CN105051015A

CN105051015A - 吡唑-酰胺化合物和其医药用途

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Publication number: CN105051015A
Application number: CN201480016173.0A
Authority: CN
Inventors: 本村隆尚; 正弥学顺
Original assignee: Japan Tobacco Inc
Current assignee: Japan Tobacco Inc
Priority date: 2013-03-15
Filing date: 2014-03-14
Publication date: 2015-11-11
Anticipated expiration: 2034-03-14
Also published as: CA2904985C; EP2975028A1; EP3348545A1; MX2015012743A; EP3805205A1; US20200163937A1; PE20151595A1; RU2015144182A3; US20180256547A1; JP2018188449A; SI2975028T1; HK1215808A1; JP6208603B2; RU2664532C2; NO2975028T3; TWI633885B; CL2015002608A1; JP2022000453A; WO2014142290A1; US20140296315A1

Abstract

下式表示的化合物：其中，n是1或2，、或者

Description

吡唑-酰胺化合物和其医药用途

技术领域

本发明提供吡唑-酰胺化合物和其医药用途。更具体地，本发明涉及吡唑-酰胺化合物或其药用可接受的盐，其具有丙酮酸脱氢酶激酶(以下缩写为PDHK)抑制活性，含其的药物组合物，含其的预防性或治疗性药剂，它们用于糖尿病(I型糖尿病、II型糖尿病等)、胰岛素耐受综合症、新陈代谢综合症、高血糖、血乳酸过多、糖尿病并发症(糖尿病性神经病变、糖尿病性视网膜病、糖尿病肾病、白内障等)、心力衰竭(急性心力衰竭、慢性心力衰竭)、心肌病、心肌缺血、心肌梗死、心绞痛、血脂障碍、动脉粥样硬化、周围动脉疾病、间歇性跛行、慢性阻塞性肺病、脑局部缺血、脑中风、线粒体病、线粒体脑肌病、癌症、肺性高血压症、或阿尔茨海默氏病等。

背景技术

在组织中，对于使用能量的反应，例如生物合成、活性转运、肌肉收缩等等，通过三磷酸腺苷(ATP)的水解提供能量。ATP由提供许多能量的代谢燃料如葡萄糖与游离脂肪酸的氧化提供。在氧化组织例如肌肉中，ATP主要由进入柠檬酸循环的乙酰-CoA产生。乙酰-CoA通过酵解途径由葡萄糖的氧化或游离脂肪酸的β-氧化产生。在控制由葡萄糖产生乙酰-CoA中起到关键作用的酶是丙酮酸脱氢酶(在下文缩写为PDH)。PDH催化烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)还原为NADH，同时将丙酮酸氧化为乙酰-CoA和二氧化碳(例如，非专利文献1、2)。

PDH是一种多酶复合物，其由三种酶组分(E1、E2和E3)以及一些位于线粒体基质中的亚单元组成。E1、E2和E3分别负责从丙酮酸脱羧，产生乙酰-CoA，和将NAD还原为NADH.

两种类型的具有调节功能的酶结合到PDH。一种是PDHK，其是对PDH具有专一性的蛋白激酶。其作用是通过磷酸化使复合物的E1α亚单位失活。另一个是PDH磷酸酶，其是通过E1α亚单位的脱磷酸激活PDH的专一性蛋白质磷酸酶。由激酶活性和磷酸酶活性的平衡确定PDH在其活性(脱磷酸)状态中的比例。通过代谢底物的相对浓度，调节激酶活性。例如，激酶活性通过增加NADH/NAD、乙酰-CoA/CoA和ATP/腺苷二磷酸(ADP)比来激活，通过丙酮酸来抑制(例如，非专利文献3)。

在哺乳动物的组织中，识别了4种类型的PDHK同功酶。特别地，PDHK2表达于很宽的组织(包括肝、骨骼肌和脂肪组织，涉及葡萄糖代谢)范围中。此外，因为PDHK2显示出对于通过增加的NADH/NAD或乙酰-CoA/CoA的激活和通过丙酮酸的抑制的较高的敏感度，表明牵连了葡萄糖代谢的短期调节(例如，非专利文献4)。

另外，PDHK1大量地表达在心肌、骨骼肌、胰腺β-细胞等中。此外，因为PDHK1的表达通过在缺血状态中激活缺氧可诱导的因子(HIF)1来诱发，表明其牵连缺血性疾病和癌性疾病(例如，非专利文献5)。

在如胰岛素依赖性(I型)糖尿病、非胰岛素依赖性(II型)糖尿病等疾病中，促进了脂质的氧化，同时降低了葡萄糖利用。这种葡萄糖利用的降低是引起高血糖的因素之一。当在I型和II型糖尿病和肥胖中氧化葡萄糖代谢降低时，PDH活性也降低。它表明在I型和II型糖尿病中在降低的葡萄糖利用中牵连了降低的PDH活性(例如，非专利文献6、7).

相反，在I型和II型糖尿病中增强了肝性糖原异生，其也构成引起高血糖的一个因素。降低的PDH活性增加了丙酮酸浓度，这又增加了乳酸作为肝性糖原异生的底物的可利用性。它表明在I型和II型糖尿病中在增强的糖原异生中可能牵连了降低的PDH活性(例如，非专利文献8、9)。当通过抑制PDHK激活PDH时，葡萄糖氧化速率被认为提高。结果，促进了体内葡萄糖利用并且抑制肝性糖原异生，借此预计改善了在I型和II型糖尿病中的高血糖(例如，非专利文献10、11、12)。归因于糖尿病的另一因素是受损害的胰岛素分泌，其已知与在胰腺β-细胞中的降低的PDH活性，和引入PDHK1、2和4有关(例如，非专利文献13、14)。另外，由于糖尿病造成的持续的高血糖已知引起并发症如糖尿病性神经病、糖尿病性视网膜病、糖尿病肾病等。维生素B1和α-硫辛酸有助于作为辅酶激活PDH。维生素B1和α-硫辛酸，或维生素B1衍生物和α-硫辛酸衍生物显示出对于治疗糖尿病并发症具有有前途的效果。因而，预计PDH的激活改善糖尿病并发症(例如，非专利文献15、16)。

在缺血性条件下，受限的供氧降低了葡萄糖和脂肪酸的氧化并且降低了组织中氧化磷酸化所产生的ATP的数量。在缺乏足够的氧气的情况下，通过促进的无氧糖酵解来保持ATP水平。结果，乳酸增加并且胞内pH降低。尽管机体试图通过能量消耗保持离子的内环境稳定，但是异常低的ATP水平和受毁坏的细胞渗透性导致细胞死亡。另外，一磷酸腺苷-激活激酶，在局部缺血期间被激活，磷酸化并且因此钝化乙酰-CoA羧化酶。在组织中的总丙二酰-CoA的水平下降，肉毒碱棕榈酰转移酶-1活性因此增加并且通过允许将酰基-CoA输送到线粒体中在葡萄糖氧化时有利于脂肪酸氧化。相比于脂肪酸的氧化，葡萄糖的氧化能够产生更多的ATP/每分子的氧气。在缺血性条件下，因此，当通过PDH的激活能量代谢变成葡萄糖氧化主导时，认为保持ATP水平的能力增强(例如，非专利文献17).

另外，因为PDH的激活引起由糖酵解所产生的丙酮酸的氧化，和降低乳酸的产生，认为在缺血性组织中净质子负荷降低。因此，通过抑制PDHK的PDH激活预计在缺血性疾病如心肌局部缺血中起到保护作用(例如，非专利文献18、19)。

通过抑制PDHK来激活PDH的药物被认为降低乳酸(lactate)生成，因为其促进丙酮酸(pyruvate)代谢。因此，这样的药物被预计可用于治疗血乳酸过多如线粒体病、线粒体脑肌病和败血病(例如，非专利文献20)。

在癌细胞中，PDHK1或2的表达增加。在癌细胞中，此外，通过在线粒体中的氧化磷酸化的ATP产生降低，通过在细胞质中无氧糖酵解的ATP产生增加。预计通过抑制PDHK来激活PDH促进了在线粒体中的氧化磷酸化，增加活性氧的产生，这将诱发癌细胞的细胞凋亡。因此，通过PDHK抑制来激活PDH可用于治疗癌性疾病(例如，非专利文献21)。

肺动脉高血压特征为高血压，这由肺动脉的部分变窄(由于其中增加的细胞增殖造成)所引起。在肺动脉高血压中，因此，预计在肺动脉细胞中PDH的激活促进了线粒体中的氧化磷酸化，增加了活性氧的产生，诱发了肺动脉细胞的细胞凋亡。因此，通过PDHK抑制来激活PDH被认为可用于治疗肺动脉高血压(例如，非专利文献22)。

在阿尔茨海默氏病中，大脑中的能量产生和葡萄糖代谢降低，并且此外，PDH活性下降。当PDH活性下降时，乙酰CoA的产生降低。乙酰CoA被用于通过柠檬酸循环在电子传递体系中产生ATP。乙酰CoA也是合成乙酰胆碱的原材料，其是神经递质之一。因此，在阿尔茨海默氏病中降低的脑PDH活性被认为引起神经元细胞死亡（由于降低的ATP产生）。此外，据信合成乙酰胆碱，其是胆碱能神经的递质，受到抑制而诱发记忆等的退化。在脑中激活PDH预计在阿尔茨海默氏病中增强能量产生和乙酰胆碱合成。因此，通过抑制PDHK来激活PDH被认为可用于治疗阿尔茨海默氏病(例如，非专利文献23、24)。

已经表明，二氯乙酸，其是具有PDH激活作用的药物，提供用于治疗糖尿病、心肌缺血、心肌梗塞、心绞痛、心力衰竭、血乳酸过多、脑局部缺血、脑中风、外周动脉疾病、慢性阻塞性肺病、癌性疾病、和肺动脉高血压的有前途的效果(例如，非专利文献10、18、20、22、25、26、27)。

由上述发现，PDHK抑制剂被认为可用于预防或治疗与葡萄糖利用障碍有关的疾病，例如，糖尿病(I型糖尿病、II型糖尿病等)、胰岛素耐受综合症、新陈代谢综合症、高血糖、血乳酸过多、糖尿病并发症(糖尿病性神经病、糖尿病性视网膜病、糖尿病肾病、白内障等)。此外，PDHK抑制剂被认为可用于预防或治疗由对于组织的受限的能量底物提供所引起的疾病，例如，心力衰竭(急性心力衰竭、慢性心力衰竭)、心肌病、心肌缺血、心肌梗塞、心绞痛、血脂障碍、动脉粥样硬化、外周动脉疾病、间歇性跛行、慢性阻塞性肺病、脑局部缺血和脑中风。

因此，PDHK抑制剂被认为可用于治疗或预防糖尿病(I型糖尿病、II型糖尿病等)、胰岛素耐受综合症、新陈代谢综合症、高血糖、血乳酸过多、糖尿病并发症(糖尿病性神经病、糖尿病性视网膜病、糖尿病肾病、白内障等)、心力衰竭(急性心力衰竭、慢性心力衰竭)、心肌病、心肌缺血、心肌梗塞、心绞痛、血脂障碍、动脉粥样硬化、外周动脉疾病、间歇性跛行、慢性阻塞性肺病、脑局部缺血、脑中风、线粒体病、线粒体脑肌病、癌症、肺动脉高血压或阿尔茨海默氏病。

文献列表

非专利文献

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非专利文献23:SaxenaU.BioenergeticsbreakdowninAlzheimer'sdisease:targetsfornewtherapies.IntJPhysiolPathophysiolPharmacol.2011;3(2):133-9.

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非专利文献25:MarangosPJ,TurkelCC,DziewanowskaZE,FoxAW.Dichloroacetateandcerebralischaemiatherapeutics.ExpertOpinInvestigDrugs.1999Apr;8(4):373-82.

非专利文献26:CalvertLD,ShelleyR,SinghSJ,GreenhaffPL,BankartJ,MorganMD,etal.Dichloroacetateenhancesperformanceandreducesbloodlactateduringmaximalcycleexerciseinchronicobstructivepulmonarydisease.AmJRespirCritCareMed.2008May15;177(10):1090-4.

非专利文献27:FlavinDF.Non-Hodgkin'sLymphomaReversalwithDichloroacetate.JOncol.HindawiPublishingCorporationJournalofOncology,Volume2010,ArticleID414726,4pagesdoi:10.1155/2010/414726。

发明内容

本发明如下.

[1]式(I)表示的化合物：。

。

其中，n是1或2，

或其药用可接受的盐，

[2]下式表示的化合物。

或者。

[3]上述[2]的化合物，其由式[II]表示。

。

[4]上述[2]的化合物，其由式[IIh]表示。

。

[5]式[III]表示的化合物。

。

[6]一种药物组合物，其包括上述[1]至[5]中任一项的化合物，或其药用可接受的盐，和药用可接受的载体，

[7]一种PDHK抑制剂，其包括上述[1]至[5]中任一项的化合物，或其药用可接受的盐，

[8]一种PDHK1抑制剂，其包括上述[1]至[5]中任一项的化合物，或其药用可接受的盐，

[9]一种PDHK2抑制剂，其包括上述[1]至[5]中任一项的化合物，或其药用可接受的盐，

[10]一种降血糖药，其包括上述[1]至[5]中任一项的化合物，或其药用可接受的盐，

[11]一种降乳酸药，其包括上述[1]至[5]中任一项的化合物，或其药用可接受的盐，

[12]一种用于预防或治疗糖尿病、胰岛素耐受综合症、新陈代谢综合症、高血糖、血乳酸过多、糖尿病并发症、心力衰竭、心肌病、心肌缺血、心肌梗死、心绞痛、血脂障碍、动脉粥样硬化、周围动脉疾病、间歇性跛行、慢性阻塞性肺病、脑局部缺血、脑中风、线粒体疾病、线粒体脑肌病、癌症或肺性高血压症的药剂，其包括上述[1]至[5]中任一项的化合物，或其药用可接受的盐，

[12']一种用于预防或治疗糖尿病、胰岛素耐受综合症、新陈代谢综合症、高血糖、血乳酸过多、糖尿病并发症、心力衰竭、心肌病、心肌缺血、心肌梗死、心绞痛、血脂障碍、动脉粥样硬化、周围动脉疾病、间歇性跛行、慢性阻塞性肺病、脑局部缺血、脑中风、线粒体病、线粒体脑肌病、癌症、肺性高血压症或阿尔茨海默氏病的药剂，其包括上述[1]至[5]中任一项的化合物，或其药用可接受的盐，

[13]上述[12]的预防性或治疗性药剂，其中糖尿病是I型糖尿病或II型糖尿病，

[14]上述[12]的预防性或治疗性药剂，其中糖尿病并发症选自糖尿病性神经病变、糖尿病性视网膜病、糖尿病肾病和白内障，

[15]上述[12]的预防性或治疗性药剂，其中心力衰竭是急性心力衰竭或慢性心力衰竭，

[16]一种药物组合物，其包括

(a)上述[1]至[5]中任一项的化合物，或其药用可接受的盐，和

(b)至少一种其它有效用于预防或治疗选自糖尿病(I型糖尿病、II型糖尿病)、胰岛素耐受综合症、新陈代谢综合症、高血糖、血乳酸过多、糖尿病并发症(糖尿病性神经病变、糖尿病性视网膜病、糖尿病肾病、白内障)、心力衰竭(急性心力衰竭、慢性心力衰竭)、心肌病、心肌缺血、心肌梗死、心绞痛、血脂障碍、动脉粥样硬化、周围动脉疾病、间歇性跛行、慢性阻塞性肺病、脑局部缺血、脑中风、线粒体疾病、线粒体脑肌病、癌症和肺性高血压症的疾病的药剂，

[16']一种药物组合物，其包括

(a)上述[1]至[5]中任一项的化合物，或其药用可接受的盐，和

(b)至少一种其它有效用于预防或治疗选自糖尿病(I型糖尿病、II型糖尿病)、胰岛素耐受综合症、新陈代谢综合症、高血糖、血乳酸过多、糖尿病并发症(糖尿病性神经病变、糖尿病性视网膜病、糖尿病肾病、白内障)、心力衰竭(急性心力衰竭、慢性心力衰竭)、心肌病、心肌缺血、心肌梗死、心绞痛、血脂障碍、动脉粥样硬化、周围动脉疾病、间歇性跛行、慢性阻塞性肺病、脑局部缺血、脑中风、线粒体病、线粒体脑肌病、癌症、肺性高血压症和阿尔茨海默氏病的疾病的药剂，

[17]一种组合药，其包括

(a)上述[1]至[5]中任一项的化合物，或其药用可接受的盐，和

(b)至少一种其它有效用于预防或治疗选自糖尿病(I型糖尿病、II型糖尿病)、胰岛素耐受综合症、新陈代谢综合症、高血糖、血乳酸过多、糖尿病并发症(糖尿病性神经病变、糖尿病性视网膜病、糖尿病肾病、白内障)、心力衰竭(急性心力衰竭、慢性心力衰竭)、心肌病、心肌缺血、心肌梗死、心绞痛、血脂障碍、动脉粥样硬化、周围动脉疾病、间歇性跛行、慢性阻塞性肺病、脑局部缺血、脑中风、线粒体疾病、线粒体脑肌病、癌症和肺性高血压症的疾病的药剂，它们被同时地、单独地或连续地给药，

[17']一种组合药，其包括

(a)上述[1]至[5]中任一项的化合物，或其药用可接受的盐，和

(b)至少一种其它有效用于预防或治疗选自糖尿病(I型糖尿病、II型糖尿病)、胰岛素耐受综合症、新陈代谢综合症、高血糖、血乳酸过多、糖尿病并发症(糖尿病性神经病变、糖尿病性视网膜病、糖尿病肾病、白内障)、心力衰竭(急性心力衰竭、慢性心力衰竭)、心肌病、心肌缺血、心肌梗死、心绞痛、血脂障碍、动脉粥样硬化、周围动脉疾病、间歇性跛行、慢性阻塞性肺病、脑局部缺血、脑中风、线粒体病、线粒体脑肌病、癌症、肺性高血压症和阿尔茨海默氏病的疾病的药剂，它们被同时地、单独地或连续地给药，

[18]一种在哺乳动物中抑制PDHK的方法，包括向所述哺乳动物给予药用有效量的上述[1]至[5]中任一项的化合物，或其药用可接受的盐，

[19]一种在哺乳动物中抑制PDHK1的方法，包括向所述哺乳动物给予药用有效量的上述[1]至[5]中任一项的化合物，或其药用可接受的盐，

[20]一种在哺乳动物中抑制PDHK2的方法，包括向所述哺乳动物给予药用有效量的上述[1]至[5]中任一项的化合物，或其药用可接受的盐，

[21]一种在哺乳动物中预防或治疗糖尿病(I型糖尿病、II型糖尿病)、胰岛素耐受综合症、新陈代谢综合症、高血糖、血乳酸过多、糖尿病并发症(糖尿病性神经病变、糖尿病性视网膜病、糖尿病肾病、白内障)、心力衰竭(急性心力衰竭、慢性心力衰竭)、心肌病、心肌缺血、心肌梗死、心绞痛、血脂障碍、动脉粥样硬化、周围动脉疾病、间歇性跛行、慢性阻塞性肺病、脑局部缺血、脑中风、线粒体疾病、线粒体脑肌病、癌症或肺性高血压症的方法，包括向所述哺乳动物给予药用有效量的上述[1]至[5]中任一项的化合物，或其药用可接受的盐，

[21']一种在哺乳动物中预防或治疗糖尿病(I型糖尿病、II型糖尿病)、胰岛素耐受综合症、新陈代谢综合症、高血糖、血乳酸过多、糖尿病并发症(糖尿病性神经病变、糖尿病性视网膜病、糖尿病肾病、白内障)、心力衰竭(急性心力衰竭、慢性心力衰竭)、心肌病、心肌缺血、心肌梗死、心绞痛、血脂障碍、动脉粥样硬化、周围动脉疾病、间歇性跛行、慢性阻塞性肺病、脑局部缺血、脑中风、线粒体病、线粒体脑肌病、癌症、肺性高血压症或阿尔茨海默氏病的方法，包括向所述哺乳动物给予药用有效量的上述[1]至[5]中任一项的化合物，或其药用可接受的盐，

[22]一种在哺乳动物中降低血糖水平的方法，包括向所述哺乳动物给予药用有效量的上述[1]至[5]中任一项的化合物，或其药用可接受的盐，

[23]一种在哺乳动物中降低乳酸(lactate)水平的方法，包括向所述哺乳动物给予药用有效量的上述[1]至[5]中任一项的化合物，或其药用可接受的盐，

[24]上述[1]至[5]中任一项的化合物或其药用可接受的盐在制备PDHK抑制剂中的用途，

[25]上述[1]至[5]中任一项的化合物或其药用可接受的盐在制备PDHK1抑制剂中的用途，

[26]上述[1]至[5]中任一项的化合物或其药用可接受的盐在制备PDHK2抑制剂中的用途，

[27]上述[1]至[5]中任一项的化合物或其药用可接受的盐在制备降血糖水平的药剂中的用途，

[28]上述[1]至[5]中任一项的化合物或其药用可接受的盐在制备降乳酸(lactate)水平的药剂中的用途，

[29]上述[1]至[5]中任一项的化合物或其药用可接受的盐在制备用于糖尿病(I型糖尿病、II型糖尿病)、胰岛素耐受综合症、新陈代谢综合症、高血糖、血乳酸过多、糖尿病并发症(糖尿病性神经病变、糖尿病性视网膜病、糖尿病肾病、白内障)、心力衰竭(急性心力衰竭、慢性心力衰竭)、心肌病、心肌缺血、心肌梗死、心绞痛、血脂障碍、动脉粥样硬化、周围动脉疾病、间歇性跛行、慢性阻塞性肺病、脑局部缺血、脑中风、线粒体疾病、线粒体脑肌病、癌症或肺性高血压症的预防性或治疗性药剂中的用途，

[29']上述[1]至[5]中任一项的化合物或其药用可接受的盐在制备用于糖尿病(I型糖尿病、II型糖尿病)、胰岛素耐受综合症、新陈代谢综合症、高血糖、血乳酸过多、糖尿病并发症(糖尿病性神经病变、糖尿病性视网膜病、糖尿病肾病、白内障)、心力衰竭(急性心力衰竭、慢性心力衰竭)、心肌病、心肌缺血、心肌梗死、心绞痛、血脂障碍、动脉粥样硬化、周围动脉疾病、间歇性跛行、慢性阻塞性肺病、脑局部缺血、脑中风、线粒体病、线粒体脑肌病、癌症、肺性高血压症或阿尔茨海默氏病的预防性或治疗性药剂中的用途，

[30]上述[24]至[29]中任一项的用途，其结合以至少一种其它有效用于预防或治疗选自糖尿病(I型糖尿病、II型糖尿病)、胰岛素耐受综合症、新陈代谢综合症、高血糖、血乳酸过多、糖尿病并发症(糖尿病性神经病变、糖尿病性视网膜病、糖尿病肾病、白内障)、心力衰竭(急性心力衰竭、慢性心力衰竭)、心肌病、心肌缺血、心肌梗死、心绞痛、血脂障碍、动脉粥样硬化、周围动脉疾病、间歇性跛行、慢性阻塞性肺病、脑局部缺血、脑中风、线粒体疾病、线粒体脑肌病、癌症和肺性高血压症的疾病的药剂，和

[30']上述[24]至[29]中任一项的用途，其结合以至少一种其它有效用于预防或治疗选自糖尿病(I型糖尿病、II型糖尿病)、胰岛素耐受综合症、新陈代谢综合症、高血糖、血乳酸过多、糖尿病并发症(糖尿病性神经病变、糖尿病性视网膜病、糖尿病肾病、白内障)、心力衰竭(急性心力衰竭、慢性心力衰竭)、心肌病、心肌缺血、心肌梗死、心绞痛、血脂障碍、动脉粥样硬化、周围动脉疾病、间歇性跛行、慢性阻塞性肺病、脑局部缺血、脑中风、线粒体病、线粒体脑肌病、癌症、肺性高血压症和阿尔茨海默氏病等的疾病的药剂。

本发明的效果

本发明的化合物或其药用可接受的盐抑制PDHK活性，可用作用于糖尿病(I型糖尿病、II型糖尿病)、胰岛素耐受综合症、新陈代谢综合症、高血糖、血乳酸过多、糖尿病并发症(糖尿病性神经病变、糖尿病性视网膜病、糖尿病肾病、白内障)、心力衰竭(急性心力衰竭、慢性心力衰竭)、心肌病、心肌缺血、心肌梗死、心绞痛、血脂障碍、动脉粥样硬化、周围动脉疾病、间歇性跛行、慢性阻塞性肺病、脑局部缺血、脑中风、线粒体病、线粒体脑肌病、癌症、肺性高血压症或阿尔茨海默氏病等的治疗性或预防性药剂。

附图说明

图1显示了在非禁食SD(IGS)大鼠中测试化合物对肝PDH活性(活性肝PDH活性相对于总肝PDH活性的百分比)的效果(均值±标准偏差(n=3)).

图2显示了在非禁食SD(IGS)大鼠中测试化合物对脂肪组织PDH活性(活性脂肪组织PDH活性相对于总脂肪组织PDH活性的百分比)的效果(均值±标准偏差(n=3))。

具体实施方案

在下文中详述本发明.

本发明的化合物是由式(I)表示的化合物。

。

其中，n是1或2，

(在下文中也称为化合物(1))，或其药用可接受的盐。

本发明的化合物是由式[II]表示的化合物。

。

(2-{4-[(9R)-9-羟基-2-(3-羟基-3-甲基丁基氧基)-9-(三氟甲基)-9H-芴-4-基]-1H-吡唑-1-基}-2-甲基丙酰胺)(在下文中也称为化合物(2)).

本发明化合物是由式[IIh]表示的化合物。

。

(2-{4-[(9R)-9-羟基-2-(3-羟基-3-甲基丁基氧基)-9-(三氟甲基)-9H-芴-4-基]-1H-吡唑-1-基}-2-甲基丙酰胺一水合物)(在下文中也称为化合物(2h))。

本发明化合物是由式[III]表示的化合物。

。

(2-{4-[(9R)-9-羟基-2-(4-羟基-4-甲基戊氧基)-9-(三氟甲基)-9H-芴-4-基]-1H-吡唑-1-基}-2-甲基丙酰胺)(在下文中也称为化合物(3))。

本发明化合物的药用可接受的盐可以是任何盐，只要其与本发明化合物形成无毒盐。其实例包括与无机酸的盐，与有机酸的盐，与氨基酸的盐等。

与无机酸的盐的实例包括与盐酸、硝酸、硫酸、磷酸、氢溴酸等的盐.

与有机酸的盐的实例包括与草酸、马来酸、柠檬酸、富马酸、乳酸、苹果酸、琥珀酸、酒石酸、乙酸、三氟乙酸、葡糖酸、抗坏血酸、甲磺酸、苯磺酸、对甲苯磺酸等的盐.

与氨基酸的盐的实例包括与赖氨酸、精氨酸、天门冬氨酸、谷氨酸等的盐.

本发明化合物的药用可接受的盐优选地是与无机酸的盐。

另外，本发明化合物或其药用可接受的盐可以标记以同位素(例如³H、¹⁴C、³⁵S等)。

作为本发明化合物或其药用可接受的盐，化合物(1)或其药用可接受的盐，其每一个基本上被提纯过，是优选的。更优选的是本发明化合物或其药用可接受的盐，其每个被提纯至不小于80%的纯度。

式[I]的化合物或其药用可接受的盐可以以溶剂化物的形式存在。术语"溶剂化物"是指与溶剂分子缔合(associate)的式[I]的化合物或其药用可接受的盐，并且还包括水合物。这样的溶剂化物优选地是药用可接受的溶剂化物。这样的溶剂化物包括，例如，式[I]的化合物或其药用可接受的盐的水合物、乙醇溶剂化物、二甲亚砜-溶剂化物等。具体的实例包括式[I]的化合物的半水合物、一水合物、二水合物或单(乙醇)溶剂化物或式[I]的化合物的一水合物，式[I]的化合物的二盐酸盐的2/3(乙醇)溶剂化物，等等。这样的溶剂化物可以根据常规方法制备。

"药物组合物"的实例包括口服制剂如片剂(tablet)、胶囊、颗粒、粉末、含片(troche)、糖浆剂、乳剂、混悬液等，和肠胃外药剂如外用制剂、栓剂、注射剂、滴眼剂、经鼻制剂、经肺制剂等。

本发明的药物组合物根据药物制剂领域中本身已知的方法来制备，通过将本发明化合物或其药用可接受的盐与合适数量的至少一种药用可接受的载体等(视情况而定)混合。虽然本发明化合物或其药用可接受的盐在药物组合物中的含量取决于剂型、剂量等而变化，但是其例如是全部组合物的0.1至100wt%。

"药用可接受的载体"的实例包括各种常规用作制剂材料的有机或无机载体物质，例如，对于固体制剂，赋形剂、崩解剂、粘结剂、流化剂、润滑剂等，对于液体制剂，溶剂、增溶剂、悬浮剂、等渗剂、缓冲剂、抚慰剂等。在必要时，此外，使用添加剂如防腐剂、抗氧化剂、着色剂、甜味剂等。

"赋形剂"的实例包括乳糖、蔗糖、D-甘露醇、D-山梨醇、玉米淀粉、糊精、微晶纤维素、结晶纤维素、羧甲纤维素、羧甲纤维素钙、羧甲基淀粉钠、低取代的羟丙基纤维素、阿拉伯胶等。

"崩解剂"的实例包括羧甲纤维素、羧甲纤维素钙、羧甲纤维素钠、羧甲基淀粉钠、交联的羧甲基纤维素钠、交聚维酮、低取代的羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、结晶纤维素等。

"粘结剂"的实例包括羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、聚维酮、结晶纤维素、蔗糖、糊精、淀粉、明胶、羧甲纤维素钠、阿拉伯胶等。

"流化剂"的实例包括轻质无水硅酸、硬脂酸镁等。

"润滑剂"的实例包括硬脂酸镁、硬脂酸钙、滑石等。

"溶剂"的实例包括提纯水、乙醇、丙二醇、聚乙二醇、芝麻油、玉米油、橄榄油等。

"增溶剂"的实例包括丙二醇、D-甘露醇、苯甲酸苄酯、乙醇、三乙醇胺、碳酸钠、柠檬酸钠等。

"悬浮剂"的实例包括苯扎氯铵、羧甲纤维素、羟丙基纤维素、丙二醇、聚维酮、甲基纤维素、单硬脂酸甘油酯等。

"等渗剂"的实例包括葡萄糖、D-山梨醇、氯化钠、D-甘露醇等。

"缓冲剂"的实例包括磷酸氢钠、乙酸钠、碳酸钠、柠檬酸钠等。

"抚慰剂"的实例包括苯甲醇等。

"防腐剂"的实例包括对羟基苯甲酸乙酯、氯丁醇、苯甲醇、脱氢醋酸钠、山梨酸等。

"抗氧化剂"的实例包括亚硫酸钠、抗坏血酸等。

"着色剂"的实例包括食品色素(例如食品色素红No.2或3、食品色素黄No.4或5等)、β-叶红素等。

"甜味剂"的实例包括糖精钠、甘草酸二钾、阿司帕坦等。

本发明的药物组合物可以口服或肠胃外(例如局部、肌内、皮下、直肠、静脉内给药等)给予人以及非人的哺乳动物(例如小鼠、大鼠、仓鼠、豚鼠、兔、猫、狗、猪、牛、马、羊、猴等)。取决于所给予的受试者、疾病、症状、剂型、给予途径等，剂量变化。例如，成年患者(体重：约60kg)的口服给予的日剂量通常是约1mg至1g，基于作为活性成分的化合物(1)。这种数量可以以一部分或数个部分的形式给予。

因为本发明化合物或其药用可接受的盐具有PDHK(PDHK1和/或PDHK2)抑制活性，它被认为有利于治疗或预防与葡萄糖利用的损伤有关的疾病，例如，糖尿病(I型糖尿病、II型糖尿病等)、胰岛素耐受综合症、新陈代谢综合症、高血糖、血乳酸过多、糖尿病并发症(糖尿病性神经病、糖尿病性视网膜病、糖尿病肾病、白内障等)。另外，PDHK抑制剂被认为有利于治疗或预防疾病(其中能量底物供给到组织受到限制)，例如，心力衰竭(急性心力衰竭、慢性心力衰竭)、心肌病、心肌缺血、心肌梗塞、心绞痛、血脂障碍、动脉粥样硬化、外周动脉疾病、间歇性跛行、慢性阻塞性肺病、脑局部缺血和脑中风。此外，PDHK抑制剂被认为有利于治疗或预防线粒体病、线粒体脑肌病、癌症、肺动脉高血压或阿尔茨海默氏病等。

例如，糖尿病是I型糖尿病或II型糖尿病。

糖尿病并发症的实例包括糖尿病性神经病、糖尿病性视网膜病、糖尿病肾病和白内障。

例如，心力衰竭是急性心力衰竭或慢性心力衰竭。

"抑制PDHK"是指抑制PDHK的功能和消除或减弱活性。对于"抑制PDHK"，优选抑制人PDHK。作为"PDHK抑制剂"，优选的是"人PDHK抑制剂"。

"抑制PDHK1"是指抑制PDHK1的功能和消除或减弱活性。例如，它意味着抑制作为PDHK1的功能，基于下述的实验实施例1中的条件。对于"抑制PDHK1"，优选抑制人PDHK1。作为"PDHK1抑制剂"，优选的是"人PDHK1抑制剂"。更优选的是"人目标器官的PDHK1抑制剂"。

"抑制PDHK2"是指抑制PDHK2的功能和消除或减弱活性。例如，它意味着抑制作为PDHK2的功能，基于下述的实验实施例1中的条件。对于"抑制PDHK2"，优选抑制人PDHK2。作为"PDHK2抑制剂"，优选的是"人PDHK2抑制剂"。更优选的是"人目标器官的PDHK2抑制剂"。

"激活PDH"是指在目标器官(例如肝、骨骼肌、脂肪组织、心脏、脑)等、癌症或类似物中激活PDH。

"降低血糖水平"是指降低血液(包括血清和血浆)中的葡萄糖浓度，优选地降低高血糖水平，更优选地，降低血糖水平至人的治疗有效的正常水平。

"降低乳酸水平"是指降低血液(包括血清和血浆)中的乳酸浓度，优选地降低高乳酸水平，更优选地，降低乳酸水平至人的治疗有效的正常水平。

根据医学领域中通常使用的方法，本发明化合物或其药用可接受的盐可以与一种或多种其它药物(在下文中也称为相伴药物)组合使用(在下文中称为组合使用)。

本发明化合物或其药用可接受的盐和相伴药物的给予期间不受限制，它们可以以组合制剂的形式给予到给予受试者，或者两种制剂可以同时地或者以给定的间隔给予。另外，本发明的药物组合物和相伴药物可以以试剂盒的形式用作药物。相伴药物的剂量类似于临床上使用的剂量并且可以根据给予的受试者、疾病、症状、剂型、给予途径、给予时间、组合等适当地选择。相伴药物的给予形式没有特别地限制，它只需要与本发明化合物或其药用可接受的盐组合。

组合药的实例包括用于糖尿病(I型糖尿病、II型糖尿病等)、胰岛素耐受综合症、新陈代谢综合症、高血糖、血乳酸过多、糖尿病并发症(糖尿病性神经病、糖尿病性视网膜病、糖尿病肾病、白内障)、心力衰竭(急性心力衰竭、慢性心力衰竭)、心肌病、心肌缺血、心肌梗塞、心绞痛、血脂障碍、动脉粥样硬化、外周动脉疾病、间歇性跛行、慢性阻塞性肺病、脑局部缺血、脑中风、线粒体病、线粒体脑肌病、癌症、肺动脉高血压或阿尔茨海默氏病等的治疗性药剂和/或预防性药剂，其中的一种或多种药剂和本发明化合物或其药用可接受的盐可以组合使用。

"用于治疗和/或预防糖尿病的药剂"的实例包括胰岛素制剂、磺酰脲降血糖药、二甲双胍、DPP-4抑制剂、胰岛素耐受性改善剂(例如，噻唑烷衍生物)、GLP-1受体激动剂等。

实施例

通过实施例具体说明本发明化合物或其药用可接受的盐的制备方法。然而，本发明不局限于这些实施例.

即使在本申请的制备方法中没有描述，为了有效的制备，可以对各步骤进行改变，例如在必要时将保护基引入官能团中而在随后的步骤中去保护，在每一步骤中使用作为前体的官能团、随后在合适的阶段转化为期望的官能团，改变制备方法和步骤的次序，诸如此类.

每一步骤中的反应后的处理可以通过常规方法进行，其中分离和提纯可以根据需要按照适当选自常规方法如结晶、重结晶、蒸馏、分配、硅胶色谱法、制备HPLC等，或其组合的方法来进行。全部的试剂和溶剂是品质良好的市售可得的产品，并且在没有提纯的情况下使用。

百分比%表示wt%。实施例部分中使用的其它缩写具有以下含义.

s：单峰(singlet)

d：双峰(doublet)

t：三重峰(triplet)

q：四重峰(quartet)

m：多重峰(multiplet)

br：宽峰

dd：双双峰(doubledoublet)

td：三双峰(tripledoublet)

ddd：二双重峰(doubledoubledoublet)

J：偶联常数

CDCl₃：氘化氯仿

DMSO-D₆：氘化二甲亚砜

¹HNMR：质子核磁共振

HPLC：高效液相色谱

DPPA：二苯基磷酰叠氮化物

¹H-NMR谱是使用四甲基硅烷作为内标在CDCl₃或DMSO-D₆中测量的，并且全部δ值是以ppm显示的。

(10mM磷酸盐缓冲液(pH2.0))

将磷酸二氢钠(3.60g)溶解在水(3000ml)中，并且用磷酸调节到pH2.0而得到标题缓冲液。

HPLC分析条件

分析条件1

测量设备：HPLC系统SHIMADZUCORPORATION高效液相色谱Prominence

柱：DAICELCHIRALCELOD-3R4.6mmФ×150mm

柱温：40℃

流动相：(溶液A)10mM磷酸盐缓冲液(pH2.0)，(溶液B)乙腈

流动相的组成(溶液A:溶液B)在20分钟内线性地从50:50变化到20:80，并随后维持在20:80达5分钟，

流速：0.5ml/min

检测：UV(220nm)。

分析条件2

测量设备：HPLC系统SHIMADZUCORPORATION高效液相色谱Prominence

柱：DAICELCHIRALCELOJ-RH4.6mmФx150mm

柱温：40℃

流动相：(溶液A)10mM磷酸盐缓冲液(pH2.0)，(溶液B)乙腈

流动相的组成(溶液A:溶液B)在20分钟内线性地从70:30变化到40:60，并随后维持在40:60达10分钟，

流速：0.5ml/min

检测：UV(220nm)。

分析条件3

测量设备：HPLC系统SHIMADZUCORPORATION高效液相色谱Prominence

柱：DAICELCHIRALPAKAD-3R4.6mmФ×150mm

柱温：40℃

流动相：(溶液A)10mM磷酸盐缓冲液(pH2.0)，(溶液B)乙腈

流速：0.5ml/min

检测：UV(220nm)。

实施例1

合成2-{4-[(9R)-9-羟基-2-(3-羟基-3-甲基丁基氧基)-9-(三氟甲基)-9H-芴-4-基]-1H-吡唑-1-基}-2-甲基丙酰胺(化合物(2))。

步骤1

2'-氯-4'-甲氧基联苯-2-甲酸乙酯。

。

在氩气氛下，将1-溴-2-氯-4-甲氧基苯(44.3g)溶解在甲苯(220ml)中，添加2-(4,4,5,5-四甲基[1,3,2]二氧杂环戊硼烷-2-基)苯甲酸乙酯(60.8g)、水(132ml)、碳酸氢钠(33.6g)和二氯双(三苯膦)钯(II)(2.8g)，在120℃的油浴温度搅拌该混合物7小时。向反应混合物中添加2-(4,4,5,5-四甲基[1,3,2]二氧杂环戊硼烷-2-基)苯甲酸乙酯(5.2g)，进一步搅拌混合物2小时。冷却反应混合物至室温，添加甲苯(100ml)和水(200ml)，并且搅拌该混合物过夜。向反应混合物中添加活性炭(3g)，进一步搅拌该混合物1小时。通过硅藻土滤出不溶性材料，不溶性材料用甲苯(100ml)和水(200ml)洗涤。合并所获得的滤液，以使得层分离。所获得的有机层用水(100ml)洗涤，和蒸发溶剂，而得到标题化合物(67.7g).

¹H-NMR(400MHz,DMSO-D₆)δ:7.88-7.86(1H,m),7.63(1H,td,J=7.6,1.4Hz),7.51(1H,td,J=7.6,1.4Hz),7.27(1H,dd,J=7.6,0.9Hz),7.18(1H,d,J=8.6Hz),7.06(1H,d,J=2.6Hz),6.95(1H,dd,J=8.6,2.6Hz),4.01(2H,m),3.80(3H,s),0.96(3H,t,J=7.1Hz)。

步骤2

2'-氯-4'-甲氧基联苯-2-甲酸。

。

将2'-氯-4'-甲氧基联苯-2-甲酸乙酯(67.7g)溶解在乙醇(100ml)中，添加4N氢氧化钠水溶液(100ml)，在110℃的油浴温度搅拌该混合物4.5小时。冷却反应混合物至室温，添加水(200ml)和甲苯(100ml)，并且搅拌该混合物过夜。向反应混合物中添加活性炭(3.6g)，进一步搅拌该混合物1小时。通过硅藻土滤出不溶性材料，不溶性材料用甲苯(30ml)和水(300ml)洗涤。合并所获得的滤液，以使得层分离。所获得的水层用甲苯(100ml)洗涤，水层用浓盐酸(40ml)酸化，并且在室温下搅拌1小时。通过过滤收集沉淀的固体。使所获得的固体风干3小时，在60℃在减压下干燥过夜而得到标题化合物(50.2g).

¹H-NMR(400MHz,DMSO-D₆)δ:12.57(1H,s),7.90-7.88(1H,m),7.60(1H,td,J=7.6,1.3Hz),7.49(1H,td,J=7.6,1.3Hz),7.24(1H,dd,J=7.6,1.0Hz),7.19(1H,d,J=8.4Hz),7.06(1H,d,J=2.4Hz),6.95(1H,dd,J=8.5,2.4Hz),3.81(3H,s)。

步骤3

4-氯-2-甲氧基-9H-芴-9-酮。

。

在氩气氛下，向2'-氯-4'-甲氧基联苯-2-甲酸(65.4g)中添加Eaton试剂(五氧化二磷-甲磺酸(重量比1:10)溶液，330ml)，在100℃的油浴温度搅拌该混合物1小时。将反应混合物冰冷，慢慢地滴加水(650ml)，在室温搅拌该混合物1小时。通过过滤收集沉淀的固体，并且用水(500ml)洗涤。将所获得的固体风干过夜而得到标题化合物(92.0g).

¹H-NMR(400MHz,DMSO-D₆)δ:8.01(1H,d,J=7.4Hz),7.64-7.60(2H,m),7.36(1H,td,J=7.4,0.9Hz),7.17(2H,dd,J=8.4,2.3Hz),3.85(3H,s)。

步骤4

4-氯-2-羟基-9H-芴-9-酮。

。

在氩气氛下，向4-氯-2-甲氧基-9H-芴-9-酮(92.0g)中添加N-甲基吡咯烷酮(120ml)和盐酸吡啶(144g)。在200℃的油浴温度搅拌反应混合物3小时，通过Dean-Stark装置除去水。冷却反应混合物至90℃，滴加水(600ml)，在室温搅拌该混合物2小时。通过过滤收集沉淀的固体，并且用水(400ml)洗涤。将所获得的固体风干3天，添加己烷和乙酸乙酯的混合溶剂(己烷:乙酸乙酯1:1，300ml)，在室温搅拌该混合物1小时。通过过滤收集固体，并且用己烷和乙酸乙酯的混合溶剂(己烷:乙酸乙酯=1:1，500ml)洗涤。在50℃在减压下干燥所获得的固体3小时而得到标题化合物(48.6g).

¹H-NMR(400MHz,DMSO-D₆)δ:10.56(1H,s),7.96(1H,d,J=8.4Hz),7.61-7.57(2H,m),7.32(1H,td,J=7.4,0.9Hz),6.97(1H,d,J=2.2Hz),6.94(1H,d,J=2.2Hz)。

步骤5

4-(4-氯-9-氧代-9H-芴-2-基氧基)丁酸乙酯。

。

将4-氯-2-羟基-9H-芴-9-酮(48.6g)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(150ml)中，添加碳酸钾(58.3g)和4-溴丁酸乙酯(33.5ml)，在60℃搅拌该混合物2小时。冷却反应混合物至40℃，添加甲苯(300ml)和水(300ml)，以使得层分离。再次用甲苯(100ml)萃取所获得的水层。合并所获得的有机层，用水(100ml)洗涤两次，添加无水硫酸钠和活性炭(2.5g)，在室温搅拌该混合物5分钟。通过硅藻土滤出不溶性材料，蒸发滤液中的溶剂。向所获得的残余物中添加己烷(220ml)，在50℃搅拌该混合物10分钟，和在室温下搅拌1小时。通过过滤收集沉淀的固体，并且用己烷洗涤。在减压下干燥所获得的固体而得到标题化合物(66.9g)。另外，蒸发所获得的滤液中的溶剂，向残余物中添加乙酸乙酯(5ml)和己烷(20ml)，在室温搅拌该混合物1小时。通过过滤收集沉淀的固体，并且用己烷洗涤。在减压下干燥所获得的固体而进一步得到标题化合物(2.5g).

¹H-NMR(400MHz,DMSO-D₆)δ:8.01(1H,d,J=7.6Hz),7.65-7.61(2H,m),7.37(1H,t,J=7.6Hz),7.17-7.14(2H,m),4.13-4.05(4H,m),2.47(2H,t,J=7.3Hz),2.02-1.95(2H,m),1.19(3H,td,J=7.2,0.7Hz)。

步骤6

4-[(9R)-4-氯-9-羟基-9-(三氟甲基)-9H-芴-2-基氧基]丁酸乙酯。

。

在氩气氛下，将4-(4-氯-9-氧代-9H-芴-2-基氧基)丁酸乙酯(69.4g)溶解在THF(700ml)中，添加N-(4-叔丁基苄基)辛可尼丁4-甲氧基苯酚盐(N-(4-tert-butylbenzyl)cinchonidium4-methoxyphenoxide)(6.4g)。在-16℃，向反应混合物中滴加三甲基(三氟甲基)硅烷(52.0ml)/THF(140ml)溶液，在相同温度搅拌该混合物15分钟。依次向反应混合物中添加乙酸(23.0ml)和1M氟化四丁铵/THF溶液(222ml)，在室温搅拌该混合物1小时。蒸发反应混合物中的溶剂，向所获得的残余物中添加甲苯(500ml)和饱和碳酸氢钠水溶液(200ml)，以使得层分离。依次用饱和碳酸氢钠水溶液(150ml，两次)，1N氢氧化钠水溶液(100ml)，水(100ml)，1N盐酸(100ml)，水(100ml)和饱和盐水(100ml)洗涤所获得的有机层。向所获得的有机层添加无水硫酸镁和硅胶(150g)，搅拌该混合物10分钟。滤出不溶性材料，依次用甲苯(300ml)和乙酸乙酯(800ml)洗涤不溶性材料。将所获得的滤液和甲苯洗液合并，蒸发溶剂而得到标题化合物(72.1g)。此外，乙酸乙酯洗液中的溶剂被蒸发，向所获得的残余物中添加硅胶(40g)和己烷和乙酸乙酯的混合溶剂(乙酸乙酯:己烷2:1，300ml)，在室温下搅拌该混合物。滤出不溶性材料，不溶性材料用己烷和乙酸乙酯的混合溶剂(乙酸乙酯:己烷=2:1，300ml)洗涤。将所获得的滤液中的溶剂蒸发而进一步得到标题化合物(20.3g).

¹H-NMR(400MHz,DMSO-D₆)δ:8.14(1H,d,J=7.7Hz),7.66(1H,d,J=7.5Hz),7.53(1H,t,J=7.6Hz),7.42-7.38(2H,m),7.14(2H,s),4.11-4.05(4H,m),2.47(2H,t,J=7.5Hz),2.03-1.96(2H,m),1.19(3H,td,J=7.1,0.8Hz)。

(绝对构型)

在随后提及的步骤10中的4-氯-2-甲基-9-(三氟甲基)-9H-芴-9-醇的绝对构型的识别证实在本步骤中获得的标题化合物是(R)型。旋光纯度是52.9%e.e.

在HPLC分析条件1下测定旋光纯度。(S)型的停留时间19.6分钟，(R)型的停留时间23.0分钟。

步骤7

4-[(9R)-4-氯-9-羟基-9-(三氟甲基)-9H-芴-2-基氧基]丁酸。

。

4-[(9R)-4-氯-9-羟基-9-(三氟甲基)-9H-芴-2-基氧基]丁酸乙酯(92.2g)被溶解在乙醇(100ml)中，添加4N氢氧化钠水溶液(100ml)，在80℃搅拌该混合物过夜。冷却反应混合物至室温，添加水(200ml)，用甲苯(100ml)洗涤混合物两次。所获得的水层用浓盐酸(40ml)中和，用乙酸乙酯(300ml)萃取两次。依次用水(100ml，两次)，和饱和盐水(100ml)洗涤所获得的乙酸乙酯萃取物，添加无水硫酸镁和活性炭(4.2g)，在室温搅拌该混合物10分钟。滤出不溶性材料，蒸发滤液中的溶剂。向所获得的残余物中添加氯仿(80ml)，和加热混合物至50℃。滴加己烷(400ml)，在相同温度搅拌该混合物30分钟，在室温下搅拌2小时。通过过滤收集沉淀的固体，用己烷和氯仿的混合溶剂(己烷:氯仿=9:1，50ml)洗涤，在80℃在减压下干燥2小时而得到标题化合物(72.5g).

¹H-NMR(400MHz,DMSO-D₆)δ:12.17(1H,brs),8.14(1H,d,J=7.7Hz),7.66(1H,d,J=7.5Hz),7.54(1H,td,J=7.7,1.2Hz),7.42-7.30(2H,m),7.18-7.15(2H,m),4.09(2H,t,J=6.4Hz),2.41(2H,t,J=7.3Hz),2.00-1.93(2H,m)。

步骤8

4-[(9R)-4-氯-9-羟基-9-(三氟甲基)-9H-芴-2-基氧基]丁酸的(1S)-1-(4-甲基苯基)乙胺盐。

。

在氮气气氛下，将(1S)-1-(4-甲基苯基)乙胺(19.5g)溶解在乙酸乙酯(720ml)中，添加4-[(9R)-4-氯-9-羟基-9-(三氟甲基)-9H-芴-2-基氧基]丁酸(72.5g)。在60℃搅拌反应混合物2小时，在室温下搅拌过夜。通过过滤收集沉淀的固体，并且用乙酸乙酯(100ml)洗涤。在60℃在减压下干燥所获得的固体5小时而得到标题化合物(68.6g)。另外，可以由滤液获得4-[(9S)-4-氯-9-羟基-9-(三氟甲基)-9H-芴-2-基氧基]丁酸。

(旋光纯度)

在HPLC分析条件1下测定4-[(9R)-4-氯-9-羟基-9-(三氟甲基)-9H-芴-2-基氧基]丁酸的旋光纯度(旋光纯度90.2%e.e.)。(R)型的停留时间12.9分钟，(S)型的停留时间10.4分钟.

¹H-NMR(400MHz,DMSO-D₆)δ:8.14(1H,d,J=7.7Hz),7.66(1H,d,J=7.7Hz),7.53(1H,td,J=7.6,1.1Hz),7.40(1H,td,J=7.6,1.0Hz),7.26(2H,d,J=7.9Hz),7.16-7.10(4H,m),4.08(2H,t,J=6.5Hz),4.01(1H,q,J=6.7Hz),2.32(2H,t,J=7.3Hz),2.26(3H,s),1.98-1.91(2H,m),1.26(3H,d,J=6.7Hz)。

步骤9

4-[(9R)-4-氯-9-羟基-9-(三氟甲基)-9H-芴-2-基氧基]丁酸。

。

向4-[(9R)-4-氯-9-羟基-9-(三氟甲基)-9H-芴-2-基氧基]丁酸(68.6g)的(1S)-1-(4-甲基苯基)乙胺盐中添加乙酸乙酯(500ml)和2N盐酸(300ml)，在室温搅拌该混合物10分钟。使混合物分层。依次用水(250ml)和饱和盐水(200ml)洗涤所获得的有机层。所获得的有机层用无水硫酸镁干燥，滤出不溶性材料，蒸发滤液中的溶剂而得到标题化合物(60.0g).

步骤10

(9R)-4-氯-9-(三氟甲基)-9H-芴-2,9-二醇。

。

向4-[(9R)-4-氯-9-羟基-9-(三氟甲基)-9H-芴-2-基氧基]丁酸(50g)中添加N-甲基吡咯烷酮(200ml)和盐酸吡啶(298g)，在200℃的油浴温度搅拌该混合物2天。冷却反应混合物至室温，用乙酸乙酯(500ml)稀释，用水洗涤两次。再次用乙酸乙酯(300ml)萃取所获得的水层。依次用水、1N盐酸和饱和盐水洗涤合并的有机层。向所获得的有机层添加无水硫酸镁和活性炭(10g)，在室温下搅拌该混合物。通过硅藻土滤出不溶性材料。蒸发所获得的有机层中的溶剂，将己烷添加到残余物，在室温下搅拌该混合物。通过过滤收集沉淀的固体，在室温下在减压下干燥。将所获得的粗产物溶解在乙酸乙酯(500ml)中，用水洗涤3次，用无水硫酸镁干燥。滤出不溶性材料，蒸发滤液中的溶剂。向残余物中添加己烷，在室温下搅拌该混合物。通过过滤收集沉淀的固体，在室温下在减压下干燥而得到标题化合物(22.4g).

¹H-NMR(400MHz,DMSO-D₆)δ:10.37(1H,brs),8.09(1H,d,J=7.5Hz),7.63(1H,d,J=7.5Hz),7.50(1H,td,J=7.6,1.0Hz),7.36(1H,td,J=7.6,1.0Hz),7.32(1H,brs),7.06(1H,s),6.91(1H,brd,J=2.0Hz)。

(绝对构型)

使用在随后步骤(步骤A-1至步骤A-2和步骤B-1)中制备的化合物(100A)和化合物(100B)的旋光活性柱，通过HPLC分析测定标题化合物的绝对构型。

步骤A-1。

。

4-氯-2-甲基-9H-芴-9-酮经受三氟甲基化，与溴乙酸乙酯反应，水解而得到[4-氯-2-甲基-9-(三氟甲基)-9H-芴-9-基氧基]乙酸。使用(1R)-1-苯基乙胺，旋光拆分这个化合物，并且通过所获得的(1R)-1-苯基乙胺盐(100AA)的单晶X-射线结构分析，确定绝对构型为(R)。

步骤A-2。

。

通过酸处理等，由化合物100AA合成(9R)-4-氯-2-甲基-9-(三氟甲基)-9H-芴-9-醇(化合物(100A))。

步骤B-1。

。

通过上述方法，将步骤10中获得的4-氯-9-(三氟甲基)-9H-芴-2,9-二醇的2位上的羟基转化为甲基，而得到4-氯-2-甲基-9-(三氟甲基)-9H-芴-9-醇(化合物(100B))。

(使用旋光活性柱的HPLC分析)

使用旋光活性柱通过HPLC(HPLC分析条件3)分离化合物(100)的两个对映异构体。化合物(100A)的HPLC分析证实(R)型的停留时间是18.4分钟，(S)型的停留时间是17.0分钟。在HPLC条件下分析化合物(100A)和化合物(100B)，发现停留时间相配.

据信在上述的化合物(100A)和化合物(100B)的制备期间，不对称碳的绝对构型没有转变。结果证实步骤10中获得的4-氯-9-(三氟甲基)-9H-芴-2,9-二醇具有(R)的绝对构型。

步骤11

(9R)-4-氯-2-(3-羟基-3-甲基丁基氧基)-9-(三氟甲基)-9H-芴-9-醇。

。

在氮气气氛下，将(9R)-4-氯-9-(三氟甲基)-9H-芴-2,9-二醇(55.5g)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(550ml)中，添加甲苯-4-磺酸3-羟基-3-甲基丁基酯(49.6g)和碳酸钾(39.5g)，在70℃的油浴温度搅拌该混合物过夜。向反应混合物中添加甲苯-4-磺酸3-羟基-3-甲基丁基酯(4.0g)/N,N-二甲基甲酰胺(5ml)溶液，在相同温度进一步搅拌混合物9.5小时。将反应混合物冰冷，添加水(800ml)，混合物用乙酸乙酯(900ml)萃取。用水(500ml，3次)和饱和盐水(500ml)洗涤所获得的有机层。所获得的有机层用无水硫酸钠干燥，滤出不溶性材料，蒸发滤液中的溶剂。所获得的残余物通过硅胶柱色谱法提纯(己烷和乙酸乙酯的混合物用作洗脱溶剂，首先用混合比3:1的(己烷:乙酸乙酯)的混合物洗脱，然后用混合比2:1的混合物，进一步用混合比3:2的混合物)而得到标题化合物(49.5g).

¹H-NMR(400MHz,DMSO-D₆)δ:8.12(1H,d,J=7.6Hz),7.64(1H,d,J=7.4Hz),7.52(1H,td,J=7.6,0.9Hz),7.40-7.36(2H,m),7.15-7.13(2H,m),4.41(1H,s),4.16(2H,t,J=7.1Hz),1.85(2H,t,J=7.1Hz),1.17(6H,s)。

步骤12

2-{4-[(9R)-9-羟基-2-(3-羟基-3-甲基丁基氧基)-9-(三氟甲基)-9H-芴-4-基]-1H-吡唑-1-基}-2-甲基丙酸乙酯。

。

在氩气氛下，将(9R)-4-氯-2-(3-羟基-3-甲基丁基氧基)-9-(三氟甲基)-9H-芴-9-醇(49.5g)溶解在甲苯(445ml)中，添加2-甲基-2-[4-(4,4,5,5-四甲基[1,3,2]二氧杂环戊硼烷-2-基)-1H-吡唑-1-基]丙酸乙酯(59.2g)，水(149ml)，磷酸三钾(54.3g)，乙酸钯(2.9g)和2-双环己基膦基-2',6'-二甲氧基联苯(SPhos)(10.5g)，在100℃的油浴温度搅拌该混合物3.5小时。冷却反应混合物至室温，添加水(300ml)。通过硅藻土滤出不溶性材料，不溶性材料用甲苯(150ml)和水(50ml)洗涤。合并所获得的滤液，以使得层分离。依次用水(500ml)和饱和盐水(500ml)洗涤所获得的有机层。所获得的有机层用无水硫酸钠干燥，滤出不溶性材料，蒸发滤液中的溶剂。所获得的残余物通过硅胶柱色谱法提纯(己烷和乙酸乙酯的混合物用作洗脱溶剂，首先用混合比2:1的(己烷:乙酸乙酯)的混合物洗脱，然后用混合比1:1的混合物，进一步用混合比1:2的混合物)，进一步通过硅胶柱色谱法提纯(己烷和丙酮的混合物用作洗脱溶剂，首先用混合比2:1的(己烷:丙酮)混合物洗脱，然后用混合比4:1、3:1、2:1、1:1、2:3的混合物，进一步用混合比1:2的混合物)，而得到标题化合物(68.4g).

¹H-NMR(400MHz,DMSO-D₆)δ:8.18(1H,s),7.65(1H,s),7.59-7.57(1H,m),7.25-7.21(4H,m),7.13(1H,brd,J=1.6Hz),6.84(1H,d,J=2.3Hz),4.38(1H,s),4.16-4.11(4H,m),1.86(2H,t,J=7.1Hz),1.84(6H,s),1.16(6H,s),1.13(3H,t,J=7.0Hz)。

步骤13

2-{4-[(9R)-9-羟基-2-(3-羟基-3-甲基丁基氧基)-9-(三氟甲基)-9H-芴-4-基]-1H-吡唑-1-基}-2-甲基丙酸。

。

将2-{4-[(9R)-9-羟基-2-(3-羟基-3-甲基丁基氧基)-9-(三氟甲基)-9H-芴-4-基]-1H-吡唑-1-基}-2-甲基丙酸乙酯(68.4g)溶解在乙醇(256ml)中，添加4N氢氧化钠水溶液(128ml)，在室温搅拌该混合物2.5小时。将反应混合物冰冷，滴加2N盐酸(333ml)，混合物用乙酸乙酯(500ml)萃取。依次用水(400ml，两次)和饱和盐水(400ml)洗涤所获得的有机层。所获得的有机层用无水硫酸钠干燥，滤出不溶性材料，蒸发滤液中的溶剂而得到标题化合物(70.0g).

¹H-NMR(400MHz,DMSO-D₆)δ:13.06(1H,brs),8.14(1H,s),7.62(1H,s),7.57(1H,dd,J=6.4,0.6Hz),7.27-7.19(4H,m),7.12(1H,s),6.84(1H,d,J=2.3Hz),4.38(1H,s),4.14(2H,t,J=7.2Hz),1.85(2H,t,J=7.2Hz),1.82(3H,s),1.81(3H,s),1.16(6H,s)。

步骤14

2-{4-[(9R)-9-羟基-2-(3-羟基-3-甲基丁基氧基)-9-(三氟甲基)-9H-芴-4-基]-1H-吡唑-1-基}-2-甲基丙酰胺(化合物(2))。

。

在氮气气氛下，将2-{4-[(9R)-9-羟基-2-(3-羟基-3-甲基丁基氧基)-9-(三氟甲基)-9H-芴-4-基]-1H-吡唑-1-基}-2-甲基丙酸(66.7g)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(480ml)中，添加1-羟基苯并三唑(HOBt)1水合物(27.6g)，1-乙基-3-(3'-二甲基氨基丙基)碳二亚胺(WSC)盐酸盐(34.6g)和28%氨水(24.5ml)，和在室温下搅拌该混合物过夜。将反应混合物冰冷，滴加水(630ml)和2N盐酸(330ml)，混合物用乙酸乙酯(800ml)萃取。再次用乙酸乙酯(500ml)萃取所获得的水层。合并所获得的有机层，并依次用水(500ml，两次)，饱和碳酸氢钠水溶液(500ml)，和饱和盐水(500ml)洗涤所获得的有机层。所获得的有机层用无水硫酸钠干燥，滤出不溶性材料，蒸发滤液中的溶剂而得到标题化合物(60.0g).

¹H-NMR(400MHz,DMSO-D₆)δ:8.08(1H,s),7.66(1H,s),7.58-7.56(1H,m),7.32-7.30(1H,m),7.25-7.22(4H,m),7.12(1H,brs),6.96(1H,brs),6.87(1H,d,J=2.3Hz),4.38(1H,s),4.14(2H,t,J=7.2Hz),1.85(2H,t,J=7.2Hz),1.78(3H,s),1.78(3H,s),1.17(6H,s)。

步骤15

2-{4-[(9R)-9-羟基-2-(3-羟基-3-甲基丁基氧基)-9-(三氟甲基)-9H-芴-4-基]-1H-吡唑-1-基}-2-甲基丙酰胺一水化物(化合物(2h))。

。

将上一步骤中获得的2-{4-[(9R)-9-羟基-2-(3-羟基-3-甲基丁基氧基)-9-(三氟甲基)-9H-芴-4-基]-1H-吡唑-1-基}-2-甲基丙酰胺(化合物(2))(60.0g)溶解在乙酸乙酯(109ml)中，添加水(2ml)，加热混合物至50℃。向该混合物中依次滴加己烷(226ml)，和己烷和乙酸乙酯的混合溶剂(己烷:乙酸乙酯2:1，150ml)，使混合物冷却至室温并且搅拌过夜。通过过滤收集沉淀的固体，用己烷和乙酸乙酯的混合溶剂(己烷:乙酸乙酯=2:1，180ml)洗涤。在室温下在减压下干燥所获得的固体过夜而得到标题化合物(52.2g，旋光纯度98.6%e.e.)。在HPLC分析条件2下测定旋光纯度。(R)型的停留时间11.3分钟，(S)型的停留时间13.9分钟.

比旋光度[α]_D+37.9°(c=1.01MeOH25℃).

¹H-NMR(400MHz,DMSO-D₆)δ:8.08(1H,s),7.66(1H,s),7.58-7.56(1H,m),7.32-7.30(1H,m),7.25-7.22(4H,m),7.12(1H,brs),6.96(1H,brs),6.87(1H,d,J=2.3Hz),4.38(1H,s),4.14(2H,t,J=7.2Hz),1.85(2H,t,J=7.2Hz),1.78(3H,s),1.78(3H,s),1.17(6H,s).

(元素分析测量)

元素分析的结果与所计算的化合物(2h)的理论值匹配良好.

计算值：C，59.88；H，5.80；N，8.06(按一水合物计算)

实测值：C，59.86；H，5.74；N，8.00。

步骤16

。

向上一步骤中获得的2-{4-[(9R)-9-羟基-2-(3-羟基-3-甲基丁基氧基)-9-(三氟甲基)-9H-芴-4-基]-1H-吡唑-1-基}-2-甲基丙酰胺一水化物(化合物(2h))(22.63g)中添加甲苯(340ml)。在氮气气氛下，在130℃的油浴温度搅拌反应混合物2小时，通过Dean-Stark装置除去水。进一步在70℃的油浴温度搅拌反应混合物1.5小时，使其冷却至室温，并且搅拌过夜。通过过滤收集沉淀的固体，用甲苯(100ml)洗涤。在室温下在减压下干燥所获得的固体3天，进一步在60℃在减压下干燥1天而得到标题化合物(21.5g).

(元素分析测量)

元素分析的结果与所计算的化合物(2)的理论值匹配良好.

计算值：C，62.02；H，5.61；N，8.35(按无水计算)

实测值：C，62.17；H，5.60；N，8.47。

步骤C-1

制备溴化N-(4-叔丁基苄基)辛可尼丁(N-(4-tert-butylbenzyl)cinchonidiumbromide)。

。

将辛可尼丁(10.6g)溶解在四氢呋喃(200ml)中，添加4-叔丁基苄基溴(10.1g)和碘化四丁铵(0.66g)，在70℃搅拌该混合物过夜。冷却反应混合物至室温，通过过滤收集固体，用乙酸乙酯(50ml)洗涤。在减压下干燥所获得的固体过夜而得到标题化合物(18.5g).

¹H-NMR(400MHz,DMSO-D₆)δ:8.99(1H,d,J=4.4Hz),8.27(1H,d,J=8.2Hz),8.11(1H,dd,J=8.5,1.0Hz),7.89-7.79(2H,m),7.78-7.71(1H,m),7.63(2H,d,J=8.4Hz),7.59(2H,t,J=8.4Hz),6.72(1H,d,J=4.2Hz),6.57-6.51(1H,brs),5.67(1H,ddd,J=17.0,10.4,6.4Hz),5.14(1H,d,J=17.2Hz),5.08(1H,d,J=12.6Hz),5.00-4.90(2H,m),4.30-4.18(1H,m),3.91(1H,t,J=8.7Hz),3.74-3.64(1H,m),3.35-3.18(2H,m),2.76-2.65(1H,m),2.18-1.94(3H,m),1.90-1.78(1H,m),1.40-1.22(1H,m),1.34(9H,s)。

步骤C-2

制备N-(4-叔丁基苄基)辛可尼丁4-甲氧基苯酚盐(N-(4-tert-butylbenzyl)cinchonidium4-methoxyphenoxide)。

。

添加溴化N-(4-叔丁基苄基)辛可尼丁(N-(4-tert-butylbenzyl)cinchonidiumbromide)(18.5g)、AMBERLYST(注册商标)A26(苯乙烯、二乙烯基苯基质的强阳离子(basicion)交换树脂)(18.5g)和甲醇(280ml)，在室温下搅拌该混合物过夜。通过硅藻土滤出不溶性材料，用甲醇(100ml)洗涤。向滤液中添加4-甲氧基苯酚(4.8g)，蒸发溶剂。用甲苯(100ml)共沸蒸发残余物3次，添加甲苯(20ml)。然后，滴加二异丙醚(200ml)，在室温搅拌该混合物3小时。通过过滤收集沉淀的固体，用二异丙醚(50ml)洗涤，在室温下在减压下干燥混合物过夜而得到标题化合物(21.8g).

¹H-NMR(400MHz,DMSO-D₆)δ:8.91(1H,d,J=4.4Hz),8.17(1H,d,J=8.2Hz),8.07(1H,d,J=8.4Hz),7.89(1H,d,J=4.4Hz),7.79(1H,t,J=7.6Hz),7.64(1H,t,J=7.5Hz),7.57-7.52(5H,m),6.56-6.55(2H,m),6.43-6.42(3H,m),5.67-5.59(1H,m),5.28(1H,d,J=12.1Hz),5.12(1H,d,J=17.2Hz),4.92(1H,d,J=10.6Hz),4.84(1H,d,J=12.1Hz),4.65-4.53(1H,m),3.80(1H,t,J=8.8Hz),3.65-3.63(1H,m),3.57(3H,s),3.25(1H,t,J=11.6Hz),3.10-3.07(1H,m),2.67(1H,brs),2.07-2.02(2H,m),1.95(1H,brs),1.79-1.76(1H,brm),1.33(9H,s),1.16-1.11(1H,m)。

步骤D

制备甲苯-4-磺酸3-羟基-3-甲基丁基酯。

。

在氮气气氛下，将3-甲基丁烷-1,3-二醇(300g)溶解在吡啶(900ml)中，在2小时内滴加4-甲基苯磺酰氯(500g)/甲苯(900ml)和乙腈(125ml)溶液。在室温下搅拌反应混合物4小时，添加甲苯(500ml)和水(1800ml)，以使得层分离。依次用硫酸水溶液和水(两次)洗涤所获得的有机层。蒸发所获得的有机层中的溶剂，用甲苯(500ml)共沸蒸发残余物而得到标题化合物(535g).

¹H-NMR(CDCl₃)δ:7.81-7.76(2H,m),7.36-7.31(2H,m),4.20(2H,td,J=6.8,1.6Hz),2.44(3H,s),1.85(2H,td,J=6.8,1.6Hz),1.33(1H,s),1.21(6H,s)。

实施例2

合成2-{4-[(9R)-9-羟基-2-(4-羟基-4-甲基戊氧基)-9-(三氟甲基)-9H-芴-4-基]-1H-吡唑-1-基}-2-甲基丙酰胺(化合物(3))。

步骤1

4-[(9R)-4-氯-9-羟基-9-(三氟甲基)-9H-芴-2-基氧基]丁酸乙酯。

。

将实施例1的步骤10中获得的(9R)-4-氯-9-(三氟甲基)-9H-芴-2,9-二醇(200mg)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(2ml)中，添加碳酸钾(185mg)和4-溴丁酸乙酯(105μL)，在室温搅拌该混合物7小时。向反应混合物中添加水，用乙酸乙酯萃取混合物两次。依次用水(两次)和饱和盐水洗涤所获得的有机层。所获得的有机层用无水硫酸镁干燥，滤出不溶性材料，蒸发滤液中的溶剂。通过硅胶柱色谱法提纯所获得的残余物(己烷和乙酸乙酯的混合物用作洗脱溶剂，首先用混合比5:1的混合物(己烷:乙酸乙酯)洗脱，然后依次用混合比3:1的混合物，进一步用混合比2:1的混合物)而得到标题化合物(197mg).

¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ:8.19(1H,d,J=7.7Hz),7.66(1H,d,J=7.7Hz),7.46(1H,td,J=7.6,1.0Hz),7.32(1H,td,J=7.6,1.0Hz),7.16(1H,brs),6.93(1H,d,J=2.1Hz),4.14(2H,q,J=7.1Hz),4.05(2H,t,J=7.1Hz),2.82(1H,s),2.50(2H,t,J=7.1Hz),2.15-2.06(2H,m),1.25(3H,t,J=7.1Hz)。

步骤2

(9R)-4-氯-2-(4-羟基-4-甲基戊氧基)-9-(三氟甲基)-9H-芴-9-醇。

。

在氮气气氛下，将4-[(9R)-4-氯-9-羟基-9-(三氟甲基)-9H-芴-2-基氧基]丁酸乙酯(197mg)溶解在THF(2ml)中，在0℃滴加甲基锂/二乙醚溶液(1.07M，2.2ml)。在相同温度搅拌反应混合物2小时，添加水，混合物用乙酸乙酯(两次)萃取。依次用水(两次)和饱和盐水洗涤所获得的有机层。所获得的有机层用无水硫酸镁干燥，滤出不溶性材料，蒸发滤液中的溶剂。通过硅胶柱色谱法提纯所获得的残余物(己烷和乙酸乙酯的混合物用作洗脱溶剂，首先用混合比3:1的混合物(己烷:乙酸乙酯)洗脱，然后用混合比2:1的混合物)而得到标题化合物(169mg).

¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ:8.19(1H,d,J=7.7Hz),7.66(1H,d,J=7.7Hz),7.47(1H,td,J=7.7,1.0Hz),7.32(1H,td,J=7.7,1.0Hz),7.17(1H,brs),6.93(1H,d,J=2.3Hz),4.02(2H,t,J=6.4Hz),2.82(1H,s),1.92-1.85(2H,m),1.65-1.62(2H,m),1.26(3H,s),1.25(3H,s)。

步骤3

2-{4-[(9R)-9-羟基-2-(4-羟基-4-甲基戊氧基)-9-(三氟甲基)-9H-芴-4-基]-1H-吡唑-1-基}-2-甲基丙酸乙酯。

。

在氩气氛下，将(9R)-4-氯-2-(4-羟基-4-甲基戊氧基)-9-(三氟甲基)-9H-芴-9-醇(169mg)溶解在1,4-二氧杂环己烷(1.5ml)中，添加2-甲基-2-[4-(4,4,5,5-四甲基[1,3,2]二氧杂环戊硼烷-2-基)-1H-吡唑-1-基]丙酸乙酯(194mg)，水(0.5ml)，磷酸三钾(178mg)，乙酸钯(9mg)，和SPhos(33mg)，在100℃搅拌该混合物4.5小时。冷却反应混合物至室温，添加水，混合物用乙酸乙酯(两次)萃取。依次用水(两次)和饱和盐水洗涤所获得的有机层。所获得的有机层用无水硫酸镁干燥，滤出不溶性材料，蒸发滤液中的溶剂。通过硅胶柱色谱法提纯所获得的残余物(混合比1:1(己烷:乙酸乙酯)的己烷和乙酸乙酯的混合物用作洗脱溶剂)而得到标题化合物(218mg).

¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ:7.69(1H,s),7.63-7.62(2H,m),7.21-7.19(4H,m),6.81(1H,d,J=2.3Hz),4.21(2H,q,J=7.1Hz),4.04(2H,t,J=6.3Hz),2.82(1H,s),1.92(3H,s),1.91(3H,s),1.89-1.88(2H,m),1.66-1.64(2H,m),1.26(6H,s),1.26-1.23(3H,m)。

步骤4

2-{4-[(9R)-9-羟基-2-(4-羟基-4-甲基戊氧基)-9-(三氟甲基)-9H-芴-4-基]-1H-吡唑-1-基}-2-甲基丙酸。

。

2-{4-[(9R)-9-羟基-2-(4-羟基-4-甲基戊氧基)-9-(三氟甲基)-9H-芴-4-基]-1H-吡唑-1-基}-2-甲基丙酸乙酯(218mg)被溶解在乙醇中(2.2ml)，添加4N氢氧化钠水溶液(320μL)，和在室温下搅拌该混合物过夜。反应混合物用1N盐酸中和，用乙酸乙酯(两次)萃取。依次用水(两次)和饱和盐水洗涤所获得的有机层。所获得的有机层用无水硫酸镁干燥，滤出不溶性材料，蒸发滤液中的溶剂而得到标题化合物(179mg).

¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ:7.73(1H,s),7.68(1H,s),7.63-7.62(1H,m),7.23-7.09(4H,m),6.78(1H,d,J=2.6Hz),4.02(2H,t,J=6.3Hz),1.93(6H,s),1.89-1.86(2H,m),1.65-1.61(2H,m),1.25(6H,s)。

步骤5

2-{4-[(9R)-9-羟基-2-(4-羟基-4-甲基戊氧基)-9-(三氟甲基)-9H-芴-4-基]-1H-吡唑-1-基}-2-甲基丙酰胺(化合物(3))。

。

在氮气气氛下，将2-{4-[(9R)-9-羟基-2-(4-羟基-4-甲基戊氧基)-9-(三氟甲基)-9H-芴-4-基]-1H-吡唑-1-基}-2-甲基丙酸(89mg)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(1ml)中，添加氯化铵(28mg)，N,N-二异丙基乙胺(148μL)和1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶-1-鎓3-氧化物六氟磷酸盐(HATU)(99mg)，和在室温下搅拌该混合物过夜。向反应混合物中添加水，混合物用乙酸乙酯(两次)萃取。依次用稀盐水(两次)和饱和盐水洗涤所获得的有机层。所获得的有机层用无水硫酸镁干燥，滤出不溶性材料，蒸发滤液中的溶剂。通过硅胶薄层色谱法提纯所获得的残余物(混合比9:1(氯仿:甲醇)的氯仿和甲醇的混合物用作洗脱溶剂)而得到标题化合物(48mg，旋光纯度96.9%e.e.)。在HPLC分析条件2下测定旋光纯度。(R)型的停留时间13.0分钟，(S)型的停留时间14.4分钟.

比旋光度[α]_D+37.5°(c=1.04MeOH25℃).

¹H-NMR(400MHz,DMSO-D₆)δ:8.07(1H,s),7.66(1H,s),7.57-7.55(1H,m),7.34-7.31(1H,m),7.24-7.23(3H,m),7.18(1H,s),7.11(1H,brs),6.94(1H,brs),6.86(1H,d,J=2.3Hz),4.16(1H,s),4.03(2H,t,J=6.5Hz),1.80(3H,s),1.79(3H,s),1.80-1.75(2H,m),1.51-1.47(2H,m),1.11(6H,s)。

(化合物(3)的晶体的制备实施例)

向通过上述实施例步骤合成的化合物(3)(40mg)添加MeOH和水的混合物(体积比1:3(0.5ml))。然后，向该溶液中添加化合物(2h)的晶体(0.5mg)，在室温下搅拌混合物3天。通过过滤收集沉淀的固体而得到化合物(3)的晶体(41mg)。

(制备化合物(A)，(B)，(C)和(D))

化合物(A)，化合物(B)，化合物(C)和化合物(D)，其由下式表示，各自以旋光体的形式根据WO2010/041748中所述的制备方法获得。

。

化合物(A)

2-(4-{(9R)-9-羟基-2-[2-(3-羟基金刚烷-1-基)乙氧基]-9-(三氟甲基)-9H-芴-4-基}-1H-吡唑-1-基)乙酰胺。

。

化合物(B)

(9R)-2-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-9-(三氟甲基)-9H-芴-9-醇。

。

化合物(C)

(9R)-4-[1-(2-羟乙基)-1H-吡唑-4-基]-2-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-9-(三氟甲基)-9H-芴-9-醇。

。

化合物(D)

2-{4-[(9R)-2-氟-9-羟基-9-(三氟甲基)-9H-芴-4-基]-1H-吡唑-1-基}-2-甲基丙酰胺。

作为本发明的制剂实施例，可以提及以下制剂。然而，本发明不局限于这些制剂实施例。

制剂实施例1(胶囊的制备)

1)实施例1的化合物(化合物(2))30mg

2)微晶纤维素10mg

3)乳糖19mg

4)硬脂酸镁1mg

将1)、2)、3)和4)混合并装入明胶胶囊。

制剂实施例2(片剂的制备)

1)实施例1的化合物(化合物(2))10g

2)乳糖50g

3)玉米淀粉15g

4)羧甲纤维素钙44g

5)硬脂酸镁1g

总量的1)、2)、3)和30g的4)用水捏合，真空干燥，筛分。筛分过的粉末混合以14g的4)和1g的5)，通过压片机冲压混合物。用这种方法，获得1000个片剂，每一个包含10mg的实施例1的化合物(化合物(2))/片。

实验实施例1：体外PDHK活性的抑制作用

通过测量在测试化合物存在下的激酶反应后的剩余的PDH活性，间接地评定PDHK活性的抑制作用。

(PDHK1活性的抑制作用)

在人PDHK1(hPDHK1，Genbank登记号L42450.1)的情况下，通过聚合酶链式反应(PCR)从人肝cDNA分离编码这个蛋白的1.3kbp片段。改性的hPDHK1cDNA，其中将FLAG-标记序列添加到N末端，是通过PCR制备的并且克隆到载体(vector)(pET17b-Novagen)中。重组结构被转化(transform)到大肠杆菌(DH5α-TOYOBO)中。重组克隆被识别，质粒DNA被分离并且经受DNA序列分析。一个克隆，其具有预期的核酸序列，被选择用于表达工作。

对于hPDHK1活性的表达，大肠杆菌株BL21(DE3)细胞(Novagen)用包含改性的hPDHK1cDNA的pET17b载体转化(transform)。在30℃，大肠杆菌生长到光密度0.6(600nmol/L)。通过添加500μmol/L异丙基-β-硫代半乳糖吡喃糖苷，诱发蛋白表达。在30℃培养大肠杆菌5小时并且通过离心收获。通过微流化器破坏大肠杆菌浆料的再悬浮。使用FLAG亲合性凝胶(Sigma)，提纯FLAG-标记蛋白。

用20mmol/LN-(2-羟乙基)哌嗪-N'-2-乙磺酸-氢氧化钠(HEPES-NaOH)，500mmol/L氯化钠，1%乙二醇，和0.1%聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物(PluronicF-68，pH8.0)洗涤凝胶，并且用20mmol/LHEPES-NaOH，100μg/mlFLAG肽，500mmol/L氯化钠，1%乙二醇，和0.1%PluronicF-68(pH8.0)洗脱结合蛋白。

将包含FLAG-标记蛋白的洗脱级分集中(pooled)，相对于20mmol/LHEPES-NaOH，150mmol/L氯化钠，0.5mmol/L乙二胺四乙酸(EDTA)，1%乙二醇，和0.1%PluronicF-68(pH8.0)透析(dialyzed)，在-80℃保存。在分析时，将hPDHK1酶浓度设定在最小浓度，给出PDH活性的超过90%抑制。

在缓冲液(50mmol/L3-吗啉代丙烷磺酸(pH7.0)，20mmol/L磷酸氢二钾，60mmol/L氯化钾，2mmol/L氯化镁，0.4mmol/LEDTA，0.2%PluronicF-68，2mmol/L二硫苏糖醇)中混合0.05U/mlPDH(猪心脏PDH复合物，SigmaP7032)和1.0μg/mlhPDHK1，在4℃培养混合物过夜，获得PDH/hPDHK1复合物。

用二甲亚砜(DMSO)稀释测试化合物。将PDH/hPDHK1复合物(20μL)，测试化合物(1.5μL)和3.53μmol/LATP(用缓冲液稀释，8.5μL)添加到半面积96孔UV-透明微板(Corning3679)，在室温下进行PDHK反应45分钟。将DMSO(1.5μL)添加到对照孔，代替测试化合物。为测定PDH反应的最大比率，在hPDHK1不存在的情况下，将DMSO(1.5μL)添加到空白孔，代替测试化合物。

然后，添加10μL的底物(5mmol/L丙酮酸钠，5mmol/L辅酶A，12mmol/LNAD，5mmol/L焦磷酸硫胺素，用缓冲液稀释)。在室温下培养混合物90分钟，测量剩余PDH活性。

使用微板读数器，测量PDH反应前后的340nm的吸光率，来检测PDH反应所产生的NADH。测试化合物的hPDHK1抑制率(%)由公式[{(测试化合物的PDH活性-对照物的PDH活性)/空白物的PDH活性-对照物的PDH活性)}×100]计算。由在包围hPDHK1活性的50%抑制的两点处的测试化合物的浓度计算IC₅₀值.

使用化合物(2)、化合物(2h)和化合物(3)作为测试化合物获得的结果示于下表1中。

(PDHK2活性的抑制作用)

在人PDHK2(hPDHK2，Genbank登记号BC040478.1)的情况下，改性的hPDHK2cDNA，其中将FLAG-标记序列添加到hPDHK2cDNA克隆(pReceiver-M01/PDK2-GeneCopoeia)的N末端，是通过PCR制备的并且克隆到载体(pET17b-Novagen)中。重组结构被转化到大肠杆菌(DH5α-TOYOBO)中。重组克隆被识别，质粒DNA被分离并且经受DNA序列分析。一个克隆，其具有预期的核酸序列，被选择用于表达工作。

对于hPDHK2活性的表达，大肠杆菌株BL21(DE3)细胞(Novagen)用包含改性的hPDHK2cDNA的pET17b载体转化。在30℃，大肠杆菌生长到光密度0.6(600nmol/L)。通过添加500μmol/L异丙基-β-硫代半乳糖吡喃糖苷，诱发蛋白表达。在30℃培养大肠杆菌5小时并且通过离心收获。通过微流化器破坏大肠杆菌浆料的再悬浮。使用FLAG亲合性凝胶，提纯FLAG-标记蛋白。用20mmol/LHEPES-NaOH，500mmol/L氯化钠，1%乙二醇，和0.1%PluronicF-68(pH8.0)洗涤凝胶，并且用20mmol/LHEPES-NaOH，100μg/mlFLAG肽，500mmol/L氯化钠，1%乙二醇，和0.1%PluronicF-68(pH8.0)洗脱结合蛋白。将包含FLAG-标记蛋白的洗脱级分集中(pooled)，相对于20mmol/LHEPES-NaOH，150mmol/L氯化钠，0.5mmol/LEDTA，1%乙二醇，和0.1%PluronicF-68(pH8.0)透析(dialyzed)，在-80℃保存。在分析时，将hPDHK2酶浓度设定在最小浓度，给出PDH活性的超过90%抑制。

在缓冲液(50mmol/L3-吗啉代丙烷磺酸(pH7.0)，20mmol/L磷酸氢二钾，60mmol/L氯化钾，2mmol/L氯化镁，0.4mmol/LEDTA，0.2%PluronicF-68，2mmol/L二硫苏糖醇)中混合0.05U/mlPDH和0.8μg/mlhPDHK2，在4℃培养混合物过夜，获得PDH/hPDHK2复合物。用DMSO稀释测试化合物。将PDH/hPDHK2复合物(20μL)，测试化合物(1.5μL)和3.53μmol/LATP(用缓冲液稀释，8.5μL)添加到半面积96孔UV-透明微板，在室温下进行PDHK反应45分钟。将DMSO(1.5μL)添加到对照孔，代替测试化合物。为测定PDH反应的最大比率，在hPDHK2不存在的情况下，将DMSO(1.5μL)添加到空白孔，代替化合物。然后，添加10μL的底物(5mmol/L丙酮酸钠，5mmol/L辅酶A，12mmol/LNAD，5mmol/L焦磷酸硫胺素，用缓冲液稀释)。在室温下培养混合物90分钟，测量剩余PDH活性。使用微板读数器，测量PDH反应前后的340nm的吸光率，来检测PDH反应所产生的NADH。测试化合物的hPDHK2抑制率(%)由公式[{(测试化合物的PDH活性-对照物的PDH活性)/空白物的PDH活性-对照物的PDH活性)}×100]计算。由在包围hPDHK2活性的50%抑制的两点处的测试化合物的浓度计算IC₅₀值.

使用化合物(2)、化合物(2h)、化合物(3)、化合物(A)、化合物(B)、化合物(C)和化合物(D)作为测试化合物获得的结果示于下表1中。

[表1]

化合物	hPDHK1 IC₅₀(μmol/L)	hPDHK2 IC₅₀(μmol/L)
			化合物(2)	0.0047	0.0046
化合物(2h)	0.0066	0.0049
			化合物(3)	0.0035	0.0042
化合物(A)	-(未测试)	0.0051
			化合物(B)	-(未测试)	0.0074
化合物(C)	-(未测试)	0.0067
			化合物(D)	-(未测试)	0.0051

实验实施例2：体外PDH激活分析

(实验方法)

评估测试化合物对组织PDH活性的作用。通过对碘硝基四唑紫(INT)-耦合系统，检测NADH的产生，来测量PDH活性.

正常的雄性Sprague-Dawley大鼠随机分配给溶媒组(vehiclegroup)和测试化合物组。将溶媒(0.5%甲基纤维素水溶液，5mL/kg)或测试化合物口服给予大鼠。在给予后的5或20小时，用戊巴比妥钠的腹膜内注射(60mg/kg)使大鼠麻醉，收集肝切片和附睾的脂肪组织.

向肝切片中快速地添加9体积的冰冷的均化缓冲液(0.25mol/L蔗糖，5mmol/L三(羟甲基)氨基甲烷盐酸盐(pH7.5)，2mmol/LEDTA)，使用Polytron均化器来均化混合物。在600×g，4℃，将均浆离心10分钟，获得上清液。在16,000×g，4℃，将上清液(1ml)离心10分钟，收集沉淀物。沉淀物通过在均化缓冲液(1ml)中再悬浮来洗涤并且以同样方式离心。用液氮冷冻沉淀物并且在-80℃作为肝线粒体级分存储.

向脂肪组织中快速地添加3体积的冰冷的均化缓冲液，使用Polytron均化器来均化混合物。在600×g，4℃，将均浆离心10分钟，获得上清液。在16,000×g，4℃，将上清液离心10分钟，收集沉淀物。沉淀物通过在均化缓冲液(1ml)中再悬浮来洗涤并且以同样方式离心。用液氮冷冻沉淀物并且在-80℃作为脂肪组织线粒体级分存储.

将线粒体级分融化并且用样品缓冲液(0.25mol/L蔗糖，20mmol/L三(羟甲基)氨基甲烷盐酸盐(pH7.5)，50mmol/L氯化钾，和1ml/L4-(1,1,3,3-四甲基丁基)苯基-聚乙二醇(TritonX-100))悬浮。测量活性PDH活性(PDHa活性)和总PDH活性(PDHt活性)来评估PDH活性。为测量PDHt活性，混合相等数量的线粒体混悬液和激活缓冲液(0.25mol/L蔗糖，20mmol/L三(羟甲基)氨基甲烷盐酸盐(pH7.5)，50mmol/L氯化钾，1ml/LTritonX-100，4mmol/L氯化钙，40mmol/L氯化镁，10mmol/L二氯乙酸钠)，在37℃培养混合物10分钟。将用样品缓冲液稀释的四十微升的线粒体混悬液添加到96-孔微板，进行活性测量和空白测量。然后，将180μL的反应混合物(0.056mmol/L磷酸钾缓冲液(pH7.5)，5.6mmol/LDL-卡尼汀，2.8mmol/LNAD，0.22mmol/L焦磷酸硫胺素，0.11mmol/L辅酶A，1.1ml/LTritonX-100，1.1mmol/L氯化镁，1.1g/L牛血清白蛋白，0.67mmol/LINT，7.2μmol/L甲硫酸吩嗪，28mmol/L草氨酸钠)添加到每个孔，并且然后添加20μL的50mmol/L丙酮酸钠(对于活性测量)或水(对于空白测量)。在遮蔽条件下在室温下培养混合物。使用微板读取器随时间测量500-750nm的吸光率，这可归因于还原INT，最终的电子受体，并且计算吸光率的变化。通过从活性测量孔的吸光率变化减去空白孔的吸光率的变化，计算PDH活性。计算PDHa活性相对于PDHt活性的百分比并且将其作为PDH激活的指标.

使用化合物(2h)、化合物(3)、化合物(A)、化合物(B)、化合物(C)和化合物(D)作为测试化合物获得的结果示于下表2、图1(肝)和图2(脂肪组织)中。另外，使用化合物(2)获得的结果示于下表3中。

[表2]

化合物

PDHa活性(PDHt活性的%)

肝

脂肪组织

5小时

20小时

5小时

20小时

溶媒

3mg/kg

溶媒

3mg/kg

溶媒

3mg/kg

溶媒

3mg/kg

化合物(2h)

13±3

59±6

13±3

31±5

31±10

59±2

31±10

44±12

化合物(3)

13±3

56±8

13±3

32±9

31±10

70±9

31±10

42±3

化合物(A)

13±3

35±6

13±3

16±10

31±10

32±14

31±10

24±7

化合物(B)

13±3

43±7

13±3

10±3

31±10

59±5

31±10

30±4

化合物(C)

13±3

44±5

13±3

31±10

53±4

31±10

28±7

化合物(D)

13±3

41±15

13±3

20±1

31±10

43±7

31±10

24±3

均值±S.D.(n=3)。

[表3]

化合物

PDHa活性(PDHt活性的%)

肝

脂肪组织

5小时

20小时

5小时

20小时

溶媒

3mg/kg

溶媒

3mg/kg

溶媒

3mg/kg

溶媒

3mg/kg

化合物(2)

28±6

74±12

28±6

50±16

42±4

88±11

42±4

61±15

均值±S.D.(n=3)。

实验实施例3：在ZDF大鼠中重复给予测试化合物对HbA1c的效果

(实验方法)

ZuckerDiabeticFatty大鼠(雄性，7周龄，CHARLESRIVERLABORATORIESJAPANINC.)，II型糖尿病的动物模型，在纯制日粮(5.9%脂肪膳食，OrientalYeastCo.,Ltd.)的条件下，被分配给溶媒组和测试化合物组，使得在血浆葡萄糖和胰岛素水平、HbA1c水平和体重方面没有出现偏差。在黑暗期间前的3小时，每日一次将重复口服剂量的测试化合物(1mg/kg/5ml)给予大鼠。以同样方式将0.5%甲基纤维素水溶液口服给予溶媒组的大鼠。在给予的第14天，从尾部静脉收集血样并且测量HbA1c水平(%)。通过Dunnett测试，进行统计分析。p<0.05的值被认为是统计上显著的.

使用化合物(2)和化合物(3)作为测试化合物获得的结果示于下表4中。

[表4]

化合物	HbA1c(%)	HbA1c(%)
				溶媒	1mg/kg
化合物(2)	3.6±0.3	3.2±0.1*
			化合物(3)	3.7±0.2	3.4±0.1*

给予的第14天

均值±S.D.(n=10)

*p<0.05vs.溶媒组(Dunnett测试)。

实验实施例4：hERG(人Ether-a-go-go相关基因)全细胞膜片钳测试

(实验方法)

使用人Ether-a-go-go相关基因(hERG)-转染的HEK293细胞(CytomyxLimited)，根据全细胞膜片钳技术，检查对hERG电流的影响。在37℃、5%CO₂、饱和湿度的设定条件下，使用CO₂培养箱(BNA-111,TABAIESPECCORP.)，使hERG-转染的HEK293细胞传代。所用的培养容器是CollagenI型Coated75cm²烧瓶(4123-010,AGCTECHNOGLASSCO.,Ltd.)和CollagenI型Coated35mm培养皿(4000-010,AGCTECHNOGLASSCO.,Ltd.)。所使用的培养介质是E-MEM(Eagle最小必需介质(Earle'sSalts,Nikken生物医学实验室)，添加以10%FCS(胎牛血清,BioWest,L.L.C.)和1%MEM非必需的氨基酸溶液(NEAA,InvitrogenCorporation)。向其中添加用于选择表达hERG基因的细胞的遗传霉素至400μg/mL的浓度。作为用于测量的细胞，在测量hERG电流前的4至7天，将3×10⁴hERG-转染的HEK293细胞铺在35mm培养皿。为测量所制造的培养皿包含上述的培养介质，而没有遗传霉素(InvitrogenCorporation).

由在标准细胞外液(NaCl：140mmol/L、KCl：2.5mmol/L、MgCl₂：2mmol/L、CaCl₂：2mmol/L、HEPES：10mmol/L、葡萄糖：10mmol/L(用Tris-碱调节到pH7.4))中没有出现沉淀的最高浓度，确定每一个化合物的最高评价浓度。作为施加方法，所施加的每一个溶液从具有约0.25mm的尖端直径的Y形管排出，所述Y形管相邻于细胞(约2mm)，并且施加给细胞。排出率为约0.4毫升/分钟.

在相差显微镜下在室温下进行实验。将细胞铺板的35mm培养皿放置在测量装置上，将标准细胞外液由Y形管连续施加到细胞。用于测量的玻璃电极填装细胞内液(葡萄糖酸钾：130mmol/L、KCl：20mmol/L、MgCl₂：1mmol/L、ATP-Mg：5mmol/L、EGTA：3.5mmol/L、HEPES：10mmol/L(用Tris-碱调节到pH7.2))。将常规的全细胞膜片钳方法应用于细胞，并且设置维持电位为-80mV。在固定电位下，通过膜片钳的放大器((AXOPATCH-200B,AxonInstruments,Inc.)放大全细胞电流，使用数据获取分析软件(pCLAMP9.2,AxonInstruments,Inc.)将数据输入计算机(IMC-P642400,IntermedicalCo.,Ltd.).

在以下两步中进行hERG电流的测量。在两种情况中，通过给出指令电位(维持电位-80mV，前置脉冲+20mV，1.5秒，测试脉冲-50mV，1.5秒)，引发hERG电流.

步骤(1)：以0.1Hz给出上述的指令电位2分钟.

步骤(2)：上述的指令电位经受pCLAMP9.2的P/3扣除而除去泄漏电流。重复此三次并且取其平均值作为hERG电流.

在步骤(1)后，进行步骤(2)(约3分钟)，将通过施加测试脉冲给步骤(2)的方法获得的hERG电流所获得的最大尾电流作为hERG电流值。此后，交替地重复(1)和(2)的操作直到实验完成并且测量hERG电流值.

记录稳定的hERG电流值三次(约10分钟)，并且标准细胞外液与每一个施加液即时交换。在施加液的灌注期间以同样方式测量hERG电流值三次(约10分钟)，将第三次测量所获得的电流值作为灌注施加液后的hERG电流值.

将每一个细胞的数据转化为相对值，其中灌注施加液前约10分钟内记录的三个hERG电流值的平均值(以往值)作为100%。对于两个细胞进行这样的测量，计算其平均值作为相对电流(%).

相对电流(%)=100×A÷B

A：灌注施加液后的hERG电流值

B：灌注施加液前约10分钟内记录的三个hERG电流值的平均值(以往值)

另外，根据下式计算对于DMSO组的抑制率.

抑制率(%)=100-(C÷D)×100

C：相应的测试化合物组的相对电流(%)的平均值

D：DMSO组的相对电流(%)的平均值

使用化合物(2)、化合物(3)、化合物(A)、化合物(B)、化合物(C)和化合物(D)作为测试化合物获得的结果示于下表5中。

[表5]

测试化合物	浓度^a) (μmol/L)	抑制率(%)	IC₅₀值(μmol/L)
				化合物(2)	30	24.4	>30
化合物(3)	30	27.3	>30
				化合物(A)	10	11.8	>10
化合物(B)	1	17.4	3.6
				化合物(B)	10	72.9	3.6
化合物(C)	3	11.5	13.2
				化合物(C)	30	69.0	13.2
化合物(D)	3	9.4	14.2
				化合物(D)	30	67.5	14.2

a)：由在标准细胞外液中没有出现沉淀的最高浓度设定每一个化合物的最高评价浓度。

实验实施例5：在肝微粒体中的代谢稳定性测试

(实验方法)

将人肝微粒体(由Xenotech制造，H0620，最后浓度(在稀释后)，0.2mg蛋白/ml)悬浮在100mM磷酸钾缓冲液(pH7.4，含β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸：1.3mM，D-葡糖-6-磷酸：3.3mM，氯化镁：3.3mM，葡萄糖-6-磷酸脱氢酶：0.45U/mL)中，并且进一步与溶于MeCN/DMSO(95/5)的测试化合物(最后浓度5μM)混合。在37℃培养混合物10分钟和60分钟，添加含甲酸的乙腈(最后浓度0.1%)，将混合物离心。通过高效液相色谱/质谱(LC/MS)(由Waters制造，LC：AcquityUPLC，MS：SQ检测器或TQ检测器)测量上清液中的测试化合物(未改性的)。由所获得的测定值计算剩余比(%).

使用化合物(2)、化合物(3)、化合物(A)、化合物(B)、化合物(C)和化合物(D)作为测试化合物获得的结果示于下表6中。

[表6]

测试化合物	肝微粒体中的稳定性(剩余比%)	肝微粒体中的稳定性(剩余比%)	肝微粒体中的稳定性(剩余比%)	肝微粒体中的稳定性(剩余比%)
						人	人	大鼠	大鼠
	10分钟	60分钟	10分钟	60分钟
					化合物(2)	98.8	96.5	98.8	100.0
化合物(3)	98.4	85.9	102.7	95.8
					化合物(A)	34.8	0.0	24.8	0.0
化合物(B)	98.0	88.2	101.1	92.1
					化合物(C)	94.0	75.1	94.2	85.3
化合物(D)	105.4	101.5	105.2	105.1

工业实用性

因为本发明化合物或其药用可接受的盐具有PDHK抑制活性，它可用作预防或治疗糖尿病(I型糖尿病、II型糖尿病等)、胰岛素耐受综合症、新陈代谢综合症、高血糖、血乳酸过多、糖尿病并发症(糖尿病性神经病、糖尿病性视网膜病、糖尿病肾病、白内障等)、心力衰竭(急性心力衰竭、慢性心力衰竭)、心肌病、心肌缺血、心肌梗塞、心绞痛、血脂障碍、动脉粥样硬化、外周动脉疾病、间歇性跛行、慢性阻塞性肺病、脑局部缺血、脑中风、线粒体病、线粒体脑肌病、癌症、肺动脉高血压或阿尔茨海默氏病的药物的活性成分。

Claims

1.式[I]表示的化合物：

其中，n是1或2，

或其药用可接受的盐。

2.下式表示的化合物：

或者。

3.权利要求2的化合物，其由式[II]表示：

。

4.权利要求2的化合物，其由式[IIh]表示：

。

5.式[III]表示的化合物：

。

6.一种药物组合物，其包括权利要求1-5中任一项的化合物，或其药用可接受的盐，和药用可接受的载体。

7.一种PDHK抑制剂，其包括权利要求1-5中任一项的化合物，或其药用可接受的盐。

8.一种PDHK1抑制剂，其包括权利要求1-5中任一项的化合物，或其药用可接受的盐。

9.一种PDHK2抑制剂，其包括权利要求1-5中任一项的化合物，或其药用可接受的盐。

10.一种降血糖药，其包括权利要求1-5中任一项的化合物，或其药用可接受的盐。

11.一种降乳酸药，其包括权利要求1-5中任一项的化合物，或其药用可接受的盐。

12.一种用于预防或治疗糖尿病、胰岛素耐受综合症、新陈代谢综合症、高血糖、血乳酸过多、糖尿病并发症、心力衰竭、心肌病、心肌缺血、心肌梗死、心绞痛、血脂障碍、动脉粥样硬化、周围动脉疾病、间歇性跛行、慢性阻塞性肺病、脑局部缺血、脑中风、线粒体疾病、线粒体脑肌病、癌症或肺性高血压症的药剂，其包括权利要求1至5中任一项的化合物，或其药用可接受的盐。

13.权利要求12的预防性或治疗性药剂，其中糖尿病是I型糖尿病或II型糖尿病。

14.权利要求12的预防性或治疗性药剂，其中糖尿病并发症选自糖尿病性神经病变、糖尿病性视网膜病、糖尿病肾病和白内障。

15.权利要求12的预防性或治疗性药剂，其中心力衰竭是急性心力衰竭或慢性心力衰竭。