CN116440081A - 一种槲皮素脂质体的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种槲皮素脂质体的制备方法，包括如下步骤：(1)将槲皮素、卵磷脂、类神经酰胺和胆固醇加入到溶剂中混合，减压旋蒸，得到油相；(2)配制PBS缓冲液，加入聚乙二醇，混合均匀得到PBS‑PEG溶液，即水相；(3)将水相加入到油相中，水浴加热，然后进行乳化，得到槲皮素脂质体。本发明得到的槲皮素脂质体粒径小且分布均一，包封率高，利于透皮吸收，具有良好的市场应用前景。
Description
技术领域
本发明属于天然植物制剂领域，特别涉及一种槲皮素脂质体的制备方法。
背景技术
槲皮素是天然植物中广泛存在的植物性黄酮醇，具有抗自由基、抗氧化、抗菌、抗病毒、抗炎过敏、防紫外线损伤、抗衰老、防晒、美白、抑制皮肤瘢痕形成等药理作用。据目前研究显示，槲皮素的毒性较低，小鼠灌胃给药LD50约为10-50g/kg，长期应用未见毒性反应以及无明显皮肤刺激作用。鉴于槲皮素广泛的潜在护肤作用，近年来，多国已将槲皮素列入化妆品原料目录。市售的含槲皮素化妆品主要是面霜、乳液、精华、爽肤水等。其中槲皮素与曲酸配伍可增强曲酸的稳定性。
然而，槲皮素的制剂学特征尚不理想，主要问题包括：槲皮素体外稳定性较差(光照不稳定、酸碱不稳定)。因此，通过使用药剂学方法，开发合适槲皮素的载体以提高其在应用中的稳定性，具有较高的潜力和价值。脂质体作为一种新型载体，具有提高其中主药的稳定性的特点。虽然关于制备槲皮素脂质体的研究已有一定的进展(CN202010879360.9、CN201110453651.2、CN201210590103.9)，但目前制备的槲皮素脂质体粒径仍然较大，粒径约为200nm，不利于透皮吸收(CN201810376603.X)。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种槲皮素脂质体的制备方法，该方法得到的槲皮素脂质体粒径小且分布均一，包封率高，利于透皮吸收，具有良好的市场应用前景。
本发明提供了一种槲皮素脂质体的制备方法，包括如下步骤：
(1)将槲皮素、卵磷脂、类神经酰胺和胆固醇加入到溶剂中混合，减压旋蒸，得到油相；
(2)配制PBS缓冲液，加入聚乙二醇，混合均匀得到PBS-PEG溶液，即水相；
(3)将水相加入到油相中，水浴加热，然后进行乳化，得到槲皮素脂质体。
所述步骤(1)中的槲皮素、卵磷脂、类神经酰胺的质量比为1-2:35-40:1-2，所述胆固醇与类神经酰胺的摩尔比为1-2:1-2。
所述类神经酰胺为Cetyl-PG羟乙基棕榈酰胺、花生四烯酰胺MEA中的一种或几种。
所述步骤(1)中的溶剂为氯仿、乙醇、乙醚中的一种或几种；所述槲皮素与溶剂的质量体积比为1-2g:200-300mL。
所述步骤(2)中的PBS缓冲液浓度为20-30mmol/L，pH值为7。
所述步骤(2)中的聚乙二醇为PEG200、PEG400中的一种或几种；所述聚乙二醇与PBS缓冲液的体积比为1-2:20-30。
所述步骤(3)中的水浴加热温度为35-40℃，时间为1-2h。
所述步骤(3)中的乳化转速为6000-8000r/min，乳化时间为30min。
所述步骤(3)中乳化后在4℃下稳定2-3h。
类神经酰胺是一类化学物质，用于治疗皮肤问题。它们通过修复皮肤组织，提高肌肤保湿能力，减少皮肤敏感性，从而改善皮肤状况。
有益效果
本发明得到的槲皮素脂质体粒径小且分布均一，包封率高，利于透皮吸收，具有良好的市场应用前景。
附图说明
图1为实施例1得到的槲皮素脂质体的粒径分布；
图2为实施例1和对比组得到的槲皮素脂质体的体外透皮吸收结果。
具体实施方式
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明讲授的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
实施例1
(1)油相部分的制备：
1、称取2g槲皮素、36g卵磷脂和2g Cetyl-PG羟乙基棕榈酰胺：胆固醇(1:1摩尔比)置于旋蒸瓶中，加入约300ml氯仿，搅拌超声溶解，至无明显固形物；
2、将旋蒸瓶置于旋蒸蒸发仪上，减压旋蒸5h，水浴温度35℃，将溶液中的氯仿旋蒸至不出溜，此时旋蒸瓶内壁有均匀膜层，即油相。
(2)水相部分的制备：
配制200ml 20mmol/L PBS缓冲液(ph7.0)，向上述溶液中加入10ml PEG400，混合均匀得到PBS-PEG溶液，即水相。
(3)乳化：
1、将上述200ml水相加入到油相中，摇晃混合，并于35℃下水浴加热旋转1h，仍有部分固体没有溶解，然后常温超声至无明显固形物，放置4℃过夜保存。
2、使用实验室型乳化机，转速为7000r/min，充分乳化约30min。最后在4℃下稳定2小时，得到槲皮素脂质体。
(4)表征：
使用1μm PES过滤器对所制备的槲皮素脂质体的样品进行过滤，较难过滤，取约2/3的样品进行5000r/min离心10min，样品出现三层(上层为透明的液体层，中间为白色乳化层，下层为黄色的固体层，分析应该是加入的槲皮素)；将样品超声混合，然后再次进行乳化约30min后，再次取样测得粒度分布，绝大部分在24nm。
将未离心的部分样品，直接取样进行表征分析，如图1所示，测得粒度分布2789nm、264.9nm、44.7nm分别占比61.7％、27.9％、10.4％。
测试例一槲皮素脂质体包封率测试
采用高效液相色谱，分别检测实施例1得到的槲皮素脂质体中游离槲皮素浓度、脂质体中槲皮素整体浓度，进而计算出槲皮素脂质体的包封率。
实验条件如下
色谱柱：苯基柱，5μm，100A；
流速：1.0ml/min；进样量：10μl；柱温：30℃；
流动相A：0.2％甲酸水、流动相B：甲醇；检测波长：360nm；
梯度洗脱条件：45％A55％B等度洗脱30min。
空白溶剂：甲醇；
对照溶液：称取10mg样品，加入10ml甲醇，振摇溶解，过滤(0.22um滤头)。
样品溶液1(槲皮素上清)：取槲皮素脂质体静置2-3天后的上清，并用甲醇稀释10倍后，超声，过滤(0.22um滤头)。
样品溶液2(槲皮素脂质体)：将静置后的脂质体，再次超声混匀，并用甲醇稀释20倍后，超声，过滤(0.22um滤头)。
通过上述条件测得槲皮素游离浓度0.13mg/ml；槲皮素脂质体整体浓度为6.49mg/ml。
脂质体包封率计算公式EN％＝(1-Cf/Ct)×100％；Cf为游离药物浓度；Ct为脂质体悬液中的药物的总量。
得出实施例1得到的槲皮素脂质体包封率为98％。
测试例二槲皮素脂质体体外透皮实验
实验组为实施例1制备得到的槲皮素脂质体，成分表如下：
| No. | 物料名称 | 所占比例(％) |
| 1 | 槲皮素 | 0.86 |
| 2 | 氢化溶血卵磷脂 | 15.57 |
| 3 | Cetyl-PG羟乙基棕榈酰胺(神经酰胺E) | 0.86 |
| 4 | 胆固醇 | 0.56 |
对比组为根据文献(Liu D,Hu H,Lin Z,et al.Quercetin deformableliposome:preparation and efficacy against ultraviolet B induced skin damagesin vitro and in vivo[J].Journal of Photochemistry and Photobiology B:Biology,2013,127:8-17)制备得到的槲皮素脂质体，成分比表如下：
| No. | 物料名称 | 所占比例(％) |
| 1 | 槲皮素 | 0.86 |
| 2 | 磷脂酰胆碱 | 16 |
| 3 | 吐温80 | 4 |
| 4 | 胆固醇 | 4 |
采用RYJ-12B型药物透皮扩散试验仪，剪取适当大小、完整的皮肤固定在扩散池，使角质层面向供给池，真皮层面向扩散池。接收室中注入生理盐水15ml，分别向供给池中加入上述脂质体各1ml，用铁夹将供给池与接收池的结合部位，保持(37.0±0.1)℃恒温水浴，磁力搅拌保持约500r·min-1，分别于平衡1h、3、5、7、9、12、24h、30h时取出接收室中全部溶液，立即再加等体积、相同温度的新鲜接收液(注意保持皮肤下层与液面紧密接触并排除所有气泡)。样液以0.22μm的微孔滤膜过滤，弃去前1mL的初虑液，精密吸取续滤液20μL，按照高效液相色谱条件测定扩散液中槲皮素的含量[乙引、刘宁.测定植物槲皮素含量的高效液相色谱法[J].植物生理学通讯,2000,36(5):445-446]。
按以下计算公式计算各时间点的单位面积累积透过量(Q，μg·cm2)
Qn为第n个取样点测得的药物质量浓度(μg/ml)；Ci为第i(i≤n一1)个取样点测得的药物质量浓度(μg/ml)；A：有效透皮面积(1.33cm2)；V为接收池中接收液体积(ml)。
结果如图2所示，由图2可以看到实施例1槲皮素脂质体体外透过率要明显高于对比组槲皮素脂质体透过率。
Claims (9)
1.一种槲皮素脂质体的制备方法，包括如下步骤：
(1)将槲皮素、卵磷脂、类神经酰胺和胆固醇加入到溶剂中混合，减压旋蒸，得到油相；
(2)配制PBS缓冲液，加入聚乙二醇，混合均匀得到PBS-PEG溶液，即水相；
(3)将水相加入到油相中，水浴加热，然后进行乳化，得到槲皮素脂质体。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述步骤(1)中的槲皮素、卵磷脂、类神经酰胺的质量比为1-2:35-40:1-2，所述胆固醇与类神经酰胺的摩尔比为1-2:1-2。
3.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于：所述类神经酰胺为Cetyl-PG羟乙基棕榈酰胺、花生四烯酰胺MEA中的一种或几种。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述步骤(1)中的溶剂为氯仿、乙醇、乙醚中的一种或几种；所述槲皮素与溶剂的质量体积比为1-2g:200-300mL。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述步骤(2)中的PBS缓冲液浓度为20-30mmol/L，pH值为7。
6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述步骤(2)中的聚乙二醇为PEG200、PEG400中的一种或几种；所述聚乙二醇与PBS缓冲液的体积比为1-2:20-30。
7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述步骤(3)中的水浴加热温度为35-40℃，时间为1-2h。
8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述步骤(3)中的乳化转速为6000-8000r/min，乳化时间为30min。
9.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述步骤(3)中乳化后在4℃下稳定2-3h。
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|---|---|---|---|---|
| CN117679395A (zh) * | 2023-12-13 | 2024-03-12 | 上海拜思丽实业有限公司 | 一种多肽包覆槲皮素的分子胶囊及其制备方法 |
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