CN104926827A - 一种栗木鞣花素的制备方法及抗肿瘤应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种植物提取物的制备方法及应用，尤其涉及一种栗木鞣花素的制备方法及抗肿瘤应用。制备方法包括以下步骤：（1）取榆绿木茎皮，经粉碎处理，超临界CO2萃取；（2）萃取物通过经D101大孔树脂柱层析，得粗提物；（3）采用高速逆流色谱法分离纯化，收集栗木鞣花素组分；（4）将栗木鞣花素组分进行真空浓缩，析出结晶，滤出结晶，即得栗木鞣花素。本发明首先在国内建立了栗木鞣花素的提纯工艺，得到高纯度的栗木鞣花素，而且本发明采用超临界萃取和高速逆流色谱法结合，较制备液相色谱等方法具有环保、制备量大、安全稳定、易于工业化等优点。栗木鞣花素具有抗肿瘤促进作用，在其口服配方中添加肠吸收促进剂，利于提高生物利用度。
Description
技术领域
本发明公开了一种植物提取物的制备方法及应用，特别涉及一种栗木鞣花素的制备方法及抗肿瘤应用。
背景技术
栗木鞣花素（Castalagin），是从使君子科(Combretaceae)榆绿木变种Anogeissus acuminata(Roxb.ex DC.)Guill.&Pers.var.lanceolata Wall.ex C.B.Clarke的茎分离出的一种鞣质类化合物，为类白色粉末，分子式为C19H18O4，分子量为934.34，结构式为
药理研究表明，栗木鞣花素具有抗高血压活性，静注本品降低自发性高血压大鼠的血压，这是由于抑制交感神经的活性和直接扩张血管所致；具有细胞毒活性，对黑色素瘤RPMI－7951的ED50为0.79μg/ml。
目前，国内对栗木鞣花素的研究较少，尚处于起步阶段。因此，研究出一种制备栗木鞣花素的方法是非常必要的，对于扩大药源以及榆绿木茎皮的综合利用具有很重要的意义。
发明内容
为满足临床需要，扩大用药品种，更好地治疗癌症，，提供一种栗木鞣花素的制备方法及抗肿瘤应用。
为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：
一种栗木鞣花素的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
（1）取榆绿木茎皮，经粉碎处理，置于萃取釜中，以乙醇作为夹带剂，进行超临界CO2萃取，解析，收集榆绿木茎皮萃取物；
（2）萃取物与D101大孔树脂按重量比1:1-2.5充分混匀，装入层析柱，然后用30-90%乙醇洗脱，流速为0.8-2BV/h，收集洗脱液，浓缩，得粗品；
（3）采用高速逆流色谱法分离纯化粗提物中的栗木鞣花素，其两相溶剂系统为石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水，上相注满高速逆流色谱柱为固定相，转动主机，泵入下相做流动相，流动相溶解粗提物由进样阀进样，紫外检测器在线监测，收集栗木鞣花素组分；
（4）将栗木鞣花素组分进行真空浓缩，析出结晶，过滤、洗涤干燥即得栗木鞣花素。
所述步骤（1）中超临界萃取温度为45-55℃，萃取压力为30-43MPa，解析温度为25-42℃，解析压力为6-10MPa，CO2流量为15-20L/h。
所述步骤（3）中石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水溶剂系统的体积比为5-8:3-5:4-6:2-3，取上相做固定相，下相为流动相，主机转速700-1000rpm，流速为1-3ml/min。
所述制备的栗木鞣花素，在其口服配方中添加肠吸收促进剂，包含中链脂肪酸盐、胆酸盐、鹅去氧胆酸盐、壳聚糖及其衍生物中的一种或几种。
（1）采用超临界提取技术对环境无污染；（2）通过D101大孔树脂对乙酰精宁类化合物的吸附和洗脱，操作简单、分离效果好；（3）采用高速逆流色谱制备工艺，较制备液相色谱制备工艺而言，克服了样品吸附、损失和峰形拖尾等缺点，且具有制备量大、易于工业推广等优点；（4）添加肠吸收促进剂，有利于提高生物利用度。
下面将结合具体实施方式进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。
具体实施方式
实施例1：
栗木鞣花素的制备
取榆绿木茎皮，经粉碎处理，称取1kg，置于萃取釜中，以乙醇作为夹带剂，通入超临界CO2流体，CO2流量为18L/h，超临界萃取温度为48℃，萃取压力为32MPa，解析温度为29℃，解析压力为7MPa，进行超临界CO2萃取1h，解析，收集萃取物，与D101大孔树脂按重量比1:1.5充分混匀，装入层析柱，依次用去离子水、30%乙醇溶液和90%乙醇溶液洗脱，流速为0.8BV/h，收集高浓度乙醇洗脱液，减压浓缩，得粗品；采用高速逆流色谱法分离纯化粗品中的栗木鞣花素，以体积比5:4:6:2石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水为两相溶剂系统，上相注满高速逆流色谱柱为固定相，转动主机，主机转速1000rpm，泵入下相做流动相，流速为3ml/min，流动相溶解粗提物由进样阀进样，紫外检测器在线监测，收集栗木鞣花素组分，进行真空浓缩，析出结晶，滤出结晶，过滤、洗涤干燥即得栗木鞣花素，含量97.6%。
实施例2：
栗木鞣花素的抗肿瘤应用
1、材料
动物：昆明种小鼠，雌雄各半性，体重20±2g，由南京中医药大学提供。
细胞株：Sarcoma 180腹水型瘤株（S180），由中国科学院上海药物研究所提供。
2、方法
取50只小鼠，每只小鼠左腋下接种S180瘤液，次日随机分成5组，每组10只，分别为生理盐水对照组（NS组）、阳性对照组、栗木鞣花素低剂量组（1mg/kg）、中剂量组（2mg/kg）、高剂量组（4mg/kg）。接种24h后栗木鞣花素给药组灌胃给药，连续7，阳性对照组试验期间腹腔注射2次，隔日给药。期间，每日观察小鼠的一般活动、皮毛、粪便等情况。最后一次给药24h后断颈处死，称重，并计算抑瘤率。
3、结果
本发明植物提取组合物对小鼠S180皮下荷瘤有明显的抑制作用，抑瘤率为68.32-76.29%，结果见表1。
抑瘤率（%）=（1-治疗组平均瘤重/空白对照组平均瘤重）×%
表1 本发明植物提取组合物对S180皮下荷瘤小鼠的抑瘤作用（n=10，±S）
| 组别 | 给药剂量（mg/kg） | 试验前体重（g） | 试验后体重（g） | 瘤重（g） | 抑瘤率（%） |
| 空白对照组 | — | 20.10±1.35 | 27.40±3.12 | 2.32±0.21 | — |
| 阳性对照组 | 30 | 20.12±1.49 | 25.77±3.18 | 0.89±0.19 | 61.64 |
| 栗木鞣花素低剂量组 | 1 | 20.10±1.39 | 28.05±6.28 | 1.66±0.24 | 28.45 |
| 栗木鞣花素中剂量组 | 2 | 20.10±1.47 | 28.44±2.92 | 1.07±0.34 | 53.88 |
| 栗木鞣花素高剂量组 | 4 | 20.10±1.55 | 27.04±3.20 | 0.55±0.25 | 76.29** |
注：与阳性对照组相比，**P＜0.01。
Claims (5)
1.一种栗木鞣花素的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
（1）取榆绿木茎皮，经粉碎处理，置于萃取釜中，以乙醇作为夹带剂，进行超临界CO2萃取，解析，收集榆绿木茎皮萃取物；
（2）萃取物与D101大孔树脂按重量比1:1-2.5充分混匀，装入层析柱，然后用30-90%乙醇洗脱，流速为0.8-2BV/h，收集洗脱液，浓缩，得粗品；
（3）采用高速逆流色谱法分离纯化粗提物中的栗木鞣花素，其两相溶剂系统为石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水，上相注满高速逆流色谱柱为固定相，转动主机，泵入下相做流动相，流动相溶解粗提物由进样阀进样，紫外检测器在线监测，收集栗木鞣花素组分；
（4）将栗木鞣花素组分进行真空浓缩，析出结晶，过滤、洗涤干燥即得栗木鞣花素。
2.根据权利要求1所述的栗木鞣花素的制备方法，其特征在于：所述步骤（1）中超临界萃取温度为45-55℃，萃取压力为30-43MPa，解析温度为25-42℃，解析压力为6-10MPa，CO2流量为15-20L/h。
3.根据权利要求1所述的栗木鞣花素的制备方法，其特征在于：所述步骤（3）中石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水溶剂系统的体积比为5-8:3-5:4-6:2-3，取上相做固定相，下相为流动相，主机转速700-1000rpm，流速为1-3ml/min。
4.根据权利要求1~3所述方法制备的栗木鞣花素，在其口服配方中添加肠吸收促进剂。
5.根据权利要求4所述的栗木鞣花素，其特征在于肠吸收促进剂包含中链脂肪酸盐、胆酸盐、鹅去氧胆酸盐、壳聚糖及其衍生物中的一种或几种。
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| CN (1) | CN104926827A (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN115697324A (zh) * | 2020-02-20 | 2023-02-03 | 皇家学术促进会/麦吉尔大学 | 栗木鞣花素或其类似物用于抗癌功效和增加对免疫检查点抑制剂的应答的用途 |
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2015
- 2015-05-22 CN CN201510263709.5A patent/CN104926827A/zh active Pending
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| CN115697324A (zh) * | 2020-02-20 | 2023-02-03 | 皇家学术促进会/麦吉尔大学 | 栗木鞣花素或其类似物用于抗癌功效和增加对免疫检查点抑制剂的应答的用途 |
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