CN105079289B - 百药煎在制备抗幽门螺杆菌药物中的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明属于医药技术领域，具体涉及百药煎在制备抗幽门螺杆菌药物中的应用。百药煎的体外实验表明，百药煎具有很强的抗幽门螺杆菌活性。百药煎对幽门螺杆菌的1个标准菌株(NCTC11637)和5个临床耐药株均具有显著的抑菌效果，对H.pyloriNCTC11637的最小抑菌浓度(MIC值)为4mg/ml，对H.pylori的临床耐药株的平均MIC值为0.9mg/ml，其有效剂量低于临床用药剂量。说明对于与幽门螺杆菌密切相关的急、慢性胃炎、胃、十二指肠溃疡等疾病来讲，百药煎是一个极具开发潜力的药物。它可直接用于相应疾病的治疗及其相关药物的制备。

Description

百药煎在制备抗幽门螺杆菌药物中的应用
技术领域
本发明属于医药技术领域，具体涉及百药煎在制备抗幽门螺杆菌药物中的应用。
背景技术
百药煎属于传统中药，其味酸甘，性平，由五倍子和茶叶等经发酵制成，是世界上最早制得的没食子酸，始载于《丹溪心法》，具有较好的止咳止血作用。其炮制法最早见于《本草蒙筌》：“一新鲜五倍子十斤，捣烂，细磁缸盛，稻草盖盦七昼夜，取出复捣，加桔梗、甘草末各二两，又盦一七，仍捣仍盦。务过七次，捏成饼，晒干任用。”《医学入门》《本草纲目》对其炮制方法也有记载。其中《本草纲目》更详细的记载了历代的制备方法，并首次以“细茶”“酒曲”为材料进行制备，其方法一直沿用至今。百药煎具有润肺化痰，生津止渴之功效，临床上普遍用于治疗久咳痰多，咽喉肿痛，疮疡痈肿等病症。《本草纲目》中李时珍曰“百药煎，功与五倍子不异。但经酿造，其体轻虚，其性浮收，且味带余甘，治上焦心肺咳嗽，痰饮热渴诸病，含噙尤为相宜。”目前国内对百药煎的研究还局限于炮制方法的优化及其药效学的研究，但百药煎对幽门螺杆菌H.pylori的抗菌作用研究国内外则未见报道。
发明内容
本发明的目的是提供百药煎的一种药物新用途。
本发明所提供的百药煎的新用途是其在制备抗幽门螺杆菌药物中的应用。
百药煎在制备预防和/或治疗由幽门螺杆菌引起的疾病的药物中的应用也属于本发明的保护范围。
百药煎的体外实验表明，百药煎具有很强的抗幽门螺杆菌活性。百药煎对幽门螺杆菌的1个标准菌株(NCTC11637)和5个临床耐药株均具有显著的抑菌效果，对H.pyloriNCTC11637的最小抑菌浓度(MIC值)为4mg/ml，对H.pylori的临床耐药株的平均MIC值为0.9mg/ml，其有效剂量低于临床用药剂量。
百药煎对H.pylori具有显著的杀菌作用，且其杀菌效能与药物浓度成正相关，不同浓度的百药煎对H.pylori NCTC11637具有显著的杀菌效果，剂量越大，起效越快，效果则越好。
本研究结果显示，百药煎具有很强的抗幽门螺杆菌活性，说明对于与幽门螺杆菌密切相关的急、慢性胃炎、胃、十二指肠溃疡等疾病来讲，百药煎是一个极具开发潜力的药物。它可直接用于相应疾病的治疗及其相关药物的制备。
本发明涉及的百药煎在制备抗幽门螺杆菌药物中的用途属于首次公开，其对于幽门螺杆菌具有意想不到的抑制活性，可用于幽门螺杆菌感染的防治。
附图说明
图1为百药煎的药物浓度与各时间点的杀菌率的关系图。
具体实施方式
下面通过具体实施例对本发明进行说明，但本发明并不局限于此。
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法；下述实施例中所用的试剂、生物材料等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实施例
1材料与方法
1.1材料
1.1.1实验菌株
幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)NCTC11637标准菌株，临床分离的H.pylori菌株5株。
1.1.2实验用药与主要试剂
百药煎原药购自杭州桐君堂医药药材有限公司(批号：20140631)；哥伦比亚琼脂(批号：CM0331)、脑心脊液(批号：CM0225)购自英国OXOID公司，布氏肉汤(批号：3182288)购自碧迪医疗器械(上海)有限公司，按说明书配制；脱纤维羊血购自北京宝特医疗器械有限公司；胎牛血清(批号：20140623)购自北京飞默生物科技有限公司；幽门螺杆菌选择性培养琼脂购自生物梅里埃中国有限公司；微需氧产气袋(批号：CN0025A)购自北京欣隆福医药销售有限公司。
1.1.3实验设备
超净工作台(上海锐聪实验室设备有限公司)，恒温培养箱(上海一恒科技有限公司)，微需氧培养罐(北京玻璃厂)，恒温振摇床(上海一恒仪器有限公司)，液体培养罐购自英国OXOID公司，混合气体(85％N2、10％CO2、5％O2)。
1.2方法
1.2.1H.pylori培养方法及菌株鉴定方法
将H.pylori NCTC11637均匀接种于含有8％脱纤维羊血的哥伦比亚血琼脂培养基中，采用抽气换气法，于37℃微需氧环境下培养2-3d，阳性者进行传代培养；通过观察菌落形态，革兰染色，以及快速尿素酶、过氧化氢、氧化酶试验对菌株进行鉴定。
临床菌株的分离培养：取慢性胃炎或消化性溃疡患者胃镜检查下活检胃黏膜组织，充分均浆，均匀涂布于H.pylori选择性培养基，于37℃微需氧环境下培养3-5d，培养阳性者接种环挑取H.pylori菌落，再次涂布于含有8％脱纤维羊血的哥伦比亚血琼脂培养基，37℃微需氧环境下培养2-3d，传代增菌。
1.2.2E-test药敏试验
收取培养48-72h的新鲜H.pylori于脑心脊液中，稀释至3×108cfu/ml(1麦氏浊度)，取稀释后菌液100ul接种于哥伦比亚血琼脂培养基中，用L棒均匀涂开，放置含抗生素的E-test试纸条，于37℃微需氧环境下培养72h，根据E试纸说明书读取H.pylori对不同抗生素的MIC值，判定耐药情况。
1.2.3药物抑菌试验
琼脂稀释法：收取培养48-72h的新鲜H.pylori于脑心脊液中，将其稀释至3×108cfu/ml，用1μl接种环将细菌接种于含药琼脂(药物梯度从8,4,2…0.25mg/ml)平皿，并同时接种于无药培养基作为对照。接种后置于37℃微需氧环境中培养，培养72h后观察结果，不出现菌落的琼脂平皿上的最低有效浓度为其最低抑菌浓度(MIC)。
1.2.4药物杀菌试验
实验共设置4组，分别为空白对照组、1/2MIC药物浓度组、MIC药物浓度组、2MIC药物浓度组。取90mm玻璃平皿4个，分别加入布氏肉汤与胎牛血清(培养液10％的量)混合液9.5ml，将不同浓度的3种药液各0.5ml加入对应的液体培养基。收取新鲜培养的H.pyloriNCTC11637于布氏肉汤与胎牛血清混合液中制成菌悬液，使其浓度为1×106cfu/ml，各组均加入菌悬液100ul。将各平皿液体培养液混匀，于恒温振摇床37℃微需氧环境下振摇培养。准备0.9ml布氏肉汤稀释试管若干，于0、4、8、24h分别取各组菌液的母液100ul经数倍稀释后，取100ul混合稀释液接种于90mm哥伦比亚血琼脂培养皿中，置于恒温培养箱，于37℃微需氧环境下培养72h后做菌落计数并按照稀释倍数折算后取其平均值。统计各个时间点的平均菌落数，计算不同药物浓度下不同时间点的杀菌率，杀菌率＝(对照菌落数-处理菌落数)/对照菌落数×100％。取各个时间点菌落计数的对数，绘制时间-杀菌曲线图。
2.结果
2.1E-test药敏试验筛选耐药菌株情况
经E-test药敏试验筛选MZ或克拉霉素CH耐药的临床菌株5株，对临床上常见抗生素的耐药情况见表1。
表1.H.pylori临床菌株耐药情况
AC：阿莫西林CH：克拉霉素TC：四环素LE：左氧氟沙星MZ：甲硝锉MX：莫西沙星.*对该抗生素耐药
2.2百药煎对H.pylori标准菌株及临床耐药株的MIC值
百药煎对标准菌株NCTC11637和临床耐药株均具有显著的抑菌效果，对H.pyloriNCTC11637的MIC值为4mg/ml，对H.pylori的临床耐药株的平均MIC值为0.9mg/ml，其有效剂量低于临床用药剂量(见表2)。
表2.百药煎对H.pylori标准菌株及部分临床耐药株的MIC值(mg/ml)
2.3药物不同浓度杀菌率及杀菌曲线
百药煎对H.pylori具有显著的杀菌作用，且各时间点的杀菌率与药物浓度成正比。当药物浓度为1/2MIC值时，24h菌落计数为0，杀菌率可以达到100％；当药物浓度为MIC值时，8h菌落计数为100，杀菌率已经接近100％；当药物浓度为2MIC值时，4h菌落计数即为0，杀菌率已经达到100％(菌落计数见表3，杀菌率见表4)。
表3.不同时间点平均菌落数(个)
表4.不同时间点杀菌率(％)
图1为不同药物浓度在各时间点的菌落计数的对数值。
图1结果显示，在1/2MIC浓度的百药煎作用下，培养0-8h时菌落计数较0h有显著的降低，明显低于空白对照组，24h已经检测不到菌落出现。当药物浓度为MIC值时，0-24h菌落计数较空白对照显著降低，当药物浓度为2MIC值时，培养4h已经检测不到有菌落生长。
3.结论
采用琼脂稀释法测定百药煎对H.pylori的MIC，研究其在体外对H.pylori是否具有抑菌作用。结果显示百药煎对标准菌株NCTC11637和5株临床耐药株均具有显著的抑菌效果，平均MIC值为1.4mg/ml，其有效剂量低于临床用药剂量。在不同药物浓度条件下百药煎对H.pyloriNCTC11637具有明确的杀菌作用，杀菌率逐渐升高，且其杀菌效能与药物浓度成正相关。实验结果显示不同浓度的百药煎均对H.pyloriNCTC11637具有显著的杀菌效果，剂量越大，起效越快，效果则越好。

Claims (3)

1.百药煎在制备抗幽门螺杆菌药物中的应用。
2.百药煎在制备预防由幽门螺杆菌引起的疾病的药物中的应用。
3.百药煎在制备治疗由幽门螺杆菌引起的疾病的药物中的应用。
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