CN105085587A - 连翘叶中连翘酯苷a的提取纯化工艺方法 - Google Patents

Abstract

本发明提出了连翘叶中连翘酯苷A的提取纯化工艺方法，在纯化前尽可能去除连翘酯苷A提取物中的脂溶性色素和水溶性杂质，减轻后续纯化连翘酯苷A的难度，最终产品连翘酯苷A的色度好、纯度达到95-99%、提取率达到3.5-5.5%。其技术方案为：（1）提取；（2）萃取：将步骤（1）得到的浓缩物加水溶解，得提取液；然后，调pH值至6，加入石油醚萃取除去脂溶性色素；然后，用水饱和正丁醇萃取除去大部分水溶性杂质；其中，按体积比水饱和正丁醇的用量为提取液的0.5-2倍；萃取次数为2-4次，回收正丁醇，得连翘酯苷A萃取物；（3）色谱柱精制（上200-300目硅胶柱），得粗结晶物；（4）重结晶，得成品。本发明的主要创新在于步骤（2）萃取。

Description

连翘叶中连翘酯苷A的提取纯化工艺方法

技术领域

本发明涉及连翘叶中连翘酯苷A的提取纯化工艺方法。

背景技术

目前，对连翘酯苷A的提取及纯化方法都有报道。现有技术中，通过用有机溶剂提取，再上硅胶柱或柱层析法纯化得到连翘酯苷A，例如公开号为CN101215302A的发明专利就公开了一种连翘酯苷A制备方法，就是利用有机溶剂提取，再用柱层析纯化（精制）得到连翘酯苷A；这种方法虽然达到了提取、纯化（精制）连翘酯苷A的目的，但是用有机溶剂提取后，直接把提取液进行柱层析，提取液中还含有脂溶性色素、水溶性杂质，不但加大了后续柱层析的难度和时间，最终获得的连翘酯苷A中的杂质多，并且连翘酯苷A的色度不好。

发明内容

本发明提出连翘叶中连翘酯苷A的提取纯化工艺方法，通过具体工艺步骤，在纯化前尽可能去除连翘酯苷A提取物中的脂溶性色素和水溶性杂质，减轻后续纯化连翘酯苷A的难度，最终产品连翘酯苷A的色度好、纯度达到95-99%、提取率达到3.5-5.5%。

为达到目的，本发明采用的技术方案如下：连翘叶中连翘酯苷A的提取纯化工艺方法，具体步骤如下：

（1）提取：取干燥连翘叶，粉碎至50-70目，得连翘粉，以连翘粉的质量为依据加入11-20倍的50～80%乙醇，每次提取60-120分钟，加热回流提取三次，将三次所得提取液合并、过滤，滤液60℃下浓缩至无醇味；

（2）萃取：将步骤（1）得到的浓缩物加水溶解，得提取液；然后，调pH值至6，加入石油醚萃取除去脂溶性色素；然后，用水饱和正丁醇萃取除去大部分水溶性杂质；其中，按体积比水饱和正丁醇的用量为提取液的0.5-2倍；萃取次数为2-4次，回收正丁醇，得连翘酯苷A萃取物；

（3）色谱柱精制：连翘酯苷A萃取物干法上200-300目硅胶柱，用乙酸乙酯与甲醇的混合液洗脱，其中乙酸乙酯与甲醇的体积比7∶1，收集洗脱液，浓缩至干，得粗结晶物；

（4）重结晶：将得到的粗结晶物用无水乙醇溶解，稍微加热，待全部溶解后冷却，然后放置冰箱中在1-6℃温度下重结晶，12小时后，减压抽滤，得到连翘酯苷A晶体；然后，重复上述重结晶步骤2-3次；最后干燥，得成品。

有益效果：本发明在色谱柱精制纯化前，增加了去脂溶性色素及水溶性杂质的萃取步骤，减轻了后续精制纯化连翘酯苷A的难度，连翘酯苷A的纯化是通过色谱柱精制、重结晶的步骤达到的，从而提高提出率、提高连翘酯苷A的纯度，提取纯化后的连翘酯苷A纯度达到95-99%、提取率达到3.5-5.5%。

具体实施方式

实施例1：取50g干燥连翘叶，加入0.8Kg的80%乙醇水溶液，加热回流提取三次，每次90分钟，将三次所得提取液合并、过滤，滤液在60℃下浓缩至无醇味；将浓缩物加一定量水溶解，得提取液；然后，调pH值至6，用石油醚萃取除去脂溶性色素，再用饱和正丁醇萃取除去大部分水溶性杂质，按体积比萃取溶剂的用量为提取液的1倍，萃取3次，回收正丁醇，得连翘酯苷A萃取物；将连翘酯苷A萃取物干法上200-300目硅胶柱，用乙酸乙酯与甲醇的混合液洗脱，其中乙酸乙酯与甲醇的体积比7∶1，收集洗脱液；薄层层析检测（按体积比，展开剂为二氯甲烷∶甲醇∶甲酸＝10:2:0.02）,浓缩至干，得粗结晶物（连翘酯苷A粗品）；将得到的粗结晶物用无水乙醇溶解（稍微加热，加热温度30-45℃），待全部溶解后，放置冰箱中在1-6℃温度下重结晶，12小时后，减压抽滤（重复2次），得到连翘酯苷A晶体2.35g。利用HPLC（蛋白质检测与分析）测定连翘酯苷A的含量，连翘酯苷A的纯度为96.5%，提取率(收率)为3.8%。

以上，实施例1只是对本发明的进一步说明，本发明专利申请不受到实施例1的限制，只要在本说明书发明内容部分限定的技术方案，都应落入本发明专利申请的保护范围。

Claims (1)

1.连翘叶中连翘酯苷A的提取纯化工艺方法，具体步骤如下：

（1）提取：取干燥连翘叶，粉碎至50-70目，得连翘粉，以连翘粉的质量为依据加入11-20倍的50～80%乙醇，每次提取60-120分钟，加热回流提取三次，将三次所得提取液合并、过滤，滤液60℃下浓缩至无醇味；

（2）萃取：将步骤（1）得到的浓缩物加水溶解，得提取液；然后，调pH值至6，用石油醚萃取除去脂溶性色素；然后，用水饱和正丁醇萃取除去大部分水溶性杂质，水饱和正丁醇的用量为提取液的0.5-2倍；萃取次数为2-4次，回收正丁醇，得连翘酯苷A萃取物；

（3）色谱柱精制：连翘酯苷A萃取物干法上200-300目硅胶柱，用乙酸乙酯与甲醇的混合液洗脱，其中乙酸乙酯与甲醇的体积比7∶1，收集洗脱液，浓缩至干，得粗结晶物；

（4）重结晶：将得到的粗结晶物用无水乙醇溶解，稍微加热，待全部溶解后冷却，然后放置冰箱中在1-6℃温度下重结晶，12小时后，减压抽滤，得到连翘酯苷A晶体；然后，重复上述重结晶步骤2-3次；最后干燥，得成品。