TW201536748A - 茀－醯胺化合物及其醫藥用途 - Google Patents

Abstract

下述式所示之化合物或其製藥上可容許之鹽及該化合物或鹽之醫藥用途： □

Description

茀-醯胺化合物及其醫藥用途

本發明係關於茀-醯胺化合物及其醫藥用途。更詳細而言，係關於具有丙酮酸去氫酶激酶(pyruvate dehydrogenase kinase)(以下，簡稱為PDHK)抑制活性之茀-醯胺化合物或其製藥上可容許之鹽、含有該等之醫藥組成物以及下述疾病之預防或治療劑等；糖尿病(1型糖尿病、2型糖尿病等)、胰島素抗性症候群、代謝症候群、高血糖症、高乳酸血症、糖尿病併發症(糖尿病性神經病變、糖尿病性視網膜病、糖尿病性腎病、白內障等)、心衰竭(急性心衰竭、慢性心衰竭)、心肌症、心肌缺血症、心肌梗塞、狹心症、異常血脂症、動脈粥狀硬化症、末梢動脈疾病、間歇性跛行、慢性阻塞性肺臟疾病、腦缺血、腦中風、粒線體病、粒線體腦肌病、癌、肺性高血壓、或阿茲海默症。

在組織內，使用能量之反應，例如生物合成、主動運輸、肌肉收縮等係藉由三磷酸腺苷(ATP)之水解來供給能量。ATP係由如葡萄糖或游離脂肪酸之能量多的代謝燃料之氧化所生成。如肌肉之氧化性組織中，大部分 的ATP係由進入檸檬酸循環之乙醯輔酶A所產生。乙醯輔酶A係藉由醣解途徑之葡萄糖的氧化或游離脂肪酸的β氧化所生成。丙酮酸去氫酶(以下，簡稱為PDH)係達成調節從葡萄糖產生乙醯輔酶A之指揮任務之酵素。PDH係作為使丙酮酸氧化成乙醯輔酶A及二氧化碳，並同時使菸鹼醯胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)還原成NADH之觸煤(例如，非專利文獻1、2)。

PDH係包括局部存在於粒線體基質之3個酵素成分(E1、E2及E3)與複數個次單元之多酵素複合體。E1、E2及E3分別進行丙酮酸之去羧基、乙醯輔酶A之生成及NAD之還原所致之NADH之生成。

PDH中，具有調節任務之2種酵素結合。一種為PDHK，係對PDH顯示專一性之蛋白質激酶。其任務係使複合體之E1α次單元磷酸化以使其不活化。另一種為PDH磷酸酶，經由E1α次單元之去磷酸化使PDH活化之專一性蛋白質磷酸酶。活性(去磷酸化)狀態之PDH之比例係依激酶活性與磷酸酶活性之平衡而決定。激酶活性係由代謝基質之相對濃度而受到調節。例如，激酶活性係藉由NADH/NAD、乙醯輔酶A/輔酶A及ATP/二磷酸腺苷(ADP)之各比率之上昇而活化，且以丙酮酸抑制(例如，非專利文獻3)。

哺乳類之組織中鑑定出4種PDHK同功異構酶(isozyme)。其中，PDHK2係表現於參與糖代謝之肝臟、骨骼肌、包含脂肪組織之廣範圍組織。再者，從PDHK2 對由NADH/NAD、乙醯輔酶A/輔酶A之上昇所致之活化及由丙酮酸所致之抑制之敏感性較高來看，暗示其參與短期糖代謝調節(例如，非專利文獻4)。

又，PDHK1大量表現於心肌、骨骼肌、胰臟β細胞等。再者，從PDHK1在缺血狀態中經由缺氧誘導因子(HIF)1之活化而被誘導表現之情形來看，暗示其參與缺血性疾病、癌性疾病(例如，非專利文獻5)。

胰島素依存性(1型)糖尿病及非胰島素依存性(2型)糖尿病等疾病中，脂質氧化亢進，同時葡萄糖的利用降低。該葡萄糖利用降低成為呈現高血糖之原因之一。從在如1型及2型糖尿病、肥胖之氧化葡萄糖代謝降低之狀態中，PDH活性亦降低來看，暗示1型及2型糖尿病中之葡萄糖利用的降低係與PDH活性降低相關(例如，非專利文獻6、7)。

又，1型及2型糖尿病中，肝臟中之糖新生亢進，此亦成為呈現高血糖之原因之一。PDH活性降低使丙酮酸上昇，結果，肝臟中之作為糖新生基質之乳酸利用能增大。由此來看，1型及2型糖尿病中之糖新生亢進可能與PDH活性降低相關(例如，非專利文獻8、9)。

認為若藉由抑制PDHK使PDH活化，則葡萄糖氧化速度會增加。結果，期待可藉活體之葡萄糖利用亢進，且肝臟之糖新生受到抑制，而改善1型及2型糖尿病之高血糖(例如，非專利文獻10、11、12)。

已知參與糖尿病之其他因子係胰島素分泌障礙，且胰 臟β細胞之PDH活性降低及PDHK1、2及4之誘導係參與其中(例如，非專利文獻13、14)。

又，已知糖尿病所致之持續性高血糖會引發糖尿病性神經病變、糖尿病性視網膜病、糖尿病性腎病等併發症。噻胺或α-硫辛酸係作為輔酶而助於PDH之活化。該等或者噻胺衍生物或α-硫辛酸衍生物顯示具有對糖尿病併發症之治療有指望之效果。因此，期待PDH之活化可改善糖尿病併發症(例如，非專利文獻15、16)。

在缺血狀態下，由於氧氣供給受限，故葡萄糖及脂肪酸兩者之氧化降低，組織之氧化性磷酸化所產生之ATP量減少。在氧氣不充分之狀態下，欲維持ATP濃度而厭氧性醣解亢進。結果，引起乳酸增加及細胞內pH降低。雖欲耗費能量以維持離子恆定性，但異常低的ATP濃度及細胞之滲透性崩解之結果造成細胞死亡。此外，一磷酸腺苷活化激酶在缺血中活化且磷酸化使乙醯輔酶A羧酶不活化。由於組織之丙二醯輔酶A濃度降低使肉鹼棕櫚醯轉移酶-I(carnitine palmitoyltransferase-I)活性上昇，促進醯輔酶A運輸至粒線體內，故脂肪酸氧化比葡萄糖氧化有利。葡萄糖氧化比脂肪酸氧化所消費之氧每1分子之ATP產生量高。因此，認為在缺血狀態下，若藉由活化PDH使能量代謝轉變為葡萄糖氧化具有優勢，則維持ATP濃度之能力提高(例如，非專利文獻17)。

又，認為若活化PDH，則經由醣解所生成之丙酮酸被氧化，乳酸之產生降低，故發生缺血組織之質子淨負荷降 低。因此，期待抑制PDHK所致之PDH之活化對缺血性疾病，例如，心肌缺氧有保護性作用(例如，非專利文獻18、19)。

認為抑制PDHK以活化PDH之藥劑係藉由使丙酮酸代謝亢進來減少乳酸產生。因此，認為對如粒線體病、粒線體腦肌病或敗血症之高乳酸血症之治療有用(例如，非專利文獻20)。

癌細胞中，PDHK1或PDHK 2之表現上昇。又，癌細胞中，粒線體之氧化磷酸化所致之ATP產生降低，經由細胞質中之厭氧性醣解系之ATP產生增加。若抑制PDHK以活化PDH，則粒線體內之氧化性磷酸化亢進且活性氧之產生提高，期待藉此誘導癌細胞之細胞凋亡。因此，認為抑制PDHK所致之PDH之活化係對癌性疾病治療有用(例如，非專利文獻21)。

又，肺性高血壓係以肺動脈之細胞增殖亢進，肺動脈部分性縮小而使血壓變高為特徵之疾病。若活化肺性高血壓中之肺動脈細胞之PDH，則粒線體內之氧化性磷酸化亢進且活性氧之產生提高，期待藉此誘導肺動脈細胞之細胞凋亡。因此，認為抑制PDHK所致之PDH之活化係對肺性高血壓之治療有用(例如，非專利文獻22)。

阿茲海默症中，大腦中之能量產生及葡萄糖代謝降低，又，PDH活性降低。若PDH活性降低則乙醯輔酶A之產生降低。乙醯輔酶A係經由檸檬酸循環藉由電子傳遞系利用於ATP產生。又，乙醯輔酶A係合成神經傳 導物質之一之乙醯膽鹼之原料。因此，認為阿茲海默症中之腦PDH活性之降低，ATP產生降低以致於引起神經細胞死亡。又，認為在膽鹼作用性神經中，其傳導物質之乙醯膽鹼合成受到抑制，而引起記憶力降低等。阿茲海默症中，若使腦之PDH活化，期待能量產生及乙醯膽鹼合成之亢進。因此，認為抑制PDHK所致之PDH之活化對於阿茲海默症之治療有用(例如，非專利文獻23、24)。

具有PDH活化作用之藥劑之二氯乙酸顯示具有對於糖尿病、心肌缺氧、心肌梗塞、狹心症、心衰竭、高乳酸血症、腦缺血、腦中風、末梢動脈疾病、慢性阻塞性肺臟疾病、癌性疾病、肺性高血壓之治療有指望之效果(例如，非專利文獻10、18、20、22、25、26、27)。

由該等見解，認為PDHK抑制劑係對與葡萄糖利用障礙相關之疾病，例如糖尿病(1型糖尿病、2型糖尿病等)、胰島素抵抗性症候群、代謝症候群、高血糖症、高乳酸血症、糖尿病併發症(糖尿病性神經病變、糖尿病性視網膜病、糖尿病性腎病、白內障等)之治療或預防有益。又，認為PDHK抑制劑係對將能量基質供給至組織受限制之疾病，例如心衰竭(急性心衰竭、慢性心衰竭)、心肌症、心肌缺血症、心肌梗塞、狹心症、異常血脂症、動脈粥狀性硬化症、末梢動脈疾病、間歇性跛行、慢性阻塞性肺臟疾病、腦缺血及腦中風之治療或預防有益。再者，認為PDHK抑制劑係對粒線體病、粒線體腦肌病、癌、肺性高血壓等之治療或預防有益。

因此，認為PDHK抑制劑係對糖尿病(1型糖尿病、2型糖尿病等)、胰島素抵抗性症候群、代謝症候群、高血糖症、高乳酸血症、糖尿病併發症(糖尿病性神經病變、糖尿病性視網膜病、糖尿病性腎病、白內障等)、心衰竭(急性心衰竭、慢性心衰竭)、心肌症、心肌缺血症、心肌梗塞、狹心症、異常血脂症、動脈粥狀性硬化症、末梢動脈疾病、間歇性跛行、慢性阻塞性肺臟疾病、腦缺血、腦中風、粒線體病、粒線體腦肌病、癌、肺性高血壓、或阿茲海默症之治療或預防有益。

[先前技術文獻] [非專利文獻]

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Volume 2010, Article ID 414726, 4 pages doi:10.1155/2010/ 414726.

本發明係如下述。

[1]一種式[I]所示之化合物或其製藥上可容許之鹽： [2]如上述[1]所述之化合物或其製藥上可容許之鹽，其係下述式所示化合物或其製藥上可容許之鹽： [3]如上述[1]所述之化合物或其製藥上可容許之鹽，其係下述式所示化合物： [4]如上述[1]所述之化合物或其製藥上可容許之鹽，其係下述式所示化合物或其製藥可容許之鹽： [5]如上述[1]所述之化合物或其製藥上可容許之鹽，其係下述式所示化合物： [6]一種醫藥組成物，其含有上述[1]至[5]中任一項所述之化合物或其製藥上可容許之鹽以及其製藥上可容許之載體；[7]一種PDHK抑制劑，其含有上述[1]至[5]中任一項所述之化合物或其製藥上可容許之鹽；[8]一種PDHK1抑制劑，其含有上述[1]至[5]中任一項所述之化合物或其製藥上可容許之鹽；[9]一種PDHK2抑制劑，其含有上述[1]至[5]中任一項所述之化合物或其製藥上可容許之鹽；[10]一種降血糖劑，其含有上述[1]至[5]中任一項所述之化合物或其製藥上可容許之鹽；[11]一種降乳酸劑，其含有上述[1]至[5]中任一項所述之化合物或其製藥上可容許之鹽；[12]一種下述疾病之預防或治療劑，其含有上述[1]至[5]中任一項所述之化合物或其製藥上可容許之鹽，其中，該疾病係糖尿病、胰島素抵抗性症候群、代謝症候群、高血糖症、高乳酸血症、糖尿病併發症、心衰竭、心肌症、心 肌缺血、心肌梗塞、狹心症、異常血脂症、動脈粥狀性硬化症、末梢動脈疾病、間歇性跛行、慢性阻塞性肺臟疾病、腦缺血、腦中風、粒線體病、粒線體腦肌病、癌或肺性高血壓；[12’]一種下述疾病之預防或治療劑，其含有上述[1]至[5]中任一項所述之化合物或其製藥上可容許之鹽，其中，該疾病係糖尿病、胰島素抵抗性症候群、代謝症候群、高血糖症、高乳酸血症、糖尿病併發症、心衰竭、心肌症、心肌缺血症、心肌梗塞、狹心症、異常血脂症、動脈粥狀性硬化症、末梢動脈疾病、間歇性跛行、慢性阻塞性肺臟疾病、腦缺血、腦中風、粒線體病、粒線體腦肌病、癌、肺性高血壓或阿茲海默症；[13]上述[12]所述之預防或治療劑，其中，糖尿病係1型糖尿病或2型糖尿病。

[14]上述[12]所述之預防或治療劑，其中，糖尿病併發症係選自由糖尿病性神經病變、糖尿病性視網膜病、糖尿病性腎病及白內障所成之群組。

[15]上述[12]所述之預防或治療劑，其中，心衰竭係急性心衰竭或慢性心衰竭。

[16]一種醫藥組成物，其包含：(a)上述[1]至[5]中任一項所述之化合物或其製藥上可容許之鹽，以及(b)至少1種對選自由糖尿病(1型糖尿病、2型糖尿病)、胰島素抵抗性症候群、代謝症候群、高血糖症、高乳酸血 症、糖尿病併發症(糖尿病性神經病變、糖尿病性視網膜病、糖尿病性腎病、白內障)、心衰竭(急性心衰竭、慢性心衰竭)、心肌症、心肌缺血症、心肌梗塞、狹心症、異常血脂症、動脈粥狀硬化症、末梢動脈疾病、間歇性跛行、慢性阻塞性肺臟疾病、腦缺血、腦中風、粒線體病、粒線體腦肌病、癌及肺性高血壓所成群組之疾病之預防或治療有效之其他藥劑；[16’]一種醫藥組成物，其包含：(a)上述[1]至[5]中任一項所述之化合物或其製藥上可容許之鹽，以及(b)至少1種對選自由糖尿病(1型糖尿病、2型糖尿病)、胰島素抵抗性症候群、代謝症候群、高血糖症、高乳酸血症、糖尿病併發症(糖尿病性神經病變、糖尿病性視網膜病、糖尿病性腎病、白內障)、心衰竭(急性心衰竭、慢性心衰竭)、心肌症、心肌缺血症、心肌梗塞、狹心症、異常血脂症、動脈粥狀性硬化症、末梢動脈疾病、間歇性跛行、慢性阻塞性肺臟疾病、腦缺血、腦中風、粒線體病、粒線體腦肌病、癌、肺性高血壓及阿茲海默症所成群組之疾病之預防或治療有效之其他藥劑；[17]一種組合醫藥，其中，同時、分別或連續投予下述者：(a)上述[1]至[5]中任一項所述之化合物或其製藥上可容許之鹽，以及(b)至少1種對選自由糖尿病(1型糖尿病、2型糖尿病)、胰島素抵抗性症候群、代謝症候群、高血糖症、高乳酸血 症、糖尿病併發症(糖尿病性神經病變、糖尿病性視網膜病、糖尿病性腎病、白內障)、心衰竭(急性心衰竭、慢性心衰竭)、心肌症、心肌缺血症、心肌梗塞、狹心症、異常血脂症、動脈粥狀性硬化症、末梢動脈疾病、間歇性跛行、慢性阻塞性肺臟疾病、腦缺血、腦中風、粒線體病、粒線體腦肌病、癌及肺性高血壓所成群組之疾病之預防或治療有效之其他藥劑；[17’]一種組合醫藥，其中，同時、分別或連續投予下述者：(a)上述[1]至[5]中任一項所述之化合物或其製藥上可容許之鹽，以及(b)至少1種對選自由糖尿病(1型糖尿病、2型糖尿病)、胰島素抵抗性症候群、代謝症候群、高血糖症、高乳酸血症、糖尿病併發症(糖尿病性神經病變、糖尿病性視網膜病、糖尿病性腎病、白內障)、心衰竭(急性心衰竭、慢性心衰竭)、心肌症、心肌缺血症、心肌梗塞、狹心症、異常血脂症、動脈粥狀性硬化症、末梢動脈疾病、間歇性跛行、慢性阻塞性肺臟疾病、腦缺血、腦中風、粒線體病、粒線體腦肌病、癌、肺性高血壓及阿茲海默症所成群組之疾病之預防或治療有效之其他藥劑；[18]一種哺乳動物之PDHK抑制方法，其包含對該哺乳動物投予醫藥上有效量之上述[1]至[5]中任一項所述之化合物或其製藥上可容許之鹽；[19]一種哺乳動物之PDHK1抑制方法，其包含對該哺乳 動物投予醫藥上有效量之上述[1]至[5]中任一項所述之化合物或其製藥上可容許之鹽；[20]一種哺乳動物之PDHK2抑制方法，其包含對該哺乳動物投予醫藥上有效量之上述[1]至[5]中任一項所述之化合物或其製藥上可容許之鹽；[21]一種哺乳動物之下述疾病之預防或治療方法，其包含對該哺乳動物投予醫藥上有效量之上述[1]至[5]中任一項所述之化合物或其製藥上可容許之鹽，其中，該疾病係哺乳動物之糖尿病(1型糖尿病、2型糖尿病)、胰島素抵抗性症候群、代謝症候群、高血糖症、高乳酸血症、糖尿病併發症(糖尿病性神經病變、糖尿病性視網膜病、糖尿病性腎病、白內障)、心衰竭(急性心衰竭、慢性心衰竭)、心肌症、心肌缺血症、心肌梗塞、狹心症、異常血脂症、動脈粥狀性硬化症、末梢動脈疾病、間歇性跛行、慢性阻塞性肺臟疾病、腦缺血、腦中風、粒線體病、粒線體腦肌病、癌或肺性高血壓；[21’]一種哺乳動物之下述疾病之預防或治療方法，其包含對該哺乳動物投予醫藥上有效量之上述[1]至[5]中任一項所述之化合物或其製藥上可容許之鹽，其中，該疾病係哺乳動物之糖尿病(1型糖尿病、2型糖尿病)、胰島素抵抗性症候群、代謝症候群、高血糖症、高乳酸血症、糖尿病併發症(糖尿病性神經病變、糖尿病性視網膜病、糖尿病性腎病、白內障)、心衰竭(急性心衰竭、慢性心衰竭)、心肌症、心肌缺血症、心肌梗塞、狹心症、異常血脂症、動脈 粥狀性硬化症、末梢動脈疾病、間歇性跛行、慢性阻塞性肺臟疾病、腦缺血、腦中風、粒線體病、粒線體腦肌病、癌、肺性高血壓或阿茲海默症；[22]一種哺乳動物之血糖值之降低方法，其包含對該哺乳動物投予醫藥上有效量之上述[1]至[5]中任一項所述之化合物或其製藥上可容許之鹽；[23]一種哺乳動物之乳酸值之降低方法，其包含對該哺乳動物投予醫藥上有效量之上述[1]至[5]中任一項所述之化合物或其製藥上可容許之鹽；[24]一種上述[1]至[5]中任一項所述之化合物或其製藥上可容許之鹽之使用，其係用以製造PDHK抑制劑；[25]一種上述[1]至[5]中任一項所述之化合物或其製藥上可容許之鹽之使用，其係用以製造PDHK1抑制劑；[26]一種上述[1]至[5]中任一項所述之化合物或其製藥上可容許之鹽之使用，其係用以製造PDHK2抑制劑；[27]一種上述[1]至[5]中任一項所述之化合物或其製藥上可容許之鹽之使用，其係用以製造血糖值降低劑；[28]一種上述[1]至[5]中任一項所述之化合物或其製藥上可容許之鹽之使用，其係用以製造乳酸值降低劑；[29]一種上述[1]至[5]中任一項所述之化合物或其製藥上可容許之鹽之使用，其係用以製造下述疾病之預防或治療劑，其中，該疾病係糖尿病(1型糖尿病、2型糖尿病)、胰島素抵抗性症候群、代謝症候群、高血糖症、高乳酸血症、糖尿病併發症(糖尿病性神經病變、糖尿病性視網膜病、糖 尿病性腎病、白內障)、心衰竭(急性心衰竭、慢性心衰竭)、心肌症、心肌缺血症、心肌梗塞、狹心症、異常血脂症、動脈粥狀性硬化症、末梢動脈疾病、間歇性跛行、慢性阻塞性肺臟疾病、腦缺血、腦中風、粒線體病、粒線體腦肌病、癌或肺性高血壓；[29’]一種上述[1]至[5]中任一項所述之化合物或其製藥上可容許之鹽之使用，其係用以製造下述疾病之預防或治療劑，其中，該疾病係糖尿病(1型糖尿病、2型糖尿病)、胰島素抵抗性症候群、代謝症候群、高血糖症、高乳酸血症、糖尿病併發症(糖尿病性神經病變、糖尿病性視網膜病、糖尿病性腎病、白內障)、心衰竭(急性心衰竭、慢性心衰竭)、心肌症、心肌缺血症、心肌梗塞、狹心症、異常血脂症、動脈粥狀性硬化症、末梢動脈疾病、間歇性跛行、慢性阻塞性肺臟疾病、腦缺血、腦中風、粒線體病、粒線體腦肌病、癌、肺性高血壓或阿茲海默症；[30]如上述[24]至[29]中任一項所述之使用，其係與至少1種對下述疾病之預防或治療有效之其他藥劑組合，其中，該疾病係係選自由糖尿病(1型糖尿病、2型糖尿病)、胰島素抵抗性症候群、代謝症候群、高血糖症、高乳酸血症、糖尿病併發症(糖尿病性神經病變、糖尿病性視網膜病、糖尿病性腎病、白內障)、心衰竭(急性心衰竭、慢性心衰竭)、心肌症、心肌缺血症、心肌梗塞、狹心症、異常血脂症、動脈粥狀性硬化症、末梢動脈疾病、間歇性跛行、慢性阻塞性肺臟疾病、腦缺血、腦中風、粒線體病、粒線體腦肌 病、癌及肺性高血壓所成群組之疾病；以及[30’]如上述[24]或[29]中任一項所述之使用，其係與至少1種對下述疾病之預防或治療有效之其他藥劑組合，其中，該疾病係係選自由糖尿病(1型糖尿病、2型糖尿病)、胰島素抵抗性症候群、代謝症候群、高血糖症、高乳酸血症、糖尿病併發症(糖尿病性神經病變、糖尿病性視網膜病、糖尿病性腎病、白內障)、心衰竭(急性心衰竭、慢性心衰竭)、心肌症、心肌缺血症、心肌梗塞、狹心症、異常血脂症、動脈粥狀性硬化症、末梢動脈疾病、間歇性跛行、慢性阻塞性肺臟疾病、腦缺血、腦中風、粒線體病、粒線體腦肌病、癌、肺性高血壓及阿茲海默症所成群組之疾病；等。

本發明化合物或其製藥上可容許之鹽係抑制PDHK作用，故有用於作為糖尿病(1型糖尿病、2型糖尿病等)、胰島素抵抗性症候群、代謝症候群、高血糖症、高乳酸血症、糖尿病併發症(糖尿病性神經病變、糖尿病性視網膜病、糖尿病性腎病、白內障等)、心衰竭(急性心衰竭、慢性心衰竭)、心肌症、心肌缺血症、心肌梗塞、狹心症、異常血脂症、動脈粥狀性硬化症、末梢動脈疾病、間歇性跛行、慢性阻塞性肺臟疾病、腦缺血、腦中風、粒線體病、粒線體腦肌病、癌、肺性高血壓及阿茲海默症之預防劑或治療劑。

以下，詳細說明本發明。

本發明化合物係通式[I]所示之化合物：

(以下，亦稱為化合物(1))或其製藥上可容許之鹽。

本發明化合物係下述式所示之化合物：

(2-(4-{(9R)-9-羥基-2-[(2S)-2-羥基丙氧基]-9-(三氟甲基)-9H-茀-4-基}-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙醯胺)(以下，亦稱為化合物(2))或其製藥上可容許之鹽。

本發明化合物係下述式所示之化合物：

(2-(4-{(9R)-9-羥基-2-[(2R)-2-羥基丙氧基]-9-(三氟甲基)-9H-茀-4-基}-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙醯胺)(以下，亦稱為化合物(3))或其製藥上可容許之鹽。

本發明化合物之製藥上可容許之鹽只要係與本發明化合物形成無毒之鹽者則任何鹽皆可，可舉例如與無機酸之鹽、與有機酸之鹽、與胺基酸之鹽等。

就與無機酸之鹽而言，可舉例如與鹽酸、硝酸、硫酸、磷酸、氫溴酸等之鹽。

就與有機酸之鹽而言，可舉例如與乙二酸、馬來酸、檸檬酸、富馬酸、乳酸、蘋果酸、琥珀酸、酒石酸、乙酸、三氟乙酸、葡萄糖酸、抗壞血酸、甲磺酸、苯磺酸、對甲苯磺酸等之鹽。

就與胺基酸之鹽而言，可舉例如與離胺酸、精胺酸、天門冬胺酸、麩胺酸等之鹽。

本發明化合物之製藥上可容許之鹽較佳係與無機酸之鹽。

又，本發明化合物或其製藥上可容許之鹽可以同位素(例如，³H、²H、¹⁴C、³⁵S等)標識。

就本發明化合物或其製藥上可容許之鹽而言，較佳係實質上精製之化合物(1)或其製藥上可容許之鹽。更佳係精製成80%以上之純度之本發明化合物或其製藥上可容許之鹽。

通式[I]所示之化合物或其製藥上可容許之鹽亦作為溶劑合物而存在。「溶劑合物」係指溶劑分子配位於通式[I]所示之化合物或其製藥上可容許之鹽而成者，包含水和物。溶劑合物較佳係製藥上可容許之溶劑合物。可舉例如，通式[I]所示之化合物或其製藥上可容許之鹽之水合物、乙醇合物、二甲基亞碸合物等。具體而言，可列舉通式[I]所示之化合物之半水合物、1水合物、2水合物或1乙醇合物，或者通式[I]所示之化合物之製藥上可容許之鹽之1水合物或2鹽酸鹽之2/3乙醇合物等。可依據公知方法來獲得其溶劑合物。

就「醫藥組成物」而言，可列舉錠劑、膠囊劑、顆粒劑、散劑、片劑(troche)、糖漿劑、乳劑、懸浮劑等口服劑，或外用劑、栓劑、注射劑、點眼劑、經鼻劑、經肺劑等非口服劑。

本發明之醫藥組成物係於醫藥製劑之技術領域依據其公知方法，將本發明化合物或其製藥上可容許之鹽與至少1種以上之製藥上可容許之載體等適當且適量地混合等而製造。該醫藥組成物中之本發明化合物或其製藥上可容許之鹽之含有率係依劑形、投予量等而異，例如組成物整體之0.1至100重量%。

就該「製藥上可容許之載體」而言，可列舉作為製劑素材而慣用之各種有機或無機載體物質，可舉例如固形製劑之賦形劑、崩解劑、黏合劑、流動化劑、潤滑劑等，或液狀製劑之溶劑、溶解補助劑、懸浮化劑、等張化劑、緩衝劑、無痛化劑等。進一步依需要使用保存劑、抗氧化劑、著色劑、甜味劑等添加物。

就「賦形劑」而言，可舉例如乳糖、白糖、D-甘露醇、D-山梨醇、玉米澱粉、糊精、微結晶纖維素、結晶纖維素、羧甲基纖維素(carmellose)、羧甲基纖維素鈣、羧甲基澱粉鈉、低取代度羥基丙基纖維素、阿拉伯膠等。

就「崩解劑」而言，可舉例如羧甲基纖維素、羧甲基纖維素鈣、羧甲基纖維素鈉、羧甲基澱粉鈉、交聯羧甲基纖維素鈉、交聯聚維酮(crospovidone)、低取代度羥基丙基纖維素、羥基丙基甲基纖維素、結晶纖維素等。

就「黏合劑」而言，可舉例如羥基丙基纖維素、羥基丙基甲基纖維素、聚維酮、結晶纖維素、白糖、糊精、澱粉、明膠、羧甲基纖維素鈉、阿拉伯膠等。

就「流動化劑」而言，可舉例如輕質無水 矽酸、硬脂酸鎂等。

就「潤滑劑」而言，可舉例如硬脂酸鎂、硬脂酸鈣、滑石等。

就「溶劑」而言，可舉例如精製水、乙醇、丙二醇、聚乙二醇(macrogol)、麻油、玉米油、橄欖油等。

就「溶解補助劑」而言，可舉例如丙二醇、D-甘露醇、苯甲酸苯甲酯、乙醇、三乙醇胺、碳酸鈉、檸檬酸鈉等。

就「懸浮化劑」而言，可舉例如氯化苄烷銨(benzalkonium chloride)、羧甲基纖維素、羥基丙基纖維素、丙二醇、聚維酮、甲基纖維素、單硬脂酸甘油酯等。

就「等張化劑」而言，可舉例如葡萄糖、D-山梨醇、氯化鈉、D-甘露醇等。

就「緩衝劑」而言，可舉例如磷酸氫鈉、乙酸鈉、碳酸鈉、檸檬酸鈉等。

就「無痛化劑」而言，可舉例如苯甲醇等。

就「保存劑」而言，可舉例如對羥苯甲酸乙酯、氯丁醇、苯甲醇、去氫乙酸鈉、山梨酸等。

就「抗氧化劑」而言，可舉例如亞硫酸鈉、抗壞血酸等。

就「著色劑」而言，可舉例如食用色素(例：食用紅色2號或3號、食用黃色4號或5號等)、β-胡蘿蔔素等。

就「甜味劑」而言，可舉例如糖精鈉、甘 草酸二鉀、阿斯巴甜等。

本發明之醫藥組成物，當然可對人類，亦可對人類以外的哺乳動物(例：小鼠、大鼠、倉鼠、天竺鼠、兔、貓、狗、豬、牛、馬、羊、猴等)施以口服或非口服(例：局部、肌肉內、皮下、直腸、靜脈投予等)投予。投予量係依投予對象、疾病、症狀、劑形、投予路徑等而異，例如，對成人患者(體重：約60kg)口服投予時之投予量一般係每1天約1mg至1g之範圍之有效成分之化合物(1)。可將該等量1次投予或分成數次投予。

本發明化合物或其製藥上可容許之鹽具有抑制PDHK(PDHK1及/或PDHK2)之活性，因此，認為對與葡萄糖利用障礙相關之疾病，例如糖尿病(1型糖尿病、2型糖尿病等)、胰島素抵抗性症候群、代謝症候群、高血糖症、高乳酸血症、糖尿病併發症(糖尿病性神經病變、糖尿病性視網膜病、糖尿病性腎病、白內障等)之治療或預防有益。又，認為PDHK抑制劑係對將能量基質供給至組織受限制之疾病，例如心衰竭(急性心衰竭、慢性心衰竭)、心肌症、心肌缺血症、心肌梗塞、狹心症、異常血脂症、動脈粥狀性硬化症、末梢動脈疾病、間歇性跛行、慢性阻塞性肺臟疾病、腦缺血及腦中風之治療或預防有益。再者，認為PDHK抑制劑係對粒線體病、粒線體腦肌病、癌、肺性高血壓、阿茲海默症等之治療或預防有益。

糖尿病係指例如1型糖尿病、2型糖尿病。

糖尿病併發症係指例如糖尿病性神經病 變、糖尿病性視網膜病、糖尿病性腎病、白內障。

心衰竭係指例如急性心衰竭、慢性心衰竭。

「抑制PDHK」意指抑制PDHK的功能以使其活性消失或減弱。「抑制PDHK」較佳係「抑制人類PDHK」。「PDHK抑制劑」較佳係「人類PDHK抑制劑」。

「抑制PDHK1」意指抑制PDHK1的功能以使其活性消或減弱，例如，意指依據後述試驗例1之條件抑制PDHK1的功能。「抑制PDHK1」較佳係「抑制人類PDHK1」。「PDHK1抑制劑」較佳係「人類PDHK1抑制劑」。更佳係「人類目標臟器之PDHK1抑制劑」。

「抑制PDHK2」意指抑制PDHK2的功能以使其活性消失或減弱，例如，意指依據後述試驗例1之條件抑制PDHK2的功能。「抑制PDHK2」較佳係「抑制人類PDHK2」。「PDHK2抑制劑」較佳係「人類PDHK2抑制劑」。更佳係「人類目標臟器之PDHK2抑制劑」。

「活化PDH」意指活化目標臟器(例如，肝臟、骨骼肌、脂肪組織、心臟、腦)等或癌等之PDH。

「使血糖值降低」意指使血中(包含血清中或血漿中)之葡萄糖濃度降低，較佳係意指使高血糖值降低。更佳係意指使血糖值降低到治療學上有效之人類之正常值。

「使乳酸值降低」意指使血中(包含血清中或血漿中)之乳酸濃度降低，較佳係意指使高乳酸值降低。更佳係意指使乳酸值降低到治療學上有效之人類之正常 值。

可將本發明化合物或其製藥上可容許之鹽以醫藥領域所進行之一般方法與1種或複數種其他藥劑(以下，亦稱為併用藥劑)組合使用(以下，亦稱為併用)。

本發明化合物或其製藥上可容許之鹽、及併用藥劑之投予時期不受限定，可將該等作為調配劑投予於投予對象，亦可同時或以一定間隔投予兩製劑。又，可使用作為以包括本發明之醫藥組成物及併用藥劑之套件為特徵之醫藥。併用藥劑之投予量只要依據臨床上使用之投予量即可，可依投予對象、疾病、症狀、劑形、投予路徑、投予時間、組合等而適當選擇。併用藥劑之投予形態無特別限定，只要本發明化合物或其製藥上可容許之鹽與併用藥劑組合即可。

就併用藥劑而言，可舉例如糖尿病(1型糖尿病、2型糖尿病)、胰島素抵抗性症候群、代謝症候群、高血糖症、高乳酸血症、糖尿病併發症(糖尿病性神經病變、糖尿病性視網膜病、糖尿病性腎病、白內障)、心衰竭(急性心衰竭、慢性心衰竭)、心肌症、心肌缺血症、心肌梗塞、狹心症、異常血脂症、動脈粥狀性硬化症、末梢動脈疾病、間歇性跛行、慢性阻塞性肺臟疾病、腦缺血、腦中風、粒線體病、粒線體腦肌病、癌、肺性高血壓或阿茲海默症之治療劑及/或預防劑等，可將該等中之1劑至複數劑與本發明化合物或其製藥上可容許之鹽組合使用。

就「糖尿病之治療劑及/或預防劑」而言， 可舉例如胰島素製劑、磺醯脲系降血糖劑、每福敏(metformin)、DPP-4抑制劑、胰島素抵抗性改善藥(例如四氫噻唑衍生物)、GLP-1受體促效劑等。

(實施例)

接著，藉由實施例具體說明本發明化合物或其製藥上可容許之鹽之製造方法。然而，本發明不受限於該等實施例。

即使本製法中未記載，仍可依需要而於官能基導入保護基並在後步驟進行去保護；將官能基作為前驅物對應各步驟，並在適當的階段轉變為所期望的官能基；亦可藉由變更各製法及步驟之順序等辦法來實施效率更佳之製造。

又，各步驟中，反應後之處理只要以一般施行之方法來進行即可，分離精製只要依需要適宜選擇結晶化、再結晶、蒸餾、分液、凝膠滲透層析、製備型HPLC等慣用方法，或者將其組合進行即可。所有試藥及溶劑具備市售用品質，無需進一步精製即使用。

百分率%係表示重量%，其他本文中所用之簡稱表示下述意義。

s：單峰

d：雙峰

t：參峰

q：四峰

m：多峰

br：寬峰

dd：雙雙峰(double doublet)

td：參雙峰(triple doublet)

ddd：雙雙雙峰(double double doublet)

J：耦合常數

CDCl₃：氘代氯仿

DMSO-D₆：氘代二甲基亞碸

¹H-NMR：質子核磁共振

HPLC：高效液相層析

DPPA：疊氮磷酸二苯酯(diphenylphosphoryl azide)

¹H-NMR光譜在CDCl₃或DMSO-D₆中，係以四甲基矽烷作為內部標準而測定，所有δ值以ppm表示。

(10mM磷酸鹽緩衝液(pH2.0))

將磷酸二氫鉀(3.60g)溶解於水(3000ml)，使用磷酸將pH調整為2.0，獲得標題緩衝液。

HPLC分析條件

分析條件1

測定機器：HPLC系統 島津製作所 高效液相層析儀Prominence

管柱：Daicel CHIRALCEL OD-RH 4.6mm φ×150mm

管柱溫度：40℃

移動相：(A液)10mM磷酸鹽緩衝液(pH2.0)、(B液)乙腈花費20分鐘使移動相之組成(A液：B液)由50：50直線轉變為20：80，然後以20：80保持5分鐘。

流速：0.5ml/分鐘

檢測：UV(220nm)

分析條件2

測定機器：HPLC系統 島津製作所 高效液相層析儀Prominence

管柱：Daicel CHIRALPAK AD-3R 4.6mm φ×150mm

管柱溫度：40℃

移動相：(A液)10mM磷酸鹽緩衝液(pH2.0)、(B液)乙腈花費20分鐘使移動相之組成(A液：B液)由50：50直線轉變為20：80，然後以20：80保持5分鐘。

流速：0.5ml/分鐘

檢測：UV(220nm)

實施例1

2-(4-{(9R)-9-羥基-2-[(2S)-2-羥基丙氧基]-9-(三氟甲基)-9H-茀-4-基}-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙醯胺(化合物(2))之合成

步驟1

2’-氯-4’-甲氧基聯苯-2-羧酸乙酯

在氬環境下，將1-溴-2-氯-4-甲氧基苯(44.3g)溶解於甲苯(220ml)，添加2-(4,4,5,5-四甲基[1,3,2]二氧雜硼雜環戊烷-2-基)苯甲酸乙酯(60.8g)、水(132ml)、碳酸氫鈉(33.6g)及二氯雙(三苯基膦)鈀(II)(2.8g)之後，於油浴溫度 120℃攪拌7小時。於反應混合物追加2-(4,4,5,5-四甲基[1,3,2]二氧雜硼雜環戊烷-2-基)苯甲酸乙酯(5.2g)，進一步攪拌2小時。將反應混合物冷卻至室溫，添加甲苯(100ml)及水(200ml)，攪拌一晚。於反應混合物添加活性碳(3g)，進一步攪拌1小時。以矽藻土濾除不溶物，將過濾物以甲苯(100ml)及水(200ml)沖洗。將所得之濾液合併且分層。將所得之有機層以水(100ml)沖洗後，餾去溶劑，獲得標題化合物(67.7g)。

¹H-NMR(400MHz,DMSO-D₆)δ：7.88-7.86(1H,m),7.63(1H,td,J=7.6,1.4Hz),7.51(1H,td,J=7.6,1.4Hz),7.27(1H,dd,J=7.6,0.9Hz),7.18(1H,d,J=8.6Hz),7.06(1H,d,J=2.6Hz),6.95(1H,dd,J=8.6,2.6Hz),4.01(2H,m),3.80(3H,s),0.96(3H,t,J=7.1Hz).

步驟2

2’-氯-4’-甲氧基聯苯-2-羧酸

將2’-氯-4’-甲氧基聯苯-2-羧酸乙酯(67.7g)溶解於乙醇(100ml)，添加4N氫氧化鈉水溶液(100ml)，於油浴溫度110℃攪拌4.5小時。將反應混合物冷卻至室溫，添加水(200ml)及甲苯(100ml)，攪拌一晚。於 反應混合物添加活性碳(3.6g)，進一步攪拌1小時。以矽藻土濾除不溶物，將過濾物以甲苯(30ml)及水(300ml)沖洗。將所得之濾液合併且分層。將所得之水層以甲苯(100ml)沖洗後，於水層添加濃鹽酸(40ml)使其成為酸性，於室溫攪拌1小時。濾取析出之固體。將所得之固體風乾3小時後，於60℃減壓乾燥一晚，獲得標題化合物(50.2g)。

¹H-NMR(400MHz,DMSO-D₆)δ：12.57(1H,s),7.90-7.88(1H,m),7.60(1H,td,J=7.6,1.3Hz),7.49(1H,td,J=7.6,1.3Hz),7.24(1H,dd,J=7.6,1.0Hz),7.19(1H,d,J=8.4Hz),7.06(1H,d,J=2.4Hz),6.95(1H,dd,J=8.5,2.4Hz),3.81(3H,s).

步驟3

4-氯-2-甲氧基-9H-茀-9-酮

在氬環境下，於2’-氯-4’-甲氧基聯苯-2-羧酸(65.4g)添加伊頓試藥(Eaton's reagent)(五氧化二磷-甲磺酸(重量比1：10)溶液)(330ml)，於油浴溫度100℃攪拌1小時。使反應混合物冰冷，緩慢地將水(650ml)滴入後，於室溫攪拌1小時。濾取析出之固體，以水(500ml)沖洗。將所得之固體風乾一晚，獲得標題化合物(92.0g)。

¹H-NMR(400MHz,DMSO-D₆)δ：8.01(1H,d,J=7.4Hz),7.64-7.60(2H,m),7.36(1H,td,J=7.4,0.9Hz),7.17(2H,dd,J=8.4,2.3Hz),3.85(3H,s).

步驟4

4-氯-2-羥基-9H-茀-9-酮

在氬環境下，於4-氯-2-甲氧基-9H-茀-9-酮(92.0g)添加N-甲基吡咯啶酮(120ml)及吡啶鹽酸鹽(144g)。一邊將反應混合物使用迪安-斯塔克(Dean-Stark)裝置餾去水，一邊於油浴溫度200℃攪拌3小時。將反應混合物冷卻至90℃後，將水(600ml)滴入，於室溫攪拌2小時。濾取析出之固體，將過濾物以水(400ml)沖洗。將所得之固體風乾3天後，添加己烷與乙酸乙酯之混合溶劑(己烷：乙酸乙酯1：1，300ml)，於室溫攪拌1小時。濾取固體，將過濾物以己烷與乙酸乙酯之混合溶劑(己烷：乙酸乙酯=1：1，500ml)沖洗。將所得之固體於50℃減壓乾燥3小時，獲得標題化合物(48.6g)。

¹H-NMR(400MHz,DMSO-D₆)δ：10.56(1H,s),7.96(1H,d,J=8.4Hz),7.61-7.57(2H,m),7.32(1H,td,J=7.4,0.9Hz),6.97(1H,d,J=2.2Hz),6.94(1H,d,J=2.2Hz).

步驟5

4-(4-氯-9-側氧基-9H-茀-2-基氧基)丁酸乙酯

將4-氯-2-羥基-9H-茀-9-酮(48.6g)溶解於N,N-二甲基甲醯胺(150ml)，添加碳酸鉀(58.3g)及4-溴丁酸乙酯(33.5ml)，於60℃攪拌2小時。將反應混合物冷卻至40℃，添加甲苯(300ml)及水(300ml)，進行分層。將所得之水層以甲苯(100ml)再萃取。將所得之有機層合併，以水(100ml)沖洗2次後，添加無水硫酸鈉及活性碳(2.5g)，於室溫攪拌5分鐘。以矽藻土濾除不溶物，將濾液之溶劑餾去。於所得之殘渣添加己烷(220ml)，於50℃攪拌10分鐘，於室溫攪拌1小時。濾取析出之固體，將過濾物以己烷沖洗。將所得之固體減壓乾燥，獲得標題化合物(66.9g)。又，所得之濾液，係餾去溶劑，於殘渣添加乙酸乙酯(5ml)及己烷(20ml)，於室溫攪拌1小時。濾取析出之固體，將過濾物以己烷沖洗。將所得之固體減壓乾燥，更獲得標題化合物(2.5g)。

¹H-NMR(400MHz,DMSO-D₆)δ：8.01(1H,d,J=7.6Hz),7.65-7.61(2H,m),7.37(1H,t,J=7.6Hz),7.17-7.14(2H,m),4.13-4.05(4H,m),2.47(2H,t,J=7.3Hz),2.02-1.95(2H,m),1.19(3H,td,J=7.2,0.7Hz).

步驟6

4-[(9R)-4-氯-9-羥基-9-(三氟甲基)-9H-茀-2-基氧基]丁酸乙酯

在氬環境下，將4-(4-氯-9-側氧基-9H-茀-2-基氧基)丁酸乙酯(69.4g)溶解於THF(700ml)，添加N-(4-第三丁基苯甲基)辛可尼汀鎓4-甲氧基苯氧化物(6.4g)。於-16℃將三甲基(三氟甲基)矽烷(52.0ml)之THF(140ml)溶液滴入反應混合物中，於同溫攪拌15分鐘。於反應混合液依序添加乙酸(23.0ml)及1M四丁基銨氟化物/THF溶液(222ml)後，於室溫攪拌1小時。餾去反應混合液之溶劑，於所得之殘渣添加甲苯(500ml)及飽和碳酸氫鈉水(200ml)，進行分層。將所得之有機層依序以飽和碳酸氫鈉水(150ml)沖洗2次、以1N氫氧化鈉水溶液(100ml)、水(100ml)、1N鹽酸(100ml)、水(100ml)、飽和食鹽水(100ml)沖洗。於所得之有機層添加無水硫酸鎂及矽膠(150g)，攪拌10分鐘。濾除不溶物，將過濾物依序以甲苯(300ml)及乙酸乙酯(800ml)沖洗。將所得之濾液與甲苯沖洗液合併，餾去溶劑，獲得標題化合物(72.1g)。又，餾去乙酸乙酯沖洗液之溶劑，於所得之殘渣添加矽膠(40g)、以及己烷與乙酸乙酯之混合溶劑(乙酸乙酯：己烷2：1，300ml)，於室溫攪拌。濾除不溶 物，將過濾物以己烷與乙酸乙酯之混合溶劑(乙酸乙酯：己烷=2：1，300ml)沖洗。餾去所得之濾液之溶劑，更獲得標題化合物(20.3g)。

¹H-NMR(400MHz,DMSO-D₆)δ：8.14(1H,d,J=7.7Hz),7.66(1H,d,J=7.5Hz),7.53(1H,t,J=7.6Hz),7.42-7.38(2H,m),7.14(2H,s),4.11-4.05(4H,m),2.47(2H,t,J=7.5Hz),2.03-1.96(2H,m),1.19(3H,td,J=7.1,0.8Hz).

(關於絕對組態)

後述步驟10中，鑑定4-氯-2-甲基-9-(三氟甲基)-9H-茀-9-醇之絕對組態，確認本步驟所得之標題化合物係(R)體。光學純度係52.9%e.e.。

光學純度係以HPLC分析條件1來決定。(S)體之保持時間19.6分鐘，(R)體之保持時間23.0分鐘。

步驟7

4-[(9R)-4-氯-9-羥基-9-(三氟甲基)-9H-茀-2-基氧基]丁酸

將4-[(9R)-4-氯-9-羥基-9-(三氟甲基)-9H-茀-2-基氧基]丁酸乙酯(92.2g)溶解於乙醇(100ml)，添加4N氫氧化鈉水溶液(100ml)，於80℃攪拌一晚。將反應混合物冷卻至室溫後，添加水(200ml)，以甲苯(100ml)沖洗2次。使用濃鹽酸(40ml)使所得之水層中和，以乙酸乙酯(300ml)萃 取2次。將所得之乙酸乙酯萃取液依序以水(100ml)沖洗2次、以飽和食鹽水(100ml)沖洗後，添加無水硫酸鎂及活性碳(4.2g)，於室溫攪拌10分鐘。濾除不溶物，餾去濾液之溶劑。於所得之殘渣添加氯仿(80ml)，加熱至50℃後，將己烷(400ml)滴入，於同溫攪拌30分鐘，於室溫攪拌2小時。濾取析出之固體，以己烷與氯仿之混合溶劑(己烷：氯仿=9：1，50ml)沖洗後，於80℃減壓乾燥2小時，獲得標題化合物(72.5g)。

¹H-NMR(400MHz,DMSO-D₆)δ：12.17(1H,br s),8.14(1H,d,J=7.7Hz),7.66(1H,d,J=7.5Hz),7.54(1H,td,J=7.7,1.2Hz),7.42-7.30(2H,m),7.18-7.15(2H,m),4.09(2H,t,J=6.4Hz),2.41(2H,t,J=7.3Hz),2.00-1.93(2H,m).

步驟8

4-[(9R)-4-氯-9-羥基-9-(三氟甲基)-9H-茀-2-基氧基]丁酸之(1S)-1-(4-甲基苯基)乙基胺之鹽

在氮環境下，將(1S)-1-(4-甲基苯基)乙基胺(19.5g)溶解於乙酸乙酯(720ml)，添加4-[(9R)-4-氯-9-羥基-9-(三氟甲基)-9H-茀-2-基氧基]丁酸(72.5g)。將反應混合物於60℃攪拌2小時，於室溫攪拌一晚。濾取析出之固體，將過濾物以乙酸乙酯(100ml)沖洗。將所得之固體於60℃減 壓乾燥5小時，獲得標題化合物(68.6g)。另一方面，可從濾液獲得4-[(9S)-4-氯-9-羥基-9-(三氟甲基)-9H-茀-2-基氧基]丁酸。

(關於光學純度)

4-[(9R)-4-氯-9-羥基-9-(三氟甲基)-9H-茀-2-基氧基]丁酸之光學純度係以HPLC分析條件1決定(光學純度90.2%e.e.)。(R)體之保持時間12.9分鐘，(S)體之保持時間10.4分鐘。

¹H-NMR(400MHz,DMSO-D₆)δ：8.14(1H,d,J=7.7Hz),7.66(1H,d,J=7.7Hz),7.53(1H,td,J=7.6,1.1Hz),7.40(1H,td,J=7.6,1.0Hz),7.26(2H,d,J=7.9Hz),7.16-7.10(4H,m),4.08(2H,t,J=6.5Hz),4.01(1H,q,J=6.7Hz),2.32(2H,t,J=7.3Hz),2.26(3H,s),1.98-1.91(2H,m),1.26(3H,d,J=6.7Hz).

步驟9

4-[(9R)-4-氯-9-羥基-9-(三氟甲基)-9H-茀-2-基氧基]丁酸

於4-[(9R)-4-氯-9-羥基-9-(三氟甲基)-9H-茀-2-基氧基]丁酸與(1S)-1-(4-甲基苯基)乙基胺之鹽(68.6g)添加乙酸乙酯(500ml)、2N鹽酸(300ml)，於室溫攪拌10分鐘。將該混合液分層。將所得之有機層依序以水(250ml)、飽和 食鹽水(200ml)沖洗。所得之有機層以無水硫酸鎂乾燥後，濾除不溶物，餾去濾液之溶劑，獲得標題化合物(60.0g)。

¹H-NMR(400MHz,DMSO-D₆)δ：12.17(1H,br s),8.14(1H,d,J=7.7Hz),7.66(1H,d,J=7.5Hz),7.54(1H,td,J=7.7,1.2Hz),7.42-7.30(2H,m),7.18-7.15(2H,m),4.09(2H,t,J=6.4Hz),2.41(2H,t,J=7.3Hz),2.00-1.93(2H,m).

步驟10

(9R)-4-氯-9-(三氟甲基)-9H-茀-2,9-二醇

於4-[(9R)-4-氯-9-羥基-9-(三氟甲基)-9H-茀-2-基氧基]丁酸(50g)添加N-甲基吡咯啶酮(200ml)與吡啶鹽酸鹽(298g)，於油浴溫度200℃攪拌2天。將反應混合液冷卻至室溫後，以乙酸乙酯(500ml)稀釋，以水沖洗2次。將所得之水層以乙酸乙酯(300ml)再萃取，與先前所得之有機層合併，依序以水、1N鹽酸、飽和食鹽水沖洗。於所得之有機層添加無水硫酸鎂及活性碳(10g)，於室溫攪拌後，以矽藻土濾除不溶物。餾去所得之有機層之溶劑，於殘渣添加己烷，於室溫攪拌。濾取析出之固體，於室溫減壓乾燥。將所得之粗生成物溶解於乙酸乙酯(500ml)，以水沖洗3次後，以無水硫酸鎂乾燥。濾除不溶物，餾去濾液之溶劑。 於殘渣添加己烷，於室溫攪拌。濾取析出之固體，於室溫減壓乾燥，獲得標題化合物(22.4g)。

¹H-NMR(400MHz,DMSO-D₆)δ：10.37(1H,br s),8.09(1H,d,J=7.5Hz),7.63(1H,d,J=7.5Hz),7.50(1H,td,J=7.6,1.0Hz),7.36(1H,td,J=7.6,1.0Hz),7.32(1H,br s),7.06(1H,s),6.91(1H,br d,J=2.0Hz).

(關於絕對組態)

標題化合物之絕對組態係由使用藉由下述步驟(步驟A-1至步驟A-2及步驟B-1)所調製之化合物(100A)與化合物(100B)之光學活性管柱之HPLC分析來決定。

步驟A-1

針對4-氯-2-甲基-9H-茀-9-酮進行三氟甲基化、與溴乙酸乙酯之反應、及水解，獲得[4-氯-2-甲基-9-(三氟甲基)-9H-茀-9-基氧基]乙酸。使用(1R)-1-苯基乙基胺將 該化合物光學分割，所得之(1R)-1-苯基乙基胺之鹽(100AA)藉由單結晶X線構造解析而決定絕對組態為(R)。

步驟A-2

從化合物100AA藉由酸處理等而合成(9R)-4-氯-2-甲基-9-(三氟甲基)-9H-茀-9-醇(化合物(100A))。

步驟B-1

藉由上述方法將步驟10所得之4-氯-9-(三氟甲基)-9H-茀-2,9-二醇之2位羥基轉換成甲基，獲得4-氯-2-甲基-9-(三氟甲基)-9H-茀-9-醇(化合物(100B))。

(使用光學活性管柱之HPLC分析)

化合物(100)之兩個對掌體可藉由使用光學活性管柱 之HPLC分離(HPLC分析條件2)。從化合物100A之HPLC分析結果，明確得知(R)體之保持時間18.4分鐘、(S)體之保持時間17.0分鐘。藉由此HPLC條件，分析化合物(100A)與化合物(100B)時，保持時間一致。

認為製造上述化合物(100A)及化合物(100B)時，不會發生不對稱碳之立體配置之轉換。由此結果，確認步驟10所得之4-氯-9-(三氟甲基)-9H-茀-2,9-二醇具有(R)之絕對組態。

步驟11

(9R)-4-氯-2-[(2S)-1-環氧乙烷基甲氧基]-9-(三氟甲基)-9H-茀-9-醇

將(9R)-4-氯-9-(三氟甲基)-9H-茀-2,9-二醇(243mg)溶解於N,N-二甲基甲醯胺(2ml)，添加3-硝磺酸(2S)-(+)-縮水甘油酯(190mg)與碳酸鉀(184mg)，於室溫攪拌一晚。於反應混合液添加乙酸乙酯(20ml)，依序以水(10ml)沖洗4次、以飽和食鹽水(10ml)沖洗。將所得之有機層以無水硫酸鈉乾燥。濾除不溶物，餾去濾液之溶劑，獲得標題化合物(251mg)。

¹H-NMR(DMSO-D₆)δ：8.13(1H,d,J=7.7Hz),7.65(1H,d,J=7.7Hz),7.53(1H,td,J=7.7,1.2Hz),7.41-7.37(2H,m), 7.19-7.18(2H,s),4.47(1H,dd,J=11.5,2.4Hz),3.92(1H,dd,J=11.6,6.7Hz),3.36-3.33(1H,m),2.85(1H,dd,J=5.0,4.3Hz),2.73(1H,dd,J=5.0,2.7Hz).

步驟12

(9R)-4-氯-2-[(2S)-2-羥基丙氧基]-9-(三氟甲基)-9H-茀-9-醇

在氬環境下，將(9R)-4-氯-2-[(2S)-1-環氧乙烷基甲氧基]-9-(三氟甲基)-9H-茀-9-醇(227mg)溶解於四氫呋喃(3ml)，於冰冷下將1M氫化三乙基硼鋰/四氫呋喃溶液(1.87ml)滴入。於同溫攪拌30分鐘後，添加1N鹽酸(2ml)，以乙酸乙酯(10ml)萃取。將所得之有機層依序以水(5ml)、飽和碳酸氫鈉水溶液(5ml)、飽和食鹽水(5ml)沖洗後，以無水硫酸鈉乾燥。濾除不溶物，餾去濾液之溶劑。使用矽膠管柱層析(溶出溶劑：己烷/乙酸乙酯=7/3至65/35)精製殘渣，獲得標題化合物(171mg)。

¹H-NMR(DMSO-D₆)δ：8.14(1H,d,J=7.7Hz),7.66(1H,d,J=7.7Hz),7.54(1H,td,J=7.7,1.2Hz),7.42-7.38(2H,m),7.17(1H,br s),7.15(1H,d,J=2.2Hz),4.92(1H,d,J=4.6Hz),4.00-3.88(3H,m),1.16(3H,d,J=6.2Hz).

步驟13

2-(4-{(9R)-9-羥基-2-[(2S)-2-羥基丙氧基]-9-(三氟甲基)-9H-茀-4-基}-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙酸乙酯

在氬環境下，將(9R)-4-氯-2-[(2S)-2-羥基丙氧基]-9-(三氟甲基)-9H-茀-9-醇(80mg)溶解於甲苯(1ml)，添加2-甲基-2-[4-(4,4,5,5-四甲基[1,3,2]二氧雜硼雜環戊烷-2-基)-1H-吡唑-1-基]丙酸乙酯(103mg)、水(0.3ml)、碳酸氫鈉(38mg)、乙酸鈀(5mg)、2-二環己基膦基-2’,6’-二甲氧基聯苯(SPhos)(18mg)，於油浴溫度100℃攪拌7小時。將反應混合液冷卻至室溫後，添加乙酸乙酯(10ml)，進行分層。將所得之有機層依序以水(5ml)、飽和食鹽水(5ml)沖洗後，以無水硫酸鈉乾燥。濾除不溶物，餾去濾液之溶劑。使用矽膠薄層層析(展開溶劑：己烷/乙酸乙酯=1/1)精製殘渣，獲得標題化合物(57mg)。

¹H-NMR(DMSO-D₆)δ：8.19(1H,d,J=0.7Hz),7.67(1H,d,J=0.7Hz),7.60-7.59(1H,m),7.27-7.24(3H,m),7.22(1H,s),7.16(1H,br d,J=1.8Hz),6.86(1H,d,J=2.4Hz),4.89(1H,d,J=4.6Hz),4.15(2H,q,J=7.1Hz),4.01-3.95(1H,m),3.92-3.88(2H,m),1.85(6H,s),1.19-1.15(6H,m).

步驟14

2-(4-{(9R)-9-羥基-2-[(2S)-2-羥基丙氧基]-9-(三氟甲基)-9H-茀-4-基}-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙酸

將2-(4-{(9R)-9-羥基-2-[(2S)-2-羥基丙氧基]-9-(三氟甲基)-9H-茀-4-基}-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙酸乙酯(57mg)溶解於乙醇(0.5ml)，添加4N氫氧化鈉水溶液(57μl)，於室溫攪拌整晚。將1N鹽酸(1ml)滴入反應混合液後，以乙酸乙酯(5ml)萃取。所得之有機層依序以水(5ml)、飽和食鹽水(5ml)沖洗，以無水硫酸鈉乾燥。濾除不溶物，餾去濾液之溶劑，獲得標題化合物(51mg)。

¹H-NMR(DMSO-D₆)δ：13.05(1H,br s),8.14(1H,s),7.63(1H,s),7.58-7.56(1H,m),7.27-7.20(3H,m),7.18(1H,s),7.14(1H,br d,J=1.6Hz),6.85(1H,d,J=2.6Hz),4.86(1H,d,J=4.7Hz),3.99-3.94(1H,m),3.91-3.85(2H,m),1.82(3H,s),1.81(3H,s),1.15(3H,d,J=6.5Hz).

步驟15

2-(4-{(9R)-9-羥基-2-[(2S)-2-羥基丙氧基]-9-(三氟甲基)-9H-茀-4-基}-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙醯胺(化合物(2))

將2-(4-{(9R)-9-羥基-2-[(2S)-2-羥基丙氧基]-9-(三氟甲基)-9H-茀-4-基}-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙酸(49mg)溶解於N,N-二甲基甲醯胺(1ml)，添加氯化銨(17mg)、二異丙基乙基胺(90μl)及1-[雙(二甲基胺基)亞甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶-1-鎓3-氧化物 六氟磷酸酯(以下，稱為HATU)(59mg)，於室溫攪拌一晚。於反應混合液添加乙酸乙酯(10ml)，依序以1N鹽酸(5ml)沖洗、以水(5ml)沖洗4次、以飽和食鹽水(5ml)沖洗，以無水硫酸鈉乾燥。濾除不溶物，餾去濾液之溶劑。使用矽膠薄層層析(展開溶劑：氯仿/甲醇=9/1)精製殘渣，獲得標題化合物(42mg/86%產率)。

¹H-NMR(DMSO-D₆)δ：8.09(1H,d,J=0.7Hz),7.68(1H,d,J=0.7Hz),7.60-7.58(1H,m),7.36-7.34(1H,m),7.27-7.23(3H,m),7.21(1H,s),7.15(1H,br d,J=1.8Hz),6.97(1H,br s),6.89(1H,d,J=2.4Hz),4.89(1H,d,J=4.6Hz),4.00-3.86(3H,m),1.80(3H,s),1.79(3H,s),1.17(3H,d,J=6.2Hz).

步驟C-1

N-(4-第三丁基苯甲基)辛可尼汀鎓 溴化物之合成

將辛可尼汀(10.6g)溶解於四氫呋喃(200ml)，添加4-第三丁基苯甲基溴化物(10.1g)、四丁基銨碘化物(0.66g)，於70℃攪拌一晚。將反應混合物冷卻至室溫後，濾取固體，以乙酸乙酯(50ml)沖洗。將所得之固體減壓乾燥一晚，獲得標題化合物(18.5g)。

¹H-NMR(400MHz,DMSO-D₆)δ：8.99(1H,d,J=4.4Hz),8.27(1H,d,J=8.2Hz),8.11(1H,dd,J=8.5,1.0Hz),7.89-7.79(2H,m),7.78-7.71(1H,m),7.63(2H,d,J=8.4Hz),7.59(2H,t,J=8.4Hz),6.72(1H,d,J=4.2Hz),6.57-6.51(1H,br s),5.67(1H,ddd,J=17.0,10.4,6.4Hz),5.14(1H,d,J=17.2Hz),5.08(1H,d,J=12.6Hz),5.00-4.90(2H,m),4.30-4.18(1H,m),3.91(1H,t,J=8.7Hz),3.74-3.64(1H,m),3.35-3.18(2H,m),2.76-2.65(1H,m),2.18-1.94(3H,m),1.90-1.78(1H,m),1.40-1.22(1H,m),1.34(9H,s).

步驟C-2

N-(4-第三丁基苯甲基)辛可尼汀鎓4-甲氧基苯氧化物之合成

添加N-(4-第三丁基苯甲基)辛可尼汀鎓溴化物(18.5g)、Amberlyst(註冊商標)A26(苯乙烯、二乙烯苯基質之強鹼性離子交換樹脂)(18.5g)及甲醇(280ml)，於室溫攪拌一晚。以矽藻土濾除不溶物，以甲醇(100ml)沖洗。於濾液添加4-甲氧基酚(4.8g)，餾去溶劑。將殘渣以甲苯(100ml)共沸3次後，添加甲苯(20ml)，接著，將二異丙基醚(200ml)滴入，於室溫攪拌3小時。濾取析出之固體，以二異丙基醚(50ml)沖洗後，於室溫減壓乾燥一晚，獲得標題化合物(21.8g)。

¹H-NMR(400MHz,DMSO-D₆)δ：8.91(1H,d,J=4.4Hz),8.17(1H,d,J=8.2Hz),8.07(1H,d,J=8.4Hz),7.89(1H,d,J=4.4Hz),7.79(1H,t,J=7.6Hz),7.64(1H,t,J=7.5Hz),7.57-7.52(5H,m),6.56-6.55(2H,m),6.43-6.42(3H,m),5.67-5.59(1H,m),5.28(1H,d,J=12.1Hz),5.12(1H,d,J=17.2Hz),4.92(1H,d,J=10.6Hz),4.84(1H,d,J=12.1Hz),4.65-4.53(1H,m),3.80(1H,t,J=8.8Hz),3.65-3.63(1H,m),3.57(3H,s),3.25(1H,t,J=11.6Hz),3.10-3.07(1H,m),2.67(1H,br s),2.07-2.02(2H,m),1.95(1H,br s),1.79-1.76(1H,br m),1.33(9H,s),1.16-1.11(1H,m).

實施例2

2-(4-{(9R)-9-羥基-2-[(2R)-2-羥基丙氧基]-9-(三氟甲基)-9H-茀-4-基}-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙醯胺(化合物(3))之合成

步驟1

(9R)-4-氯-2-[(2R)-1-環氧乙烷基甲氧基]-9-(三氟甲基)-9H-茀-9-醇

將(9R)-4-氯-9-(三氟甲基)-9H-茀-2,9-二醇(243mg)溶解於N,N-二甲基甲醯胺(2ml)，添加3-硝磺酸(2R)-(-)-縮水甘油酯(190mg)與碳酸鉀(190mg)，於室溫攪拌一晚。於反應混合液添加乙酸乙酯(20ml)，依序以水(10ml)沖洗4次、以飽和食鹽水(10ml)沖洗。將所得之有機層以無水硫酸鈉乾燥。濾除不溶物，餾去濾液之溶劑，獲得標題化合物(235mg)。

¹H-NMR(DMSO-D₆)δ：8.13(1H,d,J=7.7Hz),7.65(1H,d,J=7.7Hz),7.53(1H,td,J=7.7,1.2Hz),7.41-7.37(2H,m),7.19(2H,s),4.46(1H,dd,J=11.5,2.4Hz),3.93(1H,dd,J=11.5,6.6Hz),3.36-3.32(1H,m),2.85(1H,dd,J=5.0,4.3Hz),2.73(1H,dd,J=5.1,2.6Hz).

步驟2

(9R)-4-氯-2-[(2R)-2-羥基丙氧基]-9-(三氟甲基)-9H-茀-9-醇

在氬環境下，將(9R)-4-氯-2-[(2R)-1-環氧乙烷基甲氧基]-9-(三氟甲基)-9H-茀-9-醇(192mg)溶解於四氫呋喃(3ml)，於冰冷下將1M氫化三乙基硼鋰/四氫呋喃溶液(1.60ml)滴入。於同溫攪拌30分鐘後，添加飽和氯化銨水溶液(5ml)，以乙酸乙酯(10ml)萃取。將所得之有機層，依序以飽和氯化銨水溶液沖洗、以飽和食鹽水沖洗2次後，以無水硫酸鈉乾燥。濾除不溶物，餾去濾液之溶劑。使用矽膠管柱層析(溶出溶劑：己烷/乙酸乙酯=65/35)精製殘渣，獲得標題化合物(145mg)。

¹H-NMR(DMSO-D₆)δ：8.14(1H,d,J=7.5Hz),7.66(1H,d,J=7.5Hz),7.54(1H,td,J=7.5,1.2Hz),7.42-7.38(2H,m),7.17(1H,br s),7.15(1H,d,J=2.4Hz),4.93(1H,d,J=4.6Hz),4.00-3.93(1H,m),3.92-3.89(2H,m),1.16(3H,d,J=6.2Hz).

步驟3

2-(4-{(9R)-9-羥基-2-[(2R)-2-羥基丙氧基]-9-(三氟甲基)-9H-茀-4-基}-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙酸乙酯

在氬環境下，將(9R)-4-氯-2-[(2R)-2-羥基丙氧基]-9-(三氟甲基)-9H-茀-9-醇(80mg)溶解於甲苯(1ml)，添加2-甲基-2-[4-(4,4,5,5-四甲基[1,3,2]二氧雜硼雜環戊烷-2-基)-1H-吡唑-1-基]丙酸乙酯(103mg)、水(0.3ml)、碳酸氫鈉(38mg)、乙酸鈀(5mg)、SPhos(18mg)，於油浴溫度100℃攪拌7小時。將反應混合液冷卻至室溫後，添加乙酸乙酯(10ml)並進行分層。將所得之有機層依序以水(5ml)、飽和食鹽水(5ml)沖洗後，以無水硫酸鈉乾燥。濾除不溶物，餾去濾液之溶劑。使用矽膠薄層層析(展開溶劑：己烷/乙酸乙酯=1/1)精製殘渣，獲得標題化合物(77mg)。

¹H-NMR(DMSO-D₆)δ：8.19(1H,d,J=0.7Hz),7.67(1H,d,J=0.7Hz),7.60(1H,br d,J=4.9Hz),7.26-7.24(3H,m),7.22(1H,s),7.16(1H,br d,J=1.8Hz),6.86(1H,d,J=2.4Hz),4.90(1H,d,J=4.9Hz),4.15(2H,q,J=7.1Hz),4.01-3.95(1H,m),3.92-3.88(2H,m),1.85(6H,s),1.19-1.15(6H,m).

步驟4

2-(4-{(9R)-9-羥基-2-[(2R)-2-羥基丙氧基]-9-(三氟甲基)-9H-茀-4-基}-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙酸

將2-(4-{(9R)-9-羥基-2-[(2R)-2-羥基丙氧基]-9-(三氟甲基)-9H-茀-4-基}-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙酸乙酯(77mg)溶解於乙醇(0.5ml)，添加4N氫氧化鈉水溶液(77μl)，於室溫攪拌整晚。將1N鹽酸(1ml)滴入反應混合液後，以乙酸乙酯(5ml)萃取。所得之有機層依序以水(5ml)、飽和食鹽水(5ml)沖洗，以無水硫酸鈉乾燥。濾除不溶物，餾去濾液之溶劑，獲得標題化合物(63mg)。

¹H-NMR(DMSO-D₆)δ：13.05(1H,br s),8.14(1H,d,J=0.7Hz),7.63(1H,d,J=0.7Hz),7.57(1H,d,J=6.3Hz),7.27-7.24(1H,m),7.23-7.20(2H,m),7.18(1H,s),7.14(1H,br d,J=1.9Hz),6.85(1H,d,J=2.6Hz),4.87(1H,d,J=4.7Hz),3.99-3.93(1H,m),3.91-3.85(2H,m),1.82(3H,s),1.81(3H,s),1.15(3H,d,J=6.5Hz).

步驟5

2-(4-{(9R)-9-羥基-2-[(2R)-2-羥基丙氧基]-9-(三氟甲基)-9H-茀-4-基}-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙醯胺(化合物(3))

將2-(4-{(9R)-9-羥基-2-[(2R)-2-羥基丙氧基]-9-(三氟甲基)-9H-茀-4-基}-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙酸(61mg)溶解於N,N-二甲基甲醯胺(1ml)，添加氯化銨(21mg)、二異丙基乙基胺(112μl)及HATU(73mg)，於室溫攪拌一晚。於反應混合液添加乙酸乙酯(10ml)，依序以1N鹽酸(5ml)沖洗、以水(5ml)沖洗4次、以飽和食鹽水(5ml)沖洗，以無水硫酸鈉乾燥。濾除不溶物，餾去濾液之溶劑。使用矽膠薄層層析(展開溶劑：氯仿/甲醇=9/1)精製殘渣，獲得標題化合物(51mg)。

¹H-NMR(DMSO-D₆)δ：8.09(1H,d,J=0.7Hz),7.68(1H,d,J=0.7Hz),7.60-7.58(1H,m),7.36-7.34(1H,m),7.27-7.23(3H,m),7.21(1H,s),7.15(1H,br d,J=1.8Hz),6.97(1H,s),6.89(1H,d,J=2.4Hz),4.90(1H,d,J=4.6Hz),4.02-3.95(1H,m),3.92-3.85(2H,m),1.80(3H,s),1.79(3H,s),1.17(3H,d,J=6.2Hz).

(化合物(A)、(B)、(C)、及(D)之合成)

下述式所示之化合物(A)、化合物(B)、化合物(C)及化合物(D)係依據國際公開第2010/041748號所記載之製造方法，分別以光學活性體獲得。

2-(4-{(9R)-9-羥基-2-[2-(3-羥基金剛烷-1-基)乙氧基]-9-(三氟甲基)-9H-茀-4-基}-1H-吡唑-1-基)乙醯胺

(9R)-2-(2-羥基-2-甲基丙氧基)-4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-9-(三氟甲基)-9H-茀-9-醇

(9R)-4-[1-(2-羥基乙基)-1H-吡唑-4-基]-2-(2-羥基-2-甲基丙氧基)-9-(三氟甲基)-9H-茀-9-醇

2-{4-[(9R)-2-氟-9-羥基-9-(三氟甲基)-9H-茀-4-基]-1H-吡唑-1-基}-2-甲基丙醯胺

本發明之製劑例，可舉例如下述製劑。然而，本發明不受限於該等製劑例。

製劑例1(膠囊之製造)

1)實施例1之化合物(化合物(2)) 30mg

將1)、2)、3)及4)混合且填充於明膠膠囊。

製劑例2(錠劑之製造)

將1)、2)、3)之總量及30g之4)使用水捏合，真空乾燥後，進行整粒。於該整粒末混合14g之4)及1g之5)，藉由打錠機打錠。如此獲得每1錠含有實施例1之化合物(化合物(2))10mg之錠劑1000錠。

試驗例1：試管內(in vitro)之PDHK活性抑制作用

PDHK活性抑制作用係藉由在被驗化合物存在下，進行激酶反應，然後測定殘留之PDH活性而間接評估。

(PDHK1活性抑制作用)

為人類PDHK1(hPDHK1，Genbank寄存編號L42450.1)時，藉由聚合酶連鎖反應(PCR)將編碼該蛋白質之1.3kbp斷片(fragment)從人類肝cDNA分離。製作藉由PCR在N末端附加有FLAG-Tag序列之修飾hPDHK1 cDNA，選殖於載體(pET17b-Novagen公司)。將重組建構體轉形至大腸桿菌(DH5α-TOYOBO公司)內。鑑定重組殖株，將質體DNA分 離，分析DNA序列。將具有預定核酸序列之1純株選作表現作業用。

為了hPDHK1活性表現，將含有修飾hPDHK1cDNA之pET17b載體轉形至大腸桿菌株BL21(DE3)(Novagen公司)內。使大腸桿菌於30℃增殖至達到光學濃度0.6(600nmol/L)為止。藉由添加500μmol/L之異丙基-β-硫代半乳哌喃糖苷(isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside)來誘導蛋白質表現。將大腸桿菌於30℃培養5小時後，藉由離心分離而採集。藉由高壓乳化機使大腸桿菌糊(paste)再懸浮液破碎。藉由FLAG Affinity Gel(Sigma公司)將附有FLAG-Tag之蛋白質分離。

使用20mmol/L之N-(2-羥基乙基)哌-N’-2-乙磺酸-氫氧化鈉(HEPES-NaOH)、500mmol/L之氯化鈉、1%乙二醇、0.1%聚氧基乙烯-聚氧基丙烯嵌段共聚物(Pluronic F-68)(pH8.0)沖洗膠後，使用20mmol/L之HEPES-NaOH、100μg/mL之FLAG胜肽、500mmol/L之氯化鈉、1%乙二醇、0.1% Pluronic F-68(pH8.0)溶析結合蛋白質。

將含有附有FLAG-Tag之蛋白質之溶析流份(fraction)匯集，對20mmol/L之HEPES-NaOH、150mmol/L之氯化鈉、0.5mmol/L之乙二胺四乙酸(EDTA)、1%乙二醇、0.1% Pluronic F-68(pH8.0)進行透析，保存於-80℃。分析時，hPDHK1之酵素濃度係設定成顯示高於90%的PDH活性抑制之最小濃度。

在緩衝液(50mmol/L之3-(N-嗎啉基)丙磺酸 (pH7.0)、20mmol/L之磷酸氫二鉀、60mmol/L之氯化鉀、2mmol/L之氯化鎂、0.4mmol/L之EDTA、0.2% Pluronic F-68、2mmol/L之二硫蘇糖醇)中，混合0.05U/mL之PDH(豬心臟PDH複合體，Sigma公司P7032)及1.0μg/mL之hPDHK1，於4℃培養一晚，調製PDH/hPDHK1複合體。

被驗化合物係以二甲基亞碸(DMSO)稀釋。添加PDH/hPDHK1複合體20μL、被驗化合物1.5μL及3.53μmol/L之ATP(以緩衝液稀釋)8.5μL於96孔Half Area UV穿透微量盤(Corning公司3679)中，於室溫進行PDHK反應45分鐘。於對照孔中添加1.5μL之DMSO以取代被驗化合物。又，於用以測定PDH反應之最大速度之空白(blank)孔中添加1.5μL之DMSO以取代被驗化合物，並且將hPDHK1除外。

接著，添加10μL之基質(5mmol/L之丙酮酸鈉、5mmol/L之輔酶A、12mmol/L之NAD、5mmol/L之焦磷酸噻胺，以緩衝液稀釋)，於室溫培養90分鐘，測定殘留PDH活性。

使用微量盤分析儀測定PDH反應前後之340nm之吸光度，以檢測藉由PDH反應所產生之NADH。被驗化合物之hPDHK1抑制率(%)係由式[{(被驗化合物之PDH活性-對照之PDH活性)/空白之PDH活性-對照之PDH活性)}×100]所算出。IC₅₀值係由夾住hPDHK1抑制率50%之2點之被驗化合物濃度所算出。

使用化合物(2)作為被驗化合物時所得之結果表示於 以下表1。

(PDHK2活性抑制作用)

為人類PDHK2(hPDHK2，Genbank寄存編號BC040478.1)時，以hPDHK2 cDNA殖株(pReceiver-M01/PDK2-GeneCopoeia公司)為基礎，製作藉由PCR在N末端附加有FLAG-Tag序列之修飾hPDHK2 cDNA，選殖於載體(pET17b-Novagen公司)。將重組建構體轉形至大腸桿菌(DH5α-TOYOBO公司)內。鑑定重組殖株，將質體DNA分離，分析DNA序列。將具有預定核酸序列之1純株選作表現作業用。

為了hPDHK2活性表現，將含有修飾hPDHK2 cDNA之pET17b載體轉形至大腸桿菌株BL21(DE3)(Novagen公司)內。使大腸桿菌於30℃增殖至達到光學濃度0.6(600nmol/L)為止。藉由添加500μmol/L之異丙基-β-硫代半乳哌喃糖苷來誘導蛋白質表現。將大腸桿菌於30℃培養5小時後，藉由離心分離而採集。藉由高壓乳化機使大腸桿菌糊再懸浮液破碎。藉由FLAG Affinity Gel將附有FLAG-Tag之蛋白質分離。使用20mmol/L之HEPES-NaOH、500mmol/L之氯化鈉、1%乙二醇、0.1% Pluronic F-68(pH8.0)沖洗膠後，使用20mmol/L之HEPES-NaOH、100μg/mL之FLAG胜肽、500mmol/L之氯化鈉、1%乙二醇、0.1% Pluronic F-68(pH8.0)溶析結合蛋白質。將含有附有FLAG-Tag之蛋白質之溶析流份匯集，對20mmol/L之HEPES-NaOH、150mmol/L之氯化鈉、0.5mmol/L之EDTA、1%乙二醇、0.1% Pluronic F-68(pH8.0)透析，保存於-80℃。分析時，將hPDHK2之酵素濃度設定成顯示高於90%的PDH活性抑制之最小濃度。

在緩衝液(50mmol/L之3-(N-嗎啉基)丙磺酸(pH7.0)、20mmol/L之磷酸氫二鉀、60mmol/L之氯化鉀、2mmol/L之氯化鎂、0.4mmol/L之EDTA、0.2% Pluronic F-68、2mmol/L之二硫蘇糖醇)中，混合0.05U/mL之PDH及0.8μg/mL之hPDHK2，於4℃培養一晚，調製PDH/hPDHK2複合體。被驗化合物係以DMSO稀釋。添加PDH/hPDHK2複合體20μL、被驗化合物1.5μL及3.53μmol/L之ATP(以緩衝液稀釋)8.5μL於96孔Half Area UV穿透微量盤中，於室溫進行PDHK反應45分鐘。對照孔中添加1.5μL之DMSO以取代被驗化合物。又，用以測定PDH反應之最大速度之空白孔中添加1.5μL之DMSO以取代化合物，且將hPDHK2除外。接著，添加10μL之基質(5mmol/L之丙酮酸鈉、5mmol/L之輔酶A、12mmol/L之NAD、5mmol/L之焦磷酸噻胺，以緩衝液稀釋)，於室溫培養90分鐘，測定殘留PDH活性。使用微量盤分析儀測定PDH反應前後之340nm之吸光度，以檢測藉由PDH反應所產生之NADH。被驗化合物之hPDHK2抑制率(%)係由式[{(被驗化合物之PDH活性-對照之PDH活性)/空白之PDH活性-對照之PDH活性)}×100]所算出。IC₅₀值係由夾住hPDHK2抑制率50%之2點之被驗化合物濃度所算出。

使用化合物(2)、化合物(3)、化合物(A)、化合物(B)、 化合物(C)及化合物(D)作為被驗化合物時所得之結果表示於以下表1及表2。

試驗例2：活體外(ex vivo)PDH活化試驗

(試驗方法)

評估投予有被驗化合物之動物之組織的PDH活化作用。經由對碘硝基四唑紫(p-iodonitrotetrazolium violet；INT)共軛系檢測NADH生成，藉此測定PDH活性。

將正常雄性Sprague-Dawley大鼠隨機分群為介質群或被驗化合物群。對大鼠經口投予介質(0.5%甲基纖維素水溶液，5mL/kg)或被驗化合物。投予後，在5或20小時後， 腹腔內投予戊巴比妥鈉60mg/kg而施以麻醉，摘出肝切片及副睾丸上脂肪組織。

於摘出之肝切片迅速添加濕重量之9倍容積之冰冷均勻化緩衝液(0.25mol/L之蔗糖、5mmol/L之參(羥基甲基)胺基甲烷鹽酸鹽(pH7.5)、2mmol/L之EDTA)，使用POLYTRON均質機進行均勻化。將均質物以600×g、4℃、10分鐘離心並回收上清液。將上清液1mL以16000×g、4℃、10分鐘離心而獲得沉澱。將該沉澱再懸浮於均勻化緩衝液1mL，以同樣方式離心並沖洗沉澱。將該沉澱作為肝粒腺體流份，使用液態氮凍結後，保存於-80℃。

於摘出之脂肪組織迅速添加濕重量之3倍容積之冰冷均勻化緩衝液，使用POLYTRON均質機進行均勻化。將均質物以600×g、4℃、10分鐘離心並回收上清液。將上清液總量以16000×g、4℃、10分鐘離心而獲得沉澱。將該沉澱再懸浮於均勻化緩衝液1mL，以同樣方式離心並沖洗沉澱。將該沉澱作為脂肪組織粒腺體流份，使用液態氮凍結後，保存於-80℃。

將粒腺體流份解凍，並懸浮於試樣緩衝液(0.25mol/L之蔗糖、20mmol/L之參(羥基甲基)胺基甲烷鹽酸鹽(pH7.5)、50mmol/L之氯化鉀、1mL/L之4-(1,1,3,3-四甲基丁基)苯基-聚乙二醇(Triton X-100))。PDH活性係測定活性型PDH活性(PDHa活性)與總PDH活性(PDHt活性)之2種。為了測定PDHt活性，等量混合粒腺體懸浮液與活化緩衝液(0.25mol/L之蔗糖、20mmol/L之參(羥基甲基)胺基甲烷鹽酸鹽 (pH7.5)、50mmol/L之氯化鉀、1mL/L之Triton X-100、4mmol/L之氯化鈣、40mmol/L之氯化鎂、10mmol/L之二氯乙酸鈉)，於37℃培養10分鐘。將經試樣緩衝液稀釋之粒腺體懸浮液40μL作為活性測定用及空白測定用而分別添加於96孔微量盤。於其中添加180μL之反應混合液(0.056mmol/L之磷酸鉀緩衝液(pH7.5)、5.6mmol/L之DL-肉鹼(DL-carnitine)、2.8mmol/L之NAD、0.22mmol/L之焦磷酸噻胺、0.11mmol/L之輔酶A、1.1mL/L之Triton X-100、1.1mmol/L之氯化鎂、1.1g/L之牛血清白蛋白、0.67mmol/L之INT、7.2μmol/L之甲基啡硫酸甲酯(phenazine methosulfate)、28mmol/L之草醯胺酸鈉)。於活性測定用添加50mmol/L之丙酮酸鈉20μL，於空白測定用添加精製水20μL，在室溫、遮光下陪養。使用微量盤分析儀來經時測定起因於最終電子受體之INT之還原之500至750nm之吸光度並算出吸光度變化。從活性測定孔之吸光度變化減去空白孔之吸光度變化，作為PDH活性。算出PDHa活性對PDHt活性之百分率，作為PDH活化之指標。

將使用化合物(2)作為被驗化合物時所得之結果表示於表3。

將使用化合物(3)作為被驗化合物時所得之結果表示於表4。

將使用化合物(A)、化合物(B)、化合物(C)及化合物(D)作為被驗化合物時所得之結果表示於表5。

試驗例3：ZDF大鼠之對於重複投予被驗化合物 之HbA1c之效果

(試驗方法)

將供給精製飼料(5.9%fat diet，Oriental酵母工業)之2型糖尿病模式Zucker Diabetic Fatty大鼠(雄，7週歲，日本Charles River)以使血糖值、血漿中胰島素濃度、HbA1c及體重無差異之方式分群為介質群及被驗化合物群。對大鼠在暗期3小時前1天1次重複經口投予被驗化合物(1mg/kg/5mL)。對介質群大鼠以同樣方式經口投予0.5%甲基纖維素水溶液。投予第27天從尾靜脈採血，測定HbA1c(%)。統計顯著性係藉由Dunnett法檢定且危險率p<0.05作為顯著。

將使用化合物(2)作為被驗化合物時所得之結果表示於以下表6。

試驗例4：hERG(human Ether-a-go-go Related Gene)全細胞膜片箝試驗

(試驗方法)

使用Human ether-a-go-go related gene(hERG)導入HEK293細胞(Cytomyx Limited)，藉由全細胞膜片箝(whole-cell patch clamp)法來檢討對hERG電流造成之影響。hERG導入HEK293細胞係使用CO₂培養器(BNA-111，TABAI ESPEC股份有限公司)，在溫度37℃、二氧化碳濃度5%、飽和濕度之設定條件下繼代培養。培養容器係使用Collagen Type I Coated 75cm²燒瓶(4123-010，旭Techno Glass股份有限公司)及Collagen Type I Coated 35mm培養皿(4000-010，旭Techno Glass股份有限公司)。培養液係使用添加有10%FCS(胎牛血清(Fetal calf serum)，BioWest公司)、1%MEM非必需胺基酸溶液(MEM Non-Essential Amino Acids Solution；NEAA，Invitrogen股份有限公司)之E-MEM(伊格爾氏基本成分培養基；Eagle Minimum Essential Medium(Earle’s Salts，日研生物醫學研究所股份有限公司))。於其中以成為400μg/mL之濃度之方式添加用以篩選hERG基因表現細胞之geneticin。作為測定用細胞，在hERG電流測定之4至7天前，於35mm培養皿播種3×10⁴個hERG導入HEK293細胞。製作成測定用之培養皿內係使用於上述培養液不添加geneticin(Invitrogen股份有限公司)。

各化合物之評估最高濃度係由標準細胞外液(NaCl：140mmol/L、KCl：2.5mmol/L、MgCl₂：2mmol/L、CaCl₂：2mmol/L、HEPES：10mmol/L、葡萄糖：10mmol/L(使用Tris-base調整為pH7.4))中析出之無法確認之最高濃度設定。就施用方法而言，從接近(約2mm)細胞之先端徑約 0.25mm之Y-tube噴出各施用液而施用於細胞。噴出速度係設為約0.4mL/min。

實驗係於室溫、相位差顯微鏡下進行。將播種有細胞之35mm培養皿設置於測定裝置，持續藉由Y-tube對細胞供給標準細胞外液。測定用玻璃電極內係填充有細胞內液(葡萄糖酸鉀：130mmol/L、KCl：20mmol/L、MgCl₂：1mmol/L、ATP-Mg：5mmol/L、EGTA：3.5mmol/L、HEPES：10mmol/L(使用Tris-base調整為pH7.2))。對細胞施用慣用全細胞膜片箝法(conventional whole cell patch clamp method)，將保持電位設為-80mV。在電位固定下藉由膜片箝用增輻器(AXOPATCH-200B，Axon Instruments,Inc.)增幅全細胞電流，使用數據取得解析軟體(pCLAMP 9.2，Axon Instruments,Inc.)將數據輸入電腦(IMC-P642400，Intermedical Co.,Ltd.)。

hERG電流測定係以下述2階段實施。再者，任一情況下皆施加指令電位(command potential)(保持電位-80mV，prepulse +20mV，1.5秒，test-pulse -50mV，1.5秒)誘發hERG電流。

步驟(1)：以0.1Hz施加2分鐘上述指令電位。

步驟(2)：於上述指令電位施行pCLAMP 9.2之P/3 subtraction，除去漏(leak)電流，將此重複3次，將其平均作為hERG電流。

步驟(1)後繼續進行步驟(2)(約3分鐘)，將步驟(2)之方法所得之hERG電流之試驗脈衝(test-pulse)中之尾(tail)電流之最大值作為hERG電流值。之後，直到實驗結束為 止重複地交互進行(1)、(2)之操作，測定hERG電流值。

記錄3次安定的hERG電流值(約10分鐘)後，將標準細胞外液瞬時地交換成各施用液。施用液灌流中同樣測定3次hERG電流值(約10分鐘)，將第3次測定所得之電流值作為施用液灌流後之hERG電流值。

數據在各細胞中，轉換成將施用液灌流前約10分鐘所記錄之3次hERG電流值之平均值(Before值)作為100%之相對值。針對2個細胞測定之，算出其平均值並作為相對電流(Relative current)(%)。

相對電流(%)=100×A÷B

A：施用液灌流後之hERG電流值

B：施用液灌流前約10分鐘所記錄之3次hERG電流值之平均值(Before值)

又，依據下述式算出對DMSO群之抑制率。

抑制率(%)=100-(C÷D)×100

C：各被驗化合物群之相對電流(%)之平均值

D：DMSO群之相對電流(%)之平均值

將使用化合物(2)及化合物(3)作為被驗化合物時所得之結果表示於以下之表7。

將使用化合物(A)、化合物(B)、化合物(C)及化合物(D)作為被驗化合物時所得之結果表示於以下之表8。

a)：各化合物之評估最高濃度係由標準細胞外液中析出之無法確認之最高濃度設定。

a)：各化合物之評估最高濃度係由標準細胞外液中析出之無法確認之最高濃度設定。

試驗例5：肝微粒體(microsome)中之代謝安定性試驗

(試驗方法)

將人類肝微粒體(Xenotech公司製，H0620，最終濃度(稀釋後)，0.2mg蛋白質/mL)懸浮於100mM磷酸鉀緩衝液(pH7.4，含有β-菸鹼醯胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(nicotinamide adenine dinucleotide phosphate)：1.3mM、D-葡萄糖-6-磷酸：3.3mM、氯化鎂：3.3mM、葡萄糖-6-磷酸脫氫酶(phosphate dehydrogenase)：0.45U/mL)，進一步與經MeCN/DMSO(95/5)溶解之被驗物質(終濃度5μM)混合。將混合液於37℃培養10分鐘及60分鐘後，添加含有甲酸(最終濃度0.1%)之乙腈，使用高效液相層析/質譜分析(LC/MS)(Waters公司製，LC：Acquity UPLC，MS：SQ Detector或TQ Detector)測定離心分離之上清液中之被驗物質(未變化體)。由所得之測定值算出殘留率(%)。

將使用化合物(2)及化合物(3)作為被驗物質時所得之結果表示於以下之表9。

將使用化合物(A)、化合物(B)、化合物(C)及化合物(D)作為被驗化合物時所得之結果表示於以下之表10。

(產業上之可利用性)

本發明化合物或其製藥上可容許之鹽係具有PDHK抑制作用，故有用於作為糖尿病(1型糖尿病、2型糖尿病等)、胰島素抵抗性症候群、代謝症候群、高血糖症、高乳酸血症、糖尿病併發症(糖尿病性神經病變、糖尿病性視網膜病、糖尿病性腎病、白內障等)、心衰竭(急性心衰竭、慢性心衰竭)、心肌症、心肌缺血、心肌梗塞、狹心症、異常血脂症、動脈粥狀性硬化症、末梢動脈疾病、間歇性跛行、慢性阻塞性肺臟疾病、腦缺血、腦中風、粒線體病、粒線體腦肌病、癌、肺性高血壓及阿茲海默症之預防或治療用之醫藥有效成分。

Claims (15)

1. 一種式[I]所示之化合物或其製藥上可容許之鹽：
2. 如申請專利範圍第1項所述之化合物或其製藥上可容許之鹽，其係下述式所示化合物或其製藥上可容許之鹽：
3. 如申請專利範圍第1項所述之化合物，其係下述式所示化合物：
4. 如申請專利範圍第1項所述之化合物或其製藥上可容許之鹽，其係下述式所示化合物或其製藥上可容許之鹽：
5. 如申請專利範圍第1項所述之化合物，其係下述式所示化合物：
6. 一種醫藥組成物，其含有申請專利範圍第1項至第5項中任一項所述之化合物或其製藥上可容許之鹽、及製藥上可容許之載體。
7. 一種PDHK抑制劑，其含有申請專利範圍第1項至第5項中任一項所述之化合物或其製藥上可容許之鹽。
8. 一種PDHK1抑制劑，其含有申請專利範圍第1項至第5項中任一項所述之化合物或其製藥上可容許之鹽。
9. 一種PDHK2抑制劑，其含有申請專利範圍第1項至第5項中任一項所述之化合物或其製藥上可容許之鹽。
10. 一種降血糖劑，其含有申請專利範圍第1項至第5項中任一項所述之化合物或其製藥上可容許之鹽。
11. 一種降乳酸劑，其含有申請專利範圍第1項至第5項中任一項所述之化合物或其製藥上可容許之鹽。
12. 一種下述疾病之預防或治療劑，其含有申請專利範圍第1項至第5項中任一項所述之化合物或其製藥上可容許之鹽，其中，該疾病係糖尿病、胰島素抵抗性症候群、代謝症候群、高血糖症、高乳酸血症、糖尿病併發症、 心衰竭、心肌症、心肌缺血症、心肌梗塞、狹心症、異常血脂症、動脈粥狀性硬化症、末梢動脈疾病、間歇性跛行、慢性阻塞性肺臟疾病、腦缺血、腦中風、粒線體病、粒線體腦肌病、癌及肺性高血壓。
13. 如申請專利範圍第12項所述之預防或治療劑，其中，糖尿病係1型糖尿病或2型糖尿病。
14. 如申請專利範圍第12項所述之預防或治療劑，其中，糖尿病併發症係選自由糖尿病性神經病變、糖尿病性視網膜病、糖尿病性腎病及白內障所成之群組。
15. 如申請專利範圍第12項所述之預防或治療劑，其中，心衰竭係急性心衰竭或慢性心衰竭。