CN105031658B - 一种酸度可控的药物载体的制备方法 - Google Patents
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Abstract
一种酸度可控的药物载体的制备方法，本发明涉及药物载体的制备方法。本发明要解决现有脂质体作为药物载体时，脂质体在人体中不稳定，容易破碎造成内部药物泄露从而对敏感组织有副作用。同时，并不是所有的脂质体都能作为酸控缓释药物的载体，具有局限性的问题。方法：一、ITO表面清洗；二、制备泡囊溶液；三、制备磷脂泡囊‑聚多巴胺复合体，即完成一种酸度可控的药物载体的制备方法。本发明用于一种酸度可控的药物载体的制备。
Description
技术领域
本发明涉及药物载体的制备方法。
背景技术
目前脂质体作为药物载体在国内外已有一些报道，但是不可否认的是脂质体作为药物载体的缺陷是脂质体在人体中不稳定，容易破碎造成内部药物泄露从而对敏感组织有副作用。在癌细胞附近为中性偏酸环境，所以制备一种抗癌药物载体具有酸控性能至关重要，虽然有些脂质体由酸敏感磷脂构成，但并不是所有的脂质体都适合作为酸控缓释药物的载体，具有局限性。
发明内容
本发明要解决现有脂质体作为药物载体时，脂质体在人体中不稳定，容易破碎造成内部药物泄露从而对敏感组织有副作用。同时，并不是所有的脂质体都适合作为酸控缓释药物载体，具有局限性的问题，而提供一种酸度可控的药物载体的制备方法。
一种酸度可控的药物载体的制备方法，具体是按照以下步骤进行的：
一、ITO表面清洗：将两片ITO玻璃电极先用无水乙醇超声清洗15min～20min，再用蒸馏水超声清洗15min～20min，然后氮气吹干，得到两片清洗后的ITO玻璃电极；
二、制备泡囊溶液：将棕榈酰油酰磷脂酰胆碱加入到氯仿中，得到浓度为5mg/mL的磷脂溶液，将两片清洗后的ITO玻璃电极表面分别涂覆5μL～7μL浓度为5mg/mL的磷脂溶液，待氯仿挥发后，得到两片表面覆有磷脂的ITO玻璃电极，将聚四氟乙烯矩形框置于两片表面覆有磷脂的ITO玻璃电极中间，得到电形成装置，且聚四氟乙烯矩形框与两片表面覆有磷脂的ITO玻璃电极形成中间空腔，中间空腔内灌注填充液，在两片表面覆有磷脂的ITO玻璃电极上分别连接信号发生器，设定交流电压为5V，设定频率为10Hz，时间控制为4h，得到泡囊溶液；
所述的填充液为水、糖或水溶性药物；
三、制备磷脂泡囊-聚多巴胺复合体：称取多巴胺固体溶解于pH＝8.5的Tris-Hcl缓冲溶液中，得到浓度为2mg/mL的多巴胺溶液,将浓度为2mg/mL的多巴胺溶液与泡囊溶液混合，得到反应液，将反应液置于温度为40℃下反应4h，得到最终产物，在转速为4000rpm的条件下，将最终产物离心5min～7min，移除浑浊上层液，用蒸馏水清洗下层固体，再离心，最后将离心产物清洗3次，得到磷脂泡囊-聚多巴胺复合体，即完成一种酸度可控的药物载体的制备方法；
所述的浓度为2mg/mL的多巴胺溶液与泡囊溶液的体积比为1:10。
所述的棕榈酰油酰磷脂酰胆碱简称POPC。
本发明的有益效果是：本发明采用电形成方法制备磷脂泡囊，然后在磷脂泡囊外附着一层多巴胺壳层，复合体的平均粒径为20μm，该壳层在酸性条件下能够缓慢溶解从而实现泡囊内部的药物缓慢释放，例如，该种复合脂质体药物在人体肿瘤组织附近(pH6.8～7.0)缓慢进行药物释放，药物与癌细胞相互作用，达到治疗目的。这种可作为药物载体的复合体具有制备过程操作简单，成本低廉，无细胞毒性等优点，是作为药物载体的最佳选择。
本发明用于一种酸度可控的药物载体的制备方法。
附图说明
图1为实施例一制备的磷脂泡囊-聚多巴胺复合体的显微镜图片；
图2为实施例一制备的磷脂泡囊-聚多巴胺复合体的SEM图片；
图3为包裹5-氟尿嘧啶的水溶液的磷脂泡囊-聚多巴胺复合体对癌细胞的作用图。
具体实施方式
具体实施方式一：本实施方式所述的一种酸度可控的药物载体的制备方法，具体是按照以下步骤进行的：
一、ITO表面清洗：将两片ITO玻璃电极先用无水乙醇超声清洗15min～20min，再用蒸馏水超声清洗15min～20min，然后氮气吹干，得到两片清洗后的ITO玻璃电极；
二、制备泡囊溶液：将棕榈酰油酰磷脂酰胆碱加入到氯仿中，得到浓度为5mg/mL的磷脂溶液，将两片清洗后的ITO玻璃电极表面分别涂覆5μL～7μL浓度为5mg/mL的磷脂溶液，待氯仿挥发后，得到两片表面覆有磷脂的ITO玻璃电极，将聚四氟乙烯矩形框置于两片表面覆有磷脂的ITO玻璃电极中间，得到电形成装置，且聚四氟乙烯矩形框与两片表面覆有磷脂的ITO玻璃电极形成中间空腔，中间空腔内灌注填充液，在两片表面覆有磷脂的ITO玻璃电极上分别连接信号发生器，设定交流电压为5V，设定频率为10Hz，时间控制为4h，得到泡囊溶液；
所述的填充液为水、糖或水溶性药物；
三、制备磷脂泡囊-聚多巴胺复合体：称取多巴胺固体溶解于pH＝8.5的Tris-Hcl缓冲溶液中，得到浓度为2mg/mL的多巴胺溶液,将浓度为2mg/mL的多巴胺溶液与泡囊溶液混合，得到反应液，将反应液置于温度为40℃下反应4h，得到最终产物，在转速为4000rpm的条件下，将最终产物离心5min～7min，移除浑浊上层液，用蒸馏水清洗下层固体，再离心，最后将离心产物清洗3次，得到磷脂泡囊-聚多巴胺复合体，即完成一种酸度可控的药物载体的制备方法；
所述的浓度为2mg/mL的多巴胺溶液与泡囊溶液的体积比为1:10。
所述的棕榈酰油酰磷脂酰胆碱简称POPC。
本实施方式的有益效果是：本实施方式采用电形成方法制备磷脂泡囊，然后在磷脂泡囊外附着一层多巴胺壳层，复合体的平均粒径为20μm，该壳层在酸性条件下能够缓慢溶解从而实现泡囊内部的药物缓慢释放，例如，该种复合脂质体药物在人体肿瘤组织附近(pH 6.8～7.0)缓慢进行药物释放，药物与癌细胞相互作用，达到治疗目的。这种可作为药物载体的复合体具有制备过程操作简单，成本低廉，无细胞毒性等优点，是作为药物载体的最佳选择。
具体实施方式二：本实施方式与具体实施方式一不同的是：步骤二中所述的水溶性药物为5-氟尿嘧啶的水溶液。其它与具体实施方式一相同。
具体实施方式三：本实施方式与具体实施方式一或二之一不同的是：所述的5-氟尿嘧啶的水溶液浓度为0.15μmol/L～77μmol/L。其它与具体实施方式一或二相同。
具体实施方式四：本实施方式与具体实施方式一至三之一不同的是：步骤一中将两片ITO玻璃电极先用无水乙醇超声清洗15min，再用蒸馏水超声清洗15min。其它与具体实施方式一至三相同。
具体实施方式五：本实施方式与具体实施方式一至四之一不同的是：步骤二中将两片清洗后的ITO玻璃电极表面分别涂覆5μL浓度为5mg/mL的磷脂溶液。其它与具体实施方式一至四相同。
具体实施方式六：本实施方式与具体实施方式一至五之一不同的是：步骤三中在转速为4000rpm的条件下，将最终产物离心5min。其它与具体实施方式一至五相同。
采用以下实施例验证本发明的有益效果：
实施例一：
本实施例所述的一种酸度可控的药物载体的制备方法，具体是按照以下步骤进行的：
一、ITO表面清洗：将两片ITO玻璃电极先用无水乙醇超声清洗15min，再用蒸馏水超声清洗15min，然后氮气吹干，得到两片清洗后的ITO玻璃电极；
二、制备泡囊溶液：将棕榈酰油酰磷脂酰胆碱加入到氯仿中，得到浓度为5mg/mL的磷脂溶液，将两片清洗后的ITO玻璃电极表面分别涂覆5μL浓度为5mg/mL的磷脂溶液，待氯仿挥发后，得到两片表面覆有磷脂的ITO玻璃电极，将聚四氟乙烯矩形框置于两片表面覆有磷脂的ITO玻璃电极中间，得到电形成装置，且聚四氟乙烯矩形框与两片表面覆有磷脂的ITO玻璃电极形成中间空腔，中间空腔内灌注填充液，在两片表面覆有磷脂的ITO玻璃电极上分别连接信号发生器，设定交流电压为5V，设定频率为10Hz，时间控制为4h，得到泡囊溶液；
所述的填充液为水；
三、制备磷脂泡囊-聚多巴胺复合体：称取多巴胺固体溶解于pH＝8.5的Tris-Hcl缓冲溶液中，得到浓度为2mg/mL的多巴胺溶液,将浓度为2mg/mL的多巴胺溶液与泡囊溶液混合，得到反应液，将反应液置于温度为40℃下反应4h，得到最终产物，在转速为4000rpm的条件下，将最终产物离心5min，移除浑浊上层液，用蒸馏水清洗下层固体，再离心，最后将离心产物清洗3次，得到磷脂泡囊-聚多巴胺复合体，即完成一种酸度可控的药物载体的制备方法；
所述的浓度为2mg/mL的多巴胺溶液与泡囊溶液的体积比为1:10。
本实施例制备的磷脂泡囊-聚多巴胺复合体利用显微镜、扫描电子显微镜及紫外-可见分光光度计，对泡囊外的聚多巴胺进行结构表征。图1为实施例一制备的磷脂泡囊-聚多巴胺复合体的显微镜图片；图2为实施例一制备的磷脂泡囊-聚多巴胺复合体的SEM图片；利用显微镜和扫描电子显微镜观察磷脂泡囊-聚多巴胺复合体的尺寸和形貌，通过显微镜可见该复合体平均粒径为20μm，扫描电子显微镜可见聚多巴胺壳体形貌。
利用紫外-可见分光光度计对泡囊外的聚合物成分进行认定，通过紫外可见分光光度计检测样品棕榈酰油酰磷脂酰胆碱简称(POPC)、聚多巴胺和磷脂泡囊-聚多巴胺复合体，结果显示在335nm处，聚多巴胺和磷脂泡囊-聚多巴胺复合体都有一相同的吸收峰，而POPC没有吸收峰，可见，在磷脂泡囊-聚多巴胺复合物外层已经附着聚多巴胺。结果显示聚多巴胺成功包裹于磷脂泡囊外。
所述的聚多巴胺具体是按以下步骤进行的：称取多巴胺固体溶解于pH＝8.5的Tris-Hcl缓冲溶液中，得到浓度为2mg/mL的多巴胺溶液，直至溶液变黑后，烘干浓度为2mg/mL的多巴胺溶液，得到粉末状的聚多巴胺。
实施例二：本实施例与实施例一不同的是：所述的填充液为浓度为0.15μmol/L的5-氟尿嘧啶的水溶液。其它与实施例一相同。
实施例三：本实施例与实施例一或二之一不同的是：步骤二中所述的填充液为浓度为0.75μmol/L的5-氟尿嘧啶的水溶液。其它与实施例一或二相同。
实施例四：本实施例与实施例一至三之一不同的是：步骤二中所述的填充液为浓度为1.5μmol/L的5-氟尿嘧啶的水溶液。其它与实施例一至三相同。
磷脂泡囊-聚多巴胺复合体的细胞毒性试验：将实施例二至四包裹5-氟尿嘧啶的水溶液的磷脂泡囊-聚多巴胺复合体与肾癌细胞SK-RC-2在最接近癌细胞生长环境的pH＝6.87的条件下共同培养24小时，并计算癌细胞存活率。图3包裹5-氟尿嘧啶的水溶液的磷脂泡囊-聚多巴胺复合体对癌细胞的作用图。将包裹浓度分别为0.15、0.75和1.5μM的5-氟尿嘧啶的水溶液(5-FU)的磷脂泡囊-聚多巴胺复合体中与肾癌细胞SK-RC-2混合，并且控制培养条件为最接近癌细胞生长环境的pH＝6.87的条件下共同培养24小时，并计算癌细胞存活率分别为40.03％、36.38％和21.09％，明显可见，磷脂泡囊-聚多巴胺复合体作为药物载体效果好。
实施例五：本实施例与实施例一至四之一不同的是：步骤二中所述的填充液为浓度为77μmol/L的5-氟尿嘧啶的水溶液。其它与实施例一至四相同。
磷脂泡囊-聚多巴胺复合体的酸控药物释放：本实施例将治疗癌症的药物浓度为77μmol/L的5-氟尿嘧啶的水溶液(5-FU)包裹于磷脂泡囊-聚多巴胺复合体中，分别在pH值为3.16、4.11、6.87、7.42的条件下刺激该复合体，利用荧光仪对在不同时间下释放出的药物进行测试。实施例五制备的磷脂泡囊-聚多巴胺复合体中包裹5-FU药物在不同pH值分别为3.16、4.11、6.87和7.42条件下进行药物释放，实验证明，随着pH值的减小，5-FU的释放率逐渐增加，当pH值为3.16时药物最大释放率高达近70％。
Claims (4)
1.一种酸度可控的药物载体的制备方法，其特征在于一种酸度可控的药物载体的制备方法是按照以下步骤进行的：
一、ITO表面清洗：将两片ITO玻璃电极先用无水乙醇超声清洗15min～20min，再用蒸馏水超声清洗15min～20min，然后氮气吹干，得到两片清洗后的ITO玻璃电极；
二、制备泡囊溶液：将棕榈酰油酰磷脂酰胆碱加入到氯仿中，得到浓度为5mg/mL的磷脂溶液，将两片清洗后的ITO玻璃电极表面分别涂覆5μL～7μL浓度为5mg/mL的磷脂溶液，待氯仿挥发后，得到两片表面覆有磷脂的ITO玻璃电极，将聚四氟乙烯矩形框置于两片表面覆有磷脂的ITO玻璃电极中间，得到电形成装置，且聚四氟乙烯矩形框与两片表面覆有磷脂的ITO玻璃电极形成中间空腔，中间空腔内灌注填充液，在两片表面覆有磷脂的ITO玻璃电极上分别连接信号发生器，设定交流电压为5V，设定频率为10Hz，时间控制为4h，得到泡囊溶液；
所述的填充液为水、糖或水溶性药物；
所述的水溶性药物为5-氟尿嘧啶的水溶液；所述的5-氟尿嘧啶的水溶液浓度为0.15μmol/L～77μmol/L；
三、制备磷脂泡囊-聚多巴胺复合体：称取多巴胺固体溶解于pH＝8.5的Tris-HCl 缓冲溶液中，得到浓度为2mg/mL的多巴胺溶液,将浓度为2mg/mL的多巴胺溶液与泡囊溶液混合，得到反应液，将反应液置于温度为40℃下反应4h，得到最终产物，在转速为4000rpm的条件下，将最终产物离心5min～7min，移除浑浊上层液，用蒸馏水清洗下层固体，再离心，最后将离心产物清洗3次，得到磷脂泡囊-聚多巴胺复合体，即完成一种酸度可控的药物载体的制备方法；
所述的浓度为2mg/mL的多巴胺溶液与泡囊溶液的体积比为1:10。
2.根据权利要求1所述的一种酸度可控的药物载体的制备方法，其特征在于步骤一中将两片ITO玻璃电极先用无水乙醇超声清洗15min，再用蒸馏水超声清洗15min。
3.根据权利要求1所述的一种酸度可控的药物载体的制备方法，其特征在于步骤二中将两片清洗后的ITO玻璃电极表面分别涂覆5μL浓度为5mg/mL的磷脂溶液。
4.根据权利要求1所述的一种酸度可控的药物载体的制备方法，其特征在于步骤三中在转速为4000rpm的条件下，将最终产物离心5min。
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