CN104894019A - 螺旋藻藻种的选育方法 - Google Patents

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    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor

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Abstract

本发明公开了一种螺旋藻藻种的选育方法，工艺步骤为：1、取藻体培养液5L，用绢布过滤，去除较小藻类；2、用磷酸缓冲液将诱变；3、挑选藻体大、螺旋圈多的单个螺旋藻；放在试管中培养，计算生长率；4、将扩大培养的螺旋藻单体在40001x12℃的光照培养箱中培养；5：选择生长最快螺旋藻单体，生长最快螺旋藻单体即为诱变筛选后经纯化、克隆所得的突变品系。本发明改变滤网筛选藻种的粗糙育种方法为毛细管精选育种，通过单细胞筛选，清除不良螺旋藻个体，获得高度纯化、然后进行诱变钝化而获得品质优良、生长速度高的螺旋藻藻种。通过藻种纯化和培养条件的不断优化，可使螺旋藻产量提高30％-50％，产品质量得到进一步改善。

Description

螺旋藻藻种的选育方法
技术领域
本发明涉及螺旋藻技术领域，具体地说涉及一种螺旋藻藻种的选育方法。
背景技术
螺旋藻是一种光合放氧、呈规则螺旋形的原核丝状微藻，系蓝藻门、颤藻目、颤藻科的一个属，因其富含优质蛋白和多种生物活性物质而受到国内外的极人关注，目前已在人量研究的基础上形成了庞大的螺旋藻产业，并应用于食品、生物医药保健、饲料、精细化工等领域。
螺旋藻是国内外在商业化养殖生产与开发中应用最广泛的品种。值得指出的是，众多的实验研究与长期的生产实践表明，旋藻种下有许多品系，它们对温度、光质、光照强度，以及培养液的盐度、pH和营养成分等环境因子的要求与适应性存有显著差异。目前国内外几乎都采用开放或半封闭、跑道型循环式培养池这一较粗放的养殖生产模式，许多环境因子，特别是温度和光照强度，难以人为调控，有些旋藻品系在实验室或生产小试中虽然表现出优良的生产性能，但进入生产池后，因难以适应环境因子的较大变化而无法应用于大规模生产。因此，选育品性兼优的品系一直是螺旋藻养殖生产与开发中最重要的环节与技术要点之一。
发明内容
针对上述现有技术的缺陷，本发明提供一种螺旋藻藻种的选育方法，本方法将取螺旋藻培养液，粗过滤，稀释、镜检、毛细管挑选，单菌株培养繁殖、生产性能测定、扩大培养，藻种保存或直接生产应用。通过藻种纯化和培养条件的不断优化，可使螺旋藻产量提高，产品质量得到进一步改善。
为了实现上述目的，本发明的技术方案是：
一种螺旋藻藻种的选育方法，该选育方法的工艺步骤为：
A、取培养有螺旋藻藻体的藻体培养液5L，用150～200目绢布过滤，去除个体较小的藻类；
B、将过滤后的藻体用pH7.0的磷酸缓冲液洗涤，然后悬于磷酸缓冲液中；NTG过滤灭菌后，以100μg/mL的最终浓度加入藻液中，黑暗中37℃水浴处理25min；诱变后的藻液离心，并用无菌的pH7.0的磷酸缓冲液洗涤；
C、加水稀释5倍，显微镜下用毛细管挑选藻体大、螺旋圈多的单个螺旋 藻；分别放在不同的试管中加入培养液进行培养；
D、培养过程不断测定藻体生长量，计算生长率；
E、筛选出生产速度最大的藻体为藻种，进一步扩大培养；在培养过种中，调整培养基配方，使藻种生长条件最优化；
F、将扩大培养的螺旋藻单体在40001x12℃的光照培养箱中培养；用毛细胞管分离生长好的藻丝，将单丝体放入试管中静置培养，3～5次，直到丝体纯化；最后将纯化藻丝体分别在12℃下进行复筛；将其中生长速率最高的在基本培养基平板上划线、克隆；5～10天后挑选几个细胞的小段丝体于试管中培养；经过一段时间培养后，最后在40001x12℃的条件下进行生长测定；
G：选择生长最快螺旋藻单体，生长最快螺旋藻单体即为诱变筛选后经纯化、克隆所得的突变品系。
作为对上述技术方案的改进，所述测定藻体生长量采用光密度法，使用721型分光光度计和560nm波长处比色，测OD值。
作为对上述技术方案的改进，在步骤C中，单个螺旋藻的螺旋圈数>12。
与现有技术相比，本发明所取得的有益效果是：
本发明改变滤网筛选藻种的粗糙育种方法为毛细管精选育种，通过单细胞筛选，清除不良螺旋藻个体，获得高度纯化、然后进行诱变钝化而获得品质优良、生长速度高的螺旋藻藻种。通过藻种纯化和培养条件的不断优化，可使螺旋藻产量提高30％-50％，产品质量得到进一步改善。
具体实施方式
下面将结合本发明的具体实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
实施例一
本实用例的螺旋藻藻种的选育方法的工艺步骤为：
A、取培养有螺旋藻藻体的藻体培养液5L，用150目绢布过滤，去除个体较小的藻类；
B、将过滤后的藻体用pH7.0的磷酸缓冲液洗涤，然后悬于磷酸缓冲液 中；NTG过滤灭菌后，以100μg/mL的最终浓度加入藻液中，黑暗中37℃水浴处理25min；诱变后的藻液离心，并用无菌的pH7.0的磷酸缓冲液洗涤；
C、加水稀释5倍，显微镜下用毛细管挑选藻体大、螺旋圈多于13圈的单个螺旋藻；分别放在不同的试管中加入培养液进行培养；
D、培养过程采用光密度法不断测定藻体生长量，计算生长率；
E、筛选出生产速度最大的藻体为藻种，进一步扩大培养；在培养过种中，调整培养基配方，使藻种生长条件最优化；
F、将扩大培养的螺旋藻单体在40001x12℃的光照培养箱中培养；用毛细胞管分离生长好的藻丝，将单丝体放入试管中静置培养，反复3次，直到丝体纯化；最后将纯化藻丝体分别在12℃下进行复筛；将其中生长速率最高的在基本培养基平板上划线、克隆；5天后挑选几个细胞的小段丝体于试管中培养；经过一段时间培养后，最后在40001x12℃的条件下进行生长测定；
G：选择生长最快螺旋藻单体，生长最快螺旋藻单体即为诱变筛选后经纯化、克隆所得的突变品系。
实施例二
本实用例的螺旋藻藻种的选育方法的工艺步骤为：
A、取培养有螺旋藻藻体的藻体培养液5L，用200目绢布过滤，去除个体较小的藻类；
B、将过滤后的藻体用pH7.0的磷酸缓冲液洗涤，然后悬于磷酸缓冲液中；NTG过滤灭菌后，以100μg/mL的最终浓度加入藻液中，黑暗中37℃水浴处理25min；诱变后的藻液离心，并用无菌的pH7.0的磷酸缓冲液洗涤；
C、加水稀释5倍，显微镜下用毛细管挑选藻体大、螺旋圈多于12圈的单个螺旋藻；分别放在不同的试管中加入培养液进行培养。
D、培养过程采用光密度法不断测定藻体生长量，计算生长率；
E、筛选出生产速度最大的藻体为藻种，进一步扩大培养；在培养过种中，调整培养基配方，使藻种生长条件最优化；
F、将扩大培养的螺旋藻单体在40001x12℃的光照培养箱中培养；用毛细胞管分离生长好的藻丝，将单丝体放入试管中静置培养，反复5次，直到丝体纯化；最后将纯化藻丝体分别在12℃下进行复筛；将其中生长速率最高的在基本培养基平板上划线、克隆；10天后挑选几个细胞的小段丝体于试管中培养； 经过一段时间培养后，最后在40001x12℃的条件下进行生长测定；
G：选择生长最快螺旋藻单体，生长最快螺旋藻单体即为诱变筛选后经纯化、克隆所得的突变品系。
以上所述仅是本发明的较优的实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明技术原理的前提下，还可以做出若干改进，这些改进也应视为本发明的保护范围。

Claims (3)

1.一种螺旋藻藻种的选育方法，其特征在于：该选育方法的工艺步骤为：
A、取培养有螺旋藻藻体的藻体培养液5L，用150～200目绢布过滤，去除个体较小的藻类；
B、将过滤后的藻体用pH7.0的磷酸缓冲液洗涤，然后悬于磷酸缓冲液中；NTG过滤灭菌后，以100μg/mL的最终浓度加入藻液中，黑暗中37℃水浴处理25min；诱变后的藻液离心，并用无菌的pH7.0的磷酸缓冲液洗涤；
C、加水稀释5倍，显微镜下用毛细管挑选藻体大、螺旋圈多的单个螺旋藻；分别放在不同的试管中加入培养液进行培养；
D、培养过程不断测定藻体生长量，计算生长率；
E、筛选出生产速度最大的藻体为藻种，进一步扩大培养；在培养过种中，调整培养基配方，使藻种生长条件最优化；
F、将扩大培养的螺旋藻单体在40001x12℃的光照培养箱中培养；用毛细胞管分离生长好的藻丝，将单丝体放入试管中静置培养，反复3～5次，直到丝体纯化；最后将纯化藻丝体分别在12℃下进行复筛；将其中生长速率最高的在基本培养基平板上划线、克隆；5～10天后挑选几个细胞的小段丝体于试管中培养；经过一段时间培养后，最后在40001x12℃的条件下进行生长测定；
G：选择生长最快螺旋藻单体，生长最快螺旋藻单体即为诱变筛选后经纯化、克隆所得的突变品系。
2.根据权利要求1所述的螺旋藻藻种的选育方法，其特征在于：所述测定藻体生长量采用光密度法，使用721型分光光度计和560nm波长处比色，测OD值。
3.根据权利要求1所述的螺旋藻藻种的选育方法，其特征在于：在步骤C中，单个螺旋藻的螺旋圈数>12。
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