CN105055185A - 一种聚乙二醇修饰的维生素e脂质体及其制备方法与应用 - Google Patents
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Abstract
本发明属于日用护理品技术领域，公开了一种聚乙二醇修饰的维生素E脂质体及其制备方法与应用。所述脂质体包括10-100份卵磷脂、10-100份胆固醇、10-150份维生素E、200-600份胆酸纳、1000-4000份聚乙二醇和400-800份冷冻干燥保护剂。其制备方法为：将卵磷脂、胆固醇、维生素E以及胆酸钠用氯仿和甲醇的混合溶剂溶解，除去溶剂得到脂质体薄膜，然后加入聚乙二醇溶液得到脂质体混悬液，将混悬液超声分散、透析，然后加入冷冻干燥保护剂进行冷冻干燥，得到聚乙二醇修饰的维生素E脂质体。本发明的产物具有良好的稳定性和经皮渗透性，可用于护肤产品，达到去除氧自由基，延缓衰老的功效。
Description
技术领域
本发明属于日用护理品技术领域，具体涉及一种聚乙二醇修饰的维生素E脂质体及其制备方法与应用。
背景技术
随着城镇化建设的加快，空气污染越来越严重，生活压力也越来越大，人们在每天生活中氧自由基的产生和集聚越来越严重，导致皮肤老化现象加重，发生皮肤疾病的概率也越来越大。开发出一款良好的护肤产品，既能实现成本经济又能高效地消除氧自由基。
维生素E具有良好的美容效果。首先，维生素E的侧链双键可直接参与巯基的氧化还原过程，抑制络氨酸酶的活性，防止色素沉着；其次，维生素E还具有扩张末梢血管，改善血管微循环，促进营养成分的输送及体内代谢垃圾排泄的效果。此外，维生素E能够保护细胞膜使其免受自由基的氧化损伤，所以能够帮助修复和巩固肌肤的天然保护屏障，锁住肌肤的水分，提供由内而外的滋养。
然而，现在市场上护肤品往往是忽略了维生素E等这些廉价的化学成分，而去追求加入一些难以提取但效果与维生素E相差无几的物质，例如SOD(超氧化物歧化酶)。SOD是一种存在于人或者其他生物体中的酶，能够修复受损细胞，清除氧自由基，但是它的提取相当困难，成本昂贵，所以含SOD的护肤品一般价格较高，而且实际上SOD的含量不可能很高，其护肤效果也不可能很好；而维生素E同样是一种广泛存在的化学成分，其抗老化效果也非常好，最重要的是提取容易，造价成本低廉，适合大规模生产以及商业化。其次，目前很多护肤品都是针对保湿，如含甘油、含透明质酸的护肤品，但这些护肤品并不能对紫外线的侵袭产生有效的保护。
专利CN101502326A公开了一种维生素E纳米脂质体的制备方法，其以维生素E为芯材，卵磷脂、胆固醇和吐温80为壁材，通过乙醇注入法和超高压均质实现维生素E的纳米脂质体化。专利CN101780041A公开了一种聚合物包覆维生素E脂质体及其制备方法，该脂质体主要由维生素E、卵磷脂、胆固醇和吐温80和聚合物包覆材料组成。以上方法为了保证脂质体的稳定性均需使用一定量的乳化剂吐温80，而且由于其主要用于食品领域，对于用在经皮渗透类的脂质体来说吐温80具有潜在不安全性。
发明内容
为了解决以上现有技术的缺点和不足之处，本发明的首要目的在于提供一种聚乙二醇修饰的维生素E脂质体。
本发明的另一目的在于提供上述聚乙二醇修饰的维生素E脂质体的制备方法。
本发明的再一目的在于提供上述聚乙二醇修饰的维生素E脂质体在日化护理产品中的应用。
本发明目的通过以下技术方案实现：
一种聚乙二醇修饰的维生素E脂质体，包括以下重量份的组分：10-100份卵磷脂、10-100份胆固醇、10-150份维生素E、200-600份胆酸纳或去氧胆酸钠、1000-4000份聚乙二醇和400-800份冷冻干燥保护剂。
上述组分优选为：10-100份卵磷脂、15-100份的胆固醇、10-100份的维生素E、200-600份胆酸钠或去氧胆酸钠、1000-3000份的聚乙二醇和400-800份的冷冻干燥保护剂。
更优选的组分为：10-100份卵磷脂、20-100份的胆固醇、10-90份的维生素E、200-500份胆酸钠或去氧胆酸钠、1000-3000份的聚乙二醇和400-600份的冷冻干燥保护剂。
所述的卵磷脂选自大豆卵磷脂、氢化大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂、二棕榈酰磷脂酰胆碱、二肉豆蔻磷脂酰胆碱、二月桂酰磷脂酰胆碱和合成磷脂中的至少一种。
所述的冷冻干燥保护剂优选甘油、乳糖、蔗糖、甘露醇、葡萄糖和海藻糖中的至少一种；更优选为甘露醇。
所述冷冻干燥保护剂与卵磷脂和胆固醇的质量之和的比为(2～20):1。
所述维生素E与卵磷脂和胆固醇的质量之和的比为1:(20～100)。
所述聚乙二醇修饰的维生素E脂质体的粒径范围为50-200nm，Zeta电位为-30～-55mV，包封率为70％-90％。
上述聚乙二醇修饰的维生素E脂质体的制备方法，包括以下制备步骤：
(1)称取卵磷脂、胆固醇、维生素E以及胆酸钠或去氧胆酸钠置于容器中，加入氯仿和甲醇的混合溶剂，搅拌溶解均匀得到混合溶液；
(2)将混合溶液置于旋转蒸发仪中，在40-80℃的温度下真空抽除溶剂，得到附着于器壁的脂质体薄膜；
(3)将聚乙二醇用PBS缓冲溶液溶解，配制质量浓度为1％-20％的聚乙二醇溶液，然后加入到步骤(2)的旋转蒸发仪中，在温度为40-80℃条件下旋转水化，得到脂质体混悬液；
(4)将步骤(3)的脂质体混悬液超声分散，然后置于截留分子量为8000-14000的透析袋中透析，除去游离的维生素E；
(5)往步骤(4)的体系中加入冷冻干燥保护剂，预冻后冷冻干燥，得到聚乙二醇修饰的维生素E脂质体。
优选地，步骤(1)中所述的氯仿和甲醇的混合溶剂是指氯仿与甲醇的体积比为1:1的混合溶剂。
优选地，步骤(4)中所述超声分散的时间为5～30min。
优选地，步骤(5)中所述的预冻是指在于-50至-100℃预冻12小时以上。
上述聚乙二醇修饰的维生素E脂质体可应用于日化护理产品中，实现去除氧自由基，延缓衰老的功效。
本发明的制备方法及所得到的产物具有如下优点及有益效果：
(1)本发明所使用的卵磷脂中的磷脂酸属于负电荷脂质成分，能够有利于脂质体与带有正电荷的皮肤结合与吸收；而本身卵磷脂本身就是人体细胞膜的重要组成成分，能够有利于维生素E稳定地存在于皮肤层并且高效地释放供人体皮肤吸收，从而达到良好的内容功效；
(2)本发明中胆固醇的使用，是为了调节脂质体膜的流动性和通透性，进而调整脂质体膜的稳定性；
(3)本发明中胆酸钠的使用，能够让脂质体膜产生更大的弹性和形变，从而促进脂质体的经皮渗透性，所得脂质体的平均累计渗透百分率为60％-100％；
(4)本发明制备的维生素E脂质体粒径在50-200nm，表面电荷的绝对值达30mV至55mV，能够保证包裹的维生素E成分有更好的稳定性；同时，采用聚乙二醇修饰脂质体，大幅度提高了脂质体的稳定性，进而提高了包封率；
(5)本发明采用的旋转蒸发-超声分散-冷冻干燥法，使产品工艺和质量具有较好的稳定性和重现性；更重要的是通过该方法制备的维生素E柔性纳米脂质体包封率达70-90％，与同类型的脂质体而言，包封率有了明显的提高；而且本发明产品的最终形态为粉末，也有利于使用、运输和贮存。
附图说明
图1为实施例1得到的聚乙二醇修饰的维生素E脂质体的扫描电镜图；
图2为实施例1得到的聚乙二醇修饰的维生素E脂质体的Zeta电位图；
图3为实施例1得到的聚乙二醇修饰的维生素E脂质体的粒径分布图；
图4为胆酸钠(a)、维生素E(b)、空白脂质体(c)和实施例1的维生素E脂质体(d)采用差示扫描量热法得到的热分析结果对照图。
具体实施方式
下面结合实施例及附图对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。
实施例1
一种聚乙二醇修饰的维生素E脂质体的制备方法，包括以下制备步骤：
(1)称取蛋黄卵磷脂0.08g、胆固醇0.08g、维生素E0.04g以及胆酸钠0.4g置于锥形瓶中，加入20ml体积比为1:1的氯仿和甲醇的混合溶剂，搅拌溶解均匀得到混合溶液；
(2)将混合溶液置于旋转蒸发仪中，在42℃的恒温水浴中旋转真空抽除溶剂，得到附着于器壁的脂质体薄膜；
(3)将0.4g聚乙二醇用pH7.4的磷酸缓冲液溶解，配制质量浓度为1％的聚乙二醇溶液，然后加入到步骤(2)的旋转蒸发仪中，在40℃水浴条件下旋转水化1小时，得到橙色脂质体混悬液；
(4)将步骤(3)的脂质体混悬液超声分散5min，然后置于截留分子量为8000的透析袋中透析，除去游离的维生素E；
(5)往步骤(4)的体系中加入0.8g甘露醇，在-50℃预冻16小时后置于冷冻干燥机中冷冻干燥，得到聚乙二醇修饰的维生素E脂质体。
本实施例得到的聚乙二醇修饰的维生素E脂质体的扫描电镜图如图1所示；其Zeta电位图如图2所示；其粒径分布图如图3所示。由图1～3可以看出，本发明的聚乙二醇修饰的维生素E脂质体粒径范围为50-200nm，Zeta电位为-30～-55mV。
本实施例的维生素E脂质体的包封率检测：取步骤(3)的橙色脂质体混悬液，用0.22μm的过滤器将大颗粒过滤，然后使用高速离心机，15000rpm条件下离心45分钟，取1.5mL离心管清液，放置在比色皿中测291.0nm处的吸光度，同时再测该配比的全液吸光度。通过吸光度计算本实施例的维生素E脂质体的包封率为79.82％。
实施例2
一种聚乙二醇修饰的维生素E脂质体的制备方法，包括以下制备步骤：
(1)称取大豆卵磷脂0.08g、胆固醇0.08g、维生素E0.04g以及胆酸钠0.8g置于锥形瓶中，加入20ml体积比为1:1的氯仿和甲醇的混合溶剂，搅拌溶解均匀得到混合溶液；
(2)将混合溶液置于旋转蒸发仪中，在60℃的恒温水浴中旋转真空抽除溶剂，得到附着于器壁的脂质体薄膜；
(3)将0.4g聚乙二醇用pH7.4的磷酸缓冲液溶解，配制质量浓度为10％的聚乙二醇溶液，然后加入到步骤(2)的旋转蒸发仪中，在60℃水浴条件下旋转水化1小时，得到橙色脂质体混悬液；
(4)将步骤(3)的脂质体混悬液超声分散15min，然后置于截留分子量为10000的透析袋中透析，除去游离的维生素E；
(5)往步骤(4)的体系中加入1.6g甘露醇，在-75℃预冻12小时后置于冷冻干燥机中冷冻干燥，得到聚乙二醇修饰的维生素E脂质体。
本实施例得到的聚乙二醇修饰的维生素E脂质体的粒径范围为50-200nm，Zeta电位为-46.1mV。按实施例1的方法检测包封率为71.52％。
实施例3
一种聚乙二醇修饰的维生素E脂质体的制备方法，包括以下制备步骤：
(1)称取蛋黄卵磷脂0.08g、胆固醇0.08g、维生素E0.04g以及胆酸钠1.0g置于锥形瓶中，加入20ml体积比为1:1的氯仿和甲醇的混合溶剂，搅拌溶解均匀得到混合溶液；
(2)将混合溶液置于旋转蒸发仪中，在80℃的恒温水浴中旋转真空抽除溶剂，得到附着于器壁的脂质体薄膜；
(3)将0.8g聚乙二醇用pH7.4的磷酸缓冲液溶解，配制质量浓度为20％的聚乙二醇溶液，然后加入到步骤(2)的旋转蒸发仪中，在60℃水浴条件下旋转水化1小时，得到橙色脂质体混悬液；
(4)将步骤(3)的脂质体混悬液超声分散30min，然后置于截留分子量为14000的透析袋中透析，除去游离的维生素E；
(5)往步骤(4)的体系中加入3.0g甘露醇，在-100℃预冻12小时后置于冷冻干燥机中冷冻干燥，得到聚乙二醇修饰的维生素E脂质体。
本实施例得到的聚乙二醇修饰的维生素E脂质体的粒径范围为50-200nm，Zeta电位为-49.3mV。按实施例1的方法检测包封率为73.46％。
对比例1
本对比例的一种聚乙二醇修饰的维生素E脂质体的制备方法，与实施例1相比，不同之处在于未加入胆酸钠，其余部分完全相同。
实施例及对比例的维生素E脂质体经皮渗透百分率的测定：
取健康的昆明小鼠，脱颈处死后剥离腹部的皮肤并将腹毛剃去，小心除去皮下的黏膜和脂肪，然后用生理盐水清洗干净后，使用改良的Franz扩散池进行经皮渗透实验。将处理好的皮肤夹在扩散池与池盖之间，扩散池面积1.00cm2，容积18.0mL，角质层朝向供给池。在供给池中加入实施例1的维生素E脂质体1mg(以溶液形式)，加入生理盐水作为接收液，恒定温度为37℃，磁力搅拌速度为100r/min。分别于实验开始后0.5h、1h、1.5h、2h、4h取样，每次取样2mL检测并放回。由标准曲线计算浓度，根据浓度乘以扩散池总体积得到经皮渗透量。由于经皮渗透量Q的单位为mg/cm2，所得到的数据恰好可以表示经皮渗透百分率。按照此方法取维生素E和对比例1的维生素E脂质体各1mg，作为对照样进行测试，结果如如表1所示。表中样品1为实施例1的维生素E脂质体，样品2为维生素E，样品3为对比例1的维生素E脂质体。
表1经皮渗透百分率的测定结果
从表1中可以看出：本发明的维生素E脂质体的经皮渗透百分率相比单独的维生素E及未加入胆酸钠的维生素E脂质体，渗透效果均具有一定程度的提高；以实施例1的维生素E脂质体再做两组平行测试，测得的数据如表2所示。
表2三次平行测试经皮渗透百分率的结果
从表2中可知：4小时内聚乙二醇修饰的维生素E柔性脂质体的平均累积渗透百分率为83.59％
为证明维生素E在被脂质体包覆后没有发生化学变化，即维生素E脂质体仍能够发挥维生素E的延缓衰老的性质，对胆酸钠、维生素E、空白脂质体、实施例1的维生素E脂质体样品采用差示扫描量热法进行对照热分析测试，结果如图4所示。
由图4可以看出：相对于胆酸钠(a)、维生素E(b)、空白脂质体(c)，实施例1的维生素E脂质体(d)未出现新的吸收峰，因此可以判定维生素E柔性脂质体是以物理方式包覆的，维生素E的药物活性没有被破坏。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其它的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种聚乙二醇修饰的维生素E脂质体，其特征在于：包括以下重量份的组分：10-100份卵磷脂、10-100份胆固醇、10-150份维生素E、200-600份胆酸纳或去氧胆酸钠、1000-4000份聚乙二醇和400-800份冷冻干燥保护剂。
2.根据权利要求1所述的一种聚乙二醇修饰的维生素E脂质体，其特征在于：包括以下重量份的组分：10-100份卵磷脂、15-100份的胆固醇、10-100份的维生素E、200-600份胆酸钠或去氧胆酸钠、1000-3000份的聚乙二醇和400-800份的冷冻干燥保护剂。
3.根据权利要求1所述的一种聚乙二醇修饰的维生素E脂质体，其特征在于：包括以下重量份的组分：10-100份卵磷脂、20-100份的胆固醇、10-90份的维生素E、200-500份胆酸钠或去氧胆酸钠、1000-3000份的聚乙二醇和400-600份的冷冻干燥保护剂。
4.根据权利要求1所述的一种聚乙二醇修饰的维生素E脂质体，其特征在于：所述的卵磷脂选自大豆卵磷脂、氢化大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂、二棕榈酰磷脂酰胆碱、二肉豆蔻磷脂酰胆碱、二月桂酰磷脂酰胆碱和合成磷脂中的至少一种。
5.根据权利要求1所述的一种聚乙二醇修饰的维生素E脂质体，其特征在于：所述的冷冻干燥保护剂是指甘油、乳糖、蔗糖、甘露醇、葡萄糖和海藻糖中的至少一种。
6.根据权利要求1所述的一种聚乙二醇修饰的维生素E脂质体，其特征在于：所述冷冻干燥保护剂与卵磷脂和胆固醇的质量之和的比为(2～20):1；所述维生素E与卵磷脂和胆固醇的质量之和的比为1:(20～100)。
7.根据权利要求1～6任一项所述的一种聚乙二醇修饰的维生素E脂质体，其特征在于：所述聚乙二醇修饰的维生素E脂质体的粒径范围为50-200nm，Zeta电位为-30～-55mV，包封率为70％-90％。
8.权利要求1～7任一项所述的一种聚乙二醇修饰的维生素E脂质体的制备方法，其特征在于包括以下制备步骤：
(1)称取卵磷脂、胆固醇、维生素E以及胆酸钠或去氧胆酸钠置于容器中，加入氯仿和甲醇的混合溶剂，搅拌溶解均匀得到混合溶液；
(2)将混合溶液置于旋转蒸发仪中，在40-80℃的温度下真空抽除溶剂，得到附着于器壁的脂质体薄膜；
(3)将聚乙二醇用PBS缓冲溶液溶解，配制质量浓度为1％-20％的聚乙二醇溶液，然后加入到步骤(2)的旋转蒸发仪中，在温度为40-80℃条件下旋转水化，得到脂质体混悬液；
(4)将步骤(3)的脂质体混悬液超声分散，然后置于截留分子量为8000-14000的透析袋中透析，除去游离的维生素E；
(5)往步骤(4)的体系中加入冷冻干燥保护剂，预冻后冷冻干燥，得到聚乙二醇修饰的维生素E脂质体。
9.根据权利要求8所述的一种聚乙二醇修饰的维生素E脂质体的制备方法，其特征在于：步骤(1)中所述的氯仿和甲醇的混合溶剂是指氯仿与甲醇的体积比为1:1的混合溶剂；步骤(4)中所述超声分散的时间为5～30min；步骤(5)中所述的预冻是指在于-50至-100℃预冻12小时以上。
10.权利要求1～7任一项所述的一种聚乙二醇修饰的维生素E脂质体在日用护理产品中的应用。
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