CN115670944B

CN115670944B - 一种具有抗衰功效的微海绵及其制备方法和应用

Info

Publication number: CN115670944B
Application number: CN202211377874.XA
Authority: CN
Inventors: 姜姗姗; 李燕; 刘三岭; 韩婷婷; 杨素珍; 陈博文; 白天明; 徐佩佩; 杲款款; 毛新宇
Original assignee: Shandong Furida Biological Co ltd
Current assignee: Shandong Furida Biological Co ltd
Priority date: 2022-11-04
Filing date: 2022-11-04
Publication date: 2023-11-10
Anticipated expiration: 2042-11-04
Also published as: CN115670944A

Abstract

本发明属于化妆品技术领域，具体涉及一种具有抗衰功效的微海绵及其制备方法和应用。所述具有抗衰功效的微海绵，其包含如下质量分数的组分：45～80％乙基纤维素、0.001～1％枯草菌脂肽钠、0.1～30％视黄醇、2～19％胡椒果油和5～45％二棕榈酰羟脯氨酸。本发明所制备的具有抗衰功效的微海绵安全性好，贮存稳定性好，相比于相比于纯视黄醇，具有更稳定、更温和、渗透性更高的特点，并将视黄醇与其它成分复配可显著提高其抗衰的功效，可用于制备具有抗衰功效的化妆品，具有良好的实际应用之价值。

Description

一种具有抗衰功效的微海绵及其制备方法和应用

技术领域

本发明属于化妆品技术领域，具体涉及一种具有抗衰功效的微海绵及其制备方法和应用。

背景技术

公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

维生素A是一种脂溶性的维生素，又称作视黄醇，是保持皮肤上皮组织健康的必须维生素，但结构中含有较多不饱和键，所以维生素A对可见光、紫外光、氧气等非常敏感。

目前，市面上主要有三种维生素A类成分，分别为视黄醇、视黄醛和视黄酯。视黄醇在化妆品配方中的应用也有局限性(如视黄醇在空气中易氧化、在紫外线照射下易失活、不溶于水等)，视黄醇的刺激性和不稳定性限制了其在化妆品中的添加量，同时导致视黄醇优良的抗衰、祛痘等功效不能得到充分的发挥。近年来，通过研究发现视黄醇的衍生物(视黄醇乙酸酯、视黄醇棕榈酸酯、视黄醇亚油酸酯等)可以很好地改善视黄醇的溶解性、刺激性、光敏感性等缺点。但大多数视黄醇衍生物在化妆品中功效大打折扣，因此诸如微胶囊、胶束、脂质体、微海绵等的包埋技术逐渐出现，为视黄醇的应用开辟了新的途径。

微海绵(Microsponge Delivery System，MDS)，亦称多孔聚合物微球，是近年来发展的一类具有海绵样多孔外观的微小粒子给药系统，可供口服或外用。微海绵可由海藻酸盐、壳聚糖、明胶等天然材料或乙基纤维素、羧甲基纤维素、PLGA、Eudragit-RS100等合成/半合成材料制成。其制备方法主要包括W/O/W乳液溶剂蒸发法、半乳化溶剂扩散法、液-液悬浮聚合法、冻干法等。正如其名，微海绵具有与海绵相似的丰富的孔道结构，以及快速吸收大量的水分等性能。其粒径范围一般在100μm左右，少数可达到纳米级别，孔径范围通常在100～800nm左右，孔隙率可高达90％。微海绵可通过将活性物包裹在孔道内或吸附于表面等多种方式进行载药，其独特的孔道结构可提供更多的液体接触面积以及药物的荷载位点。

与市面上微球等传统微小粒子相比，微海绵其独特的海绵样外观使其具有更大的比表面积、更高的吸水量以及更多的活性物荷载量等诸多优势。然而，发明人发现，目前市面上的大都已视黄醇脂质体为主，鲜有载有视黄醇的微海绵的产品。

发明内容

针对现有技术中存在的不足，本发明目的在于提供一种具有抗衰功效的微海绵及其制备方法和应用。经试验验证，本发明提供的微海绵安全性好，贮存稳定性好，相比于纯视黄醇，具有更稳定、更温和、渗透性更高的特点，并且还能明显提高视黄醇的抗衰功效，可用于制备具有抗衰功效的化妆品。基于以上研究成果，从而完成本发明。

为了实现上述技术目的，本发明提供的技术方案如下：

本发明的第一个方面，提供一种具有抗衰功效的微海绵，以其总质量为基准，包含如下质量分数的组分：45～80％乙基纤维素、0.001～1％枯草菌脂肽钠、0.1～30％视黄醇、2～19％胡椒果油和5～45％二棕榈酰羟脯氨酸。

本发明的第二个方面，提供上述具有抗衰功效的微海绵的制备方法，所述制备方法包括：

S1、将枯草菌脂肽钠与水混合，搅拌使各成分分散均匀，得A相；A相中枯草菌脂肽钠浓度(w/w)为0.02-0.1％；

S2、将乙基纤维素、视黄醇、胡椒果油、二棕榈酰羟脯氨酸与乙醇混合，搅拌使各成分分散均匀，得到B相；B相中乙基纤维素浓度(w/w)为20-29％；

S3、将B相加入A相溶液中；

S4、待B相完全加入到A相后，继续搅拌至乙醇完全挥发；

S5、将S4得到溶液进行冻干后即得具有抗衰功效的微海绵。

通过控制上述工艺条件，使得最终制备的微海绵具有良好护肤功效，同时还具有更稳定、更温和、渗透性更高的特点，并将视黄醇与其它成分复配可显著提高其抗衰的功效，因此非常适于作为化妆品抗衰活性成分使用。

因此，本发明的第三个方面，提供上述具有抗衰功效的微海绵在制备产品中的应用。其中，所述产品可以为化妆品，具体为具有抗衰功效的化妆品。

本发明的第四个方面，提供一种化妆品，所述化妆品含有上述具有抗衰功效的微海绵。

上述一个或多个技术方案的有益技术效果：

上述技术方案提供一种具有抗衰功效的微海绵，其由乙基纤维素、枯草菌脂肽钠、视黄醇、胡椒果油、二棕榈酰羟脯氨酸复配而成，该微海绵安全性好，贮存稳定性好，相比于纯视黄醇，其具有更稳定、更温和、渗透性更高的特点，并将视黄醇与其它成分复配可显著提高其抗衰的功效，可用于制备具有抗衰功效的化妆品，因此具有良好的实际应用之价值。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图获得其他的附图。

图1为本发明应用实验例1中视黄醇累计透过量；

图2为本发明应用实验例2中视黄醇在皮肤中的滞留量；

图3为本发明应用实验例3中45℃条件下的视黄醇含量留存；

图4为本发明应用实验例3中光照条件下的视黄醇含量留存；

图5为本发明应用实验例4中鸡胚绒毛尿囊膜血管的刺激性评价；

图6为本发明应用实验例4中胶原纤维测试结果；

图7为本发明应用实验例4中弹性纤维测试结果；

图8为本发明应用实验例4中CollagenIV测试结果；

图9为本发明应用实验例4中弹力蛋白测试结果。

具体实施方式

应该指出，以下详细说明都是例示性的，旨在对本发明提供进一步的说明。除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同含义。

需要注意的是，这里所使用的术语仅是为了描述具体实施方式，而非意图限制根据本申请的示例性实施方式。如在这里所使用的，除非上下文另外明确指出，否则单数形式也意图包括复数形式，此外，还应当理解的是，当在本说明书中使用术语“包含”和/或“包括”时，其指明存在特征、步骤、操作、器件、组件和/或它们的组合。

如前所述，目前市面上的大都已视黄醇脂质体为主，鲜有载有视黄醇的微海绵，因此为了提高视黄醇的载药量、降低刺激性、提高其抗衰能力及渗透能力，本发明制备了载有视黄醇的微海绵，即具有抗衰功效的微海绵。

具体的，本发明的一个典型具体实施方式中，提供一种具有抗衰功效的微海绵，以其总质量为基准，包含如下质量分数的组分：45～80％乙基纤维素、0.001～1％枯草菌脂肽钠、0.1～30％视黄醇、2～19％胡椒果油和5～45％二棕榈酰羟脯氨酸。

本发明的又一具体实施方式中，其包含如下质量分数的组分：55.575％乙基纤维素、0.005％枯草菌脂肽钠、25.32％视黄醇、8％胡椒果油、11.1％二棕榈酰羟脯氨酸。

其中，微海绵中各原料组分及功效如下：

枯草菌脂肽钠：枯草菌脂肽钠是一种生物降解性良好的发酵生产天然表面活性剂，具有特殊的“环状肽+长链烷烃”分子结构：环状肽由7个氨基酸形成，并具有两个羧基与钠离子结合，因此是一种易溶于水的阴离子表面活性剂。基于以上，枯草菌脂肽钠具有超强的乳化能力，并且稳定性优异且刺激性低。

胡椒果油：胡椒果油含挥发油、胡椒碱、粗脂肪和多种酰胺类化合物，胡椒碱，阿魏酰哌啶类，胡椒酮等，具有良好的抗氧化效果，能够加速代谢肌肤内在废物，帮助去除容易诱发各种肌肤问题的老化物，其渗透模拟试验表明，其对渗透具有促进作用。

二棕榈酰羟脯氨酸：羟脯氨酸是皮肤胶原蛋白组成的主要氨基酸，二棕榈酰羟脯氨酸作为羟脯氨酸的脂溶性衍生物，更易渗透进入真皮组织发挥促进胶原蛋白合成的作用。大量的科学试验表明，二棕榈酰羟脯氨酸具有良好的抗衰老、紧肤作用，是一种具有突出效果的抗衰老新原料。

乙基纤维素：乙基纤维素是纤维素链中的部分羟基被乙氧基取代的纤维素衍生物，是应用最广泛的水不溶性纤维素衍生物之一，在药剂中有多种用途，如：可用作片剂黏合剂、薄膜包衣材料，亦可用作骨架材料制备多种类型的骨架型缓释片，用作混合材料膜制备包衣缓释制剂，用作包囊辅料制备缓释微囊，还可作为载体材料广泛地用于制备固体分散体等。

本发明的又一具体实施方式中，提供上述具有抗衰功效的微海绵的制备方法，所述制备方法包括：

S1、将枯草菌脂肽钠与水混合，搅拌使各成分分散均匀，得A相；

S2、将乙基纤维素、视黄醇、胡椒果油、二棕榈酰羟脯氨酸与乙醇混合，搅拌使各成分分散均匀，得到B相；

S3、将B相加入A相溶液中；

S4、待B相完全加入到A相后，继续搅拌至乙醇完全挥发；

S5、将S4得到溶液进行冻干后即得具有抗衰功效的微海绵。

其中，

所述步骤S1中，A相中枯草菌脂肽钠浓度(w/w)为0.02-0.1％；

所述搅拌转速控制为50～350r/min，从而使得其分散更为均匀。

所述步骤S2中，B相中乙基纤维素浓度(w/w)为20-29％；

所述搅拌转速控制为100～400r/min；

所述步骤S3中，所述加入方式具体可以采用滴加，从而便于后续微海绵的形成；在加入过程中，A相溶液维持搅拌状态，搅拌转速保持在10～500r/min。

所述步骤S4中，继续搅拌时，转速保持在20～500r/min，搅拌时间控制为1～3h，此时乙醇可以挥发完全。

所述步骤S5中，冻干时间控制为8～24h。

因此，本发明的又一具体实施方式中，提供上述具有抗衰功效的微海绵在制备产品中的应用。其中，所述产品可以为化妆品，具体为具有抗衰功效的化妆品。

本发明的又一具体实施方式中，提供一种化妆品，所述化妆品含有上述具有抗衰功效的微海绵。

所述化妆品还可以任选地包含化妆品的常用成分，常用成分中包括媒介物(如稀释剂、分散剂、载体等)、化妆品辅料(如乳化剂、增稠剂等)等本领域已知的任何成分，且可根据具体需要选择其类型和用量，发明人在此不再进行具体限定。

此外，在本发明中，所述化妆品应做广义理解，其包括但不限于清洁霜(膏)、洗面乳、浴液、面霜、化妆水、面膜和防晒霜等。

下面结合实施例对本发明进一步说明。下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围中。基于本发明中的实施例，本领域技术人员在没有作出创造性前提下，任何对本发明的变化都归属本发明的保护范围。

实施例1

一种具有抗衰功效的微海绵的制备方法，以其总重量为基准，各组分及重量百分比具体如下：35％乙醇、12.5％乙基纤维素、0.012％枯草菌脂肽钠、5.7％视黄醇、1.8％胡椒果油、2.5％二棕榈酰羟脯氨酸、余量为水。

制备方法具体如下：

(1)将枯草菌脂肽钠与水混合，在常温条件下，开启搅拌转速保持在75r/min，搅拌使各成分充分分散均匀，得到A相；

(2)将乙基纤维素、视黄醇、胡椒果油、二棕榈酰羟脯氨酸与乙醇混合，在常温条件下，开启搅拌转速保持在120/min，搅拌使各成分充分分散均匀，得到B相；

(3)将A相在常温搅拌的条件下，搅拌转速保持在200r/min，将B相缓慢滴加到A相溶液中；

(4)待B相完全滴加到A相后，搅拌转速保持在170r/min，继续搅拌2.5h，待乙醇完全挥发；

(5)将(4)得到得溶液进行冷冻干燥12h，即得具有抗衰功效的微海绵。

去除乙醇和水后，制得微海绵中各组分及其质量分数如下所示：55.575％乙基纤维素、0.005％枯草菌脂肽钠、25.32％视黄醇、8％胡椒果油、11.1％二棕榈酰羟脯氨酸。

实施例2

一种具有抗衰功效的微海绵的制备方法，以其总重量为基准，各组分及重量百分比具体如下：26％乙醇、10％乙基纤维素、0.009％枯草菌脂肽钠、4％视黄醇、2％胡椒果油、1.5％二棕榈酰羟脯氨酸、余量为水。

制备方法具体如下：

(1)将枯草菌脂肽钠与水混合，在常温条件下，开启搅拌转速保持在110r/min，搅拌使各成分充分分散均匀，得到A相；

(2)将乙基纤维素、视黄醇、胡椒果油、二棕榈酰羟脯氨酸与乙醇混合，在常温条件下，开启搅拌转速保持在200r/min，搅拌使各成分充分分散均匀，得到B相；

(3)将A相在常温搅拌的条件下，搅拌转速保持在170r/min，将B相缓慢滴加到A相溶液中；

(4)待B相完全滴加到A相后，搅拌转速保持在200r/min，继续搅拌2h，待乙醇完全挥发；

(5)将(4)得到得溶液进行冷冻干燥10h，即得具有抗衰功效的微海绵。

去除乙醇和水后，制得微海绵中各组分及其质量分数如下所示：57.109％乙基纤维素、0.051％枯草菌脂肽钠、22.85％视黄醇、11.42％胡椒果油、8.57％二棕榈酰羟脯氨酸。

实施例3

一种具有抗衰功效的微海绵的制备方法，以其总重量为基准，各组分及重量百分比具体如下：40％乙醇、18％乙基纤维素、0.02％枯草菌脂肽钠、2％视黄醇、1.5％胡椒果油、2％二棕榈酰羟脯氨酸、余量为水。

制备方法具体如下：

(1)将枯草菌脂肽钠与水混合，在常温条件下，开启搅拌转速保持在250r/min，搅拌使各成分充分分散均匀，得到A相；

(2)将乙基纤维素、视黄醇、胡椒果油、二棕榈酰羟脯氨酸与乙醇混合，在常温条件下，开启搅拌转速保持在350r/min，搅拌使各成分充分分散均匀，得到B相；

(3)将A相在常温搅拌的条件下，搅拌转速保持在350r/min，将B相缓慢滴加到A相溶液中；

(4)待B相完全滴加到A相后，搅拌转速保持在300r/min，继续搅拌3h，待乙醇完全挥发；

(5)将(4)得到得溶液进行冷冻干燥24h，即得具有抗衰功效的微海绵。

去除乙醇和水后，制得微海绵中各组分及其质量分数如下所示：64.24％乙基纤维素、0.071％枯草菌脂肽钠、23.2％视黄醇、5.35％胡椒果油、7.139％二棕榈酰羟脯氨酸。

对比实施例1(只有视黄醇)

对比实施例1(只有视黄醇)的微海绵的制备，以其总重量为基准，各组分及重量百分比为：35％乙醇、12.5％乙基纤维素、0.012％枯草菌脂肽钠、5.7％视黄醇，余量为水。

制备方法具体如下：

(2)将乙基纤维素、视黄醇与乙醇混合，在常温条件下，开启搅拌转速保持在120r/min，搅拌使各成分充分分散均匀，得到B相；

(5)将(4)得到得溶液进行冷冻干燥12h，即得具有抗衰功效得微海绵。

对比实施例2(枯草菌酯肽钠替换为吐温80)

对比实施例2(枯草菌酯肽钠替换为吐温80)的微海绵的制备，以其总重量为基准，各组分及重量百分比为：35％乙醇、12.5％乙基纤维素、2.7％吐温80、5.7％视黄醇、1.8％胡椒果油、2.5％二棕榈酰羟脯氨酸，余量为水。

制备方法具体如下：

(1)将吐温80与水混合，在常温条件下，开启搅拌转速保持在75r/min，搅拌使各成分充分分散均匀，得到A相；

(2)将乙基纤维素、视黄醇、胡椒果油、二棕榈酰羟脯氨酸与乙醇混合，在常温条件下，开启搅拌转速保持在120r/min，搅拌使各成分充分分散均匀，得到B相；

应用实施例1(含有实施例1)

A相(重量份)：A165(乳化剂)2.5份、单甘脂1.5份、GTCC 3份、白油3份、十六十八醇2.5份、山嵛醇1.5份、硅油5份、实施例1微海绵10份；

B相(重量份)：甘油4份、丁二醇4份、EMT-10(增稠剂)0.8份、汉生胶1.5份、馨鲜酮0.4份、己二醇0.4份、大豆卵磷脂0.5份、去离子水59.4份。

上述膏霜制备步骤如下：

1)将EMT-10、汉生胶与大豆卵磷脂份先分散到甘油与丁二醇当中，然后加入馨鲜酮、己二醇和去离子水，在80℃水浴中加热并搅拌使其充分溶解，得到B相；

2)将A165、单甘脂、GTCC、白油、十六十八醇、山嵛醇、硅油、实施例1微海绵在83℃的水浴中加热熔融，得到A相；

3)将A相与B相同时置于83℃的水浴中加热，待两相温度相同时，在500r/min搅拌B相的前提下，将A相缓慢加入到B相中；

4)B相与A相混合完毕，将膏霜在83℃水浴中恒温430r/min搅拌25min；

5)将膏霜取出，在常温下60r/min搅拌降温。

6)当温度降至35℃时，静止冷却得到产品。

对比应用实施例1(含有对比实施例1)

A相(重量份)：A165(乳化剂)2.5份、单甘脂1.5份、GTCC 3份、白油3份、十六十八醇2.5份、山嵛醇1.5份、硅油5份、对比实施例1微海绵8.1份；

B相(重量份)：甘油4份、丁二醇4份、EMT-10(增稠剂)0.8份、汉生胶1.5份、馨鲜酮0.4份、己二醇0.4份、大豆卵磷脂0.5份、去离子水61.3份。

上述膏霜制备步骤如下：

1)将EMT-10、汉生胶与大豆卵磷脂先分散到甘油与丁二醇当中，然后加入馨鲜酮、己二醇和去离子水，在80℃水浴中加热并搅拌使其充分溶解，得到B相；

2)将A165、单甘脂、GTCC、白油、十六十八醇、山嵛醇、硅油、对比实施例1微海绵在83℃的水浴中加热熔融，得到A相；

5)将膏霜取出，在常温下60r/min搅拌降温。

6)当温度降至35℃时，静止冷却得到产品。

对比应用实施例2(含有对比实施例2)

A相(重量份)：A165(乳化剂)2.5份、单甘脂1.5份、GTCC 3份、白油3份、十六十八醇2.5份、山嵛醇1.5份、硅油5份、对比实施例2微海绵11.19份；

B相(重量份)：甘油4份、丁二醇4份、EMT-10(增稠剂)0.8份、汉生胶1.5份、馨鲜酮0.4份、己二醇0.4份、大豆卵磷脂0.5份、去离子水58.21份。

上述膏霜制备步骤如下：

2)将A165、单甘脂、GTCC、白油、十六十八醇、山嵛醇、硅油、对比实施例2微海绵在83℃的水浴中加热熔融，得到A相；

5)将膏霜取出，在常温下60r/min搅拌降温。

6)当温度降至35℃时，静止冷却得到产品。

对比应用实施例3(只含有视黄醇纯品)

A相(重量份)：A165(乳化剂)2.5份、单甘脂1.5份、GTCC 3份、白油3份、十六十八醇2.5份、山嵛醇1.5份、硅油5份、视黄醇2.532份；

B相(重量份)：甘油4份、丁二醇4份、EMT-10(增稠剂)0.8份、汉生胶1.5份、馨鲜酮0.4份、己二醇0.4份、大豆卵磷脂0.5份、去离子水66.868份。

上述膏霜制备步骤如下：

2)将A165、单甘脂、GTCC、白油、十六十八醇、山嵛醇、硅油、视黄醇在83℃的水浴中加热熔融，得到A相；

5)将膏霜取出，在常温下60r/min搅拌降温。

6)当温度降至35℃时，静止冷却得到产品。

对比应用实施例4(只含有二棕榈酰羟脯氨酸)

A相(重量份)：A165(乳化剂)2.5份、单甘脂1.5份、GTCC 3份、白油3份、十六十八醇2.5份、山嵛醇1.5份、硅油5份、二棕榈酰羟脯氨酸1.11份；

B相(重量份)：甘油4份、丁二醇4份、EMT-10(增稠剂)0.8份、汉生胶1.5份、馨鲜酮0.4份、己二醇0.4份、大豆卵磷脂0.5份、去离子水68.29份。

上述膏霜制备步骤如下：

1)将EMT-10、汉生胶与大豆卵磷脂0.5份先分散到甘油与丁二醇当中，然后加入馨鲜酮、己二醇和去离子水，在80℃水浴中加热并搅拌使其充分溶解，得到B相；

2)将A165、单甘脂、GTCC、白油、十六十八醇、山嵛醇、硅油、二棕榈酰羟脯氨酸在83℃的水浴中加热熔融，得到A相；

5)将膏霜取出，在常温下60r/min搅拌降温。

6)当温度降至35℃时，静止冷却得到产品。

对比应用实施例5(只含有胡椒果油)

A相(重量份)：A165(乳化剂)2.5份、单甘脂1.5份、GTCC 3份、白油3份、十六十八醇2.5份、山嵛醇1.5份、硅油5份、胡椒果油0.8份；

B相(重量份)：甘油4份、丁二醇4份、EMT-10(增稠剂)0.8份、汉生胶1.5份、馨鲜酮0.4份、己二醇0.4份、大豆卵磷脂0.5份、去离子水68.6份。

上述膏霜制备步骤如下：

2)将A165、单甘脂、GTCC、白油、十六十八醇、山嵛醇、硅油、胡椒果油在83℃的水浴中加热熔融，得到A相；

5)将膏霜取出，在常温下60r/min搅拌降温。

6)当温度降至35℃时，静止冷却得到产品。

对比应用实施例6(只含有视黄醇、DPHP、胡椒果油)

A相(重量份)：A165(乳化剂)2.5份、单甘脂1.5份、GTCC 3份、白油3份、十六十八醇2.5份、山嵛醇1.5份、硅油5份、2.532视黄醇份、0.8胡椒果油份、1.11二棕榈酰羟脯氨酸份；

B相(重量份)：甘油4份、丁二醇4份、EMT-10(增稠剂)0.8份、汉生胶1.5份、馨鲜酮0.4份、己二醇0.4份、大豆卵磷脂0.5份、去离子水64.958份。

上述膏霜制备步骤如下：

2)将A165、单甘脂、GTCC、白油、十六十八醇、山嵛醇、硅油、发酵乳木果油、丝瓜籽油在83℃的水浴中加热熔融，得到A相；

5)将膏霜取出，在常温下60r/min搅拌降温。

6)当温度降至35℃时，静止冷却得到产品。

应用实验例1体外透皮实验

裸鼠颈椎脱臼处死后，剥离腹部皮肤，剔除皮下脂肪，立即进行透皮试验。接收室加入含30％PEG-400的生理盐水的接收液。供给室分别加入应用实施例1、对比应用实施例1、对比应用实施例2各1g，再在供给室上盖上保鲜膜，将处理好的皮肤于接收室与供给室之间，(透皮面积为3.14cm²，接收室容积为15ml，实验温度保持为37℃±0.51，搅拌速度为80r/min。分别于2、4、6、8小时从接收液中取样1ml，同时补充相同体积的接收液，得到的样品经0.45nm微孔滤膜过滤，通过色谱仪条件测定视黄醇单位面积的累计透过量。按照公式1计算单位面积累积透过量。

公式中，Cn为第n个点的视黄醇浓度，Ci为第(i＝n-1)个点的视黄醇浓度，V为接受室的容积，V0为取样体积，A为扩散池的有效扩散面积。

由图1可知，应用实施例1的视黄醇累计透过量在2、4、6、8h都明显高于对比应用实施例1、对比应用实施例3的累计透过量。这说明本发明所制备的实施例1微海绵相比于对比实施例1(常用乳化剂)及纯品视黄醇具有更好的渗透性，渗透率更高。

应用实验例2皮肤滞留量试验

按照应用实验例1的体外透皮试验方法进行皮肤滞留量试验，分别于2h、4h、6h、8h后取下扩散池中的皮肤，用蒸馏水清洗除去皮肤上残留的料液，将皮肤剪碎，置于5ml离心管内，加入2ml甲醇，匀浆5min，再加入3ml甲醇，1000r/min离心30min，取上清液进行测定视黄醇的含量。

由图2可知，应用实施例1的视黄醇在皮肤中的滞留量在2、4、6、8h都明显高于对比应用实施例1、对比应用实施例3的视黄醇在皮肤中的滞留量。这说明本发明所制备的实施例1微海绵相比于对比实施例1(常用乳化剂)及纯品视黄醇具有更好的缓释性能。

应用实施例3微海绵稳定性试验

将应用实施例1和对比应用实施例3(只含有视黄醇纯品)的膏霜分别取200g置于光照、45℃的条件下，在第7、14、28天用液相测定视黄醇的残留量，计算活性成分含量留存。

公式中，为第n天的视黄醇浓度，w0为初始视黄醇浓度，k为视黄醇活性成分含量留存。

视黄醇检测仪器及色谱条件：安捷伦液相色谱仪(HPLC-DAD)，色谱柱C18(250mm)，柱温30℃，流动相为甲醇：水＝96:4，流速：0.8ml/min，检测波长325nm。

样品处理：称量0.1000g样品(精确至0.0001g)，用甲醇溶解、涡旋、超声，定容于10ml中，进样10μl。

由图3-4可知，耐热、光照会影响视黄醇在乳液配方中的保存，且光照比耐热影响更大。无论是在45℃还是在光照条件下，应用实施例1中的视黄醇含量留存都要明显高于对比应用实施例3中的视黄醇含量留存。这说明本发明所制备的实施例1微海绵相比于纯品视黄醇具有更好的稳定性，更便于贮存。

应用实验例4鸡胚绒毛尿囊膜血管的刺激性评价

①CAM制备：9日龄鸡胚进行照蛋检查，在蛋壳表面标记气室位置；用牙科锯齿弯镊剥去带标记的蛋壳部分，暴露白色蛋膜，应小心操作不破坏蛋膜完整性。用吸管滴加适量0.9％氯化钠(NaCl)溶液使蛋膜湿润，此时可立即进行下一步操作，否则应将鸡胚置于孵化器或灯光下(防止鸡胚温度降低)，放置时间不应超过20min。将0.9％氯化钠溶液倾出。小心用镊子去除内膜，保证血管膜不受损。此时应再次观察血管系统的结构，并对其完整性和是否适宜用于试验做出判断。

②实验方法：分别配置应用实施例1、对比应用实施例2、对比应用实施例3的25％的分散液。取以上分散液0.3ml分别滴加在CAM膜上，用生理盐水轻轻冲洗CAM膜上的受试物，冲洗操作可能很快将CAM膜上轻度的出血变化掩盖，因此应在30s冲洗完成后观察结果，观察每种毒性效应变化的程度，对比观察处理前后的血管变化。

由图5可知，应用实施例1相比于用实施例1及对比应用实施例3的鸡胚的血管更完整、出血更少、刺激性更小。这说明本发明所制备的实施例1微海绵相比于对比实施例1(常用乳化剂)及纯品视黄醇更加温和、刺激性更低。

应用实验例5离体皮肤抗衰测试

1)测试方案：按照测试方案(表1)配置样品工作液。

表1

2)组织处理：将新鲜获得的皮肤组织浸入75％酒精中，清洗30s，再使用无菌的PBS缓冲液清洗三次；结束后，用一次性无菌皮肤取样器将皮肤组织切成直径为0.6cm的小圆片，表皮面向上，真皮面向下，放入培养模具中，然后将培养模具转入6孔板中，每孔加入3.7mL培养液，在37℃，5％CO₂孵箱中培养，每天换液。

3)给药：离体皮肤组织培养2天后，参照表1中的试验分组及相应处理条件，开始进行UVR辐照和给药；UVR照射剂量为UVA(30J/cm²)和UVB(50mJ/cm²)，连续辐照4天，每次辐照完后更换新鲜培养液，并进行给药处理，阳性对照(VC+VE)采用液下给药的方式进行，待测样品采用表面给药的方式进行。连续辐照4天后，将离体皮肤组织继续培养3天，在此期间不进行UVR刺激，只进行样品给药。

4)组织形态、胶原纤维和弹性纤维检测：给药结束后的皮肤组织采用4％多聚甲醛固定模型，组织包埋，切片后分别进行H&E染色、Masson染色和维多利亚蓝染色，回收切片结果，使用显微镜拍照，使用Plus图像处理软件进行分析。

5)免疫组化检测：根据免疫组化具体操作步骤进行检测。

测试结果

1.胶原纤维测试结果

由图6可知，应用实施例1相比于其他对比应用实施例更能明显促进胶原纤维的增值，这说明含有本发明实施例1的微海绵具有显著促进胶原纤维的增值，且各组分之间具有一定的协同功效。

2.弹性纤维测试结果

由图7可知，应用实施例1相比于其他对比应用实施例更能明显促进弹性纤维的增值，这说明含有本发明实施例1的微海绵具有显著促进弹性纤维的增值，且各组分之间具有一定的协同功效。

3.CollagenIV测试结果

由图8可知，应用实施例1相比于其他对比应用实施例更能明显促进CollagenIV的生成，这说明含有本发明实施例1的微海绵具有显著促进CollagenIV的生成，且各组分之间具有一定的协同功效。

4.弹力蛋白测试结果

由图9可知，应用实施例1相比于其他对比应用实施例更能明显促进弹力蛋白的生成，这说明含有本发明实施例1的微海绵具有显著促进弹力蛋白的生成，且各组分之间具有一定的协同功效。

应注意的是，以上实例仅用于说明本发明的技术方案而非对其进行限制。尽管参照所给出的实例对本发明进行了详细说明，但是本领域的普通技术人员可根据需要对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的精神和范围。

Claims

1.一种具有抗衰功效的微海绵，其特征在于，以其总质量为基准，包含如下质量分数的组分：45～80％乙基纤维素、0.001～1％枯草菌脂肽钠、0.1～30％视黄醇、2～19％胡椒果油和5～45％二棕榈酰羟脯氨酸；

所述微海绵的制备方法包括：

S1、将枯草菌脂肽钠与水混合，搅拌使各成分分散均匀，得A相；A相中枯草菌脂肽钠浓度为0.02-0.1％；

S2、将乙基纤维素、视黄醇、胡椒果油、二棕榈酰羟脯氨酸与乙醇混合，搅拌使各成分分散均匀，得到B相；B相中乙基纤维素浓度为20-29％；

S3、将B相加入A相溶液中；

S4、待B相完全加入到A相后，继续搅拌至乙醇完全挥发；

S5、将S4得到溶液进行冻干后即得具有抗衰功效的微海绵。

2.如权利要求1所述的微海绵，其特征在于，所述步骤S1中，所述搅拌转速控制为50～350r/min。

3.如权利要求1所述的微海绵，其特征在于，所述步骤S2中，所述搅拌转速控制为100～400r/min。

4.如权利要求1所述的微海绵，其特征在于，所述步骤S3中，所述加入方式具体采用滴加方式。

5.如权利要求4所述的微海绵，其特征在于，滴加过程中，A相溶液维持搅拌状态，搅拌转速保持在10～500r/min。

6.如权利要求1所述的微海绵，其特征在于，所述步骤S4中，继续搅拌时，转速保持在20～500r/min，搅拌时间控制为1～3h。

7.如权利要求1所述的微海绵，其特征在于，所述步骤S5中，冻干时间控制为8～24h。

8.权利要求1所述具有抗衰功效的微海绵在制备产品中的应用；所述产品为化妆品，具体为具有抗衰功效的化妆品。

9.一种化妆品，其特征在于，所述化妆品含有权利要求1所述具有抗衰功效的微海绵；所述化妆品其包括清洁霜、清洁膏、洗面乳、浴液、面霜、化妆水、面膜和防晒霜。