CN108785128A - 一种聚丙二醇修饰的水解胶原蛋白脂质体及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于日用护理品技术领域,具体涉及一种聚丙二醇修饰的水解胶原蛋白脂质体及其制备方法。本发明采用单棕榈酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰甘油、胆固醇、去氧胆酸钠制备水解胶原蛋白脂质体薄膜,然后加入聚丙二醇的PBS缓冲溶液制备得到聚丙二醇修饰的水解胶原蛋白脂质体。本发明制备的聚丙二醇修饰的水解胶原蛋白脂质体平均粒径达到200~500nm,采用聚乙二醇修饰脂质体,大幅度提高了脂质体的稳定性,进而提高了包封率,经测试其包封率达到86%以上,且同时具备抗皱的美容功效。
Description
技术领域
本发明属于日用护理品技术领域,具体涉及一种聚丙二醇修饰的水解胶原蛋白脂质体及其制备方法。
背景技术
脂质体是一种由排列有序的磷脂双分子层组成的多层微囊结构,其结构类似生物膜。囊泡内为内水相,通常用于包裹水溶性药物的场所;磷脂双分子层为疏水层,通常用于包裹脂溶性药物。脂质体具有很多优良的性质,如降低药物毒性、提高药物的稳定性、缓释性、透皮吸收效率高、可以携带药物进入细胞等。最近,有关脂质体用于化妆品行业和食品行业的文献报道也越来越多。大部分的活性药物存在水溶性差,吸收率低,剂量低等缺点,较难普遍适用于化妆品领域。且由于人体皮肤具有天然的屏障功能,药物的透皮渗透吸收及主动吸收会受到明显的影响和制约,从而大大降低或削弱药物应具有的生物学作用和疗效。脂质体与生物膜结构类似,利用脂质体包裹技术能够增加药物进入皮肤角质层的透过量,避免药物因透过皮肤量过少而失去功效。同时脂质体能够持续停留在皮肤角质层,对表皮缓慢释放药物,提高药物的持续性功效。且脂质体本身无毒性,在体内能自主完成生物降解,也不产生皮肤刺激性,是皮肤美容及化妆品应用的理想载体。然而,现有的脂质体在体外存在易氧化、药物渗漏,脂质体颗粒间容易发生自发地聚集导致体系分层、产生沉淀等一系列热力学不稳定的问题,导致脂质体在实际应用中存在困难。此外,脂质体在储存过程中还会存在粒径增大的问题,粒径过大的脂质体难以穿透皮肤,从而使药物功效降低。
胶原蛋白是人体皮肤真皮层的主要组成部分,它具有将水分保留在真皮层的作用,并提供支持和保护,赋予皮肤弹性和强度。随着年龄的增长,肌肤中的胶原蛋白会慢慢代谢减少,此外紫外线通过表皮达到真皮层,促使胶原蛋白分解。皮肤中缺乏胶原蛋白,胶原纤维就会发生联固化,使细胞间粘多糖减少,皮肤便会失去柔软、弹性和光泽,同时真皮的纤维断裂、脂肪萎缩、汗腺及皮脂腺分泌减少,皮肤会出现色斑、皱纹等一系列老化现象。胶原蛋白的相对分子质量为30万道尔顿(D),它是由3条肽链结合而成并互相盘绕的三螺旋结构,直接应用,很难被皮肤直接吸收。胶原蛋白经过水解后形成分子量较小的水解胶原蛋白,可以更有利于胶原蛋白的皮肤吸收,化妆品中应用的水解胶原蛋白的分子量要求一般为1000-5000道尔顿(D)。试验表明,发挥最佳使用效果的平均分子量应在700-1000道尔顿(D)范围内。水解胶原蛋白可应用于各类皮肤修复医疗用品以及化妆品中,其主要生理活性表现为:1.保湿性:由于水解胶原蛋白多肽链中含有氨基、羧基和羟基等亲水基,故对皮肤具有很好的保湿作用。2.修复性:胶原蛋白在创伤愈合和组织重建过程中具有非常重要的作用,胶原蛋白能促进表皮细胞正常生长,具有独特的自动修复功能,引导上皮细胞迁入缺损区,刺激细胞分裂,其降解产物能被新生细胞利用合成新的胶原,填充在新生细胞之间的胶原能减少生长细胞的接触性抑制,促进皮肤及神经增长,并在细胞迁移时起支持和润滑作用。同时胶原贴敷料中含有的活性胶原蛋白和多种氨基酸为皮肤细胞提供营养,有利于改善表皮细胞微循环、促进皮肤的新陈代谢,从而加速组织再生和复原,促进创面上皮细胞的增生修复,修复毛囊壁的损伤,减轻毛囊壁破裂。3.去色斑作用:胶原蛋白具有使皮肤保持湿润、缓解皮肤过敏症状、促进皮肤新陈代谢,可以有效阻断过敏原自由基引起的连锁反应,从而起到清除自由基的作用,使皮肤细胞膜趋于稳定,增强皮肤的免疫体系,减少变态反应的发生。由以上论述可见水解胶原蛋白与皮肤细胞的生长、分裂、分化、增殖和迁移有关,水解胶原蛋白能够提供皮肤养分,延缓皮肤衰老,促进皮肤创面修复。实验研究和临床应用均表明,将水解胶原蛋白添加到皮肤修复用品、美容化妆品中,可以有效地与皮肤细胞发生作用,促进损伤皮肤的修复以及发挥的美容护肤功效。水解胶原蛋白发挥皮肤修复作用的前提是胶原蛋白能够透过皮肤角质层进入皮肤内部,水解胶原蛋白透皮吸收率与分子量密切相关,分子量越小,越有利于水解胶原蛋白的皮肤吸收,但分子量过小,水溶性增加,特别是游离氨基酸比例增加,则也不利于水解胶原蛋白的皮肤吸收以及功效的发挥。因此水解胶原蛋白的应用除了选择合适分子量的水解胶原蛋白外,采用透皮促渗技术促进水解胶原蛋白吸收也是研究的重点方向。
发明内容
本发明的目的是提供一种聚丙二醇修饰的水解胶原蛋白脂质体及其制备方法,采用单棕榈酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰甘油、胆固醇、去氧胆酸钠制备水解胶原蛋白脂质体薄膜,然后加入聚丙二醇的PBS缓冲溶液制备得到聚丙二醇修饰的水解胶原蛋白复合脂质体。
本发明的技术方案为:
一种聚丙二醇修饰的水解胶原蛋白脂质体的制备方法,包括以下步骤:
(1)将单棕榈酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰甘油、胆固醇、去氧胆酸钠和水解胶原蛋白置于容器中,加入氯仿和甲醇的混合溶剂,搅拌溶解均匀得到混合溶液;
(2)将混合溶液置于旋转蒸发仪旋转蒸发抽除溶剂,得到附着于器壁的水解胶原蛋白脂质体薄膜;
(3)将聚丙二醇的PBS缓冲溶液加入到步骤(2)的旋转蒸发仪中进行旋转蒸发,得到聚丙二醇修饰的水解胶原蛋白脂质体混悬液;
(4)将聚丙二醇修饰的水解胶原蛋白脂质体混悬液超声分散,然后透析除去游离的水解胶原蛋白;
(5)往步骤(4)的体系中加入冷冻干燥保护剂,预冻后冷冻干燥,得到聚丙二醇修饰的水解胶原蛋白脂质体。
优选地,步骤(2)中旋转蒸发是指在45~85℃温度并且在真空条件下旋转蒸发。
优选地,步骤(3)中旋转蒸发的温度为40~80℃。
优选地,上述聚丙二醇的PBS缓冲溶液的质量浓度为5~25%。
优选地,上述透析是指置于截留分子量为5000-15000的透析袋中透析。
优选地,上述冷冻干燥保护剂是指甘油、乳糖、蔗糖、甘露醇、葡萄糖或海藻糖中的至少一种,上述述冷冻干燥保护剂与单棕榈酰磷脂酰胆碱和二硬脂酰磷脂酰甘油的质量之和的比例为(2~18):1,上述预冻是指在-50~-100℃预冻12~24h。
上述方法制备得到的聚丙二醇修饰的水解胶原蛋白脂质体。
优选地,上述聚丙二醇修饰的水解胶原蛋白脂质体中各组分的比例为:单棕榈酰磷脂酰胆碱15~85重量份、二硬脂酰磷脂酰甘油20~60重量份、胆固醇25~100重量份、去氧胆酸钠235~498重量份、水解胶原蛋白14~99重量份、聚丙二醇376~580重量份。
本发明的有益效果如下:
本发明采用单棕榈酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰甘油、胆固醇、去氧胆酸钠制备水解胶原蛋白脂质体薄膜,然后加入聚丙二醇的PBS缓冲溶液制备得到聚丙二醇修饰的水解胶原蛋白脂质体。本发明制备的聚丙二醇修饰的水解胶原蛋白脂质体平局粒径达到200~500nm,采用聚乙二醇修饰脂质体,大幅度提高了脂质体的稳定性,进而提高了包封率,经测试其包封率达到86%以上,且同时具备抗皱的美容功效。
具体实施方式
下面结合具体实施方式,对本发明的技术方案作进一步的详细说明,但不构成对本发明的任何限制。
实施例1
一种聚丙二醇修饰的水解胶原蛋白脂质体的制备方法,包括以下步骤:
(1)将单棕榈酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰甘油、胆固醇、去氧胆酸钠和水解胶原蛋白置于容器中,加入体积比为1:1的氯仿和甲醇的混合溶剂,搅拌溶解均匀得到混合溶液;
(2)将混合溶液置于旋转蒸发仪中,50℃下真空旋转蒸发抽除溶剂,得到附着于器壁的水解胶原蛋白脂质体薄膜;
(3)将质量浓度为20%的聚丙二醇的PBS缓冲溶液加入到步骤(2)的旋转蒸发仪中,在45℃条件下进行旋转蒸发,得到聚丙二醇修饰的水解胶原蛋白脂质体混悬液;
(4)将聚丙二醇修饰的复合水解胶原蛋白脂质体混悬液超声分散30min,然后在截留分子量为6000的透析袋中透析除去游离的水解胶原蛋白;
(5)往步骤(4)的体系中加入冷冻干燥保护剂甘油,加入量为单棕榈酰磷脂酰胆碱和二硬脂酰磷脂酰甘油的质量之和的5倍,在-60℃条件下预冻20h后冷冻干燥,得到聚丙二醇修饰的水解胶原蛋白脂质体。
本实施例制备得到的聚丙二醇修饰的水解胶原蛋白脂质体中各组分的比例为:单棕榈酰磷脂酰胆碱56重量份、二硬脂酰磷脂酰甘油39重量份、胆固醇87重量份、去氧胆酸钠452重量份、水解胶原蛋白58重量份、聚丙二醇542重量份。
实施例2
一种聚丙二醇修饰的水解胶原蛋白脂质体的制备方法,包括以下步骤:
(1)将单棕榈酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰甘油、胆固醇、去氧胆酸钠和水解胶原蛋白置于容器中,加入体积比为1:1的氯仿和甲醇的混合溶剂,搅拌溶解均匀得到混合溶液;
(2)将混合溶液置于旋转蒸发仪中,65℃下真空旋转蒸发抽除溶剂,得到附着于器壁的水解胶原蛋白脂质体薄膜;
(3)将质量浓度为15%的聚丙二醇的PBS缓冲溶液加入到步骤(2)的旋转蒸发仪中,在55℃条件下进行旋转蒸发,得到聚丙二醇修饰的水解胶原蛋白脂质体混悬液;
(4)将聚丙二醇修饰的水解胶原蛋白脂质体混悬液超声分散30min,然后在截留分子量为8000的透析袋中透析除去游离的水解胶原蛋白;
(5)往步骤(4)的体系中加入冷冻干燥保护剂甘露醇,加入量为单棕榈酰磷脂酰胆碱和二硬脂酰磷脂酰甘油的质量之和的12倍,在-85℃条件下预冻15h后冷冻干燥,得到聚丙二醇修饰的复合水解胶原蛋白脂质体。
本实施例制备得到的聚丙二醇修饰的水解胶原蛋白脂质体中各组分的比例为:单棕榈酰磷脂酰胆碱73重量份、二硬脂酰磷脂酰甘油34重量份、胆固醇98重量份、去氧胆酸钠341重量份、水解胶原蛋白67重量份、聚丙二醇557重量份。
实施例3
一种聚丙二醇修饰的水解胶原蛋白脂质体的制备方法,包括以下步骤:
(1)将单棕榈酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰甘油、胆固醇、去氧胆酸钠和水解胶原蛋白置于容器中,加入体积比为1:1的氯仿和甲醇的混合溶剂,搅拌溶解均匀得到混合溶液;
(2)将混合溶液置于旋转蒸发仪中,75℃下真空旋转蒸发抽除溶剂,得到附着于器壁的水解胶原蛋白脂质体薄膜;
(3)将质量浓度为12%的聚丙二醇的PBS缓冲溶液加入到步骤(2)的旋转蒸发仪中,在65℃条件下进行旋转蒸发,得到聚丙二醇修饰的水解胶原蛋白脂质体混悬液;
(4)将聚丙二醇修饰的水解胶原蛋白脂质体混悬液超声分散30min,然后在截留分子量为9000的透析袋中透析除去游离的水解胶原蛋白;
(5)往步骤(4)的体系中加入冷冻干燥保护剂海藻糖,加入量为单棕榈酰磷脂酰胆碱和二硬脂酰磷脂酰甘油的质量之和的18倍,在-65℃条件下预冻24h后冷冻干燥,得到聚丙二醇修饰的水解胶原蛋白脂质体。
本实施例制备得到的聚丙二醇修饰的水解胶原蛋白脂质体中各组分的比例为:单棕榈酰磷脂酰胆碱82重量份、二硬脂酰磷脂酰甘油41重量份、胆固醇65重量份、去氧胆酸钠358重量份、水解胶原蛋白69重量份、聚丙二醇399重量份。
实施例4
一种聚丙二醇修饰的水解胶原蛋白脂质体的制备方法,包括以下步骤:
(1)将单棕榈酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰甘油、胆固醇、去氧胆酸钠和水解胶原蛋白置于容器中,加入体积比为1:1的氯仿和甲醇的混合溶剂,搅拌溶解均匀得到混合溶液;
(2)将混合溶液置于旋转蒸发仪中,55℃下真空旋转蒸发抽除溶剂,得到附着于器壁的水解胶原蛋白脂质体薄膜;
(3)将质量浓度为25%的聚丙二醇的PBS缓冲溶液加入到步骤(2)的旋转蒸发仪中,在50℃条件下进行旋转蒸发,得到聚丙二醇修饰的水解胶原蛋白脂质体混悬液;
(4)将聚丙二醇修饰的水解胶原蛋白脂质体混悬液超声分散30min,然后在截留分子量为12000的透析袋中透析除去游离的水解胶原蛋白;
(5)往步骤(4)的体系中加入冷冻干燥保护剂葡萄糖和甘露醇,加入量为单棕榈酰磷脂酰胆碱和二硬脂酰磷脂酰甘油的质量之和的15倍,在-95℃条件下预冻18h后冷冻干燥,得到聚丙二醇修饰的水解胶原蛋白脂质体。
本实施例制备得到的聚丙二醇修饰的水解胶原蛋白脂质体中各组分的比例为:单棕榈酰磷脂酰胆碱80重量份、二硬脂酰磷脂酰甘油29重量份、胆固醇75重量份、去氧胆酸钠403重量份、水解胶原蛋白87重量份、聚丙二醇498重量份。
实施例5
一种聚丙二醇修饰的水解胶原蛋白脂质体的制备方法,包括以下步骤:
(1)将单棕榈酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰甘油、胆固醇、去氧胆酸钠和水解胶原蛋白置于容器中,加入体积比为1:1的氯仿和甲醇的混合溶剂,搅拌溶解均匀得到混合溶液;
(2)将混合溶液置于旋转蒸发仪中,55℃下真空旋转蒸发抽除溶剂,得到附着于器壁的水解胶原蛋白脂质体薄膜;
(3)将质量浓度为25%的聚丙二醇的PBS缓冲溶液加入到步骤(2)的旋转蒸发仪中,在75℃条件下进行旋转蒸发,得到聚丙二醇修饰的水解胶原蛋白脂质体混悬液;
(4)将聚丙二醇修饰的水解胶原蛋白脂质体混悬液超声分散30min,然后在截留分子量为10000的透析袋中透析除去游离的水解胶原蛋白;
(5)往步骤(4)的体系中加入冷冻干燥保护剂蔗糖,加入量为单棕榈酰磷脂酰胆碱和二硬脂酰磷脂酰甘油的质量之和的16倍,在-80℃条件下预冻18h后冷冻干燥,得到聚丙二醇修饰的水解胶原蛋白脂质体。
本实施例制备得到的聚丙二醇修饰的水解胶原蛋白脂质体中各组分的比例为:单棕榈酰磷脂酰胆碱59重量份、二硬脂酰磷脂酰甘油45重量份、胆固醇69重量份、去氧胆酸钠412重量份、水解胶原蛋白97重量份、聚丙二醇553重量份。
性能测试
测试实施例1至5中的聚丙二醇修饰的水解胶原蛋白脂质体的粒度及包封率,具体结果如下表所示。
表1聚丙二醇修饰的水解胶原蛋白脂质体的粒度及包封率
名称 | 实施例1 | 实施例2 | 实施例3 | 实施例4 | 实施例5 |
包封率 | 86.7% | 86.9% | 88.2% | 89.1% | 91.2% |
平均粒径 | 237.5nm | 256.8nm | 245.9nm | 302.1nm | 289.7nm |
由以上实施例和对比例的测试结果可知,本发明制备的聚丙二醇修饰的水解胶原蛋白脂质体平局粒径达到200~500nm,采用聚乙二醇修饰脂质体,大幅度提高了脂质体的稳定性,进而提高了包封率,经测试其包封率达到86%以上,且同时具备抗皱的美容功效。
上述实施例为本发明较佳的实施方式,但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制,其它的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化,均应为等效的置换方式,都包含在本发明的保护范围之内。
Claims (8)
1.一种聚丙二醇修饰的水解胶原蛋白脂质体的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)将单棕榈酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰甘油、胆固醇、去氧胆酸钠和水解胶原蛋白置于容器中,加入氯仿和甲醇的混合溶剂,搅拌溶解均匀得到混合溶液;
(2)将混合溶液置于旋转蒸发仪旋转蒸发抽除溶剂,得到附着于器壁的水解胶原蛋白脂质体薄膜;
(3)将聚丙二醇的PBS缓冲溶液加入到步骤(2)的旋转蒸发仪中进行旋转蒸发,得到聚丙二醇修饰的水解胶原蛋白脂质体混悬液;
(4)将聚丙二醇修饰的水解胶原蛋白脂质体混悬液超声分散,然后透析除去游离的水解胶原蛋白;
(5)往步骤(4)的体系中加入冷冻干燥保护剂,预冻后冷冻干燥,得到聚丙二醇修饰的水解胶原蛋白脂质体。
2.根据权利要求1所述的一种聚丙二醇修饰的水解胶原蛋白脂质体的制备方法,其特征在于,步骤(2)中旋转蒸发是指在45~85℃温度并且在真空条件下旋转蒸发。
3.根据权利要求1所述的一种聚丙二醇修饰的水解胶原蛋白脂质体的制备方法,其特征在于,步骤(3)中旋转蒸发的温度为40~80℃。
4.根据权利要求1所述的一种聚丙二醇修饰的水解胶原蛋白脂质体的制备方法,其特征在于,所述聚丙二醇的PBS缓冲溶液的质量浓度为5~25%。
5.根据权利要求1所述的一种聚丙二醇修饰的水解胶原蛋白脂质体的制备方法,其特征在于,所述透析是指置于截留分子量为5000-15000的透析袋中透析。
6.根据权利要求1所述的一种聚丙二醇修饰的水解胶原蛋白脂质体的制备方法,其特征在于,所述冷冻干燥保护剂是指甘油、乳糖、蔗糖、甘露醇、葡萄糖或海藻糖中的至少一种,所述述冷冻干燥保护剂与单棕榈酰磷脂酰胆碱和二硬脂酰磷脂酰甘油的质量之和的比例为(2~18):1,所述预冻是指在-50~-100℃预冻12~24h。
7.权利要求1至6所述的任一种方法制备得到的聚丙二醇修饰的水解胶原蛋白脂质体。
8.根据权利要求7所述的一种聚丙二醇修饰的水解胶原蛋白脂质体,其特征在于,所述聚丙二醇修饰的水解胶原蛋白脂质体中各组分的比例为:单棕榈酰磷脂酰胆碱15~85重量份、二硬脂酰磷脂酰甘油20~60重量份、胆固醇25~100重量份、去氧胆酸钠235~498重量份、水解胶原蛋白14~99重量份、聚丙二醇376~580重量份。
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