CN104892792A - 一种氧化型α-1,4-寡聚葡萄糖醛酸及其制备方法和用途 - Google Patents

一种氧化型α-1,4-寡聚葡萄糖醛酸及其制备方法和用途 Download PDF

Info

Publication number
CN104892792A
CN104892792A CN201510267211.6A CN201510267211A CN104892792A CN 104892792 A CN104892792 A CN 104892792A CN 201510267211 A CN201510267211 A CN 201510267211A CN 104892792 A CN104892792 A CN 104892792A
Authority
CN
China
Prior art keywords
oxidized form
preparation
oligoglucoses
isosorbide
nitrae
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201510267211.6A
Other languages
English (en)
Other versions
CN104892792B (zh
Inventor
张真庆
郝杰
孙世昶
张慧灵
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Shanghai Green Valley Pharmaceutical Co Ltd
Original Assignee
Suzhou University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Suzhou University filed Critical Suzhou University
Priority to CN201510267211.6A priority Critical patent/CN104892792B/zh
Publication of CN104892792A publication Critical patent/CN104892792A/zh
Priority to EP16799270.0A priority patent/EP3299395A4/en
Priority to PCT/CN2016/082929 priority patent/WO2016188382A1/zh
Priority to US15/576,477 priority patent/US10898509B2/en
Priority to KR1020177037122A priority patent/KR20180019605A/ko
Priority to JP2017561938A priority patent/JP6908534B2/ja
Priority to CN201680029752.8A priority patent/CN107922513B/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN104892792B publication Critical patent/CN104892792B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/715—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H1/00—Processes for the preparation of sugar derivatives
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H15/00—Compounds containing hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
    • C07H15/02—Acyclic radicals, not substituted by cyclic structures
    • C07H15/04—Acyclic radicals, not substituted by cyclic structures attached to an oxygen atom of the saccharide radical
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H7/00—Compounds containing non-saccharide radicals linked to saccharide radicals by a carbon-to-carbon bond
    • C07H7/02—Acyclic radicals
    • C07H7/033—Uronic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
    • C08B31/00—Preparation of derivatives of starch
    • C08B31/18—Oxidised starch
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
    • C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
    • C08B37/0003—General processes for their isolation or fractionation, e.g. purification or extraction from biomass
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
    • C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
    • C08B37/0006—Homoglycans, i.e. polysaccharides having a main chain consisting of one single sugar, e.g. colominic acid
    • C08B37/0024—Homoglycans, i.e. polysaccharides having a main chain consisting of one single sugar, e.g. colominic acid beta-D-Glucans; (beta-1,3)-D-Glucans, e.g. paramylon, coriolan, sclerotan, pachyman, callose, scleroglucan, schizophyllan, laminaran, lentinan or curdlan; (beta-1,6)-D-Glucans, e.g. pustulan; (beta-1,4)-D-Glucans; (beta-1,3)(beta-1,4)-D-Glucans, e.g. lichenan; Derivatives thereof
    • C08B37/0033—Xanthan, i.e. D-glucose, D-mannose and D-glucuronic acid units, saubstituted with acetate and pyruvate, with a main chain of (beta-1,4)-D-glucose units; Derivatives thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08L—COMPOSITIONS OF MACROMOLECULAR COMPOUNDS
    • C08L3/00—Compositions of starch, amylose or amylopectin or of their derivatives or degradation products
    • C08L3/04—Starch derivatives, e.g. crosslinked derivatives
    • C08L3/10—Oxidised starch
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08L—COMPOSITIONS OF MACROMOLECULAR COMPOUNDS
    • C08L5/00—Compositions of polysaccharides or of their derivatives not provided for in groups C08L1/00 or C08L3/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C31/00—Saturated compounds having hydroxy or O-metal groups bound to acyclic carbon atoms
    • C07C31/02—Monohydroxylic acyclic alcohols
    • C07C31/04—Methanol
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C31/00—Saturated compounds having hydroxy or O-metal groups bound to acyclic carbon atoms
    • C07C31/02—Monohydroxylic acyclic alcohols
    • C07C31/08—Ethanol

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Materials Engineering (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Sustainable Development (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)
  • Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)

Abstract

本发明揭示了一种氧化型α-1,4-寡聚葡萄糖醛酸及其制备方法和用途，属于医药化合物技术领域。本发明以自然界中丰富的淀粉，特别是可溶性淀粉为原料，通过溴化钠(NaBr)-2,2,6,6-四甲基哌啶氧化物(TEMPO)-次氯酸钠(NaClO)氧化体系作用，将淀粉这种α-1,4-多聚葡萄糖的所有6位羟基氧化成羧基形成葡萄糖醛酸，同时通过控制反应条件制备出相应的氧化型寡聚葡萄糖醛酸，该类化合物有显著的抗脑缺血活性，可以发展成潜在的抗脑缺血药物。

Description

一种氧化型α-1,4-寡聚葡萄糖醛酸及其制备方法和用途
技术领域
本发明属于医药化合物技术领域，尤其涉及一种氧化型α-1,4-寡聚葡萄糖醛酸及其制备方法和用途。
背景技术
淀粉主要存在于植物的叶、根和种子中，呈颗粒状。淀粉由直链的糖淀粉和支链的胶淀粉组成。糖淀粉为α1→4连接，能溶于热水得到澄明溶液。胶淀粉也是α1→4葡聚糖，但是结构中还含有α1→6的支链，不溶于冷水，在热水中呈黏胶状。
可溶性淀粉是由淀粉经过氧化剂、酸、甘油、酶或其他方法处理而成的淀粉衍生物。白色或淡黄色粉末，无味无臭。可溶性淀粉是变性的淀粉，溶于热水，不溶于冷水、醇和醚。一般用大米、玉米、小米、土豆的淀粉都可制成可溶性淀粉，但以红薯淀粉制得的可溶性淀粉质量最好。淀粉、可溶性淀粉除食用外，工业上用于制备糊精、麦芽糖、葡萄糖、酒精等，也用于印刷、纺织、医药等产业。
葡萄糖醛酸是一种常见的糖类分子，在体内作为糖胺聚糖糖基组成的一部分，如硫酸乙酰肝素、硫酸软骨素等；也出现在小分子糖苷的糖基部分。但是自然界中没有多聚或寡聚葡萄糖醛酸。
近年来，随着生活水平的提高以及人口结构日益老龄化，脑血管疾病的发病率和死亡率正呈上升趋势，已成为其中一大死因。其中，缺血性脑血管病在脑血管疾病种类中占主要部分。目前具有良好治疗抗脑缺血疾病的药物种类有中药组合物、中药等，但是临床疗效有待确证，因此研究新的抗脑缺血疾病药物具有重要意义。
发明内容
鉴于上述现有技术存在的缺陷，本发明的目的是提出一种氧化型α-1,4-寡聚葡萄糖醛酸及其制备方法和用途，属于医药化合物技术领域。本发明以自然界中丰富的淀粉，特别是可溶性淀粉为原料，通过溴化钠(NaBr)-2,2,6,6-四甲基哌啶氧化物(TEMPO)-次氯酸钠(NaClO)氧化体系作用，将淀粉这种α-1,4-多聚葡萄糖的所有6位羟基氧化成羧基形成葡萄糖醛酸，同时通过控制反应条件制备出相应的氧化型寡聚葡萄糖醛酸，该类化合物有显著的抗脑缺血活性，可以发展成潜在的抗脑缺血药物。
本发明的目的将通过以下技术方案得以实现：
一种氧化型α-1,4-寡聚葡萄糖醛酸，聚合度为1-20糖，其具有通式Ⅰ的结构：
其中，n＝0-19；m＝0、1或2。
一种上述氧化型α-1,4-寡聚葡萄糖醛酸的制备方法，包括以下步骤：
(1)称取可溶性淀粉，制成水溶液；
(2)向步骤(1)中制得的水溶液中依次加入TEMPO和溴化钠，再使用碱性pH调节剂调节pH至10～11，之后加入次氯酸钠溶液于0～30℃条件下反应5～10小时，最后加入有机溶剂终止反应；
(3)置于500Da的透析袋中透析，浓缩、冻干得到所述氧化型α-1,4-寡聚葡萄糖醛酸。
优选的，上述的制备方法，其中，所述步骤(1)中可溶性淀粉与水的质量体积比为1g:(50～100)ml。
优选的，上述的制备方法，其中，所述步骤(2)中所述可溶性淀粉与TEMPO的质量比为1000:(5～50)。
优选的，上述的制备方法，其中，所述步骤(2)中溴化钠与TEMPO的质量比大于等于10:1。
优选的，上述的制备方法，其中，所述步骤(2)中可溶性淀粉与次氯酸钠溶液的质量体积比为1g:(5～15)ml。
优选的，上述的制备方法，其中，所述步骤(2)中的有机溶剂为无水乙醇或甲醇。
优选的，上述的制备方法，其中，所述步骤(2)中碱性pH调节剂为5～50％NaOH溶液。
一种上述氧化型α-1,4-寡聚葡萄糖醛酸在制备抗脑缺血药物中的应用。
本发明的突出效果为：将可溶性淀粉作为原料用于制备氧化型α-1,4-寡聚葡萄糖醛酸，制备方法简单，条件温和，成本较低，易于产业化。同时该类化合物有显著的抗脑缺血活性，可以发展成潜在的抗脑缺血药物。
以下便结合实施例附图，对本发明的具体实施方式作进一步的详述，以使本发明技术方案更易于理解、掌握。
附图说明
图1是实施例5中氧化型α-1,4-寡聚葡萄糖醛酸总离子流图(TIC)和在210nm下的紫外色谱图；
图2为实施例5中峰1的一级质谱图即氧化型α-1,4-寡聚葡萄糖醛酸9和10糖质谱图；
图3为实施例5中峰2的一级质谱图即氧化型α-1,4-寡聚葡萄糖醛酸8糖质谱图；
图4为实施例5中峰3的一级质谱图即氧化型α-1,4-寡聚葡萄糖醛酸7糖质谱图；
图5为实施例5中峰4的一级质谱图即氧化型α-1,4-寡聚葡萄糖醛酸6糖质谱图；
图6为实施例5中峰5的一级质谱图即氧化型α-1,4-寡聚葡萄糖醛酸5糖质谱图；
图7为实施例5中峰6的一级质谱图即氧化型α-1,4-寡聚葡萄糖醛酸4糖质谱图；
图8为实施例5中峰7的一级质谱图即氧化型α-1,4-寡聚葡萄糖醛酸3糖质谱图；
图9为实施例5中峰8的一级质谱图即氧化型α-1,4-寡聚葡萄糖醛酸2糖质谱图；
图10为实施例5中10到20糖的一级质谱图即氧化型α-1,4-寡聚葡萄糖醛酸dp10-dp20质谱图；
图11为实施例6中氧化型α-1,4-寡聚葡萄糖醛酸的1H-NMR图谱；
图12为实施例6中氧化型α-1,4-寡聚葡萄糖醛酸的13C-NMR图谱；
图13为实施例7中氧化型α-1,4-寡聚葡萄糖醛酸对正常小鼠海马细胞的作用；
图14为实施例7中氧化型α-1,4-寡聚葡萄糖醛酸对缺糖缺氧小鼠海马细胞的作用。
具体实施方式
下面通过具体实施例对本发明的方法进行说明，但本发明并不局限于此。下述实施例中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法；所述试剂和材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得。
实施例1一种氧化型α-1,4-寡聚葡萄糖醛酸的制备方法
(1)称取1g可溶性淀粉，溶解于50ml水中溶解，制成水溶液；
(2)向步骤(1)中制得的水溶液中依次加入5mg TEMPO和50mg溴化钠，用5％NaOH溶液调节pH至10，加入5ml次氯酸钠溶液，于0℃条件下反应5小时，加入无水乙醇终止反应；
(3)置于500Da的透析袋中透析，浓缩、冻干得到氧化型α-1,4-寡聚葡萄糖醛酸。
实施例2一种氧化型α-1,4-寡聚葡萄糖醛酸的制备方法
(1)称取1g可溶性淀粉，溶解于75ml水中溶解，制成水溶液；
(2)向步骤(1)中制得的水溶液中依次加入30mg TEMPO和350mg溴化钠，用20％NaOH溶液调节pH至10，加入10ml次氯酸钠溶液，于10℃条件下反应8小时，加入无水乙醇终止反应；
(3)置于500Da的透析袋中透析，浓缩、冻干得到氧化型α-1,4-寡聚葡萄糖醛酸。
实施例3一种氧化型α-1,4-寡聚葡萄糖醛酸的制备方法
(1)称取1g可溶性淀粉，溶解于100ml水中溶解，制成水溶液；
(2)向步骤(1)中制得的水溶液中依次加入50mg TEMPO和500mg溴化钠，用30％NaOH溶液调节pH至11，加入15ml次氯酸钠溶液，于25℃条件下反应10小时，加入甲醇终止反应；
(3)置于500Da的透析袋中透析，浓缩、冻干得到氧化型α-1,4-寡聚葡萄糖醛酸。
实施例4一种氧化型α-1,4-寡聚葡萄糖醛酸的制备方法
(1)称取1g可溶性淀粉，溶解于100ml水中溶解，制成水溶液；
(2)向步骤(1)中制得的水溶液中依次加入50mg TEMPO和600mg溴化钠，用50％NaOH溶液调节pH至11，加入15ml次氯酸钠溶液，于30℃条件下反应10小时，加入甲醇终止反应；
(3)置于500Da的透析袋中透析，浓缩、冻干得到氧化型α-1,4-寡聚葡萄糖醛酸。
实施例5一种氧化型α-1,4-寡聚葡萄糖醛酸质谱检测
5.1方法
称取2mg的氧化型α-1,4-寡聚葡萄糖醛酸用1ml的纯水溶解后，用0.22μm的微孔滤膜过滤后，进行超高效液相串联四级杆飞行时间质谱(UHPLC/Q-TOF-MS)分析。
UHPLC/Q-TOF-MS分析使用Agilent 6540UHD Accurate-Mass Q-TOFLC/MS(安捷伦公司，美国)系统。其色谱条件如下：ACQUITY UPLCBEH125分子排阻色谱柱(4.6×300mm，Waters)；检测波长：210nm；流动相：A为50mM乙酸铵水溶液，B为甲醇，比例为80％A；流速：0.1ml/min。质谱条件如下：负离子模式；扫描范围：100～3000；干燥气温度：350℃；干燥气流速：8L/min；毛细管电压：3500V；碎裂电压：80V。
5.2结果
氧化型α-1,4-寡聚葡萄糖醛酸通过UHPLC/Q-TOF-MS分析后，得到如下的总离子流图(TIC)和紫外色谱图(见图1)。从图1中可以看出，各峰呈规则的波浪状分布，因为使用的是分子排阻色谱柱，推测波浪峰应是按照聚合度由大到小分布。进一步通过各色谱峰对应的一级质谱图(图2～9)推测其结构：图2为峰1的一级质谱图，其中m/z 808.1483、793.1434和778.1382都带2个电荷，经计算后得到这三个信号代表的化合物分子量分别为1618、1588和1558Da，对应的结构为氧化型α-1,4-寡聚葡萄糖醛酸9糖，如式Ⅰ(n＝8,m＝0、1或2)。此外，该质谱图中还有少许带2个电荷的质谱信号m/z896.1640、881.1638和866.1564，经计算后确认它们分别为三种分子量为1794、1764和1734Da，对应的结构为氧化型α-1,4-寡聚葡萄糖醛酸10糖，如式Ⅰ(n＝9,m＝0、1或2)。同理，图3～9为峰2～8的质谱图，经解析结构分别为氧化型α-1,4-寡聚葡萄糖醛酸8糖到2糖，如式Ⅰ(n＝7→1,m＝0、1或2)。在色谱图中10到20糖没有很好的分离，但是在质谱中它们有较清晰的信号，如图10所示。
实施例6一种氧化型α-1,4-寡聚葡萄糖醛酸核磁结构确认
6.1方法
准确称取25mg样品用0.5ml重水(D≥99.96％)溶解，内标三甲基硅烷基丙酸钠(TSP)浓度为0.2μg/ml，用600MHz核磁共振仪(Agilent,美国)分析。氢谱扫描时间1h，试验温度为室温。碳谱扫描时间12h以上，试验温度为室温。
6.2结果
核磁结果如图11(1H-NMR)和图12(13C-NMR)所示。从氢谱中可以看出，a(5.45～5.49ppm)表示与开环糖醛酸直接相连或邻近的α构型环状葡萄糖醛酸的1位H，b(5.23ppm)为与开环糖醛酸相隔较远的α构型环状葡萄糖醛酸1位H。h(3.74ppm)为葡萄糖醛酸还原端开环未脱30时羧基β位H，j(3.55ppm)为还原端开环未脱30(-CH2O-)时羧基γ位H或还原端开环脱30时羧基β位H。此外，葡萄糖醛酸还原端开环未脱、脱30、脱60结构中同时和羟基、羧基相连的H化学位移由于与水峰化学位移接近，所以在氢谱中看不到。其余峰为未开环糖醛酸环上的H。从碳谱中可以进一步看出区域1为羧基碳峰，而区域2为不同化学环境下的闭环糖醛酸1位C。结合氢谱、碳谱分析可以得出，α葡萄糖结构单元中的6位被成功氧化成羧基，且葡萄糖醛酸寡糖的还原端发生开环并伴随着一定程度的降解，进一步验证了质谱分析结果。
实施例7一种氧化型α-1,4-寡聚葡萄糖醛酸在缺氧缺糖(OGD)条件下对HT-22细胞的影响
7.1 OGD模型的建立及实验分组
取正常培养的HT-22细胞，调整细胞数目至2×104个/ml，按100μl/孔接种在96孔培养板上，每组设4个平行(n＝4)。预培养12h后，给药组分别加入10μl的用培养基配置的不同浓度的样品(1、10、100μM)，正常组加入相同体积的培养基。将培养板置于5％CO2、37℃恒温培养箱中培养12h，观察并测定细胞存活率以确定样品对正常培养的HT-22细胞的影响。
取正常培养的HT-22细胞，吸去原培养液，细胞用无糖DMEM培养液洗涤2次，加入DMEM无糖培养液调整细胞数目至2×104个/ml。按100μl/孔接种在96孔培养板上。给药组分别加入10μl的用培养基配置的不同浓度的样品(1、10、100μM)，模型组加入相同体积的培养液。将培养板置于缺氧罐中(冲入95％N2、5％CO2)、37℃恒温培养12h，观察并测定细胞存活率以确定样品在OGD下对HT-22细胞的影响。
7.2 MTT法测定细胞存活率
待上述各组细胞培养完毕后，每孔加入10μL MTT(5mg/ml)溶液，继续培养4h，加入100μl 10％SDS，待紫色结晶完全溶解后，测定其在570nm的OD值，并计算出细胞存活率。
7.3结果
通过MTT法计算出各组细胞存活率如表1、2和图13、14所示。从表1和图13中可以看出，加入低、中、高剂量的氧化型α-1,4-寡聚葡萄糖醛酸后细胞的存活率与正常组相比，无显著性差异，表明氧化型α-1,4-寡聚葡萄糖醛酸对HT-22细胞无毒性。
从表2中可以看出，模型组与对照组相比HT-22细胞的存活率显著降低(p<0.001)，表明OGD对细胞的存活有明显的抑制作用。而加入氧化型α-1,4-寡聚葡萄糖醛酸(10μM)细胞存活率开始升高；当药物浓度达到100μM后细胞的存活率与模型组相比显著升高(p<0.05)，表明氧化型α-1,4-寡聚葡萄糖醛酸有促进HT-22细胞生长存活的作用。
表1 氧化型α-1,4-寡聚葡萄糖醛酸对正常HT-22细胞存活率的影响
数据以mean±SEM表示
与对照组比较：p<0.05有显著性差异(LSD法检验)
表2 氧化型α-1,4-寡聚葡萄糖醛酸对OGD下HT-22细胞存活率的影响
数据以mean±SEM表示
###表示与对照组比较p<0.001(LSD法检验)
*表示与模型组比较p<0.05(LSD法检验)
由上可见，本发明中的氧化型α-1,4-寡聚葡萄糖醛酸具有抗脑缺血的作用，在制备抗脑缺血药物中的可以得到应用。
本发明尚有多种实施方式，凡采用等同变换或者等效变换而形成的所有技术方案，均落在本发明的保护范围之内。

Claims (9)

1.一种氧化型α-1,4-寡聚葡萄糖醛酸，其特征在于，聚合度为1-20糖，其具有通式Ⅰ的结构：
其中，n＝0-19；m＝0、1或2。
2.一种根据权利要求1所述的一种氧化型α-1,4-寡聚葡萄糖醛酸的制备方法，包括以下步骤：
(1)称取可溶性淀粉，制成水溶液；
(2)向步骤(1)中制得的水溶液中依次加入2,2,6,6-四甲基哌啶氧化物和溴化钠，再使用碱性pH调节剂调节pH至10～11，之后加入次氯酸钠溶液于0～30℃条件下反应5～10小时，最后加入有机溶剂终止反应；
(3)置于500Da的透析袋中透析，浓缩、冻干得到所述氧化型α-1,4-寡聚葡萄糖醛酸。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中可溶性淀粉与水的质量体积比为1g:(50～100)ml。
4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中所述可溶性淀粉与2,2,6,6-四甲基哌啶氧化物的质量比为1000:(5～50)。
5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中溴化钠与2,2,6,6-四甲基哌啶氧化物的质量比大于等于10:1。
6.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中可溶性淀粉与次氯酸钠溶液的质量体积比为1g:(5～15)ml。
7.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中的有机溶剂为无水乙醇或甲醇。
8.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中碱性pH调节剂为5～50％NaOH溶液。
9.一种根据权利要求1所述的氧化型α-1,4-寡聚葡萄糖醛酸在制备抗脑缺血药物中的应用。
CN201510267211.6A 2015-05-22 2015-05-22 一种氧化型α-1,4-寡聚葡萄糖醛酸及其制备方法和用途 Active CN104892792B (zh)

Priority Applications (7)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201510267211.6A CN104892792B (zh) 2015-05-22 2015-05-22 一种氧化型α-1,4-寡聚葡萄糖醛酸及其制备方法和用途
EP16799270.0A EP3299395A4 (en) 2015-05-22 2016-05-20 OXIDIZED 1,4-OLIGOGLUCURONIC ACID, MANUFACTURING METHOD AND USES THEREOF
PCT/CN2016/082929 WO2016188382A1 (zh) 2015-05-22 2016-05-20 一种氧化型α-1，4-寡聚葡萄糖醛酸及其制备方法和用途
US15/576,477 US10898509B2 (en) 2015-05-22 2016-05-20 Oxidized α-1,4-oligoglucuronic acid, and preparation method therefor and uses thereof
KR1020177037122A KR20180019605A (ko) 2015-05-22 2016-05-20 산화형 α-1,4-올리고글루쿠론산 및 이의 제조방법과 용도
JP2017561938A JP6908534B2 (ja) 2015-05-22 2016-05-20 酸化型α−１，４−グルクロン酸オリゴマーおよびその製造方法と使用
CN201680029752.8A CN107922513B (zh) 2015-05-22 2016-05-20 一种氧化型α-1,4-寡聚葡萄糖醛酸及其制备方法和用途

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201510267211.6A CN104892792B (zh) 2015-05-22 2015-05-22 一种氧化型α-1,4-寡聚葡萄糖醛酸及其制备方法和用途

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN104892792A true CN104892792A (zh) 2015-09-09
CN104892792B CN104892792B (zh) 2018-08-24

Family

ID=54025797

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201510267211.6A Active CN104892792B (zh) 2015-05-22 2015-05-22 一种氧化型α-1,4-寡聚葡萄糖醛酸及其制备方法和用途
CN201680029752.8A Active CN107922513B (zh) 2015-05-22 2016-05-20 一种氧化型α-1,4-寡聚葡萄糖醛酸及其制备方法和用途

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201680029752.8A Active CN107922513B (zh) 2015-05-22 2016-05-20 一种氧化型α-1,4-寡聚葡萄糖醛酸及其制备方法和用途

Country Status (6)

Country Link
US (1) US10898509B2 (zh)
EP (1) EP3299395A4 (zh)
JP (1) JP6908534B2 (zh)
KR (1) KR20180019605A (zh)
CN (2) CN104892792B (zh)
WO (1) WO2016188382A1 (zh)

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2016188381A1 (zh) * 2015-05-22 2016-12-01 上海绿谷制药有限公司 一种氧化型β-1，4-寡聚葡萄糖醛酸及其制备方法和用途
WO2016188382A1 (zh) * 2015-05-22 2016-12-01 上海绿谷制药有限公司 一种氧化型α-1，4-寡聚葡萄糖醛酸及其制备方法和用途
CN112876521A (zh) * 2021-03-17 2021-06-01 苏州大学 一种β-1，4型葡萄糖醛酸/甘露糖醛酸直链杂合寡糖及其制备工艺
CN113773351A (zh) * 2021-08-31 2021-12-10 苏州大学 β-1,4型葡萄糖醛酸/甘露糖醛酸直链杂合寡糖及其制备方法和应用

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108264577B (zh) * 2017-01-04 2020-05-22 苏州大学 一种β-1,3-葡萄糖醛酸寡糖、及其制备方法和用途
CN110652517A (zh) 2018-06-29 2020-01-07 上海绿谷制药有限公司 褐藻胶寡糖二酸的组合物
CN109187820B (zh) * 2018-11-09 2021-07-23 湖南国华制药有限公司 一种复方菝葜颗粒uplc指纹图谱的建立方法

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2002032913A1 (en) * 2000-10-17 2002-04-25 University Of Connecticut Method for the oxidation of aldehydes, hemiacetals and primary alcohols
CN103015264A (zh) * 2013-01-08 2013-04-03 北京林业大学 葡甘露聚糖制得的纸张增强剂及其生产和使用方法

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2742755B1 (fr) * 1995-12-21 1998-02-20 Roquette Freres Procede perfectionne d'oxydation des sucres
FR2742759B1 (fr) * 1995-12-21 1998-03-06 Roquette Freres Glucuronyl-arabinarates, leur procede d'obtention et applications de ces produits
US20030119761A1 (en) 2000-04-12 2003-06-26 Christian Samuel T. Novel pharmaceutical agents containing carbohydrate moieties and methods of their preparation and use
KR101121543B1 (ko) * 2007-07-04 2012-03-06 학교법인 선목학원 벼과식물로부터 수득되는 전분 또는 식이섬유를 포함하는허혈성 질환 및 퇴행성 뇌질환의 예방 및 치료를 위한조성물
WO2014200880A1 (en) 2013-06-13 2014-12-18 Merck Sharp & Dohme Corp. Fused tricyclic heterocyclic compounds as hiv integrase inhibitors
CN104945448B (zh) * 2015-05-22 2018-06-19 上海绿谷制药有限公司 一种氧化型β-1,4-寡聚葡萄糖醛酸及其制备方法和用途
CN104892792B (zh) 2015-05-22 2018-08-24 上海绿谷制药有限公司 一种氧化型α-1,4-寡聚葡萄糖醛酸及其制备方法和用途

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2002032913A1 (en) * 2000-10-17 2002-04-25 University Of Connecticut Method for the oxidation of aldehydes, hemiacetals and primary alcohols
CN103015264A (zh) * 2013-01-08 2013-04-03 北京林业大学 葡甘露聚糖制得的纸张增强剂及其生产和使用方法

Non-Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
JEAN-FRANCOIS THABURET ET AL.: "TEMPO-mediated oxidation of maltodextrins and D-glucose: effect of pH on the selectivity and sequestering ability of the resulting polycarboxylates", 《CARBOHYDRATE RESEARCH》 *
M.SCHAMANN等: ""Reaction of enamines and mediated anodic oxidation of carbohydrates with the 2,2,6,6-tetramethylpiperidine-1-oxoammonium ion (TEMPO+)"", 《ELECTROCHIMICA ACTA》 *
P.L.BRAGDA等: ""TEMPO-mediated oxidation of polysaccharides:survey of methods and applications"", 《TOPICS IN CATALYSIS》 *
孙雪等: ""TEMPO／NaBr／NaClO体系催化氧化法合成α-D-葡萄糖醛酸"", 《化学研究与应用》 *
宋丽丽等: "《TEMPO／NaBr／NaClO体系氧化玉米淀粉的研究》", 《青岛大学学报（工程技术版）》 *
曹晶晶等: "TEMPO／NaBr／NaClO体系下氧化淀粉的制备及其结构型能表征", 《南京林业大学学报（自然科学版）》 *

Cited By (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2016188381A1 (zh) * 2015-05-22 2016-12-01 上海绿谷制药有限公司 一种氧化型β-1，4-寡聚葡萄糖醛酸及其制备方法和用途
WO2016188382A1 (zh) * 2015-05-22 2016-12-01 上海绿谷制药有限公司 一种氧化型α-1，4-寡聚葡萄糖醛酸及其制备方法和用途
CN107922513A (zh) * 2015-05-22 2018-04-17 上海绿谷制药有限公司 一种氧化型α‑1,4‑寡聚葡萄糖醛酸及其制备方法和用途
EP3336095A4 (en) * 2015-05-22 2019-03-13 Shanghai Green Valley Pharmaceutical Co., Ltd. OXIDIZED BETA-1,4-OLIGOGLUCURONIC ACID, PROCESS FOR PREPARING SAME AND USES THEREOF
US10898509B2 (en) 2015-05-22 2021-01-26 Shanghai Green Valley Pharmaceutical Co., Ltd. Oxidized α-1,4-oligoglucuronic acid, and preparation method therefor and uses thereof
US10898508B2 (en) 2015-05-22 2021-01-26 Shanghai Green Valley Pharmaceutical Co., Ltd. Oxidized β-1,4-oligoglucuronic acid, and preparation method therefor and uses thereof
CN112876521A (zh) * 2021-03-17 2021-06-01 苏州大学 一种β-1，4型葡萄糖醛酸/甘露糖醛酸直链杂合寡糖及其制备工艺
CN113773351A (zh) * 2021-08-31 2021-12-10 苏州大学 β-1,4型葡萄糖醛酸/甘露糖醛酸直链杂合寡糖及其制备方法和应用

Also Published As

Publication number Publication date
US10898509B2 (en) 2021-01-26
EP3299395A4 (en) 2019-02-13
KR20180019605A (ko) 2018-02-26
JP2018515591A (ja) 2018-06-14
CN104892792B (zh) 2018-08-24
JP6908534B2 (ja) 2021-07-28
EP3299395A1 (en) 2018-03-28
CN107922513A (zh) 2018-04-17
CN107922513B (zh) 2021-03-16
WO2016188382A1 (zh) 2016-12-01
US20180207195A1 (en) 2018-07-26

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN104892792A (zh) 一种氧化型α-1,4-寡聚葡萄糖醛酸及其制备方法和用途
CN104945448A (zh) 一种氧化型β-1,4-寡聚葡萄糖醛酸及其制备方法和用途
CN105622673B (zh) 具有抗癌活性的糖基化四价铂类化合物、制备方法及应用
US7282150B2 (en) Method of extracting and method of purifying an effective substance
CN106831375A (zh) 一种具有抗肿瘤活性的查耳酮类化合物及其制备方法和用途
CN107309438A (zh) 一种余甘多糖制备纳米银复合粒子的方法
CN103739638B (zh) 一种微生物发酵纯化茶皂素的方法
CN102370635B (zh) 甘松新酮的用途及制备方法
CN104031109B (zh) 一种微生物发酵纯化茶皂素的方法
CN115947876B (zh) β-D-半乳葡聚糖及其制备和用途
JP4023539B2 (ja) 有効物質の抽出方法および精製方法
CN106317157B (zh) 一种多羟基双酮类葫芦烷型三萜及其制法和用途
CN105296566A (zh) 一种制备可皆霉素的方法
CN106008301B (zh) 26‑甲基‑25‑羟基维生素d3化合物及其制备方法和应用
CN110117630A (zh) 一种右旋糖酐蔗糖酶的糖基化应用以及将其用于制备咖啡酸苯乙酯糖苷的方法
CN101792780A (zh) D-葡萄糖醛酸γ-内酯的分离方法
CN104826123B (zh) 一种齐墩果酸与胺类环糊精的包合物
CN107721951A (zh) 5‑羟甲基糠醛三聚物的制备方法和应用
CN103880788B (zh) 一种呋喃内酯环类衍生物的晶型
CN101974067B (zh) 澳洲茄胺-3-O-α-L-鼠李糖苷及其制备方法与应用
CN107875162A (zh) 齐墩果烷型三萜皂苷的制备和应用
CN108148105A (zh) 一种二聚环烯醚萜类化合物及其制备方法和应用
CN109053836B (zh) 木犀草素7-o-琥珀酰葡糖苷和芹菜素-7-o-琥珀酰葡糖苷及其应用
CN111675739B (zh) 一种红景天苷琥珀酸酯及其制备神经保护药物的应用
CN106399118A (zh) 一种狭旋毛壳菌及其在制备可皆霉素中的应用

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C41 Transfer of patent application or patent right or utility model
TA01 Transfer of patent application right

Effective date of registration: 20160601

Address after: 201203, 421, Newton Road, Zhangjiang hi tech park, Shanghai

Applicant after: Shanghai Green Valley Pharmaceutical Co., Ltd.

Address before: 215123 Suzhou City, Suzhou Province Industrial Park, No. love road, No. 199

Applicant before: Soochow University

GR01 Patent grant
GR01 Patent grant
TR01 Transfer of patent right
TR01 Transfer of patent right

Effective date of registration: 20210816

Address after: 201203 Room 203, part 102, building 6, No. 393 421, Newton Road, China (Shanghai) pilot Free Trade Zone, Pudong New Area, Shanghai

Patentee after: Green Valley (Shanghai) Pharmaceutical Technology Co.,Ltd.

Address before: 201203 No. 421 Newton Road, Zhangjiang High-tech Park, Shanghai

Patentee before: SHANGHAI GREEN VALLEY PHARMACEUTICAL Co.,Ltd.