CN104945462A - 一种美登叶酸的提纯方法 - Google Patents

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刘东锋
杨成东
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Abstract

本发明公开了一种美登叶酸的提纯方法。方法如下：取干燥的卫矛原料粉碎，过筛，加入酶解水溶液，在酸性的条件下酶解1~3h，酶解完成后加入提取溶剂超声提取，过滤，滤渣提取1~3次，合并提取液减压浓缩至无醇味，浓缩液上大孔吸附树脂柱洗脱，收集洗脱液采用高速逆流色谱纯化，根据图谱收集目标成分，回收试剂，冷冻干燥即得美登叶酸。采用本发明制备美登叶酸，工艺操作简便，成本低，易于实现工业化生产。

Description

一种美登叶酸的提纯方法
技术领域
本发明属于天然药物化学领域，特别涉及一种美登叶酸的提纯方法。
背景技术
美登叶酸为三萜类化合物，具有抗炎、抗癌活性，CAS号84108-17-8，分子式C30H48O4，分子量472.7，分子结构式如下：
卫矛为卫矛科卫矛属植物卫矛Euonymus alatus（Thunb.）Sieb.，以根，带翅的枝及叶入药，具有抗炎、抗肿瘤及降血糖等活性。
通过文献检索，现有美登叶酸备方法是采用有机试剂提取和硅胶分离方法。由于操作复杂，制备量较小，所得产品纯度低，很难实现工业化生产。
发明内容
本发明的目的是解决现有技术的不足和缺陷，提供一种操作简便的美登叶酸的制备方法。
为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：一种美登叶酸的提纯方法，其特征在于以下步骤：
1）取干燥的卫矛原料粉碎，过20~60目筛，收集粗粉备用；
2）按0.1~0.5g纤维素酶/L水的比例将纤维素酶溶于蒸馏水中，搅拌均匀，滴加盐酸溶液，调节pH值4~5；
3）将卫矛粗粉加入上述纤维素酶的水溶液中，搅拌均匀，水浴加热到45~50℃，恒温酶解1~2h，而后升温至60~80℃，加热20~40min，进行灭酶，即得酶解混合物；
4）在上述酶解混合物中加入料液比为1：3~5、30%的乙醇水溶液进行超声提取，过滤，滤渣超声提取1~3次，合并滤液减压浓缩至无醇味，收集浓缩液备用；
5）将所得浓缩液上大孔吸附树脂柱，先用2~5倍柱体积的蒸馏水洗脱，再用10~20%的乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液；
6）洗脱液采用高速逆流色谱纯化，根据图谱收集目标成分，回收试剂，冷冻干燥即得美登叶酸。
步骤3）所述的卫矛粗粉加入与纤维素酶水溶液的质量体积比为1：1~5。
步骤4）所述超声提取的频率为20~40KHz，温度为50~70℃。
步骤5）中所述大孔吸附树脂为X-5、LSA-21、WLD中的一种
步骤6）所述的高速逆流色谱分离的溶剂体系为氯仿-甲醇-正丙醇-水溶剂系统，混合比例9-18：12-24：1-2：8-16，取下相做固定相，上相做流动相。
采用本法制备美登叶酸，工艺简便易操作，产品纯度高，易于实现工业化生产。
下面将结合具体实施方式进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。
具体实施方式
实施例1：
取干燥的卫矛原料粉碎，过20目筛，收集粗粉备用；按0.1g纤维素酶/L水的比例将纤维素酶溶于蒸馏水中，搅拌均匀，滴加盐酸溶液，调节pH值为4；将卫矛粗粉按质量体积比为1：1加入上述纤维素酶的水溶液中，搅拌均匀，水浴加热到45℃，恒温酶解1h，而后升温至60℃，加热20min，进行灭酶，即得酶解混合物；在上述酶解混合物中加入料液比为1：3、30%的乙醇水溶液在频率为20KHz，温度为50℃进行超声提取，过滤，滤渣超声提取1次，合并滤液减压浓缩至无醇味，收集浓缩液备用；将所得浓缩液上X-5型大孔吸附树脂柱，先用2倍柱体积的蒸馏水洗脱，再用10%的乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液；洗脱液以氯仿-甲醇-正丙醇-水溶剂系统，混合比例为9：12：1：8，取下相做固定相，上相做流动相，采用高速逆流色谱纯化，根据图谱收集目标成分，回收试剂，冷冻干燥即得美登叶酸。经检测，含量94.7%。
实施例2：
取干燥的卫矛原料粉碎，过40目筛，收集粗粉备用；按0.3g纤维素酶/L水的比例将纤维素酶溶于蒸馏水中，搅拌均匀，滴加盐酸溶液，调节pH值为4；将卫矛粗粉按质量体积比为1：3加入纤维素酶的水溶液中，搅拌均匀，水浴加热到45℃，恒温酶解1.5h，而后升温至70℃，加热30min，进行灭酶，即得酶解混合物；在上述酶解混合物中加入料液比为1：4、30%的乙醇水溶液在频率为40KHz，温度为60℃下进行超声提取，过滤，滤渣超声提取2次，合并滤液减压浓缩至无醇味，收集浓缩液备用；将所得浓缩液上LSA-21型大孔吸附树脂柱，先用3倍柱体积的蒸馏水洗脱，再用15%的乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液；洗脱液以氯仿-甲醇-正丙醇-水溶剂系统，混合比例为10：15：2：10，取下相做固定相，上相做流动相，采用高速逆流色谱纯化，根据图谱收集目标成分，回收试剂，冷冻干燥即得美登叶酸。经检测，含量94.9%。
实施例3：
取干燥的卫矛原料粉碎，过60目筛，收集粗粉备用；按0.5g纤维素酶/L水的比例将纤维素酶溶于蒸馏水中，搅拌均匀，滴加盐酸溶液，调节pH值为5；将卫矛粗粉按质量体积比为1：5加入纤维素酶的水溶液中，搅拌均匀，水浴加热到50℃，恒温酶解2h，而后升温至80℃，加热40min，进行灭酶，即得酶解混合物；在酶解混合物中加入料液比为1：5、30%的乙醇水溶液在频率为40KHz，温度为70℃下进行超声提取，过滤，滤渣超声提取3次，合并滤液减压浓缩至无醇味，收集浓缩液备用；将所得浓缩液上WLD型大孔吸附树脂柱，先用5倍柱体积的蒸馏水洗脱，再用20%的乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液；洗脱液以氯仿-甲醇-正丙醇-水溶剂系统，混合比例为18：24：2：16，取下相做固定相，上相做流动相，采用高速逆流色谱纯化，根据图谱收集目标成分，回收试剂，冷冻干燥即得美登叶酸。经检测，含量为95.1%。

Claims (5)

1.一种美登叶酸的提纯方法，其特征在于以下步骤：
1）取干燥的卫矛原料粉碎，过20~60目筛，收集粗粉备用；
2）按0.1~0.5g纤维素酶/L水的比例将纤维素酶溶于蒸馏水中，搅拌均匀，滴加盐酸溶液，调节pH值4~5；
3）将卫矛粗粉加入上述纤维素酶的水溶液中，搅拌均匀，水浴加热到45~50℃，恒温酶解1~2h，而后升温至60~80℃，加热20~40min，进行灭酶，即得酶解混合物；
4）在上述酶解混合物中加入料液比为1：3~5、30%的乙醇水溶液进行超声提取，过滤，滤渣超声提取1~3次，合并滤液减压浓缩至无醇味，收集浓缩液备用；
5）将所得浓缩液上大孔吸附树脂柱，先用2~5倍柱体积的蒸馏水洗脱，再用10~20%的乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液；
6）洗脱液采用高速逆流色谱纯化，根据图谱收集目标成分，回收试剂，冷冻干燥即得美登叶酸。
2.根据权利要求1所述美登叶酸的提纯方法，其特征在于步骤3）所述的卫矛粗粉加入与纤维素酶水溶液的质量体积比为1：1~5。
3.根据权利要求1所述美登叶酸的提纯方法，其特征在于步骤4）所述超声提取的频率为20~40KHz，温度为50~70℃。
4.根据权利要求1所述美登叶酸的提纯方法，其特征在于步骤5）中所述大孔吸附树脂为X-5、LSA-21、WLD中的一种。
5.根据权利要求1所述美登叶酸的提纯方法，其特征在于步骤6）所述的高速逆流色谱分离的溶剂体系为氯仿-甲醇-正丙醇-水溶剂系统，混合比例9-18：12-24：1-2：8-16，取下相做固定相，上相做流动相。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107362167A (zh) * 2017-08-04 2017-11-21 上海华堇生物技术有限责任公司 雷公藤三萜酸a的药物用途

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