CN105087729B - 一种金枪鱼鱼骨胶原蛋白肽的制备方法 - Google Patents
一种金枪鱼鱼骨胶原蛋白肽的制备方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及一种金枪鱼鱼骨胶原蛋白肽的制备方法，将金枪鱼鱼骨粉碎后进行预处理，然后加入添加剂制成胶原蛋白，最后酶解而制得。本发明的制备方法生产周期短，得率高，产品纯度高，去除了苦腥味，口感好，并利于人体吸收；为补硒保健食品与药物开发提供了一种技术支持，同时也为金枪鱼鱼骨的高值化利用提供了一条新思路。
Description
技术领域
本发明属于水产品精深加工技术领域，尤其涉及一种提高纯度与提取率，去除苦腥味、提高口感、利于人体吸收的金枪鱼鱼骨胶原蛋白源硒螯合胶原肽的制备方法。
背景技术
金枪鱼（Tunas）又叫鲔鱼、吞拿鱼，属鲈形目鲭科，作为一种深海鱼类，金枪鱼不仅肉味鲜美，而且营养价值非常高，富含蛋白质，不饱和脂肪酸和维生素，以纯天然，营养价值高而享誉国际市场。金枪鱼的主要加工种类有蓝鳍金枪鱼，长鳍金枪鱼，黄鳍金枪鱼和大眼金枪鱼。浙江省是我国金枪鱼加工中心，拥有全国最大的金枪鱼加工基地，金枪鱼除了鲜销外，其加工产品的附加值非常高，一般经过冷冻处理用于制作寿司及罐装食品。金枪鱼在加工过程中占总重量25-30%的鱼骨多数加工成鱼骨粉或者作为废弃物丢掉，浪费了宝贵的渔业资源。
胶原肽以其在医药、保健品、食品和化妆品等应用上的独特功效被越来越多的消费者所青睐，使其成为食品行业和保健品行业、日化行业所竞相关注的焦点。硒有抗癌作用、抗氧化作用，能够增强人体免疫力，科学界研究发现，血硒水平的高低与癌的发生息息相关。大量的调查资料说明，一个地区食物和土壤中硒含量的高低与癌症的发病率有直接关系，例如：此地区的食物和土壤中的硒含量高，癌症的发病率和死亡率就低，反之，这个地区的癌症发病率和死亡率就高，事实说明硒与癌症的发生有着密切关系。同时科学界也认识到硒具有预防癌症作用，是人体微量元素的“防癌之王”。
发明内容
本发明的目的在于为了解决金枪鱼在加工过程中占总重量25-30%的鱼骨多数加工成鱼骨粉或者作为废弃物丢掉，浪费了宝贵的渔业资源的缺陷而提供一种提高纯度与提取率，去除苦腥味、提高口感、利于人体吸收的金枪鱼鱼骨胶原蛋白肽的制备方法。
为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：
一种金枪鱼鱼骨胶原蛋白肽的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：
a）清理金枪鱼鱼骨上面的鱼肉及污物后清洗、干燥，粗粉碎至2-3cm的颗粒，将鱼骨颗粒浸入浸泡液中，温度45-55℃，浸泡时间3-6h，捞出沥干后超微粉粹至粒径5-10μm的鱼骨粉末，-10℃下保存备用；
b）将步骤a）得到的鱼骨粉末加入至1-3mol/L的乙酸溶液中，并加热至55-65℃，超声震荡3-5h，13000-15000r/min离心15min后取上清液，加入添加剂，静置2-4h后15000r/min离心15min得到沉淀物，沉淀物干燥后在-20℃下保存10-12h，得到鱼骨胶原蛋白；
c）向步骤c）得到的鱼骨胶原蛋白中加入去离子水，调节pH至1.3-2.3，加入复合酶A，酶解反应1-2h后灭酶活，然后调节pH至7.5-8.5，加入复合酶B，酶解反应5-6h，得到酶解产物；
d）将步骤c）得到的酶解产物采用2200Da超滤膜进行超滤处理，收集分子量小于2200Da部分，得到超滤酶解液；玻璃吸附柱中装填质量比为4:3的活性炭与纳米银，超滤酶解液以100-120mL/min的流速进行循环层析，层析次数5-15次，然后以12000-15000r/min离心2-4min，收集上清液，喷雾干燥得到金枪鱼鱼骨胶原蛋白肽。
在本技术方案中，本发明以金枪鱼鱼骨为原材料，原料来源广，工艺步骤简单，克服了胶原蛋白传统工艺缺点产品的生产周期长、酶解液除杂不彻底、成品具有苦腥味、口感差、产品分子量分布广，不利于人体吸收的缺点，本发明的制备方法生产周期短，得率高，产品纯度高，去除了苦腥味，口感好，并利于人体吸收。
作为优选，步骤a）中浸泡液由以下重量份的原料组成：橘子皮45-50份、山楂20-25份、胡萝卜14-26份、野菊花1-5份、茶叶30-40份、壳聚糖15-18份、海藻酸钠12-15份与水200-350份，鱼骨颗粒与浸泡液的质量比为1:10。在本技术方案中，浸泡液主要是为了去除苦腥味。
作为优选，步骤b）中添加剂由以下重量份的原料组成：食盐3-5份、果糖5-7份、富硒酵母3-10份、天冬酰胺10-15份、蛋氨酸12-15份，添加剂的加入量为鱼骨粉末质量的4-6倍，鱼骨粉末与乙酸溶液的料液比为1g：40mL。在本技术方案中，硒有抗癌作用、抗氧化作用，能够增强人体免疫力，科学界研究发现，血硒水平的高低与癌的发生息息相关。大量的调查资料说明，一个地区食物和土壤中硒含量的高低与癌症的发病率有直接关系，例如：此地区的食物和土壤中的硒含量高，癌症的发病率和死亡率就低，反之，这个地区的癌症发病率和死亡率就高，事实说明硒与癌症的发生有着密切关系。同时科学界也认识到硒具有预防癌症作用，是人体微量元素的“防癌之王”。
作为优选，步骤d）中活性炭的粒度为400目、比表面积1450㎡。
作为优选，循环层析时在外部施加磁场，磁场的强度为0.2-1.8T。
作为优选，步骤c）中复合酶A为胃蛋白酶与胰蛋白酶的混合物，质量比为1:1.2，复合酶B为风味蛋白酶与菠萝蛋白酶的混合物，质量比为2.7:1，复合酶A的加入量为金枪鱼浆料重量的0.2-0.7%，复合酶B的加入量为第一次得到的上清液质量的0.5-0.9%。
作为优选，浸泡液制备时，先将水加热至65℃，加入橘子皮、山楂、胡萝卜、野菊花与茶叶，继续加热至水沸腾5次后降温到45-55℃，然后加入壳聚糖与海藻酸钠而制得。
作为优选，步骤b）中超声波功率为55-65kw。
本发明的有益效果是：本发明的制备方法生产周期短，得率高，产品纯度高，去除了苦腥味，口感好，并利于人体吸收；为补硒保健食品与药物开发提供了一种技术支持，同时也为金枪鱼鱼骨的高值化利用提供了一条新思路。
具体实施方式
以下结合具体实施例，对本发明作进一步的解释：
若未特指，其工艺为现有工艺；本发明所用原料均可从市场购得。
富硒酵母购自武汉能仁医药化工有限公司；胰蛋白酶，胃蛋白酶购自国药集团化学试剂有限公司；风味蛋白酶、菠萝蛋白酶购自广西南宁庞博生物工程有限公司。
实施例1
一种金枪鱼鱼骨胶原蛋白肽的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：
a）清理金枪鱼鱼骨上面的鱼肉及污物后清洗、干燥，粗粉碎至2-3cm的颗粒，将鱼骨颗粒浸入浸泡液中，温度45℃，浸泡时间3h，捞出沥干后超微粉粹至粒径5-10μm的鱼骨粉末，-10℃下保存备用；其中，浸泡液由以下重量份的原料组成：橘子皮45份、山楂20份、胡萝卜14份、野菊花1份、茶叶30份、壳聚糖15份、海藻酸钠12份与水200份，鱼骨颗粒与浸泡液的质量比为1:10；浸泡液制备时，先将水加热至65℃，加入橘子皮、山楂、胡萝卜、野菊花与茶叶，继续加热至水沸腾5次后降温到45℃，然后加入壳聚糖与海藻酸钠而制得；
b）将步骤a）得到的鱼骨粉末加入至1mol/L的乙酸溶液中，并加热至55℃，超声震荡3h，13000r/min离心15min后取上清液，加入添加剂，静置2h后15000r/min离心15min得到沉淀物，沉淀物干燥后在-20℃下保存10h，得到鱼骨胶原蛋白；其中，添加剂由以下重量份的原料组成：食盐3份、果糖5份、富硒酵母3份、天冬酰胺10份、蛋氨酸12份，添加剂的加入量为鱼骨粉末质量的4倍，鱼骨粉末与乙酸溶液的料液比为1g：40mL；超声波功率为55kw；
c）向步骤c）得到的鱼骨胶原蛋白中加入去离子水，调节pH至1.3，加入复合酶A，酶解反应1h后灭酶活，然后调节pH至7.5，加入复合酶B，酶解反应5h，得到酶解产物；其中，复合酶A为胃蛋白酶与胰蛋白酶的混合物，质量比为1:1.2，复合酶B为风味蛋白酶与菠萝蛋白酶的混合物，质量比为2.7:1，复合酶A的加入量为金枪鱼浆料重量的0.2%，复合酶B的加入量为第一次得到的上清液质量的0.5%；
d）将步骤c）得到的酶解产物采用2200Da超滤膜进行超滤处理，收集分子量小于2200Da部分，得到超滤酶解液；玻璃吸附柱中装填质量比为4:3的活性炭与纳米银，超滤酶解液以100mL/min的流速进行循环层析，层析次数5次，然后以12000r/min离心2min，收集上清液，喷雾干燥得到金枪鱼鱼骨胶原蛋白肽。其中，活性炭的粒度为400目、比表面积1450㎡；循环层析时在外部施加磁场，磁场的强度为0.2T。金枪鱼鱼骨胶原蛋白肽的得率92%，纯度75%。
实施例2
一种金枪鱼鱼骨胶原蛋白肽的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：
a）清理金枪鱼鱼骨上面的鱼肉及污物后清洗、干燥，粗粉碎至2-3cm的颗粒，将鱼骨颗粒浸入浸泡液中，温度50℃，浸泡时间4.5h，捞出沥干后超微粉粹至粒径5-10μm的鱼骨粉末，-10℃下保存备用；其中，浸泡液由以下重量份的原料组成：橘子皮48份、山楂23份、胡萝卜18份、野菊花3份、茶叶35份、壳聚糖16份、海藻酸钠13份与水285份，鱼骨颗粒与浸泡液的质量比为1:10；浸泡液制备时，先将水加热至65℃，加入橘子皮、山楂、胡萝卜、野菊花与茶叶，继续加热至水沸腾5次后降温到50℃，然后加入壳聚糖与海藻酸钠而制得；
b）将步骤a）得到的鱼骨粉末加入至2mol/L的乙酸溶液中，并加热至60℃，超声震荡4h，14000r/min离心15min后取上清液，加入添加剂，静置3h后15000r/min离心15min得到沉淀物，沉淀物干燥后在-20℃下保存11h，得到鱼骨胶原蛋白；其中，添加剂由以下重量份的原料组成：食盐4份、果糖6份、富硒酵母6份、天冬酰胺12份、蛋氨酸13份，添加剂的加入量为鱼骨粉末质量的5倍，鱼骨粉末与乙酸溶液的料液比为1g：40mL；超声波功率为60kw；
c）向步骤c）得到的鱼骨胶原蛋白中加入去离子水，调节pH至1.8，加入复合酶A，酶解反应1.5h后灭酶活，然后调节pH至7.9，加入复合酶B，酶解反应5.5h，得到酶解产物；其中，复合酶A为胃蛋白酶与胰蛋白酶的混合物，质量比为1:1.2，复合酶B为风味蛋白酶与菠萝蛋白酶的混合物，质量比为2.7:1，复合酶A的加入量为金枪鱼浆料重量的0.55%，复合酶B的加入量为第一次得到的上清液质量的0.63%；
d）将步骤c）得到的酶解产物采用2200Da超滤膜进行超滤处理，收集分子量小于2200Da部分，得到超滤酶解液；玻璃吸附柱中装填质量比为4:3的活性炭与纳米银，超滤酶解液以110mL/min的流速进行循环层析，层析次数10次，然后以14000r/min离心3min，收集上清液，喷雾干燥得到金枪鱼鱼骨胶原蛋白肽。其中，活性炭的粒度为400目、比表面积1450㎡；循环层析时在外部施加磁场，磁场的强度为1.8T。金枪鱼鱼骨胶原蛋白肽的得率93%，纯度81%。
实施例3
一种金枪鱼鱼骨胶原蛋白肽的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：
a）清理金枪鱼鱼骨上面的鱼肉及污物后清洗、干燥，粗粉碎至2-3cm的颗粒，将鱼骨颗粒浸入浸泡液中，温度55℃，浸泡时间6h，捞出沥干后超微粉粹至粒径5-10μm的鱼骨粉末，-10℃下保存备用；其中，浸泡液由以下重量份的原料组成：橘子皮50份、山楂25份、胡萝卜26份、野菊花5份、茶叶40份、壳聚糖18份、海藻酸钠15份与水350份，鱼骨颗粒与浸泡液的质量比为1:10；浸泡液制备时，先将水加热至65℃，加入橘子皮、山楂、胡萝卜、野菊花与茶叶，继续加热至水沸腾5次后降温到55℃，然后加入壳聚糖与海藻酸钠而制得；
b）将步骤a）得到的鱼骨粉末加入至3mol/L的乙酸溶液中，并加热至65℃，超声震荡5h， 15000r/min离心15min后取上清液，加入添加剂，静置2-4h后15000r/min离心15min得到沉淀物，沉淀物干燥后在-20℃下保存12h，得到鱼骨胶原蛋白；其中，添加剂由以下重量份的原料组成：食盐5份、果糖7份、富硒酵母10份、天冬酰胺15份、蛋氨酸15份，添加剂的加入量为鱼骨粉末质量的6倍，鱼骨粉末与乙酸溶液的料液比为1g：40mL；超声波功率为65kw；
c）向步骤c）得到的鱼骨胶原蛋白中加入去离子水，调节pH至2.3，加入复合酶A，酶解反应2h后灭酶活，然后调节pH至8.5，加入复合酶B，酶解反应6h，得到酶解产物；其中，复合酶A为胃蛋白酶与胰蛋白酶的混合物，质量比为1:1.2，复合酶B为风味蛋白酶与菠萝蛋白酶的混合物，质量比为2.7:1，复合酶A的加入量为金枪鱼浆料重量的0.7%，复合酶B的加入量为第一次得到的上清液质量的0.9%；
d）将步骤c）得到的酶解产物采用2200Da超滤膜进行超滤处理，收集分子量小于2200Da部分，得到超滤酶解液；玻璃吸附柱中装填质量比为4:3的活性炭与纳米银，超滤酶解液以120mL/min的流速进行循环层析，层析次数15次，然后以15000r/min离心4min，收集上清液，喷雾干燥得到金枪鱼鱼骨胶原蛋白肽。其中，活性炭的粒度为400目、比表面积1450㎡；循环层析时在外部施加磁场，磁场的强度为1.8T。金枪鱼鱼骨胶原蛋白肽的得率94%，纯度82%。
Claims (5)
1.一种金枪鱼鱼骨胶原蛋白肽的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：
a）清理金枪鱼鱼骨上面的鱼肉及污物后清洗、干燥，粗粉碎至2-3cm的颗粒，将鱼骨颗粒浸入浸泡液中，温度45-55℃，浸泡时间3-6h，捞出沥干后超微粉粹至粒径5-10μm的鱼骨粉末，-10℃下保存备用；
b）将步骤a）得到的鱼骨粉末加入至1-3mol/L的乙酸溶液中，并加热至55-65℃，超声震荡3-5h，13000-15000r/min离心15min后取上清液，加入添加剂，静置2-4h后15000r/min离心15min得到沉淀物，沉淀物干燥后在-20℃下保存10-12h，得到鱼骨胶原蛋白；添加剂由以下重量份的原料组成：食盐3-5份、果糖5-7份、富硒酵母3-10份、天冬酰胺10-15份、蛋氨酸12-15份，添加剂的加入量为鱼骨粉末质量的4-6倍，鱼骨粉末与乙酸溶液的料液比为1g：40mL；
c）向步骤b）得到的鱼骨胶原蛋白中加入去离子水，调节pH至1.3-2.3，加入复合酶A，酶解反应1-2h后灭酶活，然后调节pH至7.5-8.5，加入复合酶B，酶解反应5-6h，得到酶解产物；复合酶A为胃蛋白酶与胰蛋白酶的混合物，质量比为1:1.2，复合酶B为风味蛋白酶与菠萝蛋白酶的混合物，质量比为2.7:1，复合酶A的加入量为金枪鱼浆料重量的0.2-0.7%，复合酶B的加入量为第一次得到的上清液质量的0.5-0.9%；
d）将步骤c）得到的酶解产物采用2200Da超滤膜进行超滤处理，收集分子量小于2200Da部分，得到超滤酶解液；玻璃吸附柱中装填质量比为4:3的活性炭与纳米银，超滤酶解液以100-120mL/min的流速进行循环层析，层析次数5-15次，循环层析时在外部施加磁场，磁场的强度为0.2-1.8T；然后以12000-15000r/min离心2-4min，收集上清液，喷雾干燥得到金枪鱼鱼骨胶原蛋白肽。
2.根据权利要求1所述的一种金枪鱼鱼骨胶原蛋白肽的制备方法，其特征在于，步骤a）中浸泡液由以下重量份的原料组成：橘子皮45-50份、山楂20-25份、胡萝卜14-26份、野菊花1-5份、茶叶30-40份、壳聚糖15-18份、海藻酸钠12-15份与水200-350份，鱼骨颗粒与浸泡液的质量比为1:10。
3.根据权利要求1所述的一种金枪鱼鱼骨胶原蛋白肽的制备方法，其特征在于，步骤d）中活性炭的粒度为400目，比表面积1450㎡。
4.根据权利要求2所述的一种金枪鱼鱼骨胶原蛋白肽的制备方法，其特征在于，浸泡液制备时，先将水加热至65℃，加入橘子皮、山楂、胡萝卜、野菊花与茶叶，继续加热至水沸腾5次后降温到45-55℃，然后加入壳聚糖与海藻酸钠而制得。
5.根据权利要求1所述的一种金枪鱼鱼骨胶原蛋白肽的制备方法，其特征在于，步骤b）中超声波功率为55-65kw。
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| Date | Code | Title | Description |
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| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
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| TR01 | Transfer of patent right |
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