CN112341537B - 一种鱼骨胶原蛋白肽的制备方法及应用 - Google Patents
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Abstract
本发明属于胶原蛋白肽制备术领域，具体涉及一种鱼骨胶原蛋白肽的制备方法及应用。本发明提供的鱼骨胶原蛋白肽的制备方法通过采用混合酸溶液浸泡，接着进行超声处理，冷冻，然后经两次酶解、辐照处理后即得。本发明提供的制备方法制得的鱼骨胶原蛋白肽分子量分布集中在1000Da之内，并且水解度高，抗氧化性能好，能有效增加动物对于胶原蛋白的吸收，提高动物的免疫力和抗病能力。
Description
技术领域
本发明属于胶原蛋白肽制备术领域，具体涉及一种鱼骨胶原蛋白肽的制备方法及应用。
背景技术
胶原蛋白，也称胶原，是细胞外基质的一种结构蛋白质，英文名“collagen”，由希腊文演化而来，多糖蛋白，呈白色，含有少量的半乳糖和葡萄糖，是细胞外基质(ECM)的主要成分，约占胶原纤维固体物的85％。胶原蛋白是动物体中普遍存在的一种大分子蛋白，主要存在于动物的结缔组织(骨、软骨、皮肤、腱、韧等)中，是哺乳动物体内含量最多、分布最广的功能性蛋白，占哺乳动物体内蛋白质的25％～30％，相当于体重的6％。在许多海洋生物，如鱼类的皮，占其蛋白质含量甚至高达80％以上。胶原蛋白体内水解后的一些特殊肽链片段，具有免疫增强剂功效，起到抑制和杀灭病菌和病毒的作用及保健作用。
蛋白质为动物的主要营养物质，饲料配方中都含有一定比例的蛋白质，这些蛋白质成分在动物体内真正被利用的程度也不同，蛋白质生物价越高，蛋白质利用率也越高。一般来说动物蛋白的生物价要高于植物蛋白，但动物蛋白的价格也高于植物蛋白。我国动物蛋白原料资源非常短缺，大多依赖进口。优质动物源性蛋白的价格不断攀升，已严重影响到我国养殖业的利润水平。胶原蛋白粉可作为一种动物源性蛋白营养添加剂，替代或部分替代鱼粉、豆粕，用于混合、配合饲料的生产。
然而，采用猪和牛皮、骨明胶为原料提取胶原多肽技术的要求虽然不高，在明胶的生产中对环境的污染也很大，属于二次水解加工产品。由于受疯牛病、口蹄疫的影响。欧美、日本等发达国家已经立法禁止利用牛皮生产胶原蛋白。我国水产品综合利用的潜力巨大，然而鱼加工后下脚料及其他副料并没有充分回收利用。鱼骨主要成分为钙和胶原蛋白，鱼骨蛋白质含量约为15％，生物学效用较高。
中国专利CN 105087729 B公开了一种金枪鱼鱼骨胶原蛋白肽的制备方法，：将金枪鱼鱼骨粉碎后进行预处理，然后加入添加剂制成胶原蛋白，最后酶解而制得。该方法虽然生产周期短，得率高，解决了不能规模化、产业化生产的瓶颈问题，但是发明的胶原蛋白产率高，但是其得到的胶原蛋白肽的分子量很难集中在100～1000Da之间，导致胶原蛋白产品分子区段不严格，不集中，大分子蛋白与小分子蛋白共同存在，而导致吸收利用率较低等问题。
因此，亟需研发出一种可以使制得的产品分子量分布集中的鱼骨胶原蛋白制备方法，应用于饲料添加剂领域，能够为禽畜提供有效的营养物质，提高禽畜免疫力和抗病能力。
发明内容
为了解决现有技术中存在的问题，本发明的目的在于提供一种鱼骨胶原蛋白肽的制备方法及应用。本发明提供的制备方法制得的鱼骨胶原蛋白肽分子量分布集中在1000Da之内，并且水解度高，抗氧化性能好，应用于饲料添加剂中能有效增加动物对于胶原蛋白的吸收，提高动物的免疫力和抗病能力。
本发明的技术方案是：
一种鱼骨胶原蛋白肽的制备方法，包括以下步骤：
S1、去除鱼骨表面的碎肉，洗净，然后加入其质量5～8倍的0.1mol/L的NaOH溶液浸泡3～6h，取出后烘干，然后粉碎过40～60目筛，得鱼骨粉；
S2、向步骤S1中所得的与鱼骨粉中加入其重量6～10倍的混合酸溶液，搅拌均匀，浸泡2～3h，并加热至45～60℃，超声震荡2-5h，10000～16000r/min离心15～20min后取上清液，将上清液干燥后在-4～-10℃下保存10～12h，得沉淀物；
S3、向步骤S2所得沉淀物中加入8～15倍的水，调节pH至3.5～5.0，加入胃蛋白酶于30～40℃下，酶解反应1～2h后，再加入复合风味蛋白酶，于温度45～50℃酶解1～3h；两次酶解后，升温至80℃进行酶灭活10min，冷却至28℃，得酶解液；
S4、向步骤S3所得的酶解液中加入保护剂，静置2～4h后置于辐照反应器中，在常温常压下进行辐照处理，然后经过滤，将滤液浓缩、干燥，得鱼骨胶原蛋白肽。
进一步地，所述步骤S2中的混合酸溶液为0.3～1.0mol/L的柠檬酸溶液和0.2～0.8mol/L的乙酸溶液按质量比1～4:7～10组成。
更进一步地，所述步骤S2中的混合酸溶液为0.8mol/L的柠檬酸溶液和0.5mol/L的乙酸溶液按质量比3:8组成。
进一步地，所述步骤S2中的超声功率为50～70kw。
进一步地，所述步骤S3中加入胃蛋白酶的量为加入沉淀物质量的0.1～0.5％；所述步骤S3加入复合风味蛋白酶量为加入沉淀物质量的0.1～0.3％。
更进一步地，所述步骤S3中加入胃蛋白酶的量为加入沉淀物质量的0.3％；所述步骤S3加入复合风味蛋白酶量为加入沉淀物质量的0.2％。
进一步地，所述步骤S3中进行辐照处理时所用辐照源为60Co-γ射线，辐照剂量为1.0～6.0kGy，辐照剂量率为0.6kGy/h。
进一步地，所述保护剂为D-异抗坏血酸钠和鼠尾草酚按重量比7:1～3组成。
更进一步地，所述保护剂为D-异抗坏血酸钠和鼠尾草酚按重量比7:2组成。
另外，本发明还提供了一种所述的鱼骨胶原蛋白肽在禽畜饲料中的应用。
本发明中，通过向鱼骨中加入混合酸溶液，由柠檬酸和乙酸按照一定比例组成，二者相互协同作用，在脱钙的同时，还能够促进鱼骨胶原蛋白肽的提取，增强鱼骨胶原蛋白肽的水解度；之后再经超声、冷冻处理，可以将鱼骨中的分子结构打开，使功能区的片段和酶作用位点充分暴露出来，增强其分子间的结合力，从而提高其功能特性和水解度，活化了鱼骨粉内的蛋白质、多糖等生物大分子，还可以增强鱼骨胶原蛋白肽的水溶性，有利于后续两次酶解反应的进行。
进一步地，通过控制加入酶的种类、次数、酶解时间、酶解pH、温度等条件，能够将进一步提高鱼骨胶原蛋白肽的水解度，并且制得的鱼骨胶原蛋白肽粉的分子量主要集中在1000Da之内，分子量为1000Da以下的胶原蛋白肽比例达到了90％以上，均一性好。最后，向本发明的制得中加入的由D-异抗坏血酸钠和鼠尾草酚按一定质量比组成的保护剂，可以避免后续辐照过程中对于鱼骨胶原蛋白肽链上的活性基团的破坏，同时还能够有效提高制得的鱼骨胶原蛋白肽的抗氧化性能，将其应用在饲料产业更有利于动物对于饲料产品的吸收，并且能够提高动物的抗病能力和免疫能力。
与现有技术相比，本发明提供的鱼骨胶原蛋白肽的制备方法具有以下优势：
(1)本发明提供的鱼骨胶原蛋白肽的制备方法，能够开发一种将废弃鱼骨有效的利用起来，提取出其中胶原蛋白肽的方法，不仅解决了鱼骨丢弃的造成的环境问题，更是变废为宝，有利于资源的循环利用。
(2)本发明提供的鱼骨胶原蛋白肽的制备方法所制得的产品的分子量分布窄，分子量低，并且水解度较高，抗氧化性能好，应用于饲料添加剂中能有效增加动物对于胶原蛋白的吸收，提高动物的免疫力和抗病能力。
具体实施方式
以下通过具体实施方式的描述对本发明作进一步说明，但这并非是对本发明的限制，本领域技术人员根据本发明的基本思想，可以做出各种修改或改进，但是只要不脱离本发明的基本思想，均在本发明的保护范围之内。
胃蛋白酶(货号P816235-25g)购自上海麦克林生化科技有限公司；
复合风味蛋白酶(CAS编号：74-79-3)购自江苏采薇生物科技有限公司。
本发明所用的其他试剂均为常用试剂，均可在常规试剂生产销售公司购买。
实施例1一种鱼骨胶原蛋白肽的制备方法
一种鱼骨胶原蛋白肽的制备方法，包括以下步骤：
S1、去除鱼骨表面的碎肉，洗净，然后加入其质量5倍的0.1mol/L的NaOH溶液浸泡3h，取出后烘干，然后粉碎过40目筛，得鱼骨粉；
S2、向步骤S1中所得的与鱼骨粉中加入其重量6倍的混合酸溶液，搅拌均匀，浸泡2h，并加热至45℃，超声震荡2h，超声功率为50kw；然后10000r/min离心15min后取上清液，将上清液干燥后在-10℃下保存10h，得沉淀物；
S3、向步骤S2所得沉淀物中加入8倍的水，调节pH至3.5，加入胃蛋白酶于30℃下，酶解反应1h后，再加入复合风味蛋白酶，于温度45℃酶解1h；两次酶解后，升温至80℃进行酶灭活10min，冷却至28℃，得酶解液；
S4、向步骤S3所得的酶解液中加入保护剂，静置2h后置于辐照反应器中，在常温常压下进行辐照处理，然后经过滤，将滤液浓缩、干燥，得鱼骨胶原蛋白肽。
所述步骤S2中的混合酸溶液为0.3mol/L的柠檬酸溶液和0.2mol/L的乙酸溶液按质量比1:10组成。
所述步骤S3中加入胃蛋白酶的量为加入沉淀物质量的0.1％；所述步骤S3加入复合风味蛋白酶量为加入沉淀物质量的0.1％。
所述步骤S3中进行辐照处理时所用辐照源为60Co-γ射线，辐照剂量为1.0kGy，辐照剂量率为0.6kGy/h。
所述保护剂为D-异抗坏血酸钠和鼠尾草酚按重量比7:3组成。
实施例2一种鱼骨胶原蛋白肽的制备方法
一种鱼骨胶原蛋白肽的制备方法，包括以下步骤：
S1、去除鱼骨表面的碎肉，洗净，然后加入其质量6倍的0.1mol/L的NaOH溶液浸泡5h，取出后烘干，然后粉碎过50目筛，得鱼骨粉；
S2、向步骤S1中所得的与鱼骨粉中加入其重量8倍的混合酸溶液，搅拌均匀，浸泡2.5h，并加热至55℃，超声震荡3h，超声功率为60kw；然后13000r/min离心18min后取上清液，将上清液干燥后在-8℃下保存11h，得沉淀物；
S3、向步骤S2所得沉淀物中加入12倍的水，调节pH至4.5，加入胃蛋白酶于35℃下，酶解反应1.5h后，再加入复合风味蛋白酶，于温度48℃酶解2h；两次酶解后，升温至80℃进行酶灭活10min，冷却至28℃，得酶解液；
S4、向步骤S3所得的酶解液中加入保护剂，静置3h后置于辐照反应器中，在常温常压下进行辐照处理，然后经过滤，将滤液浓缩、干燥，得鱼骨胶原蛋白肽。
所述步骤S2中的混合酸溶液为0.8mol/L的柠檬酸溶液和0.5mol/L的乙酸溶液按质量比3:8组成。
所述步骤S3中加入胃蛋白酶的量为加入沉淀物质量的0.3％；所述步骤S3加入复合风味蛋白酶量为加入沉淀物质量的0.2％。
所述步骤S3中进行辐照处理时所用辐照源为60Co-γ射线，辐照剂量为4.0kGy，辐照剂量率为0.6kGy/h。
所述保护剂为D-异抗坏血酸钠和鼠尾草酚按重量比7:2组成。
实施例3一种鱼骨胶原蛋白肽的制备方法
一种鱼骨胶原蛋白肽的制备方法，包括以下步骤：
S1、去除鱼骨表面的碎肉，洗净，然后加入其质量8倍的0.1mol/L的NaOH溶液浸泡6h，取出后烘干，然后粉碎过60目筛，得鱼骨粉；
S2、向步骤S1中所得的与鱼骨粉中加入其重量10倍的混合酸溶液，搅拌均匀，浸泡3h，并加热至60℃，超声震荡5h，超声功率为70kw；然后16000r/min离心20min后取上清液，将上清液干燥后在-4℃下保存12h，得沉淀物；
S3、向步骤S2所得沉淀物中加入15倍的水，调节pH至5.0，加入胃蛋白酶于40℃下，酶解反应2h后，再加入复合风味蛋白酶，于温度50℃酶解3h；两次酶解后，升温至80℃进行酶灭活10min，冷却至28℃，得酶解液；
S4、向步骤S3所得的酶解液中加入保护剂，静置4h后置于辐照反应器中，在常温常压下进行辐照处理，然后经过滤，将滤液浓缩、干燥，得鱼骨胶原蛋白肽。
所述步骤S2中的混合酸溶液为1.0mol/L的柠檬酸溶液和0.8mol/L的乙酸溶液按质量比4:7组成。
所述步骤S3中加入胃蛋白酶的量为加入沉淀物质量的0.5％；所述步骤S3加入复合风味蛋白酶量为加入沉淀物质量的0.3％。
所述步骤S3中进行辐照处理时所用辐照源为60Co-γ射线，辐照剂量为6.0kGy，辐照剂量率为0.6kGy/h。
所述保护剂为D-异抗坏血酸钠和鼠尾草酚按重量比7:1组成。
对比例1一种鱼骨胶原蛋白肽的制备方法
与实施例2的相比，对比例1的区别在于，所述步骤S2中用0.8mol/L的柠檬酸溶液替代混合酸溶液，其他参数和操作与实施例2相同。
对比例2一种鱼骨胶原蛋白肽的制备方法
与实施例2的相比，对比例2的区别在于，所述步骤S2中用0.5mol/L的乙酸溶液替代混合酸溶液，其他参数和操作与实施例2相同。
对比例3一种鱼骨胶原蛋白肽的制备方法
与实施例2的相比，对比例3的区别在于，所述步骤S4中的保护剂中未添加鼠尾草酚，其他参数和操作与实施例2相同。
对比例4一种鱼骨胶原蛋白肽的制备方法
与实施例2的相比，对比例4的区别在于，所述步骤S4中的保护剂为D-异抗坏血酸钠和鼠尾草酚按重量比1:1组成，其他参数和操作与实施例2相同。
对比例5一种鱼骨胶原蛋白肽的制备方法
一种鱼骨胶原蛋白肽的制备方法，包括以下步骤：
S1、去除鱼骨表面的碎肉，洗净，然后加入其质量6倍的0.1mol/L的NaOH溶液浸泡5h，取出后烘干，然后粉碎过50目筛，得鱼骨粉；
S2、向步骤S1中所得的与鱼骨粉中加入其重量8倍的混合酸溶液，搅拌均匀，浸泡2.5h，并加热至55℃，超声震荡3h，超声功率为60kw；然后13000r/min离心18min后取上清液，干燥，得沉淀物；
S3、将步骤S2所得沉淀物中加入12倍的水，调节pH至4.5，加入胃蛋白酶于35℃下，酶解反应1.5h后，再加入复合风味蛋白酶，于温度48℃酶解2h；两次酶解后，升温至80℃进行酶灭活10min，冷却至28℃，得酶解液；
S4、向步骤S3所得的酶解液中加入保护剂，静置3h后置于辐照反应器中，在常温常压下进行辐照处理，然后经过滤，将滤液浓缩、干燥，得鱼骨胶原蛋白肽。
所述步骤S2中的混合酸溶液为0.8mol/L的柠檬酸溶液和0.5mol/L的乙酸溶液按质量比3:8组成。
所述步骤S3中加入胃蛋白酶的量为加入沉淀物质量的0.3％；所述步骤S3加入复合风味蛋白酶量为加入沉淀物质量的0.2％。
所述步骤S3中进行辐照处理时所用辐照源为60Co-γ射线，辐照剂量为4.0kGy，辐照剂量率为0.6kGy/h。
所述保护剂为D-异抗坏血酸钠和鼠尾草酚按重量比7:2组成。
与实施例2的相比，对比例5的区别在于，所述步骤S2中离心干燥后的沉淀物未进行冷冻的步骤，其他参数和操作与实施例2相同。
对比例6一种鱼骨胶原蛋白肽的制备方法
与实施例2的相比，对比例6的区别在于，所述步骤S3中未进行第二次采用复合风味蛋白酶进行的酶解反应，其他参数和操作与实施例2相同。
试验例一、分子量分布情况检测
1.试验材料：实施例1～3，对比例1～6制备的鱼骨胶原蛋白肽。
2.试验方法：将实施例1～3，对比例1～6制备的鱼骨胶原蛋白肽分别溶于20倍质量的水中，然后使用膜分离得到分子量小于500道尔顿，分子量小于1000道尔顿，分子量小于2000道尔顿和大于2000道尔顿的鱼骨胶原蛋白肽，干燥后称取并计算不同分子量的百分比。
3.试验结果
试验结果如表1所示。
表1鱼骨胶原蛋白肽分子量分布占比
由表1可知，采用本发明实施例1～3所述的方法制得的鱼骨胶原蛋白肽的平均分子量主要分布在1000Da之内，其中实施例2中小于500Da区间的分子量占比达到65.4％，小于1000Da区间的分子量占比达到92.2％，为本发明的最佳实施例。而对比例1～2中改变了所述鱼骨胶原蛋白肽制备方法步骤S2中的所采用的酸溶液的种类后，得到的鱼骨胶原蛋白肽在1000Da之内的分子量占比仅为60％左右；而对比例5～6制得的鱼骨胶原蛋白肽在1000Da之内的分子量占比仅为25.5％和36.2％，说明了本发明采用的鱼骨胶原蛋白肽的生产工艺能有效去除鱼骨胶原蛋白肽中的杂质及杂蛋白，将鱼骨胶原蛋白肽分子量集中在1000Da的区间之内，将其应用在饲料产业更有利于动物对于饲料产品的吸收。
试验例二、鱼骨胶原蛋白肽水解度的测定
1、试验材料：实施例2、对比例1～2、对比例5～6制备的鱼骨胶原蛋白肽。
2、试验方法：
取实施例2、对比例1～2、对比例5～6制备的鱼骨胶原蛋白肽各3g，于100mL烧杯中，加入60mL蒸馏水，开动磁力搅拌器，用0.05mo1·L-1氢氧化钠标准溶液滴定至pH为8.20时，停止搅拌，记录此时消耗氢氧化钠的体积数V2。加入中性甲醛(预先用0.05mo1·L-1氢氧化钠标准溶液滴定至pH为8.20)10mL，用磁力搅拌器混合均匀，继续滴定至9.20，记下加入甲醛后消耗的氢氧化钠溶液体积V1。同时取3mL同浓度未经水解的蛋白溶液做空白实验，记录加入中性甲醛后所耗的氢氧化钠溶液体积V0。水解度DH＝[1000×0.05×(V1-V0)]/(C×V)×(1/htot)×100％，其中，C为样品蛋白浓度(mg·mL-1)，V为用于甲醛滴定的水解液的体积数(mL)，0.05为氢氧化钠摩尔浓度，mo1·L-1，htot为每克鱼骨胶原蛋白肽质中肽键的毫摩尔数，7.8mmol/g。
3、试验结果：
试验结果如表2所示。
表2鱼骨胶原蛋白肽水解度的测定结果
| 组别 | 实施例2 | 对比例1 | 对比例2 | 对比例5 | 对比例6 |
| 水解度(％) | 56.3 | 30.7 | 33.1 | 27.8 | 24.1 |
由表2可知，本发明实施例2制备的鱼骨胶原蛋白肽的水解度明显高于对比例1～2、对比例5～6制备的鱼骨胶原蛋白肽的水解度。由此可见，通过本发明提供的鱼骨胶原蛋白肽的制备方法得到的鱼骨胶原蛋白肽的水解度高。
试验例三、抗氧化性能测试
1.试验材料：实施例2、对比例3～4制备的鱼骨胶原蛋白肽组合物。
2.试验方法：
羟基自由基清除能力的测定：
取0.1mL的FeSO4-EDTA混合液(10mmol/mL)于试管中，加入0.3mL2-脱氧核糖(10mmol/mL)，然后分别加入0.2mL实施例2、对比例3～4制备的鱼骨胶原蛋白肽组合物浓度为0.5mg/mL，用pH7.4的0.1mol/L磷酸缓冲液定容至1.9mL，再加入0.1mLH2O2(10mmol/mL)，混匀后置于37℃恒温水浴中反应1h。之后加入1mL2.8％(w/w)三氯乙酸(TCA)溶液和1mL1.0％(w/w)硫代巴比妥酸(TBA)溶液，混匀，沸水浴中反应15min，冷却后在532nm处测定吸光度值。
不加入清除剂时的吸光度为Ac，加入样品后若有清除·OH作用，则能抑制氧化产物的生成，其吸光度减少，测得吸光度为As，实际空白吸光以A0表示，则清除能力下式计算：
3.试验结果
试验结果如表3所示。
表3抗氧化性能检测结果
| 组别 | 实施例2 | 对比例3 | 对比例4 |
| 羟基自由基清除率(％) | 96.47 | 73.52 | 74.41 |
由表3可知：实施例2组制备的鱼骨胶原蛋白肽组合物，抗氧化效果明显，，其羟基自由基的清除率高达96.47％。而对比例3～4组中改变了保护剂的组分和比例后，制得的鱼骨胶原的羟基自由基清除率明显下降，说明本发明实施例2制得的鱼骨胶原蛋白肽的抗氧化能力较强。
上述实施例仅例示性说明本发明的原理及其功效，而非用于限制本发明。任何熟悉此技术的人士皆可在不违背本发明的精神及范畴下，对上述实施例进行修饰或改变。因此，举凡所属技术领域中具有通常知识者在未脱离本发明所揭示的精神与技术思想下所完成的一切等效修饰或改变，仍应由本发明的权利要求所涵盖。
Claims (6)
1.一种鱼骨胶原蛋白肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、去除鱼骨表面的碎肉，洗净，然后加入其质量5~8倍的0.1mol/L的NaOH溶液浸泡3~6h，取出后烘干，然后粉碎过40~60目筛，得鱼骨粉；
S2、向步骤S1中所得的与鱼骨粉中加入其重量6~10倍的混合酸溶液，搅拌均匀，浸泡2~3h，并加热至45~60℃，超声震荡2-5h，10000~16000r/min离心15~20min后取上清液，将上清液干燥后在-4~-10℃下保存10~12h，得沉淀物；
S3、向步骤S2所得沉淀物中加入8~15倍的水，调节pH至3.5~5.0，加入胃蛋白酶于30~40℃下，酶解反应1~2h后，再加入复合风味蛋白酶，于温度45～50℃酶解1~3h；两次酶解后，升温至80℃进行酶灭活10min，冷却至28℃，得酶解液；
S4、向步骤S3所得的酶解液中加入保护剂，静置2~4h后置于辐照反应器中，在常温常压下进行辐照处理，然后经过滤，将滤液浓缩、干燥，得鱼骨胶原蛋白肽；
所述步骤S2中的混合酸溶液为0.3~1.0mol/L的柠檬酸溶液和0.2~0.8mol/L的乙酸溶液按质量比1~4:7~10组成；
所述步骤S4中进行辐照处理时所用辐照源为60Co-γ射线，辐照剂量为1.0~6.0kGy，辐照剂量率为0.6kGy/h；
所述保护剂为D-异抗坏血酸钠和鼠尾草酚按重量比7:1~3组成。
2.如权利要求1所述的鱼骨胶原蛋白肽的制备方法，其特征在于，所述步骤S2中的混合酸溶液为0.8mol/L的柠檬酸溶液和0.5mol/L的乙酸溶液按质量比3:8组成。
3.如权利要求1所述的鱼骨胶原蛋白肽的制备方法，其特征在于，所述步骤S2中的超声功率为50~70kw。
4.如权利要求1所述的鱼骨胶原蛋白肽的制备方法，其特征在于，所述步骤S3中加入胃蛋白酶的量为加入沉淀物质量的0.1~0.5%；所述步骤S3加入复合风味蛋白酶量为加入沉淀物质量的0.1~0.3%。
5.如权利要求4所述的鱼骨胶原蛋白肽的制备方法，其特征在于，所述步骤S3中加入胃蛋白酶的量为加入沉淀物质量的0.3%；所述步骤S3加入复合风味蛋白酶量为加入沉淀物质量的0.2%。
6.如权利要求1所述的鱼骨胶原蛋白肽的制备方法，其特征在于，所述保护剂为D-异抗坏血酸钠和鼠尾草酚按重量比7:2组成。
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Legal Events
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| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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| GR01 | Patent grant | ||
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