CN101849991B - 一种辛夷挥发油纳米脂质体冻干粉及其温敏型辛夷纳米凝胶和制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种辛夷挥发油纳米脂质体冻干粉，所述的纳米脂质体冻干粉是由以下方法制备得到：A，取辛夷挥发油，用高压均质法制备得到辛夷挥发油纳米脂质体：B，将步骤A得到的辛夷挥发油纳米脂质体用冷冻干燥法制备辛夷挥发油纳米脂质体冻干粉；所述的步骤B中冷冻干燥法中选用的脂质体冻干保护剂是浓度为10％～15％的甘露醇。本发明还提供了温敏型辛夷纳米凝胶和制备方法。本发明创新性的采用冷冻干燥技术，将辛夷挥发油纳米脂质体制成冻干粉，以提高药物的稳定性，便于脂质体大量制备和长期保存。

Description

一种辛夷挥发油纳米脂质体冻干粉及其温敏型辛夷纳米凝胶和制备方法

【技术领域】

本发明涉及一种脂质体冻干粉，具体地说，是关于一种辛夷挥发油纳米脂质体冻干粉及其温敏型辛夷纳米凝胶和制备方法。

【背景技术】

辛夷为木兰科植物望春花、玉兰或武当玉兰的干燥花蕾，有祛风发散、通鼻窍之功效。主要用于风寒头痛、鼻塞、鼻渊、鼻流浊涕等。研究证明，辛夷挥发油是其有效成分之一，具有广泛的药理活性，如抗炎、抗过敏、抗组胺和肥大细胞膜稳定作用等，但传统中药制剂中挥发油类成分易挥发，稳定性差，导致其临床疗效的不确定性。

目前常用的辛夷滴鼻剂有滴通鼻炎水、鼻炎滴剂等。此类滴鼻剂制作工艺简单，疗效比较局限，药物易挥发，稳定性较差、科技含量不高，缺乏系统深入的研究，这一切都限制了辛夷在临床上的推广应用。

本发明的课题组前期研究已经成功制备出辛夷挥发油纳米脂质体，但是液态脂质体的贮存稳定性较差。在贮存过程中极易发生团聚、融合及药物渗漏，且主要膜材磷脂易氧化、水解，难以满足药物制剂稳定性的要求，同时由于温度、光线等影响产生乳析、凝聚、融合、粒径变大等现象，这些变化都对脂质体的应用产生负面的效应，使应用受到了很大限制。为此，必须采用适当的方法来处理液态脂质体来提高其贮存稳定性。

【发明内容】

本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供一种辛夷挥发油纳米脂质体冻干粉。

本发明的再一的目的是，提供一种温敏型辛夷纳米凝胶。

本发明的另一的目的是，提供辛夷挥发油纳米脂质体冻干粉制备方法。

本发明的第四个目的是，提供温敏型辛夷纳米凝胶制备方法。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案是：

一种辛夷挥发油纳米脂质体冻干粉，所述的纳米脂质体冻干粉是由以下方法制备得到：

A，取辛夷挥发油，用高压均质法制备得到辛夷挥发油纳米脂质体；

B，将步骤A得到的辛夷挥发油纳米脂质体用冷冻干燥法制备辛夷挥发油纳米脂质体冻干粉；

所述的步骤B中冷冻干燥法中选用的脂质体冻干保护剂是浓度为10％～15％的甘露醇。

所述的步骤A中，高压均质法中用的均质机的操作条件如下：压力：200、400、600、800bar各循环均质15min；温度：4～7℃。

为实现上述第二个目的，本发明采取的技术方案是：

一种温敏型辛夷纳米凝胶，所述的温敏型辛夷纳米凝胶是由以下方法制备得到：

A，取辛夷挥发油，用高压均质法制备得到辛夷挥发油纳米脂质体；

B，将步骤A得到的辛夷挥发油纳米脂质体用冷冻干燥法制备辛夷挥发油纳米脂质体冻干粉；

C，配制P188-F127溶液，将P188-F127溶液溶于水中，加入辛夷挥发油纳米脂质体冻干粉，得到温敏型辛夷纳米凝胶；

所述的步骤B中冷冻干燥法中选用的脂质体冻干保护剂是浓度为10％～15％的甘露醇。

所述的步骤C中所述的P188-F127溶液是在22.46％F127+2.6％P188浓度下配出的凝胶溶液。

为实现上述第三个目的，本发明采取的技术方案是：

一种辛夷挥发油纳米脂质体冻干粉制备方法，包括以下步骤：

A，取辛夷挥发油，用高压均质法制备得到辛夷挥发油纳米脂质体；

B，将步骤A得到的辛夷挥发油纳米脂质体用冷冻干燥法制备辛夷挥发油纳米脂质体冻干粉；

所述的步骤A中，高压均质法中用的均质机的操作条件如下：压力：200、400、600、800bar各循环均质15min；温度：4～7℃，

所述的步骤B中冷冻干燥法中选用的脂质体冻干保护剂是浓度为10％～15％的甘露醇。

为实现上述第四个目的，本发明采取的技术方案是：

一种温敏型辛夷纳米凝胶制备方法，包括以下步骤：

A，取辛夷挥发油，用高压均质法制备得到辛夷挥发油纳米脂质体；

B，将步骤A得到的辛夷挥发油纳米脂质体用冷冻干燥法制备辛夷挥发油纳米脂质体冻干粉；

C，配制P188-F127溶液，将P188-F127溶液溶于水中，加入辛夷挥发油纳米脂质体冻干粉，得到温敏型辛夷纳米凝胶；

所述的步骤A中，高压均质法中用的均质机的操作条件如下：压力：200、400、600、800bar各循环均质15min；温度：4～7℃，

所述的步骤B中冷冻干燥法中选用的脂质体冻干保护剂是浓度为10％～15％的甘露醇，

所述的步骤C中所述的P188-F127溶液是在22.46％F127+2.6％P188浓度下配出的凝胶溶液。

本发明优点在于：

1，本发明创新性的采用冷冻干燥技术，将辛夷挥发油纳米脂质体制成冻干粉，以提高药物的稳定性，便于脂质体大量制备和长期保存。

2，将温敏型高分子材料泊洛沙姆407(F127)和泊洛沙姆188(P188)引入鼻腔给药系统，制成温敏型辛夷纳米凝胶，不仅具有一般鼻用制剂的优点，还可以明显延长药物在鼻腔的滞留时间，提高药物疗效。

3，研究了制备工艺，确定了温敏型辛夷纳米凝胶的制备处方。制备的辛夷纳米冻干粉质地疏松，加去离子水后迅速溶解，很快恢复药液的原有特性，有利于药品的长期贮存，与水剂相比，稳定性有显著优势。去离子水复溶后脂质体平均粒径为92nm，包封率为75.2％。辛夷纳米冻干粉经本研究制备的温敏型分散液复溶后，在室温下为自由流动的液体，给药后在鼻腔温度(34℃)下形成半固体凝胶。

4，采用Franz扩散池法考察温敏型辛夷纳米凝胶的体外释药过程，12小时持续研究发现，该制剂与辛夷挥发油相比较，具有明显的缓释效应。

采用大鼠在体鼻腔滞留法考察温敏型辛夷纳米凝胶的鼻腔吸收规律，结果表明该制剂的吸收符合一级动力学方程，显示该制剂鼻腔滞留时间为2小时，具有缓释效应。

【附图说明】

图1：Tween-80加入量对脂质体粒径的影响。

图2：胆酸钠加入量对脂质体粒径的影响。

图3：胆固醇加入量对脂质体粒径的影响。

图4：辛夷挥发油加入量对脂质体粒径的影响。

图5：甘露醇加入量对脂质体粒径的影响。

图6：压力对脂质体粒径的影响。

图7：脂质体透射电镜照片。

图8：冻干粉复溶后脂质体透射电镜照片。

图9：温敏型辛夷纳米凝胶制备的技术路线。

【具体实施方式】

下面结合附图对本发明提供的具体实施方式作详细说明。

实施例1

辛夷挥发油纳米脂质体冻干粉的制备及性能考察

一，仪器与试剂

1，仪器

实验仪器：详见表1

表1实验仪器

2，试剂

实验原料：详见表2。

表2原料的性质及来源

二，冻干保护剂的筛选

液态脂质体是一种混悬态乳剂，在贮存过程中会发生凝聚、融合并导致其包容药物的泄漏。所以冻干保护至关重要。

为了研究不同保护剂、不同保护剂浓度在冻干过程中对脂质体粒径的影响，找到对脂质体保护效果较好的保护剂及其浓度，初步选定甘露醇、海藻糖、葡萄糖、蔗糖为冻干保护剂，并分别以5％，10％，15％浓度进行冷冻干燥研究，所得冻干样品形态如表3：

表3脂质体冻干保护剂

表3显示，海藻糖、葡萄糖及蔗糖对辛夷挥发油纳米脂质体冻干的保护效果较差，浓度为10％～15％的甘露醇对脂质体冻干有较好的保护作用。

三，辛夷挥发油纳米脂质体制备方法的选择

纳米脂质体的制备方法很多，主要有逆相蒸发法、薄膜分散法、乙醇注入法、乙醚注入法等。前期研究尝试了几种制备方法，通过比较其包封率最终选定一种包封率最高的制备方法，即薄膜分散-超声-膜过滤法。通过薄膜分散法制备的辛夷挥发油脂质体混悬液，经过探针超声和水浴超声两次超声，再经过一次滤膜过滤，既满足制备的混悬液的稳定性和纯度及制备的参量的可控性，同时使粒径的分布更窄，体系更稳定。

A薄膜分散-超声-膜过滤法：

薄膜分散-超声-膜过滤法制备的脂质体经过冻干、复溶后，经检测，粒径过大(1090nm)。故应选择其它制备方法。

B高压均质法：

(1)实验方法

称取一定量的脂材(大豆卵磷脂∶胆固醇比为6∶1)、辛夷挥发油、去氧胆酸钠、吐温-80，按照40∶3∶10∶10(质量比)的比例溶于适量无水乙醇中，在超声波中溶解；称取总处方量2倍的甘露醇，溶于一定体积的去离子水中，用磁力搅拌器搅拌，同时将混合液以缓慢流速滴加入搅拌的三叶烧杯中，滴完后用真空泵抽真空2-3h，在低温冷却液循环泵中进行操作，得半透明状溶液。即得辛夷挥发油纳米脂质体混悬液。将混悬液放入冰箱中在-20℃下预冻12h，然后放入冷冻干燥机制成冻干粉备用。

①「察吐温-80(Tween-80)对脂质体粒径的影响

表面活性剂的作用是降低水的表面张力，从而可以提高纳米粒子的分散稳定性。另一方面，表面活性剂能增加药物的亲水性，有助于药物的释放。本实验以Tween-80为分散剂，研究了Tween-80对制备微球粒径的影响。结果发现Tween-80对该悬浮体系有较好的分散稳定性。本组实验中，保持脂材(大豆卵磷脂∶胆固醇比为6∶1)、辛夷挥发油、去氧胆酸钠按照40∶3∶10(质量比)不变，进一步考察了Tween-80用量的变化对脂质体粒径的影响，结果如图1所示。结果显示：随着表面活性剂加入量的增大，脂质体粒径开始向小粒子方向移动，但继续加入表面活性剂，粒子的粒径又向大粒子方向移动。分析认为Tween-80是一种非离子表面活性剂，其分子量为1309，这种分子结构在脂质体的形成过程中起到空间位阻作用，所以很好地降低了脂质体的粒径，提高了脂质体的分散稳定性。但随着加入量的增加，表面活性剂可能又与脂质体微球产生一定的物理结合，连接在脂质体微球上，使粒径又向大粒子方向移动。由此可见，表面活性剂的最佳加入量为脂材∶表面活性剂＝4∶1(质量比)。

②考察胆酸钠对脂质体粒径的影响

柔性纳米脂质体是在脂质体的双分子层中加入附加剂制备而成，它具有柔性和形变性。研究表明，由磷脂和适当的表面活性剂制备得到的柔性脂质体(或称为传递体)具有充分的柔性，可以发生形变，能通过比它自身小得多的孔道，具有更好的生物通透性。

去氧胆酸钠是一种表面活性剂，它能增加脂质体的柔性。作为柔性脂质体，与普通刚性脂质体不同，它易受渗透压的影响，并被挤入透过黏膜，提高了吸收率。本组实验中，保持脂材(大豆卵磷脂∶胆固醇比为6∶1)、辛夷挥发油、Tween-80按照40∶3∶10(质量比)不变，进一步考察去氧胆酸钠用量的变化对脂质体粒径的影响，结果图2所示。脂质体的粒径随着胆酸钠含量的增加，先降低后升高，这是因为部分脂质体会因为胆酸钠的量的增加而破坏，黏附在其他脂质体表面，使粒径反而增加。综合考虑，脂材∶胆酸钠为4∶1。

③考察脂材大豆卵磷脂∶胆固醇的比例对脂质体粒径的影响

脂质体的主要组分为磷脂和胆固醇，最常用的磷脂酰胆碱又称卵磷脂，是人体细胞膜的主要成分之一。本课题选用卵磷脂含量较高的大豆卵磷脂。胆固醇是脂质膜的形成成分之一，跟磷脂的极性键相结合，可增加脂质体膜的抗氧化作用，具有调节脂质膜流动性的作用。本组实验中，保持辛夷挥发油∶去氧胆酸钠∶Tween-80按照3∶10∶10(质量比)不变，进一步考察脂材(大豆卵磷脂∶胆固醇)的变化对脂质体粒径的影响，保持卵磷脂加入量不变，分别考察大豆卵磷脂∶胆固醇＝4∶1、5∶1、6∶1、7∶1时粒径变化。结果如图3所示。随着胆固醇用量的增加，脂质体粒径相应变大。这是因为胆固醇对脂质体膜的通透性具有双向调节作用。考虑到成膜，选择合适的比例为大豆卵磷脂∶胆固醇＝6∶1。

④考察辛夷挥发油对脂质体粒径的影响

本组实验中，保持脂材(大豆卵磷脂∶胆固醇比为6∶1)、去氧胆酸钠、Tween-80按照4∶1∶1(质量比)不变，进一步考察辛夷挥发油用量的变化对脂质体粒径的影响，结果如图4所示。脂质体粒径随着辛夷油含量增大有增大的趋势，但变化不明显，而且增加辛夷挥发油量会使其包封率相应增加，综合考虑，脂材∶辛夷挥发油为40∶3。

⑤考察甘露醇对脂质体粒径的影响

在冻干过程中，冰晶的形成、渗透压的改变、相分离及相转变等因素均可导致脂质体膜折叠、融合、破裂及药物渗漏等，所以在脂质体冷冻干燥过程中，冻干保护剂的选择尤为重要。它不仅起到冻干制剂的骨架作用，而且能促进前体脂质体在水中的再分散。经过前期实验，选用甘露醇作为冻干保护剂。本组实验中，保持脂材(大豆卵磷脂∶胆固醇比为6∶1)、辛夷挥发油、去氧胆酸钠、吐温-80，按照40∶3∶10∶10(质量比)不变，分别考察甘露醇与总处方的比例为1∶2、1∶1、2∶1、3∶1时对脂质体粒径的影响，结果如图5所示。甘露醇需保持一定剂量才能保持脂质体的粒径。综合考虑，甘露醇与总处方的比例为2∶1。

⑥考察均质过程工艺条件对脂质体粒径的影响

(1)不同压力下，均质过程对脂质体粒径的影响如图6所示。随着压力的增大脂质体的粒径逐渐减小，但由于脂质体本身质地较软，压力过大会破坏脂质体自身结构，不利于粒径的均一、稳定。此外，在均质过程中逐渐增加压力，可以在有效保护脂质体的前提下最大限度地提高均质效果。

实验选择了均质机的最佳操作条件如下：压力：200、400、600、800bar各循环均质15min；温度：4～7℃。

(2)形貌观察

取少量辛夷挥发油纳米脂质体混悬液，滴至专用铜网上，稍干后用3％的磷钨酸负染，自然挥干后，用透射电镜观察其形貌。由透射电镜照片(图7)可见，制备的脂质体成圆形囊泡状，颗粒均匀。

(3)粒径分布

经检测，脂质体平均粒径为86.7nm。

(4)包封率测定

脂质体乳液中总的辛夷油含量测试：精密量取10ml新制备的辛夷油脂质体，加入1ml 2％曲拉通X-100破乳，然后用二氯甲烷萃取3次，装入10ml容量瓶中，用二氯甲烷定容至刻度，得到样品a；包封在脂质体内部的辛夷油含量测试：精密量取10ml新制备的辛夷油脂质体，放入离心机中，8000r离心30min，下面是白色脂质体的沉淀，上面是清夜，把上层清液去掉，用磷酸盐缓冲液定容10ml，再放入离心机8000r离心30min，去掉上层清液，取下层白色乳液加入1ml2％曲拉通X-100破乳，然后用二氯甲烷萃取3次，装入10ml容量瓶中，用二氯甲烷定容至刻度，得到样品b；分别将2个样品进行气相色谱分析，样品a的樟脑吸收峰面积为44.25176，样品b的樟脑吸收峰面积为34.80361，代入公式可得包封率为79.4％。

综上所述，通过对旋转蒸发法和高压均质法的比较研究，本课题确立了高压均质法制备辛夷挥发油纳米脂质体，其冻干粉的最佳制备处方为：吐温(Tween-80)0.4g、去氧胆酸钠0.4g、胆固醇0.23g、卵磷脂1.37g、辛夷挥发油120mg、无水乙醇100ml、T-water400ml、甘露醇4.75g。均质机的最佳操作条件为：压力200、400、600、800bar各循环均质15min；温度4～7℃。

高压均质技术在纳米制剂中的优势

纳米制剂制备的关键是控制粒子的大小和获得较窄且均匀的粒度分布。影响粒径和分布的因素很多，如处方配比、稳定剂的用量等，而采用的制备工艺和分散设备也是关键因素。许多研究表明，新型分散设备——高压均质机较传统的高速搅拌机、超声波仪、乳匀机等制备的纳米制剂中微粒粒径较小，且粒度分布均匀和稳定性好。

高压均质机在制药领域中常用于制备纳米乳剂、纳米粒、脂质体等等，制备工艺一般为先进行初乳制备，再经高压均质得到较小粒径和均匀一致的制剂。其中制备脂质体的方法不下十余种，如逆相蒸发法、乙醇注入法、薄膜分散法等，而高压均质法制备脂质体具有重现性好，可大规模生产，微粒均匀、稳定性好等优点，日益受到广泛重视。

根据所查文献，高压均质技术在制备纳米脂质体方面多用于西药如前列腺素E1，中药如槲皮素等，而在挥发油类中药中只有制备莪术油固体脂质纳米粒等，没有制备挥发油类中药纳米脂质体的记载。

四，冻干粉复溶工艺考察

本实验从水化方式、水化时间及水化介质三个方面考察了脂质体的水化工艺。

(1)水化方式考察

干态脂质体的水化主要有两种方式，即手工振荡与仪器超声两种。手工水化虽然简单易行，但不能达到干态脂质体完全水化的目的，所以本实验采用超声波振荡一定时间即可完成脂质体的水化。

(2)水化介质考察

冻干脂质体的水化介质可以是去离子水、缓冲液、生理盐水。但是由于冻干过程是水分较少的过程，其中的溶质质量不会较少，因此，为了保持冻干后各项理化性质不变，本实验选择去离子水为水化介质，这样可保持原来的PH值。

(3)水化时间考察

采用超声波振荡方法，加水后立即振荡，振荡时间分别为2、5、10min发现5min的振荡时间冻干样品分散较完全，2min的振荡时间样品中还是留有较多的大颗粒未溶解，而继续延长振荡时间也没有明显变化，所以本实验选择5min的振荡时间。

五，冻干粉复溶后形貌观察

冻干粉复溶后取少量辛夷挥发油纳米脂质体混悬液，滴至专用铜网上，稍干后用3％的磷钨酸负染，自然挥干后，用透射电镜观察其形貌。由透射电镜照片(图8)可见，脂质体颗粒分布均匀，颗粒大小未发生明显变化。

六，冻干粉复溶后粒径测定

经检测，冻干粉复溶后平均粒径92nm。

实施例2

温敏型辛夷纳米凝胶的制备

温敏型辛夷纳米凝胶的制备的技术路线见图9

一，温敏型分散液的制备

配制不同浓度的F127水溶液，P188-F127溶液(配比如表4)，装入各离心管内，并将其放入4℃的环境中，过夜，使其充分溶解。

表4 P188-F127配比

二，温敏凝胶的临界温度测定

(1)F127浓度对其自身临界温度的影响

将离心管固定在恒温水槽中，使试剂侵入水槽液面以下，进行温控升温，每次升温1℃，待温度稳定后，持续10min，然后观察是否形成凝胶，记录形成凝胶的温度，即为该样品的临界温度。

(2)P188对临界温度的影响

按照表4相应称取适量的P188及F127，配制成表中的浓度，按上述方法安排试验，测试样品临界温度。

温敏型分散液温度敏感性考察：

(1)F127浓度对其自身临界温度的影响

F127浓度16％～26％的实验结果如表5：表5F127浓度对其临界温度的影响

从表5可以得出，随着F127浓度的增加，临界温度随之下降；F127浓度小于16％将无法胶凝，当F127浓度高于24％，F127浓度—临界温度曲线趋向水平，即其临界温度将不作改变或变化很小。

(2)P188对临界温度的影响

F127浓度18％～26％，P188浓度2％～12％的实验结果如表6：

以F127浓度对临界温度影响，与空白基质相比，加入P188会使临界温度提高；并且在同一个P188浓度下，随着F127浓度的提高，临界温度随之下降，总体趋势和空白基质大体相同，当P188浓度大于10％时，F127浓度—临界温度曲线开始重合，即当P188浓度大于10％时，临界温度不再随P188浓度升高而改变。

以P188浓度对临界温度影响，在同一个F127浓度下，随着P188浓度的提高，临界温度随之升高；当P188浓度大于10％时，P188浓度—临界温度曲线趋向水平，即临界温度将不作改变或变化很小。

三，温敏型辛夷纳米凝胶的最佳制备过程

将处方量的F127、P188溶于蒸馏水中，边搅拌边加入处方量的辛夷挥发油纳米脂质体冻干粉，使其分散均匀，于4℃条件放置24小时，使凝胶充分溶胀分散均匀得到澄明的溶液，即得温敏型辛夷纳米凝胶。

综上所述，在22.46％F127+2.6％P188浓度下配出的凝胶溶液，在温度为34℃时，加入冻干粉的量不同，在5min时间都可以成为凝胶，差异不显著，加入的冻干粉剂量越小，成为凝胶的时间相应有所减少，经反复实验，性能稳定。

实施例3

温敏型辛夷纳米凝胶的体外释药考察及其比较

一，温敏型辛夷纳米凝胶的体外释药考察

采用Franz扩散池法研究药物的体外释放情况。将半透膜(截留分子量7000u)固定于Franz扩散池两池间，本实验使用的Franz扩散池的面积为0.785cm²。往给药池中准确加入温敏型辛夷纳米凝胶约1ml，使其均匀分布在半透膜的表面，放入33℃烘箱中10min使形成凝胶。将扩散池放入33℃水浴中，往接收池中加入已预热至33℃的无水乙醇5ml作为接收液，接收池中置一搅拌子以300转的转速转动，于5min、10min、20min、30min、1h、2h、4h、6h、8h、10h、12h分别取样，取出1ml介质并迅速补加等量预热的无水乙醇。样品必要时适当稀释使浓度在标准曲线的范围内，采用HPLC法测定，计算累积释放量，见表7。

表7温敏型辛夷纳米凝胶体外释药结果(mg/cm²，n＝3)

时间	5min	10min	20min	30min	1h	2h	4h	6h	8h	10h	12h
												累积释放量	1.32	1.62	1.83	2.1	2.37	2.73	3.0	3.3	3.6	3.9	4.2

由累积释放率对时间作图即可得体外释放曲线，然后可进一步拟合找出释放规律。

将样品在4℃条件下密封储存，平均分成四份，分别在不同时间考察样品释药方程，结果见表8。

表8样品体外释药动力学参数

从试验结果来看，温敏型辛夷纳米凝胶释药模式具有分段性，前30min符合Higuchi方程，以扩散过程为主，可能的原因是这段时间首先是少量游离的辛夷油扩散到外面溶液中。30min后呈现零级释药模式，说明此时的凝胶起到辛夷油的储库系统的作用，可以连续稳态释药，辛夷油通过凝胶的控释作用释放，成为整个辛夷油释药的限速步骤。温敏型辛夷纳米凝胶12小时累积释放率为14％。

避光，密封于4度冰箱条件下储存一周，二周，一月的样品和新制备的样品相比，释药模式无明显变化。

二，辛夷挥发油纳米脂质体体外释药考察

方法同上，给药池为等量的辛夷挥发油纳米脂质体，接收池为磷酸盐缓冲液。累积释放量见表9，辛夷挥发油纳米脂质体12h累积释放率为21％。

表9辛夷挥发油纳米脂质体体外释药结果(mg/cm²，n＝3)

时间	5min	10min	20min	30min	1h	2h	4h	6h	8h	10h	12h
												累积释放量	1.98	2.43	2.75	3.15	3.56	4.10	4.5	4.95	5.4	5.85	6.3

三，辛夷挥发油体外释药考察

方法同上，给药池为等量的辛夷挥发油，接收池为30％无水乙醇。辛夷挥发油12h累积释药率为46.3％。见表10

表10辛夷挥发油体外释药结果(mg/cm²，n＝3)

时间	5min	10min	20min	30min	1h	2h	4h	6h	8h	10h	12h
												累积释放量	3.78	4.86	5.22	5.58	6.09	7.23	8.85	10.23	11.64	12.87	13.89

3.3.4三组药物体外释药比较

辛夷挥发油、辛夷挥发油纳米脂质体、温敏型辛夷纳米凝胶的释药曲线比较，三组药物(辛夷挥发油、辛夷挥发油纳米脂质体、温敏型辛夷纳米凝胶)在30min内均有突释作用，其后药物的释药速度明显减慢，12h累积释药率分别为46.3％、21％、14％。由此可见，脂质体和凝胶制剂可显著降低辛夷挥发油的释药速度。在三种剂型中，药物的缓释性：温敏型辛夷纳米凝胶优于辛夷挥发油纳米脂质体，优于辛夷挥发油。进一步证实了脂质体及凝胶作为新型的药物载体，具有良好的粘附性和控缓释性。

实施例4

温敏型辛夷纳米凝胶鼻腔吸收规律的研究

一，实验动物模型及装置

选择体重200-250g的健康雄性大鼠，腹腔注射戊巴比妥钠(2％，2.5ml/kg)麻醉后，颈部切开，暴露气管和食管，向气管中插入聚乙烯套管，用直径相同的鼻腔套管由食管插向鼻腔后部，将口腔与鼻腔相连的鼻腭封闭，以防止药液从口腔流出。用一根橡胶管与插入大鼠鼻腔后部的套管相连，管子的另一端与清洗液生理盐水接触，将盛有生理盐水的容器至于约4℃的冷水浴中。本实验中采用单侧鼻腔给药，另一鼻孔用502胶封闭。给药后，药物在鼻腔中滞留一定时间，用电子蠕动泵使生理盐水从鼻孔中将药液冲出，收集清洗液，用HPLC法测定其中含药量。

二，清洗液用量的考察

为了考察洗净鼻腔内残留药物所用的清洗液量，向一侧鼻孔注入温敏凝胶溶液20ul，形成凝胶后，立刻由鼻腔套管以2ml/min的流速灌注生理盐水。经多次试验表明，5ml清洗液的回收率可达93％以上。所以本实验所需清洗液至少为5ml，可选择清洗液体积为6ml。

三，温敏型辛夷纳米凝胶鼻腔吸收规律的研究

单侧鼻腔给予温敏凝胶液10ul，滞留一定时间后，用6ml清洗液以2ml/min流速冲洗大鼠鼻腔，取滞留时间为10min、15min、20min、30min、60min、120min的清洗液，补加生理盐水至10ml。采用HPLC法测定，以外标法计算含量，即为温敏凝胶的残余量，用给药量减去残留药量即为吸收药量。见表11。采用动力学模型处理，结果表明温敏型辛夷纳米凝胶的吸收符合一级动力学过程，具有缓释效应。

表11平均吸收药量(ug，n＝3)

时间	10min	15min	20min	30min	60min	120min
							吸收药量	0.7	1.4	2.2	2.8	3.7	4.4

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员，在不脱离本发明方法的前提下，还可以做出若干改进和补充，这些改进和补充也应视为本发明的保护范围。

Claims (6)

1.一种辛夷挥发油纳米脂质体冻干粉，其特征在于，所述的辛夷挥发油纳米脂质体冻干粉是由以下方法制备得到：

A，取辛夷挥发油，用高压均质法制备得到辛夷挥发油纳米脂质体；

B，将步骤A得到的辛夷挥发油纳米脂质体用冷冻干燥法制备辛夷挥发油纳米脂质体冻干粉；

所述的步骤B中冷冻干燥法中选用的脂质体冻干保护剂是浓度为10％～15％的甘露醇。

2.根据权利要求1所述的辛夷挥发油纳米脂质体冻干粉，其特征在于，所述的步骤A中，高压均质法中用的均质机的操作条件如下：压力：200、400、600、800bar各循环均质15min；温度：4～7℃。

3.一种温敏型辛夷纳米凝胶，其特征在于，所述的温敏型辛夷纳米凝胶是由以下方法制备得到：

A，取辛夷挥发油，用高压均质法制备得到辛夷挥发油纳米脂质体；

B，将步骤A得到的辛夷挥发油纳米脂质体用冷冻干燥法制备辛夷挥发油纳米脂质体冻干粉；

C，配制泊洛沙姆188-泊洛沙姆407溶液，将泊洛沙姆188-泊洛沙姆407溶液溶于水中，加入辛夷挥发油纳米脂质体冻干粉，得到温敏型辛夷纳米凝胶；

所述的步骤B中冷冻干燥法中选用的脂质体冻干保护剂是浓度为10％～15％的甘露醇。

4.根据权利要求3所述的温敏型辛夷纳米凝胶，其特征在于，所述的步骤C中所述的泊洛沙姆188-泊洛沙姆407溶液是在22.46％泊洛沙姆407+2.6％泊洛沙姆188浓度下配出的凝胶溶液。

5.一种辛夷挥发油纳米脂质体冻干粉制备方法，包括以下步骤：

A，取辛夷挥发油，用高压均质法制备得到辛夷挥发油纳米脂质体；

B，将步骤A得到的辛夷挥发油纳米脂质体用冷冻干燥法制备辛夷挥发油纳米脂质体冻干粉；

所述的步骤A中，高压均质法中用的均质机的操作条件如下：压力：200、400、600、800bar各循环均质15min；温度：4～7℃，

所述的步骤B中冷冻干燥法中选用的脂质体冻干保护剂是浓度为10％～15％的甘露醇。

6.一种温敏型辛夷纳米凝胶制备方法，包括以下步骤：

A，取辛夷挥发油，用高压均质法制备得到辛夷挥发油纳米脂质体；

B，将步骤A得到的辛夷挥发油纳米脂质体用冷冻干燥法制备辛夷挥发油纳米脂质体冻干粉；

C，配制泊洛沙姆188-泊洛沙姆407溶液，将泊洛沙姆188-泊洛沙姆407溶液溶于水中，加入辛夷挥发油纳米脂质体冻干粉，得到温敏型辛夷纳米凝胶；

所述的步骤A中，高压均质法中用的均质机的操作条件如下：压力：200、400、600、800bar各循环均质15min；温度：4～7℃，

所述的步骤B中冷冻干燥法中选用的脂质体冻干保护剂是浓度为10％～15％的甘露醇，

所述的步骤C中所述的泊洛沙姆188-泊洛沙姆407溶液是在22.46％泊洛沙姆407+2.6％泊洛沙姆188浓度下配出的凝胶溶液。

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