CN105052498A - 一种建立dse与玉米共生体系的液体培养方法 - Google Patents

一种建立dse与玉米共生体系的液体培养方法 Download PDF

Info

Publication number
CN105052498A
CN105052498A CN201510511634.8A CN201510511634A CN105052498A CN 105052498 A CN105052498 A CN 105052498A CN 201510511634 A CN201510511634 A CN 201510511634A CN 105052498 A CN105052498 A CN 105052498A
Authority
CN
China
Prior art keywords
dse
corn
aseptic
root
days
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201510511634.8A
Other languages
English (en)
Other versions
CN105052498B (zh
Inventor
申蜜
李涛
赵大克
赵之伟
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Yunnan University YNU
Original Assignee
Yunnan University YNU
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Yunnan University YNU filed Critical Yunnan University YNU
Priority to CN201510511634.8A priority Critical patent/CN105052498B/zh
Publication of CN105052498A publication Critical patent/CN105052498A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN105052498B publication Critical patent/CN105052498B/zh
Expired - Fee Related legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01G—HORTICULTURE; CULTIVATION OF VEGETABLES, FLOWERS, RICE, FRUIT, VINES, HOPS OR SEAWEED; FORESTRY; WATERING
    • A01G22/00—Cultivation of specific crops or plants not otherwise provided for
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01G—HORTICULTURE; CULTIVATION OF VEGETABLES, FLOWERS, RICE, FRUIT, VINES, HOPS OR SEAWEED; FORESTRY; WATERING
    • A01G31/00—Soilless cultivation, e.g. hydroponics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01G—HORTICULTURE; CULTIVATION OF VEGETABLES, FLOWERS, RICE, FRUIT, VINES, HOPS OR SEAWEED; FORESTRY; WATERING
    • A01G7/00—Botany in general
    • A01G7/06—Treatment of growing trees or plants, e.g. for preventing decay of wood, for tingeing flowers or wood, for prolonging the life of plants

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Biodiversity & Conservation Biology (AREA)
  • Ecology (AREA)
  • Forests & Forestry (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明涉及一种建立DSE与玉米共生体系的液体培养方法，属于微生物学、植物营养学和生态学领域。本发明利用表面消毒的玉米B73种子培养无菌苗，利用PDA培养基培养DSE菌丝体，将玉米无菌苗与DSE菌丝体在无菌的液体培养基中进行共培养，建立无杂菌干扰的植物-真菌共生体系，主要包括玉米无菌苗的培养、DSE接种剂的准备、DSE与玉米共生体的建立及共生培养体系的检测步骤。其有益效果是：建立了DSE与玉米的无菌共培养液体体系，方法稳定高效、基质成分明确均一，为进一步研究DSE的侵染机制以及DSE与植物的共生机理提供理想模型，同时为其它真菌与共生植物的研究提供方法借鉴。

Description

一种建立DSE与玉米共生体系的液体培养方法
技术领域
本发明涉及一种建立DSE与玉米共生体系的液体培养方法，属于微生物学、植物营养学和生态学领域。
背景技术
深色有隔内生真菌（DarkSeptateEndophytes,DSE）具有多样的宿主植物和广泛的生态分布，是植物根系的一个重要组成部分，在植物体中发挥着重要作用，具有广阔的应用前景。目前，对于DSE的研究逐渐深入，人们不再局限于了解DSE对植物生长及抗逆的影响，更进一步认识DSE的侵染机制以及DSE与植物的共生机理等成为研究的热点和难点。然而，现有DSE与植物共生培养的方法主要是在开放或半开放的条件下进行无菌苗的盆栽接种，不仅易被其它杂菌污染，而且采用的培养基质多为腐殖土、泥炭土、河沙或麦麸等，营养成分较为复杂，不利于DSE的生物学特性及共生体系的系统性研究，特别是在研究外源物质与共生体系的关系时，无法确保培养基质中外源物质的均一性和有效性。此外，上述固体培养方法只有部分植物根系与DSE充分接触，导致DSE在植物根部定殖率较低且均一性较差。因此，建立一个稳定高效的、培养基质成分明确均一的无污染共生体系迫在眉睫。
发明内容
本发明的目的在于克服上述已有技术的不足而提供一种稳定高效、培养基质成分明确均一、培养体系无杂菌干扰的DSE与玉米共生体系的液体培养方法。
本发明建立的DSE与玉米共生体的液体培养方法，利用表面消毒的玉米种子培养无菌苗，利用PDA培养基培养DSE菌丝体，将玉米无菌苗与DSE菌丝体在无菌的液体培养基中进行共培养，建立无杂菌干扰的植物-真菌共生体系，主要包括下列步骤：
（1）玉米无菌苗的培养：挑选大小一致的玉米种子，放置于体积比为75%的乙醇溶液中，浸泡5min，取出种子，无菌水清洗3次；然后将种子放置于体积比为10%的次氯酸钠溶液中，浸泡10min，取出种子，无菌水清洗3次；表面消毒后的种子放置于无菌的湿润滤纸上，每瓶2颗，于22oC下黑暗培养3天，萌发后转入光照培养箱中，光照强度1800Lux，光照时间和培养温度分别为16/8h，25/22oC，空气相对湿度70%，培养7天后，挑选生长一致的无菌苗备用；
（2）DSE接种剂的准备：活化DSE菌株后，接种到PDA培养基的平皿中，28oC下黑暗倒置培养15天；用打孔器沿菌落边缘打成Φ6mm菌块作为接种剂备用；
（3）DSE与玉米共生体的建立：将上述步骤得到的菌块和玉米无菌苗同时转移到用于二者共培养的无菌三角瓶中，每个三角瓶放入一株无菌苗，5块直径为6mm的接种剂，添加无菌液体培养基使其刚好浸没幼苗根部，最后用无菌的PVA膜或PTFE膜封口，放置光照培养箱中，光照强度1800Lux，光照时间和培养温度分别为16/8h，25/22oC，空气相对湿度70%；三天后，用无菌剪刀给封口膜十字开口，使玉米的叶片刚好能伸出瓶外；培养过程中，每隔2天添加无菌液体培养基20mL，每次使玉米根部恰好浸没在培养基质中；
（4）共生培养体系的检测：共培养20天后，从三角瓶中取出玉米，用无菌水清洗玉米根部，取玉米侧根放入试管中，加入质量比为10%的KOH使根样完全浸没，放入水浴锅中90oC解离至根样透明；经乳酸中和、酸性品红染色、乳酸甘油脱色后制片，于OLYPUS-BX51显微镜下观察DSE的定殖情况并计算其定殖率；同时，表面消毒清洗干净的玉米侧根，用无菌剪刀将根样剪成0.5cm的片段，随机选取20个贴到PDA培养基上，每个平皿5个片段，所有平皿在28oC下黑暗正置培养25天；在显微镜下观察制备的玻片，发现玉米根内有大量菌丝定殖并形成DSE的典型结构特征-微菌核；同时，从根样中只分离得到与接种剂形态特征相同的DSE菌株，进一步表明DSE与玉米的共生体系成功建立。
上述步骤（3）中的共培养培养基质为改良的1/2MS液体培养基：NH4NO3825mg/L，KNO3950mg/L，CaCl2 .2H2O220mg/L，MgCl2 .7H2O185mg/L，KH2PO485mg/L，KI0.83mg/L，H2BO36.20mg/L，MnSO4 .4H2O22.30mg/L，ZnSO4 .7H2O8.60mg/L，Na2MoO4 .2H2O0.25mg/L，CuSO4 .5H2O0.025mg/L，CoCl2 .6H2O0.025mg/L，FeSO4 .7H2O27.8mg/L，Na2EDTA.2H2O37.3mg/L，去离子水，pH5.8。
上述步骤（4）中玉米侧根的表面消毒方法为：体积比70%的乙醇浸泡1min，无菌水清洗3次，体积比10%次氯酸钠浸泡2min，无菌水清洗3次，置于无菌滤纸上吸干水分。分离DSE的培养基为：PDA添加100mg/L硫酸链霉素和氨苄青霉素。分离DSE的空白对照为：最后一次清洗根样的无菌水涂到添加100mg/L硫酸链霉素和氨苄青霉素PDA培养基上，28oC黑暗正置培养，25天后不生长任何菌落。
本发明的有益效果是：成功建立了DSE与玉米无菌共培养液体体系，方法稳定高效、基质成分明确均一，为进一步研究DSE的侵染机制以及DSE与植物的共生机理等提供理想模型，同时为其它真菌与共生植物的研究提供方法借鉴。
具体实施方式
实施例1：
本实施例建立的DSE与玉米共生体的液体培养方法，利用表面消毒的玉米种子培养无菌苗，利用PDA培养基培养DSE菌丝体，将玉米无菌苗与DSE菌丝体在无菌的液体培养基中进行共培养，建立无杂菌干扰的植物-真菌共生体系，主要包括下列步骤：
1、将玉米种子B73（公知全基因组数据库）放置于体积比为75%的乙醇溶液中，浸泡5min，取出种子，无菌水清洗3次；将种子放置于体积比为10%的次氯酸钠溶液中，浸泡10min，取出种子，无菌水清洗3次。表面消毒后的种子放置于无菌的湿润滤纸上，在规格为Φ56mm×Φ56mm×91mm（口径×胸径×高）的组培瓶中培养，每瓶2颗，于22oC下黑暗培养3天，萌发后转入光照培养箱中，光照强度1800Lux，光照时间和培养温度分别为16/8h，25/22oC，空气相对湿度70%，培养7天后，挑选生长一致的无菌苗备用。
2、取冷藏的试管斜面菌株H93（嗜鱼外瓶霉Exophialapisciphila）活化，接种到PDA培养基的平皿中，28oC下黑暗倒置培养15天。用打孔器沿菌落边缘打成Φ6mm菌块作为接种剂备用。此外，将部分菌块转移到干净的平皿中，每个平皿5块，121oC高温高压间歇灭菌3次，每次2h，作为空白对照。
3、配置改良的1/2MS液体培养基（NH4NO3825mg/L，KNO3950mg/L，CaCl2 .2H2O220mg/L，MgCl2 .7H2O185mg/L，KH2PO485mg/L，KI0.83mg/L，H2BO36.20mg/L，MnSO4 .4H2O22.30mg/L，ZnSO4 .7H2O8.60mg/L，Na2MoO4 .2H2O0.25mg/L，CuSO4 .5H2O0.025mg/L，CoCl2 .6H2O0.025mg/L，FeSO4 .7H2O27.8mg/L，Na2EDTA.2H2O37.3mg/L，去离子水，pH5.8），分装到规格一致的250mL三角瓶中，每瓶30mL，121oC高温高压灭菌20min。待培养基质冷却后，将上述菌块和玉米无菌苗同时转移到共培养的三角瓶中（添加灭活H93的无菌苗为空白对照），最后用无菌的PVA膜或PTFE膜封口放置光照培养箱中，光照强度1800Lux，光照时间和培养温度分别为16/8h，25/22oC，空气相对湿度70%。三天后，用无菌剪刀给封口膜十字开口，使玉米的叶片刚好能伸出瓶外。培养过程中，每隔2天添加无菌液体培养基20mL，每次使玉米根部恰好浸没在培养基中。菌块、无菌苗的转移以及培养基质的添加均在超净工作台中进行。
4、共培养20天后，从三角瓶中取出玉米，用去离子水清洗玉米根部，取玉米侧根放入试管中，加入质量比为10%的KOH使根样完全浸没，放入水浴锅中90oC解离至根样透明。经常规乳酸中和、酸性品红染色、乳酸甘油脱色后制片，于OLYPUS-BX51显微镜下观察DSE的定殖情况并计算其定殖率。同时，清洗干净的玉米侧根以体积比70%的乙醇浸泡1min，无菌水清洗3次，体积比10%次氯酸钠浸泡2min，无菌水清洗3次，置于无菌滤纸上吸干水分后，用无菌剪刀将根样剪成约0.5cm的片段，随机选取20个贴到PDA培养基（添加100mg/L硫酸链霉素和氨苄青霉素）上，每个平皿5个片段，此外，将最后一次清洗根样的无菌水涂到PDA培养基（添加100mg/L硫酸链霉素和氨苄青霉素）上作为空白对照，所有平皿在28oC下黑暗正置培养25天。
检测结果：在活体H93菌丝体与玉米的共生体系中，发现玉米根内有大量菌丝定殖并形成DSE的典型结构特征-微菌核，其中，菌丝的定殖率为17.5%，微菌核的定殖率为6.5%，DSE的定殖率为52%；在灭活H93菌丝体与玉米的共生体系中，玉米根样内只观察到根细胞。同时，只从活体H93菌丝体与玉米共生体系的根样中分离得到与H93形态特征相同的DSE菌株，且未分离得到其它菌株。此外，涂有无菌水的空白对照不生长任何菌落。表明H93与玉米的液体共生体系成功建立。

Claims (3)

1.一种建立DSE真菌与玉米共生体的液体培养方法，其特征在于：利用表面消毒的玉米种子培养无菌苗，利用PDA培养基培养深色有隔内生真菌菌丝体，即DSE菌丝体，将玉米无菌苗与DSE菌丝体在无菌的液体培养基中进行共培养，建立无杂菌干扰的植物-真菌共生体系，主要包括下列步骤：
（1）玉米无菌苗的培养：挑选大小一致的玉米种子，放置于体积比为75%的乙醇溶液中，浸泡5min，取出种子，无菌水清洗3次；将种子放置于体积比为10%的次氯酸钠溶液中，浸泡10min，取出种子，无菌水清洗3次；表面消毒后的种子放置于无菌的湿润滤纸上，每瓶2颗，于22oC下黑暗培养3天，萌发后转入光照培养箱中，光照强度1800Lux，光照时间和培养温度分别为16/8h，25/22oC，空气相对湿度70%，培养7天后，挑选生长一致的无菌苗备用；
（2）DSE接种剂的准备：活化DSE菌株后，接种到PDA培养基的平皿中，28oC下黑暗倒置培养15天；用打孔器沿菌落边缘打成Φ6mm菌块作为接种剂备用；
（3）DSE与玉米共生体的建立：将上述步骤得到的菌块和玉米无菌苗同时转移到用于二者共培养的无菌三角瓶中，每个三角瓶放入一株无菌苗，5块直径为6mm的接种剂，添加无菌液体培养基使其刚好浸没幼苗根部，最后用无菌的PVA膜或PTFE膜封口，放置光照培养箱中，光照强度1800Lux，光照时间和培养温度分别为16/8h，25/22oC，空气相对湿度70%；三天后，用无菌剪刀给封口膜十字开口，使玉米的叶片刚好能伸出瓶外；培养过程中，每隔2天添加无菌液体培养基20mL，每次使玉米根部恰好浸没在培养基质中；
（4）共生培养体系的检测：共培养20天后，从三角瓶中取出玉米，用无菌水清洗玉米根部，取玉米侧根放入试管中，加入质量比为10%的KOH使根样完全浸没，放入水浴锅中90oC解离至根样透明；经乳酸中和、酸性品红染色、乳酸甘油脱色后制片，于OLYPUS-BX51显微镜下观察DSE的定殖情况并计算其定殖率；同时，表面消毒清洗干净的玉米侧根，用无菌剪刀将根样剪成0.5cm的片段，随机选取20个贴到PDA培养基上，每个平皿5个片段，所有平皿在28oC下黑暗正置培养25天；在显微镜下观察制备的玻片，发现玉米根内有大量菌丝定殖并形成DSE的典型结构特征-微菌核；同时，从根样中只分离得到与接种剂形态特征相同的DSE菌株，进一步表明DSE与玉米的共生体系成功建立。
2.根据权利要求1所述的DSE与玉米共生体液体培养的方法，其特征在于步骤（3）中的共培养培养基质为改良的1/2MS液体培养基：NH4NO3825mg/L，KNO3950mg/L，CaCl2 .2H2O220mg/L，MgCl2 .7H2O185mg/L，KH2PO485mg/L，KI0.83mg/L，H2BO36.20mg/L，MnSO4 .4H2O22.30mg/L，ZnSO4 .7H2O8.60mg/L，Na2MoO4 .2H2O0.25mg/L，CuSO4 .5H2O0.025mg/L，CoCl2 .6H2O0.025mg/L，FeSO4 .7H2O27.8mg/L，Na2EDTA.2H2O37.3mg/L，去离子水，pH5.8。
3.根据权利要求1所述的DSE与玉米共生体液体培养的方法，其特征在于：步骤（4）中玉米侧根的表面消毒方法为：体积比70%的乙醇浸泡1min，无菌水清洗3次，体积比10%次氯酸钠浸泡2min，无菌水清洗3次，置于无菌滤纸上吸干水分；分离DSE的培养基为：PDA添加100mg/L硫酸链霉素和氨苄青霉素；分离DSE的空白对照为：最后一次清洗根样的无菌水涂到添加100mg/L硫酸链霉素和氨苄青霉素的PDA培养基上，28oC黑暗正置培养，25天后不生长任何菌落。
CN201510511634.8A 2015-08-20 2015-08-20 一种建立dse与玉米共生体系的液体培养方法 Expired - Fee Related CN105052498B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201510511634.8A CN105052498B (zh) 2015-08-20 2015-08-20 一种建立dse与玉米共生体系的液体培养方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201510511634.8A CN105052498B (zh) 2015-08-20 2015-08-20 一种建立dse与玉米共生体系的液体培养方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN105052498A true CN105052498A (zh) 2015-11-18
CN105052498B CN105052498B (zh) 2017-10-31

Family

ID=54482238

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201510511634.8A Expired - Fee Related CN105052498B (zh) 2015-08-20 2015-08-20 一种建立dse与玉米共生体系的液体培养方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN105052498B (zh)

Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105519350A (zh) * 2015-12-14 2016-04-27 广西壮族自治区药用植物园 快速生产白及种苗的方法
CN105918127A (zh) * 2016-05-20 2016-09-07 武汉理工大学 一种基于dse快速扩繁建立dse-植物共生体系的方法
CN106717306A (zh) * 2016-11-29 2017-05-31 吉林省农业科学院 球孢白僵菌在玉米苗期的定殖方法及其应用
CN110577902A (zh) * 2019-10-11 2019-12-17 保定学院 一种深色有隔内生菌根真菌菌剂组合体制备方法
CN110591923A (zh) * 2019-08-09 2019-12-20 云南大学 一种快速获得大量dse菌丝体接种剂的方法
CN111373899A (zh) * 2020-03-20 2020-07-07 中国矿业大学(北京) 一种利用深色有隔内生真菌浸种促进植物幼苗生长发育的方法
CN111500469A (zh) * 2020-04-17 2020-08-07 中国矿业大学(北京) 一种利用dse根系（段）生产菌肥的方法

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1961631A (zh) * 2005-11-07 2007-05-16 中国医学科学院药用植物研究所 内生真菌在雪莲苗培养和雪莲栽培中的应用
CN101263778A (zh) * 2007-12-06 2008-09-17 云南大学 一种快速建立dse与植物共生培养体系的方法及其应用
CN102144540A (zh) * 2010-12-10 2011-08-10 梁经军 一种铁皮石斛组培菌根化种苗生产方法
CN103828722A (zh) * 2014-03-24 2014-06-04 鲁东大学 一种应用dse真菌进行蓝莓育苗及大面积栽培的方法

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1961631A (zh) * 2005-11-07 2007-05-16 中国医学科学院药用植物研究所 内生真菌在雪莲苗培养和雪莲栽培中的应用
CN101263778A (zh) * 2007-12-06 2008-09-17 云南大学 一种快速建立dse与植物共生培养体系的方法及其应用
CN102144540A (zh) * 2010-12-10 2011-08-10 梁经军 一种铁皮石斛组培菌根化种苗生产方法
CN103828722A (zh) * 2014-03-24 2014-06-04 鲁东大学 一种应用dse真菌进行蓝莓育苗及大面积栽培的方法

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
李娜: "《野生稻内生真菌与拟南芥的共生关系研究》", 《浙江大学硕士学位论文》 *
谢玲等: "《深色有隔内生真菌（DSE）引进菌株对铁皮石斛的接种效应》", 《南方农业学报》 *
陈严严等: "《蒙古沙冬青根系深色有隔内生真菌共生及分离培养特征研究》", 《河北农业大学学报》 *

Cited By (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105519350A (zh) * 2015-12-14 2016-04-27 广西壮族自治区药用植物园 快速生产白及种苗的方法
CN105519350B (zh) * 2015-12-14 2018-07-03 广西壮族自治区药用植物园 快速生产白及种苗的方法
CN105918127A (zh) * 2016-05-20 2016-09-07 武汉理工大学 一种基于dse快速扩繁建立dse-植物共生体系的方法
CN105918127B (zh) * 2016-05-20 2018-05-01 武汉理工大学 一种基于dse快速扩繁建立dse-植物共生体系的方法
CN106717306A (zh) * 2016-11-29 2017-05-31 吉林省农业科学院 球孢白僵菌在玉米苗期的定殖方法及其应用
CN110591923A (zh) * 2019-08-09 2019-12-20 云南大学 一种快速获得大量dse菌丝体接种剂的方法
CN110577902A (zh) * 2019-10-11 2019-12-17 保定学院 一种深色有隔内生菌根真菌菌剂组合体制备方法
CN110577902B (zh) * 2019-10-11 2021-07-09 保定学院 一种深色有隔内生菌根真菌菌剂组合体制备方法
CN111373899A (zh) * 2020-03-20 2020-07-07 中国矿业大学(北京) 一种利用深色有隔内生真菌浸种促进植物幼苗生长发育的方法
CN111500469A (zh) * 2020-04-17 2020-08-07 中国矿业大学(北京) 一种利用dse根系（段）生产菌肥的方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN105052498B (zh) 2017-10-31

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN105052498A (zh) 一种建立dse与玉米共生体系的液体培养方法
CN103468587B (zh) 胶膜菌属真菌菌株及其在促进硬叶兰种子萌发中的应用
CN104651239A (zh) 一种促进齿瓣石斛种子萌发形成幼苗的菌株及其应用
CN104855285B (zh) 一种多倍体金线莲有机培养一次性成苗诱导方法
CN104745672A (zh) 一种快速鉴定烟草黑胫病抗性的方法
CN111876336B (zh) 胶膜菌属真菌及其促进白旗兜兰种子萌发形成幼苗的应用
CN103468588B (zh) 胶膜菌菌株及其在促进兜唇石斛种子萌发中的应用
CN112369314B (zh) 一种鉴定苗期水稻纹枯病表型的方法
CN111793567B (zh) 胶膜菌科真菌及其促进白旗兜兰种子萌发形成幼苗的应用
CN105993865A (zh) 一种栓皮栎无菌苗的培育方法
CN110972811B (zh) 一种建立dse和amf与植物共生体系的方法及其应用
CN110055303A (zh) 一种高通量筛选用于防治植物土传真菌病害微生物的方法
CN107629966A (zh) 真菌诱导子、其制备方法及利用该真菌诱导子进行白芨种苗快繁的方法
CN104845892A (zh) 一种硬孔菌及其促进沉香属植物产生沉香的应用
CN103621332A (zh) 一种快速鉴定月季对白粉病抗性的方法
CN108913621A (zh) 一株有效防治樱花根癌病的甲基营养型芽孢杆菌yh-18及其应用
CN105052499A (zh) 一种快速建立瓶霉属真菌与农作物共生体系的方法
CN104651474A (zh) 一种甜瓜白粉菌生理小种的快速鉴定方法
CN104673701B (zh) 一株根皮苷降解菌及其菌剂的制备和应用
CN105462882A (zh) 一种用于防治作物黄萎病的铜绿假单胞菌及其应用
CN115340955A (zh) 一种高效培养丛枝菌根真菌的方法
CN105494105B (zh) 一种牡丹组织培养容器苗技术
CN104357351A (zh) 一种枯草芽孢杆菌菌株、生防菌剂及其制备方法及应用
CN108203695A (zh) 一株杜鹃花类菌根真菌功能菌株及其应用
JP2001120061A (ja) 菌根性きのこ類の菌根苗作成ならびに人工栽培

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee

Granted publication date: 20171031

Termination date: 20180820