CN101288769A - 一种用于宠物的杀菌制剂及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种用于宠物的杀菌制剂。该制剂包括杀菌有效量的溶葡萄球菌酶和溶菌酶。本发明的制剂不仅杀菌效果较溶葡萄球菌酶高得多，对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌均可达到很强的杀灭作用，特别对耐药性金黄色葡萄球菌具有很强的杀灭效果，而且对宠物的皮肤、粘膜无刺激，并不易产生耐药性。本发明提供杀菌制剂可用于宠物的皮肤粘膜等部位的杀菌消毒用，可用于宠物烧伤、烫伤、抓伤、咬伤等创面的清洁消毒，并可用于外科、妇产科、泌尿科、口腔科等各种外科手术术前术后的清创和防治感染，还可用于宠物口腔、耳道和鼻部的清洁和消毒。
Description
技术领域
本发明涉及一种生物杀菌制剂，尤其涉及一种用于宠物的复合溶葡萄球菌酶制剂及其制备方法。
背景技术
宠物在带给人们乐趣的同时也会带来许多意想不到的问题，比如传染疾病、引起过敏、抓伤咬伤等，人畜共患的200多种传染病，其传播途径包括通过消化道、呼吸道和皮肤接触等，由宠物传染给人类，其中由狗传给人类的病毒性、细菌性和寄生虫性疾病多达40余种。皮肤接触是比较主要的传播途径，宠物身上的皮毛容易沾染灰尘，造成致病菌滋生并大量繁殖，并通过和人体皮肤接触传染给人类。
同时，宠物的身上所携带的致病菌又很容易造成宠物自身的疾病。如皮肤细菌感染，多数病例病原为中间葡萄球菌，临床上表现为皮肤脓疱疹，小脓疱，毛囊炎，皮肤皱裂和干性脓皮病。又比如宠物的口腔疾病，宠物的口腔卫生不同于人类，通常难以刷牙，此类动物的口腔非常不卫生，以至大肠杆菌等细菌容易在口中生成。此外，黏着在牙上的食物残渣可形成含唾液菌的菌斑，唾液菌中的细菌不仅包括革兰氏阳性菌还有革兰氏阴性菌，它们在唾液中生长和繁殖，会引起各种口腔疾病，如口臭、齿龈炎、牙周炎等。而这些问题都不能象人类一样通过刷牙等手段来控制。
目前常用的宠物皮肤粘膜用杀菌制剂主要包括酒精、碘酒、高锰酸钾等化学类杀菌或抗菌制剂，会对皮肤产生不同程度的刺激和伤害，特别是不能用于口腔粘膜、破溃皮肤及过于娇嫩皮肤，同时长期使用会产生耐药性问题。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于提供一种用于宠物的杀菌制剂，以克服现有技术的不足。
本发明所要解决的另一个技术问题是提供该用于宠物的杀菌制剂的制备方法。
本发明提供了一种用于宠物的杀菌制剂，该制剂包括杀菌有效量的溶葡萄球菌酶和溶菌酶，其重量百分比为为：
溶葡萄球菌酶∶溶菌酶＝1∶100～300。
其中的溶葡萄球菌酶为野生类型、重组产生、突变异种或保留抗葡萄球菌细胞壁肽聚糖的含甘氨酸交联键的任何重组或有关的酶中的一种或一种以上；溶菌酶为细菌胞壁溶解酶、酵母菌胞壁溶解酶、霉菌胞壁溶解酶中的一种或一种以上。所用的溶葡萄球菌酶是由基因重组产生，枯草杆菌分泌的。所用的溶菌酶是由蛋清中提取的或者基因重组产生。
该杀菌制剂中还包括以溶葡萄球菌酶和溶菌酶总重量计0.5-30％的蛋白质稳定剂和0.6-20％的离子化合物。
所述及的蛋白质稳定剂包括聚乙二醇类物质或壳聚糖、甲壳素、N-乙酰-D-氨基等药用高分子化合物，可以包裹蛋白质或多肽，免受其他物质的破坏，从而增强蛋白质或多肽的稳定性；
所述及的离子化合物是K+、Na+、Mg2+、PO4 3-、Cl-中任意两种阴离子与阳离子的组合，如NaCl，KCl等，可以辅助增强该杀菌制剂的稳定性，并可以调节其酸碱度，使之适用于不同部位的创面或黏膜。
所述及的聚乙二醇类物质包括是聚乙二醇400、聚乙二醇1000、聚乙二醇1500、聚乙二醇4000或聚乙二醇6000中的一种或一种以上。
为了增强该杀菌制剂杀菌力，扩大杀菌谱，还包括以制剂总重量计0-10％的杀菌剂。其中杀菌剂是指醋酸氯己定、抑菌肽或者有杀菌作用的中药提取物，如蒜头素、麝香草酚、儿茶酚、番茄碱、大黄素等。
该杀菌制剂还包括以制剂总重量计0-20％的麻黄素，麻黄素是平滑肌收缩剂，用于创面，可促进创面愈合；还可用于鼻腔，促进黏膜吸收。
按照本发明，优选的组份和重量百分比含量为：
溶葡萄球菌酶 0.0001-0.1％
溶菌酶 0.01-1％
蛋白质稳定剂 0.5-20％
离子化合物 0.6-10％
水 余量
优选的组份和重量百分比含量为：
溶葡萄球菌酶 0.0001-0.1％
溶菌酶 0.01-1％
蛋白质稳定剂 1-30％
离子化合物 0.6-20％
杀菌剂 0.01-10％
水 余量
优选的组份和重量百分比含量为：
溶葡萄球菌酶 0.0001-0.1％
溶菌酶 0.01-1％
蛋白质稳定剂 1-30％
离子化合物 0.6-20％
杀菌剂 0.01-10％
麻黄素 0.1-15％。
水 余量
本发明的制剂的制备方法可采用常规的物理混合，将各组分按比例混合，然后灌装于塑料或玻璃瓶中，入库，室温保存即可。
本发明提供的杀菌制剂不仅杀菌效果较溶葡萄球菌酶高得多，杀菌谱也明显扩大，对引起宠物皮肤、粘膜等感染的革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌均可达到很强的杀灭作用，而且对白色念珠菌等真菌也有很好的杀灭效果，同时对宠物比较娇嫩的皮肤和黏膜无任何刺激和毒副作用。
对400多株细菌进行了该制剂的抑杀菌实验。实验结果表明：对常见的金黄色葡萄球菌，表皮葡萄球菌、肺炎双球菌、D群肠球菌、四联球菌、产单核李斯特菌、链球菌以及胃幽门螺旋杆菌、大肠杆菌、绿脓杆菌等均有明显的抑杀作用。
纯溶葡萄球菌酶在常温下很不稳定，复配的溶葡萄球菌复合酶中含有多种我们筛选的稳定剂和增效剂，稳定性大为增强，使之可适用于工业化规模生产。
溶葡萄球菌酶和溶葡萄球菌复合酶酶活稳定性实验比较，经37℃保存3个月(相当于常温保存2年)，见表1、表2。
表1溶葡萄球菌酶37℃3个月放置前后酶活性比较
| 溶葡萄球菌酶放置前酶活性(U/mg) | 溶葡萄球菌酶37℃3个月放置后酶活性(U/mg) | 下降率(％) | |
| 1 | 566 | 301 | 46.8 |
| 2 | 568 | 299 | 47.3 |
| 3 | 560 | 290 | 48.2 |
| 平均值 | 47.4 |
表2溶葡萄球菌复合酶37℃3个月放置前后溶葡萄球菌酶活性比较
| 溶葡萄球菌复合酶放置前酶活性(U/g) | 溶葡萄球菌复合酶37℃3个月放置后酶活性(U/g) | 下降率(％) | |
| 1 | 1000 | 960 | 4.00 |
| 2 | 1020 | 967 | 5.20 |
| 3 | 1015 | 967 | 4.73 |
| 平均值 | 4.64 |
由上表可见溶葡萄球菌复合酶中的溶葡萄球菌酶酶活稳定性较纯溶葡萄球菌酶高。
实验还证明溶葡萄球菌复合酶制剂对耐药性菌株，如耐甲氧西林金黄色葡萄球菌，耐药性肺炎双球菌、嗜麦芽窄食单孢菌的杀灭效果更优于常用抗生素。
其基本特点为：
1.杀菌谱较溶葡萄球菌酶广。不仅能有效杀灭葡萄球菌、葡萄球菌、白色念珠菌、绿脓杆菌、大肠杆菌、肺炎双球菌、D群肠球菌、四联球菌、产单核李斯特菌、链球菌、厌氧菌、嗜麦芽窄食单孢菌等常见致病细菌，对淋球菌、胃幽门螺旋杆菌也有很强的杀灭作用。此外对一些耐药性细菌，如耐药性金黄色葡萄球菌、耐药性肺炎双球菌等也显示出极强的杀菌效果。
2.杀菌活性和稳定性大大高于溶葡萄球菌酶。由于溶葡萄球菌复合酶是以溶葡萄球菌酶为主要成分，配以溶菌酶、上述小分子化合物及稳定剂、增效剂等成分复合而成，比纯的溶葡萄球菌酶具有更大的稳定性，经测试证明，该产品在常温下可保存2年。
3.不易产生耐药性。作为主要活性成分的溶葡萄球菌酶和溶菌酶，具有独特的杀菌机理，溶葡萄球菌酶是通过专一性的切断胞壁肽聚糖中的甘氨酸键，达到快速杀死致病菌的效果；而溶菌酶则能作用于胞壁中的β-1，4糖苷键或β-1，3葡聚糖，使之断裂。两种酶以一定的比例进行复配，协同作用，双重裂解细菌细胞壁，因而细菌不易对其产生耐药性。
4.对机体无毒副作用。溶葡萄球菌酶和溶菌酶均为蛋白质产品，对皮肤和粘膜产生刺激，不对机体产生任何形式的毒副作用，并可通过代谢彻底降解，没有残留，不会富集。
本发明杀菌制剂可用于宠物的皮肤粘膜等部位的杀菌消毒用，可用于宠物烧伤、烫伤、抓伤、咬伤等创面的清洁消毒，并可用于外科、妇产科、泌尿科、口腔科等各种外科手术术前术后的清创和防治感染。并可用于宠物口腔、耳道和鼻部的清洁和消毒。
具体实施方式
实施例1
制造100克杀菌制剂
配比：
溶葡葡球菌酶 0.0015g
溶菌酶 0.2g
磷酸钾 0.2g
氯化钠 0.2g
甲壳素 2g
蒸馏水 97.4g
方法：在无菌室中，按上表所述称取每一组分，按比例依次加入洁净的玻璃或不锈钢盛具中，加入无菌蒸馏水，轻轻搅拌，充分混和均匀后，灌装于塑料或玻璃瓶中，入库，室温保存即可。
该制剂可用于用于宠物的皮肤粘膜消毒用，可在2-10分钟内杀灭皮肤、粘膜表面的淋球菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌、绿脓杆菌、大肠杆菌等，杀灭率达99.9％。可用于宠物烧伤、烫伤、抓伤、咬伤等创面的清洁消毒，均匀喷洒于患处，每天3～4次，以充分湿润患处为宜。并可用于外科、妇产科、泌尿科、口腔科等各种外科手术术前术后的清创和防止感染。
实施例2细菌定量杀灭试验
一、器材
1、试验菌株：白色念珠菌(ATCC10231)，大肠杆菌(8099)，金黄色葡萄球菌(ATCC6538)，绿脓杆菌(ATCC27853)。购自中国典型培养物保藏中心(CCTCC)。
2、试验材料：实施例一所配制的杀菌制剂
3、中和剂：0.5硫代硫酸钠、2％吐温-80、0.5％卵磷脂的PBS溶液
4、无菌硬水
5、稀释液：(TPS)
二、方法
1、检验依据：卫生部《消毒技术规范》(2002年版)2..1.1.7.4细菌定量杀灭试验
2、杀菌试验：试验温度21℃，试验重复3次。
三、对试验菌的杀灭效果
1、分别作用2.5min、5min和7.5min对白色念珠菌的平均杀灭对数值均＞5.00。
表3对白色念珠菌的杀灭效果
阴性对照无细菌生长。
2、对大肠杆菌的杀灭效果：
表4对大肠杆菌的杀灭效果
注：阳性对照组平均菌数及范围为7.10×105cfu/片(7.70-7.20×105cfu/片)
阴性对照组：中和剂、PBS、培养基无细菌生长。
3、对金黄色葡萄球菌的杀灭效果
表5对金黄色葡萄球菌的杀灭效果
注：阳性对照组平均菌数及范围为6.63×105cfu/片(6.50-6.80×105cfu/片)
阴性对照组：中和剂、PBS、培养基无细菌生长。
4、对绿脓杆菌的杀灭效果
表6对绿脓杆菌的杀灭效果
注：阳性对照组平均菌数及范围为1.23×106cfu/片(1.20-1.25×106cfu/片)
阴性对照组：中和剂、PBS、培养基无细菌生长。
实施例3
制造100克溶葡萄球菌复合酶制剂
配比：
溶葡葡球菌酶 0.001g
溶菌酶 0.2g
醋酸氯己定 0.01g
氯化钾 0.15g
氯化钠 0.15g
壳聚糖 1.5g
蒸馏水 97.99g
方法：在无菌室中，按上表所述称取每一组分，按比例依次加入洁净的玻璃或不锈钢盛具中，加入无菌蒸馏水轻轻搅拌，充分混和均匀后，灌装于塑料或玻璃瓶中，入库，室温保存即可。
该杀菌制剂可用于宠物口腔的清洁消毒，可治疗各类由细菌感染引起的口腔疾病、口臭等。可利用喷雾装置喷入宠物的口腔，或用棉球蘸取擦拭宠物包括齿龈的口内组织，一天2-3次，症状好转后，一天一次。
实施例4
制造100克溶葡萄球菌复合酶制剂
配比：
溶葡葡球菌酶 0.002g
溶菌酶 0.45g
麝香草酚 1.5g
磷酸钾 0.25g
氯化钠 0.25g
聚乙二醇 2g
蒸馏水 95.55g
方法：在无菌室中，按上表所述称取每一组分，按比例依次加入洁净的玻璃或不锈钢盛具中，加入无菌蒸馏水轻轻搅拌，充分混和均匀后，灌装于塑料或玻璃瓶中，入库，室温保存即可。
该杀菌制剂可用于宠物的耳道清洁和消毒，对于各种致病菌所引起的耳炎症、包括各类外耳道炎症等，每天一次，每次1-2滴。
实施例5
制造100克溶葡萄球菌复合酶制剂
配比：
溶葡葡球菌酶 0.002g
溶菌酶 0.45g
聚乙二醇 1.5g
麻黄素 0.5g
磷酸钾 0.25g
氯化钠 0.25g
水 97.05g
方法：在无菌室中，按上表所述称取每一组分，按比例依次加入洁净的玻璃或不锈钢盛具中，加入无菌蒸馏水轻轻搅拌，充分混和均匀后，灌装于塑料或玻璃瓶中，入库，室温保存即可。
该杀菌制剂可用于宠物鼻部细菌的清除，用于鼻部的清洁和消毒，每日1-2次，每次1-2滴。
Claims (10)
1.一种用于宠物的杀菌制剂，其特征在于，该制剂包括杀菌有效量的溶葡萄球菌酶和溶菌酶。
2.根据权利要求1所述的杀菌制剂，其特征在于，溶葡萄球菌酶与溶菌酶的重量百分比为：
溶葡萄球菌酶∶溶菌酶＝1∶100-300。
3.根据权利要求1或2所述的杀菌制剂，其特征在于，所述的溶葡萄球菌酶为野生类型、重组产生、突变异种或保留抗葡萄球菌细胞壁肽聚糖的含甘氨酸交联键的任何重组或有关的酶中的一种或一种以上；所述的溶菌酶为细菌胞壁溶解酶、酵母菌胞壁溶解酶、霉菌胞壁溶解酶中的一种或一种以上。
4.根据权利要求1或2所述的杀菌制剂，其特征在于，该制剂还包括以溶葡萄球菌酶和溶菌酶总重量计0.5-30％的蛋白质稳定剂和0.6-20％的离子化合物；蛋白质稳定剂为聚乙二醇类物质或壳聚糖、甲壳素、N-乙酰-D-氨基中的一种或一种以上；离子化合物为K+、Na+、Mg2+、PO4 3-、Cl-中任意两种阴离子与阳离子的组合。
5.根据权利要求1或2所述的杀菌制剂，其特征在于，该制剂还包括以溶葡萄球菌酶和溶菌酶总重量计0-10％的杀菌剂；杀菌剂为醋酸氯己定、抑菌肽、蒜头素、麝香草酚、儿茶酚、番茄碱或大黄素中的一种或一种以上。
6.根据权利要求1或2所述的杀菌制剂，其特征在于，该制剂还包括以溶葡萄球菌酶和溶菌酶总重量计0-15％的麻黄素。
7.一种如权利要求1或2所述的用于宠物的杀菌制剂，其特征在于该制剂的组份和重量百分比含量如下：
溶葡萄球菌酶 0.0001-0.1％
溶菌酶 0.01-1％
蛋白质稳定剂 0.5-20％
离子化合物 0.6-10％
水 余量。
8.一种用于宠物的杀菌制剂，其特征在于该制剂的组份和重量百分比含量如下：
溶葡萄球菌酶 0.0001-0.1％
溶菌酶 0.01-1％
蛋白质稳定剂 1-30％
离子化合物 0.6-20％
杀菌剂 0.01-10％
水 余量。
9.一种用于宠物的杀菌制剂，其特征在于该制剂的组份和重量百分比含量如下：
溶葡萄球菌酶 0.0001-0.1％
溶菌酶 0.01-1％
蛋白质稳定剂 1-30％
离子化合物 0.6-20％
杀菌剂 0.01-10％
麻黄素 0.1-15％。
水 余量。
10.一种如权利要求1～9任一项所述的用于宠物的杀菌制剂的制备方法，其特征在于将各组分按比例混合。
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