CN105148253B - 皮肤黏膜抗菌组合物 - Google Patents
皮肤黏膜抗菌组合物 Download PDFInfo
- Publication number
- CN105148253B CN105148253B CN201510521972.XA CN201510521972A CN105148253B CN 105148253 B CN105148253 B CN 105148253B CN 201510521972 A CN201510521972 A CN 201510521972A CN 105148253 B CN105148253 B CN 105148253B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- skin
- mucosa
- composition
- antibacterial
- antibacterial peptide
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Landscapes
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
本发明提供了一种皮肤黏膜抗菌组合物,组合物包含序列为SEQ ID NO:1的抗菌肽和合适的添加剂,所述合适的添加剂为稳定剂,还可以包括皮肤黏膜修复调理剂。针对现有抗微生物产品的副作用大、刺激性强、耐药性高的缺点,本发明的皮肤黏膜抗菌组合物因其科学的组方配比而具有刺激性低、无耐药性、效果好等优点。本发明的抗菌组合物对多种微生物具有抗菌作用,可用于人体皮肤黏膜等处的抗菌清洁、护理和治疗。
Description
技术领域
本发明涉及日化、消毒、药物、医疗器械领域,特别是皮肤黏膜抗菌组合物。
背景技术
在外界理化因子的损害、病原微生物的侵入、人体内分泌代谢紊乱以及其他原发性全身疾病等情况下,人体皮肤、黏膜会出现的一系列的疾患,如累及毛囊皮脂腺的慢性炎症性皮肤病,俗称“青春痘”的痤疮、好发于婴幼儿,同时成人也存在的湿疹、常见性的口腔疾病如牙周炎、口腔溃疡、龋齿等、女性高发性的妇科疾病等。
致病微生物,如金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌、痤疮丙酸杆菌、牙龈卟啉单胞菌、变异链球菌等可引起各种皮肤、黏膜疾患,同时一些非细菌感染的原发性疾病也为微生物的侵入提供了条件,现有的抗微生物剂为化学成分抑菌剂或杀菌剂和中草药,化学类如洗必泰、三氯生、西吡氯铵、抗生素等成分,这些成分有的味苦,有的具刺激性,且具有不同的副作用。长期使用洗必泰易使牙齿及口腔黏膜表面着色,使味蕾的味觉降低,并抑制唾液的分泌,造成口干、灼痛等不适症状。三氯生曾被报道过具有致癌作用,目前虽无科学研究可以证明三氯生会致癌,但最近的研究结果表明,三氯生会引起白鼠肝癌和肝脏纤维化,其对人体的毒副作用需密切关注。2007年10月,在美国佐治亚州提出的集体诉讼声称,许多用户使用宝洁公司生产的活性成分为西吡氯铵的漱口水,造成牙齿染色和他们的味觉丧失。而传统抗生素虽抗菌效果明显,但抗菌机理大多通过阻碍细菌细胞壁的合成、抑制蛋白质的合成、影响核酸、叶酸的代谢等来进行抗微生物,微生物很容易通过基因突变来改变代谢途径,进而对抗生素产生耐药性。中草药虽具有抑菌、消炎、止血、镇痛等作用,但中草药不稳性,易被氧化变质,失去活性。
抗菌肽是一类碱性多肽,由于其越来越多的功能被发现,可被称为宿主防御肽(host defence peptides,HDPs),一般由12~50个左右氨基酸组成,具有广谱抗菌性,对细菌、真菌、病毒、寄生虫和肿瘤细胞有抑制或杀灭作用,可促进伤口愈合过程。此外,抗菌肽还能作为免疫效应活化分子,调节机体免疫系统的功能,增强机体清除病原体的能力,中和细菌内毒素LPS,降低炎性细胞因子的释放,减缓炎症反应引起的组织损伤。相对于抗生素,抗菌肽在耐药性方面具有不可比拟的优点,抗菌肽可通过与微生物细胞膜作用,形成孔洞,影响细胞内外渗透压,进而使细胞死亡。这种抗菌机理不易使细菌产生耐药性。因此,抗菌肽作为抗微生物成分受到越来越多的青睐。
然而,就广谱抗菌性而言,每种抗菌肽的抗菌谱不尽相同。如来源相同的家蚕抗菌肽就如表1(林立鹏,蓝希钳.家蚕抗菌肽[J].蚕学通讯,2007,27(3):11-17.孙伟,沈以红,向仲怀,等.家蚕抗菌肽基因研究进展[J].蚕业科学,2009,35(1):196-203.) 所示表现出不同的抗菌谱。再如gerberth等人报道(gerberth B,Lee JY,Bergman T,et al.Aminoacid sequence of PR 39,isolation from pig intestine of a new member of thefamily of proline-arginine-rich antibacterial peptides[J].Eur J Biochem,1991,202: 849-854.)猪抗菌肽Cathelicidin PR-39在较低的μmol/L浓度下对革兰氏阴性菌(大肠杆菌、鼠伤寒沙门氏菌和醋酸钙不动杆菌)和一些革兰氏阳性菌(巨大芽孢杆菌、枯草杆菌和化脓链球菌)有作用,而对其他一些菌株,如普通变形杆菌、铜绿假单孢菌和金黄色葡萄球菌,即使在200~300μmol/L浓度下也没有抑制作用。
表1家蚕抗菌肽基因
就细胞毒性而言,由于抗菌肽对微生物膜的破坏性,针对不同种类的抗菌肽,其对真核细胞是否有毒性也需要进行考虑。抗菌肽在体内自然血液环境下无毒性,但其对PBS悬浮的血细胞是否有毒性却令人质疑。有文献(Hancock REW,Sahl H(2006)Antimicrobialand host-defense peptides as new anti-infective therapeutic strategies.NatBiotechnol 24:1551–1557)报道称,抗菌肽选择性破坏原核细胞膜而非真核细胞,其原因是后者细胞膜结构特点不同于前者,后者表面存在胆固醇,不存在负电荷和强跨膜电位。而抗菌肽选择性破坏癌细胞而非正常细胞,其原因是正常细胞与癌细胞骨架等结构差异(Schweizer F(2009) Cationic amphiphilic peptides with cancerselectivetoxicity.Eur J Pharmacol 625:190–194)。尽管如此,也有文献报道抗菌肽对正常真核细胞有毒性,Johansson等人 (Johansson,J.;Gudmundsson,G.H.;Rottenberg,M.E.;Berndt,K.D.;Agerberth, B.Conformation-dependent antibacterial activity of thenaturally occurring human peptide ll-37.J.Biol.Chem.1998,273,3718–3724.)报道称,抗菌肽Cathelicidin家族的LL-37在13~25μM对一些真核细胞有毒性。Gusman等人(Gusman,H.;Travis,J.; Helmerhorst,E.J.;Potempa,J.;Troxler,R.F.;Oppenheim,F.G.Salivary histatin 5 is an inhibitor of both host and bacterial enzymesimplicated in periodontal disease.Infect.Immun.2001,69,1402–1408.)报道称,抗菌肽histatin家族的histatin 5对人口腔蛋白酶MMP-2and MMP-9有抑制作用。
除此之外,抗菌肽还有其他一些缺点,包括:体内半衰期过短、易被高盐离子失活、易被蛋白酶水解、生产成本高等。抗菌肽的以上特点严重制约了其在产品中的应用。
涉及到皮肤黏膜抗菌领域,针对本领域中现有产品的缺点以及抗菌肽自身特性,含抗菌肽的皮肤黏膜抗菌组合物设计有格外多的要求。含抗菌肽的皮肤黏膜抗菌组合物首先要考虑到多肽本身的理化性质和生物学性质,包括分子大小、抗菌谱、溶解度、pH值、等电点、构象稳定性、有效剂量;例如多肽具有两性电离和等电点的性质,在其等电点时溶解度最低。其次是组合物的稳定性、其他添加物对多肽的稳定性和配伍性的影响;GOLDMAN等人报道(GOLDMAN M J,ANDERSON G M,STOLZEN-BERG E D,et a.l Human beta-defensin-1isa salt-sensitive antibiotic in lung that is inactivated in cystic fibrosis[J].Cel,l 1997,88(4):553-560.),部分抗菌肽的抗菌作用和溶液中的Na+浓度存在负相关性,当NaCl 浓度为150mmol/L(生理盐浓度)时即失去活性。HANCOCK等人报道(HANCOCK REW,DIAMOND G.The role of cationic antimicrobial peptides in innate hostdefences[J].Trends in Microbiology,2000,8(9):402-410.)许多因素会降低抗菌肽的活性,如高浓度的一价和二价阳离子、聚阴离子(polyanion)、血清、阿朴脂蛋白A-I(apolipoprotein A-I)和蛋白酶等。最后还要考虑到组合物使用效果和毒理安全性、以及对皮肤黏膜的刺激性以及生产成本的平衡关系。
发明内容
为解决上述问题,本发明的目的是提供一种皮肤黏膜抗菌组合物,本发明的皮肤黏膜抗菌组合物不引起耐药性、稳定性高、效果好、无副作用、对人体刺激性低。
本发明的皮肤黏膜抗菌组合物,包括序列为SEQ ID NO:1 的抗菌肽和合适的添加剂。
本发明的皮肤黏膜抗菌组合物中,所述抗菌肽含量优选为62.5ppm~2000ppm。
本发明的皮肤黏膜抗菌组合物中,所述抗菌肽含量优选为62.5ppm~1000ppm。
本发明的皮肤黏膜抗菌组合物中,所述抗菌肽含量进一步优选为125ppm~500ppm。
本发明的皮肤黏膜抗菌组合物中,所述的合适的添加剂为稳定剂。所述稳定剂可选自下列一种或多种:葡萄糖、吐温-80、海藻糖、甘油、聚乙二醇、山梨醇。
本发明的皮肤黏膜抗菌组合物中,除稳定剂外,还可以包括皮肤黏膜修复调理剂。所述皮肤黏膜修复调理剂可选自下列物质中的一种或多种:赖氨酸、精氨酸、蛋氨酸。
本发明的皮肤黏膜抗菌组合物的pH值优选为5.0~9.0,本发明组合物中各组分含量,无特殊说明下均为质量百分数。
针对抗菌领域现有产品缺点以及所选抗菌肽的分子大小、溶解度、pH值、等电点、构象稳定性、有效剂量等因素,发明人进行了科学组方。本发明组合物中所选择的抗菌肽是经过对众多抗菌肽的构效关系以及大量试验确定的,该抗菌肽针对引起皮肤黏膜疾病的多种微生物有抗菌作用。本发明的皮肤黏膜抗菌组合物中合适的添加剂为稳定剂,还可以包括皮肤黏膜修复调理剂。抗菌肽虽热稳定性好,但因其碱性氨基酸含量高而易受蛋白酶降解,另外,多肽本身也会逐渐分解,同时,其抗菌活性发挥所依赖的正电荷和特殊空间构象也易受溶液中很多因素影响,稳定剂的使用可保证其抗菌作用正常发挥。皮肤黏膜修复调理剂可改善皮肤黏膜代谢更新、增强免疫功能、修复皮肤黏膜疾患引起的损伤。
本发明的组合物可用于局部施用至皮肤、毛发、指甲、阴道、尿道、耳、口腔、鼻腔、呼吸系统、眼部、各种黏膜区域及其他受侵袭的区域,以治疗或预防微生物感染,或预防微生物感染的复发。
对本发明的皮肤黏膜抗菌组合物进行使用效果验证,结果表明组合物对皮肤黏膜疾病效果显著。对组合物进行动物学试验,结果表明本发明的皮肤黏膜抗菌组合物小鼠急性经口毒性试验属实际无毒级,对家兔眼部黏膜刺激反应为无刺激性、家兔多次完整皮肤刺激试验无刺激性、家兔阴道黏膜刺激性试验极轻刺激性。
本发明的皮肤黏膜抗菌组合物设计是基于现有抗菌产品的缺点以及对抗菌肽自身特性而进行科学组方,组合物的组合以及各组分的上述百分比范围是通过大量试验确定的,不仅能使组合物体系稳定性增加,而且具有增强组织免疫功能,提高细胞修复能力,促进伤口愈合的协同增益效果。与现有技术相比,本发明的皮肤黏膜抗菌组合物具有不引起耐药性、对皮肤黏膜刺激性低、效果显著等优点。
具体实施方式
本发明组合物包含序列为SEQ ID NO:1 的抗菌肽和稳定剂,所述稳定剂可选自下列一种或多种:葡萄糖、吐温-80、海藻糖、甘油、聚乙二醇、山梨醇。在一个实施方案中,稳定剂优选为甘油。
此外,组合物还可以包括其他皮肤黏膜修复调理剂,所述皮肤黏膜修复调理剂优选为氨基酸。氨基酸是身体新陈代谢的必需成分,是细胞修复过程中蛋白质合成的原料。
所述皮肤黏膜修复调理剂可优选自赖氨酸、精氨酸、蛋氨酸。
精氨酸可刺激生长激素和胰岛素等物质的释放,生长激素的主要生理功能包括促进神经组织以外的所有其他组织生长、促进机体合成代谢和蛋白质合成,胰岛素可促进血循环中葡萄糖进入肝细胞、肌细胞、脂肪细胞及其他组织细胞合成糖原使血糖降低,促进脂肪及蛋白质的合成。同时,精氨酸也是免疫刺激剂和伤口恢复促进剂,能促进皮肤与黏膜新陈代谢和伤口愈合,如由诺华公司生产的品牌为Arginaid的精氨酸饮料,主要用于医院或家庭护理中伤口愈合的促进。
赖氨酸能增强自然杀伤细胞的功能,调节炎症免疫反应(如抑制TNF和IFN的生成),可阻止病毒和细菌进入细胞,可用于治疗单纯性疱疹、唇疱疹、生殖器疱疹等病毒性感染。赖氨酸可抑制睾酮转化为双氢睾酮(DHT)的酶活性,而DHT与脱发、青春痘和前列腺增生关系密切。赖氨酸还可通过提高胶原形成而促进皮肤健康。
蛋氨酸是角蛋白重要组成成分,是胶原形成必需的物质,可保持组织的弹性,其还具有抗氧化特性,可防护机体受有毒物质和自由基的侵害,可螯合重金属,并将其清除体外,同时,还有助于尿道感染的治疗,阻止细菌在尿道壁中的粘附和增殖,研究证明有免疫系统问题的人体内蛋氨酸水平较低,蛋氨酸的添加可增强自然免疫功能。
在一个实施方案中,所述皮肤黏膜修复调理剂为精氨酸。
在一个实施方案中,所述皮肤黏膜修复调理剂为赖氨酸。
在一个实施方案中,所述皮肤黏膜修复调理剂为精氨酸和赖氨酸的组合。
在一个实施方案中,所述皮肤黏膜修复调理剂为精氨酸、赖氨酸和蛋氨酸的组合。
当配制为产品时,本发明的组合物可以包含通常用于化妆品、消毒产品、药物、医疗器械的成分,例如基质、载体或媒介。特别地,基质、载体或媒介与所施用部位相容,所述部位例如皮肤、毛发、指甲、阴道、尿道、耳、口腔、鼻道、呼吸系统、眼部、和/或黏膜。本发明的组合物适合于接触受感染的组织或在患者中使用,且通常不具有过度的毒性、不相容性、不稳定性、变态反应等。视情况而定,本发明的组合物可以包含通常在本领域中考虑使用的任何其他辅助成分。
本发明组合物的剂型可以包括喷剂、乳剂、悬浮液、乳膏、洗液、凝胶、粉剂、或其他固体或液体组合物。此类组合物可以包含:保湿剂、水合剂、渗透剂、防腐剂、乳化剂、天然或合成油、表面活性剂、去污剂、胶凝剂、软化剂、抗氧化剂、芳香剂、填充剂、增稠剂、蜡、气味吸收剂、着色剂、染色剂、粉剂、粘度调节剂和水,以及任选地包括止痒活性剂、植物提取物或增白剂、闪光剂、矿物质、多酚、有机硅、防晒剂、维生素等。
当本发明的组合物配制为各种剂型时,可根据个人喜好,在组合物中选择性添加令口腔感觉清爽舒适的香料,如薄荷香料、橘子味香料、黄瓜味香料等。在一个实施方案中,本发明的组合物未添加香料,为原味的抗龋齿口腔喷剂。
特别的,当本发明的组合物配制为凝胶剂,可选择以下成分作为凝胶基质:卡波姆、羟甲基纤维素钠、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素、聚乙烯醇、丙烯酸类树脂、泊洛沙姆、明胶、聚卡波菲等。在一个实施方案中,本组合物配置的凝胶基质为卡波姆,产品使用形式为口腔溃疡抗菌凝胶,产品对普通口腔溃疡和放化疗引起的口腔溃疡起到较好治疗作用。在另一个实施方案中,本组合物配置的凝胶基质为聚乙烯醇,产品使用形式为液体抗菌创可贴,产品在患处涂抹5分钟内成膜,患处可自由活动。同样的,按照产品应用的形式需要,本组合物也可配置为女性抗菌凝胶、皮肤抗菌凝胶、祛痘凝胶等各种凝胶应用剂。以此类推,产品的剂型不限于凝胶剂。
实施例1抗菌肽的选择
抗菌肽具有广谱抗菌、抗炎、免疫调节等各种作用,然而每种抗菌肽的特性各有不同。
在实际应用中,如何选择适合的抗菌肽种类和剂量,需考虑其在所应用领域能否达到安全性和有效性的要求。涉及到皮肤黏膜疾病治疗领域,安全性就是对皮肤和黏膜刺激性低,无过敏反应,在抗菌肽选择时,首先考虑的是其对细胞有无毒性。有效性就是能抑制或杀灭皮肤黏膜主要致病微生物,关于有效性将在后续实施例中介绍。
本发明在对抗菌肽构效关系的分析以及大量的试验基础上,从众多抗菌肽中优选出本组合物中的抗菌肽,该抗菌肽序列为SEQ ID NO:1 。
抗菌肽对哺乳动物的毒性,通过抗菌肽对红细胞溶血性来检测,一般用最小溶血浓度 (MHC)来表示,MHC代表引起10%红细胞溶血的最低浓度,也就是说,溶血率10%以下的浓度可判为对细胞基本无毒性。抗菌肽的溶血率通过检测被裂解红细胞释放的血红蛋白量获得。取1mL人新鲜血细胞,4℃,1000×g,离心5分钟,将血细胞用PBS(pH 7.2)溶液洗3次,重悬于PBS中,取50μL血细胞与PBS配制的50μL不同浓度的抗菌肽溶液在37℃孵育1小时。孵育液在4℃,1000×g,离心5分钟,取上清。检测血红蛋白释放量,在570nm下测吸光度。阴性对照为红细胞的PBS溶液,阳性对照为0.1%的Triton X-100。
结果如表2所示:
表2抗菌肽的溶血性
以上试验结果表明:所选择的抗菌肽在一定剂量范围内对细胞基本无毒性。
实施例2皮肤黏膜抗菌组合物配方
本组合物中的抗菌肽为氨基酸序列如SEQ ID NO:1 所示的多肽,本发明中所述抗菌肽可通过化学合成,也可以通过基因工程技术表达、分离纯化得到(具体方法可参见Sambrook et al.,Molecular Cloning:A Laboratory Manual,Cold Spring HarborLaboratory Press,Cold Spring Harbor,NY,1989)。皮肤黏膜抗菌组合物中抗菌肽浓度为:62.5~2000ppm;优选为: 62.5~1000ppm;进一步优选为:125~500ppm。本组合物中的抗菌肽可抑制皮肤黏膜致病菌的粘附和生长、杀灭致病菌,保持人体皮肤和黏膜的健康。
本组合物中的稳定剂可维持抗菌肽正确的构象,为其营造稳定的抗菌作用环境。可选自吐温-80、甘油,或二者的混合液;由于糖和多元醇在低浓度下会迫使更多的水分子围绕在抗菌肽周围,因而提高了抗菌肽的稳定性,基于此原理,其他的如葡萄糖、海藻糖、聚乙二醇、山梨醇、甘露醇等物质也可以作为抗菌肽的稳定剂。本发明中的稳定剂优选为甘油。
本组合物中的皮肤黏膜修复调理剂可为皮肤黏膜的生长修复提供营养,从而能促进皮肤黏膜损伤处的细胞生长,加速伤口愈合,增强细胞免疫功能。
皮肤黏膜修复调理剂可优选自:3%~15%赖氨酸、0.2~0.6%精氨酸、0.001-0.01%蛋氨酸中的一种或多种。
本发明的皮肤黏膜抗菌组合物的pH值优选为5.0~9.0。该pH值下,抗菌肽构象更稳定,可更好发挥抗菌作用。所述的pH调节剂包括酸、碱或缓冲剂,所述的酸包括盐酸(包括1.0N 盐酸)、2,5-二羟基苯甲酸、乳酸、柠檬酸、乙酸或磷酸等,所述的碱包括氢氧化钠水溶液或氢氧化钾水溶液等,所述的缓冲剂包括琥珀酸盐、磷酸盐、乙酸盐或柠檬酸盐。
基于本发明的作用原理,本发明的皮肤黏膜抗菌组合物不限于以下组合:
A:62.5~2000ppm抗菌肽,0.5%~8%甘油。
B:62.5~1000ppm抗菌肽,0.5%~8%甘油,0.2~0.6%精氨酸。
C:125~500ppm抗菌肽,0.5%~8%甘油,3%~15%赖氨酸。
D:125~500ppm抗菌肽,0.5%~8%甘油,0.2~0.6%精氨酸,3%~15%赖氨酸。
E:125~500ppm抗菌肽,0.5%~8%甘油,0.2~0.6%精氨酸,3%~15%赖氨酸,0.001-0.01%蛋氨酸。
实施例3皮肤黏膜抗菌组合物的配制方法
本制备方法为实施例2中各组合组分的例举,不代表对本发明组合物的任何限制,配制步骤如下:
A1:
1.在1000ml的纯化水中,加入10ml甘油,搅拌均匀;
2.将62.5mg抗菌肽混合后,加入上一步的甘油溶液中,搅拌均匀;
3.将pH值调至7.0,即可得到儿童抗龋齿口腔喷剂。
B1:
1.在1000ml的纯化水中,加入5ml甘油,搅拌均匀;
2.将1000mg抗菌肽、2g精氨酸混合后,加入上一步的甘油溶液中,搅拌均匀;
3.将pH值调至5.0,即可得到女性抗菌洗液。
C1:
1.在1000ml的纯化水中,加入45ml甘油,搅拌均匀;
2.将125mg抗菌肽、30g赖氨酸混合后,加入上一步的甘油溶液中,搅拌均匀;
3.将pH值调至6.8,即可得到皮肤抗菌液。
D1:
1.在1000ml的纯化水中,加入80ml甘油,搅拌均匀;
2.将200mg抗菌肽、5g精氨酸、100g赖氨酸混合后,加入上一步的甘油溶液中,搅拌均匀;
3.将pH值调至7.2,即可得祛痘精华液。
E1:
1.在1000ml的纯化水中,加入20ml甘油,搅拌均匀;
2.将500mg抗菌肽、6g精氨酸、150g赖氨酸、0.01g蛋氨酸混合后,加入上一步的溶液中,搅拌均匀;
3.加入15g卡波姆,充分搅拌均匀;
4.将pH值调至7.8,即可得到口腔溃疡抗菌凝胶。
E2:
1.1000ml的纯化水加热至50℃,加入200g聚乙烯醇和20ml甘油,充分搅拌均匀;
2.将400mg抗菌肽、4g精氨酸、80g赖氨酸、0.1g蛋氨酸混合后,加入上一步的溶液中,搅拌均匀;
3.将pH值调至8.5,即可得到液体抗菌创可贴。
实施例4皮肤黏膜抗菌组合物的体外抗菌试验
为验证本发明皮肤黏膜抗菌组合物储存3个月后对致病微生物的抗菌效果,观察不加其他添加物的抗菌肽(Un-AP3)和本发明的皮肤黏膜抗菌组合物(实施例3中的A1-E1)储存3个月后以及新鲜配制不加其他添加物的抗菌肽(Un-AP)对致病菌的生长情况影响。其中,不加其他添加物的抗菌肽(Un-AP3和Un-AP)浓度为500ppm。
试验菌株:
金黄色葡萄球菌(ATCC6538)、大肠杆菌(ATCC8099)、铜绿假单胞菌(ATCC15442)、白色念珠菌(ATCC 10231)来自军事医学科学院,痤疮丙酸杆菌(ATCC 11827)、牙龈卟啉单胞菌(ATCC 33277)、变异链球菌(ATCC 25175)来自广东省微生物检测中心。
菌悬液的制备:
分别取各菌株在超净台上进行无菌操作,无菌条件下用划线法将试验菌种移接到相应培养基平板上,放入培养箱,37℃培养24小时。其中,变形链球菌采用MSA平板培养基,置于厌氧罐中,微需氧环境(N2 90%、CO2 5%),牙龈卟啉单胞菌采用CDC平板培养基,置于厌氧罐中,厌氧环境(N2 80%,H2 10%,CO2 10%)。试验菌培养物用0.03mol/L磷酸盐缓冲PBS(高压灭菌锅121℃湿热灭菌)冲洗至104cfu/mL菌悬液。
实验方法:参照GB 15979《一次性使用卫生用品卫生标准》中附录C3“杀菌性能试验方法”进行测定。取上述菌悬液,分别取实施例3中的各组被试样品和对照(PBS)100μL,混合均匀,作用20分钟,加入5mL中和剂(2%卵磷脂、2%吐温-80的D/E肉汤),充分混匀,作适当稀释,取其中3个稀释度,分别吸取0.5mL,置于平行平皿内,再加入相应培养基培养,37℃培养48小时(细菌)或72小时(真菌),计菌落数。以上试验重复3次,取其平均数。
皮肤黏膜抗菌组合物储存3个月后对致病微生物的抗菌效果检测结果如表3所示:
表3皮肤黏膜抗菌组合物的杀菌率结果
由上结果可知,本发明的皮肤黏膜抗菌组合物存放3个月后对各种致病菌的杀菌率都达到 90%以上,该抗菌肽对致病菌有杀菌作用,且本发明组合物对抗菌肽的抗菌性能具有很好的稳定作用。
实施例5人群试用数据
5.1儿童抗龋齿口腔喷剂对龋齿的使用效果
1名半年龋齿病史的5岁女孩,1名两年龋齿病史的7岁男孩,分别使用按照实施例3中组合物A1配制的儿童抗龋齿口腔喷剂,每天早饭后和晚上睡觉前各喷一次,在饮食生活习惯未改变下,持续使用半年,没有观察到新的龋洞。
5.2女性抗菌洗液的使用效果
1名经医院鉴定为患有真菌性阴道炎的29岁女性,使用实施例3中组合物B1配制的女性抗菌洗液,3天后,所有真菌性阴道炎症状消失。
5.3皮肤抗菌液对湿疹的使用效果
1名患有婴儿湿疹的6月龄儿童、1名患有口周湿疹的1岁半儿童、1名患有腰部湿疹的40 岁成年男性,该3名患者使用实施例3中组合物C1配制的皮肤抗菌液2天后,瘙痒、红肿症状减轻,5天后症状消失。
5.4祛痘精华液对痤疮治疗效果评价
选取轻、中度面部寻常性痤疮志愿者50名,男28名,女22名,年龄16岁-38岁,将志愿者随机分为试验组和对照组2组,每组25人,试验组使用按照实施例2中的组合物D1配制为祛痘精华液,每日3次。对照组用皮康霜(购自药店),每日涂抹3次,全部志愿者忌烟、酒、辛辣刺激性食物及油腻食品,测试者清洁面部后分别于痤疮处施用本发明组合物或皮康霜,使用时间为4周。
判定标准:
治愈:疗效指数≥90%;显效:60%≤疗效指数<90%;有效:20%≤疗效指数<60%;无效:疗效指数<20%。
使用4周后组合物对痤疮的使用效果见表4:
表4祛痘精华液使用效果
分组 | 治愈 | 显效 | 有效 | 无效 | 有效率(%) |
对照组 | 12 | 8 | 6 | 1 | 80 |
试验组 | 21 | 3 | 1 | 0 | 96 |
以上结果表明使用本发明的组合物用于痤疮治疗效果显著。
5.5口腔溃疡抗菌凝胶对口腔溃疡的使用效果
对照组和试验组各选择15例口腔溃疡患者,每组中有5例为放化疗引起的口腔溃疡患者,所有患者每次2喷,每天3次,对照组为生理盐水口腔喷剂,试验组为按照实施例3中组合物E1配制的口腔溃疡抗菌凝胶,使用30min内不饮食。对比使用前后1周两组患者的口腔黏膜情况,询问并记录患者的主诉症状,溃疡发生部位、数目、直径及周围炎症反应情况。
疗效评定标准:显效:用药3天后局部红肿减退,无疼痛症状,溃疡愈合。有效:用药1周后溃疡基本愈合,无疼痛症状。无效:超过1周仍有疼痛,溃疡无好转。
使用效果见表5:
表5口腔溃疡抗菌凝胶使用效果
组别 | 效果显著 | 有效 | 总有效率% |
对照组 | 1 | 4 | 33% |
试验组 | 5 | 7 | 80% |
结论:与生理盐水相比,本发明的口腔溃疡抗菌凝胶对口腔溃疡有显著效果。
实施例5.6液体抗菌创可贴的使用效果
一名25岁女性削水果时将左手食指第二关节处划伤,用酒精清洗伤口后,使用实施例3中组合物E2配制的液体抗菌创可贴涂抹于伤口部位,在体温作用下,2分钟后,产品在伤口处形成薄膜,该薄膜具有防水、透气、吸收组织液渗出优点,不受伤口形状和所处的位置的限制、涂布位能活动自如,3天后伤口愈合完好。
实施例5.7镇痛效果
令人意外的是,70%以上的试用前皮肤或口腔有发炎、红肿、破溃的试用者反映使用该组合物后痛感减轻。基于该组合物中未添加任何镇痛成分,发明人推测,镇痛原理可能来自抗菌肽本身,亦或抗菌肽与其他组合物组方后出现的新效果,具体原理还有待进一步研究。
实施例6动物毒理试验
实施例6.1小鼠急性经口毒性试验
取清洁级健康ICR小鼠40只,体重18.2-21.9g,雌雄各半,随机分为2组,试验方法为一次最大限度试验,设计剂量为5000mg/kgb.wt.,分别称取实施例3中A1和E1的组合物5000mg加纯净水至20ml配制成受试物。小鼠禁食过夜后,经口一次灌胃给予,灌胃容量为20ml/kg b.wt.。灌胃后4h给食,观察期14d。小鼠灌胃后未见中毒表现,观察期内无动物死亡。结果表明本发明的组合物对雌雄小鼠经口LD50值均大于5000mg/kgb.wt.,属实际无毒级。
实施例6.2多次眼刺激试验
用于黏膜的产品对黏膜的刺激性可通过动物眼刺激性试验表征。
取健康新西兰白兔6只,普通级,体重2.3-2.6kg,试验前24h检查双眼,随机分为2组,取无眼疾者进行试验,分别从实施例3中A1和E1的组合物中吸取0.1ml滴入家兔一侧眼结膜囊内,被动闭合10s,不冲洗,另一侧以生理盐水作正常对照。每天一次,连续给受试物14d,给药结束后对眼部进行检查,肉眼观察家兔结膜、虹膜和角膜的损伤与恢复情况。必要时用2%荧光素钠溶液或放大镜、裂隙灯检查角膜变化观察眼刺激反应。试验结果表明各试验组与对照组相同,角膜无浑浊,虹膜正常,无充血、肿胀,结膜血管正常,无水肿,无分泌物,该各组合物对家兔眼刺激反应为无刺激性。
实施例6.3皮肤刺激性试验
取健康无皮疾家兔12只,普通级,金陵种兔场提供,体重2.3-2.7kg,随机分为3组。试验前日,将家兔背部脊柱两侧毛剪掉,去毛范围各为3cm×3cm。试验时,取受试物(实施例3中的C1、D1、E2)约0.5ml涂抹在一侧去毛皮肤上,另一侧去毛皮肤作为空白对照,涂抹面积2.5cm×2.5cm,每天涂抹1次,连续涂抹14d。涂抹后4h,用温水清洗,除去残余物, 24h后观察结果,无红斑、无水肿,该各组合物对家兔皮肤刺激反应为无刺激性。
实施例6.4阴道黏膜刺激试验
取健康雌性新西兰白兔6只,普通级,金陵种兔场提供,体重2.0-2.2kg,随机分为3只试验组和3只对照组。动物仰面固定,暴露出会阴和阴道口。用导管将2ml实施例3中的组合物B1 轻柔推入动物阴道内。连续5天,每天1次。对照组用生理盐水作同样处理。末次24h后采用气栓法处死动物,剖腹取出完整阴道,纵向切开,肉眼观察有无充血、水肿等表现。再将阴道放入10%福尔马林中固定24h以上,选取阴道两端和中央3个部位的组织制片,HE染色后进行组织病理学检查。结果显示组合物对阴道黏膜的刺激强度为极轻。
上述实施例为本发明较佳的实施方式,但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制,其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化,均应为等效的置换方式,都包含在本发明的保护范围之内。
<110> 杭州先端生物科技有限公司
<120> 皮肤黏膜 抗菌组合物
<160> 1
<210> 1
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 1
Gly Arg Phe Lys Arg Phe Arg Lys Lys Phe Lys Lys Leu Phe Lys Lys
1 5 10 15
Leu Ser
Claims (6)
1.一种皮肤黏膜抗菌组合物,包括序列为SEQ ID NO:1 的抗菌肽和合适的添加剂,所述合适的添加剂为稳定剂,所述稳定剂为甘油,所述抗菌肽为62.5ppm~2000ppm,所述甘油含量为0.5%~8%,所述ppm为质量分数,所述含量为质量百分比。
2.如权利要求1所述的皮肤黏膜抗菌组合物,其特征在于:所述抗菌肽为62.5ppm~1000ppm。
3.如权利要求2所述的皮肤黏膜抗菌组合物,其特征在于:所述抗菌肽为125ppm~500ppm。
4.如权利要求1,2或3所述的皮肤黏膜抗菌组合物,其特征在于:所述组合物还可包括下列物质中的一种或多种:0.2%~0.6%精氨酸,3%~15%赖氨酸,0.001%~0.01%蛋氨酸,前述百分比为质量百分比。
5.如权利要求1,2或3所述的皮肤黏膜抗菌组合物,其特征在于:所述组合物的pH值在5.0~9.0。
6.如权利要求4所述的皮肤黏膜抗菌组合物,其特征在于:所述组合物的pH值在5.0~9.0。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201510521972.XA CN105148253B (zh) | 2015-08-24 | 2015-08-24 | 皮肤黏膜抗菌组合物 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201510521972.XA CN105148253B (zh) | 2015-08-24 | 2015-08-24 | 皮肤黏膜抗菌组合物 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN105148253A CN105148253A (zh) | 2015-12-16 |
CN105148253B true CN105148253B (zh) | 2018-03-27 |
Family
ID=54789514
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201510521972.XA Active CN105148253B (zh) | 2015-08-24 | 2015-08-24 | 皮肤黏膜抗菌组合物 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN105148253B (zh) |
Families Citing this family (13)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN105196259B (zh) * | 2015-10-22 | 2017-08-11 | 苏州金莱克精密机械有限公司 | 一种单手操作的电动工具电池包的锁紧机构 |
CN105769844B (zh) * | 2016-05-25 | 2019-01-11 | 天津嘉氏堂医美科技有限公司 | 一种含精氨酸的组合物及制剂 |
CN106620646A (zh) * | 2017-03-04 | 2017-05-10 | 江苏吉锐生物技术有限公司 | 一种多肽在制备用于治疗皮炎湿疹的药物中的用途 |
CN106668832B (zh) * | 2017-03-30 | 2020-08-14 | 浙江瀛康生物医药有限公司 | 一种多肽在制备治疗肠道病毒感染药物的应用 |
CN107698662A (zh) * | 2017-10-24 | 2018-02-16 | 银川利智信知识产权咨询服务有限公司 | 治疗痤疮的肽组合 |
CN107812017B (zh) * | 2017-11-28 | 2021-01-19 | 吉安市御美丽健康产业股份有限公司 | 一种抗菌肽妇科凝胶的制备方法 |
CN111375051A (zh) * | 2018-12-29 | 2020-07-07 | 江苏吉锐生物技术有限公司 | 一种多肽在制备预防和治疗人乳头瘤病毒感染制剂的应用 |
TWM612458U (zh) | 2019-03-12 | 2021-06-01 | 美商米沃奇電子工具公司 | 動力工具 |
CN113117047B (zh) * | 2019-12-30 | 2022-07-12 | 浙江瀛康生物医药有限公司 | 一种多肽抗炎止痒组合物 |
CN111214644A (zh) * | 2020-03-16 | 2020-06-02 | 中国人民解放军第四军医大学 | 芬母多肽在制备抑制ii型单纯疱疹病毒感染药物中的应用 |
CN111568919A (zh) * | 2020-05-19 | 2020-08-25 | 上海中砥生物科技有限公司 | 一种含壳寡糖的抗幽门螺旋杆菌制剂 |
CN116421590B (zh) * | 2023-06-14 | 2023-08-29 | 深圳市第二人民医院(深圳市转化医学研究院) | 二乙酸氯己定在制备预防或/和治疗肝癌的药物中的用途 |
CN116898901A (zh) * | 2023-08-14 | 2023-10-20 | 陕西科技大学 | 一种外生殖器护理喷雾及其制备方法 |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN102060928A (zh) * | 2009-11-13 | 2011-05-18 | 四川大学华西医院 | 一种蛙皮素导向的抗肿瘤多肽及其制备方法和应用 |
CN102205128A (zh) * | 2011-03-30 | 2011-10-05 | 青岛康地恩药业有限公司 | 抗菌肽保存试剂和含该试剂的抗菌肽制剂及制剂制备方法 |
CN103142990A (zh) * | 2013-03-14 | 2013-06-12 | 山东信得科技股份有限公司 | 一种治疗畜禽细菌性疾病的药物及其制备方法 |
-
2015
- 2015-08-24 CN CN201510521972.XA patent/CN105148253B/zh active Active
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN102060928A (zh) * | 2009-11-13 | 2011-05-18 | 四川大学华西医院 | 一种蛙皮素导向的抗肿瘤多肽及其制备方法和应用 |
CN102205128A (zh) * | 2011-03-30 | 2011-10-05 | 青岛康地恩药业有限公司 | 抗菌肽保存试剂和含该试剂的抗菌肽制剂及制剂制备方法 |
CN103142990A (zh) * | 2013-03-14 | 2013-06-12 | 山东信得科技股份有限公司 | 一种治疗畜禽细菌性疾病的药物及其制备方法 |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
In vitro and in vivo antimicrobial activity of two –helical cathelicidin peptides and of their synthetic analogs;Monica Benincasa等;《Peptides》;20031130;第24卷(第11期);摘要,第1726页图1、左栏第1段、第1726页右栏表1,第1727页图2、左栏第1段,第1728页表2 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN105148253A (zh) | 2015-12-16 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN105148253B (zh) | 皮肤黏膜抗菌组合物 | |
ES2360803T3 (es) | Composiciones y métodos terapéuticos antimicrobianos. | |
US20150264935A1 (en) | Semi-Fluidic Composition for Lubricating, Moisture Retaining, Disinfecting, Sterilizing and Method Using the Same | |
CN103356738B (zh) | 一种皮肤消毒凝胶及其应用 | |
JP2003515615A (ja) | 治療用抗菌剤組成物 | |
KR102659079B1 (ko) | 키토산-함유 제제 및 그의 제조 및 사용 방법 | |
US20080286235A1 (en) | Antimicrobials and related methods | |
KR20070092095A (ko) | 소독용 조성물 및 이의 제조 및 이용 방법 | |
CN103083472A (zh) | 一种治疗妇科炎症的纳米银抗炎凝胶及制备方法 | |
CN101543658B (zh) | 防治宫颈糜烂的宫颈帽及其制备方法 | |
CN111449973A (zh) | 一种修复女性阴道微生态平衡的泡沫剂及其制备方法 | |
WO2021217324A1 (zh) | 消毒剂组合物、其制备方法和用途 | |
CN108354880A (zh) | 一种婴童皮肤护理组合物 | |
WO2008104076A1 (en) | Electrocolloidal silver and echinacea root antimicrobial formulation | |
CN109833431A (zh) | 一种抑菌凝胶及其制备方法 | |
CN109010098A (zh) | 抗菌漱口液及其制备方法 | |
CN109528631A (zh) | 一种妇用抗菌水凝胶及其制备方法 | |
KR20070017451A (ko) | 항균 감염증 및 항염증 작용에 대한 예방 치료용 조성물 및이를 이용하여 얻어진 무좀치료제 | |
CN109432201B (zh) | 妇科抗菌凝胶及其制备方法 | |
RU2184538C2 (ru) | Применение дихлорбензилового спирта для получения лекарственного средства для местного лечения воспаления и лекарственное средство, содержащее дихлорбензиловый спирт | |
CN105899221A (zh) | 基于藻类和橄榄叶提取物的皮肤用组合物 | |
CN101288769A (zh) | 一种用于宠物的杀菌制剂及其制备方法 | |
AU2007298511B2 (en) | Compositions for prevention and treatment of mastitis and metritis | |
KR101862628B1 (ko) | 피부용 윤활제 조성물 및 그 제조방법 | |
US7476379B1 (en) | Emu-based formulations for the treatment of damaged skin by inhibiting microbial and fungal activity |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
TA01 | Transfer of patent application right | ||
TA01 | Transfer of patent application right |
Effective date of registration: 20170306 Address after: 310000 Zhejiang, Gongshu District, Cheung Yuen Road, No. 47, building 1, north of the 2 floor Applicant after: Hangzhou apex Biotechnology Co., Ltd. Address before: 210036 Nanjing City, Hanzhoung Province, No. 301 Gate Street, building 13, block, 01, A Applicant before: Genloci Biotechnologies Inc. |
|
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant |