CN104995516A - 用于补体因子h相关蛋白质1检测的试剂、试剂盒和方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及用于特异性检测来自受试者的样品中的补体因子H相关蛋白质1（CFHR1）的测定，以及与之相关的试剂盒和试剂。

Description

用于补体因子H相关蛋白质1检测的试剂、试剂盒和方法
本发明涉及用于特异性检测来自对象的样品中的补体因子H相关蛋白质1（CFHR1）的测定，以及与之相关的试剂盒试剂。
补体因子H也称为因子H是含唾液酸糖蛋白，其在补体介导的免疫系统的调节中起不可或缺的作用，所述补体介导的免疫系统涉及微生物防御、免疫复合物处理、程序性细胞死亡和年龄相关性黄斑变性。补体因子H是最佳表征的补体因子H蛋白质家族成员。补体因子H家族由下述成员组成：补体因子H（CFH）、补体因子H相关蛋白质1（CFHR1）、补体因子H相关蛋白质2（CFHR2）、补体因子H相关蛋白质3（CFHR3）、具有同种型4A和4B的补体因子H相关蛋白质4（CFHR4A和CFHR4B）、以及补体因子H相关蛋白质5（CFHR5）。补体因子H相关蛋白质在补体因子H基因下游编码，并且与补体因子H的子结构域共享高度同源性。补体因子H相关蛋白质还共享功能相似性（Jozsi，M.和Zipfel，P.F.，Trend in Immunology 29（2008）380-387）。
补体系统由~40种蛋白质组成，所述~40种蛋白质存在于体液中或者细胞和组织表面上，并且通过三个主要途径以级联样方式活化（Walport，M.J.N.，Engl. J. Med. 344，1058-1066）。替代途径通过中心组分C3的自发水解以低速率连续活化，凝集素途径通过识别微生物碳水化合物的甘露糖结合凝集素或纤维胶原素（ficolins）起始，并且经典途径通过C1q与抗原结合的免疫球蛋白结合而活化。酶促步骤生成补体组分的活性片段，并且触发进一步的扩增。三个途径在C3浓度时合并，所述C3在活化后被切割成C3a和C3b。补体因子H保护宿主细胞免于起因于无限制的补体活化的损伤。补体因子H通过下述来调节自身细胞上的补体活化：具有对因子I介导的C3b切割的辅因子活性，以及针对替代途径C3转化酶C3bBb的衰变加速活性。补体因子H使自身细胞免于补体活化，而不是细菌/病毒。由于补体因子H在补体调节中的中枢作用，存在起于异常CFH活性的许多临床并发症。补体因子H基因中的突变与严重和多样性疾病相关，包括罕见肾病症溶血性尿毒症综合征（HUS）和膜性增生性肾小球肾炎（MPGN）也称为致密沉积物病（DDD）、膜性增生性肾小球肾炎II型或致密沉积物病、以及更频繁的视网膜疾病年龄相关性黄斑变性（AMD）。除其补体调节活性之外，补体因子H还具有多重生理活性，并且1）充当细胞外基质组分，2）与整联蛋白型细胞受体结合，和3）与广泛选择的配体相互作用，例如C反应蛋白、凝血酶敏感蛋白、骨唾液蛋白、骨桥蛋白和肝素。
补体因子H蛋白质家族包含蛋白质CFH、CFHR1、CFHR2、CFHR3、CFHR4A、CFHR4B和CFHR5。
显而易见的是在现有技术中，没有特异性方法可用于血液、血清、血浆、液体（liquor）样品或任何其他体液中的补体因子H相关蛋白质1（CFHR1）的体外检测。本发明的发明人目前已发现且可以建立特异性测定衍生自个体的血液、血清、血浆或液体样品中的CFHR1的方法。
本发明的目的是提供样品中的CFHR1检测的简单和成本有效的操作，例如以便诊断与CFHR1相关的疾病和病症。
全血、血清或血浆是临床常规中最广泛使用的样品来源。帮助可靠检测某种疾病或提供早期预后信息的标记物的鉴定可以导致极大帮助该疾病诊断和管理的方法。尤其重要的是改善某些疾病的早期诊断，因为早期干预可以减少功能残废且改善长期结果。
本发明的目的是研究在体外优选在对象的体液样品中特异性评价CFHR1，即与其他CFH家族成员无交叉反应性的方法。
本发明的发明人已令人惊讶地能够证实使用本发明的试剂盒，特异性检测补体因子H相关蛋白质1（CFHR1）的方法，所述CFHR1是补体因子H家族成员的蛋白质。
本发明的方法特别适合于对象的血液、血清、血浆或液体样品中的CFHR1的体外评价。
所公开的方法和试剂盒可以克服目前已知的可用于评价CFH家族成员的方法的几个问题。
在一个实施方案中，本发明涉及包含下述的试剂盒：
a）能够结合补体因子H R1（CFHR1）蛋白质的第一试剂，和
b）能够结合补体因子H R1（CFHR1）蛋白质的第二试剂，
其中第一试剂和第二试剂与不同且非重叠的表位结合，
并且其中第一试剂和第二试剂两者不都与CFH交叉反应，
并且其中第一试剂和第二试剂两者不都与CFHR2交叉反应，
并且其中第一试剂和第二试剂两者不都与CFHR3交叉反应，
并且其中第一试剂和第二试剂两者不都与CFHR4交叉反应，
并且其中第一试剂和第二试剂两者不都与CFHR5交叉反应，
并且其中一种试剂用可检测标记进行标记，
并且其中另一种试剂能够固定到固相上。
在优选实施方案中，非重叠表位是位于CFHR1的不同结构域中的表位。
惊讶地发现此类试剂盒允许特异性检测来自对象的样品中的CFHR1，如实施例7、8、9和10中所示。特别地，成功使用包含标记的单克隆抗体MAB<CFHR1>M-5.1.5和生物素标记的抗体MAB<CFH/CFHR1>M-L20/3的试剂盒。如实施例中所述，生物素标记的抗体MAB<CFH/CFHR1>M-L20/3能够经由与包被有链霉抗生物素蛋白的磁性颗粒结合而固定到固相上。另外，MAB<CFHR1>M-5.1.5是钌化的，并且可以通过电化学发光进行检测。另外，两种抗体与不同且非重叠的表位结合，因为对应于CHFR1的氨基酸1-143的免疫原（=CHFR1的SCR（短共有重复序列）结构域1-2）用于生成MAB<CFHR1>M-5.1.5，而MAB<CFH/CFHR1>M-L20/3与CFHR1的更C末端部分内，即在CHFR1的SCR结构域3-4-5内的表位结合。
第一试剂和第二试剂应理解为多肽或多肽复合物。
因此，在本发明的试剂盒的一个优选实施方案中，第一试剂与SEQ ID No. 2的氨基酸144 - 330内的表位结合。
因此，在本发明的试剂盒的另一个优选实施方案中，第二试剂与SEQ ID No. 2的氨基酸1-143内的表位结合。
如表1中所示，MAB<CFHR1>M-5.1.5不与CFH交叉反应，但显示与CFHR2交叉反应。另外，表1显示MAB<CFH/CFHR1>M-L20/3与CFH和CFHR5交叉反应，但不与CFHR2交叉反应。
分别缺乏与CFHR2和/或CFH和CFHR5的交叉反应是至关重要的，因为CFH蛋白质家族的这些成员显示与CFHR1的最大结构相似性。
因此，在本发明的试剂盒的另一个优选实施方案中，第一试剂不与CFHR2交叉反应。
在本发明的试剂盒的另一个优选实施方案中，第二试剂不与CFH交叉反应。
在本发明的试剂盒的另一个优选实施方案中，第二试剂不与CFHR5交叉反应。
在本发明的试剂盒的另一个优选实施方案中，第二试剂不与CFH和CFHR5交叉反应。
在试剂盒的一个优选实施方案中，第一试剂与CFH和CFHR5交叉反应，但不与CFHR2、CFHR3和CFHR4交叉反应。
在试剂盒的另一个优选实施方案中，第二试剂与CFHR2交叉反应，但不与CFH、CFHR3、CFHR4和CFHR5交叉反应。
根据本发明，“交叉反应”意指不同于靶蛋白质的所讨论的蛋白质针对检测试剂特别是抗体的结合强度是用靶蛋白质测量的结合强度的至少0,2%，优选至少0,1%。结合强度可以特别通过使用BiaCore应用本发明的实施例的亲和力测试进行测量。如技术人员已知的，如果作为Kd给出，则结合强度越佳/越高，则Kd越低。
CFH在某些体液中是可比较地丰富的，其浓度为CFHR1浓度约10倍。
在本发明中使用的两种试剂可以显示出与CFH家族的其他成员的交叉反应性。然而，在本发明中使用的两种试剂不与CFH家族的相同成员交叉反应，即其中至多一种分别与CFH、CFHR2、CFHR3、CFHR4和CFHR5交叉反应。
因此，在本发明的试剂盒的一个优选实施方案中，第一试剂可以与CFH交叉反应，但不与超过一种其他CFH家族成员交叉反应。
因此，在本发明的试剂盒的另一个优选实施方案中，第一试剂可以与CFHR5交叉反应，但不与超过一种其他CFH家族成员交叉反应。
因此，在本发明的试剂盒的进一步甚至更优选的实施方案中，第一试剂可以与CFHR5和CFH交叉反应，但不与其他CFH家族成员交叉反应。
因此，在本发明的试剂盒的另一个优选实施方案中，第二试剂可以与CFHR2交叉反应，但不与其他CFH家族成员交叉反应。
根据本申请的“CFHR4”涵盖天然存在的变体CFHR4A和CFHR4B。如由本申请的图1可见的，存在CFHR4的两种同种型，即如SEQ ID No. 5中公开的CFHR4A和如SEQ ID No. 6中公开的CFHR4B。CFHR4A和CFHR4B具有相同的N末端序列，但CFHR4B具有更短的C末端部分。编码CFHR4的基因转录物是可变剪接的，并且表达CFHR4的不同变体。存在长度331个氨基酸的编码CFHR4多肽的变体，以及577氨基酸变体。后者被称为“CFHR4A”，而短同种型被称为“CFHR4B”。两种变体均在人肝中表达，而仅短同种型被克隆且表达用于本发明中。两种变体的同源性分析显示SCR结构域1在两种变体中相同的。CFHR4A SCR2-5与CFHR4B SCR2-4几乎相同，仅具有少数氨基酸差异。进一步地，CFHR4B SCR6-9与CFHR4A SCR2-5共享100%同一性（Joszi，Richter，L?schmann等人，European Journal of Human Genetics，2005，13，321-329）。因此，CFHR4A不被克隆且表达或用于交叉反应性测定中，因为结构域组成已经由CFHR4B代表。在实验中，因此使用CFHR4B以便测定与CFHR4的交叉反应性。因此，对于CFHR4B获得的实验结果也应用于变体CFHR4A，并且因此应用于一般而言的CFHR4。
在甚至更优选的实施方案中，第一试剂是抗体，特别是抗体MAB<CFH/CFHR1>M-L20/3。特别地，MAB<CFH/CFHR1>M-L20/3的重链具有SEQ ID No. 41的序列，并且轻链具有SEQ ID No. 43的序列。在进一步优选的实施方案中，使用包含MAB<CFH/CFHR1>M-L20/3的CDR序列的抗体。
在甚至更优选的实施方案中，第一试剂是抗体，特别是抗体MAB<CFHR1>M-5.1.5。特别地，重链具有SEQ ID No. 16的序列。在进一步优选的实施方案中，轻链具有SEQ ID No. 18的序列。在进一步优选的实施方案中，使用包含根据SEQ ID No. 19、SEQ ID No. 20、SEQ ID No. 21、SEQ ID No. 22、和SEQ ID No. 23的MAB<CFHR1>M-5.1.5的CDR序列和氨基酸序列ITS的抗体。
如本文使用的，术语“可检测标记”指能够产生经由直接或间接检测的信号的任何物质。可检测标记因此可以直接或间接检测。对于直接检测，适用于本发明的标记可以选自任何已知的可检测标记物组，如色原、荧光基团、化学发光基团（例如吖啶酯或二氧杂环丁烷）、电化学发光化合物、催化剂、酶、酶底物、染料、荧光染料（例如荧光素、香豆素、罗丹明、噁嗪、试卤灵、花青及其衍生物）、胶体金属和非金属颗粒、以及有机聚合物胶乳颗粒。其他可检测标记的例子是发光金属络合物，例如如用于ECLIA的钌或铕络合物，例如如用于ELISA的酶，和例如如用于RIA的放射性同位素。
间接检测系统包括例如用生物亲和（bioaffine）结合对的第一配偶体标记的检测试剂，例如检测抗体。合适结合对的例子是半抗原或抗原/抗体、生物素或生物素类似物如氨基生物素、亚氨基生物素或脱硫生物素/抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白、糖/凝集素、核酸或核酸类似物/互补核酸、和受体/配体例如类固醇激素受体/类固醇激素。优选的第一结合对成员包含半抗原、抗原和激素。尤其优选的是半抗原如地高辛和生物素及其类似物。此类结合对的第二配偶体例如抗体、链霉抗生物素蛋白等通常是标记的，以允许例如通过如上所述的可检测标记的直接检测。
在优选实施方案中，本发明的试剂盒进一步包含用于执行测量的辅助试剂。
在一个优选实施方案中，本发明的试剂盒进一步包含在其上可以固定试剂的芯片。
本发明的试剂盒的第一试剂和第二试剂与不同且非重叠表位结合。此类表位可以是线性或构象的。第一试剂和第二试剂可以与其CFHR1上的各自表位结合，而不干扰分别的另一种试剂的结合。
本发明首次允许特异性检测对象的样品中的CFHR1。另外，这首次允许诊断CFHR1相关疾病和病症，例如精神分裂症。
在一个实施方案中，本发明涉及用于特异性测量样品中的补体因子H相关蛋白质1（CFHR1）的方法，其包括下述步骤：使样品与能够结合补体因子H相关蛋白质1（CFHR1）的第一试剂，以及能够结合补体因子H相关蛋白质1（CFHR1）的第二试剂接触，从而形成在所述第一试剂、CFHR1和所述第二试剂之间的复合物，和b）测量（a）中形成的复合物，其中第一试剂和第二试剂均与CFHR1结合，并且不都与除CFHR1外的相同CFH家族成员交叉反应。
在进一步的实施方案中，本发明涉及用于检测得自对象的样品中的补体因子H相关蛋白质1（CFHR1）的体外测定，其包含
a）使样品与本发明的试剂盒中任一的试剂接触，
b）将所形成的复合物固定至固相，和
c）检测CFHR1，
其中步骤b）可以在步骤a）之前、在步骤a）之后或与步骤a）同时执行。
在优选实施方案中，在使预包被的固相与样品接触之前，能够与CFHR1结合的一种试剂可以固定至固体支持物，其可以与本发明的试剂盒中任一的其他试剂同时或顺次与固相一起温育。
在进一步的实施方案中，能够与CFHR1结合的一种试剂可以固定至固体支持物，同时使样品与本发明的试剂盒中任一的其他试剂接触。在该实施方案中，将所形成的复合物固定至固相与步骤a）同时发生。
在优选实施方案中，在另一种试剂与样品接触之前，根据步骤a），使与CFH、CFHR2、CFHR3、CFHR4和/或CFHR5具有更少交叉反应性的试剂与样品接触。
在优选实施方案中，在步骤c）中测定CFHR1的量和/或浓度。
当执行本发明的方法时，CFHR1以及如上所述的第一和第二试剂形成复合物，其中第一和第二试剂各自与CFHR1结合。复合物形成可以是通过第一和第二试剂与CFHR1的共价或非共价结合，优选通过非共价结合。因此，根据本发明“所形成的复合物”应理解为包含CFHR1、如上所述的第一和第二试剂的复合物，其中在三种分子之间的结合可以是共价或非共价的。
可以在步骤a）之前，将能够固定到固相上的试剂固定至固相。在使样品与根据本发明的试剂接触前，固定的所形成的复合物将同时形成。
可替代地，所形成的复合物在复合物形成后固定，如实施例7中所述。在实施例7中，所形成的复合物经由非共价结合固定至磁性颗粒，所述磁性颗粒随后使用电极固定到表面上。在该实施方案中，步骤b）在步骤a）之前执行。
一般而言，固定可以直接或间接地，并且通过共价或非共价方式执行。
在优选实施方案中，固定在磁性颗粒上发生。本发明的试剂可以经由共价或非共价结合与此类磁性颗粒结合。在实施例7中，结合经由生物素-链霉抗生物素蛋白结合而发生。磁性颗粒包被有链霉抗生物素蛋白，而抗体是生物素化的。
在优选实施方案中，生物亲和结合对用于固定。合适的结合对的例子是半抗原或抗原/抗体、生物素或生物素类似物如氨基生物素、亚氨基生物素或脱硫生物素/抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白、糖/凝集素、核酸或核酸类似物/互补核酸、和受体/配体例如类固醇激素受体/类固醇激素。优选的第一结合对成员包含半抗原、抗原和激素。尤其优选的是半抗原如地高辛和生物素及其类似物。此类结合对的第二配偶体例如抗体、链霉抗生物素蛋白等通常与固相结合，或共价附着至此类固相例如磁珠。
在一些实施方案中，固相是测试条、芯片特别是微阵列或纳米阵列芯片、微量滴定板或微粒。
发现样品中的CFHR1浓度的体外测定允许对于患有神经发育、神经系统或神经精神性病症的患者，预测来自用甘氨酸再摄取抑制剂（GRI）治疗的临床利益。
甘氨酸再摄取抑制剂（GRI）是被认为通过升高甘氨酸的细胞外浓度来增强NMDA受体（NMDA-R）介导的传递的新类型化合物。来自健康个体、精神病患者和动物中的研究以及来自遗传分析的证据经过过去15年已累积在神经发育、神经系统或神经精神性病症的病理生理学中的NMDA受体（NMDA-R）机能减退的改善。因为甘氨酸是NMDA-R复合物的专性共激动剂，所以增强NMDA-R介导的神经传递的一种策略是升高NMDA受体的局部微环境中的甘氨酸的细胞外浓度。甘氨酸升高可以通过GRI抑制来实现，所述GRI负责来自突触间隙的甘氨酸去除。超过现有神经系统和神经精神性疗法的可能优点包括甘氨酸再摄取抑制剂在具有良好功效中的潜力，以及用于治疗精神分裂症（阳性和阴性症状）、双相性精神障碍、物质依赖（酒精、可卡因）、自闭症或强迫症（OCD）中的阳性和阴性症状的改善的耐受性概况。已知甘氨酸再摄取抑制剂可以用于治疗神经发育、神经系统或神经精神性病症例如精神分裂症。
精神分裂症是严重的精神障碍，通常在青春晚期或早期成人期出现，全世界流行率为大约1%的成人群体，其具有巨大的社会和经济影响。欧洲精神病学协会（Association of European Psychiatrists）（ICD）和美国美国精神病学协会（American Psychiatric Association）（DSM）的精神分裂症诊断标准需要存在两个或更多个特征性症状：妄想、幻觉、言语紊乱、严重紊乱或紧张的行为、或阴性症状（失语症、情感冷淡、缺乏动力、快感缺乏），以及存在其他要求例如排除情感障碍和功能受损的存在。作为群体，患有精神分裂症的人具有功能障碍，其可能在儿童期开始，继续贯穿成人生活，并且使得大多数患者不能维持正常就业或在其他方面具有正常社会功能。与一般群体相比较，他们还具有缩短的寿命，并且患有的广泛多样的其他神经精神性综合征的流行率增加，包括严重的物质滥用、抗精神病药物治疗之前的强迫症状和异常不随意运动。精神分裂症还与广泛范围的认知障碍相关，即使当精神病症状得到良好控制时，所述认知障碍的严重性也限制其功能。
与谷氨酸能传递相关的其他适应症是双相性精神障碍、物质依赖（酒精、可卡因）、自闭症和强迫症（OCD）。
因此，本发明还涉及预测如果用甘氨酸再摄取抑制剂（GRI）治疗，则患有神经发育、神经系统或神经精神性病症的患者的应答的体外方法，其包括下述步骤：
i）通过执行本发明的测定来测定患者样品中的CFHR1的蛋白质浓度，
ii）比较步骤i）中测定的蛋白质浓度与患有神经发育、神经系统或神经精神性病症的患者中的CFHR1的截断值，
iii）其中患有神经发育、神经系统或神经精神性病症的患者的样品中的CFHR1的蛋白质浓度高于截断值指示患者将从GRI治疗获得临床利益，和
iv）对于患有神经发育、神经系统或神经精神性病症的患者选择GRI治疗。
在进一步优选的实施方案中，神经发育、神经系统或神经精神性病症包括精神分裂症、双相性精神障碍、物质依赖、自闭症和强迫症的阴性或阳性症状，特别是精神分裂症的阴性或阳性症状。
在进一步优选的实施方案中，患者患有分裂情感性障碍。
因此，在一个实施方案中，本发明涉及本发明的试剂盒用于测定得自对象的样品中的CFHR1的量和/或浓度的用途。
此外，发现对于用GRI治疗的应答者和非应答者可以可靠地通过测定体液中的CFHR1浓度进行鉴定。
因此，在进一步的实施方案中，本发明涉及本发明的试剂盒用于预测患者的临床利益的用途，所述患者用甘氨酸再摄取抑制剂进行治疗。
因此，在进一步的实施方案中，本发明涉及本发明的试剂盒用于预测如果用甘氨酸再摄取抑制剂（GRI）治疗，则患有神经发育、神经系统或神经精神性病症的患者的临床利益的用途。
例如，CFHR1基线血清值的截断值可以计算为10 ug/ml，并且CFHR1值低于或等于10 ug/ml的患者可以分层为“CFHR1低的”，而补体因子H血清值高于10 ug/ml的患者可以分层为“CFHR1高的”。虽然安慰剂治疗的患者在两个亚组中未显示多少差异，但用10 mg和30 mg GRI治疗的患者显示在CFHR1高的组中的更强应答。
在进一步的实施方案中，本发明涉及诊断CFHR1相关疾病或病症的方法，其包括下述步骤：
a）使得自对象的样品与本发明的试剂盒中任一的试剂接触，
b）将试剂固定至固相；和
c）测定CFHR1的量，
其中步骤b）可以在步骤a）之前、在步骤a）之后或与步骤a）同时执行，和
其中相对于对照改变的CFHR1量指示CFHR1相关疾病或病症。
在优选实施方案中，在另一种试剂与样品接触之前，根据步骤a），使与CFH具有更少交叉反应性的试剂与样品接触。
本发明的方法和试剂盒特别适合于检测CFHR1，且用于测定来自对象的液体样品中的CFHR1的量和/或浓度。来自对象的优选液体是血液、血清、液体和血浆。因此，在本发明的优选实施方案中，在本发明的方法中，所述样品是血液、血清、液体、血浆或另一种体液。在一个实施方案中，样品选自血清或血浆。
本发明通过特异性检测来自对象的样品中的CFHR1，首次允许诊断对象中精神分裂症的存在或不存在，和/或精神分裂症的严重性。
另外，本发明首次允许可靠地测定对象的样品中的CFHR1蛋白质的量和/或浓度，特别地其中高于或低于截断值的浓度指示疾病的存在和/或严重性。
在本发明的进一步优选的实施方案中，CFHR1相关疾病或病症选自精神分裂症、罕见肾病症溶血性尿毒症综合征（HUS）或非典型HUS（aHUS）、和膜性增生性肾小球肾炎（MPGN）也称为致密沉积物病（DDD）、膜性增生性肾小球肾炎II型或致密沉积物病、以及视网膜疾病年龄相关性黄斑变性（AMD），更优选地，CFHR1相关疾病或病症是精神分裂症。
CFHR1在血浆中的不存在对下述病症的进展具有相反作用：在aHUS中，缺失看起来代表危险因素，而在AMD中，它描述为具有保护效应（P. Zipfel和Skerka，Nature Reviews Immunology，2009 9（10）: 729-740）。补体因子H相关1（CFHR1）的缺失增加aHUS的危险（Zipfel P.等人，2007，PLoS Genet 3（3）: e41）。CFHR1的缺失与年龄相关性黄斑变性的更低危险相关（A. Hughes，Nature genetics，2006，38，1173 - 1177）。
因此，在一个实施方案中，在aHUS的情况下，高于截断值的浓度指示该疾病的存在和/或严重性。
因此，在另一个实施方案中，在AMD的情况下，低于截断值的浓度指示该疾病的存在和/或严重性。
合适的截断值可以如通过本领域技术人员已知的和如下文更详细地描述的进行测定。
另外，在本发明的进一步优选的实施方案中，高于或低于参考量和/或浓度和/或截断值的CFHR1蛋白质的量和/或浓度指示疾病的存在和/或严重性。
因此，在一个实施方案中，本发明的试剂盒可以用于测定得自对象的样品中的CFHR1的量，和/或用于体外诊断CFHR1相关疾病或病症。
测定的读出取决于使用的可检测标记。在实施例中，使用钌化的抗体。此类抗体通过测量电化学发光进行检测。可替代地，可以使用与任何其他合适标记连接，例如与酶连接的抗体。此类酶随后可以用于生成可检测物质。
在根据本发明的方法的一个实施方案中，CFHR1在免疫测定操作中进行测量。
免疫测定是技术人员众所周知的。用于进行此类测定的方法以及实际应用和操作概括于相关教科书中。相关教科书的例子是Tijssen，P.，Preparation of enzyme-antibody or other enzyme-macromolecule conjugates，In: Practice and theory of enzyme immunoassays，第221-278页，Burdon，R.H.和v. Knippenberg，P.H.（编辑），Elsevier，Amsterdam（1990），以及Methods in Enzymology的不同卷，Colowick，S.P.和Caplan，N.O.（编辑），Academic Press），dealing with immunological detection methods，尤其是第70、73、74、84、92和121卷。
在优选实施方案中，CFHR1在夹心测定中进行检测。
在优选实施方案中，CFHR1在酶联免疫吸附测定（ELISA）中进行检测。在进一步优选的实施方案中，CFHR1在（电）化学发光免疫测定（ECLIA）中进行检测。在进一步的实施方案中，CFHR1在放射免疫测定（RIA）中进行检测。进一步优选的测定是夹心荧光免疫测定（FIA）、微粒捕获酶免疫测定（MEIA）、固相荧光免疫测定（SPFIA）、粒子浓度荧光免疫测定（PCFIA）、含和不含胶乳颗粒增强的浊度和比浊测定（LPIA）。另外，测定可以采取测试条的形式。
在优选实施方案中，使用夹心免疫测定，以便测定样品中的CFHR1。如实施例中所示，此类夹心免疫测定特异性检测样品中的CFHR1。
在夹心测定中，第一试剂用于捕获在一个侧面上的CFHR1，并且直接或间接可检测标记的第二试剂用于另一个侧面上。在夹心型测定形式中使用的试剂可以是结合CFHR1的抗体。本发明的试剂盒的试剂与非重叠表位结合。
在一个实施方案中，本发明的试剂盒用于定性（CFHR1存在或不存在）或定量（测定CFHR1的量）或半定量（给出特别是高于或低于截断值的相对量）免疫测定。
在优选实施方案中，CFHR1在电化学或电化学发光免疫测定（=ECLIA）中进行检测。在电化学或电化学发光免疫测定中，结合的分析物分子通过与检测试剂（靶分子）连接的标记进行检测。电极电化学起始与检测试剂连接的化学标记的发光。由标记发出的光通过光检测器进行测量，并且指示结合的分析物分子/靶分子复合物的存在或数量。ECLA方法例如在美国专利号5,543,112；5,935,779；和6,316,607中描述。信号调节可以对于不同分析物分子浓度达到最大，用于精确和灵敏的测量。
此外，在实施例9和10中可以显示，本发明的测定未显示与CFH家族的其他成员的任何显著交叉反应性；即，与除CFHR1外的CFH家族的其他成员的交叉反应性已发现小于0.2%，特别是小于0.1%。因此，即使在其他CFH家族成员的存在下，也可以特异性且可靠地检测少量CFHR1。
在优选实施方案中，CFHR1蛋白质的检测范围为约0.02 - 约50 μg/ml，更优选约0.05 - 约35 μg/ml。
在本发明的实施例中，成功地使用本领域已知的抗体MAB<CFH/CFHR1>M-L20/3和本发明的MAB<CFHR1>M-5.1.5。
因此，在优选实施方案中，第一试剂和/或第二试剂是抗体，特别是单克隆抗体。
在更优选的实施方案中，第一试剂是MAB<CFH/CFHR1>M-L20/3，其用可检测标记进行标记或能够固定到固相上。在更优选的实施方案中，第一试剂是MAB<CFH/CFHR1>M-L20/3，其能够固定到固相上。在甚至更优选的实施方案中，第一试剂是MAB<CFH/CFHR1>M-L20/3，所述抗体是生物素化的。
在进一步优选的实施方案中，第一试剂能够固定到固相上。
在另一个更优选的实施方案中，第二试剂是MAB<CFHR1>M-5.1.5，其用可检测标记进行标记或能够固定到固相上。在更优选的实施方案中，第二试剂是MAB<CFHR1>M-5.1.5，其用可检测标记进行标记。在甚至更优选的实施方案中，第二试剂是MAB<CFHR1>M-5.1.5，所述抗体是钌化的。
“MAB<CFHR1>M-5.1.5”应理解为单克隆抗体，其中重链具有根据SEQ ID No. 16的序列，并且其中轻链具有根据SEQ ID No. 18的序列。MAB<CFHR1>M-5.1.5与CFHR1结合。
“MAB<CFH/CFHR1>M-L20/3”应理解为单克隆抗体，其中重链具有根据SEQ ID No. 41的序列，并且其中轻链具有根据SEQ ID No. 43的序列，或可作为目录号GAU 020-03-02得自Thermo Scientific的“抗补体因子H，克隆：L20/3”。
对于本发明的测定，至少一种试剂用可检测标记进行标记，并且至少一种试剂能够固定到固相上。在优选实施方案中，一种试剂用可检测标记进行标记，并且一种试剂能够固定到固相上。
因此，在本发明的方法的一个实施方案中，第一试剂能够固定到固相上，并且第二试剂用可检测标记进行标记。因此，在本发明的方法的一个进一步实施方案中，第一试剂用可检测标记进行标记，并且第二试剂能够固定到固相上。
在优选实施方案中，第一试剂能够固定到固相上，更优选地，MAB<CFH/CFHR1>M-L20/3能够固定到固相上。在一个实施方案中，MAB<CFH/CFHR1>M-L20/3是生物素化的。
在另一个优选实施方案中，第二试剂用可检测标记进行标记，更优选地，MAB<CFHR1>M-5.1.5用可检测标记进行标记。在一个实施方案中，MAB<CFHR1>M-5.1.5是钌化的。
优选使用校准物使测定标准化。在更优选的实施方案中，此类校准物蛋白质特别在HEK细胞中重组产生。
如实施例4中所示，MAB<CFHR1>M-5.1.5鉴定为单克隆抗体，其显示出与CFHR1的高亲和力，并且仅显示与CFH家族的其他成员的低交叉反应性。值得注意的是，仅与CFHR的交叉反应性是可检测的（参见表2）。此外，MAB<CFHR1>M-5.1.5令人惊讶地首次允许可靠和灵敏的检测对象的样品中的CFHR1（参见实施例9）。MAB<CFHR1>M-5.1.5的重链序列是SEQ ID No. 16。MAB<CFHR1>M-5.1.5的轻链序列是SEQ ID No. 18。
因此，本发明还涉及能够结合CFHR1的试剂，特别是抗体，所述抗体是单克隆抗体MAB<CFHR1>M-5.1.5，其中重链具有SEQ ID No. 16的序列，并且其中轻链具有SEQ ID No. 18的序列。
此外，根据实施例3和4鉴定了进一步的抗体，其显示与CFHR1的结合，并且还可以用于本发明的试剂盒和方法中，如实施例9中所示。
因此，在进一步的实施方案中，本发明涉及
（i）单克隆抗体MAB<CFHR1>M-4.1.3，其中重链具有SEQ ID No. 25的序列，并且其中轻链具有SEQ ID No. 27的序列，或
（ii）单克隆抗体MAB<CFHR1>M-4.2.53，其中重链具有SEQ ID No. 29的序列，并且其中轻链具有SEQ ID No. 31的序列，或
（iii）单克隆抗体MAB<CFHR1>M-4.2.74，其中重链具有SEQ ID No. 33的序列，并且其中轻链具有SEQ ID No. 35的序列，或
（iv）单克隆抗体MAB<CFHR1>M-5.3.23，其中重链具有SEQ ID No. 37的序列，并且其中轻链具有SEQ ID No. 39的序列。
在进一步的实施方案中，本发明涉及能够结合CFHR1的试剂，特别是抗体，其包含根据SEQ ID No. 19、SEQ ID No. 20、SEQ ID No. 21、SEQ ID No. 22、和SEQ ID No. 23的MAB<CFHR1>M-5.1.5的CDR序列和氨基酸序列ITS。MAB<CFHR1>M-5.1.5的重链的CDR1序列具有根据SEQ ID No. 19的序列。MAB<CFHR1>M-5.1.5的重链的CDR2序列具有根据SEQ ID No. 20的序列。MAB<CFHR1>M-5.1.5的重链的CDR3序列具有根据SEQ ID No. 21的序列。MAB<CFHR1>M-5.1.5的轻链的CDR1序列具有根据SEQ ID No. 22的序列。MAB<CFHR1>M-5.1.5的轻链的CDR2序列具有氨基酸序列ITS。MAB<CFHR1>M-5.1.5的轻链的CDR3序列具有根据SEQ ID No. 23的序列。
在进一步的实施方案中，本发明涉及能够结合CFHR1的试剂，特别是抗体，其包含根据SEQ ID No. 21和23的MAB<CFHR1>M-5.1.5的重和轻链的CDR3序列。
在再进一步的实施方案中，本发明涉及抗体，其包含MAB<CFHR1>M-4.1.3、MAB<CFHR1>M-4.2.53、MAB<CFHR1>M-4.2.74或MAB<CFHR1>M-5.3.23的CDR序列，
和/或
包含MAB<CFHR1>M-4.1.3、MAB<CFHR1>M-4.2.53、MAB<CFHR1>M-4.2.74或MAB<CFHR1>M-5.3.23的CDR3序列。
这些抗体的CDR序列包括CDR3序列公开于本申请的图5至12中。
在进一步的实施方案中，本发明涉及根据本发明能够结合CFHR1的试剂，特别是抗体的功能活性变体。
如技术人员已知的，抗体的结合特征通过可变结构域介导。对于与抗原的结合，存在来自重链的合适可变结构域和来自轻链的共同作用可变结构域，且排列为允许共同作用是必需的。可变结构域也称为FV区，并且是与抗原结合的最重要区域。更具体而言，在轻（VL）和重（VH）链上各三个的可变环负责与抗原结合。这些环被称为互补决定区（CDR）。三个环对于VL被称为L1、L2和L3，并且对于VH被称为H1、H2和H3。然而，来自重链的可变结构域和来自轻链的共同作用可变结构域，以及重链的CDR和轻链的CDR的多种不同排列是本领域已知的。
多种不同抗体形式迄今为止已得到开发或鉴定。这些或任何其他合适排列中的任一种均可用于本发明的试剂，只要该形式或排列允许与CFHR1结合。
CDR序列可以在本发明的试剂和本发明的试剂盒的试剂中排列在一种多肽或肽复合物中。如果它们在一种多肽中排列，则两个序列可以通过接头序列优选肽接头进行连接，例如作为融合蛋白。如果它们在多肽复合物中排列，则两种或更多种多肽通过非共价键合彼此结合，所述非共价键合包括氢键、离子键、范德华力和疏水作用。上述序列或其功能活性变体可以构成试剂或可以是其一部分。
多肽（也称为蛋白质）是由以线性链排列的α-氨基酸制成的有机化合物。聚合物链中的氨基酸通过邻近氨基酸残基的羧基和氨基之间的肽键连接在一起。一般而言，遗传密码指定20种标准氨基酸。在合成后或甚至在合成期间，蛋白质中的残基可以通过翻译后修饰进行化学修饰，所述翻译后修饰改变蛋白质的物理和化学性质、折叠、稳定性、活性和最终的功能。
如本文定义的试剂选择性识别且结合CFHR1且因此是CFHR1结合试剂。
在具体实施方案中，CFHR1结合试剂或抗体以1 x 10-6或更少的KD与人CFHR1结合。在具体实施方案中，CFHR1结合试剂或抗体以5 x 10-7或更少、2 x 10-7或更少、或者1 x 10-7或更少的KD与人CFHR1结合。在另外的实施方案，CFHR1结合试剂以1 x 10-8或更少的KD与人CFHR1结合。在其他实施方案中，CFHR1结合试剂以5 x 10-9或更少、或者1 x 10-9或更少的KD与人CFHR1结合。在进一步的实施方案中，CFHR1结合试剂以1 x 10-10或更少、1 x 10-11或更少、或者1 x 10-12或更少的KD与人CFHR1结合。在具体实施方案中，CFHR1结合试剂或CFHR1结合抗体可以与如上所述的CFH蛋白质家族的其他蛋白质结合。
本发明的测定对于CFHR1特异性。在本文中术语“选择性”或“特异性”的使用指下述事实：本发明的测定不检测CFH蛋白质家族的其他蛋白质，或以高达0.2%、优选高达0.1%的交叉反应性检测CFH蛋白质家族的其他蛋白质。
KD指得自kd（特定结合分子-靶蛋白质相互作用的解离速率；也称为koff）与ka（特定结合分子-靶蛋白质相互作用的结合速率；也称为kon）的比的解离常数，或表示为摩尔浓度（M）的kd/ka。KD值可以使用本领域充分确定的方法进行测定。用于测定结合分子的KD的优选方法通过使用表面等离子体共振，例如生物传感器系统例如Biacore（TM）（GE Healthcare Life Sciences）系统（参见实施例4）。
试剂还可以包含本发明的抗体的上述序列的功能活性变体。本发明的功能活性变体的特征在于与CFHR1结合，优选与CFHR1的强结合。
如果变体与CFHR1的结合活性，任选表示为KD，总计为试剂或抗体的活性的至少10%、优选至少25%、更优选至少50%、甚至更优选至少70%、再更优选至少80%、尤其是至少90%、特别是至少95%、最优选至少99%，而无序列改变，则变体在本发明的背景下是功能活性的。用于测定与CFHR1的结合活性的合适方法在实施例中给出，如上所述。功能活性变体可以通过有限数目的氨基酸置换、缺失和/或插入来获得。
在本发明的优选实施方案中，SEQ ID NO: 18的功能活性变体包含SEQ ID NO: 18的分别序列的互补决定区L3（CDR L3），优选CDR L1、CDR L2和CDR L3；和/或序列SEQ ID NO: 16中任一的功能活性变体包含SEQ ID NO: 18的分别序列的互补决定区H3（CDR H3），优选CDR H1、CDR H2和CDR H3。在最优选的实施方案中，SEQ ID NO: 16的功能活性变体包含SEQ ID NO: 16的分别序列的CDR L1、CDR L2和CDR L3，并且序列SEQ ID NO: 18的功能活性变体包含SEQ ID NO: 18的分别序列的CDR H1、CDR H2和CDR H3。可替代地，序列之一可以是SEQ ID NO: 16或18，而无序列改变，并且另一种可以是如本文定义的变体。
鉴定可变区的序列中的CDR的不同方法已得到描述。另外，已知一系列软件程序可用于该目的。已应用于SEQ ID NO: 16和18的序列以鉴定这些序列中的CDR的规则集是本领域已知的，并且例如在www.bioinf.org.uk；MacCallum等人，1996，J. Mol. Biol. 262（5）: 732-745；Antibody Engineering Lab Manual，Chapter ?Protein Sequence and Structure Analysis of Antibody Variable Domains“，Ed.: Duebel，S.和Kontermann，R.，Springer-Verlag，Heidelberg中描述。其中指出CDR的序列显示于图2和3中。
这同样应用于SEQ ID NO: 25、27、29、31、33、35、37和39的功能活性变体。
如上所述，在VH和VL内存在高变区以及较不可变的构架区，所述高变区显示从一种抗体到另一种的最多序列变异性。折叠使得高变区集合以形成抗原结合袋。抗体和抗原之间的这些最紧密接触的位点是抗体的CDR，其介导抗体的特异性。相应地，它们对于抗原结合具有特定重要性。尽管优选功能活性变体包含所有三个CDR，但已发现对于一些抗体，CDR-L3和CDR-H3足以赋予特异性。相应地，在一个实施方案中，仅CDR-L3和CDR-H3的存在是强制性的。在任何情况下，CDR必须排列为允许与抗原（此处CFHR1）结合。
在本发明的优选实施方案中，CDR（CDR-L3和-H3；或CDR-L1、-L2、-L3、-H1、-H2和-H3）排列在普遍的可变结构域的构架中，即VL的构架中的L1、L2和L3，以及VH的构架中的H1、H2和H3。这意指如通过任何合适方法鉴定或如图2和3中所示的CDR可以从所示邻域中去除，并且转移到另一个（第二个）可变结构域内，从而取代第二个可变结构域的CDR。另外，可以使用图2和3中未显示的可变结构域的构架。多个可变结构域或抗体序列是本领域已知的，并且可以用于此目的。例如，目的CDR插入其内的可变结构域可以得自任何种系，或是重排的人可变结构域。可变结构域还可以是合成产生的。CDR区可以使用重组DNA技术引入分别的可变结构域内。通过其可以实现这点的一种方法在Marks等人，1992，Bio/Technology 10:779-783中描述。可变重结构域可以与可变轻结构域配对，以提供抗原结合位点。另外，独立区域（例如单独的可变重结构域）可以用于结合抗原。
最后，在另一个实施方案中，CDR可以转移至非可变结构域邻域，只要邻域排列CDR以允许与CFHR1结合。
在本发明的优选实施方案中，试剂是抗体。
天然存在的抗体是共享基本结构的球形血浆蛋白质（~150 kDa（http://en.wikipedia.org/wiki/Dalton_unit）），其也称为免疫球蛋白。因为它们具有加入氨基酸残基的糖链，所以它们是糖蛋白。每种抗体的基本功能单位是免疫球蛋白（Ig）单体（仅含有一个Ig单位）；分泌的抗体还可以是二聚的，具有两个Ig单位，与IgA一样，四聚的，具有四个Ig单位，如硬骨鱼IgM，或五聚的，具有五个Ig单位，如哺乳动物IgM。在本发明中，合适形式的例子包括天然存在的抗体的形式，包括称为IgA、IgD、IgE、IgG和IgM的抗体同种型。
Ig单位是“Y”型分子，其由四条多肽链组成；通过半胱氨酸残基之间的二硫键连接的两条相同的重链和两条相同的轻链。每条重链长约440个氨基酸；每条轻链长约220个氨基酸。重和轻链各自含有稳定其折叠的链内二硫键。每条链由称为Ig结构域的结构结构域组成。这些结构域含有约70-110个氨基酸，并且根据其大小和功能分类成不同范畴（例如可变或V和恒定或C）。它们具有特征性免疫球蛋白折叠，其中两个β片层产生通过保守半胱氨酸和其他荷电氨基酸之间的相互作用保持在一起的“夹心”形状。
存在通过α、δ、ε、γ和μ指示的五类哺乳动物Ig重链。存在的重链的类型限定抗体的同种型；这些链分别在IgA、IgD、IgE、IgG和IgM抗体中发现。
不同的重链在大小和组成中不同；α和γ含有大约450个氨基酸，并且δ含有大约500个氨基酸，而μ和ε具有大约550个氨基酸。每条重链具有两个区域，恒定区（CH）和可变区（VH）。在一个物种中，恒定区在相同同种型的所有抗体中是相同的，但在不同同种型的抗体中不同。重链γ、α和δ具有由三个串联Ig结构域组成的恒定区，以及添加灵活性的铰链区；重链μ和ε具有由四个免疫球蛋白结构域组成的恒定区。重链的可变区在通过不同B细胞产生的抗体中不同，但对于通过单一B细胞或B细胞克隆产生的所有抗体是相同的。每条重链的可变区长大约110个氨基酸，并且由单个Ig结构域组成。
在哺乳动物中，存在通过λ和κ指示的两类免疫球蛋白轻链。轻链具有两个相继结构域：一个恒定结构域（CL）和一个可变结构域（VL）。轻链的大约长度为211 - 217个氨基酸。每种抗体含有几乎相同的两条轻链；在哺乳动物中每种抗体存在仅一类轻链，κ或λ。其他类型的轻链，例如ι链在低等脊椎动物如软骨鱼纲和真骨鱼类中发现。
除天然存在的抗体之外，人工抗体形式包括抗体片段已得到开发。其中一些在下文中描述。然而，包含上述多肽或由上述多肽组成且允许与CFHR1结合的任何其他抗体形式同样由本发明涵盖。
尽管所有抗体的一般结构是非常相似的，但给定抗体的独特性质由可变（V）区决定，如上详述。更具体而言，在轻（VL）和重（VH）链上各三个的可变环负责与抗原结合，即负责其抗原特异性。这些环被称为互补决定区（CDR）。因为结构域VH和VL两者的CDR均促成抗原结合位点，所以是重和轻链的组合，而不是单独的任一决定最终抗原特异性。
相应地，如本文使用的，术语“抗体”意指任何多肽，其与天然存在的抗体具有结构相似性，并且能够与CFHR1结合，其中结合特异性由多肽的CDR决定，例如如图2和3中所示。因此，“抗体”意指与CFHR1结合的免疫球蛋白衍生的结构，其包括但不限于全长或整个抗体、抗原结合片段（由抗体结构物理或概念衍生的片段）、前述任一种的衍生物、嵌合分子、前述任一种与另一种多肽的融合物、或与CFHR1选择性结合的任何替代结构/组成。抗体可以是包含至少一个抗原结合片段的任何多肽。抗原结合片段由至少重链的可变结构域和轻链的可变结构域组成，以两个结构域一起能够与特异性抗原结合的方式排列。
“全长”或“完全”抗体指包含通过二硫键互联的两条重链（H）和两条轻链（L）的蛋白质，其包含：（1）就重链而言，可变区和重链恒定区，其包含三个结构域CH1、CH2和CH3；和（2）就轻链而言，轻链可变区和轻链恒定区，其包含一个结构域CL。就术语“完全抗体”而言，意指具有天然存在的抗体的典型总体结构域结构的任何抗体（即包含重链的三个或四个恒定结构域和轻链的一个恒定结构域以及各自的可变结构域），即使每个结构域可以包含进一步的修饰，例如突变、缺失或插入，其不改变总体结构域结构。例如，MAB<CFHR1>M-5.1.5是全长抗体。
“抗体片段”还含有如上定义的至少一种抗原结合片段，并且显示出与片段由其衍生的完全抗体基本上相同的功能和特异性。用胃蛋白酶的有限蛋白酶解消化将Ig原型切割成三个片段。各自含有一整条L链和约一半H链的两个相同的氨基末端片段是抗原结合片段（Fab）。在大小中相似但含有具有其链间二硫键的两条重链的羧基末端一半的第三个片段是可结晶片段（Fc）。Fc含有碳水化合物、补体结合和FcR结合位点。限制性胃蛋白酶消化获得含有两片Fab和铰链区的单个F（ab'）2片段，包括H-H链间二硫键。F（ab'）2对于抗原结合是二价的。F（ab'）2的二硫键可以进行切割，以便获得Fab'。此外，重和轻链的可变区可以融合在一起，以形成单链可变片段（scFv）。
因为第一代全尺寸抗体存在一些问题，所以第二代抗体中的许多仅包含抗体的片段。可变结构域（Fv）是具有完整抗原结合结构域的最小片段，由一个VL和一个VH组成。仅具有结合结构域的此类片段可以通过酶促方法或有关基因片段例如在细菌和真核细胞中的表达来生成。可以使用不同方法，例如单独的Fv片段或含有“Y”的上臂之一的'Fab'片段，其包括Fv加上第一个恒定结构域。这些片段通常通过在两条链之间引入多肽连接得到稳定，其导致单链Fv（scFv）的产生。可替代地，可以使用二硫键合的Fv（dsFv）片段。片段的结合结构域可以与任何恒定结构域组合，以便产生全长抗体，或可以与其他蛋白质和多肽融合。
重组抗体片段是单链Fv（scFv）片段。一般而言，它对于其抗原具有高亲和力，并且可以在多种宿主中表达。这些及其他性质使得scFv片段不仅可应用于医学中，还具有用于生物技术应用的潜力。如上文详述，在scFv片段中，VH和VL结构域通过亲水和柔性肽接头连接，这改善表达和折叠效率。通常使用约15个氨基酸的接头，其中最频繁使用（Gly4Ser）3接头。scFv分子可以容易地蛋白酶解降解，取决于使用的接头。随着基因工程技术的发展，这些局限性可以通过集中于功能和稳定性改善的研究实际上得到克服。例子是二硫键稳定的（或二硫键合）的Fv片段的生成，其中VH-VL二聚体通过链间二硫键得到稳定。半胱氨酸在VL和VH结构域之间的界面处引入，形成使两个结构域保持在一起的二硫桥。
scFv的解离导致单体scFv，其可以复合成二聚体（双抗体）、三聚体（三抗体）或更大聚集物例如TandAb和Flexibody。
具有两个结合结构域的抗体可以通过两个scFv用简单多肽连接的结合（scFv）2或通过两个单体的二聚化（双抗体）进行制备。最简单的设计是具有两个功能抗原结合结构域的双抗体，其可以是相同的、相似（二价双抗体）的或对于不同抗原具有特异性（双特异性双抗体）。这些双特异性抗体允许例如将新型效应子功能（例如细胞毒性T细胞）召募至靶细胞，这使得它们对于医学中的应用非常有用。
近来，包含重链的四个可变结构域和轻链的四个可变结构域的抗体形式已得到开发。这些的例子包括四价双特异性抗体（TandAb和Flexibody，Affimed Therapeutics AG，Heidelberg.德国）。与双特异性抗体形成对比，双特异性TandAb是由仅一种多肽组成的同二聚体。因为两条不同的链，双抗体可以构建三种不同二聚体，其中仅一种是功能的。因此，产生且纯化这种均质产物是更简单和更廉价的。此外，TandAb通常显示更佳的结合性质（具有两倍的结合位点数目）和增加的体内稳定性。Flexibody是具有双抗体多聚体基序的scFv组合，导致具有用于连接两个分子的高度灵活性的多价分子，所述两个分子在细胞表面上彼此非常遥远。如果存在超过两个功能抗原结合结构域，并且如果它们对于不同抗原具有特异性，则抗体是多特异性的。
总之，特定的公开序列可以插入其内或可替代地形成其必需部分的特异性免疫球蛋白，包括但不限于形成本发明的特定实施方案的下述抗体分子：Fab（具有可变轻（VL）、可变重（VH）、恒定轻（CL）和恒定重（CHl）结构域的单价片段）、F（ab'）2（包含通过二硫桥或可替代在铰链区连接的两个Fab片段的二价片段）、Fv（VL和VH结构域）、scFv（其中VL和VH通过接头例如肽接头连接的单链Fv）、双特异性抗体分子（包含与第二功能部分连接的如本文公开的多肽的抗体分子，所述第二功能部分具有与抗体不同的结合特异性，包括但不限于另一种肽或蛋白质，例如抗体或受体配体）、双特异性单链Fv二聚体、双抗体、三抗体、四抗体、微型抗体（与CH3连接的scFv）。
通过掺入二硫桥以将VH和VL结构域排成一行，可以稳定某些抗体分子包括但不限于Fv、scFv、双抗体分子或结构域抗体（Domantis）。双特异性抗体可以使用常规技术进行产生，其具体方法包括化学产生或由混合杂交瘤产生）以及其他技术包括但不限于BiTETM技术（含肽接头，具有不同特异性的抗原结合区的分子）和纽进洞（knobs-into-holes）改造。
相应地，抗体可以是Fab、Fab'、F（ab'）2、Fv、二硫键合的Fv、scFv、（scFv）2、二价抗体、双特异性抗体、多特异性抗体、双抗体、三抗体、四抗体或微型抗体。
在另一个优选实施方案中，抗体是单克隆抗体、嵌合抗体或人源化抗体。单克隆抗体是单特异性抗体，其是相同的，因为它们通过一类免疫细胞产生，所述一类免疫细胞是单一亲本细胞的所有克隆。嵌合抗体是其中一个物种的免疫球蛋白的至少一个区域通过基因工程与另一个物种的免疫球蛋白的另一个区域融合的抗体，以便降低其免疫原性。例如，鼠VL和VH区可以与人免疫球蛋白的剩余部分融合。特定类型的嵌合抗体是人源化抗体。人源化抗体通过将编码非人抗体的CDR的DNA与人抗体产生DNA合并进行生产。所得到的DNA构建体随后可以用于表达且产生抗体，其通常不象非人亲本抗体或嵌合抗体一样是免疫原性的，因为仅CDR是非人的。
在本发明的优选实施方案中，试剂包含选自下述的重链免疫球蛋白恒定结构域：人IgM恒定结构域、人IgGl恒定结构域、人IgG2恒定结构域、人IgG3恒定结构域、人IgG4恒定结构域、人IgE恒定结构域和人Ig恒定结构域。
如上文在本发明的抗体的背景下详述的，天然存在的抗体的每条重链具有两个区域，恒定区和可变区。存在五类哺乳动物免疫球蛋白重链：γ、δ、α、μ和ε，其分别限定免疫球蛋白种类IgM、IgD、IgG、IgA和IgE。
在人中存在四个IgG亚类（IgG1、2、3和4），以其在血清中的丰度次序命名（IgG1是最丰富的）。即使在IgG亚类的Fc区中存在约95%相似性，铰链区的结构也是相对不同的。在两条重链的Fab臂（抗原结合片段）和两个羧基末端结构域CH2和CH3之间的这个区域决定分子的灵活性。上铰链（针对氨基末端）区段允许在Fab臂之间的角度的可变性（Fab-Fab灵活性）以及每个个别Fab的旋转灵活性。下铰链区（朝向羧基末端）的灵活性直接决定Fab臂相对于Fc区的位置（Fab-Fc灵活性）。铰链依赖性Fab-Fab和Fab-Fc灵活性在触发进一步的效应子功能例如补体活化和Fc受体结合中可以是重要的。相应地，铰链区的结构给予四个IgG亚类各自其独特的生物学概况。
铰链区的长度和灵活性在IgG亚类中不同。IgG1的铰链区涵盖氨基酸216-231，并且因为它是自由灵活的，所以Fab片段可以围绕其对称轴旋转，且在两个重链间二硫桥中的第一个处集中的球体内移动。IgG2具有比IgG1更短的铰链，具有12个氨基酸残基和四个二硫桥。IgG2的铰链区缺乏甘氨酸残基，它是相对短的，且含有通过额外重链间二硫桥稳定的刚性聚脯氨酸双螺旋。这些性质限制IgG2分子的灵活性。IgG3通过其独特的延长铰链区而不同于其他亚类（是IgG1铰链约四倍长），含有62个氨基酸（包括21个脯氨酸和11个半胱氨酸），形成不可弯曲的聚脯氨酸双螺旋。在IgG3中，Fab片段相对远离Fc片段，给予分子更大的灵活性。与其他亚类相比较，在IgG3中的延长铰链也负责其更高的分子量。IgG4的铰链区短于IgG1的那种，并且它的灵活性在IgG1和IgG2的那种中间。
在本发明的优选实施方案中，本发明涉及单克隆抗体MAB<CFHR1>M-5.1.5的功能活性变体，其中重链具有SEQ ID No. 16的序列，并且其中轻链具有SEQ ID No. 18的序列，或涉及抗体的功能活性变体，所述抗体包含根据SEQ ID No. 19、SEQ ID No. 20、SEQ ID No. 21、SEQ ID No. 22、和SEQ ID No. 23的MAB<CFHR1>M-5.1.5的CDR序列和氨基酸序列ITS，和/或包含根据SEQ ID No. 21和SEQ ID No. 23的MAB<CFHR1>M-5.1.5的CDR3序列。
在另一个优选实施方案中，本发明进一步涉及单克隆抗体MAB<CFHR1>M-4.1.3的功能活性变体，其中重链具有SEQ ID No. 25的序列，并且其中轻链具有SEQ ID No. 27的序列，或涉及单克隆抗体MAB<CFHR1>M-4.2.53的功能活性变体，其中重链具有SEQ ID No. 29的序列，并且其中轻链具有SEQ ID No. 31的序列，或涉及单克隆抗体MAB<CFHR1>M-4.2.74的功能活性变体，其中重链具有SEQ ID No. 33的序列，并且其中轻链具有SEQ ID No. 35的序列，或涉及单克隆抗体MAB<CFHR1>M-5.3.23的功能活性变体，其中重链具有SEQ ID No. 37的序列，并且其中轻链具有SEQ ID No. 39的序列，或涉及抗体的功能活性变体，所述抗体包含MAB<CFHR1>M-4.1.3、MAB<CFHR1>M-4.2.53、MAB<CFHR1>M-4.2.74或MAB<CFHR1>M-5.3.23的CDR序列和/或包含MAB<CFHR1>M-4.1.3、MAB<CFHR1>M-4.2.53、MAB<CFHR1>M-4.2.74或MAB<CFHR1>M-5.3.23的CDR3序列。
例如，变体可以限定为变体
a）是功能活性片段，由SEQ ID NO: 16、18、25、27、29、31、33、35、37和/或39中任一的至少60%、优选至少70%、更优选至少80%、再更优选至少90%、甚至更优选至少95%、最优选99%氨基酸序列组成；
b）是功能活性变体，与SEQ ID NO: 16、18、25、27、29、31、33、35、37和/或39中任一的氨基酸序列具有至少60%、优选至少70%、更优选至少80%、再更优选至少90%、甚至更优选至少95%、最优选99%序列同一性；
c）由SEQ ID NO: 16、18、25、27、29、31、33、35、37和/或39中任一的氨基酸序列以及1 - 50个另外的氨基酸残基组成，优选1 - 40，更优选1 - 30，甚至更优选至多1 - 25，再更优选至多1 - 10个，最优选1、2、3、4或5个另外的氨基酸残基。
如a）中限定的片段的特征在于通过一个或多个缺失而衍生自SEQ ID NO: 16、18、25、27、29、31、33、35、37和/或39的序列中的任一。缺失可以是C末端、N末端和/或内部的。优选地，片段通过1、2、3、4、5、6、7、8、9或10，更优选1、2、3、4或5，甚至更优选1、2或3，再更优选1或2，最优选1个缺失获得。本发明的功能活性片段的特征在于与CFHR1结合的能力。如果片段的结合总计为抗原的活性的至少10%、优选至少25%、更优选至少50%、甚至更优选至少70%、再更优选至少80%、尤其是至少90%、特别是至少95%、最优选至少99%，而无序列改变，则抗原的片段在本发明的背景下是功能活性的。
如b）中限定的变体的特征在于通过一种或多种氨基酸修饰而衍生自SEQ ID NO: 16、18 、25、27、29、31、33、35、37和39的序列中的任一，所述氨基酸修饰包括缺失、添加和/或置换。修饰可以是C末端、N末端和/或内部的。优选地，片段通过1、2、3、4、5、6、7、8、9或10，更优选1、2、3、4或5，甚至更优选1、2或3，再更优选1或2，最优选1个修饰获得。本发明的功能活性变体的特征在于与CFHR1结合的能力。如果片段的结合总计为抗原的活性的至少10%、优选至少25%、更优选至少50%、甚至更优选至少70%、再更优选至少80%、尤其是至少90%、特别是至少95%、最优选至少99%，而无序列改变，则抗原的片段在本发明的背景下是功能活性的。
如c）中限定的变体的特征在于它由SEQ ID NO: 16、18、25、27、29、31、33、35、37和/或39的序列中任一的氨基酸序列和1 - 50个另外的氨基酸残基组成。添加可以是C末端、N末端和/或内部的。优选地，变体通过1、2、3、4、5、6、7、8、9或10，更优选1、2、3、4或5，甚至更优选1、2或3，再更优选1或2，最优选1个添加获得。功能活性变体进一步如上定义（参见b）的变体）。
（b）和/或（c）的另外氨基酸残基可以是任何氨基酸，其可以是L-和/或D-氨基酸，天然存在的及其他。优选地，氨基酸是任何天然存在的氨基酸，例如丙氨酸、半胱氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、赖氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、天冬酰胺、脯氨酸、谷氨酰胺、精氨酸、丝氨酸、苏氨酸、缬氨酸、色氨酸或酪氨酸。
然而，氨基酸还可以是经修饰的或罕见氨基酸。这些的例子是2-氨基己二酸、3-氨基己二酸、β-丙氨酸、2-氨基丁酸、4-氨基丁酸、6-氨基己酸、2-氨基庚酸、2-氨基异丁酸、3-氨基异丁酸、2-氨基庚二酸、2,4-二氨基丁酸、锁链素、2,2'-二氨基庚二酸、2,3-二氨基丙酸、N-乙基甘氨酸（ethylglycinem）-N-乙基天冬酰胺、羟赖氨酸、别-羟赖氨酸、3-羟脯氨酸、4-羟脯氨酸、异锁链素、别-异亮氨酸、N-甲基甘氨酸、N-甲基异亮氨酸、6-N-甲基赖氨酸、N-甲基缬氨酸、正缬氨酸、正亮氨酸或鸟氨酸。另外，氨基酸可以遭受修饰例如翻译后修饰。修饰的例子包括乙酰化、酰胺化、阻断、甲酰化、γ-羧基谷氨酸羟化、糖基化、甲基化、磷酸化和硫酸化。如果超过一个另外或异源氨基酸残基存在于肽中，则氨基酸残基可以彼此相同或不同。
序列同一性百分比可以例如通过序列比对进行测定。用于比较的序列比对方法是本领域众所周知的。多种程序和比对算法已例如在Smith和Waterman，Adv. Appl. Math. 2: 482，1981或Pearson和Lipman，Proc. Natl. Acad. Sci.US. A. 85: 2444，1988中得到描述。
NCBI基本局部比对搜索工具（BLAST）（Altschul等人，J. Mol. Biol. 215: 403-410，1990）可得自几个来源，包括美国国家生物技术信息中心（National Center for Biotechnology Information）（NCBI，Bethesda，MD）和因特网上，用于与序列分析程序blastp、blastn、blastx、tblastn和tblastx结合使用。SEQ ID NO: 16和18序列中任一的变体通常使用设为缺省参数的NCBI Blast 2.0、加缺口的blastp进行表征。对于至少30个氨基酸的氨基酸序列的比较，采用Blast 2序列功能，使用设为缺省参数的缺省BLOSUM62矩阵（缺口存在成本11和每残基缺口成本1）。当比对短肽（少于约30个氨基酸）时，比对使用Blast 2序列功能执行，采用设为缺省参数的PAM30矩阵（开放缺口9、延伸缺口1罚分）。用于测定相比此类短窗口例如15个氨基酸或更少的序列同一性的方法在网站上描述，所述网站由Bethesda，Maryland中的美国国家生物技术信息中心维护。
在更优选的实施方案中，如上定义的功能活性变体通过一个或多个保守氨基酸置换而衍生自SEQ ID NO: 16和18中任一的氨基酸序列。
如本领域普通技术人员应当理解的，保守氨基酸置换是将氨基酸残基替换为赋予相似或更佳（为了预期目的）功能和/或化学特征的氨基酸残基的置换。例如，保守氨基酸置换通常是其中氨基酸残基替换为具有相似侧链的氨基酸残基的置换。具有相似侧链的氨基酸残基家族已在本领域中得到限定。这些家族包括具有碱性侧链的氨基酸（例如赖氨酸、精氨酸、组氨酸）、具有酸性侧链的氨基酸（例如天冬氨酸、谷氨酸）、具有不带电荷的极性侧链的氨基酸（例如甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、色氨酸）、具有非极性侧链的氨基酸（例如丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸）、具有β-分支侧链的氨基酸（例如苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸）和具有芳香族侧链的氨基酸（例如酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸）。此类修饰不设计为显著降低或改变试剂的结合或功能抑制特征，尽管它们可以改善此类性质。制备置换的目的并不重要，并且可以包括但绝不限于将残基替换为更佳地能够维持或增强分子结构、分子的电荷或疏水性、或分子尺寸的残基。例如，可能仅希望将更不希望的残基置换为相同极性或电荷的残基。此类修饰可以通过本领域已知的标准技术引入，例如定点诱变和PCR介导的诱变。本领域技术人员通过其实现保守氨基酸置换的一种具体方法是丙氨酸扫描诱变。随后使用本领域可获得的或实施例中描述的功能测定，就保留或更佳的功能测试改变的多肽。在本发明的更优选的实施方案中，SEQ ID NO: 16、18 、25、27、29、31、33、35、37或39序列中任一的保守置换数目为至多20、19、18、27、26、15、14、13、12或11，优选至多10、9、8、7或6，尤其是至多5、4、3，特别是2或1。
在进一步的实施方案中，本发明涉及编码本发明的试剂特别是抗体的一种或多种核酸。
本发明的核酸分子可以采取RNA的形式，例如mRNA或cRNA，或采取DNA的形式，包括例如cDNA和基因组DNA，例如通过克隆获得或通过化学合成技术产生或通过其组合。DNA可以是三链、双链或单链的。单链DNA可以是编码链，也称为有义链，或它可以是非编码链，也称为反义链。如本文使用的，核酸分子还尤其指单链和双链DNA，其为单链和双链RNA的混合物的DNA，以及其为单链和双链区的混合物的RNA，包含DNA和RNA（其可以是单链的、或更通常地双链或三链的）的杂交分子、或单链和双链区的混合物。另外，如本文使用的核酸分子指包含RNA或DNA或RNA和DNA两者的三链区。
核酸还包括其为遗传密码简并的结果的序列。存在20种天然氨基酸，其中大多数通过超过一种密码子指定。因此，所有核苷酸序列均包括在本发明中，其导致如上定义的肽。
另外，核酸可以含有一种或多种经修饰的碱基。此类核酸还可以含有例如在磷酸核糖主链中的修饰，以增加此类分子在生理环境中的稳定性和半衰期。因此，具有就稳定性或其他原因修饰的主链的DNA或RNA是“核酸分子”，如该特点在本文中预期的。此外，仅举两个例子，包含稀有碱基例如肌苷或经修饰的碱基例如三苯甲基化碱基的DNA或RNA是在本发明的背景下的核酸分子。应当理解绝大多数修饰已对DNA和RNA制备，其发挥本领域技术人员已知的许多有用的目的。如其在本文中采用的，术语核酸分子尤其包含核酸分子的此类化学、酶促或代谢修饰形式，以及病毒和细胞包括简单和复杂细胞特征性的DNA和RNA的化学形式。例如，可以制备核苷酸置换，其不影响由核酸编码的多肽，并且因此编码如上定义的抗原或其片段或功能活性变体的任何核酸分子均由本发明涵盖。
此外，使用标准技术例如标准克隆技术，编码本发明的一种或多种试剂的核酸分子中的任一包括其片段或功能活性变体，可以功能连接至任何所需调节序列、前导序列、异源标记物序列或异源编码序列，以制备融合蛋白。
本发明的核酸可以最初在体外或培养中的细胞中形成，一般而言，通过经由核酸内切酶和/或核酸外切酶和/或聚合酶和/或连接酶和/或重组酶或本领域技术人员已知产生核酸的其他方法操作。
在优选实施方案中，核酸位于载体中。载体可以另外包括允许其在宿主细胞中复制的核酸序列例如复制起点，一种或多种治疗基因和/或可选标记物基因和本领域已知的其他遗传元件，例如指导所编码蛋白质的转录、翻译和/或分泌的调节元件。载体可以用于转导、转化或感染细胞，从而促使细胞表达除细胞天然的那些外的核酸和/或蛋白质。载体任选包括帮助实现核酸进入细胞的材料，例如病毒颗粒、脂质体、蛋白质外壳等等。众多类型的适当表达载体是本领域已知通过标准分子生物学技术用于蛋白质表达的。此类载体选自常规载体类型包括插入片段，例如杆状病毒表达，或者酵母、真菌、细菌或病毒表达系统。其他适当的表达载体也可以用于此目的，其中众多类型是本领域已知的。用于获得此类表达载体的方法是本领域众所周知的（参见例如Sambrook等人，Molecular Cloning. A Laboratory Manual，第2版，Cold Spring Harbor Laboratory，New York（1989））。在一个实施方案中，载体是病毒载体。病毒载体包括但不限于逆转录病毒和腺病毒载体。
通过这种方法用于转染的合适宿主细胞或细胞系包括细菌细胞。例如，多种大肠杆菌（E. coli）菌株作为生物技术领域中的宿主细胞是众所周知的。多种枯草芽孢杆菌（B. subtilis）、假单胞菌属（Pseudomonas）、链霉菌属（Streptomyces）及其他杆菌菌株等也可以用于这种方法中。本领域技术人员已知的许多酵母细胞菌株也可用作宿主细胞，用于表达本发明的肽。其他真菌细胞或昆虫细胞例如草地贪夜蛾（Spodoptera frugipedera）（Sf9）细胞也可以用作表达系统。可替代地，可以使用哺乳动物细胞例如人293细胞，中国仓鼠卵巢细胞（CHO），猴COS-1细胞系或衍生自Swiss、BALB/c或NIH小鼠的鼠3T3细胞。另外其他合适的宿主细胞以及用于转染、培养、扩增、筛选、生产和纯化的方法是本领域已知的。
编码MAB<CFHR1>M-5.1.5的重和轻链的cDNA序列分别为SEQ ID No. 15和17。因此，在优选实施方案中，本发明涉及根据SEQ ID No. 15的核酸。在进一步优选的实施方案中，本发明涉及根据SEQ ID No. 17的核酸。在优选实施方案中，本发明涉及根据SEQ ID No. 17或SEQ ID No. 15的核酸，其中所述核酸位于载体中。在进一步优选的实施方案中，本发明涉及根据SEQ ID No. 17和SEQ ID No. 15的核酸，其中所述核酸位于载体中。根据SEQ ID No. 17和SEQ ID No. 15的核酸可以位于相同或不同载体中。
编码MAB<CFHR1>M-4.1.3的重和轻链的cDNA序列分别为SEQ ID No. 24和26。因此，在优选实施方案中，本发明涉及根据SEQ ID No. 24的核酸。在进一步优选的实施方案中，本发明涉及根据SEQ ID No. 26的核酸。在优选实施方案中，本发明涉及根据SEQ ID No. 24或SEQ ID No. 26的核酸，其中所述核酸位于载体中。在进一步优选的实施方案中，本发明涉及根据SEQ ID No. 24和SEQ ID No. 26的核酸，其中所述核酸位于载体中。根据SEQ ID No. 24和SEQ ID No. 26的核酸可以位于相同或不同载体中。
编码MAB<CFHR1>M-4.2.53的重和轻链的cDNA序列分别为SEQ ID No. 28和30。因此，在优选实施方案中，本发明涉及根据SEQ ID No. 28的核酸。在进一步优选的实施方案中，本发明涉及根据SEQ ID No. 30的核酸。在优选实施方案中，本发明涉及根据SEQ ID No. 28或SEQ ID No. 30的核酸，其中所述核酸位于载体中。在进一步优选的实施方案中，本发明涉及根据SEQ ID No. 28和SEQ ID No. 30的核酸，其中所述核酸位于载体中。根据SEQ ID No. 28和SEQ ID No. 30的核酸可以位于相同或不同载体中。
编码MAB<CFHR1>M-4.2.74的重和轻链的cDNA序列分别为SEQ ID No. 32和34。因此，在优选实施方案中，本发明涉及根据SEQ ID No. 32的核酸。在进一步优选的实施方案中，本发明涉及根据SEQ ID No. 34的核酸。在优选实施方案中，本发明涉及根据SEQ ID No. 32或SEQ ID No. 34的核酸，其中所述核酸位于载体中。在进一步优选的实施方案中，本发明涉及根据SEQ ID No. 32和SEQ ID No. 34的核酸，其中所述核酸位于载体中。根据SEQ ID No. 32和SEQ ID No. 34的核酸可以位于相同或不同载体中。
编码MAB<CFHR1>M-5.3.23的重和轻链的cDNA序列分别为SEQ ID No. 36和38。因此，在优选实施方案中，本发明涉及根据SEQ ID No. 36的核酸。在进一步优选的实施方案中，本发明涉及根据SEQ ID No. 38的核酸。在优选实施方案中，本发明涉及根据SEQ ID No. 36或SEQ ID No. 38的核酸，其中所述核酸位于载体中。在进一步优选的实施方案中，本发明涉及根据SEQ ID No. 36和SEQ ID No. 38的核酸，其中所述核酸位于载体中。根据SEQ ID No. 36和SEQ ID No. 38的核酸可以位于相同或不同载体中。
试剂特别是本发明的抗体可以通过在合适的宿主细胞中表达本发明的核酸进行生产。在转录调节序列的控制下，例如通过常规方法例如电穿孔，可以用含有本发明的核酸的至少一种表达载体来转染宿主细胞。经转染的或经转化的宿主细胞随后在允许蛋白质表达的条件下进行培养。通过本领域技术人员已知的适当方法，将所表达的蛋白质从细胞中（或从培养基中，如果细胞外表达）回收、分离且任选纯化。例如，蛋白质在细胞裂解后以可溶形式分离，或使用已知技术例如在氯化胍中提取。需要时，本发明的试剂作为融合蛋白产生。此类融合蛋白是上文描述的那些。可替代地，例如，可能希望产生融合蛋白，以增强蛋白质在所选宿主细胞中的表达或改善纯化。包含本发明的试剂的分子可以使用多种常规方法中的任一种进一步纯化，所述常规方法包括但不限于：液相层析例如正相或反相，使用HPLC、FPLC等；亲和层析（例如使用无机配体或单克隆抗体）；尺寸排阻层析；固定金属螯合层析；凝胶电泳；等等。本领域技术人员可以选择最适当的分离和纯化技术，而不背离本发明的范围。此类纯化提供以基本上不含微生物的其他蛋白质性质和非蛋白质性质材料的形式的抗原。
本发明进一步涉及产生本发明的能够结合CFHR1的试剂特别是抗体的细胞系。在单克隆抗体的情况下，细胞系优选是杂交瘤细胞系。
为了在本发明的测定中采用能够结合CFHR1的试剂，特别是抗体，抗体用可检测标记进行标记，和/或能够固定到固相上。因此，在进一步的实施方案中，本发明涉及本发明的能够结合CFHR1的试剂特别是抗体，所述抗体用可检测标记进行标记，和/或能够固定到固相上。
试剂特别是抗体可用于诊断疾病和病症，特别是CFHR1相关疾病或病症。因此，在进一步的实施方案中，本发明涉及能够结合CFHR1的试剂特别是抗体，和/或本发明的一种或多种核酸，和/或本发明的细胞系，用于诊断疾病和病症，特别是CFHR1相关疾病或病症，更优选精神分裂症。
在进一步的实施方案中，本发明涉及能够结合CFHR1的试剂特别是抗体，和/或本发明的一种或多种核酸，和/或本发明的细胞系，用于治疗和/或预防疾病和病症，特别是CFHR1相关疾病或病症，更优选精神分裂症。
在再进一步的实施方案中，能够结合CFHR1的试剂特别是抗体，和/或本发明的一种或多种核酸，和/或本发明的细胞系如下的体外用途：
a）用于测定得自对象的样品中的CFHR1的量和/或浓度，和/或
b）用于预测用甘氨酸再摄取抑制剂治疗的患者的临床利益，和/或
c）用于预测如果用甘氨酸再摄取抑制剂（GRI）治疗，则患有神经发育、神经系统或神经精神性病症的患者的临床利益。
不定冠词“一个”和“一种”在本文中用于指不定冠词的一个/种或超过一个/种（即至少一个/种）语法目标。例如，“标记物”意指一个/种标记物或超过一个/种标记物。术语“至少”用于指示任选可以存在一个/种或超过一个/种进一步的目标。
表达“一个或多个/一种或多种”指示1 - 50，优选1 - 20，还优选2、3、4、5、6、7、8、9、10、12或15。
如本文使用的，术语“标记物”或“生物化学标记物”指用作用于分析个体的测试样品的靶的分子。在一个实施方案中，此类分子靶的例子是蛋白质或多肽。用作本发明中的标记物的蛋白质或多肽考虑包括所述蛋白质的天然存在的变体，以及所述蛋白质或所述变体的片段，特别是可免疫检测的片段。可免疫检测的片段优选包含所述标记物多肽的至少6、7、8、10、12、15或20个邻接氨基酸。本领域技术人员应认识到通过细胞释放或存在于细胞外基质中的蛋白质例如在炎症期间可以是损害的，并且可以变得降解或切割成此类片段。某些标记物以失活形式合成，其随后可以通过蛋白酶解活化。如技术人员应当理解的，蛋白质或其片段还可以作为复合物的一部分存在。此类复合物还可以用作本发明含义中的标记物。另外或可替代地，标记物多肽或其变体可以携带翻译后修饰。优选的翻译后修饰是糖基化、酰化或磷酸化。
在本发明的含义中的“标记物”是这样的标记物，其作为单一标记物，或如果与标记物CFHR1组合，在某些疾病的评价对研究下的诊断问题添加有关信息。分别地，如果给定特异性下，对于某种疾病的评价的灵敏度，或如果在给定灵敏度下，对于某种疾病的评价的特异性，可以通过将所述标记物包括到已经包含标记物CFHR1的标记物实验对象组（标记物组合）内得到改善，则信息视为相关的或具有附加价值。优选地，分别在灵敏度或特异性中的改善在p = 0.05、0.02、0.01或更低的显著性水平上是统计上显著的。
如本文使用的，术语“样品”或“测试样品”指得自对象用于在体外评估目的的生物样品。在本发明的方法中，在本发明的一个实施方案中，样品或患者样品可以包含任何体液。在本发明的一个实施方案中，样品是体液，优选血液、血清、血浆或液体。特别优选的样品是血清和血浆。对象是动物，优选人。
CFHR1特别是可溶形式的CFHR1的蛋白质浓度在体外在适当样品中进行测定。根据本发明的实施方案，“CFHR1”分别包含根据SEQ ID No. 2的CFHR1的变体或同种型，特别是对于SEQ ID No. 2指示的变体，即变体H157Y、L159V、E175Q和A296V。
术语“CFH”涵盖所有CFH同种型，包括根据SEQ ID No. 1的CFH蛋白质同种型1和2（指示CFHL1）。
“约”应理解为意指所示值+/- 10%标准差。
本领域技术人员已知，在一个实施方案中，根据本发明的方法检测的CFHR1与参考浓度或量相比较。此类参考浓度可以使用阴性参考样品、阳性参考样品、或包含这些类型对照中的一种或超过一种的混合参考样品进行测定。阴性参考样品优选包含来自无某种疾病的诊断、表面健康的个体的样品，或包含的CFHR1量或浓度对应于无某种疾病的诊断、表面健康的个体的样品中的CFHR1量或浓度的样品。阳性参考样品优选包含来自具有疾病诊断的对象的样品，或包含的CFHR1量或浓度对应于具有疾病诊断的对象的样品中的CFHR1量或浓度的样品。
表达“比较测定的浓度与参考浓度或量”仅用于进一步举例说明无论如何对于技术人员显而易见的那种。参考浓度在对照样品中确定。对照样品可以是内部或外部对照样品。在一个实施方案中，使用内部对照样品，即标记物水平在测试样品中以及取自相同对象的一个或多个其他样品中进行评价，以测定在所述标记物的水平中是否存在任何变化。在另一个实施方案中，使用外部对照样品。对于外部对照样品，衍生自个体的样品中的标记物的存在或量与其在个体中的存在或量相比较，所述个体已知患有给定状况，或已知处于给定状况的危险中；或已知不含给定状况的个体，即“正常个体”。例如，患者样品中的标记物浓度可以与已知与某种疾病的特异性过程相关的浓度相比较。
通常，样品的标记物浓度与诊断直接或间接关联，并且标记物浓度例如用于测定个体是否处于某种疾病的危险中。
可替代地，在判断疾病进展的危险或患者的随访中，样品的标记物浓度可以例如与已知与下述相关的标记物浓度相比较：某种疾病中对疗法的应答、某种疾病的诊断、某种疾病的严重性的评价、对某种疾病选择适当药物的指导。取决于预期诊断用途，选择适当的对照样品，并且在其中确定标记物的对照或参考值。本领域技术人员应当理解，在一个实施方案中，此类对照样品得自参考群体，其是年龄匹配且不含混淆疾病的。如另外对于技术人员明确的，在对照样品中确定的绝对标记物值取决于使用的测定。优选地，来自适当参考群体的100个充分表征的个体的样品用于确定对照（参考）值。还优选参考群体可以选自为由20、30、50、200、500或1000个体组成。健康个体代表用于确定对照值的优选参考群体。
术语“测量”或“测定”优选包含定性、半定量或定量测量。在本发明中，CFHR1优选在体液样品中作为定量测量进行测量，即测定CFHR1的不同浓度。
在优选实施方案中，如在对照组或对照群体中测定的CFHR1的浓度或量值用于确定截断值或参考范围。在一个实施方案中，高于此类截断值或在参考范围的更高末端外的值视为升高的，或指示某种疾病的存在，或指示更严重形式的某种疾病的存在。在一个实施方案中，低于此类截断值或在参考范围的更低末端外的值视为降低的，或指示某种疾病或病症的不存在，或指示更严重形式的某种疾病的不存在。
在本发明的一个实施方案中，确定固定截断值。此类截断值选择为匹配目的诊断问题。在一个实施方案中，截断设为导致90%的特异性，优选设为导致95%的特异性，更优选设为导致98%的特异性。
在一个实施方案中，截断设为导致90%的灵敏度，还优选截断设为导致95%的灵敏度，还优选截断设为导致98%的灵敏度。
在一个实施方案中，对于在对照组或对照群体中测定的CFHR1的量或浓度值用于确定参考范围。在优选实施方案中，如果测定的值超过参考范围的90%百分位数，则CFHR1的浓度或量视为升高的。在进一步优选的实施方案中，如果测定的值超过参考范围的95%百分位数、96%百分位数、97%百分位数或97.5%百分位数，则CFHR1的蛋白质浓度视为升高的。
高于截断值的值可以例如指示某种疾病的存在，或对治疗的应答。低于截断值的值可以例如指示某种疾病的不存在，或对治疗的不应答。
如上所述，高于截断值的CFHR1值指示患有神经发育、神经系统或神经精神性病症的患者对GRI治疗的应答。
在进一步优选的实施方案中，CFHR1的测量是定量测量。在进一步的实施方案中，CFHR1的浓度与潜在的诊断问题关联。
在某些背景下，由患有已经证实疾病的患者提供的样品可以用作阳性对照样品，且优选与待研究的样品平行测定。在此类背景下，关于阳性对照样品中的标记物蛋白质CFHR1的阳性结果指示测试操作已在技术水平上工作。
如技术人员应当理解的，任何此类评价在体外作出。其后弃去样品（测试样品）。样品仅用于本发明的体外诊断方法，并且样品的材料不转移回患者体内。通常，样品是体液样品，例如血液、血清、血浆或液体。根据本发明的方法基于得自个体的液体或体液样品，且基于此类样品中的CFHR1的蛋白质浓度的体外测定。如本文使用的，“个体”、“对象”或“患者”指单一动物，特别是人。
优选地，CFHR1的蛋白质浓度通过使用本发明的试剂盒，由液体样品在体外特异性测定。
本发明的发明人惊讶地能够检测体液样品中的CFHR1。在优选实施方案中，根据本发明的方法用血清作为样品材料进行实践。在进一步优选的实施方案中，根据本发明的方法用血浆作为样品材料进行实践。在进一步优选的实施方案中，根据本发明的方法用全血作为样品材料进行实践。在进一步优选的实施方案中，根据本发明的方法用液体作为样品材料进行实践。
在进一步的实施方案中，本发明涉及CFHR1作为由得自个体的血液、血清、血浆或液体样品体外评价某种疾病的标记物分子的用途，其中血清或血浆是优选的。
理想的诊断情况将是其中单一事件或过程促使各自疾病的情形，如例如在传染病中。在所有其他情况下，正确诊断可以是非常困难的，尤其当疾病的病因学并未得到充分了解时，如关于精神分裂症的情况。如技术人员应当理解的，对于给定多因素疾病，如例如精神分裂症，没有生物化学标记物是具有100%特异性和同时100%灵敏度诊断的。相反，生物化学标记物用于以某一可能性或预测值评价潜在的诊断问题，例如疾病的存在、不存在或严重性。因此，在常规临床诊断中，一般多种临床症状和生物标记物在潜在疾病的评价中一起考虑。技术人员完全熟悉数学/统计方法，其照常规用于计算待评价的诊断问题的相对危险或可能性。在常规临床实践中，多种临床症状和生物学标记物一般通过医生在潜在疾病的诊断、治疗和管理中一起考虑。
除非另有定义，否则本文使用的技术和科学术语具有与本发明所属领域普通技术人员通常理解相同的含义。Singleton等人，Dictionary of Microbiology and Molecular Biology第2版，J. Wiley & Sons， New York，N.Y.（1994）；March，Advanced Organic Chemistry Reactions，Mechanisms and Structure，第4版，John Wiley & Sons， New York，N.Y.（1992）；Lewin，B.，Genes V，由Oxford University Press出版（1994），ISBN 0-19-854287-9；Kendrew，J.等人（编辑），The Encyclopedia of Molecular Biology，由Blackwell Science Ltd.出版（1994），ISBN 0-632-02182-9；和Meyers，R.A.（编辑），Molecular Biology and Biotechnology: a Comprehensive Desk Reference，由VCH Publishers，Inc.出版（1995），ISBN 1-56081-569-8为本领域技术人员提供了在本申请中使用的许多术语的一般指导。
除非另有说明，否则本发明的实践采用分子生物学（包括重组技术）、微生物学、细胞生物学、生物化学和免疫学的常规技术，其在本领域技术内。此类技术在文献中充分说明，例如Sambrook等人，Molecular Cloning: A Laboratory Manual，第二版（1989）；Gait，M.J.，Oligonucleotide Synthesis（1984）；Freshney，R.I.（编辑），Animal Cell Culture（1987）；Methods in Enzymology，Academic Press，Inc.；Ausubel，F.M.等人（编辑），Current Protocols in Molecular Biology,（1987）和定期更新；Mullis等人（编辑），PCR: The Polymerase Chain Reaction（1994）。
附图描述
图1显示了CFH和CFH相关蛋白质的蛋白质结构（Józsi M，Zipfel PF “Factor 8 family proteins and human diseases” Trends Immunol. 2008；29（8）:380-7）。
图2显示了单克隆抗体<CFHR1>M-5.1.5的重链序列，其中CDR区有下划线。序列对应于SEQ ID NO: 15（DNA）和SEQ ID NO: 16（蛋白质）。
图3 显示了单克隆抗体<CFHR1>M-5.1.5的轻链序列，其中CDR区有下划线。序列对应于SEQ ID NO: 17（DNA）和SEQ ID NO: 18（蛋白质）。
图4显示了重组CFHR1- CFHR5和CFHL1-衍生物的氨基酸序列。
图5显示了单克隆抗体<CFHR1>M-4.1.3的重链序列，其中CDR区有下划线。序列对应于SEQ ID NO: 24（DNA）和SEQ ID NO: 25（蛋白质）。
图6显示了单克隆抗体<CFHR1>M-4.1.3的轻链序列，其中CDR区有下划线。序列对应于SEQ ID NO: 26（DNA）和SEQ ID NO: 27（蛋白质）。
图7显示了单克隆抗体<CFHR1>M-4.2.53的重链序列，其中CDR区有下划线。序列对应于SEQ ID NO: 28（DNA）和SEQ ID NO: 29（蛋白质）。
图8显示了单克隆抗体<CFHR1>M-4.2.53的轻链序列，其中CDR区有下划线。序列对应于SEQ ID NO: 30（DNA）和SEQ ID NO: 31（蛋白质）。
图9显示了单克隆抗体<CFHR1>M-4.2.74的重链序列，其中CDR区有下划线。序列对应于SEQ ID NO: 32（DNA）和SEQ ID NO: 33（蛋白质）。
图10显示了单克隆抗体<CFHR1>M-4.2.74的轻链序列，其中CDR区有下划线。序列对应于SEQ ID NO: 34（DNA）和SEQ ID NO: 35（蛋白质）。
图11显示了单克隆抗体<CFHR1>M-5.3.23的重链序列，其中CDR区有下划线。序列对应于SEQ ID NO: 36（DNA）和SEQ ID NO: 37（蛋白质）。
图12显示了单克隆抗体<CFHR1>M-5.3.23的轻链序列，其中CDR区有下划线。序列对应于SEQ ID NO: 38（DNA）和SEQ ID NO: 39（蛋白质）。
图13显示了单克隆抗体MAB<CFH/CFHR1>M-L20/3的重链序列，其中CDR区有下划线。序列对应于SEQ ID NO: 40（DNA）和SEQ ID NO: 41（蛋白质）。
图14显示了单克隆抗体MAB<CFH/CFHR1>M-L20/3的轻链序列，其中CDR区有下划线。序列对应于SEQ ID NO: 42（DNA）和SEQ ID NO: 43（蛋白质）。
图15显示了使用MAK<CFHR1>M-5.1.5作为一抗和PAK<M-IgG>S-IgG-POD作为二抗执行的蛋白质印迹。泳道1 MagicMark XP尺寸标准，泳道4血清纯化的CFH（200ng/孔），泳道5血清纯化的CFH（2000ng/孔）。在37 kDa处的双重条带对应于CFHR1。在220 kDa周围的污点是由于为了实现纯化的CFH中的CFHR1-剩余部分的更佳检测的超载孔。
序列描述
SEQ ID NO: 1显示了人补体因子H蛋白质同种型1（CFH）以及同种型2（CFHL1）的氨基酸序列；SwissProt数据库登录号：P08603-1和P08603-2。
SEQ ID NO: 2显示了人补体因子H相关蛋白质1（CFHR1）的氨基酸序列；SwissProt数据库登录号：Q03591。
SEQ ID NO: 3显示了人补体因子H相关蛋白质2（CFHR2）的氨基酸序列；SwissProt数据库登录号：P36980。
SEQ ID NO: 4显示了人补体因子H相关蛋白质3（CFHR3）的氨基酸序列；SwissProt数据库登录号：Q02985。
SEQ ID NO: 5显示了人补体因子H相关蛋白质4A（CFHR4A）的氨基酸序列；SwissProt数据库登录号：C9J7J7。
SEQ ID NO: 6显示了人补体因子H相关蛋白质4B（CFHR4B）的氨基酸序列；SwissProt数据库登录号：Q92496。
SEQ ID NO: 7显示了人补体因子H相关蛋白质5（CFHR5）的氨基酸序列；SwissProt数据库登录号：Q9BXR6。
SEQ ID NO: 8显示了CFHR1_1,2-GS-His8的氨基酸序列，其用作本发明的实施例中的免疫原。
SEQ ID NO: 9显示了CFHR1_1-5的氨基酸序列，其用作本发明的实施例中的校准物材料。
SEQ ID NO: 10显示了CFHR2-GS-Avi-GS-His8的氨基酸序列。
SEQ ID NO: 11显示了CFHR3-GS-Avi-GS-His8的氨基酸序列。
SEQ ID NO: 12显示了CFHR4-GS-Avi-GS-His8的氨基酸序列，其中使用CFHR4变体B。
SEQ ID NO: 13显示了CFHR5-GS-Avi-GS-His8的氨基酸序列。
SEQ ID NO: 14显示了CFHL1-GS-Avi-GS-His8的氨基酸序列。
SEQ ID NO: 15显示了本发明的单克隆抗体<CFHR1>M-5.1.5 DNA的重链的cDNA序列。
SEQ ID NO: 16显示了本发明的单克隆抗体<CFHR1>M-5.1.5的重链的氨基酸序列。
SEQ ID NO: 17显示了本发明的单克隆抗体<CFHR1>M-5.1.5 DNA的轻链的cDNA序列。
SEQ ID NO: 18显示了本发明的单克隆抗体<CFHR1>M-5.1.5的轻链的氨基酸序列。
SEQ ID No. 19显示了本发明的单克隆抗体<CFHR1>M-5.1.5的重链的hCDR1氨基酸序列。
SEQ ID No. 20显示了本发明的单克隆抗体<CFHR1>M-5.1.5的重链的hCDR2氨基酸序列。
SEQ ID No. 21显示了本发明的单克隆抗体<CFHR1>M-5.1.5的重链的hCDR3氨基酸序列。
SEQ ID No. 22显示了本发明的单克隆抗体<CFHR1>M-5.1.5的轻链的LCDR1氨基酸序列。
SEQ ID No. 23显示了本发明的单克隆抗体<CFHR1>M-5.1.5的轻链的LCDR3氨基酸序列。
SEQ ID NO: 24显示了本发明的单克隆抗体<CFHR1>M-4.1.3 DNA的重链的cDNA序列。
SEQ ID NO: 25显示了本发明的单克隆抗体<CFHR1>M-4.1.3的重链的氨基酸序列。
SEQ ID NO: 26显示了本发明的单克隆抗体<CFHR1>M-4.1.3 DNA的轻链的cDNA序列。
SEQ ID NO: 27显示了本发明的单克隆抗体<CFHR1>M-4.1.3的轻链的氨基酸序列。
SEQ ID NO: 28显示了本发明的单克隆抗体<CFHR1>M-4.2.53 DNA的重链的cDNA序列。
SEQ ID NO: 29显示了本发明的单克隆抗体<CFHR1>M-4.2.53的重链的氨基酸序列。
SEQ ID NO: 30显示了本发明的单克隆抗体<CFHR1>M-4.2.53 DNA的轻链的cDNA序列。
SEQ ID NO: 31显示了本发明的单克隆抗体<CFHR1>M-4.2.53的轻链的氨基酸序列。
SEQ ID NO: 32显示了本发明的单克隆抗体<CFHR1>M-4.2.74 DNA的重链的cDNA序列。
SEQ ID NO: 33显示了本发明的单克隆抗体<CFHR1>M-4.2.74的重链的氨基酸序列。
SEQ ID NO: 34显示了本发明的单克隆抗体<CFHR1>M-4.2.74 DNA的轻链的cDNA序列。
SEQ ID NO: 35显示了本发明的单克隆抗体<CFHR1>M-4.2.74的轻链的氨基酸序列。
SEQ ID NO: 36显示了本发明的单克隆抗体<CFHR1>M-5.3.23 DNA的重链的cDNA序列。
SEQ ID NO: 37显示了本发明的单克隆抗体<CFHR1>M-5.3.23的重链的氨基酸序列。
SEQ ID NO: 38显示了本发明的单克隆抗体<CFHR1>M-5.3.23 DNA的轻链的cDNA序列。
SEQ ID NO: 39显示了本发明的单克隆抗体<CFHR1>M-5.3.23的轻链的氨基酸序列。
SEQ ID NO: 40显示了本发明的试剂盒的单克隆抗体MAB<CFH/CFHR1>M-L20/3 DNA的重链的cDNA序列。
SEQ ID NO: 41显示了本发明的试剂盒的单克隆抗体MAB<CFH/CFHR1>M-L20/3的重链的氨基酸序列。
SEQ ID NO: 42显示了本发明的试剂盒的MAB<CFH/CFHR1>M-L20/3 DNA的轻链的cDNA序列。
SEQ ID NO: 43显示了本发明的试剂盒的MAB<CFH/CFHR1>M-L20/3的轻链的氨基酸序列。
实施例
实施例1：用于CFHR1特异性测定的抗体
对于CFHR1特异性测定的开发，使用下述单克隆抗体：MAB<CFH/CFHR1>M-L20/3（供应商: Thermo Scientific、目录号：GAU 020-03-02），MAB<CFHR1>M-442127（供应商: R&D-systems、目录号: MAB4247），以及分别根据本发明的内部开发的单克隆抗体MAB<CFHR1>M-4.1.3、MAB<CFHR1>M-4.2.53、MAB<CFHR1>M-4.2.74、MAB<CFHR1>M-5.3.23和MAB<CFHR1>M-5.1.5，其在实施例3、4、10和12中描述。
实施例2：重组CFHR1- CFHR5和CFHL1-衍生物的产生
通过质粒DNA转染的瞬时基因表达（TGE）是在哺乳动物培养中产生蛋白质的快速策略。编码CFHR1、CFHR2、CFHR3、CFHR4B、CFHR5以及CFHL1的cDNA购自Source BioScience LifeSciences。将编码序列PCR扩增，且通过标准重组克隆技术，克隆到pM1MT（Roche Applied Science）内编码Avi-GS-His标签的盒内，以便获得如图4中列出的蛋白质，除了CFHR4A之外。不产生CFHR4A，因为该分子的SCR-1的蛋白质序列等同于CFHR4B的SCR1-2，并且CFHR4A的SCR2与CFHR4B 92%相同，因此交叉反应性假定为分别对于CFHR4A和CFHR4B两者相同。
通过使用pM1MT，上述编码序列的表达处于人巨细胞病毒（CMV）立即早期增强子/启动子区、用于增强表达的内含子A和BGH多腺苷酸化信号的控制下。
根据制造商的建议，使用QuikChange Site-Directed Mutagenesis（Stratagene），通过将终止密码子引入CFHR1_1-5-GS-His8表达构建体内，生成对应于全长成熟CFHR1的标签更少的CFHR1_ 1-5。所有突变均通过自动化测序（Sequiserve）进行验证。
对于在人胚肾（HEK）293细胞中的瞬时基因表达，我们使用在摇瓶中的无血清和悬浮适应的HEK293细胞系，其用表达质粒（0.5 - 1 mg/L细胞培养物）以大约1-2 x 106 vc/ml进行转染，所述表达质粒通过293-FreeTM（Merck）转染试剂复合。转染后大约七天，收获培养上清液用于下游过程：在针对50 mM K-PO4（pH 7.5）、35 mM NaCl（12 mS）渗滤，添加完全蛋白酶抑制剂混合物片剂（Roche）和Benzonase?（Merck）处理后，通过Ni-NTA（Superflow，Qiagen）层析步骤，随后为尺寸排阻层析，来纯化加上His标签的衍生物。最后，蛋白质针对50 mM Hepes pH7.5、150 mM NaCl、 6.5%蔗糖、10 mM Cystein进行透析，并且贮存于-80℃下，导致>95%纯度的功能和稳定的蛋白质级分，如通过相对滴度测定、分析凝胶过滤和/或SDS-PAGE显示的。
实施例3：单克隆抗体MAB<CFHR1>M-5.1.5 MAB<CFHR1>M-4.1.3、MAB<CFHR1>M-4.2.53、MAB<CFHR1>M-4.2.74和MAB<CFHR1>M-5.3.23的产生
3.1.小鼠免疫接种
分别8-12周龄的雌性BALB/C和/或NMRI小鼠用重组CFHR1_1,2-GS-His8抗原以三周间隔免疫接种三次，所述抗原具有根据SEQ ID No. 8的序列。第一次注射用在完全弗氏佐剂中乳化的30μg抗原腹膜内执行。第二次免疫接种用与Abisco佐剂（Isconova）混合的10μg抗原皮下执行，并且第三次注射用5 μg抗原腹膜内发生。末次免疫接种后十天，获得血液且在免疫接种小鼠的血清中测定抗体滴度。在融合前三天，所选择的小鼠给予溶解于PBS中的50 μg重组CFHR1_1,2_GS_His8的静脉内加强注射。
3.2.杂交瘤生产
遵循Galfre和Milstein（1981）Meth. Enzymol. 73，3-46的操作，将免疫接种小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞融合。将1x108免疫接种小鼠的脾细胞与2x107骨髓瘤细胞（P3X63-Ag8-653，ATCC CRL1580）混合且离心。细胞随后在含/不含FCS的RPMI 1640培养基中洗涤一次，并且再次以400 g离心。弃去上清液，并且通过轻拍使细胞沉积物轻轻松散，在一分钟内将1 ml PEG加入其中，并且通过在37℃温水浴中轻轻摇动与细胞混合。随后，在5分钟内逐滴加入5 ml含/不含FCS的RPMI 1640培养基，并且通过连续摇动在37℃温水浴中混合。在添加25 ml含/不含FCS的RPMI 1640培养基后，将细胞以400 g离心10分钟。细胞团块在RPMI 1640培养基、5% FCS中吸收，并且接种到重氮丝氨酸-次黄嘌呤选择培养基（在补充有5% FCS的RPMI1640中的5.7 μM重氮丝氨酸、100 μM次黄嘌呤、2 mM谷氨酰胺、1 mM丙酮酸钠、50 μM 2-巯基乙醇和100 μM非必需氨基酸）内。小鼠重组白细胞介素6（50U/ml）作为生长因子加入培养基中。在10天后，原代培养物就CFHR1结合抗体的合成进行测试。借助于荧光激活细胞分选（FACS），将CFHR1结合杂交瘤原代培养物克隆到微量滴定板中。
3.3.所产生抗体的结合和特异性的测定
通过间接酶联免疫吸附测定（ELISA），测定杂交瘤培养上清液中的MAb产生。链霉抗生物素蛋白包被的微量滴定板（Microcoat、Bernried、德国）与在温育缓冲液（磷酸盐缓冲盐水pH 7.3、0,5% Byco C）中1:2000稀释的MAB<CFH/CFHR1>M-L20/3单克隆抗体的生物素化的Fab片段一起在室温下温育1小时。在用洗涤缓冲液（0,9% NaCl溶液、0,05% Tween 20）洗涤后，微量滴定板与在温育缓冲液中稀释的100ng/ml纯化的重组CFHR1和CFH蛋白质一起在室温下温育1小时。将微量滴定板再次洗涤，并且将杂交瘤上清液加入包被的孔，并且在室温下温育1小时。在洗涤后，通过与在温育缓冲液中1:5000稀释的山羊抗小鼠IgG过氧化物酶缀合物（Calbiochem,德国）的1小时温育，随后为在进一步洗涤步骤后，与ABTS溶液（Roche，德国）的底物反应，检测结合的单克隆抗体（MAb）。在20-30分钟后，在ELISA阅读器中在405/490 nm处测量颜色变化。选择针对CFH无任何交叉反应性的一些CFHR1特异性克隆。
3.4. 样品IgG的产生
使所选的杂交瘤克隆适应补充有0.1% Nutridoma CS（Roche，德国）的无血清培养基（HyClone ADCF-MAb；Thermo Fisher），并且在175cm2组织培养瓶中培养至1x105细胞/ml的密度。得自预培养物的2x107细胞重悬浮于10 ml新鲜培养基中，并且接种到CELLine经典1000生物反应器（Integra Biosciences，德国）的细胞区室内。将500ml新鲜培养基加入培养基区室中，并且使细胞在CO2温箱中温育6至7天。在初始温育后，每周执行两次在培养基区室内的培养基更换，以及从细胞区室中收获5 ml杂交瘤上清液。将所收获的细胞悬浮液以400 g离心，并且收集无细胞上清液用于后续IgG纯化。克隆之一命名为克隆5.1.5对应于产生MAB<CFHR1>M-5.1.5的克隆。其他克隆分别对应于产生MAB<CFHR1>M-4.1.3、MAB<CFHR1>M-4.2.53、MAB<CFHR1>M-4.2.74和MAB<CFHR1>M-5.3.23的克隆。
实施例4：抗体MAB<CFH /CFHR1>M-L20/3、MAB<CFHR1>M-442127、MAB<CFHR1>M-4.1.3和MAB<CFHR1>M-5.1.5的BiaCore分析
抗体MAB<CFH/CFHR1>M-L20/3、MAB<CFHR1>M-442127、MAB<CFHR1>M-4.1.3和MAB<CFHR1>M-5.1.5在BiaCore上进行分析。包被有兔抗小鼠IgG的芯片CM5用于结合纯化的单克隆小鼠抗体。在下一步中，加入天然CFH或者根据SEQ ID No.: 9 - 13的重组CFHR1、CFHR2、CFHR3、CFHR4B或CFHR5蛋白质，以测定不同抗体的结合亲和力。结果显示于表1中。
表1：不同CFHR1结合抗体的结合亲和力（以nM表示的KD）
n.d. = 无法检测。
抗体MAB<CFH/CFHR1>M-L20/3显示针对CFHR1的高反应性，以及与CFH和CFHR5的较低亲和力。令人惊讶的是，针对CFHR1的亲和力高于针对CFH的反应性，尽管该抗体通过用CFH免疫接种生成。三种CFHR1结合抗体MAB<CFHR1>M-442127、MAB<CFHR1>M-5.1.5和MAB<CFHR1>M-4.1.3显示不同的反应模式。抗体MAB<CFHR1>M-5.1.5和MAB<CFHR1>M-4.1.3分别揭示与CFHR1的高反应性，以及针对CFHR2的小反应性，而无CFH和CFHR5的任何可测量的结合。相反地，抗体MAB<CFHR1>M-442127显示针对CFHR2和CFHR5无交叉反应性，但CFH的低结合。由于与CFH的交叉反应性，该抗体较不适合开发特异性CFHR1测定。因为MAB<CFHR1>M-5.1.5和MAB<CFHR1>M-4.1.3没有针对CFH和CFHR5的交叉反应性，所以CFHR1特异性测定能够与MAB<CFH/CFHR1>M-L20/3组合。
因此，关于与MAB<CFHR1>M-5.1.5相比较的交叉反应性概况，对于MAB<CFHR1>M-4.1.3观察到相似结果。然而，与MAB<CFHR1>M-5.1.5相比较，MAB<CFHR1>M-4.1.3对CFHR1的亲和力更低。因此，MAB<CFHR1>M-4.1.3抗体也可以与MAB<CFH/CFHR1>M-L20/3组合用于本发明的试剂盒、测定和方法中。
实施例5：单克隆MAB<CFH/CFHR1>M-L20/3的Fab片段的生物素化；化学计量学1:1.3
使用木瓜蛋白酶（3mU/mg IgG）消化克隆L20/3（供应商：Thermo Scientific，目录号：GAU 020-03-02）的单克隆小鼠IgG，以产生Fab片段。消化的Fc片段通过在DAE-琼脂糖上层析进行消除。Fab的纯化通过剩余Fc的Fcγ吸收，随后为Superdex 200尺寸排阻。
向10 mg/ml L20/3-Fab片段的100 mM KPO4 pH 8.5溶液中，加入50 ul生物素-N-羟基琥珀酰亚胺（在DMSO中3.6 mg/ml）/ml。在室温下45分钟后，样品针对100 mM KPO4、150 mM NaCl，pH 7.2进行透析且冻干。
实施例6：单克隆 MAB<CFHR1>M-442127以及所有内部单克隆MAB<CFHR1>M即5.1.5、4.1.3.、4.2.53、4.2.74和5.3.23分别的钌化；化学计量学1:3
分别向5 mg/ml单克隆小鼠IgG（MAB<CFHR1>M-442127；克隆442127，供应商：R&D-systems，目录号: MAB4247或如标题中列出的内部MAB<CFHR1>的100 mM KPO4，pH 8.5溶液中，加入125 ug钌-（bpy）2-bpyCO-Osu。在室温下75分钟后，通过添加10 mM赖氨酸停止钌化。对于聚集物的分离，从Superdex 200尺寸排阻层析收集适当的样品级分。
实施例7：使用生物素化的L20/3 Fab片段和钌化的MAB<CFHR1>M-5.1.5-Ru的CFHR1测定1
使用Elecsys? cobas分析仪e601，开发用于特异性测量特别是人血清或血浆样品中的CFHR1的电化学发光免疫测定（ECLIA）。Elecsys CFHR1免疫测定是电化学发光免疫测定（ECLIA），其经由夹心原理起作用。在测定中包括两种抗体，即单克隆抗体MAB<CFH/CFHR1>M-L20/3的生物素化的Fab片段（L20/3-Bi；捕获抗体），以及钌化的单克隆抗CFHR1抗体MAB<CFHR1>M-5.1.5（MAB<CFHR1>M-5.1.5-Ru；检测抗体），其与样品中的CFHR1形成夹心免疫测定复合物。复合物随后与固相链霉抗生物素蛋白包被的微粒结合。微粒磁捕获到电极的表面上，并且对电极应用电压诱导化学发光发射，其通过光电倍增管测量用于读出。结果经由仪器特异性校准曲线进行测定。
样品使用通用稀释液（Roche Diagnostics GmbH， No. 03183971）1:400稀释。应用测定方案10，允许10 ul预稀释样品与80 ul在反应缓冲液（Hepes 50 mM，NaCl  150 mM；Thesit/Polidocanol 0.1%；EDTA 1mM；牛血清白蛋白0.5%）中含有1.5 μg/ml生物素化的MAB<CFH/CFHR1>M-L20/3 Fab片段的试剂1（R1），以及在相同反应缓冲液中含有1.0 μg/ml钌化MAB<CFHR1>M-5.1.5的试剂2（R2）预温育9分钟。在第二步中，加入30 μl微粒悬浮液，并且进一步温育9分钟。在温育期间，形成抗体-分析物-抗体夹心，其与微粒结合。最后，将微粒转移至Elecsys系统的检测室，用于信号生成和读出。为了校准，在通用稀释液（Roche-Id. 03609987 190）中制备具有不同浓度的重组CFHR1（0 ng/ml、7,5 ng/ml、15,25 ng/ml、30,25 ng/ml、60,75 ng/ml和121,2 ng/ml）的一系列校准物。校准曲线的等式通过非线性最小二乘法曲线拟合（RCM-Rodbard）进行计算，并且用于将信号读出转换成相应的浓度值。结果乘以测定的稀释因子（= 400）。
实施例8：分别使用生物素化的L20/3 Fab片段以及MAB<CFHR1>M-442127-Ru、MAB<CFHR1>M-4.1.3-Ru、MAB<CFHR1>M-4.2.53-Ru、MAB<CFHR1>M-4.2.74-Ru和MAB<CFHR1>M-5.3.23-Ru的其他CFHR1测定的描述
对于这些不同夹心测定，单克隆抗体Fab L20/3-Bi的相同生物素化的Fab片段（捕获抗体）用于与实施例7中相同的缓冲液组成中。关于CFHR1测定1的差异是分别使用钌化的（=-Ru）单克隆抗CFHR1抗体MAB<CFHR1>M-442127-Ru、MAB<CFHR1>M-4.1.3-Ru、MAB<CFHR1>M-4.2.53-Ru、MAB<CFHR1>M-4.2.74-Ru和MAB<CFHR1>M-5.3.23-Ru。这些抗体还分别以0.5 mg/L、2 mg/L、2 mg/L、1,5 mg/L和2 mg/L的浓度用于试剂2（（R2），Hepes 50 mM、NaCl  150 mM；Thesit/Polidocanol 0.1%；EDTA 1mM；牛血清白蛋白0.5%）中。测定操作和校准根据CFHR1测定1（参见实施例7）。
实施例9：内部CFHR1测定与CFH、CFHR2和CFHR5的交叉反应性
对于实施例7和8的所有5种内部CFHR1测定，通过测量潜在交叉反应的血清组分CFH（内部纯化的天然CFH）以及重组产生的CFHR2和CFHR5蛋白质的不同浓度，来测定针对最关键的CFH相关蛋白质的交叉反应性。对于该实验，将潜在交叉反应的蛋白质溶解于测定稀释剂中，并且根据测定描述进行测量。结果显示于表2中。
表2：潜在交叉反应的蛋白质的分析
。
所有5个测定均显示相同的交叉反应性。不存在针对CFHR2和CFHR5的交叉反应性，和存在针对CFH的0.1%的极低反应性。由于纯化的CFH显示CFHR1杂质的事实（参见图15的蛋白质印迹分析），针对CFH的真实（交叉）反应性（如果存在的话）低于0.1%。
实施例10：两种所选CFHR1测定与所有其他CFH相关蛋白质的交叉反应性
通过测量不同浓度的潜在交叉反应的血清组分CFH（纯化的天然CFH，No. 4400-9554，AbDSerotec）以及加上标签的重组蛋白质CFHL1、CFHR2、CFHR3、CFHR4B和CFHR5，分别测定使用实施例7和8的MAK<CFHR1>M-442127的优选CFHR1测定（L20/3-Bi/5.1.5-Ru）和CFHR测定的（交叉）反应性。对于该实验，使用来自AbDSerotec的纯化CFH，因为该材料显示极低的CFHR1污染。将潜在交叉反应的蛋白质溶解于测定稀释剂中，并且根据测定描述进行测量。这些结果显示于表3中。另外，进行第二个实验，以特异性检查针对CFH的交叉反应性。在两个测定中选择且测量从具有CFHR1缺失的患者中收集的样品；即其中不存在CFHR1的样品。结果进一步显示于下表4中。
表3：潜在交叉反应的蛋白质的分析
。
对于使用本发明的单克隆抗体MAB<CFHR1>M-5.1.5的特异性内部CFHR1测定（实施例7），对于CFH未测定显著交叉反应性，并且未测定针对所有其他CFH相关蛋白质CFHL1、CFHR2、CFHR3、CFHR4B、CFHR5的交叉反应性。测定1的定量极限评价为< 0.25 μg/ml，并且对于作为交叉反应物的CFH测量的CFHR1浓度低于测量范围。另一方面，使用CFHR1特异性抗体MAB<CFHR1>M-442127的CFHR1测定2显示针对CFH的一些交叉反应性，大约为0.8 - 1.0%。这是临界值，因为血清中的CFH浓度显著高于CFHR1浓度。
因此，确定了用于CFHR1的特异性测定。
表4：从具有CFHR1缺失的患者中收集的人血清样品的结果
。
实施例11：CFHR1参考材料的产生
具有根据SEQ ID No. 9的序列的重组CFHR1_1-5（AA19-330，无亲和力标签）在人胚肾（HEK）293细胞中瞬时表达。通过免疫亲和层析，使用固定到柱基质上对于CFHR1特异性的单克隆抗体，进一步纯化澄清的细胞培养上清液。亲和柱装载有重组CFHR1，并且用10mM Tris/HCl、20mM NaCl pH 8.5和10mM Tris/HCl、500mM NaCl、0.05% Tween 20 pH 8.5洗涤，以去除非特异性结合的蛋白质。用1M丙酸从柱中洗脱RecCFHR1，并且使用2M精氨酸/HCl pH 9.2，将洗脱物的pH调整至8.5。在针对5mM磷酸钾、5mM NaCl pH 8.5透析后，在离子交换层析柱（Resurce Q，GE Health Care Life Sciences）上捕获亲和纯化的recCFHR1，且在NaCl梯度中洗脱。产物针对贮存缓冲液（50mM磷酸钾、150mM NaCl pH 8.5）进行透析，通过使用0.2μm Supor? PES膜盘式过滤器（Pall Corporation）的过滤进行澄清，并且冷冻贮存于-80℃下。
实施例12：MAB<CFHR1>M-5.1.5、MAB<CFHR1>M-4.1.3、MAB<CFHR1>M-4.2.53、MAB<CFHR1>M-4.2.74和MAB<CFHR1>M-5.3.23的序列分析
根据Doeneke等人（1997）Leukemia 11,1787-1792，使用第二代5’/3’ RACE 试剂盒（Roche Applied Science），通过RACE-PCR执行来自实施例3和4中鉴定的克隆的小鼠单克隆抗体<CFHR1>M-5.1.5的序列分析。序列分析的结果显示于图2和3中。序列显示于SEQ ID No. 15 - 18中。
相应地执行实施例3中鉴定的小鼠单克隆抗体MAB<CFHR1>M-4.1.3、MAB<CFHR1>M-4.2.53、MAB<CFHR1>M-4.2.74和MAB<CFHR1>M-5.3.23的序列分析。序列分析的结果显示于图5 - 12中。氨基酸和DNA序列显示于SEQ ID No. 24 - 39中。
                         序列表
 
<110>  Roche Diagnostics GmbH
       F. Hoffmann-La Roche AG
       Roche Diagnostics Operations Inc.
 
<120>  用于补体因子H相关蛋白质1检测的试剂、试剂盒和方法
 
<130>  R68468PC
 
<150>  EP 13 156 823.0
<151>  2013-02-26
 
<160>  43   
 
<170>  PatentIn version 3.5
 
<210>  1
<211>  1231
<212>  PRT
<213>  小家鼠
 
 
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (1)..(1231)
<223>  人补体因子H (CFH)和同种型2 (CFHL1)
 
<220>
<221>  变体
<222>  (62)..(62)
<223>  V -> I
 
<220>
<221>  变体
<222>  (78)..(78)
<223>  R -> G
 
<220>
<221>  变体
<222>  (127)..(127)
<223>  R -> L
 
<220>
<221>  变体
<222>  (224)..(224)
<223>  缺失
 
<220>
<221>  变体
<222>  (325)..(325)
<223>  C -> Y
 
<220>
<221>  变体
<222>  (400)..(400)
<223>  Q -> K
 
<220>
<221>  变体
<222>  (402)..(402)
<223>  Y -> H
 
<220>
<221>  变体
<222>  (431)..(431)
<223>  C -> S
 
<220>
<221>  变体
<222>  (446)..(449)
<223>  KTCS -> SFTL (在同种型2中，CFHL1)
 
<220>
<221>  变体
<222>  (450)..(1231)
<223>  在同种型2(CFHL1)中缺失
 
<220>
<221>  变体
<222>  (493)..(493)
<223>  T -> R
 
<220>
<221>  变体
<222>  (536)..(536)
<223>  C -> R
 
<220>
<221>  变体
<222>  (551)..(551)
<223>  I -> T
 
<220>
<221>  变体
<222>  (567)..(567)
<223>  R -> G
 
<220>
<221>  变体
<222>  (609)..(609)
<223>  V -> I
 
<220>
<221>  变体
<222>  (630)..(630)
<223>  C -> W
 
<220>
<221>  变体
<222>  (673)..(673)
<223>  C -> S
 
<220>
<221>  变体
<222>  (673)..(673)
<223>  C -> Y
 
<220>
<221>  变体
<222>  (850)..(850)
<223>  E -> K
 
<220>
<221>  变体
<222>  (890)..(890)
<223>  S -> I
 
<220>
<221>  变体
<222>  (893)..(893)
<223>  H -> R
 
<220>
<221>  变体
<222>  (915)..(915)
<223>  C -> S
 
<220>
<221>  变体
<222>  (936)..(936)
<223>  E -> D
 
<220>
<221>  变体
<222>  (950)..(950)
<223>  Q -> H
 
<220>
<221>  变体
<222>  (951)..(951)
<223>  Y -> H
 
<220>
<221>  变体
<222>  (956)..(956)
<223>  T -> M
 
<220>
<221>  变体
<222>  (959)..(959)
<223>  C -> Y
 
<220>
<221>  变体
<222>  (978)..(978)
<223>  W -> C
 
<220>
<221>  变体
<222>  (997)..(997)
<223>  N -> T
 
<220>
<221>  变体
<222>  (1007)..(1007)
<223>  V -> I
 
<220>
<221>  变体
<222>  (1007)..(1007)
<223>  V -> L
 
<220>
<221>  变体
<222>  (1010)..(1010)
<223>  A -> T
 
<220>
<221>  变体
<222>  (1017)..(1017)
<223>  T -> I
 
<220>
<221>  变体
<222>  (1021)..(1021)
<223>  Y -> F
 
<220>
<221>  变体
<222>  (1043)..(1043)
<223>  C -> R
 
<220>
<221>  变体
<222>  (1050)..(1050)
<223>  N -> Y
 
<220>
<221>  变体
<222>  (1059)..(1059)
<223>  I -> T
 
<220>
<221>  变体
<222>  (1076)..(1076)
<223>  Q -> E
 
<220>
<221>  变体
<222>  (1078)..(1078)
<223>  R -> S
 
<220>
<221>  变体
<222>  (1119)..(1119)
<223>  D -> G
 
<220>
<221>  变体
<222>  (1134)..(1134)
<223>  V -> G
 
<220>
<221>  变体
<222>  (1142)..(1142)
<223>  Y -> D
 
<220>
<221>  变体
<222>  (1143)..(1143)
<223>  Q -> E
 
<220>
<221>  变体
<222>  (1157)..(1157)
<223>  W -> R
 
<220>
<221>  变体
<222>  (1163)..(1163)
<223>  C -> W
 
<220>
<221>  变体
<222>  (1169)..(1169)
<223>  I -> L
 
<220>
<221>  变体
<222>  (1183)..(1183)
<223>  W -> C
 
<220>
<221>  变体
<222>  (1183)..(1183)
<223>  W -> L
 
<220>
<221>  变体
<222>  (1183)..(1183)
<223>  W -> R
 
<220>
<221>  变体
<222>  (1184)..(1184)
<223>  T -> R
 
<220>
<221>  变体
<222>  (1189)..(1189)
<223>  L -> R
 
<220>
<221>  变体
<222>  (1191)..(1191)
<223>  S -> L
 
<220>
<221>  变体
<222>  (1194)..(1194)
<223>  G -> D
 
<220>
<221>  变体
<222>  (1197)..(1197)
<223>  V -> A
 
<220>
<221>  变体
<222>  (1198)..(1198)
<223>  E -> A
 
<220>
<221>  变体
<222>  (1199)..(1199)
<223>  F -> S
 
<220>
<221>  变体
<222>  (1210)..(1210)
<223>  R -> C
 
<220>
<221>  变体
<222>  (1215)..(1215)
<223>  R -> G
 
<220>
<221>  变体
<222>  (1215)..(1215)
<223>  R -> Q
 
<220>
<221>  变体
<222>  (1225)..(1231)
<223>  YPTCAKR -> FQS
 
<220>
<221>  变体
<222>  (1226)..(1226)
<223>  P -> S
 
<400>  1
 
Met Arg Leu Leu Ala Lys Ile Ile Cys Leu Met Leu Trp Ala Ile Cys
1               5                   10                  15     
 
 
Val Ala Glu Asp Cys Asn Glu Leu Pro Pro Arg Arg Asn Thr Glu Ile
            20                  25                  30         
 
 
Leu Thr Gly Ser Trp Ser Asp Gln Thr Tyr Pro Glu Gly Thr Gln Ala
        35                  40                  45             
 
 
Ile Tyr Lys Cys Arg Pro Gly Tyr Arg Ser Leu Gly Asn Val Ile Met
    50                  55                  60                 
 
 
Val Cys Arg Lys Gly Glu Trp Val Ala Leu Asn Pro Leu Arg Lys Cys
65                  70                  75                  80 
 
 
Gln Lys Arg Pro Cys Gly His Pro Gly Asp Thr Pro Phe Gly Thr Phe
                85                  90                  95     
 
 
Thr Leu Thr Gly Gly Asn Val Phe Glu Tyr Gly Val Lys Ala Val Tyr
            100                 105                 110        
 
 
Thr Cys Asn Glu Gly Tyr Gln Leu Leu Gly Glu Ile Asn Tyr Arg Glu
        115                 120                 125            
 
 
Cys Asp Thr Asp Gly Trp Thr Asn Asp Ile Pro Ile Cys Glu Val Val
    130                 135                 140                
 
 
Lys Cys Leu Pro Val Thr Ala Pro Glu Asn Gly Lys Ile Val Ser Ser
145                 150                 155                 160
 
 
Ala Met Glu Pro Asp Arg Glu Tyr His Phe Gly Gln Ala Val Arg Phe
                165                 170                 175    
 
 
Val Cys Asn Ser Gly Tyr Lys Ile Glu Gly Asp Glu Glu Met His Cys
            180                 185                 190        
 
 
Ser Asp Asp Gly Phe Trp Ser Lys Glu Lys Pro Lys Cys Val Glu Ile
        195                 200                 205            
 
 
Ser Cys Lys Ser Pro Asp Val Ile Asn Gly Ser Pro Ile Ser Gln Lys
    210                 215                 220                
 
 
Ile Ile Tyr Lys Glu Asn Glu Arg Phe Gln Tyr Lys Cys Asn Met Gly
225                 230                 235                 240
 
 
Tyr Glu Tyr Ser Glu Arg Gly Asp Ala Val Cys Thr Glu Ser Gly Trp
                245                 250                 255    
 
 
Arg Pro Leu Pro Ser Cys Glu Glu Lys Ser Cys Asp Asn Pro Tyr Ile
            260                 265                 270        
 
 
Pro Asn Gly Asp Tyr Ser Pro Leu Arg Ile Lys His Arg Thr Gly Asp
        275                 280                 285            
 
 
Glu Ile Thr Tyr Gln Cys Arg Asn Gly Phe Tyr Pro Ala Thr Arg Gly
    290                 295                 300                
 
 
Asn Thr Ala Lys Cys Thr Ser Thr Gly Trp Ile Pro Ala Pro Arg Cys
305                 310                 315                 320
 
 
Thr Leu Lys Pro Cys Asp Tyr Pro Asp Ile Lys His Gly Gly Leu Tyr
                325                 330                 335    
 
 
His Glu Asn Met Arg Arg Pro Tyr Phe Pro Val Ala Val Gly Lys Tyr
            340                 345                 350        
 
 
Tyr Ser Tyr Tyr Cys Asp Glu His Phe Glu Thr Pro Ser Gly Ser Tyr
        355                 360                 365            
 
 
Trp Asp His Ile His Cys Thr Gln Asp Gly Trp Ser Pro Ala Val Pro
    370                 375                 380                
 
 
Cys Leu Arg Lys Cys Tyr Phe Pro Tyr Leu Glu Asn Gly Tyr Asn Gln
385                 390                 395                 400
 
 
Asn Tyr Gly Arg Lys Phe Val Gln Gly Lys Ser Ile Asp Val Ala Cys
                405                 410                 415    
 
 
His Pro Gly Tyr Ala Leu Pro Lys Ala Gln Thr Thr Val Thr Cys Met
            420                 425                 430         
 
 
Glu Asn Gly Trp Ser Pro Thr Pro Arg Cys Ile Arg Val Lys Thr Cys
        435                 440                 445            
 
 
Ser Lys Ser Ser Ile Asp Ile Glu Asn Gly Phe Ile Ser Glu Ser Gln
    450                 455                 460                 
 
 
Tyr Thr Tyr Ala Leu Lys Glu Lys Ala Lys Tyr Gln Cys Lys Leu Gly
465                 470                 475                 480
 
 
Tyr Val Thr Ala Asp Gly Glu Thr Ser Gly Ser Ile Thr Cys Gly Lys
                485                 490                 495    
 
 
Asp Gly Trp Ser Ala Gln Pro Thr Cys Ile Lys Ser Cys Asp Ile Pro
            500                 505                 510        
 
 
Val Phe Met Asn Ala Arg Thr Lys Asn Asp Phe Thr Trp Phe Lys Leu
        515                 520                 525            
 
 
Asn Asp Thr Leu Asp Tyr Glu Cys His Asp Gly Tyr Glu Ser Asn Thr
    530                 535                 540                
 
 
Gly Ser Thr Thr Gly Ser Ile Val Cys Gly Tyr Asn Gly Trp Ser Asp
545                 550                 555                 560
 
 
Leu Pro Ile Cys Tyr Glu Arg Glu Cys Glu Leu Pro Lys Ile Asp Val
                565                 570                 575    
 
 
His Leu Val Pro Asp Arg Lys Lys Asp Gln Tyr Lys Val Gly Glu Val
            580                 585                 590        
 
 
Leu Lys Phe Ser Cys Lys Pro Gly Phe Thr Ile Val Gly Pro Asn Ser
        595                 600                 605            
 
 
Val Gln Cys Tyr His Phe Gly Leu Ser Pro Asp Leu Pro Ile Cys Lys
    610                 615                 620                
 
 
Glu Gln Val Gln Ser Cys Gly Pro Pro Pro Glu Leu Leu Asn Gly Asn
625                 630                 635                 640
 
 
Val Lys Glu Lys Thr Lys Glu Glu Tyr Gly His Ser Glu Val Val Glu
                645                 650                 655    
 
 
Tyr Tyr Cys Asn Pro Arg Phe Leu Met Lys Gly Pro Asn Lys Ile Gln
            660                 665                 670        
 
 
Cys Val Asp Gly Glu Trp Thr Thr Leu Pro Val Cys Ile Val Glu Glu
        675                 680                 685            
 
 
Ser Thr Cys Gly Asp Ile Pro Glu Leu Glu His Gly Trp Ala Gln Leu
    690                 695                 700                
 
 
Ser Ser Pro Pro Tyr Tyr Tyr Gly Asp Ser Val Glu Phe Asn Cys Ser
705                 710                 715                 720
 
 
Glu Ser Phe Thr Met Ile Gly His Arg Ser Ile Thr Cys Ile His Gly
                725                 730                 735    
 
 
Val Trp Thr Gln Leu Pro Gln Cys Val Ala Ile Asp Lys Leu Lys Lys
            740                 745                 750        
 
 
Cys Lys Ser Ser Asn Leu Ile Ile Leu Glu Glu His Leu Lys Asn Lys
        755                 760                 765            
 
 
Lys Glu Phe Asp His Asn Ser Asn Ile Arg Tyr Arg Cys Arg Gly Lys
    770                 775                 780                
 
 
Glu Gly Trp Ile His Thr Val Cys Ile Asn Gly Arg Trp Asp Pro Glu
785                 790                 795                 800
 
 
Val Asn Cys Ser Met Ala Gln Ile Gln Leu Cys Pro Pro Pro Pro Gln
                805                 810                 815    
 
 
Ile Pro Asn Ser His Asn Met Thr Thr Thr Leu Asn Tyr Arg Asp Gly
            820                 825                 830        
 
 
Glu Lys Val Ser Val Leu Cys Gln Glu Asn Tyr Leu Ile Gln Glu Gly
        835                 840                 845            
 
 
Glu Glu Ile Thr Cys Lys Asp Gly Arg Trp Gln Ser Ile Pro Leu Cys
    850                 855                 860                
 
 
Val Glu Lys Ile Pro Cys Ser Gln Pro Pro Gln Ile Glu His Gly Thr
865                 870                 875                 880
 
 
Ile Asn Ser Ser Arg Ser Ser Gln Glu Ser Tyr Ala His Gly Thr Lys
                885                 890                 895    
 
 
Leu Ser Tyr Thr Cys Glu Gly Gly Phe Arg Ile Ser Glu Glu Asn Glu
            900                 905                 910        
 
 
Thr Thr Cys Tyr Met Gly Lys Trp Ser Ser Pro Pro Gln Cys Glu Gly
        915                 920                 925            
 
 
Leu Pro Cys Lys Ser Pro Pro Glu Ile Ser His Gly Val Val Ala His
    930                 935                 940                
 
 
Met Ser Asp Ser Tyr Gln Tyr Gly Glu Glu Val Thr Tyr Lys Cys Phe
945                 950                 955                 960
 
 
Glu Gly Phe Gly Ile Asp Gly Pro Ala Ile Ala Lys Cys Leu Gly Glu
                965                 970                 975    
 
 
Lys Trp Ser His Pro Pro Ser Cys Ile Lys Thr Asp Cys Leu Ser Leu
            980                 985                 990        
 
 
Pro Ser Phe Glu Asn Ala Ile Pro  Met Gly Glu Lys Lys  Asp Val Tyr
        995                 1000                 1005            
 
 
Lys Ala  Gly Glu Gln Val Thr  Tyr Thr Cys Ala Thr  Tyr Tyr Lys
    1010                 1015                 1020            
 
 
Met Asp  Gly Ala Ser Asn Val  Thr Cys Ile Asn Ser  Arg Trp Thr
    1025                 1030                 1035            
 
 
Gly Arg  Pro Thr Cys Arg Asp  Thr Ser Cys Val Asn  Pro Pro Thr
    1040                 1045                 1050            
 
 
Val Gln  Asn Ala Tyr Ile Val  Ser Arg Gln Met Ser  Lys Tyr Pro
    1055                 1060                 1065            
 
 
Ser Gly  Glu Arg Val Arg Tyr  Gln Cys Arg Ser Pro  Tyr Glu Met
    1070                 1075                 1080            
 
 
Phe Gly  Asp Glu Glu Val Met  Cys Leu Asn Gly Asn  Trp Thr Glu
    1085                 1090                 1095            
 
 
Pro Pro  Gln Cys Lys Asp Ser  Thr Gly Lys Cys Gly  Pro Pro Pro
    1100                 1105                 1110            
 
 
Pro Ile  Asp Asn Gly Asp Ile  Thr Ser Phe Pro Leu  Ser Val Tyr
    1115                 1120                 1125            
 
 
Ala Pro  Ala Ser Ser Val Glu  Tyr Gln Cys Gln Asn  Leu Tyr Gln
    1130                 1135                 1140            
 
 
Leu Glu  Gly Asn Lys Arg Ile  Thr Cys Arg Asn Gly  Gln Trp Ser
    1145                 1150                 1155            
 
 
Glu Pro  Pro Lys Cys Leu His  Pro Cys Val Ile Ser  Arg Glu Ile
    1160                 1165                 1170            
 
 
Met Glu  Asn Tyr Asn Ile Ala  Leu Arg Trp Thr Ala  Lys Gln Lys
    1175                 1180                 1185            
 
 
Leu Tyr  Ser Arg Thr Gly Glu  Ser Val Glu Phe Val  Cys Lys Arg
    1190                 1195                 1200            
 
 
Gly Tyr  Arg Leu Ser Ser Arg  Ser His Thr Leu Arg  Thr Thr Cys
    1205                 1210                 1215            
 
 
Trp Asp  Gly Lys Leu Glu Tyr  Pro Thr Cys Ala Lys  Arg
    1220                 1225                 1230    
 
 
<210>  2
<211>  330
<212>  PRT
<213>  小家鼠
 
 
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (1)..(330)
<223>  人补体因子H相关蛋白质1 (CFHR1)
 
<220>
<221>  变体
<222>  (157)..(157)
<223>  H -> Y
 
<220>
<221>  变体
<222>  (159)..(159)
<223>  L -> V
 
<220>
<221>  变体
<222>  (175)..(175)
<223>  E -> Q
 
<220>
<221>  变体
<222>  (296)..(296)
<223>  A -> V
 
<400>  2
 
Met Trp Leu Leu Val Ser Val Ile Leu Ile Ser Arg Ile Ser Ser Val
1               5                   10                  15     
 
 
Gly Gly Glu Ala Thr Phe Cys Asp Phe Pro Lys Ile Asn His Gly Ile
            20                  25                  30         
 
 
Leu Tyr Asp Glu Glu Lys Tyr Lys Pro Phe Ser Gln Val Pro Thr Gly
        35                  40                  45             
 
 
Glu Val Phe Tyr Tyr Ser Cys Glu Tyr Asn Phe Val Ser Pro Ser Lys
    50                  55                  60                 
 
 
Ser Phe Trp Thr Arg Ile Thr Cys Thr Glu Glu Gly Trp Ser Pro Thr
65                  70                  75                  80 
 
 
Pro Lys Cys Leu Arg Leu Cys Phe Phe Pro Phe Val Glu Asn Gly His
                85                  90                  95     
 
 
Ser Glu Ser Ser Gly Gln Thr His Leu Glu Gly Asp Thr Val Gln Ile
            100                 105                 110        
 
 
Ile Cys Asn Thr Gly Tyr Arg Leu Gln Asn Asn Glu Asn Asn Ile Ser
        115                 120                 125            
 
 
Cys Val Glu Arg Gly Trp Ser Thr Pro Pro Lys Cys Arg Ser Thr Asp
    130                 135                 140                
 
 
Thr Ser Cys Val Asn Pro Pro Thr Val Gln Asn Ala His Ile Leu Ser
145                 150                 155                 160
 
 
Arg Gln Met Ser Lys Tyr Pro Ser Gly Glu Arg Val Arg Tyr Glu Cys
                165                 170                 175    
 
 
Arg Ser Pro Tyr Glu Met Phe Gly Asp Glu Glu Val Met Cys Leu Asn
            180                 185                 190        
 
 
Gly Asn Trp Thr Glu Pro Pro Gln Cys Lys Asp Ser Thr Gly Lys Cys
        195                 200                 205            
 
 
Gly Pro Pro Pro Pro Ile Asp Asn Gly Asp Ile Thr Ser Phe Pro Leu
    210                 215                 220                
 
 
Ser Val Tyr Ala Pro Ala Ser Ser Val Glu Tyr Gln Cys Gln Asn Leu
225                 230                 235                 240
 
 
Tyr Gln Leu Glu Gly Asn Lys Arg Ile Thr Cys Arg Asn Gly Gln Trp
                245                 250                 255    
 
 
Ser Glu Pro Pro Lys Cys Leu His Pro Cys Val Ile Ser Arg Glu Ile
            260                 265                 270        
 
 
Met Glu Asn Tyr Asn Ile Ala Leu Arg Trp Thr Ala Lys Gln Lys Leu
        275                 280                 285            
 
 
Tyr Leu Arg Thr Gly Glu Ser Ala Glu Phe Val Cys Lys Arg Gly Tyr
    290                 295                 300                
 
 
Arg Leu Ser Ser Arg Ser His Thr Leu Arg Thr Thr Cys Trp Asp Gly
305                 310                 315                 320
 
 
Lys Leu Glu Tyr Pro Thr Cys Ala Lys Arg
                325                 330
 
 
<210>  3
<211>  270
<212>  PRT
<213>  小家鼠
 
 
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (1)..(270)
<223>  人补体因子H相关蛋白质2 (CFHR2)
 
<220>
<221>  变体
<222>  (144)..(171)
<223>  ISAEKCGPPPPIDNGDITSFLLSVYAPG -> S (在短同种型中)
 
<400>  3
 
Met Trp Leu Leu Val Ser Val Ile Leu Ile Ser Arg Ile Ser Ser Val
1               5                   10                  15     
 
 
Gly Gly Glu Ala Met Phe Cys Asp Phe Pro Lys Ile Asn His Gly Ile
            20                  25                  30         
 
 
Leu Tyr Asp Glu Glu Lys Tyr Lys Pro Phe Ser Gln Val Pro Thr Gly
        35                  40                  45             
 
 
Glu Val Phe Tyr Tyr Ser Cys Glu Tyr Asn Phe Val Ser Pro Ser Lys
    50                  55                  60                 
 
 
Ser Phe Trp Thr Arg Ile Thr Cys Ala Glu Glu Gly Trp Ser Pro Thr
65                  70                  75                  80 
 
 
Pro Lys Cys Leu Arg Leu Cys Phe Phe Pro Phe Val Glu Asn Gly His
                85                  90                  95      
 
 
Ser Glu Ser Ser Gly Gln Thr His Leu Glu Gly Asp Thr Val Gln Ile
            100                 105                 110        
 
 
Ile Cys Asn Thr Gly Tyr Arg Leu Gln Asn Asn Glu Asn Asn Ile Ser
        115                 120                 125             
 
 
Cys Val Glu Arg Gly Trp Ser Thr Pro Pro Lys Cys Arg Ser Thr Ile
    130                 135                 140                
 
 
Ser Ala Glu Lys Cys Gly Pro Pro Pro Pro Ile Asp Asn Gly Asp Ile
145                 150                 155                 160
 
 
Thr Ser Phe Leu Leu Ser Val Tyr Ala Pro Gly Ser Ser Val Glu Tyr
                165                 170                 175    
 
 
Gln Cys Gln Asn Leu Tyr Gln Leu Glu Gly Asn Asn Gln Ile Thr Cys
            180                 185                 190        
 
 
Arg Asn Gly Gln Trp Ser Glu Pro Pro Lys Cys Leu Asp Pro Cys Val
        195                 200                 205            
 
 
Ile Ser Gln Glu Ile Met Glu Lys Tyr Asn Ile Lys Leu Lys Trp Thr
    210                 215                 220                
 
 
Asn Gln Gln Lys Leu Tyr Ser Arg Thr Gly Asp Ile Val Glu Phe Val
225                 230                 235                 240
 
 
Cys Lys Ser Gly Tyr His Pro Thr Lys Ser His Ser Phe Arg Ala Met
                245                 250                 255    
 
 
Cys Gln Asn Gly Lys Leu Val Tyr Pro Ser Cys Glu Glu Lys
            260                 265                 270
 
 
<210>  4
<211>  330
<212>  PRT
<213>  小家鼠
 
 
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (1)..(330)
<223>  人补体因子H相关蛋白质3 (CFHR3)
 
<220>
<221>  变体
<222>  (71)..(71)
<223>  H -> Y
 
<400>  4
 
Met Leu Leu Leu Ile Asn Val Ile Leu Thr Leu Trp Val Ser Cys Ala
1               5                   10                  15     
 
 
Asn Gly Gln Val Lys Pro Cys Asp Phe Pro Asp Ile Lys His Gly Gly
            20                  25                  30         
 
 
Leu Phe His Glu Asn Met Arg Arg Pro Tyr Phe Pro Val Ala Val Gly
        35                  40                  45             
 
 
Lys Tyr Tyr Ser Tyr Tyr Cys Asp Glu His Phe Glu Thr Pro Ser Gly
    50                  55                  60                 
 
 
Ser Tyr Trp Asp Tyr Ile His Cys Thr Gln Asn Gly Trp Ser Pro Ala
65                  70                  75                  80 
 
 
Val Pro Cys Leu Arg Lys Cys Tyr Phe Pro Tyr Leu Glu Asn Gly Tyr
                85                  90                  95     
 
 
Asn Gln Asn Tyr Gly Arg Lys Phe Val Gln Gly Asn Ser Thr Glu Val
            100                 105                 110        
 
 
Ala Cys His Pro Gly Tyr Gly Leu Pro Lys Ala Gln Thr Thr Val Thr
        115                 120                 125            
 
 
Cys Thr Glu Lys Gly Trp Ser Pro Thr Pro Arg Cys Ile Arg Val Arg
    130                 135                 140                
 
 
Thr Cys Ser Lys Ser Asp Ile Glu Ile Glu Asn Gly Phe Ile Ser Glu
145                 150                 155                 160
 
 
Ser Ser Ser Ile Tyr Ile Leu Asn Lys Glu Ile Gln Tyr Lys Cys Lys
                165                 170                 175    
 
 
Pro Gly Tyr Ala Thr Ala Asp Gly Asn Ser Ser Gly Ser Ile Thr Cys
            180                 185                 190        
 
 
Leu Gln Asn Gly Trp Ser Ala Gln Pro Ile Cys Ile Asn Ser Ser Glu
        195                 200                 205             
 
 
Lys Cys Gly Pro Pro Pro Pro Ile Ser Asn Gly Asp Thr Thr Ser Phe
    210                 215                 220                
 
 
Leu Leu Lys Val Tyr Val Pro Gln Ser Arg Val Glu Tyr Gln Cys Gln
225                 230                 235                 240
 
 
Pro Tyr Tyr Glu Leu Gln Gly Ser Asn Tyr Val Thr Cys Ser Asn Gly
                245                 250                 255    
 
 
Glu Trp Ser Glu Pro Pro Arg Cys Ile His Pro Cys Ile Ile Thr Glu
            260                 265                 270        
 
 
Glu Asn Met Asn Lys Asn Asn Ile Lys Leu Lys Gly Arg Ser Asp Arg
        275                 280                 285            
 
 
Lys Tyr Tyr Ala Lys Thr Gly Asp Thr Ile Glu Phe Met Cys Lys Leu
    290                 295                 300                
 
 
Gly Tyr Asn Ala Asn Thr Ser Ile Leu Ser Phe Gln Ala Val Cys Arg
305                 310                 315                 320
 
 
Glu Gly Ile Val Glu Tyr Pro Arg Cys Glu
                325                 330
 
 
<210>  5
<211>  578
<212>  PRT
<213>  小家鼠
 
 
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (1)..(578)
<223>  人补体因子H相关蛋白质4A (CFHR4A)
 
<400>  5
 
Met Leu Leu Leu Ile Asn Val Ile Leu Thr Leu Trp Val Ser Cys Ala
1               5                   10                  15     
 
 
Asn Gly Gln Glu Val Lys Pro Cys Asp Phe Pro Glu Ile Gln His Gly
            20                  25                  30         
 
 
Gly Leu Tyr Tyr Lys Ser Leu Arg Arg Leu Tyr Phe Pro Ala Ala Ala
        35                  40                  45             
 
 
Gly Gln Ser Tyr Ser Tyr Tyr Cys Asp Gln Asn Phe Val Thr Pro Ser
    50                  55                  60                 
 
 
Gly Ser Tyr Trp Asp Tyr Ile His Cys Thr Gln Asp Gly Trp Ser Pro
65                  70                  75                  80 
 
 
Thr Val Pro Cys Leu Arg Thr Cys Ser Lys Ser Asp Val Glu Ile Glu
                85                  90                  95     
 
 
Asn Gly Phe Ile Ser Glu Ser Ser Ser Ile Tyr Ile Leu Asn Glu Glu
            100                 105                 110        
 
 
Thr Gln Tyr Asn Cys Lys Pro Gly Tyr Ala Thr Ala Asp Gly Asn Ser
        115                 120                 125            
 
 
Ser Gly Ser Ile Thr Cys Leu Gln Asn Gly Trp Ser Thr Gln Pro Ile
    130                 135                 140                
 
 
Cys Ile Lys Phe Cys Asp Met Pro Val Phe Glu Asn Ser Arg Ala Lys
145                 150                 155                 160
 
 
Ser Asn Gly Met Trp Phe Lys Leu His Asp Thr Leu Asp Tyr Glu Cys
                165                 170                 175    
 
 
Tyr Asp Gly Tyr Glu Ser Ser Tyr Gly Asn Thr Thr Asp Ser Ile Val
            180                 185                 190        
 
 
Cys Gly Glu Asp Gly Trp Ser His Leu Pro Thr Cys Tyr Asn Ser Ser
        195                 200                 205            
 
 
Glu Asn Cys Gly Pro Pro Pro Pro Ile Ser Asn Gly Asp Thr Thr Ser
    210                 215                 220                
 
 
Phe Pro Gln Lys Val Tyr Leu Pro Trp Ser Arg Val Glu Tyr Gln Cys
225                 230                 235                 240
 
 
Gln Ser Tyr Tyr Glu Leu Gln Gly Ser Lys Tyr Val Thr Cys Ser Asn
                245                 250                 255    
 
 
Gly Asp Trp Ser Glu Pro Pro Arg Cys Ile Ser Met Lys Pro Cys Glu
            260                 265                 270        
 
 
Phe Pro Glu Ile Gln His Gly His Leu Tyr Tyr Glu Asn Thr Arg Arg
        275                 280                 285            
 
 
Pro Tyr Phe Pro Val Ala Thr Gly Gln Ser Tyr Ser Tyr Tyr Cys Asp
    290                 295                 300                
 
 
Gln Asn Phe Val Thr Pro Ser Gly Ser Tyr Trp Asp Tyr Ile His Cys
305                 310                 315                 320
 
 
Thr Gln Asp Gly Trp Leu Pro Thr Val Pro Cys Leu Arg Thr Cys Ser
                325                 330                 335    
 
 
Lys Ser Asp Ile Glu Ile Glu Asn Gly Phe Ile Ser Glu Ser Ser Ser
            340                 345                 350        
 
 
Ile Tyr Ile Leu Asn Lys Glu Ile Gln Tyr Lys Cys Lys Pro Gly Tyr
        355                 360                 365            
 
 
Ala Thr Ala Asp Gly Asn Ser Ser Gly Ser Ile Thr Cys Leu Gln Asn
    370                 375                 380                
 
 
Gly Trp Ser Ala Gln Pro Ile Cys Ile Lys Phe Cys Asp Met Pro Val
385                 390                 395                 400
 
 
Phe Glu Asn Ser Arg Ala Lys Ser Asn Gly Met Arg Phe Lys Leu His
                405                 410                 415    
 
 
Asp Thr Leu Asp Tyr Glu Cys Tyr Asp Gly Tyr Glu Ile Ser Tyr Gly
            420                 425                 430        
 
 
Asn Thr Thr Gly Ser Ile Val Cys Gly Glu Asp Gly Trp Ser His Phe
        435                 440                 445            
 
 
Pro Thr Cys Tyr Asn Ser Ser Glu Lys Cys Gly Pro Pro Pro Pro Ile
    450                 455                 460                
 
 
Ser Asn Gly Asp Thr Thr Ser Phe Leu Leu Lys Val Tyr Val Pro Gln
465                 470                 475                 480
 
 
Ser Arg Val Glu Tyr Gln Cys Gln Ser Tyr Tyr Glu Leu Gln Gly Ser
                485                 490                 495    
 
 
Asn Tyr Val Thr Cys Ser Asn Gly Glu Trp Ser Glu Pro Pro Arg Cys
            500                 505                 510        
 
 
Ile His Pro Cys Ile Ile Thr Glu Glu Asn Met Asn Lys Asn Asn Ile
        515                 520                 525            
 
 
Gln Leu Lys Gly Lys Ser Asp Ile Lys Tyr Tyr Ala Lys Thr Gly Asp
    530                 535                 540                
 
 
Thr Ile Glu Phe Met Cys Lys Leu Gly Tyr Asn Ala Asn Thr Ser Val
545                 550                 555                 560
 
 
Leu Ser Phe Gln Ala Val Cys Arg Glu Gly Ile Val Glu Tyr Pro Arg
                565                 570                 575     
 
 
Cys Glu
       
 
 
<210>  6
<211>  331
<212>  PRT
<213>  小家鼠
 
 
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (1)..(331)
<223>  人补体因子H相关蛋白质4B (CFHR4B)
 
<220>
<221>  变体
<222>  (306)..(306)
<223>  G -> E
 
<400>  6
 
Met Leu Leu Leu Ile Asn Val Ile Leu Thr Leu Trp Val Ser Cys Ala
1               5                   10                  15     
 
 
Asn Gly Gln Glu Val Lys Pro Cys Asp Phe Pro Glu Ile Gln His Gly
            20                  25                  30         
 
 
Gly Leu Tyr Tyr Lys Ser Leu Arg Arg Leu Tyr Phe Pro Ala Ala Ala
        35                  40                  45             
 
 
Gly Gln Ser Tyr Ser Tyr Tyr Cys Asp Gln Asn Phe Val Thr Pro Ser
    50                  55                  60                 
 
 
Gly Ser Tyr Trp Asp Tyr Ile His Cys Thr Gln Asp Gly Trp Ser Pro
65                  70                  75                  80 
 
 
Thr Val Pro Cys Leu Arg Thr Cys Ser Lys Ser Asp Ile Glu Ile Glu
                85                  90                  95     
 
 
Asn Gly Phe Ile Ser Glu Ser Ser Ser Ile Tyr Ile Leu Asn Lys Glu
            100                 105                 110        
 
 
Ile Gln Tyr Lys Cys Lys Pro Gly Tyr Ala Thr Ala Asp Gly Asn Ser
        115                 120                 125            
 
 
Ser Gly Ser Ile Thr Cys Leu Gln Asn Gly Trp Ser Ala Gln Pro Ile
    130                 135                 140                
 
 
Cys Ile Lys Phe Cys Asp Met Pro Val Phe Glu Asn Ser Arg Ala Lys
145                 150                 155                 160
 
 
Ser Asn Gly Met Arg Phe Lys Leu His Asp Thr Leu Asp Tyr Glu Cys
                165                 170                 175    
 
 
Tyr Asp Gly Tyr Glu Ile Ser Tyr Gly Asn Thr Thr Gly Ser Ile Val
            180                 185                 190        
 
 
Cys Gly Glu Asp Gly Trp Ser His Phe Pro Thr Cys Tyr Asn Ser Ser
        195                 200                 205            
 
 
Glu Lys Cys Gly Pro Pro Pro Pro Ile Ser Asn Gly Asp Thr Thr Ser
    210                 215                 220                 
 
 
Phe Leu Leu Lys Val Tyr Val Pro Gln Ser Arg Val Glu Tyr Gln Cys
225                 230                 235                 240
 
 
Gln Ser Tyr Tyr Glu Leu Gln Gly Ser Asn Tyr Val Thr Cys Ser Asn
                245                 250                 255    
 
 
Gly Glu Trp Ser Glu Pro Pro Arg Cys Ile His Pro Cys Ile Ile Thr
            260                 265                 270        
 
 
Glu Glu Asn Met Asn Lys Asn Asn Ile Gln Leu Lys Gly Lys Ser Asp
        275                 280                 285            
 
 
Ile Lys Tyr Tyr Ala Lys Thr Gly Asp Thr Ile Glu Phe Met Cys Lys
    290                 295                 300                
 
 
Leu Gly Tyr Asn Ala Asn Thr Ser Val Leu Ser Phe Gln Ala Val Cys
305                 310                 315                 320
 
 
Arg Glu Gly Ile Val Glu Tyr Pro Arg Cys Glu
                325                 330    
 
 
<210>  7
<211>  569
<212>  PRT
<213>  小家鼠
 
 
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (1)..(569)
<223>  人补体因子H相关蛋白质5 (CFHR5)
 
<220>
<221>  变体
<222>  (46)..(46)
<223>  P -> S
 
<220>
<221>  变体
<222>  (216)..(216)
<223>  N -> S
 
<220>
<221>  变体
<222>  (277)..(277)
<223>  Y -> N
 
<220>
<221>  变体
<222>  (356)..(356)
<223>  R -> H
 
<220>
<221>  变体
<222>  (379)..(379)
<223>  V -> L
 
<220>
<221>  变体
<222>  (521)..(521)
<223>  L -> I
 
<220>
<221>  变体
<222>  (529)..(529)
<223>  L -> R
 
<400>  7
 
Met Leu Leu Leu Phe Ser Val Ile Leu Ile Ser Trp Val Ser Thr Val
1               5                   10                  15     
 
 
Gly Gly Glu Gly Thr Leu Cys Asp Phe Pro Lys Ile His His Gly Phe
            20                  25                  30         
 
 
Leu Tyr Asp Glu Glu Asp Tyr Asn Pro Phe Ser Gln Val Pro Thr Gly
        35                  40                  45             
 
 
Glu Val Phe Tyr Tyr Ser Cys Glu Tyr Asn Phe Val Ser Pro Ser Lys
    50                  55                  60                 
 
 
Ser Phe Trp Thr Arg Ile Thr Cys Thr Glu Glu Gly Trp Ser Pro Thr
65                  70                  75                  80 
 
 
Pro Lys Cys Leu Arg Met Cys Ser Phe Pro Phe Val Lys Asn Gly His
                85                  90                  95     
 
 
Ser Glu Ser Ser Gly Leu Ile His Leu Glu Gly Asp Thr Val Gln Ile
            100                 105                 110        
 
 
Ile Cys Asn Thr Gly Tyr Ser Leu Gln Asn Asn Glu Lys Asn Ile Ser
        115                 120                 125            
 
 
Cys Val Glu Arg Gly Trp Ser Thr Pro Pro Ile Cys Ser Phe Thr Lys
    130                 135                 140                
 
 
Gly Glu Cys His Val Pro Ile Leu Glu Ala Asn Val Asp Ala Gln Pro
145                 150                 155                 160
 
 
Lys Lys Glu Ser Tyr Lys Val Gly Asp Val Leu Lys Phe Ser Cys Arg
                165                 170                 175    
 
 
Lys Asn Leu Ile Arg Val Gly Ser Asp Ser Val Gln Cys Tyr Gln Phe
            180                 185                 190        
 
 
Gly Trp Ser Pro Asn Phe Pro Thr Cys Lys Gly Gln Val Arg Ser Cys
        195                 200                 205            
 
 
Gly Pro Pro Pro Gln Leu Ser Asn Gly Glu Val Lys Glu Ile Arg Lys
    210                 215                 220                
 
 
Glu Glu Tyr Gly His Asn Glu Val Val Glu Tyr Asp Cys Asn Pro Asn
225                 230                 235                 240
 
 
Phe Ile Ile Asn Gly Pro Lys Lys Ile Gln Cys Val Asp Gly Glu Trp
                245                 250                 255    
 
 
Thr Thr Leu Pro Thr Cys Val Glu Gln Val Lys Thr Cys Gly Tyr Ile
            260                 265                 270        
 
 
Pro Glu Leu Glu Tyr Gly Tyr Val Gln Pro Ser Val Pro Pro Tyr Gln
        275                 280                 285            
 
 
His Gly Val Ser Val Glu Val Asn Cys Arg Asn Glu Tyr Ala Met Ile
    290                 295                 300                
 
 
Gly Asn Asn Met Ile Thr Cys Ile Asn Gly Ile Trp Thr Glu Leu Pro
305                 310                 315                 320
 
 
Met Cys Val Ala Thr His Gln Leu Lys Arg Cys Lys Ile Ala Gly Val
                325                 330                 335    
 
 
Asn Ile Lys Thr Leu Leu Lys Leu Ser Gly Lys Glu Phe Asn His Asn
            340                 345                 350        
 
 
Ser Arg Ile Arg Tyr Arg Cys Ser Asp Ile Phe Arg Tyr Arg His Ser
        355                 360                 365            
 
 
Val Cys Ile Asn Gly Lys Trp Asn Pro Glu Val Asp Cys Thr Glu Lys
    370                 375                 380                
 
 
Arg Glu Gln Phe Cys Pro Pro Pro Pro Gln Ile Pro Asn Ala Gln Asn
385                 390                 395                 400
 
 
Met Thr Thr Thr Val Asn Tyr Gln Asp Gly Glu Lys Val Ala Val Leu
                405                 410                 415    
 
 
Cys Lys Glu Asn Tyr Leu Leu Pro Glu Ala Lys Glu Ile Val Cys Lys
            420                 425                 430        
 
 
Asp Gly Arg Trp Gln Ser Leu Pro Arg Cys Val Glu Ser Thr Ala Tyr
        435                 440                 445            
 
 
Cys Gly Pro Pro Pro Ser Ile Asn Asn Gly Asp Thr Thr Ser Phe Pro
    450                 455                 460                
 
 
Leu Ser Val Tyr Pro Pro Gly Ser Thr Val Thr Tyr Arg Cys Gln Ser
465                 470                 475                 480
 
 
Phe Tyr Lys Leu Gln Gly Ser Val Thr Val Thr Cys Arg Asn Lys Gln
                485                 490                 495    
 
 
Trp Ser Glu Pro Pro Arg Cys Leu Asp Pro Cys Val Val Ser Glu Glu
            500                 505                 510        
 
 
Asn Met Asn Lys Asn Asn Ile Gln Leu Lys Trp Arg Asn Asp Gly Lys
        515                 520                 525            
 
 
Leu Tyr Ala Lys Thr Gly Asp Ala Val Glu Phe Gln Cys Lys Phe Pro
    530                 535                 540                
 
 
His Lys Ala Met Ile Ser Ser Pro Pro Phe Arg Ala Ile Cys Gln Glu
545                 550                 555                 560
 
 
Gly Lys Phe Glu Tyr Pro Ile Cys Glu
                565                
 
 
<210>  8
<211>  158
<212>  PRT
<213>  小家鼠
 
<400>  8
 
Met Trp Leu Leu Val Ser Val Ile Leu Ile Ser Arg Ile Ser Ser Val
1               5                   10                  15     
 
 
Gly Gly Glu Ala Thr Phe Cys Asp Phe Pro Lys Ile Asn His Gly Ile
            20                  25                  30         
 
 
Leu Tyr Asp Glu Glu Lys Tyr Lys Pro Phe Ser Gln Val Pro Thr Gly
        35                  40                  45             
 
 
Glu Val Phe Tyr Tyr Ser Cys Glu Tyr Asn Phe Val Ser Pro Ser Lys
    50                  55                  60                 
 
 
Ser Phe Trp Thr Arg Ile Thr Cys Thr Glu Glu Gly Trp Ser Pro Thr
65                  70                  75                  80 
 
 
Pro Lys Cys Leu Arg Leu Cys Phe Phe Pro Phe Val Glu Asn Gly His
                85                  90                  95     
 
 
Ser Glu Ser Ser Gly Gln Thr His Leu Glu Gly Asp Thr Val Gln Ile
            100                 105                 110        
 
 
Ile Cys Asn Thr Gly Tyr Arg Leu Gln Asn Asn Glu Asn Asn Ile Ser
        115                 120                 125            
 
 
Cys Val Glu Arg Gly Trp Ser Thr Pro Pro Lys Cys Arg Ser Thr Ala
    130                 135                 140                
 
 
Ala Ala Gly Gly Gly Ser His His His His His His His His
145                 150                 155            
 
 
<210>  9
<211>  330
<212>  PRT
<213>  小家鼠
 
<400>  9
 
Met Trp Leu Leu Val Ser Val Ile Leu Ile Ser Arg Ile Ser Ser Val
1               5                   10                  15     
 
 
Gly Gly Glu Ala Thr Phe Cys Asp Phe Pro Lys Ile Asn His Gly Ile
            20                  25                  30         
 
 
Leu Tyr Asp Glu Glu Lys Tyr Lys Pro Phe Ser Gln Val Pro Thr Gly
        35                  40                  45             
 
 
Glu Val Phe Tyr Tyr Ser Cys Glu Tyr Asn Phe Val Ser Pro Ser Lys
    50                  55                  60                 
 
 
Ser Phe Trp Thr Arg Ile Thr Cys Thr Glu Glu Gly Trp Ser Pro Thr
65                  70                  75                  80 
 
 
Pro Lys Cys Leu Arg Leu Cys Phe Phe Pro Phe Val Glu Asn Gly His
                85                  90                  95     
 
 
Ser Glu Ser Ser Gly Gln Thr His Leu Glu Gly Asp Thr Val Gln Ile
            100                 105                 110        
 
 
Ile Cys Asn Thr Gly Tyr Arg Leu Gln Asn Asn Glu Asn Asn Ile Ser
        115                 120                 125            
 
 
Cys Val Glu Arg Gly Trp Ser Thr Pro Pro Lys Cys Arg Ser Thr Asp
    130                 135                 140                
 
 
Thr Ser Cys Val Asn Pro Pro Thr Val Gln Asn Ala His Ile Leu Ser
145                 150                 155                 160
 
 
Arg Gln Met Ser Lys Tyr Pro Ser Gly Glu Arg Val Arg Tyr Glu Cys
                165                 170                 175    
 
 
Arg Ser Pro Tyr Glu Met Phe Gly Asp Glu Glu Val Met Cys Leu Asn
            180                 185                 190        
 
 
Gly Asn Trp Thr Glu Pro Pro Gln Cys Lys Asp Ser Thr Gly Lys Cys
        195                 200                 205            
 
 
Gly Pro Pro Pro Pro Ile Asp Asn Gly Asp Ile Thr Ser Phe Pro Leu
    210                 215                 220                
 
 
Ser Val Tyr Ala Pro Ala Ser Ser Val Glu Tyr Gln Cys Gln Asn Leu
225                 230                 235                 240
 
 
Tyr Gln Leu Glu Gly Asn Lys Arg Ile Thr Cys Arg Asn Gly Gln Trp
                245                 250                 255    
 
 
Ser Glu Pro Pro Lys Cys Leu His Pro Cys Val Ile Ser Arg Glu Ile
            260                 265                 270        
 
 
Met Glu Asn Tyr Asn Ile Ala Leu Arg Trp Thr Ala Lys Gln Lys Leu
        275                 280                 285            
 
 
Tyr Leu Arg Thr Gly Glu Ser Ala Glu Phe Val Cys Lys Arg Gly Tyr
    290                 295                 300                
 
 
Arg Leu Ser Ser Arg Ser His Thr Leu Arg Thr Thr Cys Trp Asp Gly
305                 310                 315                 320
 
 
Lys Leu Glu Tyr Pro Thr Cys Ala Lys Arg
                325                 330
 
 
<210>  10
<211>  304
<212>  PRT
<213>  小家鼠
 
<400>  10
 
Met Trp Leu Leu Val Ser Val Ile Leu Ile Ser Arg Ile Ser Ser Val
1               5                   10                  15     
 
 
Gly Gly Glu Ala Met Phe Cys Asp Phe Pro Lys Ile Asn His Gly Ile
            20                  25                  30         
 
 
Leu Tyr Asp Glu Glu Lys Tyr Lys Pro Phe Ser Gln Val Pro Thr Gly
        35                  40                  45             
 
 
Glu Val Phe Tyr Tyr Ser Cys Glu Tyr Asn Phe Val Ser Pro Ser Lys
    50                  55                  60                 
 
 
Ser Phe Trp Thr Arg Ile Thr Cys Ala Glu Glu Gly Trp Ser Pro Thr
65                  70                  75                  80 
 
 
Pro Lys Cys Leu Arg Leu Cys Phe Phe Pro Phe Val Glu Asn Gly His
                85                  90                  95     
 
 
Ser Glu Ser Ser Gly Gln Thr His Leu Glu Gly Asp Thr Val Gln Ile
            100                 105                 110        
 
 
Ile Cys Asn Thr Gly Tyr Arg Leu Gln Asn Asn Glu Asn Asn Ile Ser
        115                 120                 125            
 
 
Cys Val Glu Arg Gly Trp Ser Thr Pro Pro Lys Cys Arg Ser Thr Ile
    130                 135                 140                
 
 
Ser Ala Glu Lys Cys Gly Pro Pro Pro Pro Ile Asp Asn Gly Asp Ile
145                 150                 155                 160
 
 
Thr Ser Phe Leu Leu Ser Val Tyr Ala Pro Gly Ser Ser Val Glu Tyr
                165                 170                 175    
 
 
Gln Cys Gln Asn Leu Tyr Gln Leu Glu Gly Asn Asn Gln Ile Thr Cys
            180                 185                 190        
 
 
Arg Asn Gly Gln Trp Ser Glu Pro Pro Lys Cys Leu Asp Pro Cys Val
        195                 200                 205            
 
 
Ile Ser Gln Glu Ile Met Glu Lys Tyr Asn Ile Lys Leu Lys Trp Thr
    210                 215                 220                
 
 
Asn Gln Gln Lys Leu Tyr Ser Arg Thr Gly Asp Ile Val Glu Phe Val
225                 230                 235                 240
 
 
Cys Lys Ser Gly Tyr His Pro Thr Lys Ser His Ser Phe Arg Ala Met
                245                 250                 255    
 
 
Cys Gln Asn Gly Lys Leu Val Tyr Pro Ser Cys Glu Glu Lys Ala Ala
            260                 265                 270        
 
 
Ala Gly Gly Gly Ser Gly Leu Asn Asp Ile Phe Glu Ala Gln Lys Ile
        275                 280                 285            
 
 
Glu Trp His Glu Gly Gly Gly Ser His His His His His His His His
    290                 295                 300                
 
 
<210>  11
<211>  364
<212>  PRT
<213>  小家鼠
 
<400>  11
 
Met Leu Leu Leu Ile Asn Val Ile Leu Thr Leu Trp Val Ser Cys Ala
1               5                   10                  15     
 
 
Asn Gly Gln Val Lys Pro Cys Asp Phe Pro Asp Ile Lys His Gly Gly
            20                  25                  30         
 
 
Leu Phe His Glu Asn Met Arg Arg Pro Tyr Phe Pro Val Ala Val Gly
        35                  40                  45             
 
 
Lys Tyr Tyr Ser Tyr Tyr Cys Asp Glu His Phe Glu Thr Pro Ser Gly
    50                  55                  60                 
 
 
Ser Tyr Trp Asp Tyr Ile His Cys Thr Gln Asn Gly Trp Ser Pro Ala
65                  70                  75                  80 
 
 
Val Pro Cys Leu Arg Lys Cys Tyr Phe Pro Tyr Leu Glu Asn Gly Tyr
                85                  90                  95     
 
 
Asn Gln Asn Tyr Gly Arg Lys Phe Val Gln Gly Asn Ser Thr Glu Val
            100                 105                 110        
 
 
Ala Cys His Pro Gly Tyr Gly Leu Pro Lys Ala Gln Thr Thr Val Thr
        115                 120                 125            
 
 
Cys Thr Glu Lys Gly Trp Ser Pro Thr Pro Arg Cys Ile Arg Val Arg
    130                 135                 140                
 
 
Thr Cys Ser Lys Ser Asp Ile Glu Ile Glu Asn Gly Phe Ile Ser Glu
145                 150                 155                 160
 
 
Ser Ser Ser Ile Tyr Ile Leu Asn Lys Glu Ile Gln Tyr Lys Cys Lys
                165                 170                 175    
 
 
Pro Gly Tyr Ala Thr Ala Asp Gly Asn Ser Ser Gly Ser Ile Thr Cys
            180                 185                 190        
 
 
Leu Gln Asn Gly Trp Ser Ala Gln Pro Ile Cys Ile Asn Ser Ser Glu
        195                 200                 205            
 
 
Lys Cys Gly Pro Pro Pro Pro Ile Ser Asn Gly Asp Thr Thr Ser Phe
    210                 215                 220                
 
 
Leu Leu Lys Val Tyr Val Pro Gln Ser Arg Val Glu Tyr Gln Cys Gln
225                 230                 235                 240
 
 
Pro Tyr Tyr Glu Leu Gln Gly Ser Asn Tyr Val Thr Cys Ser Asn Gly
                245                 250                 255    
 
 
Glu Trp Ser Glu Pro Pro Arg Cys Ile His Pro Cys Ile Ile Thr Glu
            260                 265                 270        
 
 
Glu Asn Met Asn Lys Asn Asn Ile Lys Leu Lys Gly Arg Ser Asp Arg
        275                 280                 285            
 
 
Lys Tyr Tyr Ala Lys Thr Gly Asp Thr Ile Glu Phe Met Cys Lys Leu
    290                 295                 300                
 
 
Gly Tyr Asn Ala Asn Thr Ser Ile Leu Ser Phe Gln Ala Val Cys Arg
305                 310                 315                 320
 
 
Glu Gly Ile Val Glu Tyr Pro Arg Cys Glu Ala Ala Ala Gly Gly Gly
                325                 330                 335    
 
 
Ser Gly Leu Asn Asp Ile Phe Glu Ala Gln Lys Ile Glu Trp His Glu
            340                 345                 350        
 
 
Gly Gly Gly Ser His His His His His His His His
        355                 360                
 
 
<210>  12
<211>  365
<212>  PRT
<213>  小家鼠
 
<400>  12
 
Met Leu Leu Leu Ile Asn Val Ile Leu Thr Leu Trp Val Ser Cys Ala
1               5                   10                  15     
 
 
Asn Gly Gln Glu Val Lys Pro Cys Asp Phe Pro Glu Ile Gln His Gly
            20                  25                  30          
 
 
Gly Leu Tyr Tyr Lys Ser Leu Arg Arg Leu Tyr Phe Pro Ala Ala Ala
        35                  40                  45             
 
 
Gly Gln Ser Tyr Ser Tyr Tyr Cys Asp Gln Asn Phe Val Thr Pro Ser
    50                  55                  60                  
 
 
Gly Ser Tyr Trp Asp Tyr Ile His Cys Thr Gln Asp Gly Trp Leu Pro
65                  70                  75                  80 
 
 
Thr Val Pro Cys Leu Arg Thr Cys Ser Lys Ser Asp Ile Glu Ile Glu
                85                  90                  95     
 
 
Asn Gly Phe Ile Ser Glu Ser Ser Ser Ile Tyr Ile Leu Asn Lys Glu
            100                 105                 110        
 
 
Ile Gln Tyr Lys Cys Lys Pro Gly Tyr Ala Thr Ala Asp Gly Asn Ser
        115                 120                 125            
 
 
Ser Gly Ser Ile Thr Cys Leu Gln Asn Gly Trp Ser Ala Gln Pro Ile
    130                 135                 140                
 
 
Cys Ile Lys Phe Cys Asp Met Pro Val Phe Glu Asn Ser Arg Ala Lys
145                 150                 155                 160
 
 
Ser Asn Gly Met Arg Phe Lys Leu His Asp Thr Leu Asp Tyr Glu Cys
                165                 170                 175    
 
 
Tyr Asp Gly Tyr Glu Ile Ser Tyr Gly Asn Thr Thr Gly Ser Ile Val
            180                 185                 190        
 
 
Cys Gly Glu Asp Gly Trp Ser His Phe Pro Thr Cys Tyr Asn Ser Ser
        195                 200                 205            
 
 
Glu Lys Cys Gly Pro Pro Pro Pro Ile Ser Asn Gly Asp Thr Thr Ser
    210                 215                 220                
 
 
Phe Leu Leu Lys Val Tyr Val Pro Gln Ser Arg Val Glu Tyr Gln Cys
225                 230                 235                 240
 
 
Gln Ser Tyr Tyr Glu Leu Gln Gly Ser Asn Tyr Val Thr Cys Ser Asn
                245                 250                 255    
 
 
Gly Glu Trp Ser Glu Pro Pro Gly Cys Ile His Pro Cys Ile Ile Thr
            260                 265                 270        
 
 
Glu Glu Asn Met Asn Lys Asn Asn Ile Gln Leu Lys Gly Lys Ser Asp
        275                 280                 285            
 
 
Ile Lys Tyr Tyr Ala Lys Thr Gly Asp Thr Ile Glu Phe Met Cys Lys
    290                 295                 300                
 
 
Leu Gly Tyr Asn Ala Asn Thr Ser Val Leu Ser Phe Gln Ala Val Cys
305                 310                 315                 320
 
 
Arg Glu Gly Ile Val Glu Tyr Pro Arg Cys Glu Ala Ala Ala Gly Gly
                325                 330                 335    
 
 
Gly Ser Gly Leu Asn Asp Ile Phe Glu Ala Gln Lys Ile Glu Trp His
            340                 345                 350        
 
 
Glu Gly Gly Gly Ser His His His His His His His His
        355                 360                 365
 
 
<210>  13
<211>  603
<212>  PRT
<213>  小家鼠
 
<400>  13
 
Met Leu Leu Leu Phe Ser Val Ile Leu Ile Ser Trp Val Ser Thr Val
1               5                   10                  15     
 
 
Gly Gly Glu Gly Thr Leu Cys Asp Phe Pro Lys Ile His His Gly Phe
            20                  25                  30         
 
 
Leu Tyr Asp Glu Glu Asp Tyr Asn Pro Phe Ser Gln Val Pro Thr Gly
        35                  40                  45             
 
 
Glu Val Phe Tyr Tyr Ser Cys Glu Tyr Asn Phe Val Ser Pro Ser Lys
    50                  55                  60                 
 
 
Ser Phe Trp Thr Arg Ile Thr Cys Thr Glu Glu Gly Trp Ser Pro Thr
65                  70                  75                  80 
 
 
Pro Lys Cys Leu Arg Met Cys Ser Phe Pro Phe Val Lys Asn Gly His
                85                  90                  95     
 
 
Ser Glu Ser Ser Gly Leu Ile His Leu Glu Gly Asp Thr Val Gln Ile
            100                 105                 110        
 
 
Ile Cys Asn Thr Gly Tyr Ser Leu Gln Asn Asn Glu Lys Asn Ile Ser
        115                 120                 125            
 
 
Cys Val Glu Arg Gly Trp Ser Thr Pro Pro Ile Cys Ser Phe Thr Lys
    130                 135                 140                
 
 
Gly Glu Cys His Val Pro Ile Leu Glu Ala Asn Val Asp Ala Gln Pro
145                 150                 155                 160
 
 
Lys Lys Glu Ser Tyr Lys Val Gly Asp Val Leu Lys Phe Ser Cys Arg
                165                 170                 175    
 
 
Lys Asn Leu Ile Arg Val Gly Ser Asp Ser Val Gln Cys Tyr Gln Phe
            180                 185                 190        
 
 
Gly Trp Ser Pro Asn Phe Pro Thr Cys Lys Gly Gln Val Arg Ser Cys
        195                 200                 205            
 
 
Gly Pro Pro Pro Gln Leu Ser Asn Gly Glu Val Lys Glu Ile Arg Lys
    210                 215                 220                
 
 
Glu Glu Tyr Gly His Asn Glu Val Val Glu Tyr Asp Cys Asn Pro Asn
225                 230                 235                 240
 
 
Phe Ile Ile Asn Gly Pro Lys Lys Ile Gln Cys Val Asp Gly Glu Trp
                245                 250                 255    
 
 
Thr Thr Leu Pro Thr Cys Val Glu Gln Val Lys Thr Cys Gly Tyr Ile
            260                 265                 270        
 
 
Pro Glu Leu Glu Tyr Gly Tyr Val Gln Pro Ser Val Pro Pro Tyr Gln
        275                 280                 285            
 
 
His Gly Val Ser Val Glu Val Asn Cys Arg Asn Glu Tyr Ala Met Ile
    290                 295                 300                
 
 
Gly Asn Asn Met Ile Thr Cys Ile Asn Gly Ile Trp Thr Glu Leu Pro
305                 310                 315                 320
 
 
Met Cys Val Ala Thr His Gln Leu Lys Arg Cys Lys Ile Ala Gly Val
                325                 330                 335    
 
 
Asn Ile Lys Thr Leu Leu Lys Leu Ser Gly Lys Glu Phe Asn His Asn
            340                 345                 350        
 
 
Ser Arg Ile Arg Tyr Arg Cys Ser Asp Ile Phe Arg Tyr Arg His Ser
        355                 360                 365            
 
 
Val Cys Ile Asn Gly Lys Trp Asn Pro Glu Val Asp Cys Thr Glu Lys
    370                 375                 380                
 
 
Arg Glu Gln Phe Cys Pro Pro Pro Pro Gln Ile Pro Asn Ala Gln Asn
385                 390                 395                 400
 
 
Met Thr Thr Thr Val Asn Tyr Gln Asp Gly Glu Lys Val Ala Val Leu
                405                 410                 415    
 
 
Cys Lys Glu Asn Tyr Leu Leu Pro Glu Ala Lys Glu Ile Val Cys Lys
            420                 425                 430        
 
 
Asp Gly Arg Trp Gln Ser Leu Pro Arg Cys Val Glu Ser Thr Ala Tyr
        435                 440                 445            
 
 
Cys Gly Pro Pro Pro Ser Ile Asn Asn Gly Asp Thr Thr Ser Phe Pro
    450                 455                 460                 
 
 
Leu Ser Val Tyr Pro Pro Gly Ser Thr Val Thr Tyr Arg Cys Gln Ser
465                 470                 475                 480
 
 
Phe Tyr Lys Leu Gln Gly Ser Val Thr Val Thr Cys Arg Asn Lys Gln
                485                 490                 495    
 
 
Trp Ser Glu Pro Pro Arg Cys Leu Asp Pro Cys Val Val Ser Glu Glu
            500                 505                 510        
 
 
Asn Met Asn Lys Asn Asn Ile Gln Leu Lys Trp Arg Asn Asp Gly Lys
        515                 520                 525            
 
 
Leu Tyr Ala Lys Thr Gly Asp Ala Val Glu Phe Gln Cys Lys Phe Pro
    530                 535                 540                
 
 
His Lys Ala Met Ile Ser Ser Pro Pro Phe Arg Ala Ile Cys Gln Glu
545                 550                 555                 560
 
 
Gly Lys Phe Glu Tyr Pro Ile Cys Glu Ala Ala Ala Gly Gly Gly Ser
                565                 570                 575    
 
 
Gly Leu Asn Asp Ile Phe Glu Ala Gln Lys Ile Glu Trp His Glu Gly
            580                 585                 590        
 
 
Gly Gly Ser His His His His His His His His
        595                 600            
 
 
<210>  14
<211>  483
<212>  PRT
<213>  小家鼠
 
<400>  14
 
Met Arg Leu Leu Ala Lys Ile Ile Cys Leu Met Leu Trp Ala Ile Cys
1               5                   10                  15     
 
 
Val Ala Glu Asp Cys Asn Glu Leu Pro Pro Arg Arg Asn Thr Glu Ile
            20                  25                  30         
 
 
Leu Thr Gly Ser Trp Ser Asp Gln Thr Tyr Pro Glu Gly Thr Gln Ala
        35                  40                  45             
 
 
Ile Tyr Lys Cys Arg Pro Gly Tyr Arg Ser Leu Gly Asn Val Ile Met
    50                  55                  60                 
 
 
Val Cys Arg Lys Gly Glu Trp Val Ala Leu Asn Pro Leu Arg Lys Cys
65                  70                  75                  80 
 
 
Gln Lys Arg Pro Cys Gly His Pro Gly Asp Thr Pro Phe Gly Thr Phe
                85                  90                  95     
 
 
Thr Leu Thr Gly Gly Asn Val Phe Glu Tyr Gly Val Lys Ala Val Tyr
            100                 105                 110        
 
 
Thr Cys Asn Glu Gly Tyr Gln Leu Leu Gly Glu Ile Asn Tyr Arg Glu
        115                 120                 125            
 
 
Cys Asp Thr Asp Gly Trp Thr Asn Asp Ile Pro Ile Cys Glu Val Val
    130                 135                 140                
 
 
Lys Cys Leu Pro Val Thr Ala Pro Glu Asn Gly Lys Ile Val Ser Ser
145                 150                 155                 160
 
 
Ala Met Glu Pro Asp Arg Glu Tyr His Phe Gly Gln Ala Val Arg Phe
                165                 170                 175    
 
 
Val Cys Asn Ser Gly Tyr Lys Ile Glu Gly Asp Glu Glu Met His Cys
            180                 185                 190        
 
 
Ser Asp Asp Gly Phe Trp Ser Lys Glu Lys Pro Lys Cys Val Glu Ile
        195                 200                 205            
 
 
Ser Cys Lys Ser Pro Asp Val Ile Asn Gly Ser Pro Ile Ser Gln Lys
    210                 215                 220                
 
 
Ile Ile Tyr Lys Glu Asn Glu Arg Phe Gln Tyr Lys Cys Asn Met Gly
225                 230                 235                 240
 
 
Tyr Glu Tyr Ser Glu Arg Gly Asp Ala Val Cys Thr Glu Ser Gly Trp
                245                 250                 255    
 
 
Arg Pro Leu Pro Ser Cys Glu Glu Lys Ser Cys Asp Asn Pro Tyr Ile
            260                 265                 270        
 
 
Pro Asn Gly Asp Tyr Ser Pro Leu Arg Ile Lys His Arg Thr Gly Asp
        275                 280                 285            
 
 
Glu Ile Thr Tyr Gln Cys Arg Asn Gly Phe Tyr Pro Ala Thr Arg Gly
    290                 295                 300                
 
 
Asn Thr Ala Lys Cys Thr Ser Thr Gly Trp Ile Pro Ala Pro Arg Cys
305                 310                 315                 320
 
 
Thr Leu Lys Pro Cys Asp Tyr Pro Asp Ile Lys His Gly Gly Leu Tyr
                325                 330                 335    
 
 
His Glu Asn Met Arg Arg Pro Tyr Phe Pro Val Ala Val Gly Lys Tyr
            340                 345                 350        
 
 
Tyr Ser Tyr Tyr Cys Asp Glu His Phe Glu Thr Pro Ser Gly Ser Tyr
        355                 360                 365            
 
 
Trp Asp His Ile His Cys Thr Gln Asp Gly Trp Ser Pro Ala Val Pro
    370                 375                 380                
 
 
Cys Leu Arg Lys Cys Tyr Phe Pro Tyr Leu Glu Asn Gly Tyr Asn Gln
385                 390                 395                 400
 
 
Asn Tyr Gly Arg Lys Phe Val Gln Gly Lys Ser Ile Asp Val Ala Cys
                405                 410                 415    
 
 
His Pro Gly Tyr Ala Leu Pro Lys Ala Gln Thr Thr Val Thr Cys Met
            420                 425                 430        
 
 
Glu Asn Gly Trp Ser Pro Thr Pro Arg Cys Ile Arg Val Ser Phe Thr
        435                 440                 445            
 
 
Leu Ala Ala Ala Gly Gly Gly Ser Gly Leu Asn Asp Ile Phe Glu Ala
    450                 455                 460                
 
 
Gln Lys Ile Glu Trp His Glu Gly Gly Gly Ser His His His His His
465                 470                 475                 480
 
 
His His His
           
 
 
<210>  15
<211>  772
<212>  DNA
<213>  小家鼠
 
 
<220>
<221>  misc_feature
<222>  (1)..(772)
<223>  cDNA重链<CFHR1>M-5.1.5
 
<400>  15
tttttttttt tttgctctga cagaggaggc cggtcctgga ttcgattccc agttcctcac       60
 
attcagtcag cactgaacac ggacccctca ccatgaactt cgggctcagc ttgattttcc      120
 
ttgccctcat tttaaaaggt gtccagtgtg aggtgcagct ggtggagtct gggggagact      180
 
tagtgaagcc tggagggtcc ctgaaactct cctgtgcagc ctctggattc actttcagta      240
 
gctatgacat gtcttgggtt cgccagactc cagacaagag gctggagtgg gtcgcaacca      300
 
ttagtagtgg tggtagtaac acctactatc cagacagtgt gaaggggcga ttcaccatct      360
 
ccagagacaa tgccaagaac accctgtacc tgcaaatgag cagtctgaag tctgaggaca      420
 
cagccatgta ttactgtgca agacaagggt attactacgg tagtagttac tatgctatgg      480
 
actactgggg tcaaggaacc tcagtcaccg tctcctcagc caaaacgaca cccccatctg      540
 
tctatccact ggcccctgga tctgctgccc aaactaactc catggtgacc ctgggatgcc      600
 
tggtcaaggg ctatttccct gagccagtga cagtgacctg gaactctgga tccctgtcca      660
 
gcggtgtgca caccttccca gctgtcctgc agtctgacct ctacactctg agcagctcag      720
 
tgactgtccc ctccagcacc tggcccagcg agaccgtcac ctgcaacgtt gc              772
 
 
<210>  16
<211>  227
<212>  PRT
<213>  小家鼠
 
 
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (1)..(227)
<223> 重链 <CFHR1>M-5.1.5
 
<400>  16
 
Met Asn Phe Gly Leu Ser Leu Ile Phe Leu Ala Leu Ile Leu Lys Gly
1               5                   10                  15     
 
 
Val Gln Cys Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys
            20                  25                  30         
 
 
Pro Gly Gly Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe
        35                  40                  45             
 
 
Ser Ser Tyr Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Asp Lys Arg Leu
    50                  55                  60                 
 
 
Glu Trp Val Ala Thr Ile Ser Ser Gly Gly Ser Asn Thr Tyr Tyr Pro
65                  70                  75                  80 
 
 
Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn
                85                  90                  95     
 
 
Thr Leu Tyr Leu Gln Met Ser Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Met
            100                 105                 110        
 
 
Tyr Tyr Cys Ala Arg Gln Gly Tyr Tyr Tyr Gly Ser Ser Tyr Tyr Ala
        115                 120                 125            
 
 
Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Lys
    130                 135                 140                
 
 
Thr Thr Pro Pro Ser Val Tyr Pro Leu Ala Pro Gly Ser Ala Ala Gln
145                 150                 155                 160
 
 
Thr Asn Ser Met Val Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro
                165                 170                 175    
 
 
Glu Pro Val Thr Val Thr Trp Asn Ser Gly Ser Leu Ser Ser Gly Val
            180                 185                 190        
 
 
His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Asp Leu Tyr Thr Leu Ser Ser
        195                 200                 205             
 
 
Ser Val Thr Val Pro Ser Ser Thr Trp Pro Ser Glu Thr Val Thr Cys
    210                 215                 220                
 
 
Asn Val Ala
225        
 
 
<210>  17
<211>  712
<212>  DNA
<213>  小家鼠
 
 
<220>
<221>  misc_feature
<222>  (1)..(712)
<223>  编码轻链<CFHR1>M-5.1.5的cDNA
 
<400>  17
ggaccaaaat tcaaagacaa aatggattct caagtgcaga ttttcagctt ccttctaatc       60
 
agtgccttag tcataatgtc cagaggacag attgttctca cccagtctcc agcaatcatg      120
 
tctgcatctc caggggagaa ggtcaccatg acctgcaggg ccagttcaag tgtaagttcc      180
 
agttacttgc actggtacca gcagaagcca ggatcttccc ccaaactctg gatttatatc      240
 
acatccagcc tggcttcagg agtcccagct cgcttcagtg gcagtgggtc tgggacctct      300
 
tactctctca caatcagcag tgtggaggct gaggatggtg ccacttatta ctgccagcag      360
 
tatcatagtt ccccgtatac gttcggatcg gggaccaagc tggaaataaa acgggctgat      420
 
gctgcaccaa ctgtatccat cttcccacca tccagtgagc agttaacatc tggaggtgcc      480
 
tcagtcgtgt gcttcttgaa caacttctac cccaaagaca tcaatgtcaa gtggaagatt      540
 
gatggcagtg aacgacaaaa tggcgtcctg aacagttgga ctgatcagga cagcaaagac      600
 
agcacctaca gcatgagcag caccctcacg ttgaccaagg acgagtatga acgacataac      660
 
agctatacct gtgaggccac tcacaagaca tcaacttcac ccattgtcaa ga              712
 
 
<210>  18
<211>  231
<212>  PRT
<213>  小家鼠
 
 
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (1)..(231)
<223>  轻链<CFHR1>M-5.1.5
 
<400>  18
 
Met Asp Ser Gln Val Gln Ile Phe Ser Phe Leu Leu Ile Ser Ala Leu
1               5                   10                  15     
 
 
Val Ile Met Ser Arg Gly Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile
            20                  25                  30         
 
 
Met Ser Ala Ser Pro Gly Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Arg Ala Ser
        35                  40                  45             
 
 
Ser Ser Val Ser Ser Ser Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly
    50                  55                  60                 
 
 
Ser Ser Pro Lys Leu Trp Ile Tyr Ile Thr Ser Ser Leu Ala Ser Gly
65                  70                  75                  80 
 
 
Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu
                85                  90                  95     
 
 
Thr Ile Ser Ser Val Glu Ala Glu Asp Gly Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln
            100                 105                 110        
 
 
Gln Tyr His Ser Ser Pro Tyr Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu
        115                 120                 125            
 
 
Ile Lys Arg Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser
    130                 135                 140                
 
 
Ser Glu Gln Leu Thr Ser Gly Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn
145                 150                 155                 160
 
 
Asn Phe Tyr Pro Lys Asp Ile Asn Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser
                165                 170                 175    
 
 
Glu Arg Gln Asn Gly Val Leu Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys
            180                 185                 190        
 
 
Asp Ser Thr Tyr Ser Met Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu
        195                 200                 205            
 
 
Tyr Glu Arg His Asn Ser Tyr Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser
    210                 215                 220                
 
 
Thr Ser Pro Ile Val Lys Xaa
225                 230    
 
 
<210>  19
<211>  8
<212>  PRT
<213>  小家鼠
 
 
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (1)..(8)
<223>  5.1.5的hCDR1
 
<400>  19
 
Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Asp
1               5              
 
 
<210>  20
<211>  8
<212>  PRT
<213>  小家鼠
 
 
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (1)..(8)
<223>  5.1.5的hCDR2
 
<400>  20
 
Ile Ser Ser Gly Gly Ser Asn Thr
1               5              
 
 
<210>  21
<211>  16
<212>  PRT
<213>  小家鼠
 
 
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (1)..(16)
<223>  5.1.5的hCDR3
 
<400>  21
 
Ala Arg Gln Gly Tyr Tyr Tyr Gly Ser Ser Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr
1               5                   10                  15     
 
 
<210>  22
<211>  7
<212>  PRT
<213>  小家鼠
 
 
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (1)..(7)
<223>  5.1.5的LCDR1
 
<400>  22
 
Ser Ser Val Ser Ser Ser Tyr
1               5          
 
 
<210>  23
<211>  9
<212>  PRT
<213>  小家鼠
 
 
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (1)..(9)
<223>  5.1.5的LCDR3
 
<400>  23
 
Gln Gln Tyr His Ser Ser Pro Tyr Thr
1               5                  
 
 
<210>  24
<211>  631
<212>  DNA
<213>  小家鼠
 
 
<220>
<221>  misc_feature
<222>  (1)..(631)
<223>  Mab 4.1.3的重链的cDNA
 
<400>  24
gaccacgcgt atcgatgtcg actttttttt ttttttttnc atcgctctca ctggaggctg       60
 
atctctgaag ataaggaggt gtagcctaaa agatgagagt gctggttctt ttgtggctgt      120
 
tcacagcctt tcctggtatc ctgtctgatg tgcagcttca ggagtcggga cctggcctgg      180
 
tgaaaccttc tcagtctctg tccctcacct gcactgtcac tggctactca atcaccagtg      240
 
aatatgcctg gaactggatc cggcaatttc caggaaacaa actggagtgg atggcctaca      300
 
taaattccag tggtaaatct agctataatc catctctcaa aagtcgaatc tctgtcactc      360
 
gagacacatc caagaaccag ttcttcctgc aattgaattc tgtgactact gaggacacag      420
 
ccacatatta ctgtgcgaga gagggatatg gtaactaccc ggcctggttt gcttactggg      480
 
gccaagggac tctggtcact gtctctgcag ccaaaacaac agccccatcg gtctatccac      540
 
tggcccctgt gtgtggagat acaactggct cctcggtgac tctaggatgc ctggtcaagg      600
 
gttatttccc tgagccagtg accttgacct g                                     631
 
 
<210>  25
<211>  179
<212>  PRT
<213>  小家鼠
 
 
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (1)..(179)
<223> Mab 4.1.3的重链
 
<400>  25
 
Met Arg Val Leu Val Leu Leu Trp Leu Phe Thr Ala Phe Pro Gly Ile
1               5                   10                  15     
 
 
Leu Ser Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro
            20                  25                  30         
 
 
Ser Gln Ser Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Thr Gly Tyr Ser Ile Thr
        35                  40                  45             
 
 
Ser Glu Tyr Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Asn Lys Leu
    50                  55                  60                 
 
 
Glu Trp Met Ala Tyr Ile Asn Ser Ser Gly Lys Ser Ser Tyr Asn Pro
65                  70                  75                  80 
 
 
Ser Leu Lys Ser Arg Ile Ser Val Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln
                85                  90                  95     
 
 
Phe Phe Leu Gln Leu Asn Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr
            100                 105                 110        
 
 
Tyr Cys Ala Arg Glu Gly Tyr Gly Asn Tyr Pro Ala Trp Phe Ala Tyr
        115                 120                 125            
 
 
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala Ala Lys Thr Thr Ala
    130                 135                 140                
 
 
Pro Ser Val Tyr Pro Leu Ala Pro Val Cys Gly Asp Thr Thr Gly Ser
145                 150                 155                 160
 
 
Ser Val Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val
                165                 170                 175    
 
 
Thr Leu Thr
           
 
 
<210>  26
<211>  749
<212>  DNA
<213>  小家鼠
 
 
<220>
<221>  misc_feature
<222>  (1)..(749)
<223>  Mab 4.1.3的轻链的cDNA序列
 
<400>  26
gaccacgagc acgcgtgtcg actttttttt ttttttttgt awttgaagtc aagactcagc       60
 
ctggacatga tgtcctctgc tcagttcctt ggtctcctgt tgctctgttt tcaaggtacc      120
 
agatgtgata tccagatgac acagactaca tcctccctgt ctgcctctct gggagacaga      180
 
gtcaccatca gttgcagtgc aagtcaggac attaacaatt atttaaactg gtatcagcag      240
 
aaaccagatg gaactgttaa actcctgatt tattacactt caaatttaca ctcaggagtc      300
 
ccatcaaggt tcagtggcag tgggtctggg acagattatt ctctcaccat cagcaacctg      360
 
gaacctgaag atattgccac ttacttttgt cagcagtata gtaagcttcc tcggacgttc      420
 
ggtggaggca ccaagctgga aatcaaacgg gctgatgctg caccaactgt atccatcttc      480
 
ccaccatcca gtgagcagtt aacatctgga ggtgcctcag tcgtgtgctt cttgaacaac      540
 
ttctacccca aagacatcaa tgtcaagtgg aagattgatg gcagtgaacg acaaaatggc      600
 
gtcctgaaca gttggactga tcaggacagc aaagacagca cctacagcat gagcagcacc      660
 
ctcacgttga ccaaggacga gtatgaacga cataacagct atacctgtga ggccactcac      720
 
aagacatcaa ctttcaccca ttgtcaaga                                        749
 
 
<210>  27
<211>  227
<212>  PRT
<213>  小家鼠
 
 
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (1)..(227)
<223>  Mab 4.1.3的轻链
 
<400>  27
 
Met Met Ser Ser Ala Gln Phe Leu Gly Leu Leu Leu Leu Cys Phe Gln
1               5                   10                  15     
 
 
Gly Thr Arg Cys Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser
            20                  25                  30         
 
 
Ala Ser Leu Gly Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Ala Ser Gln Asp
        35                  40                  45             
 
 
Ile Asn Asn Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val
    50                  55                  60                 
 
 
Lys Leu Leu Ile Tyr Tyr Thr Ser Asn Leu His Ser Gly Val Pro Ser
65                  70                  75                  80 
 
 
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser
                85                  90                  95     
 
 
Asn Leu Glu Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Ser
            100                 105                 110        
 
 
Lys Leu Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
        115                 120                 125            
 
 
Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser Glu Gln
    130                 135                 140                
 
 
Leu Thr Ser Gly Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe Tyr
145                 150                 155                 160
 
 
Pro Lys Asp Ile Asn Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser Glu Arg Gln
                165                 170                 175    
 
 
Asn Gly Val Leu Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
            180                 185                 190        
 
 
Tyr Ser Met Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu Arg
        195                 200                 205             
 
 
His Asn Ser Tyr Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Phe Thr
    210                 215                 220                
 
 
His Cys Gln
225        
 
 
<210>  28
<211>  599
<212>  DNA
<213>  小家鼠
 
 
<220>
<221>  misc_feature
<222>  (1)..(599)
<223>  Mab 4.2.53的重链的cDNA序列
 
<400>  28
gaccacgcgt atcgatgtcg actttttttt ttttttttat ctcctcacta gagcccccat       60
 
cagagcatgg ctgtcctggt gctgttcctc tgcctggttg catttccaag ctgtgtcctg      120
 
tcccaggtgc agttgaagga gtcaggacct ggcctggtgg cgccctcaca gagcctgtcc      180
 
atcacttgca ctgtctctgg gttttcatta accagttatg gtgtacactg ggttcgccag      240
 
cctccaggaa agggtctgga gtggctggga gtaatatggg ctggtggaaa tacagattat      300
 
atttcggctc tcatgtccag actgagcatc agcaaagaca actccaagag ccaagttttc      360
 
ttaaaaataa acagactgca aactgatgac acagccgtgt actactgtgc cagagatcat      420
 
tatgatggtt actacatgga gtactggggt caaggaacct cagtcaccgt ctccccagcc      480
 
aaaacgacac ccccatctgt ctatccactg gcccctggat ctgctgccca aactaactcc      540
 
atggtgaccc tgggatgcct ggtcaagggc tatttccctg agccagtgac agtgacctg       599
 
 
<210>  29
<211>  177
<212>  PRT
<213>  小家鼠
 
 
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (1)..(177)
<223>  Mab 4.2.53的重链
 
<400>  29
 
Met Ala Val Leu Val Leu Phe Leu Cys Leu Val Ala Phe Pro Ser Cys
1               5                   10                  15     
 
 
Val Leu Ser Gln Val Gln Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala
            20                  25                  30         
 
 
Pro Ser Gln Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu
        35                  40                  45             
 
 
Thr Ser Tyr Gly Val His Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu
    50                  55                  60                 
 
 
Glu Trp Leu Gly Val Ile Trp Ala Gly Gly Asn Thr Asp Tyr Ile Ser
65                  70                  75                  80 
 
 
Ala Leu Met Ser Arg Leu Ser Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln
                85                  90                  95     
 
 
Val Phe Leu Lys Ile Asn Arg Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Val Tyr
            100                 105                 110        
 
 
Tyr Cys Ala Arg Asp His Tyr Asp Gly Tyr Tyr Met Glu Tyr Trp Gly
        115                 120                 125            
 
 
Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Pro Ala Lys Thr Thr Pro Pro Ser
    130                 135                 140                
 
 
Val Tyr Pro Leu Ala Pro Gly Ser Ala Ala Gln Thr Asn Ser Met Val
145                 150                 155                 160
 
 
Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
                165                 170                 175    
 
 
Thr
   
 
 
<210>  30
<211>  748
<212>  DNA
<213>  小家鼠
 
 
<220>
<221>  misc_feature
<222>  (1)..(748)
<223>  Mab 4.2.53的轻链的cDNA序列
 
<400>  30
gaccacgcgt atcgatgtcg actttttttt ttttttttag tcattcttgg tcaggagacg       60
 
ttgtagaaat gagaccgtct attcagttcc tggggctctt gttgttctgg cttcatggtg      120
 
ttcagtgtga catccagatg acacagtctc catcctcact gtctgcatct ctgggaggca      180
 
aagtcaccat cacttgcaag gcaagccagg acattaacaa atatttagct tggtaccaac      240
 
acaagcctgg aaaaggtcct agactgctca tacattacac atttacatta cagccaggca      300
 
tcccatcaag gttcagtgga ggtgggtctg ggagagatta ttccttcaac atcaacaacc      360
 
tggagcctga ggatattgca acttattatt gtctgcagta tgataatctg tatacgttcg      420
 
ggggggggac caagctggaa ataaaacggg ctgatgctgc accaactgta tccatcttcc      480
 
caccatccag tgagcagtta acatctggag gtgcctcagt cgtgtgcttc ttgaacaact      540
 
tctaccccaa agacatcaat gtcaagtgga agattgatgg cagtgaacga caaaatggcg      600
 
tcctgaacag ttggactgat caggacagca aagacagcac ctacagcatg agcagcaccc      660
 
tcacgttgac caaggacgag tatgaacgac ataacagcta tacctgtgag gccactcaca      720
 
agacatcaac tttcacccat tgtcaaga                                         748
 
 
<210>  31
<211>  226
<212>  PRT
<213>  小家鼠
 
 
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (1)..(226)
<223>  Mab 4.2.53的轻链
 
<400>  31
 
Met Arg Pro Ser Ile Gln Phe Leu Gly Leu Leu Leu Phe Trp Leu His
1               5                   10                  15     
 
 
Gly Val Gln Cys Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser
            20                  25                  30         
 
 
Ala Ser Leu Gly Gly Lys Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp
        35                  40                  45             
 
 
Ile Asn Lys Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln His Lys Pro Gly Lys Gly Pro
    50                  55                  60                 
 
 
Arg Leu Leu Ile His Tyr Thr Phe Thr Leu Gln Pro Gly Ile Pro Ser
65                  70                  75                  80 
 
 
Arg Phe Ser Gly Gly Gly Ser Gly Arg Asp Tyr Ser Phe Asn Ile Asn
                85                  90                  95     
 
 
Asn Leu Glu Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp
            100                 105                 110        
 
 
Asn Leu Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Ala
        115                 120                 125            
 
 
Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser Glu Gln Leu
    130                 135                 140                
 
 
Thr Ser Gly Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe Tyr Pro
145                 150                 155                 160
 
 
Lys Asp Ile Asn Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser Glu Arg Gln Asn
                165                 170                 175    
 
 
Gly Val Leu Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr
            180                 185                 190        
 
 
Ser Met Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu Arg His
        195                 200                 205             
 
 
Asn Ser Tyr Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Phe Thr His
    210                 215                 220                
 
 
Cys Gln
225    
 
 
<210>  32
<211>  649
<212>  DNA
<213>  小家鼠
 
 
<220>
<221>  misc_feature
<222>  (1)..(649)
<223>  Mab 4.2.74的重链的cDNA序列
 
<400>  32
gaccacgcgt atcgatgtcg actttttttt ttttttttwg ctctgacaga ggagccaagc       60
 
cctggattcc caggtcctca cattcagtga tcagcactga acacagacca ctcaccatgg      120
 
actccaggct caatttagtt ttccttgtcc ttattttaaa aggtgtccag tgtgatgtgc      180
 
ggctggtgga gtctggggga ggcttagtgc agcctggagg gtcccggaaa ctctcctgtg      240
 
cagcctctgg attcactttc agtagctttg gaatgcactg ggttcgtcag gctccagaga      300
 
aggggctgga gtgggtcgca tacattagta gtggcagtag taccatctac tatgcagaca      360
 
cagtgaaggg ccgattcacc atctccagag acaatcccaa gaacaccctg ttcctgcaaa      420
 
tgaccagtct aaggtctgag gacacggcca tgtattactg tgcaagatgg ggtaactcgt      480
 
atgctatgga ctactggggt caaggaacct cagtcaccgt ctcctcagcc aaaacgacac      540
 
ccccatctgt ctatccactg gcccctggat ctgctgccca aactaactcc atggtgaccc      600
 
tgggatgcct ggtcaagggc tatttccctg agccagtgac agtgacctg                  649
 
 
<210>  33
<211>  177
<212>  PRT
<213>  小家鼠
 
 
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (1)..(177)
<223>  Mab 4.2.74的重链
 
<400>  33
 
Met Asp Ser Arg Leu Asn Leu Val Phe Leu Val Leu Ile Leu Lys Gly
1               5                   10                  15     
 
 
Val Gln Cys Asp Val Arg Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln
            20                  25                  30         
 
 
Pro Gly Gly Ser Arg Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe
        35                  40                  45             
 
 
Ser Ser Phe Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Glu Lys Gly Leu
    50                  55                  60                 
 
 
Glu Trp Val Ala Tyr Ile Ser Ser Gly Ser Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala
65                  70                  75                  80 
 
 
Asp Thr Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Pro Lys Asn
                85                  90                  95     
 
 
Thr Leu Phe Leu Gln Met Thr Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met
            100                 105                 110        
 
 
Tyr Tyr Cys Ala Arg Trp Gly Asn Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly
        115                 120                 125            
 
 
Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Lys Thr Thr Pro Pro Ser
    130                 135                 140                
 
 
Val Tyr Pro Leu Ala Pro Gly Ser Ala Ala Gln Thr Asn Ser Met Val
145                 150                 155                 160
 
 
Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
                165                 170                 175    
 
 
Thr
   
 
 
<210>  34
<211>  744
<212>  DNA
<213>  小家鼠
 
 
<220>
<221>  misc_feature
<222>  (1)..(744)
<223>  Mab 4.2.74的轻链的cDNA序列
 
<400>  34
tttttttttt ttttttctac atctgaaagg caggtggagc aagatggaat cacagactca       60
 
ggtcctcatg tccctgctgt tctgggtatc tggtacctgt ggggacattg tgatgacaca      120
 
gtctccatcc tccctgactg tgacagcagg agagaaggtc actatgagct gcaagtccag      180
 
tcagagtctg ctaaacagag gaaatcaaaa gaactatttg acctggtacc agcagaaacc      240
 
agggcagcct cctaaactgt tgatttactg ggcatccact agggaatctg gggtccctga      300
 
tcgcttcaca ggcagtggat ctggaacaga tttcactctc accatcagca gtgtgctggc      360
 
tgaagacctg gcagtttatt actgtcagat tgcttatagt tctccattca cgttcggctc      420
 
ggggacaaag ttggaaatta aacgggctga tgctgcacca actgtatcca tcttcccacc      480
 
atccagtgag cagttaacat ctggaggtgc ctcagtcgtg tgcttcttga acaacttcta      540
 
ccccaaagac atcaatgtca agtggaagat tgatggcagt gaacgacaaa atggcgtcct      600
 
gaacagttgg actgatcagg acagcaaaga cagcacctac agcatgagca gcaccctcac      660
 
gttgaccaag gacgagtatg aacgacataa cagctatacc tgtgaggcca ctcacaagac      720
 
atcaactttc acccattgtc aaga                                             744
 
 
<210>  35
<211>  233
<212>  PRT
<213>  小家鼠
 
 
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (1)..(233)
<223>  Mab 4.2.74的轻链
 
<400>  35
 
Met Glu Ser Gln Thr Gln Val Leu Met Ser Leu Leu Phe Trp Val Ser
1               5                   10                  15     
 
 
Gly Thr Cys Gly Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr
            20                  25                  30         
 
 
Val Thr Ala Gly Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser
        35                  40                  45             
 
 
Leu Leu Asn Arg Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln
    50                  55                  60                 
 
 
Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg
65                  70                  75                  80 
 
 
Glu Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp
                85                  90                  95     
 
 
Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Leu Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr
            100                 105                 110        
 
 
Tyr Cys Gln Ile Ala Tyr Ser Ser Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr
        115                 120                 125            
 
 
Lys Leu Glu Ile Lys Arg Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser Ile Phe
    130                 135                 140                
 
 
Pro Pro Ser Ser Glu Gln Leu Thr Ser Gly Gly Ala Ser Val Val Cys
145                 150                 155                 160
 
 
Phe Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Lys Asp Ile Asn Val Lys Trp Lys Ile
                165                 170                 175    
 
 
Asp Gly Ser Glu Arg Gln Asn Gly Val Leu Asn Ser Trp Thr Asp Gln
            180                 185                 190        
 
 
Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Met Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr
        195                 200                 205            
 
 
Lys Asp Glu Tyr Glu Arg His Asn Ser Tyr Thr Cys Glu Ala Thr His
    210                 215                 220                
 
 
Lys Thr Ser Thr Phe Thr His Cys Gln
225                 230            
 
 
<210>  36
<211>  653
<212>  DNA
<213>  小家鼠
 
 
<220>
<221>  misc_feature
<222>  (1)..(653)
<223>  Mab 5.3.23的重链的cDNA序列
 
<400>  36
gaccacgcgt atcgatgtcg actttttttt ttttttttwg acagacgcac aaccctggac       60
 
tcccaagtct ttctcttcag tgacaaacac agacatagaa cattcaccat gtacttggga      120
 
ctgaacagtg taatcatagt ctttctctta aaaggtgtcc agagtgaagt gaagcttgag      180
 
gagtctggag gaggcttggt gcaacctgga ggatccatga aactctcttg tgatggttct      240
 
ggattcactt ttagtgatgc ctggatgggc tgggtccgcc agtcaccaga gaaggggctt      300
 
gaatgggttt ctgaaattag aaacagagct aataatcatg agacacatta tgctgagtct      360
 
gtgaaaggga ggttcaccat ctcaagagat gattccaaaa gtagagtgta cttgcaaatg      420
 
aacagtttaa gagctgaaga cactggcatt tattactgta acgggcggta ttatgattcc      480
 
tactggttcc tcgatgtctg gggcgcaggg accacggtca ccgtctcctc agccaaaacg      540
 
acacccccat ctgtctatcc actggcccct ggatctgctg cccaaactaa ctccatggtg      600
 
accctgggat gcctggtcaa gggctatttc cctgagccag tgacagtgac ctg             653
 
 
<210>  37
<211>  181
<212>  PRT
<213>  小家鼠
 
 
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (1)..(181)
<223>  Mab 5.3.23的重链
 
<400>  37
 
Met Tyr Leu Gly Leu Asn Ser Val Ile Ile Val Phe Leu Leu Lys Gly
1               5                   10                  15     
 
 
Val Gln Ser Glu Val Lys Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln
            20                  25                  30         
 
 
Pro Gly Gly Ser Met Lys Leu Ser Cys Asp Gly Ser Gly Phe Thr Phe
        35                  40                  45             
 
 
Ser Asp Ala Trp Met Gly Trp Val Arg Gln Ser Pro Glu Lys Gly Leu
    50                  55                  60                 
 
 
Glu Trp Val Ser Glu Ile Arg Asn Arg Ala Asn Asn His Glu Thr His
65                  70                  75                  80 
 
 
Tyr Ala Glu Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser
                85                  90                  95     
 
 
Lys Ser Arg Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr
            100                 105                 110        
 
 
Gly Ile Tyr Tyr Cys Asn Gly Arg Tyr Tyr Asp Ser Tyr Trp Phe Leu
        115                 120                 125            
 
 
Asp Val Trp Gly Ala Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Lys Thr
    130                 135                 140                
 
 
Thr Pro Pro Ser Val Tyr Pro Leu Ala Pro Gly Ser Ala Ala Gln Thr
145                 150                 155                 160
 
 
Asn Ser Met Val Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu
                165                 170                 175    
 
 
Pro Val Thr Val Thr
            180    
 
 
<210>  38
<211>  729
<212>  DNA
<213>  小家鼠
 
 
<220>
<221>  misc_feature
<222>  (1)..(729)
<223>  Mab 5.3.23的轻链的cDNA序列
 
<400>  38
tttttttttt tttttttttg aaatacatca ggcaggcaaa ggcatcaaga tgaagtcaca       60
 
gacccaggtc ttcatatttc tactgctctg tgtgtctggt actcatggga atattgtgat      120
 
gacccagact cccaaattcc tgcctgtgtc agtaggagac agggttacca tgacctgcaa      180
 
ggccagtcag agtgtgggtt ataatgtggc ctggttccaa cagaagccag gacagtctcc      240
 
taaactgctg atatactatg catccaatcg ctacactgga gtccctgatc gcttcactgg      300
 
cagtggaggt gggacagatt tcactttcac catcagcagt gtgcaggttg aagacctggc      360
 
agtttatttc tgtcagcagc attatatctc tccaacgttc ggatcgggga ccaagcttga      420
 
aataaaacgg gctgatgctg caccaactgt atccatcttc ccaccatcca gtgagcagtt      480
 
aacatctgga ggtgcctcag tcgtgtgctt cttgaacaac ttctacccca aagacatcaa      540
 
tgtcaagtgg aagattgatg gcagtgaacg acaaaatggc gtcctgaaca gttggactga      600
 
tcaggacagc aaagacagca cctacagcat gagcagcacc ctcacgttga ccaaggacga      660
 
gtatgaacga cataacagct atacctgtga ggccactcac aagacatcaa ctttcaccca      720
 
ttgtcaaga                                                              729
 
 
<210>  39
<211>  226
<212>  PRT
<213>  小家鼠
 
 
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<223>  Mab 5.3.23的轻链
 
<400>  39
 
Met Lys Ser Gln Thr Gln Val Phe Ile Phe Leu Leu Leu Cys Val Ser
1               5                   10                  15     
 
 
Gly Thr His Gly Asn Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Lys Phe Leu Pro
            20                  25                  30         
 
 
Val Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Met Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser
        35                  40                  45             
 
 
Val Gly Tyr Asn Val Ala Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro
    50                  55                  60                 
 
 
Lys Leu Leu Ile Tyr Tyr Ala Ser Asn Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp
65                  70                  75                  80 
 
 
Arg Phe Thr Gly Ser Gly Gly Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser
                85                  90                  95     
 
 
Ser Val Gln Val Glu Asp Leu Ala Val Tyr Phe Cys Gln Gln His Tyr
            100                 105                 110        
 
 
Ile Ser Pro Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Ala
        115                 120                 125            
 
 
Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser Glu Gln Leu
    130                 135                 140                
 
 
Thr Ser Gly Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe Tyr Pro
145                 150                 155                 160
 
 
Lys Asp Ile Asn Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser Glu Arg Gln Asn
                165                 170                 175    
 
 
Gly Val Leu Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr
            180                 185                 190        
 
 
Ser Met Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu Arg His
        195                 200                 205            
 
 
Asn Ser Tyr Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Phe Thr His
    210                 215                 220                
 
 
Cys Gln
225    
 
 
<210>  40
<211>  616
<212>  DNA
<213>  小家鼠
 
 
<220>
<221>  misc_feature
<222>  (1)..(616)
<223>  Mab L20/3的重链的cDNA序列
 
<400>  40
gaccacgcgt atcgatgtcg actttttttt ttttttttwa catatgtcca atgtcctctc       60
 
cacaggcact gaacacactg actctaacca tgggatggag ctggatcttt ctcttcttcc      120
 
tgtcaggaac tgcaggtgtc ctctctgagg tcctgctgca acagtctgga cctgaactag      180
 
tgaagcctgg ggcttcagtg aagataccct gcaaggcctc tggatacaca ttcactgact      240
 
acaacatgga ctgggtgaag cagagccatg gaaagagcct tgaatggatt ggagacatta      300
 
atcctaacaa tggttttact atctacaacc agaagttcaa gggcaaggcc acattgactg      360
 
tagacaagtc ctccagcaca gcctacatgg agctccgcag cctgacatct gaggacactg      420
 
caatctatta ctgtgcaatc aactgggact ggtttgctta ctggggccaa gggactctgg      480
 
tcactgtctc tgcagccaaa acgacacccc catctgtcta tccactggcc cctggatctg      540
 
ctgcccaaac taactccatg gtgaccctgg gatgcctggt caagggctat ttccctgagc      600
 
cagtgacagt gacctg                                                      616
 
 
<210>  41
<211>  175
<212>  PRT
<213>  小家鼠
 
 
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (1)..(175)
<223>  Mab L20/3的重链
 
<400>  41
 
Met Gly Trp Ser Trp Ile Phe Leu Phe Phe Leu Ser Gly Thr Ala Gly
1               5                   10                  15     
 
 
Val Leu Ser Glu Val Leu Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys
            20                  25                  30         
 
 
Pro Gly Ala Ser Val Lys Ile Pro Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe
        35                  40                  45             
 
 
Thr Asp Tyr Asn Met Asp Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu
    50                  55                  60                 
 
 
Glu Trp Ile Gly Asp Ile Asn Pro Asn Asn Gly Phe Thr Ile Tyr Asn
65                  70                  75                  80 
 
 
Gln Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser
                85                  90                  95     
 
 
Thr Ala Tyr Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Ile
            100                 105                 110        
 
 
Tyr Tyr Cys Ala Ile Asn Trp Asp Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly
        115                 120                 125            
 
 
Thr Leu Val Thr Val Ser Ala Ala Lys Thr Thr Pro Pro Ser Val Tyr
    130                 135                 140                
 
 
Pro Leu Ala Pro Gly Ser Ala Ala Gln Thr Asn Ser Met Val Thr Leu
145                 150                 155                 160
 
 
Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Thr
                165                 170                 175
 
 
<210>  42
<211>  778
<212>  DNA
<213>  小家鼠
 
 
<220>
<221>  misc_feature
<222>  (1)..(778)
<223>  Mab L20/3的轻链的cDNA序列
 
<400>  42
gaccacgcgt agcgatgtcg actttttttt ttttttttac tgatcagtct cctcaggctg       60
 
tctcctcagg ttgcctcctc aaaatgaagt tgcctgttag gctgttggtg ctgatgttct      120
 
ggattcctgc ttccagcagt gatgttttga tgacccaaac tccactctcc ctgcctgtca      180
 
gtcttggaga tcaagcctcc atctcttgca gatctagtca gagcattgta cataataatg      240
 
gaaacaccta tttagaatgg tacctgctga aaccaggcca gtctccaaag ctcctgatct      300
 
acaaagtttc caaccgattt tctggggtcc cagacaggtt cagtggcagt ggatcaggga      360
 
cagatttcac actcaagatc agcagagtgg aggctgagga tctgggagtt tattactgct      420
 
ttcaaggttc acatgttccg tacacgttcg gaggggggac caagctggaa ataaaacggg      480
 
ctgatgctgc accaactgta tccatcttcc caccatccag tgagcagtta acatctggag      540
 
gtgcctcagt cgtgtgcttc ttgaacaact tctaccccaa agacatcaat gtcaagtgga      600
 
agattgatgg cagtgaacga caaaatggcg tcctgaacag ttggactgat caggacagca      660
 
aagacagcac ctacagcatg agcagcaccc tcacgttgac caaggacgag tatgaacgac      720
 
ataacagcta tacctgtgag gccactcaca agacatcaac tttcacccat tgtcaaga        778
 
 
<210>  43
<211>  231
<212>  PRT
<213>  小家鼠
 
 
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (1)..(231)
<223>  Mab L20/3的轻链
 
<400>  43
 
Met Lys Leu Pro Val Arg Leu Leu Val Leu Met Phe Trp Ile Pro Ala
1               5                   10                  15     
 
 
Ser Ser Ser Asp Val Leu Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val
            20                  25                  30         
 
 
Ser Leu Gly Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile
        35                  40                  45             
 
 
Val His Asn Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Leu Lys Pro
    50                  55                  60                 
 
 
Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser
65                  70                  75                  80 
 
 
Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
                85                  90                  95     
 
 
Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys
            100                 105                 110        
 
 
Phe Gln Gly Ser His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu
        115                 120                 125            
 
 
Glu Ile Lys Arg Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro
    130                 135                 140                
 
 
Ser Ser Glu Gln Leu Thr Ser Gly Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu
145                 150                 155                 160
 
 
Asn Asn Phe Tyr Pro Lys Asp Ile Asn Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly
                165                 170                 175    
 
 
Ser Glu Arg Gln Asn Gly Val Leu Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser
            180                 185                 190        
 
 
Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Met Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp
        195                 200                 205            
 
 
Glu Tyr Glu Arg His Asn Ser Tyr Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr
    210                 215                 220                
 
 
Ser Thr Phe Thr His Cys Gln
225                 230    

Claims (15)

1.一种试剂盒，其包含
a）能够结合补体因子H R1（CFHR1）蛋白质的第一试剂，和
b）能够结合补体因子H R1（CFHR1）蛋白质的第二试剂，
其中所述第一试剂和所述第二试剂与不同且非重叠的表位结合，
并且其中所述第一试剂和所述第二试剂两者不都与CFH交叉反应，
并且其中所述第一试剂和所述第二试剂两者不都与CFHR2交叉反应，
并且其中所述第一试剂和所述第二试剂两者不都与CFHR3交叉反应，
并且其中所述第一试剂和所述第二试剂两者不都与CFHR4交叉反应，
并且其中所述第一试剂和所述第二试剂两者不都与CFHR5交叉反应，
并且其中一种试剂用可检测标记进行标记，
并且其中另一种试剂能够固定到固相上。
2.根据权利要求1的试剂盒，
a）其中所述第一试剂与SEQ ID No. 2的氨基酸144 - 330内的表位结合，和/或
b）其中所述第二试剂与SEQ ID No. 2的氨基酸1-143内的表位结合。
3.根据权利要求1或2的试剂盒，其中
a）所述第一试剂与CFH和CFHR5交叉反应，但不与CFHR2、CFHR3和CFHR4交叉反应，和/或
b）其中所述第二试剂与CFHR2交叉反应，但不与CFH、CFHR3、CFHR4和CFHR5交叉反应。
4.根据权利要求1 - 3中任一项的试剂盒，其中
a）所述第一试剂是抗体，特别是抗体MAB<CFH/CFHR1>M-L20/3，其中所述重链具有SEQ ID No. 41的序列，并且其中所述轻链具有SEQ ID No. 43的序列，或包含MAB<CFH/CFHR1>M-L20/3的CDR序列的抗体，和/或
b）所述第二试剂是抗体，特别是抗体MAB<CFHR1>M-5.1.5，其中所述重链具有SEQ ID No. 16的序列，并且其中所述轻链具有SEQ ID No. 18的序列，或包含根据SEQ ID No. 19、SEQ ID No. 20、SEQ ID No. 21、SEQ ID No. 22、和SEQ ID No. 23的MAB<CFHR1>M-5.1.5的CDR序列和氨基酸序列ITS的抗体。
5.一种用于检测得自受试者的样品中的补体因子H R1（CFHR1）蛋白质的体外测定，其包含
a）使所述样品与权利要求1 - 4中任一项的任一试剂盒中的试剂接触，
b）将所形成的复合物固定至固相，和
c）检测CFHR1，特别是测定CFHR1的量和/或浓度，
其中步骤b）可以在步骤a）之前、在步骤a）之后或与步骤a）同时执行。
6.一种预测如果用甘氨酸再摄取抑制剂（GRI）治疗，则患有神经发育、神经系统或神经精神性病症的患者的应答的体外方法，其包括下述步骤：
i）通过执行权利要求5的测定来测定患者样品中的CFHR1的蛋白质浓度，
ii）比较步骤i）中测定的蛋白质浓度与患有神经发育、神经系统或神经精神性病症的患者中的CFHR1的截断值，
iii）其中患有神经发育、神经系统或神经精神性病症的所述患者的样品中的CFHR1的蛋白质浓度高于截断值指示所述患者将从GRI治疗获得临床利益，和
iv）对于患有神经发育、神经系统或神经精神性病症的患者选择GRI治疗。
7.根据权利要求5和6的方法，其中所述样品是血液、血清、液体或血浆。
8.根据权利要求6的方法，
a）其中所述神经发育、神经系统或神经精神性病症包括精神分裂症、双相性精神障碍、物质依赖、自闭症和强迫症的阴性或阳性症状，特别是精神分裂症的阴性或阳性症状，和/或
b）其中所述患者患有分裂情感性障碍；和/或
c）其中所述GRI是[4-（3-氟-5-三氟甲基-吡啶-2-基）-哌嗪-1-基]-[5-甲磺酰基-2-[[（2S）-1,1,1-三氟丙-2-基]氧基]苯基]甲酮。
9.根据权利要求5-8中任一项的方法，
a）其中所述测定是酶联免疫吸附测定（ELISA）或电化学发光免疫测定（ECLIA）或放射性免疫测定（RIA），和/或
b）其中所述CFHR1蛋白质的检测范围为0.02 - 约50 μg/ml，更优选约0.05 - 约35 μg/ml，和/或
c）其中所述第一试剂和第二试剂是单克隆抗体，和/或
d）其中所述第一试剂是MAB<CFH/CFHR1>M-L20/3，其用可检测标记进行标记，并且所述第二试剂是MAB<CFHR1>M-5.1.5，其能够固定到固相上，和/或
e）其中所述测定通过重组CFHR1蛋白质校准物进行标准化，特别地其中所述重组CFHR1蛋白质在HEK细胞中产生，
f）其中在另一种试剂与所述样品接触之前，使与CFH、CFHR2、CFHR3、CFHR4和/或CFHR5具有更少交叉反应性的试剂与根据权利要求6的步骤a）的所述样品接触。
10.根据权利要求5 - 9中任一项的方法，
a）其中所述第一试剂能够固定到固相上，并且所述第二试剂用可检测标记进行标记，或
b）其中所述第一试剂用可检测标记进行标记，并且所述第二试剂能够固定到固相上。
11.一种能够结合CFHR1的试剂，所述试剂是
a）（i）单克隆抗体MAB<CFHR1>M-5.1.5，其中所述重链具有SEQ ID No. 16的序列，并且其中所述轻链具有SEQ ID No. 18的序列，或
（ii）单克隆抗体MAB<CFHR1>M-4.1.3，其中所述重链具有SEQ ID No. 25的序列，并且其中所述轻链具有SEQ ID No. 27的序列，或
（iii）单克隆抗体MAB<CFHR1>M-4.2.53，其中所述重链具有SEQ ID No. 29的序列，并且其中所述轻链具有SEQ ID No. 31的序列，或
（iv）单克隆抗体MAB<CFHR1>M-4.2.74，其中所述重链具有SEQ ID No. 33的序列，并且其中所述轻链具有SEQ ID No. 35的序列，或
（v）单克隆抗体MAB<CFHR1>M-5.3.23，其中所述重链具有SEQ ID No. 37的序列，并且其中所述轻链具有SEQ ID No. 39的序列，
或
b）（i）抗体，其包含根据SEQ ID No. 19、SEQ ID No. 20、SEQ ID No. 21、SEQ ID No. 22、和SEQ ID No. 23的MAB<CFHR1>M-5.1.5的CDR序列和氨基酸序列ITS，和/或包含根据SEQ ID No. 21和SEQ ID No. 23的MAB<CFHR1>M-5.1.5的CDR3序列，或
（ii）抗体，其包含MAB<CFHR1>M-4.1.3、MAB<CFHR1>M-4.2.53、MAB<CFHR1>M-4.2.74或MAB<CFHR1>M-5.3.23的CDR序列，和/或包含MAB<CFHR1>M-4.1.3、MAB<CFHR1>M-4.2.53、MAB<CFHR1>M-4.2.74或MAB<CFHR1>M-5.3.23的CDR3序列，
或
c）a）或b）的功能活性变体。
12.编码根据权利要求11的抗体的一种或多种核酸，特别地其中所述核酸位于载体中，
和/或是
（i）根据SEQ ID No. 15和17的核酸，和/或
（ii）根据SEQ ID No. 24和26的核酸，和/或
（iii）根据SEQ ID No. 28和30的核酸，和/或
（iv）根据SEQ ID No. 32和34的核酸，和/或
（v）根据SEQ ID No. 36和38的核酸，
特别地其中所述核酸位于载体中。
13.一种细胞系，其产生如权利要求11中限定的试剂。
14.权利要求11的能够结合CFHR1的试剂，其用可检测标记进行标记，和/或能够固定到固相上。
15.根据权利要求1-4的试剂盒、或根据权利要求11或14的试剂、和/或根据权利要求12的一种或多种核酸、和/或根据权利要求13的细胞系如下的用途：
a）用于测定得自受试者的样品中的CFHR1的量和/或浓度，和/或
b）用于预测用甘氨酸再摄取抑制剂治疗的患者的临床利益，和/或
c）用于预测如果用甘氨酸再摄取抑制剂（GRI）治疗，则患有神经发育、神经系统或神经精神性病症的患者的临床利益。
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