CN104982885A - 一种以酱油渣为主要原料制备风味呈味基料的方法 - Google Patents
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- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
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Abstract
本发明公开了一种以酱油渣为主要原料制备风味呈味基料的方法，属于食品加工技术领域。按照下述步骤进行：首先将酱油渣脱盐（≤8%）脱水（≤35%），补充适量自来水后以超声结合生物酶解技术对酱油渣中纤维素物质适度降解以释放残余蛋白质。其次，以筛选的可高效降解酱油渣残余蛋白质（大豆蛋白B3碱性亚基）的商品酶，通过可控酶解技术和美拉德反应生香技术制备风味呈味基料。最后，通过风味后修饰技术进一步完善和强化呈味料的特征风味。所得呈味料口感醇厚鲜美、酱香风味浓郁，余香天然绵长。与常规酱油渣处理技术相比，本发明具有所得产品附加值高、高效、经济、环保等特点。
Description
技术领域
本发明涉及一种以酱油渣或酱渣为主要原料制备风味呈味料的方法，属于食品加工技术领域。
背景技术
2014年我国酱油产量达938万吨，比2013年产量增加23.9%（中商情报网，http://www.askci.com/chanye/2015/02/04/165020 koaw.shtml）。我国酱油总产量已超过调味品总产量的50%，是我国调味品和食品工业的重要组成部分。随着我国酱油行业的快速发展，酱油生产的副产物—酱油渣的产量也迅速增加，初步统计我国酱油渣年产量超过500万吨（湿渣）。作为一种工业废渣其具有如下特征：（1）营养物质含量相对丰富（以豆粕和麸皮为原料生产酱油后干渣蛋白质含量19.5-25.8%，还原糖10.7-12.3%，脂肪7.4-8.6%；以大豆和面粉为原料生产酱油后干渣蛋白质含量21.4%，碳水化合物23.9%，脂肪18.1%）；（2）含盐量高（含盐量大于10%）；（3）易腐烂变质。酱油渣的上述特点使其难以直接作为饲料（家畜中毒）或有机肥料（土地盐碱化）使用，而其易腐烂变质的特点决定了其难于长期保存和长途运输异地使用。因此，酱油渣的开发利用具有重要的经济意义和社会意义。
目前，有关酱油渣开发应用的研究主要集中在如下方面：（1）提取功能或保健成分：如利用酱油渣制备和提取大豆异黄酮、功能多糖和多肽、膳食纤维等（Yang Bao, Prasad K. Nagendra, Xie Haihui; 等. Structural characteristics of oligosaccharides from soy sauce lees and their potential prebiotic effect on lactic acid bacteria[J], Food Chemistry, 2011(2): 590-594）。此类技术目前仅限于实验室开发阶段，工业化应用并未见报道。此外，提取功能和保健成分后剩余的大量废渣其营养价值大大降低，其进一步开发利用的价值更低，其中排放将造成严重的环境污染。（2）利用酱油渣为主要原料开发生物饲料：将酱油渣、菜籽饼粕和玉米淀粉等混合，接种发酵微生物进行发酵制备生物饲料（李湛，王晔. 酱油渣发酵生产蛋白质饲料的研究[J]，广东饲料，2009（10）：21-24）。利用酱油渣制备生物饲料是目前有关酱油渣开发利用研究的热点。其优势是我国养殖业市场庞大，生物饲料具有广阔的市场；其缺点是酱油渣含盐量高、高性能耐盐发酵菌种筛选困难，而饲料附加值相对较低也阻碍高新技术在此领域的应用。（3）作为酱油原料二次发酵：将酱油渣与大豆或豆粕、面粉或麸皮混合、灭菌、接种（米曲霉3.042）后在一定盐水浓度下进行二次发酵。此类方法能够在一定程度上提高酱油渣蛋白质、碳水化合物的利用率，但是酱油渣剩余蛋白质多为大豆蛋白碱性亚基B3亚基，实验结果证实米曲霉产蛋白酶对其降解能力低（高献礼, 赵斯薇, 孙鹏飞, 等. 酱油渣蛋白质的分离、鉴定和氨基酸组成特征研究[J], 现代食品科技, 2013, 29(10):2512-2516）。综合以上分析可知，针对酱油渣的特点，开发一种能够高效、环保的以酱油渣为主要原料的高附加值产品具有重要意义。
呈味料即可直接应用于食品工业作为调味基料，也可以作为咸味香精产品的主要原料，其属于咸味香精范畴。我国咸味香精行业起源于上世纪80年代初，目前年产值超过100亿元人民币，与咸味香精行业相关的食品工业和餐饮业年产值超过1万亿元，是我国食品工业的核心原料，被誉为食品工业的“灵魂”（Gao Xianli, Yan Shuang, Yang Bao, et al. Comparison of physicochemical properties of beef potentiators prepared by synergistic fermentation and traditional method, International Journal of Food Science and Technology, 2013, 48(9):1932-1939）。我国咸味香精行业具有“味料同源”、原料天然（与国外化学合成香精相比）、生产技术发展迅速和产品附加值高等特点。因此，随着我国食品工业的迅速发展，咸味香精行业具有光明的前景。
与上述酱油渣处理技术相比，本发明的关键区别点在于：（1）本发明产品具有产品附加值高、原料利用率高、产品为调味品（与酱油厂产品同类，且有互补性）；（2）主要原料酱油渣仅需简单机械脱盐脱水处理，所得盐水通过调配（加盐）可以作为酱油发酵盐水，节约用盐、用水，又减轻工厂排污压力；（3）针对酱油渣大豆蛋白B3亚基含量高的特点，本技术结合低频超声处理和生物酶解技术高效降解酱油渣中大豆纤维组织；以筛选的耐盐蛋白酶定向降解大豆B3亚基蛋白，产生丰富的氨基酸和多肽等呈味物质；（4）通过可控美拉德反应，定向生成具有酱香风味的呈味料；（5）通过风味后修饰技术，进一步完善和丰富调味料的特征香气和口感。由以上特征可知本发明具有重要的经济意义和社会意义。
发明内容
本发明的目的是为了解决我国酱油渣高效利用问题。具体地，本发明提供了一种以酱油渣为主要原料、结合机械预处理、可控酶解和美拉德反应技术制备风味呈味料的方法。
本发明提供了一种以酱油渣为主要原料制备风味呈味基料的方法，按照下述步骤进行：
（1）酱油渣脱盐脱水：将淋过三油的酱油渣（高盐稀态或低盐固态法酱油）与自来水混合，控制酱油渣与自来水的比例充分搅拌混合（150 rpm/3-10 h）后用酱油压榨机压榨（20000-70000 MPa）脱盐脱水，使酱油渣中的食盐含量小于8%（w/w）、水分含量小于35%（w/w）；将所得盐水调配至含盐量22-25%（w/v）用于下一批酱油酿造。
（2）低频电场超声处理：将脱盐脱水处理的酱油渣和自来水按照重量比1:2-4（w/w）充分混合（150 rpm），混合物用低频电场超声处理（功率100-300 W/频率10-100 KHz/时间30-100 min），使酱油渣中残留细胞壁适度破裂，利于被包裹蛋白质释放，与酶接触；
（3）细胞壁裂解酶处理：将低频电场超声处理过的处理液添加一定量的纤维素酶，使纤维素酶活与干酱油渣之比控制在0.1-5 IU/g，酶解温度40-55℃，酶解时间2-6 h，pH4.5-6.0。
（4）酱油渣蛋白质酶解：将纤维素酶处理后的酶解液pH调至6.5-9.0，使蛋白酶酶活与底物之比为500-5000 IU/g蛋白质，酶解温度和时间控制在40-50℃和1-10 h。
（5）可控美拉德生香反应：针对酱油渣酶解液中蛋白质和氨基酸组成特征补充适量的氨基酸，所补充的氨基酸为蛋氨酸、甘氨酸、丙氨酸、谷氨酸、天门冬氨酸等中的一种或两种以上的组合，添加比例为反应体系固形物含量的0.1-5%。然后加入还原糖、维生素进行可控美拉德生香反应，其反应体系pH、温度和时间分别控制在4-9.5、80-160 ℃、0.5-10 h；其中添加的还原糖为木糖、核糖、葡糖糖、蔗糖中的一种或两种以上的组合，添加量为反应体系的0.1-10%，其中添加的维生素为B组维生素、C组维生素中的一种或者两种，添加量为反应体系固形物含量的0.001-0.1%。
（6）胶体磨处理：将上述美拉德反应液过胶体磨处理，使反应体系颗粒控制在0.5-10 μm。
（7）干燥处理：将过胶体磨后的美拉德反应液进行微波干燥或喷雾干燥。
（8）风味后修饰：将干燥后产物通过添加食品辅料和（或）添加剂进行风味后修饰，所添加的食品辅料和（或）添加剂为其中的一种或者两种以上的混合物；其中所述的食品辅料为盐、糖、味精、麦芽糊精、大蒜粉，其添加量范围为干燥产物重量比的0.1-40%；其中所述的添加剂为焦糖色、乙基麦芽酚、3-甲基丁醇、苯乙醛、对乙基愈创木酚、对乙烯基愈创木酚、3-甲硫基丙醛、2-乙基-4-羟基-5-甲基-3(2H)-呋喃酮，其添加量为干燥物料重量比的0.000001-3%。
（9）粉碎、混合和包装：将步骤（9）混合物进行充分粉碎、混合后进行包装。
所述步骤（1）所采用的酱油渣与自来水的比例优选1:2-5（w/w）。
所述步骤（2）中低频超声的频率为30-60 KHz。
所述步骤（3）中纤维素酶酶活（南宁庞博生物工程有限公司，10000 U/g）与底物的比例为0.5-4 IU/g（干底物）。
所述步骤（4）中所使用的蛋白酶为碱性蛋白酶（广州裕立宝生物科技有限公司，38000 U/g）、木瓜蛋白酶（南宁庞博生物工程有限公司，65000 U/g）、胰蛋白酶（国药集团化学试剂有限供公司，60000 U/g）、复合蛋白酶（诺维信(中国)生物技术有限公司，80000 U/g）、风味蛋白酶（诺维信(中国)生物技术有限公司，20000 U/g）、菠萝蛋白酶（南宁庞博生物工程有限公司，120000 U/g）中的一种或几种的组合。控制蛋白酶酶活与底物之比为1000-5000 IU/g蛋白质，酶解温度和时间控制在40-50 ℃和2-8 h。
所述步骤（5）的关键点在于所补充的氨基酸、还原糖和维生素的种类和数量及美拉德反应条件控制。所补充的氨基酸为蛋氨酸、甘氨酸、丙氨酸、谷氨酸、天门冬氨酸等中的两种以上的组合，添加比例为反应体系固形物含量的0.5-2%。还原糖为木糖、核糖、葡糖糖、蔗糖中的一种或两种以上的组合，添加量为反应体系的0.2-5%。维生素为B组维生素、C组维生素中的一种或者两种，添加量为反应体系固形物含量的0.001-0.1%。反应体系pH、温度和时间分别控制在4-7.5、100-160 ℃、1-6 h。
所述步骤（8）的关键点在于所添加食品辅料和食品添加剂的种类和数量。每种辅料添加量为干燥产物重量比的0.5-40%；所使用添加剂为上述添加剂中的一种或两种以上的组合，添加量为干燥物料重量比的0.000001-2%。
本发明与现有技术相比，具有如下优点和有益效果：
（1）本发明产品具有产品附加值高、原料利用率高、产品为调味品（与酱油厂产品同类，且有互补性）；（2）主要原料酱油渣仅需简单机械脱盐脱水处理，所得盐水通过调配（加盐）可以作为下一批酱油发酵盐水，节约用盐、用水，又减少工厂排污压力；（3）针对酱油渣大豆蛋白B3亚基含量高的特点，本技术结合低频超声处理和生物酶解技术高效降解酱油渣中大豆纤维组织；以筛选的耐盐蛋白酶定向降解大豆B3亚基蛋白，产生丰富的氨基酸和多肽等呈味物质；（4）通过可控美拉德反应和风味后修饰，所得产品口感醇厚鲜美、酱香风味突出、余味天然绵长。因此，本发明与现有技术相比，具有产品附加值高、高效、经济、环保、与酱油厂产品具有互补等优势。
具体实施方式
下面结合实例对本发明的具体实施方式作进一步说明，但本发明的实施和保护范围不限于此。
实施例1 以低盐固态酱油渣（脱脂豆粕、麸皮、小麦）为主要原料制备风味呈味料
将淋过二油或三油的以脱脂豆粕、麸皮和（或）粉碎小麦（焙炒）为原料的低盐固态发酵酱油渣脱盐脱水。脱水条件为酱油渣与水重量比为1:2（w/w），150 rpm搅拌3 h，压榨压力和时间为20000 MPa和2 h。脱盐脱水酱油渣添加2倍重量的自来水充分搅拌后进行超声处理（100 W/10 KHz/30 min）。超声处理液添加纤维素酶进一步破碎细胞，条件为纤维素酶与干酱油渣之比0.1 IU/g酱油渣，酶解条件为45 ℃、2 h、pH4.0。将预处理后的酱油渣进行蛋白酶分阶段酶解，所用蛋白酶为胰蛋白酶和风味蛋白酶。首先调节胰蛋白酶活与底物之比为500 IU/g蛋白质，酶解温度和时间控制在40 ℃和1 h；其次添加风味蛋白酶，使其与底物之比为200 IU/g蛋白质，酶解温度和时间控制在40 ℃和2 h。蛋白酶酶解过程使用2 M NaOH调节反应体系pH6.5。反应体系升温至100 ℃，保温10 min使酶失活，添加固形物含量0.2%的蛋氨酸、0.1%的甘氨酸、0.3%的谷氨酸；添加固形物含量0.5%的葡萄糖、0.1%木糖；添加固形物含量0.001%的维生素B1。控制美拉德反应条件为pH4.0、80 ℃、0.5 h。美拉德反应产物过胶体磨后进行微波干燥。干燥产物添加固形物重量比2%的食盐、10%的麦芽糊精、0.5%的味精、0.2%的焦糖色、0.002%的乙基麦芽酚、0.00015%的2-乙基-4-羟基-5-甲基-3(2H)-呋喃酮、0.000001%的3-甲硫基丙醛、0.0001%的3-甲基丁醇、0.000005%的对乙基愈创木酚和0.00001%的苯乙醛。上述食品辅料、添加剂与干燥产物充分粉碎、混合后包装。
实施例2以高盐稀态酱油渣（脱脂豆粕、麸皮、小麦）为主要原料制备风味呈味料
将淋过二油或三油的以脱脂豆粕、麸皮和（或）粉碎小麦（焙炒）为原料的高盐稀态发酵酱油渣脱盐脱水。脱水条件为酱油渣与水重量比为1:8，150 rpm搅拌10 h，压榨压力和时间为70000 MPa和10 h。脱盐脱水酱油渣添加6倍重量的自来水充分搅拌后进行超声处理（500 W/100 KHz/100 min）。超声处理液添加纤维素酶进一步破碎细胞，条件为纤维素酶与干酱油渣之比5 IU/g酱油渣，酶解条件为70 ℃、10 h、pH6.0。将预处理后的酱油渣进行蛋白酶分阶段酶解，所用蛋白酶为胰蛋白酶和风味蛋白酶。首先调节胰蛋白酶活与底物之比为10000 IU/g蛋白质，酶解温度和时间控制在60 ℃和10 h；其次添加风味蛋白酶，使其与底物之比为1000 IU/g蛋白质，酶解温度和时间控制在60 ℃和10 h。蛋白酶酶解过程使用2 M NaOH调节反应体系pH10.0。反应体系升温至100 ℃，保温10 min使酶失活，添加固形物含量5%的蛋氨酸、4%的甘氨酸、5%的丙氨酸、3%的谷氨酸；添加固形物含量5%的葡萄糖和2%核糖；添加固形物含量0.1%的维生素B1和0.04%的维生素C。控制美拉德反应条件为pH9.5、160℃、9 h。美拉德反应产物过胶体磨后进行喷雾干燥。干燥产物添加固形物重量比15%的食盐、40%的麦芽糊精、3%的味精、2%的焦糖色、0.02%的乙基麦芽酚、0.002%的2-乙基-4-羟基-5-甲基-3(2H)-呋喃酮、0.00005%的3-甲硫基丙醛、0.001%的3-甲基丁醇、0.00005%的对乙基愈创木酚和0.0004%的苯乙醛。上述食品辅料、添加剂与干燥产物充分粉碎、混合后包装。
实施例3以高盐稀态酱油渣（大豆、面粉）为主要原料制备风味呈味料
将淋过二油的以大豆和面粉为原料的高盐稀态发酵酱油渣脱盐脱水。脱水条件为酱油渣与水重量比为1:3，150 rpm搅拌5 h，压榨压力和时间为70000 MPa和2 h。脱盐脱水酱油渣添加2倍重量的自来水充分搅拌后进行超声处理（160 W/50 KHz/60 min）。超声处理液添加纤维素酶进一步破碎细胞，条件为纤维素酶与干酱油渣之比0.1 IU/g酱油渣，酶解条件为45℃、3h、pH5.2。将预处理后的酱油渣进行蛋白酶分阶段酶解，所用蛋白酶为胰蛋白酶和风味蛋白酶。首先调节胰蛋白酶活与底物之比为1500 IU/g蛋白质，酶解温度和时间控制在42℃和2 h；其次添加风味蛋白酶，使其与底物之比为700 IU/g蛋白质，酶解温度和时间控制在40 ℃和2 h。蛋白酶酶解过程使用2 M NaOH调节反应体系pH7.5-8.0。反应体系升温至100 ℃，保温10 min使酶失活，添加固形物含量1.2%的蛋氨酸、1%的甘氨酸、0.5%的丙氨酸、0.3%的谷氨酸；添加固形物含量3.0%的葡萄糖和0.2%核糖；添加固形物含量0.015%的维生素B1和0.006%的维生素C。控制美拉德反应条件为pH6.5、130 ℃、2 h。美拉德反应产物过胶体磨后进行微波干燥。干燥产物添加固形物重量比8%的食盐、30%的麦芽糊精、3%的味精、2%的焦糖色、0.015%的乙基麦芽酚、0.005%的2-乙基-4-羟基-5-甲基-3(2H)-呋喃酮、0.00001%的3-甲硫基丙醛、0.0005%的3-甲基丁醇、0.000016%的对乙基愈创木酚和0.00006%的苯乙醛。上述食品辅料、添加剂与干燥产物充分粉碎、混合后包装。
本发明是高效和经济的解决我国酱油行业废渣问题的关键技术。因此本发明具有重要现实、经济和社会意义。
虽然本发明已以较佳实施例公开如上，但其并非用以限定本发明，任何熟悉此技术的人，在不脱离本发明的精神和范围内，都可做各种的改动与修饰，因此本发明的保护范围应该以权利要求书所界定的为准。
Claims (8)
1.一种以酱油渣为主要原料制备风味呈味基料的方法，其特征在于按照下述步骤进行：
（1）酱油渣脱盐脱水：将淋过三油的酱油渣（高盐稀态或低盐固态法酱油）与自来水混合，控制酱油渣与自来水的比例充分搅拌混合（150 rpm/3-10 h）后用酱油压榨机压榨（20000-70000 MPa）脱盐脱水，使酱油渣中的食盐含量小于8%（w/w）、水分含量小于35%（w/w）；将所得盐水调配至含盐量22-25%（w/v）用于下一批酱油酿造；
（2）低频电场超声处理：将脱盐脱水处理的酱油渣和自来水按照重量比1:2-4（w/w）充分混合（150 rpm），混合物用低频电场超声处理（功率100-300 W/频率10-100 KHz/时间30-100 min），使酱油渣中残留细胞壁适度破裂，利于被包裹蛋白质释放，与酶接触；
（3）细胞壁裂解酶处理：将低频电场超声处理过的处理液添加一定量的纤维素酶，使纤维素酶活与干酱油渣之比控制在0.1-5 IU/g，酶解温度40-55℃，酶解时间2-6 h，pH4.5-6.0；
（4）酱油渣蛋白质酶解：将纤维素酶处理后的酶解液pH调至6.5-9.0，使蛋白酶酶活与底物之比为500-5000 IU/g蛋白质，酶解温度和时间控制在40-50℃和1-10 h；
（5）可控美拉德生香反应：针对酱油渣酶解液中蛋白质和氨基酸组成特征补充适量的氨基酸，所补充的氨基酸为蛋氨酸、甘氨酸、丙氨酸、谷氨酸、天门冬氨酸等中的一种或两种以上的组合，添加比例为反应体系固形物含量的0.1-5%；
然后加入还原糖、维生素进行可控美拉德生香反应，其反应体系pH、温度和时间分别控制在4-9.5、80-160 ℃、0.5-10 h；其中添加的还原糖为木糖、核糖、葡糖糖、蔗糖中的一种或两种以上的组合，添加量为反应体系的0.1-10%，其中添加的维生素为B组维生素、C组维生素中的一种或者两种，添加量为反应体系固形物含量的0.001-0.1%；
（6）胶体磨处理：将上述美拉德反应液过胶体磨处理，使反应体系颗粒控制在0.5-10 μm；
（7）干燥处理：将过胶体磨后的美拉德反应液进行微波干燥或喷雾干燥；
（8）风味后修饰：将干燥后产物通过添加食品辅料和（或）添加剂进行风味后修饰，所添加的食品辅料和（或）添加剂为其中的一种或者两种以上的混合物；其中所述的食品辅料为盐、糖、味精、麦芽糊精、大蒜粉，其添加量范围为干燥产物重量比的0.1-40%；其中所述的添加剂为焦糖色、乙基麦芽酚、3-甲基丁醇、苯乙醛、对乙基愈创木酚、对乙烯基愈创木酚、3-甲硫基丙醛、2-乙基-4-羟基-5-甲基-3(2H)-呋喃酮，其添加量为干燥物料重量比的0.000001-3%；
（9）粉碎、混合和包装：将步骤（9）混合物进行充分粉碎、混合后进行包装。
2.根据权利要求1所述的一种以酱油渣为主要原料制备风味呈味基料的方法，其特征在于所述步骤（1）所采用的酱油渣与自来水的比例优选1:2-5（w/w）。
3.根据权利要求1所述的一种以酱油渣为主要原料制备风味呈味基料的方法，其特征在于所述步骤（2）中低频超声的频率为30-60 KHz。
4.根据权利要求1所述的一种以酱油渣为主要原料制备风味呈味基料的方法，其特征在于所述步骤（3）中纤维素酶酶活为10000 U/g，其与底物的比例为0.5-4 IU/g（干底物）。
5.根据权利要求1所述的一种以酱油渣为主要原料制备风味呈味基料的方法，其特征在于所述步骤（4）中所使用的蛋白酶为碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、复合蛋白酶、风味蛋白酶、菠萝蛋白酶中的一种或几种的组合；控制蛋白酶酶活与底物之比为1000-5000 IU/g蛋白质，酶解温度和时间控制在40-50 ℃和2-8 h。
6.根据权利要求1所述的一种以酱油渣为主要原料制备风味呈味基料的方法，其特征在于所述步骤（5）的关键点在于所补充的氨基酸、还原糖和维生素的种类和数量及美拉德反应条件控制；所补充的氨基酸为蛋氨酸、甘氨酸、丙氨酸、谷氨酸、天门冬氨酸等中的两种以上的组合，添加比例为反应体系固形物含量的0.5-2%；还原糖为木糖、核糖、葡糖糖、蔗糖中的一种或两种以上的组合，添加量为反应体系的0.2-5%；
维生素为B组维生素、C组维生素中的一种或者两种，添加量为反应体系固形物含量的0.001-0.1%；
反应体系pH、温度和时间分别控制在4-7.5、100-160 ℃、1-6 h。
7.根据权利要求1所述的一种以酱油渣为主要原料制备风味呈味基料的方法，其特征在于所述步骤（8）的关键点在于所添加食品辅料和食品添加剂的种类和数量；每种辅料添加量为干燥产物重量比的0.5-40%；所使用添加剂为上述添加剂中的一种或两种以上的组合，添加量为干燥物料重量比的0.000001-2%；所述步骤（1）中的酱油渣与水比例为1:1-10（w/w），浸泡和搅拌（150 rpm）时间1-10 h；酱油榨油机压榨压力为10000-70000 MPa，控制所得酱油渣的食盐含量小于8%（w/w）、水分含量小于35%（w/w）。
8.根据权利要求1所述的一种以酱油渣为主要原料制备风味呈味基料的方法，其特征在于超声装置的功率控制在100-500 W，电磁频率控制在10-100 KHz，时间10-100 min。
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