CN109463751A - 一种辅酶q10脂质体的保健食品的制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明属于保健食品技术领域，具体涉及一种辅酶Q10脂质体的保健食品及其制备方法。所述辅酶Q10脂质体是一种液体口服保健品，辅酶Q10、卵磷脂、胆固醇、吐温‑80和VE乙酸酯用乙醇加热溶解，减压蒸发形成光滑的薄膜；经真空干燥后加入聚乙烯吡咯烷酮和甘油，加入水相介质水化薄膜得到乳化液体，超声乳液得到粒径为纳米级的辅酶Q10脂质体；其中辅酶Q10的浓度可达到30‑40mg/mL。本发明通过将辅酶Q10包裹在脂质体中，可以解决辅酶Q10液体口服液不稳定的缺点，并且能增强辅酶Q10在体内的生物利用率，实现辅酶Q10的被动靶向作用。制得的辅酶Q10脂质体具有提高人体免疫力、增强抗氧化和延缓衰老等功能。

Description

一种辅酶Q10脂质体的保健食品的制备方法
技术领域
本发明属于保健食品技术领域，具体涉及一种辅酶Q10脂质体的保健食品及其制备方法。
背景技术
辅酶Q10又称泛醌，存在任何细胞的线粒体中，在人体细胞能量的制造与输送中扮演相当重要的角色。辅酶Q10是近年来的国际研究热点，是人体细胞中重要的生化辅酶之一，具有增强免疫力、抗氧化、辅助降血脂、缓解体力疲劳等多种功能。在细胞线粒体呼吸链中，辅酶Q10接受黄素蛋白和铁硫蛋白复合物传递来的氢而被还原成氢醌型，该还原体可再将电子传递给细胞色素系统，将质子留在环境中，而本身又被氧化成醌型辅酶。作为呼吸链中的递氢体，为线粒体合成三磷腺苷的必要成分，同时它还是线粒体氧化磷酸化反应中几种重要酶的辅助成分，能阻止合成代谢所需物质的减少，激活细胞的呼吸功能。因此，辅酶Q10在细胞能量生成、增强生物体活力方面可作为一种潜在的功能性药物或保健食品添加剂。
但是，辅酶Q10属于脂溶性物质，不溶于水，容易团聚，出现重结晶，在体内吸收率较低。尽管与含有脂肪的膳食一同食用，其在肠道中的吸收仍很慢，口服生物利用度较低。因此，如何有效提高辅酶的体内生物利用度已成为国内外近年来研究的热点。
脂质体是利用磷脂双分子层膜所形成的囊泡，其能包裹药物分子而形成一种定向药物载体，是靶向给药系统的一种新剂型。它是将溶液或溶液中的活性物质包埋在直径为纳米级的微粒中。目前，脂质体的主要原料为磷脂，磷脂是构成脂质体的主要化学成分，其中最具有代表性的是卵磷脂。胆固醇也是脂质体另一个重要组成成分，它本身并不形成膜结构，但是能够以一定的摩尔比插入磷脂膜中。加入胆固醇可以改变脂膜的相变温度，从而影响膜的通透性和流动性，增加磷脂膜的稳定性。磷脂分散在水中时能形成多层微囊，且每层均为脂质双分子层，各层之间被水相隔开，这种微囊就是脂质体。
将辅酶Q10制成脂质体，更易于人体的吸收，可以提高辅酶Q10的生物利用度和稳定性。但高浓度辅酶Q10脂质体制备过程中存在包封率低、粒径过小、存储过程中出现颗粒聚沉等问题。
发明内容
本发明的目的是提供一种辅酶Q10脂质体的保健食品及其制备方法，本发明制备的辅酶Q10脂质体能够提高辅酶Q10的生物利用度，通过优化制备方法解决了高浓度辅酶Q10脂质体制备过程中存在包封率低、粒径过小、存储过程中出现颗粒聚沉等问题。
本发明是通过如下技术方案实现上述目的的，一种辅酶Q10脂质体的制备方法，包括以下步骤：
按配方称取辅酶Q10，卵磷脂，胆固醇，吐温-80和VE乙酸酯倒入圆底烧瓶中，用乙醇加热溶解，水浴减压蒸发形成光滑的薄膜，真空干燥后加入表面活性剂聚乙烯吡咯烷酮(PVP)和保护剂甘油，加入水相介质水浴水化薄膜得到乳化液体，通过超声乳液得到粒径为纳米级的辅酶Q10脂质体。
优选的，所述辅酶Q10脂质体中辅酶Q10的质量浓度为30-40mg/mL，优选为40mg/mL，卵磷脂的质量浓度为75-150mg/mL，胆固醇的质量浓度为18-36mg/mL，卵磷脂和胆固醇的质量比为25：6；吐温-80的体积浓度为2％-2.5％(100v份的辅酶Q10脂质体中，加入2v-2.5v份的吐温-80)，VE乙酸酯的质量浓度为4-15mg/mL。
优选的，所述卵磷脂为大豆卵磷脂或蛋黄卵磷脂；所述大豆卵磷脂中磷脂酰胆碱的重量含量为90％-98％；蛋黄卵磷脂中磷脂酰胆碱的重量含量为60％；实验证明包载高浓度的辅酶Q10，需要提高载体卵磷脂中磷脂酰胆碱的含量，大豆卵磷脂中磷脂酰胆碱的重量含量为90％-98％，蛋黄卵磷脂中磷脂酰胆碱的重量含量为60％。
优选的，所述乙醇为无水乙醇。
优选的，所述乙醇加热溶解温度为45℃，溶解时间为30min，水浴减压蒸发温度为45℃。
优选的，所述真空干燥温度为60℃，时间为120min。
优选的，所述表面活性剂聚乙烯吡咯烷酮在纳米级的辅酶Q10脂质体的质量浓度为2mg/mL，聚乙烯吡咯烷酮在脂质体表面高度修饰，可以减少脂质体的聚集。
优选的，所述甘油在纳米级的辅酶Q10脂质体的体积浓度为3％(v/v)；即100v份的辅酶Q10脂质体中加入3v份的甘油；甘油作为保护剂，加入甘油，可以减少脂质体的聚沉，延长脂质体的保质期。
优选的，所述水相介质是根据中国药典2000版标准配制的磷酸盐缓冲溶液，pH值6.5-7.4，优选7.2。
优选的，所述水浴水化温度为45℃，并加入适量4-5mm的玻璃珠(20ml份水相介质中加入30-40颗玻璃珠)；加入玻璃珠可以缩短水化时间，获得粒径更加均匀的脂质体。
优选的，所述超声时采用冰浴超声。
优选的，所述超声功率为400W-500W，工作时间5min(工作1s/间歇1s)。
本发明具有如下优点：
(1)本发明所包载的辅酶Q10的浓度可达到40mg/mL。
(2)采用磷脂酰胆碱含量高的卵磷脂制备脂质体，可以解决辅酶Q10脂质体粒径过小的问题。
(3)加入吐温-80，可以提高辅酶Q10脂质体的包封率。
(4)加入保护剂甘油，可以改善辅酶Q10脂质体在存储过程中聚沉问题。
附图说明
图1大豆卵磷脂制备的辅酶Q10脂质体的粒径和PDI图。
图2蛋黄卵磷脂制备的辅酶Q10脂质体的粒径和PDI图。
图3大豆卵磷脂和蛋黄卵磷脂制备的辅酶Q10脂质体的包封率图。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚明了，下面结合具体实施方式，对本发明进一步详细说明。应该理解，这些描述只是示例性的，而并非要限制本发明的范围。
实施例1
不同磷脂酰胆碱含量的大豆卵磷脂制备的辅酶Q10脂质体
1实验材料
2实验方法
1)辅酶Q10脂质体的制备
将1.5g不同磷脂酰胆碱含量的大豆卵磷脂，0.36g胆固醇，800mg辅酶Q10，400mg吐温-80和80mg VE乙酸酯溶于无水乙醇中，加热60℃溶解，45℃水浴减压蒸发形成光滑的薄膜，加入20mL水相介质PBS(pH＝7.2)和30-40颗4-5mm的玻璃珠，45℃水浴水化薄膜得到乳化液体，将乳化液体进行冰浴超声，超声功率为400W，工作时间为5min(工作1s/间歇1s)，通过超声乳液得到粒径为纳米级的辅酶Q10脂质体。
2)粒径和多分散系数PDI的测定
用美国布鲁克海文仪器公司产的，型号为BI-9000的高浓度激光粒度仪测定辅酶Q10脂质体的粒径和多分散系数(PDI)值，所测样品放入样品池直接测量即可。多分散系数(PDI)直接反映脂质体的稳定性，因此是主要参考指标，脂质体的PDI在0～0.3范围内属于最好，在0.3～0.7范围内还可以，当PDI＞0.8时，不予考虑。
表1不同磷脂酰胆碱含量的大豆卵磷脂制备的辅酶Q10脂质体
大豆卵磷脂中的磷脂酰胆碱含量对于辅酶Q10脂质体的制备是个重要指标，包封高浓度的辅酶Q10，提高载体大豆卵磷脂的质量浓度无法成功制备平均粒径100nm左右的辅酶Q10脂质体，所制备的脂质体粒径过小。采用高磷脂酰胆碱含量的大豆卵磷脂可以较好的解决这个问题。吐温-80可以较好的提高辅酶Q10脂质体的包封率。脂质体在储备过程中易出现聚集、聚沉现象，表面活性剂PVP和保护剂甘油的加入可以延缓脂质体的聚沉。
实施例2大豆卵磷脂制备的辅酶Q10脂质体
1实验材料
2实验方法
1)辅酶Q10脂质体的制备
将1.5g大豆卵磷脂(磷脂酰胆碱含量为90％)，0.36g胆固醇，800mg辅酶Q10，400mg吐温-80和80mg VE乙酸酯溶于无水乙醇中，加热60℃溶解，45℃水浴减压蒸发形成光滑的薄膜，加入20mL水相介质PBS(pH＝7.2)和30-40颗粒径为4-5mm的玻璃珠，45℃水浴水化薄膜得到乳化液体，将乳化液体进行冰浴超声，超声功率为400W，工作时间为5min(工作1s/间歇1s)，通过超声乳液得到粒径为纳米级的辅酶Q10脂质体。
2)粒径和多分散系数PDI的测定
用美国布鲁克海文仪器公司产的，型号为BI-9000的高浓度激光粒度仪测定辅酶Q10脂质体的粒径和多分散系数(PDI)值，所测样品放入样品池直接测量即可。多分散系数(PDI)直接反映脂质体的稳定性，因此是主要参考指标，脂质体的PDI在0～0.3范围内属于最好，在0.3～0.7范围内还可以，当PDI＞0.8时，不予考虑。结果如图1所示，由大豆卵磷脂制备的辅酶Q10脂质体的平均粒径为115.1nm，PDI为0.561，由此可见，辅酶Q10脂质体的粒径较均一，稳定性较可以。
实施例3蛋黄卵磷脂制备的辅酶Q10脂质体
1实验材料
2实验方法
1)辅酶Q10脂质体的制备
将3.0g蛋黄卵磷脂(磷脂酰胆碱含量为60％)，0.72g胆固醇，800mg辅酶Q10，500mg吐温-80和300mg VE乙酸酯溶于无水乙醇中，加热60℃溶解，45℃水浴减压蒸发形成光滑的薄膜，60℃真空干燥2h，加入40mg表面活性剂PVP和3％保护剂甘油，加入20mL水相介质PBS(pH＝7.2)和适量4-5mm的玻璃珠，45℃水浴水化薄膜得到乳化液体，将乳化液体进行冰浴超声，超声功率为500W，工作时间为5min(工作1s/间歇1s)，通过超声乳液得到粒径为纳米级的辅酶Q10脂质体。
采用的蛋黄卵磷脂的磷脂酰胆碱含量比大豆卵磷脂低，通过提高蛋黄卵磷脂的用量可以成功制备辅酶Q10脂质体。
2)粒径和多分散系数PDI的测定
用美国布鲁克海文仪器公司产的，型号为BI-9000的高浓度激光粒度仪测定辅酶Q10脂质体的粒径和多分散系数(PDI)值，所测样品放入样品池直接测量即可。多分散系数(PDI)直接反映脂质体的稳定性，因此是主要参考指标，脂质体的PDI在0～0.3范围内属于最好，在0.3～0.7范围内还可以，当PDI＞0.8时，不予考虑。结果如图2所示，由蛋黄卵磷脂制备的辅酶Q10脂质体的平均粒径为165.4nm，PDI为0.136，由此可见，辅酶Q10脂质体的粒径较均一，稳定性较好。
实施例4脂质体包封率及辅酶Q10生物利用率的测定
1)包封率的测定
1.1总含量的测定
取1mL纳米脂质体组合物于试管中，加入3mL甲醇漩涡震荡30s，再加入2mL正己烷震荡3min，然后于2000r/min离心5min，取上层正己烷液，重复操作两次，合并正己烷液，用氮气吹干后用乙醇定容至5mL。用高效液相色谱法(HPLC)测定其峰面积，根据标准曲线计算浓度。
1.2游离含量的测定
取1mL纳米脂质体组合物于试管中，加入5mL正戊烷漩涡震荡3min，然后于2000r/min离心5min，取上层正戊烷液，重复操作两次，合并正戊烷液，用氮气吹干后用乙醇定容至1mL。用HPLC法测定峰面积，根据标准曲线计算浓度。
测定结果如图3所示，大豆卵磷脂和蛋黄卵磷脂的包封率均大于60％，由于蛋黄来源的不饱和脂肪酸含量比大豆来源的低20％，所以蛋黄制备的脂质体的包封率略高于大豆。
2)辅酶Q10生物可给率的测定
取1.5mL样品与13.5mL生理盐水(含140mmol/L，5mmol/L KCl，150μmol/L BHT混合，搅拌10min至均匀。用HCl溶液将体系pH调至2.0，并加入1mL浓度为3.2g/L的胃蛋白酶，模拟胃液消化1h。然后，用NaOH溶液将体系pH调至7.5，并加入4.5mL肠液消化液(含4.76g/L胰酶和5.16g/L脱氧胆酸钠)，模拟肠液消化2h。整个实验过程在氮气氛围下进行，体系的温度被恒定在37℃，并持续搅拌。
将消化后的样品全部转移至离心管中，并在4℃下10000r/min离心30min。样品被分成两部分，上层为载有营养素的透明胶束层，下层则为未消化的样品、胆酸盐以及游离脂肪酸形成的致密不容物。检测胶束层中Q10的含量，按下式计算其胶束化率和生物可给率。
表1辅酶Q10脂质体的生物利用率
将辅酶Q10制备成脂质体，可以提高其生物利用率，由于大豆卵磷脂的生物相容性更好，所以由其制成的脂质体更易被人体吸收，从而辅酶Q10的生物利用率比蛋黄卵磷脂制备的脂质体的生物利用率略高。
尽管已经详细描述了本发明的实施方式，但是应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围的情况下，可以对本发明的实施方式做出各种改变、替换和变更。

Claims (10)

1.一种辅酶Q10脂质体的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
称取辅酶Q10，卵磷脂，胆固醇，吐温-80和VE乙酸酯用乙醇加热溶解，水浴减压蒸发形成光滑的薄膜；薄膜经真空干燥后加入聚乙烯吡咯烷酮和甘油，加入水相介质水浴水化薄膜得到乳化液体，通过超声乳液得到粒径为纳米级的辅酶Q10脂质体。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述辅酶Q10脂质体中辅酶Q10的质量浓度为30-40mg/mL。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：所述卵磷脂为大豆卵磷脂或蛋黄卵磷脂；所述大豆卵磷脂中磷脂酰胆碱的重量含量为90％-98％；蛋黄卵磷脂中磷脂酰胆碱的重量含量为60％。
4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：所述卵磷脂的质量浓度为75-150mg/mL，胆固醇的质量浓度为18-36mg/mL；吐温-80的体积浓度为2％-2.5％，VE乙酸酯的质量浓度为4-15mg/mL。
5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：所述聚乙烯吡咯烷酮在纳米级的辅酶Q10脂质体的质量浓度为2mg/mL；所述甘油在纳米级的辅酶Q10脂质体的体积浓度为3％。
6.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：所述乙醇加热溶解温度为45℃，溶解时间为30min，水浴减压蒸发温度为45℃。
7.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：所述真空干燥温度为60℃，时间为120min。
8.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：所述水相介质是根据中国药典2000版标准配制的磷酸盐缓冲溶液，pH值6.5-7.4。
9.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：所述水浴水化温度为45℃，并加入适量4-5mm的玻璃珠。
10.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：所述超声时采用冰浴超声，所述超声功率为400W-500W，工作时间5min，超声过程中每工作1s间歇1s。
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Denomination of invention: A preparation method of coenzyme Q10 liposome health food

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Denomination of invention: Preparation method of a health food containing coenzyme Q10 liposomes

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