶-1-基)乙烷-1-醇(370毫克，1.47毫摩尔，收率：88.6％)。LCMS(ESI):m/z252[M+H]+。
步骤26c：2-(4-(((6-((5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑-6-基)嘧啶-2-基)胺基)吡啶-3-基)氧)甲基)哌啶-1-基)乙烷-1-醇(2-(4-(((6-((5-fluoro-4-(4-fluoro-1-isopropyl-2-methyl-1H-benzo[d]imidazol-6-yl)pyrimidin-2-yl)amino)pyridin-3-yl)oxy)methyl)piperidin-1-yl)ethan-1-ol)(化合物32)的制备
氮气保护下，将2-(4-(((6-胺基吡啶-3-基)氧)甲基)哌啶-1-基)乙烷-1-醇(607-32)(112毫克，0.45毫摩尔，1.2当量)，6-(2-氯-5-氟-嘧啶-4-基)-4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑(107-1)(120毫克，0.373毫摩尔，1当量)，4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(22毫克，0.037毫摩尔，0.1当量)，N，N-二异丙基乙胺(121毫克，0.933毫摩尔，2.5毫摩尔),三(二亚苄基丙酮)二钯(34毫克，0.037毫摩尔,0.1当量)置于正丁醇(25毫升)中，加热到90摄氏度反应4小时。将反应液浓缩后通过硅胶柱层析(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝100/1至30/1)梯度洗脱分离提纯浓缩得到黄色固体2-(4-(((6-((5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑-6-基)嘧啶-2-基)胺基)吡啶-3-基)氧)甲基)哌啶-1-基)乙烷-1-醇(40毫克，0.074毫摩尔，收率：19.8％)。LCMS(ESI):m/z538[M+H]+。熔点：57.9-63.1摄氏度；1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.89(s,1H),8.65(d,J＝3.8Hz,1H),8.26(d,J＝0.9Hz,1H),8.11(d,J＝9.1Hz,1H),8.04(d,J＝3.0Hz,1H),7.67(d,J＝12.2Hz,1H),7.41(dd,J＝9.1,3.0Hz,1H),4.84(m,1H),4.35(t,J＝5.3Hz,1H),3.87(d,J＝5.9Hz,2H),3.48(dd,J＝11.8,6.3Hz,2H),2.89(d,J＝11.4Hz,2H),2.65(d,J＝7.8Hz,3H),2.37(t,J＝6.4Hz,2H),1.95(t,J＝10.8Hz,2H),1.72(t,J＝13.3Hz,3H),1.62(d,J＝6.9Hz,6H),1.29(m,3H).
实施例27:5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑-6-基)-N-(5-((1-(2-甲氧基乙基)哌啶-4-基)甲氧基)吡啶-2-基)-嘧啶-2-胺(5-fluoro-4-(4-fluoro-1-isopropyl-2-methyl-1H-benzo[d]imidazol-6-yl)-N-(5-((1-(2-methoxyethyl)piperidin-4-yl)methoxy)pyridin-2-yl)pyrimidin-2-amine)(化合物33)的制备
步骤27a：2-溴-5-((1-(2-甲氧基乙基)哌啶-4-基)甲氧基)吡啶(2-bromo-5-((1-(2-methoxyethyl)piperidin-4-yl)methoxy)pyridine)(化合物606-33)的制备
将2-溴-5-(哌啶-4-基甲氧基)吡啶(605-29)(500毫克，1.85毫摩尔,1当量)和碳酸钾(510毫克，3.7毫摩尔，2当量)放置到有乙腈(30毫升)的反应器中，搅拌后将2-溴乙基甲基醚(309毫克，2.22毫摩尔，1.2当量)加入反应液中，加热到50摄氏度反应4小时。反应液在水相和乙酸乙酯相中萃取分离，有机相用饱和氯化钠溶液洗涤后，干燥浓缩得到2-溴-5-((1-(2-甲氧基乙基)哌啶-4-基)甲氧基)吡啶(550毫克，1.68毫摩尔,收率：90.8％)。LCMS(ESI):m/z329[M+H]+。
步骤27b：5-((1-(2-甲氧基乙基)哌啶-4-基)甲氧基)吡啶-2-胺(5-((1-(2-methoxyethyl)piperidin-4-yl)methoxy)pyridin-2-amine)(化合物607-33)的制备
将2-溴-5-((1-(2-甲氧基乙基)哌啶-4-基)甲氧基)吡啶(606-37)(550毫克，1.68毫摩尔，1当量)，氧化亚铜(55毫克，10％)和氨水(2毫升)加入到装有甲醇(20毫升)的闷罐中，加热到80摄氏度反应16小时。反应液在水相和乙酸乙酯相中萃取分层，有机相用饱和氯化钠溶液洗涤后干燥浓缩得到5-((1-(2-甲氧基乙基)哌啶-4-基)甲氧基)吡啶-2-胺(377毫克，1.44毫摩尔，收率：85.7％)。
步骤27c：5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑-6-基)-N-(5-((1-(2-甲氧基乙基)哌啶-4-基)甲氧基)吡啶-2-基)-嘧啶-2-胺(5-fluoro-4-(4-fluoro-1-isopropyl-2-methyl-1H-benzo[d]imidazol-6-yl)-N-(5-((1-(2-methoxyethyl)piperidin-4-yl)methoxy)pyridin-2-yl)pyrimidin-2-amine)(化合物33)的制备
氮气保护下，将5-((1-(2-甲氧基乙基)哌啶-4-基)甲氧基)吡啶-2-胺(607-33)(119毫克，0.45毫摩尔，1.2当量)，6-(2-氯-5-氟-嘧啶-4-基)-4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑(107-1)(120毫克，0.373毫摩尔，1当量)，4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(22毫克，0.037毫摩尔，0.1当量)，N，N-二异丙基乙胺(121毫克，0.933毫摩尔，2.5毫摩尔)和三(二亚苄基丙酮)二钯(34毫克，0.037毫摩尔,0.1当量)置于正丁醇(25毫升)中，加热到90摄氏度反应4小时。将反应液浓缩后通过硅胶柱层析(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝100/1至30/1)梯度洗脱分离提纯浓缩得到黄色固体5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑-6-基)-N-(5-((1-(2-甲氧基乙基)哌啶-4-基)甲氧基)吡啶-2-基)-嘧啶-2-胺(50毫克，0.091毫摩尔，收率：24.4％)。LCMS(ESI):m/z552[M+H]+；熔点：55.3-59.6摄氏度；1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.82(s,1H),8.64(s,1H),8.25(s,1H),8.08(m,2H),7.67(d,J＝11.8Hz,1H),7.41(d,J＝7.4Hz,1H),4.84(s,1H),3.88(s,2H),3.42(s,2H),3.23(s,3H),2.89(d,J＝9.4Hz,2H),2.64(s,3H),2.45(s,2H),1.96(s,2H),1.72(s,3H),1.62(d,J＝6.1Hz,6H),1.28(m,2H)。
实施例28:N5-[(1-乙基哌啶-4-基)乙基]-N2-[5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑-6-基)-嘧啶-2-基]吡啶-2,5-二胺(N5-(1-(1-ethylpiperidin-4-yl)ethyl)-N2-(5-fluoro-4-(4-fluoro-1-isopropyl-2-methyl-1H-benzo[d]imidazol-6-yl)pyrimidin-2-yl)pyridine-2,5-diamine)(化合物34)的制备
步骤28a：4-(1-氨基乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(tert-butyl4-(1-aminoethyl)piperidine-1-carboxylate)(化合物108A-34)的制备。
将叔丁基-4-乙酰哌啶-1-羧酸(1.01克，4.443毫摩尔，1.0当量)溶解于甲醇(30毫升)中，加入甲酸铵(2.80克，44.435毫摩尔，10当量)，搅拌1小时后冷却到0℃再加入氰基硼氢化钠(0.42克，6.664毫摩尔，1.5当量)，半小时后撤去冰浴在室温反应过夜。反应结束时加入碳酸钠水溶液终止反应，然后用二氯甲烷(100毫升×3)萃取，合并有机相，浓缩得到的浓缩物通过柱层析分离纯化(洗脱剂：石油醚：乙酸乙酯＝10:1至5:1)，得到无色油状化合物4-(1-氨基乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.56克,收率：55.3％)。LCMS(ESI):m/z229[M+H]+。
步骤28b：4-[1-(6-硝基吡啶-3-基氨基)乙基]哌啶-1-羧酸叔丁酯tert-butyl4-(1-(6-nitropyridin-3-ylamino)ethyl)piperidine-1-carboxylate(化合物108B-34)的制备
在氮气氛围下，将化合物4-(1-氨基乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(108A-34)(0.56克，2.456毫摩尔，1.0当量)、5-溴-2-硝基吡啶(0.50克，2.456毫摩尔，1.0当量)、碳酸铯(1.60克，4.912毫摩尔，2.0当量)、4,5-双(二苯基膦)-9,9-二甲基氧杂蒽(0.14克，0.2456毫摩尔，0.1当量)和三(二亚苄基丙酮)二钯(0.22克，0.2456毫摩尔，0.1当量)混合于甲苯(60毫升)中，然后在90℃下搅拌反应4小时。反应结束后，减压浓缩，所得浓缩物通过硅胶柱层析分离提纯，得到黄色固体化合物4-[1-(6-硝基吡啶-3-基氨基)乙基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.40克，收率：46.5％)。LCMS(ESI):m/z295[M+H]+。
步骤28c：4-[1-(6-氨基吡啶-3-基氨基)乙基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(tert-butyl4-(1-(6-aminopyridin-3-ylamino)ethyl)piperidine-1-carboxylate)(化合物108-34)的制备
将化合物4-[1-(6-硝基吡啶-3-基氨基)乙基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(108B-34)(0.40克，1.143毫摩尔，1.0当量)溶于甲醇(40毫升)里，然后逐渐加进质量分数10％的钯碳(40毫克)，最后反应混合物在氢气氛围下40℃搅拌过夜。通过硅藻土过滤，浓缩滤液得到黑色油状化合物4-[1-(6-氨基吡啶-3-基氨基)乙基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.36克，粗品)。LCMS(ESI):m/z321[M+H]+。
步骤28d：4-{1-{6-[5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑-6-基)-嘧啶-2-基胺基]吡啶-3-基}氨基]乙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯(tert-butyl4-(1-(6-(5-fluoro-4-(4-fluoro-1-isopropyl-2-methyl-1H-benzo[d]imidazol-6-yl)pyrimidin-2-ylamino)pyridin-3-ylamino)ethyl)piperidine-1-carboxylate)(化合物109-34)的制备
在氮气保护下，将化合物4-[1-(6-氨基吡啶-3-基氨基)乙基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(108-34)(331.4毫克，1.036毫摩尔，1.0当量)、6-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑(107-1)(334.5毫克，1.036毫摩尔，1.0当量)、三(二亚苄基丙酮)二钯(94.8毫克，0.104毫摩尔，0.1当量)、4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(60毫克，0.104毫摩尔，0.1当量)和N,N-二异丙基乙基胺(267.2毫克，2.071毫摩尔，2.0当量)溶解于正丁醇(50毫升)中，然后在95℃下搅拌反应过夜。反应混合物降至室温，过滤，真空浓缩。得到的浓缩物通过柱层析纯化(洗脱剂：二氯甲烷：甲醇＝70:1)得到黄色固体化合物4-{1-{6-[5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑-6-基)-嘧啶-2-基胺基]吡啶-3-基}氨基]乙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯(225.4毫克，收率：35.9％)。LCMS(ESI):m/z607[M+H]+。
步骤28e：N2-[5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑-6-基)-嘧啶-2-基]-N5-1-[(哌啶-4-基)乙基]吡啶-2,5-二胺(N2-(5-fluoro-4-(4-fluoro-1-isopropyl-2-methyl-1H-benzo[d]imidazol-6-yl)pyrimidin-2-yl)-N5-(1-(piperidin-4-yl)ethyl)pyridine-2,5-diamine(化合物110-34)的制备。
化合物4-{1-{6-[5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑-6-基)-嘧啶-2-基胺基]吡啶-3-基}氨基]乙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯(109-34)(225.4毫克，0.372毫摩尔，1.0当量)溶解于二氯甲烷(20毫升)中，然后冰浴冷却。向反应液滴加4摩尔盐酸甲醇溶液(5毫升)，然后在室温搅拌过夜。反应结束后，浓缩，加入水(20毫升)，用二氯甲烷(3*20毫升)洗涤。水相用碳酸钠调节pH＝8，再用二氯甲烷(3*30毫升)反萃，将有机相合并干燥，浓缩得到黄色固体N2-[5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑-6-基)-嘧啶-2-基]-N5-1-[(哌啶-4-基)乙基]吡啶-2,5-二胺(172.4毫克，收率：91.6％)。LCMS(ESI):m/z507[M+H]+。
步骤28f:N5-[(1-乙基哌啶-4-基)乙基]-N2-[5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑-6-基)-嘧啶-2-基]吡啶-2,5-二胺(N5-(1-(1-ethylpiperidin-4-yl)ethyl)-N2-(5-fluoro-4-(4-fluoro-1-isopropyl-2-methyl-1H-benzo[d]imidazol-6-yl)pyrimidin-2-yl)pyridine-2,5-diamine)(化合物34)的制备
将N2-[5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑-6-基)-嘧啶-2-基]-N5-1-[(哌啶-4-基)乙基]吡啶-2,5-二胺(172.4毫克，0.341毫摩尔，1.0当量)、溴乙烷(44.5毫克，0.409毫摩尔，1.2当量)和碳酸钾(70.5毫克，0.511毫摩尔，1.5当量)混合在乙腈(80毫升)中，在室温下搅拌48小时。反应结束时加入100毫升水终止反应，然后用二氯甲烷(100毫升*3)萃取，合并有机相，浓缩得到的残留物通过柱层析分离纯化(洗脱剂：二氯甲烷：甲醇＝70:1至20:1)，得到黄色固体化合物N5-[(1-乙基哌啶-4-基)乙基]-N2-[5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑-6-基)-嘧啶-2-基]吡啶-2,5-二胺(80.1克，收率：43.9％)。LCMS(ESI):m/z535(M+1)；熔点：97.3～101.1℃；1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.41(s,1H),8.57(d,J＝3.8Hz,1H),8.25(s,1H),7.86(d,J＝8.8Hz,1H),7.76(d,J＝2.8Hz,1H),7.65(d,J＝12.1Hz,1H),7.05(dd,J＝8.9,2.5Hz,1H),5.35(d,J＝8.9Hz,1H),4.84(dt,J＝13.8,6.9Hz,1H),3.31(s,2H),3.17(d,J＝4.5Hz,1H),2.70(d,J＝63.6Hz,5H),2.50(s,2H),1.91(s,1H),1.76(d,J＝16.8Hz,1H),1.58(t,J＝35.7Hz,9H),1.10(t,J＝14.4Hz,6H)。
实施例29:N5-((1-乙基哌啶-4-基)甲基)-N2-(5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑-6-基)吡啶-2-基)吡啶-2,5-二胺(N5-((1-ethylpiperidin-4-yl)methyl)-N2-(5-fluoro-4-(4-fluoro-1-isopropyl-2-methyl-1H-benzo[d]imidazol-6-yl)pyridin-2-yl)pyridine-2,5-diamine)(化合物36)的制备
步骤29a：2-氯-5-氟-4-碘吡啶(2-chloro-5-fluoro-4-iodopyridine)(化合物106-36)的制备
在氮气保护下，将二异丙胺(1.0克，9.9毫摩尔，1.3当量)加入到35毫升四氢呋喃中，冷却至-30℃，滴加正丁基锂四氢呋喃溶液(2.5M，3.64毫升，9.1毫摩尔，1.2当量)，于-30度下搅拌半小时，然后降温至-70℃。将2-氯-5-氟吡啶(1.0克，7.6毫摩尔，1.0当量)滴加到反应液中，搅拌半个小时后，滴加碘的四氢呋喃溶液(2.31克，9.1毫摩尔，1.2当量)，于-70℃下，反应两小时，加入饱和亚硫酸氢钠水溶液和乙酸乙酯，分液，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到黄色固体2-氯-5-氟-4-碘吡啶(1.68克，收率：85％)。LCMS(ESI):m/z258[M+H]+。
步骤29b：6-(2-氯-5-氟吡啶-4-基)-4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑(6-(2-chloro-5-fluoropyridin-4-yl)-4-fluoro-1-isopropyl-2-methyl-1H-benzo[d]imidazole)(化合物107-36)的制备
在氮气保护下，将2-氯-5-氟-4-碘吡啶(106-36)(500毫克，1.94毫摩尔，1.1当量),4-氟-2-甲基-1-异丙基-6-(3,3,4,4-四甲基-1,3,2-二氧硼戊烷-2-基)-1H-苯并咪唑(105-1)(560毫克，1.76毫摩尔，1.0当量)，双三苯基膦二氯化钯(28毫克，0.04毫摩尔，0.03当量)和碳酸钠(560毫克，5.28毫摩尔，2.5当量)加入到20毫升四氢呋喃中，加入2毫升水，加热回流，反应3小时。通过HPLC检测，原料消失，冷却至室温，过滤，减压浓缩，经柱层析分离纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝10/1至4/1)得到黄色固体6-(2-氯-5-氟吡啶-4-基)-4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑(270毫克，收率：47.0％)。LCMS(ESI):m/z322[M+H]+。
步骤29c：N5-((1-乙基哌啶-4-基)甲基)-N2-(5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑-6-基)吡啶-2-基)吡啶-2,5-二胺(N5-((1-ethylpiperidin-4-yl)methyl)-N2-(5-fluoro-4-(4-fluoro-1-isopropyl-2-methyl-1H-benzo[d]imidazol-6-yl)pyridin-2-yl)pyridine-2,5-diamine)(化合物36)的制备
氮气保护下，(6-胺基吡啶-3-基)((1-乙基哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(204-5)(150毫克，0.444毫摩尔，1.2当量)，6-(2-氯-5-氟吡啶-4-基)-4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑(107-36)(120毫克，0.37毫摩尔，1当量)，4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(21毫克，0.037毫摩尔，0.1当量)，碳酸铯(265毫克，0.814毫摩尔，2.2当量)和三(二亚苄基丙酮)二钯(34毫克，0.037毫摩尔，0.1当量)加入到装有甲苯的反应瓶中，加热到回流，搅拌6小时后，反应液减压浓缩得到的粗品通过硅胶柱层析分离提纯(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝80/1)得到黄色固体(35毫克，0.057毫摩尔，收率：15.3％)。将所得的黄色固体溶于二氯甲烷(10毫升)，加入盐酸(5毫升，6M水溶液)，搅拌3小时后，用饱和碳酸钠水溶液将反应液的pH值调节到10左右，用二氯甲烷萃取。有机相减压浓缩得到黄色固体N5-((1-乙基哌啶-4-基)甲基)-N2-(5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑-6-基)吡啶-2-基)吡啶-2,5-二胺(12毫克，收率：40.4％)。熔点89.3-93.5℃；LCMS(ESI):m/z520[M+H]+；1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.15(s,1H),8.18(d,J＝2.4Hz,1H),7.76(d,J＝5.9Hz,1H),7.69(s,1H),7.63(d,J＝2.8Hz,1H),7.49(d,J＝8.9Hz,1H),7.19(d,J＝11.5Hz,1H),7.01(dd,J＝8.9,2.9Hz,1H),5.34(t,J＝5.9Hz,1H),4.83(dt,J＝13.8,6.9Hz,1H),2.88(t,J＝6.2Hz,4H),2.62(s,3H),2.30(s,2H),1.82(s,2H),1.73(d,J＝12.1Hz,2H),1.60(d,J＝6.9Hz,6H),1.51(s,1H),1.18(m,2H),0.98(t,J＝7.1Hz,3H)。
实施例30:N-(5-((1-乙基哌啶-4-基)甲氧基)吡啶-2-基)-5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑-6-基)吡啶-2-胺(N-(5-((1-ethylpiperidin-4-yl)methoxy)pyridin-2-yl)-5-fluoro-4-(4-fluoro-1-isopropyl-2-methyl-1H-benzo[d]imidazol-6-yl)pyridin-2-amine)(化合物38)的制备
在氮气的氛围下，将化合物6-(2-氯-5-氟吡啶-4-基)-4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑(107-36)(100毫克，0.31毫摩尔，1当量)，化合物5-((1-乙基哌啶-4-基)甲氧基)吡啶-2-胺(607-29)(87.4毫克，0.372毫摩尔，1.2当量)，N,N-二异丙基乙基胺(201.5毫克，0.62毫摩尔，2当量),4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(18.18毫克，0.028毫摩尔，0.09当量)和三(二亚苄基丙酮)二钯(14.2毫克，0.016毫摩尔，0.05当量)混合于正丁醇(15毫升)。反应在95℃下搅拌反应6小时。反应结束后，冷却至室温，减压浓缩，所得固体用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇100/1)，得到黄色固体N-(5-((1-乙基哌啶-4-基)甲氧基)吡啶-2-基)-5-氟-4-(4-氟＝-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑-6-基)吡啶-2-胺(14毫克，收率：6.5％)。LCMS(ESI):m/z521[M+H]+；熔点：113-115摄氏度；1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.51(s,1H),8.24(s,1H),7.94(d,J＝2.7Hz,1H),7.83(d,J＝5.8Hz,1H),7.70(d,J＝9.6Hz,2H),7.37(dd,J＝9.1,2.9Hz,1H),7.20(d,J＝11.4Hz,1H),4.83(m,1H),3.99(t,J＝6.2Hz,2H),2.63(s,3H),2.42(m,4H),2.28(s,2H),1.99(s,2H),1.79(m,2H),1.60(d,J＝6.9Hz,6H),1.47(s,1H),1.06(s,3H)。
实施例31:N-(5-((1-乙基哌啶-4-基)氧甲基)吡啶-2-基)-5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑-6-基)吡啶-2-胺(N-(5-(((1-ethylpiperidin-4-yl)oxy)methyl)pyridin-2-yl)-5-fluoro-4-(4-fluoro-1-isopropyl-2-methyl-1H-benzo[d]imidazol-6-yl)pyridin-2-amine)(化合物39)的制备
将5-((1-乙基哌啶-4-基)氧甲基)吡啶-2-胺(508-20)(24毫克，0.1毫摩尔，1.0当量)，6-(2-氯-5-氟吡啶-4-基)-4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑(107-36)(33毫克，0.1毫摩尔，1.0当量)，碳酸铯(65毫克，0.2毫摩尔，2.0当量)，三(二亚苄基丙酮)二钯(5毫克，0.005毫摩尔，0.05当量)和4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(6毫克，0.01毫摩尔，0.1当量)溶于5毫升甲苯，氮气保护条件下，升温到110℃反应4小时。冷却到室温，旋干溶剂，浓缩物硅胶柱层析纯化(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝20/1)得到黄色固体N-(5-((1-乙基哌啶-4-基)氧甲基)吡啶-2-基)-5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并咪唑-6-基)吡啶-2-胺(30毫克，收率：58％)。LCMS(ESI):m/z521[M+H]+；熔点：78-79摄氏度；1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.75(s,1H),8.29(s,1H),8.15(s,1H),8.01(s,1H),7.68(m,3H),7.22(d,J＝10.1Hz,1H),4.83(s,1H),4.42(s,2H),3.36(s,1H),2.63(s,5H),2.29(s,2H),2.00(s,2H),1.84(s,2H),1.60(s,6H),1.47(s,2H),0.97(s,3H).
实施例32生物活性试验
一、酶活性抑制实验
1、实验方法
(1)CDK2活性抑制实验
采用ADP-GloTM激酶检测试剂盒法(Promega，#V4489,Madison，WI)测定CDK2/CyclinE蛋白激酶活性。将上述得到的化合物用DMSO溶解后用激酶缓冲液(40mMTris7.5，20mMMgCl2，0.1mg/mlBSA，50μMDTT)稀释，在96孔板中加入2.5μl的5％DMSO溶解的5倍反应终浓度的化合物，无化合物对照孔是2.5μl的5％DMSO(最大信号值),无酶活性对照孔是2.5μl激酶缓冲液(最小信号值)。加入5μl的稀释2.5倍后的CDK2/CyclinE1酶溶液后在室温下孵育10分钟，再加入5μl的底物HistoneH1protein/ATP混合溶液，室温孵育60分钟。加入12.5μlADP-GloTM试剂室温孵育40分钟。再加25μl激酶检测试剂室温孵育30分钟。用荧光/化学发光分析仪(ThermoScientificFluoroskanAscentFL)检测记录荧光信号。抑制率％＝(最大信号值-化合物信号值)/(最大信号值-最小信号值)×100％。使用GraphPadPrismV5.0(GraphPadSoftware,SanDiego,CA)软件处理数据。通过S形剂量-反应曲线拟合计算IC50值。
(2)CDK4活性抑制实验
采用Caliper迁移率变动检测技术(Calipermobilityshiftassay)测定CDK4蛋白激酶活性(参见JBiomolScreen14:31，2009)。将上述得到的化合物用DMSO溶解后用激酶缓冲液(20mMHEPES-pH7.5，0.01％TritonX-100，10mMMgCl2，2mMDTT)稀释，在384孔板中加入5μl的10％DMSO溶解的5倍反应终浓度的化合物，无化合物对照孔是5μl的10％DMSO,无酶活性对照孔是5μl的激酶缓冲液。加入10μl稀释2.5倍后的CDK4酶溶液(GST-CDK4(1-303end)/GST-CycD3(1-292end；Carna,Cat.No04-105))后在室温下孵育10分钟，再加入10μl的稀释2.5倍后的底物溶液PeptideFAM-P8(GLBiochem,Cat.No.112396)。28℃下孵育3小时后加25μl终止液终止反应。CaliperEZReaderII(CaliperLifeSciences)上读取转化率数据。其中max是指DMSO对照(无化合物)的转化率，min是指无酶活性对照的转化率按照上述方法把转化率转化成抑制率数据。其中，抑制率％＝(max-转化率)/(max-min)×100，
(3)CDK6活性抑制实验
采用Caliper迁移率变动检测技术(Calipermobilityshiftassay)测定CDK6蛋白激酶活性(参见JBiomolScreen14:31，2009)。将上述得到的化合物用DMSO溶解后用激酶缓冲液(20mMHEPES-pH7.5，0.01％TritonX-100，10mMMgCl2，2mMDTT)稀释，在384孔板中加入5μl的10％DMSO溶解的5倍反应终浓度的化合物，无化合物对照孔是5μl的10％DMSO,无酶活性对照对照孔是5μl的激酶缓冲液。加入10μl的稀释2.5倍后的CDK6酶溶液(GST-CDK6(1-326end)；Carna,Cat.No04-107)后在室温下孵育10分钟，再加入10μl的稀释2.5倍后的底物溶液PeptideFAM-P8(GLBiochem,Cat.No.112396)。28℃下孵育40分钟后加25μl终止液终止反应。CaliperEZReaderII(CaliperLifeSciences)上读取转化率数据。把转化率转化成抑制率数据。其中max是指DMSO对照(无化合物)的转化率，min是指无酶活性对照的转化率。按照上述方法把转化率转化成抑制率数据。其中，抑制率％＝(max-转化率)/(max-min)×100。
2、实验结果
下述的表格1中列出本发明中所述的代表性化合物在CDK6,CDK4及CDK2的活性抑制检测中所具有的抑制活性。在这些检测中，使用下述级别：对于IC50而言，I>500nM,500nM>II>100nM,100nM>III>50nM,50nM>IV>10nM,V<10nM。
从实验结果我们可以看出，本发明提供的化合物对CDK2抑制的IC50为I或II(化合物9除外)，即至少＞100nM，而对CDK4或CDK6抑制的IC50为50nM以下，即该类化合物可以选择性抑制CDK4和CDK6，特别是其中的化合物2、6、20、21、22、23、24、25、27、29、32、33、34、38等，对CDK2抑制的IC50大于500nM，而对CDK4和CDK6有较高的抑制活性，IC50能达到50nM以下，甚至10nM以下，具有高选择性和高活性的特点。
表1酶活性抑制结果
注：表中的化合物编号对应于实施例1-31中的化合物编号。
二、肿瘤细胞增殖抑制实验
1、实验方法
采用CellTiter-Glo发光细胞活力检测试剂盒法(Promega，#G7572,Madison，WI)测定三磷酸腺苷(ATP)的含量来评估细胞活力。肿瘤细胞株(结肠癌SW620、乳腺癌ZR-75-1、乳腺癌MDA-MB-231)购买自上海复旦IBS细胞资源中心和美国菌种保藏中心(ATCC)。用胰酶将细胞从细胞培养盘上消化和培养基重悬后用Scepter自动细胞计数仪(Millipore，#PHCC00000)计数测定细胞密度。将细胞稀释成每毫升含44,000个细胞的溶液。调整密度后的细胞溶液以每孔90μl加入细胞实验板中。孔板置于37℃、5％CO2培养箱培养24小时后加入不同浓度的待试化合物。细胞在10％胎牛血清存在下与化合物一起培养72小时(SW620)或者120小时(ZR-75-1、MDA-MB-231)。使用LuminescentCellViabilityAssaykit(见厂家说明书)测定ATP的含量来评估细胞生长抑制。简要来讲，每个孔中加入30μl试剂，摇板10分钟，诱导细胞裂解，用荧光/化学发光分析仪(ThermoScientificFluoroskanAscentFL)检测记录荧光信号。从二甲基亚砜(DMSO)处理72或120小时的细胞得到最大的信号值。最小信号值定义为0。抑制率％＝(最大信号值-化合物信号值)/(最大信号值-最小信号值)×100％。使用GraphPadPrismV5.0(GraphPadSoftware,SanDiego,CA)软件处理数据。通过S形剂量-反应曲线拟合计算IC50值。
2、实验结果
下述的表格2中列出本发明中所述的代表性化合物在基于细胞的检测中所具有的抗细胞增殖的活性。在这些检测中，使用下述级别：对于IC50而言，I>5μM,5μM>II>1μM,1μM>III>0.5μM,0.5μM>IV>0.1μM,V<0.1μM。从实验结果我们可以看出，本发明提供的化合物对SW620、ZR-75-1、MDA-MB-231肿瘤细胞株均有抑制活性，且部分化合物活性较高
表2肿瘤细胞增殖抑制结果
化合物 SW620 ZR-75-1 MDA-MB-231
1 III III II
2 IV V IV
5 IV V III
6 IV V III
7 IV V IV
9 IV IV IV
17 III III III
18 III IV II
19 IV IV III
20 IV V IV
21 II V IV
22 IV V IV
23 IV V IV
24 II V IV
25 II V IV
27 II V II
29 V V IV
32 IV V II
33 II V IV
34 IV V III
38 V V V
PD-0332991 IV IV IV
LY2835219 IV V IV
LEE011 III V II
注：表中的化合物编号对应于实施例1-31中的化合物编号。
三、细胞周期抑制实验
1、实验方法
本实验采用的细胞周期与细胞凋亡检测试剂盒(Beyotime，C1052)是一种采用经典的碘化丙啶染色(Propidiumstaining，即PIstaining)方法进行细胞周期与细胞凋亡分析的检测试剂盒。碘化丙啶(Propidium，简称PI)是一种双链DNA的荧光染料。碘化丙啶和双链DNA结合后可以产生荧光，并且荧光强度和双链DNA的含量成正比。细胞内的DNA被碘化丙啶染色后，可以用流式细胞仪对细胞进行DNA含量测定，然后根据DNA含量的分布情况，可以进行细胞周期和细胞凋亡分析。将MDA-MB-231细胞按每孔3x105个接种于6孔培养板，培养24小时。加入待试化合物或参照物(PD-0332991或LY2835219)24h后，1000rcf离心3min收集细胞，PBS(磷酸盐缓冲溶液)洗两次；加入预冷的70％乙醇4℃固定过夜，1000rcf离心10min，1×PBS洗两次；加入PI染色液染色30min；用流式细胞仪检测并分析细胞周期G1阻滞。
2、实验结果
CDK4和CDK6在肿瘤细胞周期中与cyclinD结合促使G1期进入S期。CDK4/6抑制剂选择性阻滞肿瘤细胞G1期进入S期。流式细胞术检测MDA-MB-231乳腺癌细胞周期结果表明，本发明提供的CDK4/6抑制剂化合物以浓度依赖方式使G1期细胞生长停止和S期细胞减少(表3)。
表3细胞周期实验结果
注：表中的化合物编号对应于实施例1-31中的化合物编号。
四、蛋白免疫印迹(WesternBlot)实验
1、实验方法
MDA-MB-231单层培养生长,加入待试化合物或参考化合物(PD-0332991或LY2835219)培养培养16小时后，用预冷的PBS洗两次，收集细胞，用生物样品均质器匀浆2-3次，13,000rpm于4℃离心10min，取上清液。采用Branfor法测定蛋白浓度，加入上样缓冲液(Beyotime，#P0015L)于100℃煮8min，以8％-10％SDS-PAGE电泳分离蛋白后转移至PVDF膜，膜用含5％的脱脂奶粉封闭45min，加一抗β-actin(CST，#4970)、Rb(D20)RabbitmAb(CST，#9313)、Phospho-Rb(Ser780)(D59B7)RabbitmAb(CST，#8180)于4℃下孵育过夜，然后用TBST液洗膜3×10min。以荧光二抗IRDye680CWGoat(polyclonal)Anti-RabbitlgG(H+L)，HighlyCrossAdsorbed(LI-COR，#926-68071)室温下避光孵育2h后再洗膜，洗涤条件同上。最后将膜置于LI-COROdyssey红外荧光扫描成像系统上检测成像。
2、实验结果
CDK4/6可通过将肿瘤抑制蛋白Rb蛋白磷酸化而使Rb蛋白失去对细胞周期的阻滞作用。CDK4/6抑制剂可阻止肿瘤抑制蛋白Rb的失活从而恢复Rb对细胞周期的阻滞作用。本发明提供的化合物5，7，20，29作用于MDA-MB-231乳腺癌细胞，能有效降低Rb在Ser780位点的磷酸化(图1)。
实施例33药代动力学(PK)实验
1、实验方法
雄性SD大鼠，体重300-350克，试验前过夜禁食。待试化合物溶解在30％磺丁基-β-环糊精(SBE-β-CD)中，以20mg/kg灌胃给药。给药后15分钟、30分钟和1、2、3、4、6、8及24小时尾端断口取血，每时间点约0.3ml，置于含K2-EDTA的离心管中，离心处理(2,000g，10分钟，4℃)取血浆，储存在-80℃的超低温冰箱中。50μL的血浆样品与5微升内标(IS)混合，用乙酸乙酯萃取。真空干燥后残留物重新溶于乙腈中。对样品进行过滤，并注入到LC-MS/MS分析。
2、实验结果
本发明提供的化合物5、7、20、29经灌胃给药后，吸收良好，血液暴露量高。这类化合物吸收缓慢，Tmax为4.6-6.0小时；半衰期较长，从3.4小时至21.2小时不等(表4，图2-5)。表中Tmax是指达峰时间，Cmax是指最大血药浓度，T1/2为半衰期，AUClast是指0-24小时时间-浓度曲线下面积，AUCinf是指0-Inf时间-浓度曲线下面积。
表4药代动力学实验结果：
注：表中的化合物编号对应于实施例1-31中的化合物编号。
以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims (19)

1.具有式Ⅰ结构的吡啶嘧啶胺类化合物或吡啶吡啶胺类化合物或者其药学上可接受的盐或立体异构体或其前药分子：
其中：
X和Y分别独立选自：CR7R8,C＝O,O,N或S，且X和Y不能同时是杂原子；
W选自：C或N；
R1选自：H，C1-C6烷基，C3-C6环烷基，C3-C6环烷基取代甲基；
R2和R3分别独立选自：H或卤素；
R4选自：H，C1-C6烷基；
当Y选自CR7R8,C＝O时，R5选自如下基团：
当Y选自O，N或S时，R5选自：
其中：
Z选自：C，N或O，且当Z是O时，R6不存在；
m选自：0，1或2；
n选自：1，2或3；
R6选自：H，C1-C6烷基，C3-C6环烷基，C3-C6环烷基取代C1-C6烷基，苯甲基，乙酰基，C1-C6烷基磺基，卤素取代C1-C6烷基，羟基取代C1-C6烷基，C1-C6烷氧基取代C1-C6烷基，氨基取代C1-C6烷基，C1-C6烷基胺基取代C1-C6烷基，C1-C6烷基砜取代C1-C6烷基，C1-C6烷基取代胺基，C3-C6环胺基；
R7和R8分别独立选自：H,C1-C6烷基，C3-C6环烷基。
2.根据权利要求1所述的吡啶嘧啶胺类化合物或吡啶吡啶胺类化合物或者其药学上可接受的盐或立体异构体或其前药分子，其特征在于，X-Y选自：NH-CH2，CR7R8-NH，O-CH2，或CH2-O。
3.根据权利要求1所述的吡啶嘧啶胺类化合物或吡啶吡啶胺类化合物或者其药学上可接受的盐或立体异构体或其前药分子，其特征在于，
R5选自：
其中：Z选自N；m选自：0，1或2；n选自：1，2或3。
4.根据权利要求1所述的吡啶嘧啶胺类化合物或吡啶吡啶胺类化合物或者其药学上可接受的盐或立体异构体或其前药分子，其特征在于，
X-Y选自：NH-CH2，CH2-NH，O-CH2，或CH2-O；
R5选自：
其中：Z选自N；m选自：1；n选自：2。
5.根据权利要求1-4任一项所述的吡啶嘧啶胺类化合物或吡啶吡啶胺类化合物或者其药学上可接受的盐或立体异构体或其前药分子，其特征在于，R6选自：H，C1-C6烷基，羟基取代C1-C6烷基，C1-C6烷氧基取代C1-C6烷基，C3-C6环烷基取代C1-C6烷基。
6.根据权利要求1-4任一项所述的吡啶嘧啶胺类化合物或吡啶吡啶胺类化合物或者其药学上可接受的盐或立体异构体或其前药分子，其特征在于，R6选自：H，甲基，乙基，丙基，2-羟基乙基，3-羟基丙基，2-甲氧基乙基，环丙基甲基。
7.根据权利要求1-4任一项所述的吡啶嘧啶胺类化合物或吡啶吡啶胺类化合物或者其药学上可接受的盐或立体异构体或其前药分子，其特征在于，R1选自C1-C6烷基。
8.根据权利要求1-4任一项所述的吡啶嘧啶胺类化合物或吡啶吡啶胺类化合物或者其药学上可接受的盐或立体异构体或其前药分子，其特征在于，R2和R3分别独立选自卤素。
9.根据权利要求1-4任一项所述的吡啶嘧啶胺类化合物或吡啶吡啶胺类化合物或者其药学上可接受的盐或立体异构体或其前药分子，其特征在于，R4选自C1-C3烷基。
10.根据权利要求1-4所述的吡啶嘧啶胺类化合物或吡啶吡啶胺类化合物或者其药学上可接受的盐或立体异构体或其前药分子，其特征在于，
W选自C；
R1选自C1-C6烷基；
R2和R3均选自卤素；
R4选自C1-C6烷基；
X-Y选自：O-CH2；
R5选自：
其中：Z选自N；m选自1；n选自2；
R6选自：C1-C6烷基。
11.根据权利要求1-4任一项所述的吡啶嘧啶胺类化合物或吡啶吡啶胺类化合物或者其药学上可接受的盐或立体异构体或其前药分子，其特征在于，
W选自N；
R1选自异丙基或丙基；
R2和R3均选自氟；
R4选自C1-C6烷基；
X-Y选自：NH-CH2，CH2-NH，O-CH2，或CH2-O；
R5选自：
其中：Z选自N；m选自1；n选自2；
R6选自：C1-C6烷基，羟基取代C1-C6烷基，C1-C6烷氧基取代C1-C6烷基。
12.根据权利要求1所述的吡啶嘧啶胺类化合物或吡啶吡啶胺类化合物或者其药学上可接受的盐或立体异构体或其前药分子，其特征在于，选自如下化合物：
13.权利要求1-12任一项所述的吡啶嘧啶胺类化合物或吡啶吡啶胺类化合物或者其药学上可接受的盐或立体异构体或其前药分子在制备周期蛋白依赖性蛋白激酶4和周期蛋白依赖性蛋白激酶6的抑制剂中的应用。
14.权利要求1-12任一项所述的吡啶嘧啶胺类化合物或吡啶吡啶胺类化合物或者其药学上可接受的盐或立体异构体或其前药分子在制备防治肿瘤的药物中的应用。
15.根据权利要求14所述的应用，其特征在于，所述肿瘤为实体肿瘤和血液肿瘤。
16.根据权利要求15所述的应用，其特征在于，所述实体肿瘤和血液肿瘤包括：乳腺癌，肠癌，脂肪肉瘤，非小细胞肺癌，肝癌，卵巢癌，胶质母细胞瘤，成神经细胞瘤，黑素瘤，膀胱癌，口腔癌，子宫癌，多发性骨髓瘤和淋巴瘤。
17.根据权利要求16所述的应用，其特征在于，所述乳腺癌包括：在绝经后女性雌激素受体阳性和/或人表皮生长因子受体2阴性的局部晚期或转移性乳腺癌。
18.一种防治肿瘤的药物组合物，其特征在于，包括作为活性成份的权利要求1-12任一项所述的吡啶嘧啶胺类化合物或吡啶吡啶胺类化合物或者其药学上可接受的盐或立体异构体或其前药分子，以及药学上可接受的载体。
19.根据权利要求18所述的药物组合物，其特征在于，所述肿瘤包括：乳腺癌，肠癌，脂肪肉瘤，非小细胞肺癌，肝癌，卵巢癌，胶质母细胞瘤，成神经细胞瘤，黑素瘤，膀胱癌，口腔癌，子宫癌，多发性骨髓瘤和淋巴瘤。
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