CN105012305A - 拉米夫定及其药用盐治疗老年性黄斑部病变的用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及拉米夫定或其药用盐治疗老年性黄斑部病变的用途，本研究发现拉米夫定眼内给药，能控制发炎体(inflammasome)蛋白质途径以控制脉络膜新生血管，有助预防和治疗老年性黄斑部病变。

Description

拉米夫定及其药用盐治疗老年性黄斑部病变的用途

技术领域

本发明涉及拉米夫定及其药用盐的新用途，该新用途涉及治疗的眼部疾病为老年性黄斑部病变。

背景技术

黄斑部病变是眼睛黄斑区视网膜色素上皮增殖、萎缩、脱离，以及视网膜下的新生血管不健康，血管膜容易破裂、出血及形成瘢痕，严重的视力丧失。老年性黄斑变性分为干性和湿性两种。干性老年性黄斑变性多发生于50岁以上，视力常为缓慢下降或视物变形，通常进展缓慢，但是可能发展为更为严重的湿性老年黄斑病变(AMD)。湿性的老年黄斑病变多发生于60岁以上的老年人，常为一眼突然发生视力障碍，另一眼正常或处于病变早期，几年后也发生同样病变。湿性是较为严重的情况，能够导致2/3的中心视力的丧失。湿性致盲的主要原因是脉络膜新生血管(CNV)的形成，它可以导致血管渗漏。这个过程迅速发展并能导致相应区域视网膜功能的完全丧失，最终导致视觉损伤甚至致盲。

目前，治疗老年性黄斑部病变的药物治疗法有以下几种(姚慧敏.年龄相关性黄斑变性的发病机制及药物治疗进展[J].中国实验方剂学杂志，2013,19(10)：370.)(高瑛，辛敏行，向华.老年黄斑变性发病机制及相关药物研究进展[J].中国医药导刊，2009，11(2)：244.)哌加他尼钠(Pegaptanib sodium)。是anti-VEGF适配子，以28个核苷酸的核糖核酸(RNA)为主链，与两个聚乙二醇链共价相连，可特定地与细胞外VEGF结合，阻碍其与VEGFR-2结合，抑制新生血管生成,但是经玻璃体内注射哌加他尼钠的给药途径有引起感染、无菌性眼内炎、视网膜脱落及白内障的风险。

阿奈可他醋酸酯(Anecortave acetate)。采用56°钝端弯管在眼球后近巩膜处注射的给药方式，在黄斑形成药物储库，缓慢释放，一次注射可维持6个月的有效浓度，这种新型的给药方式避免了玻璃体注射的缺陷，减少给药次数，降低了感染的风险，也方便于患者。对于一只眼患AMD的病人，阿奈可他可以有效预防另一只眼患AMD的风险，并且可以降低干性AMD发展成湿性AMD的风险，但对湿性AMD效果不好。

倍伐株单抗(Bevacizumab，Avastin)。可以缓解CNV的泄漏并且改善患者的视敏度，对视网膜的毒副作用小。对于不能接受玻璃体注射方式给药及不符合维替泊芬PDT治疗范围的病人，不妨使用倍伐株单抗作为补救疗法。

雷尼株单抗。于2006年在美国上市，该药属于anti-VEGF抗体，使用范围广，对湿性AMD的所有类型均有效，不仅能维持大多数患者视力水平的稳定，还能使有些个体的视力获得改善，安全性和耐受性在接受范围内。但是每剂近1600美元价格限制了推广。

干扰素。尽管实验室结果和早期临床研究结果提示干扰素对黄斑下新生血管有治疗作用，但一项多国家多眼科中心参与的临床双盲、随机、匹配、对照实验表明干扰素对治疗由AMD引起的CNV不仅无效，反而有使视力恶化的趋势。

皮质类固醇药物。此类药物通过改变细胞外基质的降解而抑制新生血管形成。

国内报告使用该类药物治疗AMD出现玻璃体混浊、高眼压等并发症，也有发生感染性眼内炎的可能。大多学者认为，单独使用糖皮质激素的抗血管生长效应对比其抗炎作用是微乎其微的，单独使用引发的副作用超过了其有效性。

抗氧化剂和锌剂。美国多中心“年龄相关性眼病研究”(Age-related eyedisease study，AREDS)表明，同时补充锌和抗氧化剂能使中、晚期AMD病情进展降低25％，视力丧失减少19％，但不能减缓早期AMD的进展。

拉米夫定结构如下：

拉米夫定是核苷类似物，抗病毒药物，对病毒DNA链的合成和延长有竞争性抑制作用。其英文名称为Lamivudine，化学名为(2R-顺式)-4-氨基-1-(2-羟甲基-1,3-氧硫杂环戊-5-基)-1H-嘧啶-2-酮，又称3-TC。拉米夫定对体外及实验性感染动物体内的乙型肝炎病毒(HBV)有较强的抑制作用。拉米夫定可在HBV感染细胞和正常细胞内代谢生成拉米夫定三磷酸盐，它是拉米夫定的活性形式，既是HBV聚合酶的抑制剂，亦是此聚合酶的底物。拉米夫定三磷酸盐掺入到病毒DNA链中，阻断病毒DNA的合成。拉米夫定三磷酸盐不干扰正常细胞脱氧核苷的代谢，它对哺乳动物DNA聚合酶α和β的抑制作用微弱，对哺乳动物细胞DNA含量几乎无影响。拉米夫定对线粒体的结构、DNA含量及功能无明显的毒性。对大多数乙型肝炎患者的血清HBV DNA检测结果表明，拉米夫定能迅速抑制HBV复制，其抑制作用持续于整个治疗过程。同时使血清转氨酶降至正常，长期应用可显著改善肝脏坏死炎症性改变并减轻或阻止肝脏纤维化的进展。

本发明人在研究核苷类似物拉米夫定时意外的发现，其能控制发炎体(inflammasome)蛋白质途径，控制脉络膜新生血管，并发现其可以预防和治疗黄斑部病变。

发明内容

本发明提供拉米夫定或其可药用盐在制备治疗老年性黄斑部病变的药物中的应用。

本发明所述药物是含有有效剂量的拉米夫定或其药用盐的药物制剂。

本发明所述拉米夫定可药用盐选自：拉米夫定琥珀酸盐、拉米夫定L-酒石酸盐、拉米夫定草酸盐、拉米夫定糖二酸盐、拉米夫定柠檬酸盐、拉米夫定水杨酸盐、拉米夫定磷酸盐，拉米夫定富马酸盐。

本发明所述药物制剂选自：眼内给药的药物制剂，贴剂，片剂，胶囊，注射剂。

本发明所述眼内给药的药物制剂选自：滴眼剂，眼膏。

本发明所述眼内给药的药物制剂，单位剂量含有拉米夫定或其可药用盐为1-50000μg。

优选的，本发明所述眼内给药的药物制剂，单位剂量含有拉米夫定或其可药用盐为500-10000μg。更优选的，本发明所述眼内给药的药物制剂，单位剂量含有拉米夫定或其可药用盐为1000-5000μg。

本发明所述的药物制剂，是根据药剂学常规技术制备的，优选眼内给药的制剂，如其可以被配制成等渗溶液剂，软膏剂，或凝胶剂等任何一种适合眼内给药的剂型。

本发明意外的发现拉米夫定可以控制发炎体(inflammasome)蛋白质途径以控制脉络膜新生血管，有助预防和治疗黄斑部病变。拉米夫定或其可药用盐在豚鼠外眼区域充血以及眼水肿实验中未观察到明显的不良反应以及其它直观的不良反应，表明拉米夫定及其可药用盐用于眼用制剂的动物实验是安全的。

以下通过实验数据进一步说明本发明的有益效果：

药效实验如下：

实验动物

5-6周龄的小鼠140只，体重24.5-31g，平均体重(26.10±1.66)g，雌雄各半。

实验药品和试剂

拉米夫定滴眼液，拉米夫定富马酸盐滴眼液，拉米夫定眼用软膏，拉米夫定琥珀酸眼用软膏，拉米夫定眼用凝胶剂，拉米夫定磷酸盐眼用凝胶剂,市售雷尼株单抗。

实验方法

小鼠随机分成7个组，即本发明的6个实施例组，雷尼株单抗治疗对照组。分别进行对激光诱导所致脉络膜新生血管的药理作用试验和对眼内血管增生的抑制作用试验。每组小鼠中随机取14只进行激光诱导络膜新生血管，激光光凝后，除空白组外向小鼠眼球注入1微升上述各组药物。随后对小鼠进行荧光素眼底血管造影，络膜新生血管的形成根据有无荧光渗漏作为判断依据和组织学检查。结果如下：

表1光凝后5天络膜新生血管的发生率

表2光凝后10天后络膜新生血管的发生率

激光光凝后5天和10天的荧光素眼底血管造影，每只眼中6点光凝斑形成络膜新生血管的情况，分别见上表。结果显示，与光凝后5天相比，光凝后10天的空白组出现2点新的荧光渗漏，而实施例组和累尼珠单抗则无新的有荧光渗漏的光凝斑出现，且原有荧光渗漏的光凝斑渗漏有部分消失。表明拉米夫定及其盐对该病有效的治疗作用，且比目前最佳的雷尼株单抗治疗药物效果还好。

药物对眼内血管增生的抑制作用

取雄性大鼠40只，随机分成8组，实施例6组，空白组，雷尼株单抗组。各组动物数均为5只。每只大鼠随机选取一眼为实验眼，另一眼为对照眼。除空白组外各组均眼内注射10微克药物。

用激光照射大鼠眼球，光凝后有气泡产生或伴有轻度出血(有时伴有轻响)标志击破Bruch膜，记为有效点。激光光凝后，向大鼠右眼眼球注入各组药物。光凝后10天，观察血管增生面积并进行组织学检查。结果如下：

表3各组平均脉络膜血管增生面积(单位：mm2n＝5)

组别	视网膜	脉络膜
			实施例1	5.15	2.11
实施例2	5.01	2.21
			实施例3	5.11	2.18
实施例4	5.06	2.25
			实施例5	5.01	2.28
实施例6	5.17	2.28
			雷尼珠单抗	5.10	2.44
空白	5.12	3.18

上表的结果表明，空白组的脉络膜发生血管增生面积较大，其余组不同限度的缩小了血管增生面积。

组织学检查的结果为，光镜下空白组光凝斑处可见Bruch膜被击穿，外层视网膜及脉络膜结构紊乱，视网膜色素上皮细胞、脉络膜新生血管增生。各个实施例组与空白相比，明显减少脉络膜的新生血管增生且未见局限性浆液性视网膜脱离和炎性细胞浸润。组织学检查表明，拉米夫定及其药用盐可有效抑制眼内血管增生，从而治疗老年黄斑部病变。

安全性实验如下：

眼用制剂主要的不良反应是引起外眼区域充血以及引起眼水肿。将实施例1，实施例2，实施例3，实施例4，实施例5，实施例6，雷尼珠单抗与0.2％花生四烯酸钠溶液50微升一次滴注到豚鼠眼内，以诱导眼粘膜充血和水肿做阳性对比。参照表4充血度等级和表5水肿度等级，选用5-6年的健康豚鼠100只，体重1-1.5kg，雌雄各半，观察不良反应结果如表6和表7所示。

表4充血度等级

充血级别	分数
		未充血	0
角膜周血管轻微扩张	1
		角膜周血管明显扩张	2
角膜周血管显著扩张	3
		角膜周血管充血引起通红	4

表5水肿度等级

水肿度	分数
		无肿胀	0
轻微等级水肿	1
		比正常稍微肿胀	2
显著肿胀	3
		肿胀并低垂至眼睑上	4
肿胀引起的外翻	5

表6充血实验结果(n＝5)

表7水肿度结果(n＝5)

从表6充血实验结果可清楚的知道，拉米夫定及其可药用盐对于不会引起豚鼠外眼区域充血，从表7水肿度结果可知，拉米夫定及其可药用盐也不会引起眼水中，在实验过程中，未发现豚鼠眼睛其它直观的异常现象，表明拉米夫定及其可药用盐用于眼用制剂的动物实验是安全的。

具体实施方式

下面具体实施例对本发明作进一步详细说明，但本发明不仅局限以下实施例。

实施例1

拉米夫定0.005％，0.01％的吐温80，聚卡波非0.5％，乙二胺四乙酸二钠0.2％，磷酸二氢钠0.6％，磷酸氢二钠0.3％，苯扎氯铵0.01％，余量为水；

制备方法如下：

1)：按照处方量精密称量拉米夫定、苯扎氯铵、吐温80至烧杯底部，再加入少量的水，水浴搅拌约30min。

2)：称取处方量的乙二胺四乙酸二钠、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠等成分，搅拌溶解后加入注射用水，得到缓冲液；

3)：将聚卡波菲缓慢撒入注射用水中，充分搅拌溶胀；

4)：将步骤1,2,3药液混合，充分搅拌；测定pH值和渗透压，黏度，灌装至低密度

聚乙烯瓶中，加塞和拧盖即得拉米夫定滴眼液。

实施例2

取拉米夫定富马酸盐0.007％，其它组分和制备步骤如实施例1，制得拉米夫定富马酸盐滴眼液。

实施例3

取拉米夫定0.005g，置灭菌乳钵中，加灭菌注射用水研成细腻糊状，再分次等量递加黄凡士林至100g，研匀，分装，即得拉米夫定眼用软膏。

实施例4

取拉米夫定琥珀酸0.007g，其余组分和制备步骤同实施例3，.得拉米夫定琥珀酸眼用软膏。

实施例5

拉米夫定0.004％，泊洛沙姆P40717％，泊洛沙姆P1886％，卡波姆0.05％，生理盐水余量。

取卡波姆0.05％，缓慢均匀地分散在量取生理盐水的锥形瓶中，磁力搅拌均匀后加入拉米夫定0.004％，缓慢加入泊洛沙姆P40717％泊洛沙姆P1886％充分搅拌使泊洛沙姆在溶液中分散均匀，避光，4℃下保存至泊洛沙姆完全溶解至溶液澄清，加生理盐水至全量，即得拉米夫定眼用凝胶剂。

实施例6

用拉米夫定磷酸盐0.005％，其它组分和步骤如实施例5，制得拉米夫定磷酸盐眼用凝胶剂。

Claims (8)

1.拉米夫定或其可药用盐在制备治疗老年性黄斑部病变的药物中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述药物是含有有效剂量的拉米夫定或其药用盐的药物制剂。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述拉米夫定可药用盐选自：拉米夫定琥珀酸盐、拉米夫定L-酒石酸盐、拉米夫定草酸盐、拉米夫定糖二酸盐、拉米夫定柠檬酸盐、拉米夫定水杨酸盐、拉米夫定磷酸盐，拉米夫定富马酸盐。

4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述药物制剂选自：眼内给药的药物制剂，贴剂，片剂，胶囊，注射剂。

5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述眼内给药的药物制剂选自：滴眼剂，眼膏。

6.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述眼内给药的药物制剂，单位剂量含有拉米夫定或其可药用盐为1-50000μg。

7.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述眼内给药的药物制剂，单位剂量含有拉米夫定或其可药用盐为500-10000μg。

8.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述眼内给药的药物制剂，单位剂量含有拉米夫定或其可药用盐为1000-5000μg。