CN104876955B - 精氨酸酶抑制剂及其治疗应用 - Google Patents

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Abstract

本申请涉及精氨酸酶抑制剂及其治疗应用。根据式I和式I的化合物是精氨酸酶I和II活性的有效抑制剂：式(I)、(II)，其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、D、M、X和Y是如说明书中所述来定义。本发明还提供所述化合物的医药组合物以及其用于治疗或预防与精氨酸酶活性相关的疾病或病况的方法。

Description

精氨酸酶抑制剂及其治疗应用
本申请是申请日为2011年4月20日，申请号为201180028626.8、发明名称为“精氨酸酶抑制剂及其治疗应用”的发明专利申请的分案申请。
本申请案主张2010年4月22日申请的美国临时申请案第61/326,892号和2010年11月12日申请的第61/413,202号的优先权益，各案完整揭示内容以引用的方式并入，就如同在本文中完整陈述一般。
技术领域
本发明大体上涉及精氨酸酶抑制剂和其用于治疗病理状态的用途。到目前为止，已经鉴别出精氨酸酶的两种同功异型物。在细胞溶质中表达的精氨酸酶I(ARG I)，以及在线粒体中表达的精氨酸酶II(ARG II)。精氨酸酶与一氧化氮合成酶(NOS)一起在调控细胞中一氧化氮水平以及病理生理性疾病状态的发生中起到重要作用。
背景技术
精氨酸酶牵涉到各种病理状态。这些病理状态包括(但不限于)勃起功能障碍、肺高压、高血压、动脉粥样硬化、肾病、哮喘、T细胞功能障碍、缺血再灌注损伤、神经退行性疾病、创伤愈合和纤维化疾病。尽管精氨酸酶在这些疾病状态中的作用机制仍是正在进行的研究的主题，但数项研究暗示，在病理性疾病状态期间，精氨酸酶常常上调。
举例来说，据推测，精氨酸酶活性上调引起精氨酸水平降低，而精氨酸水平降低又使一氧化氮(NO)水平降低，一氧化氮是一种在生理学上非常重要的信号传导分子，其为细胞分裂、动脉血管舒张、血流调控以及肌肉和神经信号转导控制所需的。
除在调控一氧化氮(NO)水平方面的作用外，精氨酸酶还影响例如腐胺、亚精胺和精胺等关键聚胺的产生。当精氨酸酶使L-精氨酸发生分解代谢时，其产生鸟氨酸。鸟氨酸随后分别经由鸟氨酸脱羧酶、亚精胺合成酶和精胺合成酶转化成腐胺、亚精胺和精胺。因此，精氨酸酶通过控制聚胺信号转导子的细胞内水平来控制生理性信号传导事件。参见王J-Y(Wang,J-Y)和卡瑟罗Jr.,R.A.(Casero,Jr.,R.A.)编；胡马纳出版社(Humana Press),新泽西州托托瓦(Totowa,NJ),2006。鸟氨酸也提供脯氨酸的替代性生物合成路径，并由此支持胶原蛋白的产生(史密斯R.J.(Smith,R.J.)；彭J.M.(Phang,J.M.),在哺乳动物细胞中鸟氨酸作为脯氨酸前体的重要性(The importance of ornithine as a precursor forproline in mammalian cells).细胞生理学杂志(J.Cell.Physiol.)1979,98,475–482。奥宾纳J.E.(Albina,J.E.)；阿贝特J.A.(Abate,J.A.)；马斯特罗弗朗切斯科B.(Mastrofrancesco,B.),在创伤愈合中鸟氨酸作为脯氨酸前体的作用(Role of ornithineas a proline precursor in healing wounds).外科研究杂志(J.Surg.Res.)1993,55,97–102。)
已知精氨酸酶在各种病理状态中的作用，本发明提供作为精氨酸酶活性的抑制剂的式I和式II化合物，以及使用本发明化合物作为治疗剂的方法。
发明内容
本发明提供根据如本文所述的式I和II的某些含硼化合物，这些化合物是精氨酸酶活性的抑制剂。本发明还提供使用本发明化合物进行治疗的方法。因此，在一个实施例中，提供本发明化合物和其医药学上可接受的调配物作为治疗剂，其能够抑制精氨酸酶活性。根据本发明的化合物和医药调配物可用于治疗多种疾病和病况，包括(但不限于)肺高压、勃起功能障碍(ED)、高血压、动脉粥样硬化、肾病、哮喘、T细胞功能障碍、缺血再灌注损伤、神经退行性疾病、创伤愈合和纤维化疾病。
在一个实施例中，本发明提供遵照式I的化合物，以及其立体异构体、互变异构体、前药和医药学上可接受的盐或酯：
在式I中，R1选自由-OH、ORa和NRbRc组成的群组。取代基Ra选自由以下组成的群组：氢、直链或分支链(C1-C6)烷基、(C3-C14)芳基、(C3-C14)杂环烷基-(C1-C6)亚烷基-、(C3-C14)杂芳基-(C1-C6)亚烷基-和(C3-C14)芳基(C1-C6)亚烷基-。取代基Rb和Rc各自独立地选自由以下组成的群组：H、-OH、直链或分支链(C1-C6)烷基、-S(O)2-(C1-C6)烷基、(C3-C14)芳基-S(O)2-、(C3-C14)杂环烷基-(C1-C6)亚烷基-和(C3-C14)杂芳基-(C1-C6)亚烷基-。
在式I中，取代基R2选自由以下组成的群组：直链或分支链(C1-C6)烷基、直链或分支链(C2-C6)烯基、直链或分支链(C2-C6)炔基、(C3-C14)芳基、(C3-C14)环烷基、(C3-C14)芳基(C1-C6)亚烷基-、(C3-C14)杂芳基-(C1-C6)亚烷基-、(C3-C14)杂芳基、(C3-C14)杂环烷基、(C3-C14)杂环烷基-(C1-C6)亚烷基-、(C3-C14)杂芳基-(C3-C6)亚杂环烷基-、(C3-C14)芳基-(C3-C14)亚杂环烷基-、(C3-C14)芳基-(C1-C6)烷基-(C3-C14)亚杂环烷基-、(C3-C14)杂芳基-(C1-C6)烷基-(C3-C14)亚杂环烷基-、(C3-C14)杂环烷基-(C1-C6)烷基-(C3-C14)亚杂环烷基-和-(CH2)m-(X)u-(CH2)n-(Y)v-Rf。
当R2为-(CH2)m-(X)u-(CH2)n-(Y)v-Rf时，u和v各自独立地为0或1，因此u+v≥1。下标m和n各自独立地为0、1、2、3、4、5或6，其中m+n≥1。
变量X和Y独立地选自由–NH-、-O-和-S-组成的群组。
取代基Rf选自由H、羟基、直链或分支链(C1-C6)烷基和(C3-C14)芳基组成的群组。
取代基R3和R4各自独立地为氢或者直链或分支链(C1-C6)烷基。
或者，R3和R4连同其所结合的硼原子一起形成5元或6元环，所述5元或6元环是完全或部分饱和的，并且任选含有1到3个选自O、S和N的额外杂原子环成员。
也涵盖式I中的硼酸部分经糖酯化的化合物。此类化合物可用作前药。
取代基R5选自由H、直链或分支链(C1-C6)烷基和(C1-C6)烷基-C(O)-组成的群组。
在式I中，D选自由以下组成的群组：直链或分支链(C1-C6)亚烷基、直链或分支链(C2-C8)亚烯基、(C3-C14)亚芳基、直链或分支链(C2-C8)亚炔基和(C3-C14)亚环烷基。在一些实施例中，D中的一个或一个以上–CH2-基团任选且独立地经选自由以下组成的群组的部分置换：–O-、-NR'-、-S-、-SO-、-SO2-和-CR'R”-，其中R'和R”各自独立地选自由H、(C1-C8)烷基和(C3-C6)芳基组成的群组。在其它实施例中，任两个相邻的-CH2-基团任选表示(C3-C14)亚环烷基的两个成员。
式I中的任何烷基、亚烷基、烯基、亚烯基、炔基或亚炔基任选经一个或一个以上选自由以下组成的群组的成员取代：卤素、氧代基、-COOH、-CN、-NO2、-OH、-NRdRe、-NRgS(O)2Rh、(C1-C6)烷氧基和(C3-C14)芳氧基。
取代基Rd、Re、Rg和Rh独立地选自由以下组成的群组：H、直链或分支链(C1-C6)烷基、任选取代的(C3-C14)芳基(C1-C6)亚烷基-、(C1-C6)烷氧基、任选取代的(C3-C14)芳基、(C1-C6)羟基烷基、(C1-C6)氨基烷基、H2N(C1-C6)亚烷基-、任选取代的(C3-C6)环烷基、任选取代的(C3-C14)杂环烷基、任选取代的(C3-C14)杂芳基、任选取代的(C3-C14)芳基-(C1-C6)亚烷基-、NR'R”C(O)-和(C3-C6)芳基-(C3-C14)亚环烷基-，并且R'和R”可各自独立地选自由H、(C1-C8)烷基和(C3-C6)芳基组成的群组。
任何芳基、杂芳基、环烷基或杂环烷基任选经一个或一个以上选自由以下组成的群组的成员取代：卤素、-OH、氧代基、-COOH、(C3-C14)芳基(C1-C6)亚烷基-、-CN、-NO2、-NH2、(C1-C6)烷基-S-、(C3-C14)环烷基、(C3-C14)杂环烷基、(C3-C14)芳基、(C3-C14)杂芳基、-C(O)NH-(C1-C6)烷基、-NHC(O)-(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷基、(C2-C8)烯基、(C2-C8)炔基、(C1-C6)烷氧基、(C1-C6)卤烷基和(C1-C6)羟基烷基。
应了解，尽管本文中给出了式I的描述，但式I不包括2-氨基-4-二羟硼基-2-甲基丁酸。
本发明也提供遵照式II的化合物，其立体异构体、互变异构体、前药和医药学上可接受的盐或酯，以及其医药学上可接受的调配物，其作为治疗剂用于治疗与精氨酸酶不平衡相关的各种疾病状态。
在式II中，R6选自由ORa和NRbRc组成的群组。
取代基Ra选自由以下组成的群组：氢、直链或分支链(C1-C6)烷基、(C3-C8)环烷基、(C3-C14)芳基、(C3-C14)杂环烷基-(C1-C6)亚烷基-、(C3-C14)杂芳基-(C1-C6)亚烷基-和(C3-C14)芳基(C1-C6)亚烷基-，而取代基Rb和Rc各自独立地选自由以下组成的群组：H、-OH、直链或分支链(C1-C6)烷基、-S(O)2-(C1-C6)烷基、(C3-C14)芳基-S(O)2-、(C3-C14)杂环烷基-(C1-C6)亚烷基-和(C3-C14)杂芳基-(C1-C6)亚烷基-。
取代基R7选自由以下组成的群组：H、直链或分支链(C1-C6)烷基、(C3-C14)芳基(C1-C6)亚烷基-、(C3-C14)杂芳基-(C1-C6)亚烷基-、(C3-C14)杂环烷基-(C1-C6)亚烷基-和(C1-C6)烷基-C(O)-。
式II中的变量X选自由(C3-C14)亚环烷基和(C3-C14)亚杂环烷基组成的群组，并且变量M选自由以下组成的群组：键结、(C1-C6)亚烷基-、-O-、-C(O)-、-C(S)-、-C(O)NH-、-C(S)NH-、-S-、-S(O)-、-S(O)2-、-NR'-和–C＝NR11-。
式II中的变量Y选自由以下组成的群组：H、(C1-C14)烷基、-NR'R”、羟基(C1-C6)亚烷基、(C3-C14)环烷基、(C3-C14)环烷基-(C1-C6)亚烷基、(C3-C14)芳基、(C3-C14)芳基-(C1-C6)亚烷基、(C3-C14)杂环烷基、(C3-C14)杂环烷基-(C1-C6)亚烷基、(C3-C14)杂芳基、(C3-C14)杂芳基-(C1-C6)亚烷基、(C3-C14)杂芳基-(C3-C6)亚杂环烷基-、(C3-C14)芳基-(C3-C14)亚杂环烷基-、(C3-C14)芳基-(C1-C6)烷基-(C3-C14)亚杂环烷基-、(C3-C14)杂芳基-(C1-C6)烷基-(C3-C14)亚杂环烷基-和(C3-C14)杂环烷基-(C1-C6)烷基-(C3-C14)亚杂环烷基-。
在一个实施例中，X是(C3-C14)亚环烷基，M是键结，并且Y是–NH2。在本发明的其它方面中，X是(C3-C14)亚杂环烷基，并且Y选自由以下组成的群组：(C3-C14)环烷基、(C3-C14)芳基、(C3-C14)芳基-(C1-C6)亚烷基、(C3-C14)杂芳基和(C3-C14)杂芳基-(C1-C6)亚烷基。举例来说，Y可为(C3-C14)杂芳基、(C3-C14)芳基、(C3-C14)环烷基或(C3-C14)芳基-(C1-C6)亚烷基。
取代基R8和R9独立地选自氢、直链或分支链(C1-C6)烷基、(C3-C8)环烷基、(C3-C14)芳基和C(O)-R'。或者，R8和R9连同其所结合的硼原子一起形成5元或6元环，所述5元或6元环是完全或部分饱和的，并且任选含有1到3个选自O、S和N的额外杂原子环成员。在本发明一个实施例中，R8和R9连同其所结合的硼原子连接在一起形成5元二氧杂硼戊环或6元二氧杂硼杂环己烷环，其任选与环烷基、杂环或芳香族环稠合。
在式II中，D选自由以下组成的群组：直链或分支链(C3-C5)亚烷基、直链或分支链(C2-C8)亚烯基、直链或分支链(C2-C8)亚炔基、(C3-C14)亚芳基和(C3-C14)亚环烷基。在一个实施例中，D中的一个或一个以上–CH2-基团任选且独立地经选自由O、NR'、S、SO、SO2和CR'R”组成的群组的部分置换。然而，D中两个相邻的–CH2-基团不同时为O、NR'、S、SO或SO2。
对于某些式II化合物来说，D中任两个相邻的-CH2-基团任选表示(C3-C14)亚环烷基的两个成员。在其它实施例中，D遵照式-L1-L2-CH2-CH2-、-CH2-L1-L2-CH2-、-CH2-CH2-L1-L2-、-L1-CH2-CH2-L2-、-L1-CH2-L2-CH2-或-CH2-L1-CH2-L2-中的一者。变量L1和L2独立地选自由以下组成的群组：O、NR'、S、SO、SO2和CR'R”，其中R'和R”如下文所定义。然而，在-L1与-L2彼此相邻的实施例中，L1和L2不同时为O、NR'、S、SO或SO2基团。
式II中的取代基R'和R”独立地选自由以下组成的群组：H、(C1-C8)烷基、-C(O)-(C1-C8)亚烷基、任选取代的(C3-C6)芳基、任选取代的(C3-C14)芳基(C1-C6)亚烷基-、任选取代的(C1-C6)氨基烷基、任选取代的(C3-C6)环烷基、任选取代的(C3-C14)杂环烷基、任选取代的(C3-C14)杂芳基。
此外，如本文所定义的任何烷基、亚烷基、芳基、杂芳基、环烷基或杂环烷基取代基任选经一个或一个以上选自由以下组成的群组的成员取代：卤素、氧代基、-COOH、-CN、-NO2、-OH、-NRdRe、-NRgS(O)2Rh、(C1-C6)烷基、(C1-C6)卤烷基、(C1-C6)卤烷氧基、(C1-C6)烷氧基、(C3-C14)芳基、(C3-C14)杂芳基、(C3-C14)杂环烷基、(C3-C14)杂芳基-(C1-C6)亚烷基和(C3-C14)芳氧基。
Rd、Re、Rg和Rh各自独立地选自由以下组成的群组：H、直链或分支链(C1-C6)烷基、任选取代的(C3-C14)芳基(C1-C6)亚烷基-、任选取代的(C3-C14)芳基、(C1-C6)羟基烷基、(C1-C6)氨基烷基、H2N(C1-C6)亚烷基-、任选取代的(C3-C6)环烷基、任选取代的(C3-C14)杂环烷基、任选取代的(C3-C14)杂芳基、任选取代的(C3-C14)芳基-(C1-C6)亚烷基-和NR'R”C(O)-。
本发明也提供式II化合物的医药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体或前药。
根据式I或II的化合物和其医药调配物可用于治疗多种疾病和病况，包括(但不限于)肺高压、勃起功能障碍(ED)、高血压、动脉粥样硬化、肾病、哮喘、T细胞功能障碍、缺血再灌注损伤、神经退行性疾病、创伤愈合和纤维化疾病。
在一个实施例中，本发明提供一种医药组合物，其包含治疗有效量的至少一种式I或式II化合物，以及医药学上可接受的载剂。
在一个实施例中，本发明提供一种用于抑制细胞中的精氨酸酶I、精氨酸酶II或其组合的方法，其包含使所述细胞与至少一种根据式I或式II的化合物接触。按照另一实施例，本发明提供一种用于治疗或预防个体的与精氨酸酶I、精氨酸酶II或其组合的表达或活性有关的疾病或病况的方法，其包含投予所述个体治疗有效量的至少一种式I或式II化合物。
如上文所述，按照一个实施例，本发明提供一种式I或式II化合物，其用于治疗或预防个体的与精氨酸酶I、精氨酸酶II或其组合的表达或活性有关的疾病或病况。在另一实施例中，本发明也提供式I或式II化合物用于所述目的的用途。另外，另一实施例提供式I或式II化合物的用途，其用于制造供治疗或预防与细胞中精氨酸酶I、精氨酸酶II或两种酶的组合的表达或活性有关的疾病或病况的药物。
附图说明
无
具体实施方式
如本文所述的化合物是遵照式I或II的小分子精氨酸酶抑制剂。如将从下文的描述显而易知，一些式II化合物也是式I化合物。这些化合物和其医药组合物可用于治疗或预防与精氨酸酶表达或活性有关的疾病或病况。
定义
“烷基”是指包括1到约20个碳原子的直链、分支链或环状烃基。举例来说，烷基可具有1到10个碳原子或1到5个碳原子。示范性烷基包括直链烷基，例如甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、庚基、辛基、壬基、癸基、十一烷基、十二烷基和类似基团，并且也包括直链烷基的分支链异构体，例如(但不限于)-CH(CH3)2、-CH(CH3)(CH2CH3)、-CH(CH2CH3)2、-C(CH3)3、-C(CH2CH3)3、-CH2CH(CH3)2、-CH2CH(CH3)(CH2CH3)、-CH2CH(CH2CH3)2、-CH2C(CH3)3、-CH2C(CH2CH3)3、-CH(CH3)CH(CH3)(CH2CH3)、-CH2CH2CH(CH3)2、-CH2CH2CH(CH3)(CH2CH3)、-CH2CH2CH(CH2CH3)2、-CH2CH2C(CH3)3、-CH2CH2C(CH2CH3)3、-CH(CH3)CH2CH(CH3)2、-CH(CH3)CH(CH3)CH(CH3)2和类似基团。因此，烷基包括伯烷基、仲烷基和叔烷基。
短语“经取代烷基”是指一个或一个以上(例如1、2、3、4、5或甚至6个)位置经取代的烷基，这些取代基连接于任何可用的原子处以产生稳定的化合物，其中取代如本文所述。“任选取代的烷基”是指烷基或经取代烷基。
术语“卤素”、“卤化物”和“卤基”各自是指-F、-Cl、-Br或-I。
术语“亚烷基”和“经取代亚烷基”分别是指二价烷基和二价经取代烷基。亚烷基的实例包括(但不限于)亚乙基(-CH2-CH2-)。“任选取代的亚烷基”是指亚烷基或经取代亚烷基。
“烯烃”是指包括2到约20个碳原子并且具有一个或一个以上碳碳双键(例如1到3个、1到2个或至少一个碳碳双键)的直链、分支链或环状烃基。“经取代烯烃”是指一个或一个以上(例如1、2、3、4、5或甚至6个)位置经取代的烯烃，这些取代基连接于任何可用的原子处以产生稳定的化合物，其中取代如本文所述。“任选取代的烯烃”是指烯烃或经取代烯烃。
术语“亚烯基”是指二价烯烃。亚烯基的实例包括(但不限于)亚乙烯基(-CH＝CH-)，以及其所有立体异构形式和构象异构形式。“经取代亚烯基”是指二价经取代烯烃。“任选取代的亚烯基”是指亚烯基或经取代亚烯基。
“炔烃”或“炔基”是指具有指定数目的碳原子和至少一个三键的直链或分支链不饱和烃。(C2-C8)炔基的实例包括(但不限于)乙炔、丙炔、1-丁炔、2-丁炔、1-戊炔、2-戊炔、1-己炔、2-己炔、3-己炔、1-庚炔、2-庚炔、3-庚炔、1-辛炔、2-辛炔、3-辛炔和4-辛炔。炔基可未经取代或任选经一个或一个以上如下文所述的取代基取代。
术语“亚炔基”是指二价炔烃。亚炔基的实例包括(但不限于)亚乙炔基、亚丙炔基。“经取代亚炔基”是指二价经取代炔烃。
术语“烷氧基”是指具有指定数目的碳原子的-O-烷基。举例来说，(C1-C6)烷氧基包括-O-甲基(甲氧基)、-O-乙基(乙氧基)、-O-丙基(丙氧基)、-O-异丙基(异丙氧基)、-O-丁基(丁氧基)、-O-仲丁基(仲丁氧基)、-O-叔丁基(叔丁氧基)、-O-戊基(戊氧基)、-O-异戊基(异戊氧基)、-O-新戊基(新戊氧基)、-O-己基(己氧基)、-O-异己基(异己氧基)和-O-新己基(新己氧基)。
单独或组合形式的术语“芳基”是指芳香族单环或双环系统，例如苯基或萘基。“芳基”也包括任选与如本文所定义的环烷基环稠合的芳香族环系统。
“经取代芳基”是指独立地经一个或一个以上取代基取代的芳基，所述取代基连接于任何可用的原子以产生稳定的化合物，其中所述取代基如本文所述。“任选取代的芳基”是指芳基或经取代芳基。
“亚芳基”表示二价芳基，并且“经取代亚芳基”是指二价经取代芳基。“任选取代的亚芳基”是指亚芳基或经取代亚芳基。
术语“杂原子”是指N、O和S。含有N或S原子的本发明化合物可任选氧化成相应的N-氧化物、亚砜或砜化合物。
单独或与本文所述的任何其它部分组合的“杂芳基”是指含有一个或一个以上(例如1到4个、1到3个或1到2个)独立地选自由O、S和N组成的群组的杂原子的含5或6个环原子的单环芳香族环结构或具有8到10个原子的双环芳香族基团。杂芳基也打算包括经氧化的S或N，例如亚磺酰基、磺酰基以及三级环氮的N-氧化物。碳或杂原子是杂芳基环结构的连接点，由此产生稳定的化合物。杂芳基的实例包括(但不限于)吡啶基、哒嗪基、吡嗪基、喹喔啉基、吲哚嗪基、苯并[b]噻吩基、喹唑啉基、嘌呤基、吲哚基、喹啉基、嘧啶基、吡咯基、吡唑基、噁唑基、噻唑基、噻吩基、异噁唑基、氧杂噻二唑基、异噻唑基、四唑基、咪唑基、三唑基、呋喃基、苯并呋喃基和吲哚基。“杂芳基”也涵盖稠环系统，其中杂芳基与如本文所定义的芳基或环烷基环稠合。
“经取代杂芳基”是除非另作指示，否则独立地经一个或一个以上(例如1、2、3、4或5个)取代基取代的杂芳基，所述取代基连接于任何可用的原子以产生稳定的化合物，其中所述取代基如本文所述。“任选取代的杂芳基”是指杂芳基或经取代杂芳基。
“亚杂芳基”是指二价杂芳基，并且“经取代亚杂芳基”是指二价经取代杂芳基。“任选取代的亚杂芳基”是指亚杂芳基或经取代亚杂芳基。
“杂环烷基”意思指具有5到14个原子并且环中的1到3个碳原子经杂原子O、S或N置换的饱和或不饱和非芳香族单环、双环、三环或多环系统。杂环烷基任选与具有5到6个环成员的苯并或杂芳基稠合，并且包括经氧化的S或N，例如亚磺酰基、磺酰基和三级环氮的N-氧化物。杂环烷基环的连接点在使得保留稳定的环的碳或杂原子处。杂环烷基的实例包括(但不限于)N-吗啉基、四氢呋喃基、二氢吡啶基、哌啶基、吡咯烷基、哌嗪基、二氢苯并呋喃基和二氢吲哚基。
“任选取代的杂环烷基”表示经1到3个取代基，例如1、2或3个取代基取代的杂环烷基，所述取代基连接于任何可用的原子以产生稳定的化合物，其中所述取代基如本文所述。
“杂烷基”意思指具有1到约20个碳原子、1到10个碳原子、1到6个碳原子或1到3个碳原子并且其中1到3个碳原子经杂原子O、S或N置换的饱和烷基。杂烷基也打算包括经氧化的S或N，例如亚磺酰基、磺酰基以及三级环氮的N-氧化物。杂烷基取代基的连接点在使得形成稳定化合物的原子处。杂烷基的实例包括(但不限于)N-烷基氨基烷基(例如CH3NHCH2-)、N,N-二烷基氨基烷基(例如(CH3)2NCH2-)和类似基团。
“亚杂烷基”是指二价杂烷基。术语“任选取代的亚杂烷基”是指经1到3个取代基，例如1、2或3个取代基取代的亚杂烷基，所述取代基连接于任何可用的原子以产生稳定的化合物，其中所述取代基如本文所述。
“杂烯烃”意思指具有1到约20个碳原子、1到10个碳原子、1到6个碳原子或1到3个碳原子并且其中1到3个碳原子经杂原子O、S或N置换，并具有1到3个、1到2个或至少一个碳碳双键或碳与杂原子双键的不饱和烷基。
“亚杂烯基”是指二价杂烯烃。术语“任选取代的亚杂烯基”是指经1到3个取代基，例如1、2或3个取代基取代的亚杂烯基，所述取代基连接于任何可用的原子以产生稳定的化合物，其中所述取代基如本文所述。
术语“环烷基”是指饱和、不饱和或芳香族单环、双环、三环或多环3元到14元环系统。环烷基可经由任何原子连接。环烷基也涵盖稠环，其中环烷基与如上文所定义的芳基或杂芳基环稠合。环烷基的代表性实例包括(但不限于)环丙基、环丁基、环戊基和环己基。环烷基可未经取代或任选经一个或一个以上如下文所述的取代基取代。
术语“环烯基”是指不饱和单环、双环、三环或多环3元到14元环系统。环烯基可经由任何原子连接。环烯基的代表性实例包括(但不限于)环丙烯基、环丁烯基、环戊烯基和环己烯基。
术语“亚环烷基”是指二价环烷基。术语“任选取代的亚环烷基”是指经1到3个取代基，例如1、2或3个取代基取代的亚环烷基，所述取代基连接于任何可用的原子以产生稳定的化合物，其中所述取代基如本文所述。
术语“腈或氰基”可互换使用，并且是指-CN基团，其结合于杂芳基环、芳基环和杂环烷基环的碳原子。
术语“氧代基”是指＝O原子，其连接于饱和或不饱和(C3-C8)环部分或(C1-C8)无环部分。＝O原子可连接于作为所述环或无环部分的一部分的碳、硫和氮原子。
术语“胺或氨基”是指–NRdRe基团，其中Rd和Re各自独立地指氢、(C1-C8)烷基、芳基、杂芳基、杂环烷基、(C1-C8)卤烷基和(C1-C6)羟基烷基。
术语“酰胺”是指–NR'R”C(O)-基团，其中R'和R”各自独立地指氢、(C1-C8)烷基或(C3-C6)芳基。
术语“甲酰胺基”是指–C(O)NR'R”基团，其中R'和R”各自独立地指氢、(C1-C8)烷基或(C3-C6)芳基。
术语“芳氧基”是指具有指定数目的碳原子的-O-芳基。芳氧基的实例包括(但不限于)苯氧基、萘氧基和环丙烯氧基。
术语“卤烷氧基”是指–O-(C1-C6)烷基，其中C1-C8烷基中的一个或一个以上氢原子经卤素原子置换，所述卤素原子可相同或不同。卤烷基的实例包括(但不限于)二氟甲氧基、三氟甲氧基、2,2,2-三氟乙氧基、4-氯丁氧基、3-溴丙氧基、五氯乙氧基和1,1,1-三氟-2-溴-2-氯乙氧基。
术语“羟基烷基”是指具有指定数目的碳原子并且烷基的一个或一个以上氢原子经-OH基团置换的烷基。羟基烷基的实例包括(但不限于)-CH2OH、-CH2CH2OH、-CH2CH2CH2OH、-CH2CH2CH2CH2OH、-CH2CH2CH2CH2CH2OH、-CH2CH2CH2CH2CH2CH2OH和其分支型式。
术语“烷基磺酰基”是指这样一种(C1-C6)烷基，其中C1-C6烷基中的一个或一个以上氢原子经–S(O)a基团置换。下标“a”可为1或2，由此分别得到烷基亚砜(亚磺酰基)或烷基砜。烷基磺酰基的实例包括(但不限于)二甲亚砜、乙基甲基亚砜和甲基乙烯基砜。
术语“卤烷基”是指这样一种(C1-C6)烷基，其中C1-C6烷基中的一个或一个以上氢原子经卤素原子置换，所述卤素原子可相同或不同。卤烷基的实例包括(但不限于)二氟甲基、三氟甲基、2,2,2-三氟乙基、4-氯丁基、3-溴丙基、五氯乙基和1,1,1-三氟-2-溴-2-氯乙基。
术语“氨基烷基”是指这样一种(C1-C6)烷基，其中C1-C6烷基中的一个或一个以上氢原子经–NRdRe基团置换，其中Rd与Re可相同或不同，例如，Rd和Re各自独立地指氢、(C1-C8)烷基、芳基、杂芳基、杂环烷基、(C1-C8)卤烷基和(C1-C6)羟基烷基。氨基烷基的实例包括(但不限于)氨基甲基、氨基乙基、4-氨基丁基和3-氨基丁基。
术语“硫烷基”或“烷硫基”是指这样一种(C1-C6)烷基，其中C1-C6烷基中的一或一个以上氢原子经–SRj基团置换，其中Rj选自由氢、(C1-C6)烷基和(C3-C14)芳基组成的群组。
“氨基(C1-C6)亚烷基”是指这样一种二价亚烷基，其中C1-C6亚烷基中的一个或一个以上氢原子经–NRdRe基团置换。氨基(C1-C6)亚烷基的实例包括(但不限于)氨基亚甲基、氨基亚乙基、4-氨基亚丁基和3-氨基亚丁基。
术语“磺酰胺”是指–NRgS(O)2Rh基团，其中Rg和Rh各自独立地指氢、(C1-C8)烷基、芳基、杂芳基、杂环烷基、(C1-C8)卤烷基和(C1-C6)羟基烷基。
“羟基”是指–OH基团。
术语“(C3-C14)芳基-(C1-C6)亚烷基”是指这样一种二价亚烷基，其中C1-C6亚烷基中的一个或一个以上氢原子经(C3-C14)芳基置换。(C3-C14)芳基-(C1-C6)亚烷基的实例包括(但不限于)1-苯基亚丁基、苯基-2-亚丁基、1-苯基-2-甲基亚丙基、苯基亚甲基、苯基亚丙基和萘基亚乙基。
术语“(C3-C14)杂芳基-(C1-C6)亚烷基”是指这样一种二价亚烷基，其中C1-C6亚烷基中的一个或一个以上氢原子经(C3-C14)杂芳基置换。(C3-C14)杂芳基-(C1-C6)亚烷基的实例包括(但不限于)1-吡啶基亚丁基、喹啉基-2-亚丁基和1-吡啶基-2-甲基亚丙基。
术语“(C3-C14)杂环烷基-(C1-C6)亚烷基”是指这样一种二价亚烷基，其中C1-C6亚烷基中的一个或一个以上氢原子经(C3-C14)杂环烷基置换。(C3-C14)杂环烷基-(C1-C6)亚烷基的实例包括(但不限于)1-吗啉基亚丙基、氮杂环丁烷基-2-亚丁基和1-四氢呋喃基-2-甲基亚丙基。
术语“(C3-C14)杂芳基-(C1-C14)亚杂环烷基”是指这样一种二价亚杂环烷基，其中C1-C6亚杂环烷基中的一个或一个以上氢原子经(C3-C14)杂芳基置换。(C3-C14)杂芳基-(C1-C6)亚杂环烷基的实例包括(但不限于)吡啶基亚氮杂环丁烷基和4-(N-喹啉基)-1-亚哌嗪基。
术语“(C3-C14)芳基-(C1-C14)亚杂环烷基”是指这样一种二价亚杂环烷基，其中C1-C14亚杂环烷基中的一个或一个以上氢原子经(C3-C14)芳基置换。(C3-C14)芳基-(C1-C14)亚杂环烷基的实例包括(但不限于)1-萘基-亚哌嗪基、苯基亚氮杂环丁烷基和苯基亚哌啶基。
术语“(C3-C14)芳基-(C1-C6)烷基-(C1-C14)亚杂环烷基”是指这样一种二价亚杂环烷基，其中C1-C14亚杂环烷基中的一个或一个以上氢原子经(C1-C6)烷基置换，所述(C1-C6)烷基进一步通过用(C3-C14)芳基置换(C1-C6)烷基的一个或一个以上氢原子而经取代。
术语“(C3-C14)杂芳基-(C1-C6)烷基-(C1-C14)亚杂环烷基”是指这样一种二价亚杂环烷基，其中C1-C14亚杂环烷基中的一个或一个以上氢原子经(C1-C6)烷基置换，所述(C1-C6)烷基进一步通过用(C3-C14)杂芳基置换(C1-C6)烷基的一个或一个以上氢原子而经取代。
术语“(C3-C14)杂环烷基-(C1-C6)烷基-(C1-C14)亚杂环烷基”是指这样一种二价亚杂环烷基，其中C1-C14亚杂环烷基中的一个或一个以上氢原子经(C1-C6)烷基置换，所述(C1-C6)烷基进一步通过用(C3-C14)杂环烷基置换(C1-C6)烷基的一个或一个以上氢原子而经取代。
术语“(C3-C14)芳基-(C1-C14)亚环烷基”是指这样一种二价亚环烷基，其为单环、双环或多环的，并且其中(C1-C14)亚环烷基中的一个或一个以上氢原子经(C3-C14)芳基置换。(C3-C14)芳基-(C1-C14)亚环烷基的实例包括(但不限于)苯基亚环丁基、苯基-亚环丙基和3-苯基-2-甲基亚丁基-1-酮。
取代基-CO2H可用生物电子等排置换进行置换，例如：
和类似物，其中R具有与本文所定义的R'和R”相同的定义。参见例如实用药物化学(THE PRACTICE OF MEDICINAL CHEMISTRY)(学术出版社(Academic Press):纽约(NewYork),1996),第203页。
本发明化合物可以各种异构体形式存在，包括构型异构体、几何异构体和构象异构体，包括例如顺式或反式构象。本发明化合物也可以一种或一种以上互变异构形式存在，包括单一互变异构体和互变异构体混合物。术语“异构体”打算涵盖本发明化合物的所有异构形式，包括化合物的互变异构形式。
本发明化合物也可以开链或环化形式存在。在一些情形中，一种或一种以上环化形式可引起水损失。开链和环化形式的具体组成可取决于如何分离、储存或投予化合物。举例来说，化合物在酸性条件下可主要以开链形式存在，但在中性条件下环化。所有形式都包括在本发明中。
此处描述的一些化合物可具有不对称中心，并因此以不同对映异构形式和非对映异构形式存在。本发明化合物可呈光学异构体或非对映异构体形式。因此，本发明涵盖呈光学异构体、非对映异构体和其混合物(包括外消旋混合物)形式的如本文所述的本发明化合物和其用途。本发明化合物的光学异构体可通过已知技术，例如不对称合成、手性色谱法、模拟移动床技术或经由采用光学活性拆分剂以化学方式分离立体异构体来获得。
除非另作指示，否则“立体异构体”意思指化合物的一种立体异构体，其实质上不含所述化合物的其它立体异构体。因此，具有一个手性中心的立体异构体纯的化合物将实质上不含所述化合物的相对的对映异构体。具有两个手性中心的立体异构体纯的化合物将实质上不含所述化合物的其它非对映异构体。典型的立体异构体纯的化合物包含超过约80重量％所述化合物的一种立体异构体和小于约20重量％所述化合物的其它立体异构体，例如超过约90重量％所述化合物的一种立体异构体和小于约10重量％所述化合物的其它立体异构体，或超过约95重量％所述化合物的一种立体异构体和小于约5重量％所述化合物的其它立体异构体，或超过约97重量％所述化合物的一种立体异构体和小于约3重量％所述化合物的其它立体异构体。
如果描绘的结构与对所述结构指定的名称之间存在不一致，那么以描绘的结构为准。此外，如果一种结构或一种结构的一部分的立体化学未用例如粗体或虚线指示，那么所述结构或所述结构的部分应解释为涵盖其所有立体异构体。然而，在一些情形中，如果存在超过一个手性中心，那么可将结构和名称表示为单一对映异构体以帮助描述相关的立体化学。有机合成领域的技术人员将了解是否由用于制备化合物的方法将这些化合物制备为单一对映异构体形式。
“医药学上可接受的盐”是本发明化合物的医药学上可接受的有机或无机酸或碱盐。代表性医药学上可接受的盐包括例如碱金属盐、碱土金属盐、铵盐、水溶性和水不溶性盐，例如乙酸盐、氨芪磺酸盐(amsonate)(4,4-二氨基芪-2,2-二磺酸盐)、苯磺酸盐、苯甲酸盐、碳酸氢盐、硫酸氢盐、酒石酸氢盐、硼酸盐、溴化物、丁酸盐、钙盐、依地酸钙(calciumedetate)、樟脑磺酸盐、碳酸盐、氯化物、柠檬酸盐、克拉维酸盐(clavulariate)、二盐酸盐、依地酸盐、乙二磺酸盐、依托酸盐(estolate)、乙磺酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、葡糖酸盐、谷氨酸盐、对α-羟乙酰氨基苯砷酸盐(glycollylarsanilate)、六氟磷酸盐、己基间苯二酚盐(hexylresorcinate)、海巴明盐(hydrabamine)、氢溴酸盐、盐酸盐、羟基萘甲酸盐、碘化物、异硫代羟酸盐(isothionate)、乳酸盐、乳糖酸盐、月桂酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐、甲基溴化物、甲基硝酸盐、甲基硫酸盐、粘酸盐、萘磺酸盐、硝酸盐、N-甲基葡糖胺铵盐、3-羟基-2-萘甲酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐(1,1-亚甲基-双-2-羟基-3-萘甲酸盐，恩波酸盐(einbonate))、泛酸盐、磷酸盐/二磷酸盐、苦味酸盐、聚半乳糖醛酸盐、丙酸盐、对甲苯磺酸盐、水杨酸盐、硬脂酸盐、碱式乙酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、磺基水杨酸盐、suramate、鞣酸盐、酒石酸盐、茶氯酸盐(teoclate)、甲苯磺酸盐、三乙碘化物(triethiodide)和戊酸盐。医药学上可接受的盐可在其结构中具有超过一个带电荷的原子。在这种情形中，医药学上可接受的盐可具有多个平衡离子。因此，医药学上可接受的盐可具有一个或一个以上带电荷的原子和/或一个或一个以上平衡离子。
术语“治疗”是指改善或根治疾病或与疾病有关的症状。在某些实施例中，这些术语是指通过对患有此类疾病的患者投予一种或一种以上预防剂或治疗剂来使所述疾病的扩散或恶化减到最低。
术语“预防”是指通过投予预防剂或治疗剂来预防患者的疾病的发作、复发或扩散。
术语“有效量”是指足以提供治疗或预防益处以治疗或预防疾病或者使与疾病有关的症状延缓或减到最少的本发明化合物(例如式I或式II化合物)或其它活性成分的量。此外，关于本发明化合物的治疗有效量意思指，单独或与其它疗法组合以提供治疗益处从而治疗或预防疾病的治疗剂的量。结合本发明化合物使用的这一术语可涵盖改进总体疗法、减少或避免疾病症状或成因，或增强另一治疗剂的治疗功效或与另一治疗剂协同作用的量。
术语“调节”和类似术语是指式I或式II化合物增加或降低例如精氨酸酶I或精氨酸酶II的功能或活性的能力。呈各种形式的“调节”打算涵盖针对精氨酸酶相关活性的抑制作用、拮抗作用、部分拮抗作用、活化作用、激动作用和/或部分激动作用。精氨酸酶抑制剂是例如结合于精氨酸酶，部分或完全阻断对精氨酸酶的刺激作用，降低、防止、延缓精氨酸酶活化，使精氨酸酶失活，使精氨酸酶不敏感化，或下调精氨酸酶信号转导的化合物。化合物调节精氨酸酶活性的能力可在酶分析或基于细胞的分析中得到证实。
“患者”包括动物，例如人类、母牛、马、绵羊、小羊、猪、鸡、火鸡、鹌鹑、猫、狗、小鼠、大鼠、兔或豚鼠。动物可为哺乳动物，例如非灵长类动物和灵长类动物(例如猴子和人类)。在一个实施例中，患者是人类，例如婴儿、儿童、青少年或成人。
术语“前药”是药物的前体，其为在投予患者后必须通过代谢过程而经历化学转化，之后变成活性药理药剂的化合物。根据式I和II的化合物的示范性前药是酯、蒎烯、二氧杂硼戊环和酰胺。
式I化合物
如上文所述，本发明涉及根据式I的化合物。
对于式I化合物，D选自由以下组成的群组：直链或分支链(C1-C6)亚烷基、直链或分支链(C2-C8)亚烯基、直链或分支链(C2-C8)亚炔基、(C3-C14)亚芳基和(C3-C14)亚环烷基。在一些实施例中，D中的一个或一个以上–CH2-基团任选且独立地经选自由–O-、-NR'-、-S-、-SO-、-SO2-和-CR'R”-组成的群组的部分置换。举例来说，D可为具有式-L1-L2-CH2-CH2-、–CH2-L1-L2-CH2-、-CH2-CH2-L1-L2-、-L1-CH2-CH2-L2-、-L1-CH2-L2-CH2-或-L1-CH2-CH2-L2-的含4个原子的连接基。变量L1和L2独立地选自由以下组成的群组：O、NR'、S、SO、SO2和CR'R”，其中R'和R”如上文所定义。
在其它实施例中，D含有(C3-C14)亚环烷基环，其两个环成员为D中的两个相邻–CH2-基团，各自移除一个氢原子。D的具体实例为亚正丁基，其中第二和第三碳原子是环丙基的一部分，如以下部分中所示：
变量D宜为具有3到5个原子的连接基。特别适宜的实施例提供如本文所述的呈具有4个原子的连接基形式的D。
在一个实施例中，例如，本发明提供式I化合物，其中D为亚丁基，R1为-OH，R3、R4和R5各自为氢并且R2选自由以下组成的群组：(C1-C6)烷基、(C3-C14)芳基、(C3-C14)杂芳基、(C3-C14)杂环烷基、(C3-C14)杂芳基-(C1-C6)亚烷基-、(C3-C14)杂环烷基-(C1-C6)亚烷基-、(C3-C14)芳基-(C1-C6)亚烷基-和-(CH2)n-(X)u-(CH2)m-(Y)v-Rf。
在另一实施例中，R2为-(CH2)n-(X)u-(CH2)m-(Y)v-Rf。X和Y各自独立地为–NH，下标m和n分别为1和2，并且u和v都为1。
或者，R2可为任选经羟基或-NRdRe取代的烷基，其中Rd和Re各自独立地选自由以下组成的群组：H、直链或分支链(C1-C6)烷基、(C1-C6)氨基烷基、任选取代的(C3-C14)芳基(C1-C6)亚烷基-、任选取代的(C3-C14)芳基和任选取代的(C3-C6)环烷基。举例来说，当R2为氨基烷基时，Rd和Re各自可为(C1-C6)氨基烷基。
在另一实施例中，R2可为(C3-C14)杂环烷基-(C1-C6)亚烷基-，例如(C3-C6)杂环烷基-(C1-C2)亚烷基-。适合的(C3-C6)杂环烷基包括氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、四氢-2H-吡喃和硫吗啉基。(C3-C6)杂环烷基可任选经一个或一个以上选自由-(C1-C6)烷氧基、-(C1-C6)烷基和-OH组成的群组的成员取代。在一个实施例中，(C3-C6)杂环烷基可为哌啶基或吡咯烷基，并且-(C1-C6)亚烷基-可为亚甲基或亚乙基。
对于式I化合物，当R2为(C3-C14)杂芳基-(C1-C6)亚烷基-时，R2可为(C3-C6)杂芳基-(C1-C6)亚烷基-基团。示范性(C3-C6)杂芳基包括(但不限于)吡啶基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、咪唑、1,2,3-三唑、1,2,4-三唑、四唑、嘧啶、咪唑并[1,2-a]吡啶、噁唑、异噁唑和呋喃。在本发明一个实施例中，-(C1-C6)亚烷基-可为亚甲基或亚乙基。
在一些实施例中，R3和R4连同其所结合的硼原子一起形成5元或6元环，所述5元或6元环是完全或部分饱和的，并且任选含有1到3个选自O、S和N的额外杂原子环成员。所述环任选经一个或一个以上如本文关于R'和R”所定义的取代基取代。
由于R3和R4由二醇形成环状酯，故此类环状结构可用作本发明化合物的前药形式。就这一点来说，有用的二醇是频那醇，并且另一种二醇是蒎烷二醇。其它二醇包括(但不限于)新戊二醇、1,2-乙二醇、1,2-丙二醇、1,3-丙二醇、2,3-丁二醇、1,2-二异丙基乙二醇和5,6-癸二醇。
也涵盖式I中的硼酸部分经糖酯化的化合物。此类化合物也可用作前药。适合的糖包括(但不限于)单糖和二糖，例如选自由葡萄糖、甘露糖醇和山梨糖醇组成的群组的糖。
在其它实施例中，R2为(C3-C14)环烷基，任选经1到3个如上文所定义的取代基取代。示范性环烷基为环己基和环戊基。或者，R2为(C3-C14)杂环烷基，例如5元或6元杂环烷基。这些实施例的式I化合物的实例包括下表中者，其中R'如上文所定义，R具有与R'相同的含义，并且W是如上文所定义的杂原子：
应了解，式I中排除2-氨基-4-二羟硼基-2-甲基丁酸。
示范性式I化合物包括(但不限于)下表1中提到的化合物。尽管利用了立体化学来描绘一些示范性化合物，但应了解，本发明包括这些化合物的所有可能的立体异构体，例如非对映异构体。
表1
式II化合物
本发明也涉及根据式II的化合物。
对于遵照式II的化合物，D选自由以下组成的群组：直链或分支链(C3-C5)亚烷基、直链或分支链(C2-C8)亚烯基、直链或分支链(C2-C8)亚炔基、(C3-C14)亚芳基和(C3-C14)亚环烷基。在一个实施例中，D中的一个或一个以上–CH2-基团任选且独立地经选自由O、NR'、S、SO、SO2和CR'R”组成的群组的部分置换。然而，D中两个相邻的–CH2-基团不同时经O、NR'、S、SO或SO2置换。
根据一个实施例，D遵照式-L1-L2-CH2-CH2-、-CH2-L1-L2-CH2-、-CH2-CH2-L1-L2-、-L1-CH2-CH2-L2-、-L1-CH2-L2-CH2-或-CH2-L1-CH2-L2-。尽管变量L1和L2各自独立地选自由O、NR'、S、SO、SO2和CR'R”组成的群组，但当-L1与-L2彼此相邻时，L1和L2不同时为O、NR'、S、SO或SO2基团。
对于某些式II化合物来说，D中任两个相邻的-CH2-基团任选表示(C3-C14)亚环烷基的两个成员。因此，例如，当D为亚丙基时，C2和C3原子可各自省略一个氢原子，由此偶合–CH2-基团形成如以下部分所说明的环丙基环部分：
变量D宜为具有3到5个原子的连接基。特别适宜的实施例提供如本文所述的呈具有4个原子的连接基形式的D。
对于式II化合物来说，取代基X选自由(C3-C14)亚环烷基和(C3-C14)亚杂环烷基组成的群组。变量M选自由以下组成的群组：键结、(C1-C6)亚烷基-、-O-、-C(O)-、-C(S)-、-C(O)NH-、-C(S)NH-、-S-、-S(O)-、-S(O)2-、-NR'-和–C＝NR11-。
式II中的取代基Y选自由以下组成的群组：H、(C1-C14)烷基、-NR'R”、羟基(C1-C6)亚烷基、(C3-C14)环烷基、(C3-C14)环烷基-(C1-C6)亚烷基、(C3-C14)芳基、(C3-C14)芳基-(C1-C6)亚烷基、(C3-C14)杂环烷基、(C3-C14)杂环烷基-(C1-C6)亚烷基、(C3-C14)杂芳基、(C3-C14)杂芳基-(C1-C6)亚烷基、(C3-C14)杂芳基-(C3-C6)亚杂环烷基-、(C3-C14)芳基-(C3-C14)亚杂环烷基-、(C3-C14)芳基-(C1-C6)烷基-(C3-C14)亚杂环烷基-、(C3-C14)杂芳基-(C1-C6)烷基-(C3-C14)亚杂环烷基-和(C3-C14)杂环烷基-(C1-C6)烷基-(C3-C14)亚杂环烷基-。
对于某些式II化合物来说，D为亚丁基，X为(C3-C14)亚杂环烷基，M选自由以下组成的群组：键结、(C1-C6)亚烷基-、-O-、-C(O)-、-C(S)-、-C(O)NH-、-C(S)NH-、-S-、-S(O)-、-S(O)2-、-NR'-和–C＝NR11-，并且Y选自由以下组成的群组：(C3-C14)杂芳基、(C3-C14)环烷基、(C3-C14)芳基、(C3-C14)芳基-(C1-C6)亚烷基和(C3-C14)杂芳基-(C1-C6)亚烷基。然而，根据另一实施例，M选自由以下组成的群组：–C(O)-、-C(S)-、-C(O)NH-、-C(S)NH-、-S(O)2-和-NR'-。
对于某些式II化合物来说，当M为–NR'-时，取代基R'可为亚甲基或亚乙基。或者，R'为-C(O)-(C1-C8)亚烷基，例如-C(O)-亚甲基。
示范性式II化合物包括(但不限于)下表1-A中说明的化合物。尽管利用了立体化学来描绘一些示范性化合物，但应了解，本发明包括这些化合物的所有可能的立体异构体，例如非对映异构体。
表1-A
医药组合物和剂量
本发明部分针对式I或式II化合物的医药调配物，以及本发明调配物用于治疗与精氨酸酶活性不平衡或精氨酸酶的不当功能有关的疾病病况的用途。在一个方面中，本发明提供组合疗法，其中投予需要疗法的患者或个体式I或式II化合物的调配物与一种或一种以上具有类似或不同生物活性的其它化合物的组合。
根据组合疗法常规的一个方面，可对有需要的患者或个体分别投予治疗有效剂量的式I或式II化合物和治疗有效剂量的组合药物。所属领域技术人员将认识到，这两个剂量可在彼此间隔数小时或数天内投予，或者这两个剂量可一起投予。
可投予根据本发明的组合疗法的示范性疾病病况包括下文更具体地描述的任何病况。这些病况包括(但不限于)心脏病、高血压、性功能障碍、胃部病症、自体免疫病症、寄生虫感染、肺部病症、平滑肌松弛障碍和溶血病症。
可与式I或式II化合物组合使用的适合化合物包括(但不限于)：
勃起功能障碍：西地那非(sildenafil)、伐地那非(vardenafil)、他达那非(tadalafil)和前列地尔(alprostadil)。
肺高压/高血压：依前列醇(epoprostenol)、伊洛前列素(iloprost)、波生坦(bosentan)、氨氯地平(amlodipine)、地尔硫卓(diltiazem)、硝苯地平(nifedipine)、安立生坦(ambrisentan)和华法令(warfarin)。
哮喘：氟替卡松(fluticasone)、布地奈德(budesonide)、莫米松(mometasone)、氟尼缩松(flunisolide)、倍氯米松(beclomethasone)、孟鲁司特(montelukast)、扎鲁司特(zafirlukast)、齐留通(zileuton)、沙美特罗(salmeterol)、福莫特罗(formoterol)、茶碱(theophylline)、沙丁胺醇(albuterol)、左旋沙丁胺醇(levalbuterol)、吡布特罗(pirbuterol)、异丙托品(ipratropium)、泼尼松(prednisone)、甲泼尼龙(methylprednisolone)、奥马珠单抗(omalizumab)、皮质类固醇(corticosteroid)和色甘酸(cromolyn)。
动脉粥样硬化：阿托伐他汀(atorvastatin)、洛伐他汀(lovastatin)、辛伐他汀(simvastatin)、普伐他汀(pravastatin)、氟伐他汀(fluvastatin)、罗苏伐他汀(rosuvastatin)、吉非贝齐(gemfibrozil)、非诺贝特(fenofibrate)、烟酸(nicotinicacid)、氯吡格雷(clopidogrel)。
本发明也提供一种医药组合物，其包含一种或一种以上根据式I或式II的化合物或其医药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、互变异构体或前药与医药学上可接受的载剂的混合物。在一些实施例中，根据公认的医药混配实务，所述组合物进一步含有一种或一种以上其它治疗剂、医药学上可接受的赋形剂、稀释剂、佐剂、稳定剂、乳化剂、防腐剂、着色剂、缓冲剂或调味剂(flavor imparting agent)。
在一个实施例中，医药组合物包含选自表1或表1-A中所说明的化合物的化合物，或其医药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、互变异构体或前药，和医药学上可接受的载剂。
根据本发明的适合口服的组合物包括(但不限于)片剂、糖锭、锭剂、水性或油性悬浮液、可分散的散剂或颗粒剂、乳液、硬或软胶囊、糖浆或酏剂。
本发明的范围内涵盖适于单一单位剂量的医药组合物，其包含本发明的化合物、其医药学上可接受的立体异构体、前药、盐、溶剂化物、水合物或互变异构体，和医药学上可接受的载剂。
适于口服使用的本发明组合物可根据医药组合物制造领域已知的任何方法制备。举例来说，本发明化合物的液体调配物可含有一种或一种以上选自由甜味剂、调味剂、着色剂和防腐剂组成的群组的试剂，以便提供医药学上优良且适口的精氨酸酶抑制剂制剂。
对于式I或式II化合物的片剂组合物，使用活性成分与无毒医药学上可接受的赋形剂的混合物来制造片剂。所述赋形剂的实例包括(但不限于)惰性稀释剂，例如碳酸钙、碳酸钠、乳糖、磷酸钙或磷酸钠；造粒剂和崩解剂，例如玉米淀粉或海藻酸；粘合剂，例如淀粉、明胶或阿拉伯胶；和润滑剂，例如硬脂酸镁、硬脂酸或滑石。片剂可以是无包衣的，或者其可通过已知包覆技术进行包覆，从而延缓在胃肠道中的崩解和吸收，并由此在所需的时间段内提供持续治疗作用。举例来说，可以使用延缓时间的材料，例如单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。
供口服使用的调配物也可以呈硬明胶胶囊形式，其中将活性成分与例如碳酸钙、磷酸钙或高岭土等惰性固体稀释剂混合；或者呈软明胶胶囊形式，其中将活性成分与水或者例如花生油、液体石蜡或橄榄油等油介质混合。
对于水性悬浮液来说，将本发明化合物与适于维持稳定悬浮液的赋形剂混合。所述赋形剂的实例包括(但不限于)羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、海藻酸钠、聚乙烯吡咯烷酮、黄芪胶和阿拉伯胶。
口服悬浮液也可含有分散剂或润湿剂，例如天然存在的磷脂，例如卵磷脂，或环氧烷与脂肪酸的缩合产物(例如聚氧乙烯硬脂酸酯)，或环氧乙烷与长链脂肪醇的缩合产物(例如十七亚乙基氧基十六醇)，或环氧乙烷与由脂肪酸和己糖醇得到的偏酯的缩合产物(例如聚氧化乙烯山梨糖醇单油酸酯)，或环氧乙烷与由脂肪酸和己糖醇酐得到的偏酯的缩合产物(例如聚乙烯脱水山梨糖醇单油酸酯)。水性悬浮液也可含有一种或一种以上防腐剂，例如对羟基苯甲酸乙酯或对羟基苯甲酸正丙酯；一种或一种以上着色剂；一种或一种以上调味剂；和一种或一种以上甜味剂，例如蔗糖或糖精。
油性悬浮液可通过将活性成分悬浮于植物油(例如花生油、橄榄油、芝麻油或椰子油)或矿物油(例如液体石蜡)中来调配。油性悬浮液可含有增稠剂，例如蜂蜡、硬石蜡或鲸蜡醇。
可以添加甜味剂(例如上文所述者)和调味剂以提供适口的口服制剂。可通过添加例如抗坏血酸等抗氧化剂使这些组合物防腐。
适于通过添加水而制备水性悬浮液的可分散的散剂和颗粒剂可提供活性成分与分散剂或润湿剂、悬浮剂和一种或一种以上防腐剂的混合物。适合的分散剂或润湿剂和悬浮剂已通过上文提到者进行了例证。也可能存在其它赋形剂，例如甜味剂、调味剂和着色剂。
本发明的医药组合物也可呈水包油乳液的形式。油相可以是植物油，例如橄榄油或花生油；或矿物油，例如液体石蜡，或这些物质的混合物。适合的乳化剂可以是天然存在的胶，例如阿拉伯胶或黄芪胶；天然存在的磷脂，例如大豆、卵磷脂，以及由脂肪酸和己糖醇酐得到的酯或偏酯，例如脱水山梨糖醇单油酸酯，和所述偏酯与环氧乙烷的缩合产物，例如聚氧乙烯脱水山梨糖醇单油酸酯。乳液也可以含有甜味剂和调味剂。
糖浆和酏剂可以用例如甘油、丙二醇、山梨糖醇或蔗糖等甜味剂调配。这些调配物还可含有缓和剂、防腐剂以及调味剂和着色剂。医药组合物可以是无菌可注射的水性悬浮液或油性悬浮液的形式。此悬浮液可根据已知技术使用上文已提到的那些合适的分散剂或湿润剂及悬浮剂来调配。无菌可注射制剂也可以是于无毒不经肠可接受的稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液或悬浮液，例如于1,3-丁醇中的溶液。可采用的可接受的媒剂和溶剂为水、林格氏溶液(Ringer's solution)和等渗氯化钠溶液。此外，常规地采用无菌不挥发性油作为溶剂或悬浮介质。为此，可使用任何温和的不挥发性油，包括合成单酸甘油酯或二酸甘油酯。此外，脂肪酸(例如油酸)可用于制备可注射物。
遵照式I或式II的化合物也可以供直肠投药的栓剂形式投予。可以通过将药物与适合的无刺激性赋形剂混合，来制备这些组合物，所述赋形剂在常温下为固体，但在直肠温度下为液体，并因此将在直肠中熔融而释放出药物。这些材料的实例是可可脂和聚乙二醇。
供不经肠投予的组合物是于无菌介质中投予。取决于所用媒剂以及药物在调配物中的浓度，不经肠调配物可为含有溶解的药物的悬浮液或溶液。也可将例如局部麻醉剂、防腐剂和缓冲剂等佐剂添加到不经肠组合物中。
化合物的合成
本发明的化合物是使用下文所述的许多通用方法制备，并且可适于合成未具体描述的化合物。适宜合成方法的选择是通过所需式I或式II化合物的选择以及中间物和终产物中存在的官能团的性质来指引。因此，取决于所需特定官能团和所用保护基，有必要在合成期间进行选择性保护/脱保护方案。所述保护基的描述以及如何引入和移除保护基见于：有机合成中的保护基(Protective Groups in Organic Synthesis),第3版,T.W.格林(T.W.Green)和P.G.M.伍兹(P.G.M.Wuts),约翰威立公司(John Wiley and Sons),纽约(New York),1999。用于制备制备式I或式II化合物的通用合成方法的说明是下文所述者。
I.合成式I化合物
如下文所述的方案A中所说明，可便利地使用甘氨酸二苯甲酮亚胺酯来制备式I化合物，其中D-B(OR3)(OR4)为–CH2-L1-L2-CH2-B(OH)2，并且R2是经取代烷基。在此方法中，起始氨基酸亚胺A-1可购买，或通过使二苯甲酮亚胺与所需的氨基酸酯反应来制备(奥丹尼尔M.J.(O'Donnell,M.J.),奥尔德里奇化学公司杂志(Aldrichimica Acta),2001,34,3-15)。使用典型的烷基化条件，例如双(三甲基硅烷基)氨基锂、LDA或氢化钠，在例如THF等极性非质子性溶剂中，用亲电子试剂A-2使方案A中的A-1烷基化，得到单烷基化产物A-3。可使用类似的反应条件引入第二取代基，以得到中间物A-4。随后水解，得到目标化合物A-5(方案A)。
在一些情形中，可能优选或有必要在多步骤方法中构造一个或两个氨基酸取代基。其实例提供于方案A中，其中在上文所述的烷基化条件下，在第二烷基化步骤中使用烯丙基溴，得到中间物A-6。在移除二苯甲酮且随后保护胺后，将末端烯烃氧化，得到醛中间物A-8。
可利用高度通用的醛基来制备多种目标化合物。一种常规应用是在还原胺化反应中，如方案A中所示。此处，用所需的胺和还原剂(如氰基硼氢化钠)处理，得到胺中间物A-9，水解后，得到目标化合物A-10。取决于所需的特定官能团，可能需要某些保护基。
方案A
或者，在经保护硼酸亲电子试剂不可得或与合成方案不相容的情况下，可通过用末端烯烃代替亲电子试剂A-2，随后引入硼，在接下来稍后的步骤中，使用硼氢化化学烷基化，来合成式I化合物。
对于式I化合物的对映选择性合成，可使用多种不同的合成方法。因此，在一个实施例中，使用光学纯的酮来代替非手性二苯甲酮。参见例如塔布彻(Tabcheh)等人,四面体(Tetrahedron)1991,47,4611-4618，和贝罗肯(Belokon)等人,应用化学,国际版(AngewChem,Int Ed)2001,40,1948-1951。
或者，可在第二烷基化反应中，通过使用手性催化剂来实现不对称性的诱导。参见例如黄(Ooi)等人,四面体通讯(Tet Lett.)2004,45,1675-1678；大岛(Ohshima)等人,美国化学协会杂志(J.Am.Chem.Soc.)2009,125,11206-11207；和贝罗肯等人,四面体,2001,57,2491-2498。
在另一实施例中，可通过使用光学纯噁嗪酮引入对映选择性，来合成式I化合物(达斯立K.A.(Dastlik,K.A.)；萨德梅尔U.(Sundermeier,U.),约翰D.M.(Johns,D.M.)；陈Y.(Chen,Y.)；威廉姆斯R.M.(Williams,R.M.),合成有机化学快报(Synlett)2005,4,693-696)。此方法于方案B中予以说明。
方案B
此处，使用光学活性噁嗪酮B-4以立体选择性方式引导连续烷基化，从而形成中间物B-7。这些烷基化反应可在所用亲电子试剂(例如B-2、B-3和B-6)特异性反应条件下进行。合成B-5和B-7的替代性方法包括醛醇反应，其涉及醛与噁嗪酮偶合，随后还原所得双键。本发明化合物是通过降解双取代的噁嗪酮，随后移除保护基来获得。因此，经由氢化或使用碱金属/氨还原来裂解噁嗪酮杂环，随后用酸水溶液处理中间物B-8，得到目标双取代氨基酸B-9。
如果在终产物亲电子试剂中需要丁烷硼酸作为一个取代基，那么可使用B-2或B-3作为烷基化剂。可由B-1通过在THF中用频那醇处理，来容易地制备B-2。如果需要碘-中间物B-3，那么其可由相应的溴化物，经由在丙酮中用碘化钠处理来制备。
或者，合成需要在烷基化步骤之后对一个或两个取代基进行修饰。当终产物中所需的官能团与烷基化反应条件不相容时，或如果因反应性有限而不能便利地引入所需的取代基作为亲电子试剂，那么可能需要此操作。实例在方案C中予以说明，其中使用烯丙基碘作为高效的烷基化剂，接着在噁嗪酮环系统裂解后进一步进行修饰。在本实例中，在氨中用锂处理烯丙基中间物C-1，以移除噁嗪酮环。所得酸可以酯C-3形式进行保护，且随后用臭氧处理，以得到相应的醛。
醛(C-4)是一种非常灵活的官能团，并且可用于许多类型的反应中，以制备多种不同的类似物。作为一个实例，其可用于还原胺化反应中，以制备具有胺取代基R1和R2的化合物，如在中间物C-5中。在脱除酯、氨基和硼酸部分的保护后，可获得最终目标化合物(C-6)。
方案C
在另一实施例中，一些式I化合物的合成采用了乌吉反应(Ugi reaction)(杜恩林A.(Doemling,A.),化学评论(Chem.Rev.)2006,106,17-89。此方法于方案D中予以说明。在乌吉反应中，用例如异氰酸叔丁基酯等异氰酸酯和如乙酸铵等胺源处理酮或醛(D-3)，直接得到氨基酸衍生物，其中羧酸和胺分别被保护成叔丁酰胺和乙酰胺的形式。在这一反应中，取决于所需的胺和所需的羧酸保护基，可使用不同的异氰酸酯和胺源。如果需要光学活性产物，那么可使用手性光学纯异氰酸酯和/或胺源。使用这些试剂的反应可为对映选择性的，或至少提供产物的非对映异构体混合物，所述非对映异构体混合物可容易地分离。
方案D
关键中间物D-3的合成可使用多种方法完成。一种极为常用的方法利用了羧酸D-1。在此方法中，使羧酸活化，并使其与甲氧基甲胺偶合，以形成韦恩雷伯酰胺(Weinrebamide)D-2。此可使用例如EDC、DCC或PyBOP等多种偶合试剂完成，或直接由D-1的酰氯完成。韦恩雷伯酰胺可通过与适宜的格利雅试剂(Grignard reagent)反应而转化成所需的酮，从而得到中间物D-3。
在乌吉反应完成后，可用例如频那醇硼烷等硼烷源处理末端烯烃，来引入硼酸部分。最后脱除中间物D-5的保护基，得到目标化合物D-6。
在α位具有氨基亚甲基取代基的许多实例可便利地使用方案E中说明的方法制备。此处，使用氨基丙二酸酯起始物质，例如E-1(其中胺被保护为氨基甲酸苯甲酯(Cbz)的形式，并且酸被保护成酯的形式)，经由用4-溴丁烯进行烷基化来产生双取代的氨基酸衍生物E-2。在乙醇中用氢氧化钾选择性水解二酯，得到酸酯E-3。使用氯甲酸酯和硼氢化钠选择性还原羧酸，得到醇E-4，其可使用二甲氧基丙烷和有机酸(例如甲苯磺酸)进行保护。用频那醇硼烷使E-5硼氢化，得到E-6，脱除保护基后，得到醇E-7。将所述醇氧化，得到中间物醛E-8，在还原胺化并最终脱除保护基之后，得到目标化合物E-11。
方案E
作为使用氨基甲酸苯甲酯作为胺保护基的方案E中方法的替代，也可使用相应的经氨基甲酸叔丁基酯(Boc)保护的氨基丙二酸酯衍生物。此处，如方案F中所说明，用4-溴丁烯使2-(叔丁氧基羰基氨基)丙二酸二乙酯F-1烷基化，得到双取代的丙二酸酯中间物F-2。使用碱性条件，例如在乙醇中的氢氧化钾，选择性水解二酯，得到单酸F-3。使用氯甲酸乙酯和硼氢化钠还原羧酸，得到伯醇，可便利地使用标准条件(例如乙酸酐和DMAP)将其保护为乙酸酯的形式。必要时，可以使用许多替代性保护基。简单地引入这一基团，以促进随后的硼氢化反应，以提供中间物F-6。一旦硼氢化反应完成，就可以移除乙酸酯，并且可将所得醇(F-7)氧化成相应的醛(F-8)，且用于利用胺F-9进行的还原胺化反应中，得到经保护的产物F-10。接着使用酸水溶液脱除保护基，得到所需产物F-11。除还原胺化反应外，还可将中间物醛F-8用于多种反应中，以产生所需取代基。使用醛形成杂环或其它产物是有机合成领域技术人员众所周知的。
方案F
所属领域技术人员将认识到，起始物质和反应条件可变化，反应次序可改变，且可采用其它步骤来制造本发明所涵盖的化合物，如以下实例中所述。在一些情形中，可能有必要保护某些反应性官能团以实现上述某些转化。一般说来，有机合成领域技术人员将显而易见对于所述保护基的需求以及连接和移除所述基团的必要条件。
以下实例将进一步说明本发明式I化合物的制备，这些实例不应视为将本发明的范围或精神局限于其中描述的具体程序和化合物。
示范性式I化合物
实例1：制备(R)-2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-((S)-3-(羟甲基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)乙基)己酸二盐酸盐
步骤1：2-(4-溴丁基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环
在小心地升温达到熔化后，在氮气流下将4-溴-1-丁基硼酸儿茶酚酯(112.2g，0.44mol，1.0当量)添加到3颈500mL圆底烧瓶中，用新蒸馏的THF(150mL，3.0M)稀释，并用整份频那醇(104.0g，0.88mol，2当量)处理。在氮气氛围下搅拌16小时后，浓缩所得溶液。粗产物用庚烷(500mL)稀释并在冰水浴中冷却。1小时后，通过过滤移除沉淀的儿茶酚并通过用庚烷润湿的硅胶(500g)短垫过滤残留溶液。用含5％乙酸乙酯的庚烷溶液(700mL)和含10％乙酸乙酯的庚烷溶液(700mL)洗脱后，浓缩滤液，得到呈无色油状的2-(4-溴丁基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环(112.7g，97％)。1H NMR(CDCl3,300MHz)δ3.38(t,J＝6.6Hz,2H),1.90-1.78(m,2H),1.58-1.44(m,2H),1.26(s,12H),0.78(t,J＝7.5Hz,2H)；C10H20BBrO2的ESI-LCMS m/z计算值：预期值262.1；实验值263.1(M+H)+。
步骤2：2-(4-碘丁基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环
在氮气氛围下将2-(4-溴丁基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环(46.2g，0.176mol，1.0当量)和碘化钠(52.8g，0.35mol，2当量)于丙酮(176mL，1.0M)中的溶液加热到50℃，保持4小时。冷却到室温后，减压浓缩溶液。所得残余物用庚烷(200mL)稀释并通过用庚烷润湿的硅胶(300g)短垫过滤。用含10％乙酸乙酯的庚烷溶液(500mL)洗脱后，浓缩滤液，得到呈无色油状的2-(4-碘丁基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环(53.5g，98％)。1H NMR(CDCl3,300MHz)δ3.18(t,J＝7.2Hz,2H),1.90-1.78(m,2H),1.58-1.44(m,2H),1.24(s,12H),0.79(t,J＝7.5Hz,2H)；C10H20BIO2的ESI-LCMS m/z计算值：预期值310.1；实验值311.1(M+H)+。
步骤3：(3R,5R,6S)-2-氧代-5,6-二苯基-3-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)丁基)吗啉-4-甲酸叔丁基酯
将(2S,3R)-6-氧代-2,3-二苯基吗啉-4-甲酸叔丁基酯(4.69g，13.27mmol)和2-(4-碘丁基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环(d 1.38，5.96mL，8.23g，26.5mmol,2当量)于THF(66mL，0.2M)和HMPA(6.6mL)中的溶液冷却到-78℃，并经5分钟逐滴用双(三甲基硅烷基)氨基钠(14.6mL，1.0M，1.1当量)处理，且搅拌1小时。升温到室温且再搅拌2小时后，将溶液冷却到0℃并用0.5N HC(2-3当量)淬灭。所得溶液用庚烷稀释，并依序用水和NaCl饱和水溶液洗涤，经MgSO4干燥，过滤并浓缩。通过MPLC(含1-60％乙酸乙酯的庚烷，历经6CV)纯化，得到呈白色固体状的(3R,5R,6S)-2-氧代-5,6-二苯基-3-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)丁基)吗啉-4-甲酸叔丁基酯(6.66g，94％)；C31H42BNO2的ESI-LCMSm/z计算值：预期值535.3；实验值536.4(M+H)+。
步骤4：(3R,5R,6S)-3-烯丙基-2-氧代-5,6-二苯基-3-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)丁基)吗啉-4-甲酸叔丁基酯
将(3R,5R,6S)-2-氧代-5,6-二苯基-3-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)丁基)吗啉-4-甲酸叔丁基酯(5.00g，9.34mmol)和TMEDA(10mL，65mmol，7当量)于THF(51mL，0.2M)中的溶液冷却到-78℃，并逐滴用烯丙基碘(17mL，187mmol，20当量)和双(三甲基硅烷基)氨基钾(47mL，0.9M的THF溶液，46.7mmol，5当量)处理，并且搅拌30分钟。一旦添加完成，就移除冷却浴并搅拌混合物过夜。一旦TLC确定完成，就用0.5N HCl(5-10当量)淬灭反应混合物，用庚烷稀释并依序用水和NaCl饱和水溶液洗涤，经MgSO4干燥，过滤并浓缩。通过MPLC(含1-60％乙酸乙酯的庚烷，历经6CV)纯化，得到呈无色油状的(3R,5R,6S)-3-烯丙基-2-氧代-5,6-二苯基-3-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)丁基)吗啉-4-甲酸叔丁基酯(5.2g，96％)。Rf 0.55(含30％乙酸乙酯的庚烷)；1H NMR(CDCl3,300MHz)δ7.39-7.14(m,10H),7.10(dd,J1＝5.4Hz,J2＝1.8Hz,1H),6.08(d,J＝5.4Hz,1H),5.95-5.80(m,1H),5.27-5.17(m,2H),3.30-3.15(m,1H),2.89-2.76(m,1H),2.20-2.07(m,2H),1.54(s,9H),1.35-1.21(m,4H),1.78(s,12H),0.46(t,J＝8.4Hz,2H)；C34H46BNO6的ESI-LCMS m/z计算值：预期值575.3；实验值574.3(M+H)+。
步骤5：(R)-2-烯丙基-2-(叔丁氧基羰基氨基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)己酸甲酯
向配备有氮气进口管和干冰冷凝器的三颈RBF中装入(3R,5R,6S)-3-烯丙基-2-氧代-5,6-二苯基-3-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)丁基)吗啉-4-甲酸叔丁基酯(4.60g，8.00mmol)和THF(10mL)。将冷凝器冷却到-78℃并且将烧瓶冷却到-45℃(CO2(s)，CH3CN)后，使氨(80mL)在烧瓶中冷凝。一旦完成，就经10分钟小心添加金属锂(0.55g，80mmol，小片)。再搅拌40分钟后，小心地用NH4Cl(s)淬灭反应混合物，直到溶液变澄清。移除浸浴并使氨蒸发过夜。所得残余物用乙酸乙酯稀释，并依序用0.5N HCl和NaCl饱和水溶液洗涤，经MgSO4干燥，过滤并浓缩。将粗产物溶解于含50％甲醇的甲苯(80mL，0.1M)中，并用TMSCHN2(2.0M的己烷溶液)处理，直到持续呈现浅黄色。当TLC指示反应完成时，用乙酸淬灭过量的TMSCHN2，直到溶液变澄清。浓缩溶液，用乙酸乙酯稀释，并依序用NaHCO3饱和水溶液和NaCl饱和水溶液洗涤，经MgSO4干燥，过滤并浓缩。通过MPLC(含1-60％乙酸乙酯的庚烷，历经6CV)纯化，得到呈无色油状的(R)-2-烯丙基-2-(叔丁氧基羰基氨基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)己酸甲酯(1.9g，58％)。Rf 0.46(含30％乙酸乙酯的庚烷)；1H NMR(CDCl3,300MHz)δ5.70-5.52(m,1H),5.49-5.36(m,1H),5.05(dd,J1＝13.8Hz,J2＝1.2Hz,1H),3.73(s,3H),3.09-2.96(m,1H),2.50(dd,J1＝13.8Hz,J2＝7.8Hz,1H),2.29-2.10(m,1H),1.78-1.65(m,1H),1.43(s,9H),1.42-1.26(m,4H),1.23(s,12H),0.74(t,J＝7.5Hz,2H)；C21H38BNO6的ESI-LCMS m/z计算值：预期值411.3；实验值412.3(M+H)+。
步骤6：(R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-2-(2-氧代乙基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)己酸甲酯
将(R)-2-烯丙基-2-(叔丁氧基羰基氨基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)己酸甲酯(1.90g，4.62mmol)于二氯甲烷(90mL，0.05M)中的溶液冷却到–78℃，并用臭氧处理，直到出现浅蓝灰色。TLC指示不存在起始物质之后，用氮气代替臭氧进口管，并使氮气鼓泡通过溶液，持续20分钟，以移除任何过量的臭氧。整份添加三苯基膦(3.6g，13.8mmol，3当量)，移除冷却浴并搅拌混合物4小时。浓缩溶液并通过MPLC(含1-50％乙酸乙酯的庚烷，历经6CV)纯化，且得到呈无色油状的(R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-2-(2-氧代乙基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)己酸甲酯(1.28g，67％)。Rf 0.55(含30％乙酸乙酯的庚烷)；1H NMR(CDCl3,300MHz)δ9.66(s,1H),5.62(br s,1H),3.75(s,3H),3.60(br d,J＝17.4Hz,1H),2.95(d,J＝17.4Hz,1H),2.30-2.15(m,1H),1.70-1.54(m,1H),1.40(s,9H),1.39-1.24(m,4H),0.74(t,J＝7.8Hz,2H)；C20H36BNO7的ESI-LCMS m/z计算值：预期值413.3；实验值414.3(M+H)+。
步骤7：(R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-2-(2-((S)-3-(羟甲基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)乙基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)己酸甲酯
用三乙酰氧基硼氢化钠(0.19g，0.90mmol，2.5当量)整份处理(R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-2-(2-氧代乙基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)己酸甲酯(0.148g，0.358mmol，1.0当量)和(S)-(1,2,3,4-四氢异喹啉-3-基)甲醇(0.088g，0.54mmol，1.5当量)于1,2-二氯乙烷(0.34mL，0.5M)中的溶液。搅拌1.5小时后，用NaHCO3饱和水溶液(1mL)淬灭反应混合物并且再搅拌5分钟。将所得混合物添加到分液漏斗中，用NaCl饱和水溶液(5mL)稀释并用二氯甲烷(2×10mL)萃取。有机层经MgSO4干燥，过滤并减压浓缩。通过用含5％甲醇的氯仿洗脱的快速柱色谱法纯化，得到呈浅黄色油状的(R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-2-(2-((S)-3-(羟甲基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)乙基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)己酸甲酯(0.187g，93％)。Rf 0.52(含10％甲醇的二氯甲烷)；1H NMR(CDCl3,300MHz)δ7.15-7.08(m,2H),7.07-6.98(m,2H),5.90(s,1H),3.78(d,J＝16.2Hz,1H),3.70(s,3H),3.60-3.47(m,2H),3.04-2.93(m,1H),2.92-2.82(m,1H),2.71-2.60(m,1H),2.56-2.38(m,2H),2.37-2.23(m,1H),2.21-2.10(m,1H),1.77-1.63(m,1H),1.42(s,9H),1.43-1.26(m,3H),1.23(s,12H),1.22-1.16(m,1H),0.99-0.82(m,2H),0.74(t,J＝7.5Hz,2H)；C30H49BN2O7的ESI-LCMS m/z计算值：预期值560.4；实验值561.4(M+H)+。
步骤8：(R)-2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-((S)-3-(羟甲基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)乙基)己酸二盐酸盐
将(R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-2-(2-((S)-3-(羟甲基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)乙基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)己酸甲酯(0.187g，0.334mmol)于6N HCl(5mL)中的溶液加热到轻微回流，保持16小时。冷却到室温后，将反应混合物转移到分液漏斗中，用脱离子水(5mL)稀释并用二氯甲烷(3×5mL)洗涤。水层在液氮中冷冻并冻干，得到呈灰白色泡沫状的(R)-2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-((S)-3-(羟甲基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)乙基)己酸二盐酸盐(0.122g，89％)。1H NMR(D2O,300MHz)δ7.26-7.08(m,4H),3.89-375(m,1H),3.78-3.65(m,1H),3.61-3.50(m,1H),3.41-3.18(m,1H),3.10-3.00(m,1H),2.99-2.75(m,2H),2.35-2.20(m,2H),1.84-1.60(m,2H),1.31-1.16(m,2H),1.15-1.00(m,2H),0.66-0.50(m,2H)；C18H29BN2O5的ESI-LCMS m/z计算值：预期值364.2；实验值365.2(M+H)+。
实例2：制备(R)-2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-((S)-2-(甲氧基甲基)吡咯烷-1-基)乙基)己酸二盐酸盐
按与实例1中所述方式类似的方式制备(R)-2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-((S)-2-(甲氧基甲基)吡咯烷-1-基)乙基)己酸二盐酸盐，但在步骤7中使用(S)-2-(甲氧基甲基)吡咯烷作为胺。1H NMR(D2O,300MHz)δ3.68-3.50(m,3H),3.50-3.39(m,1H),3.38-3.10(m,2H),3.24(s,3H),3.10-2.96(m,1H),2.22-2.10(m,2H),2.10-2.01(m,1H),2.01-1.89(m,1H),1.88-1.62(m,4H),1.35-1.16(m,3H),1.16-1.00(m,1H),0.63(t,J＝7.8Hz,2H)；C14H29BN2O5的ESI-LCMS m/z计算值：预期值316.2；实验值317.2(M+H)+。
实例3：制备(R)-2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-((R)-2-(甲氧基甲基)吡咯烷-1-基)乙基)己酸二盐酸盐
按与实例1中所述方式类似的方式制备(R)-2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-((R)-2-(甲氧基甲基)吡咯烷-1-基)乙基)己酸二盐酸盐，但在步骤7中使用(R)-2-(甲氧基甲基)吡咯烷作为胺。1H NMR(D2O,300MHz)δ3.67-3.35(m,4H),3.23(s,3H),3.08-2.91(m,3H),2.25-1.55(m,8H),1.36-1.16(m,3H),1.16-1.00(m,1H),0.63(br s,2H)；C14H29BN2O5的ESI-LCMSm/z计算值：预期值316.2；实验值317.2(M+H)+。
实例4：制备(R)-2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-(4-羟基哌啶-1-基)乙基)己酸二盐酸盐
按与实例1中所述方式类似的方式制备(R)-2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-(4-羟基哌啶-1-基)乙基)己酸二盐酸盐，但在步骤7中使用哌啶-4-醇作为胺。1H NMR(D2O,300MHz)δ4.05-3.96(m,1H),3.82-3.68(m,1H),3.51-3.49(m,1H),3.33-3.05(m,2H),3.05-2.81(m,2H),2.17-1.98(m,3H),1.87-1.44(m,5H),1.30-1.15(m,3H),1.12-0.99(m,1H),0.62(t,J＝7.8Hz,2H)；C13H27BN2O5的ESI-LCMS m/z计算值：302.2；实验值303.2(M+H)+。
实例5：制备(R)-2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-((S)-3-羟基哌啶-1-基)乙基)己酸二盐酸盐
按与实例1中所述方式类似的方式制备(R)-2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-((S)-3-羟基哌啶-1-基)乙基)己酸二盐酸盐，但在步骤7中使用(S)-哌啶-3-醇作为胺。1H NMR(D2O,300MHz)δ4.16-4.04(m,1H),3.48-3.12(m,4H),3.07-2.90(m,1H),2.88-2.70(m,1H),2.25-2.00(m,2H),2.00-1.80(m,1H),1.80-1.45(m,5H),1.32-1.14(m,3H),1.14-1.00(m,1H),0.63(t,J＝7.8Hz,2H)；C13H27BN2O5的ESI-LCMS m/z计算值：302.2；实验值303.2(M+H)+。
实例6：制备(R)-2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-((3,4-二甲氧基苯乙基)(甲基)氨基)乙基)己酸二盐酸盐
按与实例1中所述方式类似的方式制备(R)-2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-((3,4-二甲氧基苯乙基)(甲基)氨基)乙基)己酸二盐酸盐，但在步骤7中使用2-(3,4-二甲氧基苯基)-N-甲基乙胺作为胺。1H NMR(D2O,300MHz)δ6.83-6.59(m,3H),3.68(s,3H),3.66(s,3H),3.40-2.99(m,4H),2.97-2.79(m,2H),2.75(s,3H),2.20-2.01(m,2H),1.81-1.47(m,2H),1.33-1.08(3H),1.07-0.96(m,1H),0.61(t,J＝6.9Hz,2H)；C19H33BN2O6的ESI-LCMS m/z计算值：396.2；实验值397.2(M+H)+。
实例7：制备(R)-2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-((R)-3-(羟甲基)吡咯烷-1-基)乙基)己酸二盐酸盐
按与实例1中所述方式类似的方式制备(R)-2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-((R)-3-(羟甲基)吡咯烷-1-基)乙基)己酸二盐酸盐，但在步骤7中使用(R)-吡咯烷-3-基甲醇作为胺。1H NMR(D2O,300MHz)δ3.70-3.18(m,5H),3.16-2.88(m,3H),2.11-1.85(m,3H),1.82-1.51(3H),1.30-1.14m,3H),1.11-0.99(m,1H),0.62(t,J＝7.8Hz,2H)；C13H27BN2O5的ESI-LCMS m/z计算值：302.2；实验值303.3(M+1)+。
实例8：制备(R)-2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-(N-硫吗啉基)乙基)己酸二盐酸盐
按与实例1中所述方式类似的方式制备(R)-2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-(N-硫吗啉基)乙基)己酸二盐酸盐，但在步骤7中使用硫吗啉作为胺。1H NMR(D2O,300MHz)δ3.61-3.57(m,2H),3.30-3.17(m,1H),3.16-2.99(m,3H),2.98-2.80(m,2H),2.73-2.60(m,2H),2.29-2.14(m,2H),1.90-1.61(m,2H),1.30-1.15(m,3H),1.12-0.95(m,1H),0.78(t,J＝7.2Hz,2H)；C12H25BN2O4S的ESI-LCMS m/z计算值：304.2；实验值305.2(M+1)+。
实例9：制备(R)-2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-(4-(2-羟乙基)哌啶-1-基)乙基)己酸二盐酸盐
按与实例1中所述方式类似的方式制备(R)-2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-(4-(2-羟乙基)哌啶-1-基)乙基)己酸二盐酸盐，但在步骤7中使用2-(哌啶-4-基)乙醇作为胺。1HNMR(D2O,300MHz)δ3.51-3.30(m,3H),3.30-3.02(m,2H),3.01-2.89(m,1H),2.88-2.60(m,2H),2.20-1.95(m,2H),1.90-1.63(m,6H),1.64-1.40(m,1H),1.40-1.28(m,2H),1.28-1.10(m,3H),1.11-0.93(m,1H),0.61(t,J＝7.5Hz,2H)；C15H31BN2O5的ESI-LCMS m/z计算值：330.2；实验值331.3(M+1)+。
实例10：制备(R)-2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-((S)-2-(羟甲基)吡咯烷-1-基)乙基)己酸
按与实例1中所述方式类似的方式制备(R)-2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-((S)-2-(羟甲基)吡咯烷-1-基)乙基)己酸，但在步骤7中使用(S)-吡咯烷-2-基甲醇作为胺。1H NMR(D2O,400MHz)δ3.85-3.75(m,1H),3.72-3.63(m,1H),3.60-3.45(m,2H),3.34-3.12(m,2H),3.10-3.00(m,1H),2.22-2.07(m,3H),2.10-1.75(m,5H),1.87(s,3H),1.45-1.30(m,3H),1.28-1.10(m,1H),0.72(t,J＝7.5Hz,2H)。ESI+MS：观测值m/z 267.1(M–36+H)+。
实例11：制备(R)-2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-(甲基(苯乙基)氨基)乙基)己酸二盐酸盐
按与实例1中所述方式类似的方式制备(R)-2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-(甲基(苯乙基)氨基)乙基)己酸二盐酸盐，但在步骤7中使用N-甲基-2-苯基乙胺作为胺。1H NMR(D2O,400MHz)δ7.45-7.38(m,2H),7.37-7.31(m,3H),3.51-3.36(m,3H),3.25-3.13(m,1H),3.09(t,J＝7.8Hz,2H),2.92(s,3H),2.26-2.16(m,2H),1.88-1.70(m,2H),1.45-1.33(m,2H),1.26-1.12(m,2H),0.78(t,J＝7.6Hz,2H)。ESI+MS：观测值m/z 319.1(M-18+H)+,301.1(M–36+H)+。
实例12：制备(R)-2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-(((S)-2-羟基-2-(3-羟苯基)乙基)(甲基)氨基)乙基)己酸二盐酸盐
按与实例1中所述方式类似的方式制备(R)-2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-(((S)-2-羟基-2-(3-羟苯基)乙基)(甲基)氨基)乙基)己酸，但在步骤7中使用(S)-3-(1-羟基-2-(甲基氨基)乙基)苯酚作为胺。1H NMR(D2O,400MHz)δ7.33(t,J＝7.8Hz,1H),7.02-6.86(m,3H),5.14-5.08(m,1H),3.52-3.23(m,3H),2.97(s,3H),2.40-2.28(m,1H),2.27-2.15(m,1H),1.87-1.70(m,2H),1.46-1.32(m,3H),1.30-1.15(m,2H),0.78(t,J＝7.6Hz,2H)。ESI+MS：观测值m/z 333.1(M-36+H)+,315.1(M–54+H)+。
实例13：制备(R)-2-氨基-6-二羟硼基-2-[2-哌啶-1-基)-乙基]-己酸二盐酸盐
按与实例1中所述方式类似的方式制备(R)-2-氨基-6-二羟硼基-2-[2-哌啶-1-基)-乙基]-己酸二盐酸盐，但在步骤7中使用哌啶基作为胺。最后一个步骤如下：在95℃下将(R)-2-叔丁氧基羰基氨基-2-(2-哌啶-1-基-乙基)-6-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]-二氧杂硼戊环-2-基)-己酸甲酯(182mg)于6N盐酸(5mL)中的溶液搅拌过夜。冷却到室温后，将反应混合物转移到分液漏斗中，用脱离子水(5mL)稀释并用二氯甲烷(3×)洗涤。水层在液氮中冷冻并冻干，得到呈无色泡沫状的(R)-2-氨基-6-二羟硼基-2-[2-哌啶-1-基)-乙基]-己酸二盐酸盐(72mg，53％)；1H NMR(D2O,300MHz)δ3.34(d,J＝11.5Hz,2H),3.14(m,1H),2.97(m,1H),2.77(t,J＝12Hz,2H),2.19(t,J＝8.5Hz,2H),1.76(m,4H),1.55(m,3H),1.23(m,4H),1.06(m,1H)和0.59(t,J＝7.5Hz,2H)。
实例14：制备(R)-2-氨基-2-[4-二羟硼基-丁基)]-戊-4-烯酸盐酸盐
按与实例1中所述方式类似的方式制备(R)-2-氨基-2-[4-二羟硼基-丁基)]-戊-4-烯酸盐酸盐，但不进行步骤6和7。最后一个步骤如下：在65℃下将(R)-2-叔丁氧基羰基氨基-2-[4-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]-二氧杂硼戊环-2-基)-丁基]-戊-4-烯酸(85mg)于6N盐酸(4mL)中的溶液搅拌过夜。冷却到室温后，将反应混合物转移到分液漏斗中，用脱离子水(5mL)稀释并用二氯甲烷(3×)洗涤。水层在液氮中冷冻并冻干，得到呈无色泡沫状的(R)-2-氨基-2-[4-二羟硼基-丁基)]-戊-4-烯酸盐酸盐(48mg，89％)；1H NMR(D2O,300MHz)δ5.60(m,1H),5.16(m,2H),2.60(m,1H),2.45(m,1H),1.78(m,2H),1.26(m,3H),1.09(m,1H)和0.63(t,J＝7.5Hz,2H)；C9H18BNO4的ESI-LCMS m/z计算值：215.1；实验值216.1(M+1)+。
实例15：制备(S)-2-氨基-6-二羟硼基-2-乙基己酸盐酸盐
步骤1：(3S,5R,6S)-3-乙基-2-氧代-5,6-二苯基-3-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)丁基)吗啉-4-甲酸叔丁基酯
将(3R,5R,6S)-2-氧代-5,6-二苯基-3-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)丁基)吗啉-4-甲酸叔丁基酯(1.00g，1.87mmol)和TMEDA(2mL，13mmol，7当量)于1,2-二甲氧基乙烷(9.4mL，0.2M)中的溶液冷却到-78℃，并逐滴用碘乙烷(3mL，37mmol，20当量)和双(三甲基硅烷基)氨基钾(9.4mL，0.9M的THF溶液，9.4mmol，5当量)处理。在-78℃下再搅拌30分钟后，移除冷却浴并搅拌混合物过夜。通过TLC确定反应未完成，且因此再冷却到-78℃并再用双(三甲基硅烷基)氨基钾(9.4mL，0.9M的THF溶液，9.4mmol，5当量)和碘乙烷(3mL，37mmol，20当量)处理。添加完成后，移除浸浴并搅拌溶液过夜。一旦TLC确定完成，就用0.5N HCl(5-10当量)淬灭反应混合物，用庚烷稀释并依序用水和NaCl饱和水溶液洗涤，经MgSO4干燥，过滤并浓缩。通过MPLC(含1-60％乙酸乙酯的庚烷，历经6CV)纯化，得到呈无色油状的(3S,5R,6S)-3-乙基-2-氧代-5,6-二苯基-3-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)丁基)吗啉-4-甲酸叔丁基酯(0.68g，65％)。Rf 0.40(含30％乙酸乙酯的庚烷)；1H NMR(CDCl3,300MHz)δ7.31-7.15(m,10H),7.08(d,J＝2.4Hz,1H),6.02(d,J＝2.4Hz,1H),2.35-2.22(m,2H),2.22-2.07(m,2H),1.47(s,9H),1.26-1.21(m,4H),1.15(s,12H),1.00(t,J＝7.5Hz,3H),0.85(t,J＝6.8Hz,2H)；C33H46BNO6的ESI-LCMS m/z计算值：563.3；实验值564.3(M+1)+。
步骤2：(S)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-2-乙基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)己酸甲酯
向配备有氮气进口管和干冰冷凝器三颈圆底烧瓶中装入(3S,5R,6S)-3-乙基-2-氧代-5,6-二苯基-3-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)丁基)吗啉-4-甲酸叔丁基酯(0.57g，1.01mmol)和THF(1mL)。将冷凝器冷却到-78℃并将烧瓶冷却到-45℃(CO2(s)，CH3CN)后，使氨(50mL)在烧瓶中冷凝。一旦完成，就经10分钟小心添加金属锂(0.07g，10mmol，小片)。再搅拌1小时后，小心地用NH4Cl(s)淬灭反应混合物，直到溶液变澄清。移除浸浴并使氨蒸发过夜。所得残余物用乙酸乙酯稀释并依序用0.5N HCl和NaCl饱和水溶液洗涤，经MgSO4干燥，过滤并浓缩。将粗产物溶解于含50％甲醇的甲苯(50mL，0.1M)中并用TMSCHN2(2.0M的己烷溶液)处理，直到持续呈现浅黄色。当TLC指示反应完成时，用乙酸淬灭过量的TMSCHN2，直到溶液变澄清。浓缩溶液，用乙酸乙酯稀释并依序用NaHCO3饱和水溶液和NaCl饱和水溶液洗涤，经MgSO4干燥，过滤并浓缩。通过MPLC(含1-60％乙酸乙酯的庚烷，历经4CV)纯化，得到呈无色油状的(S)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-2-乙基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)己酸甲酯(0.283g，71％)。Rf 0.88(含30％乙酸乙酯的庚烷)；C20H38BNO6的ESI-LCMS m/z计算值：399.3；实验值400.3(M+1)+。
步骤3：(S)-2-氨基-6-二羟硼基-2-乙基己酸盐酸盐
将(S)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-2-乙基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)己酸甲酯(0.283g，0.709mmol)于6N HCl(5mL)中的溶液加热到轻微回流，保持16小时。冷却到室温后，将反应混合物转移到分液漏斗中，用脱离子水(5mL)稀释并用二氯甲烷(3×10mL)洗涤。浓缩水层，得到灰白色固体，将其溶解于脱离子水(3mL)中并使其通过C-18埃索特SPE(Isolute SPE)柱(20g)，用含10％甲醇的脱离子水(200mL)洗脱。减压浓缩含产物部分，再溶解于脱离子水(5mL)中，在液氮中冷冻并冻干，得到呈白色泡沫状的(S)-2-氨基-6-二羟硼基-2-乙基己酸盐酸盐(0.096g，67％)。1H NMR(D2O,300MHz)δ(m,4H),1.31-1.17(m,3H),1.13-0.97(m,1H),0.794(t,J＝7.6Hz,3H),0.63(t,J＝7.8Hz,2H)；C8H18BNO4的ESI-LCMS m/z计算值：203.1；实验值204.1(M+1)+。
实例16：制备(R/S)-2-氨基-6-二羟硼基-2-[2-吡咯烷-1-基)-乙基]-己酸盐酸盐
步骤1：2-(二苯基亚甲基氨基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)己酸乙酯
将N-(二苯基亚甲基)甘氨酸乙酯(8.24g，30.8mmol)和2-(4-溴丁基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环(8.92g，33.9mmol)于新蒸馏的THF(77mL，0.4M)中的溶液冷却到-78℃，并用双(三甲基硅烷基)氨基锂(32.3mL，1.0M的THF溶液)处理。一旦添加完成，就使反应物升温到50℃并加热8小时。通过TLC确定完成后，将反应混合物冷却到0℃，用乙酸乙酯稀释并依序用NaHCO3饱和水溶液和NaCl饱和水溶液洗涤，经MgSO4干燥，过滤并浓缩。通过MPLC(含1-15％乙酸乙酯且含0.5％三乙胺的庚烷，历经6CV)迅速纯化，得到呈无色油状的2-(二苯基亚甲基氨基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)己酸乙酯(8.9g，64％)。Rf 0.40(含30％乙酸乙酯的庚烷)。
步骤2：2-烯丙基-2-(二苯基亚甲基氨基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)己酸乙酯
将2-(二苯基亚甲基氨基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)己酸乙酯(2.79g，6.21mmol)于新蒸馏的(THF 15mL，0.4M)中的溶液冷却到-78℃，并用双(三甲基硅烷基)氨基锂(6.8mL，1.0M的THF溶液)处理。搅拌10分钟后，添加烯丙基溴(2.25g，18.6mmol)，使反应物升温到室温并搅拌16小时。通过TLC确定完成后，将反应混合物冷却到0℃，用乙酸乙酯稀释并依序用NaHCO3饱和水溶液和NaCl饱和水溶液洗涤，经MgSO4干燥，过滤并浓缩。通过MPLC(含1-20％乙酸乙酯且含0.5％三乙胺的庚烷，历经6CV)纯化，得到呈无色油状的2-烯丙基-2-(二苯基亚甲基氨基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)己酸乙酯(1.81g，59％)。Rf 0.52(含30％乙酸乙酯的庚烷)；1H NMR(CDCl3,300MHz)δ7.58-7.53(m,2H),7.39-7.22(m,6H),7.16-7.12(m,2H),5.89-5.74(m,1H),5.07(dd,J1＝15.3Hz,J2＝2.1Hz,1H),5.05(dd,J1＝8.7Hz,J2＝2.1Hz,1H),3.70(q,J＝7.5Hz,1H非对映异位),3.69(q,J＝7.2Hz,1H非对映异位),2.70(dd,J1＝7.2Hz,J2＝1.2Hz,2H),1.92-1.83(m,2H),1.44-1.35(m,2H),1.35-1.23(m,2H),1.19(s,12H),1.10(t,J＝7.2Hz,3H),0.78(t,J＝6.6Hz,2H)。
步骤3：2-烯丙基-2-氨基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)己酸乙酯
用1N HCl(3mL)处理2-烯丙基-2-(二苯基亚甲基氨基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)己酸乙酯(0.32g，0.65mmol)于乙醚(3.4mL，0.2M)中的溶液。搅拌16小时后，分离各层且水相用K2CO3饱和水溶液稀释，并用氯仿萃取，得到呈无色油状的2-烯丙基-2-氨基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)己酸乙酯(0.20g，94％)。Rf0.62(含10％甲醇的二氯甲烷)；1H NMR(CDCl3,300MHz)δ5.76-5.60(m,1H),5.18-5.07(m,2H),4.15(q,J＝7.2Hz,2H),2.54(ddt,J1＝13.5Hz,J2＝6.3Hz,J3＝1.2Hz,1H),2.23(dd,J1＝13.5Hz,J2＝8.7Hz,1H),1.8-1.68(m,2H),1.70-1.60(m,1H),1.60-1.46(m,2H),1.46-1.32(m,3H),1.24(s,12H),1.20-1.06(m,1H),0.766(t,J＝7.8Hz,2H)；C17H32BNO4的ESI-LCMS m/z计算值：325.2；实验值326.2(M+H)+。
步骤4：2-烯丙基-2-氨基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)己酸乙酯
用碳酸二叔丁基酯(0.090g，0.414mmol)处理2-烯丙基-2-氨基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)己酸乙酯(0.0897g，0.276mmol)于乙酸乙酯(0.6mL，0.5M)和NaHCO3饱和水溶液(0.6mL)中的溶液，并在室温下搅拌。16小时后，分离各层且水层用乙酸乙酯萃取。合并的有机层用NaCl饱和水溶液洗涤，经MgSO4干燥，过滤并浓缩。通过MPLC(含0-20％乙酸乙酯的庚烷，历经6CV)纯化，得到呈无色油状的2-烯丙基-2-(叔丁氧基羰基氨基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)己酸乙酯(0.096g，82％)。Rf 0.53(含30％乙酸乙酯的庚烷)；C22H40BNO6的ESI-LCMS m/z计算值：425.3；实验值426.3(M+H)+。
步骤5：2-叔丁氧基羰基氨基-2-(2-氧代-乙基)-6-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]-二氧杂硼戊环-2-基)-己酸乙酯
将2-烯丙基-2-(叔丁氧基羰基氨基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)己酸乙酯(650mg，1.53mmol)于二氯甲烷(30mL)中的溶液冷却到–78℃并用臭氧处理，直到出现浅蓝灰色。在TLC指示不存在起始物质后，用氮气代替臭氧进口管并使氮气鼓泡通过溶液，持续20分钟，以移除任何过量的臭氧。整份添加三苯基膦(1.20g，4.59mmol，3当量)，移除冷却浴并搅拌混合物4小时。浓缩溶液并通过MPLC(含0-40％乙酸乙酯的庚烷)纯化，得到呈无色油状的标题化合物(608mg，93％)。Rf 0.25(含30％乙酸乙酯的庚烷)；1H NMR(CDCl3,300MHz):δ9.64(s,CHO,1H),5.60(br,s,NH,1H),4.19(q,J＝7.5Hz,2H),3.56(d,J＝17Hz,1H),2.93(d,J＝17.5Hz,1H),2.20(m,1H),1.62(m,1H),1.38(s,9H),1.28–1.43(m,4H),1.23(t,J＝7Hz,3H),1.21(s,12H)和0.72(t,J＝7.5Hz,2H)。
步骤6：2-叔丁氧基羰基氨基-2-(2-吡咯烷-基-乙基)-6-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]-二氧杂硼戊环-2-基)-己酸乙酯
用三乙酰氧基硼氢化钠(125mg，0.59mmol)整份处理2-叔丁氧基羰基氨基-2-(2-氧代-乙基)-6-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]-二氧杂硼戊环-2-基)-己酸乙酯(100mg，0.23mmol，1.0当量)和吡咯烷(21mg，0.29mmol，1.2当量)于1,2-二氯乙烷(0.5mL)中的溶液。在室温下搅拌过夜后，用NaHCO3饱和水溶液(1mL)淬灭反应混合物并且再搅拌5分钟。将所得混合物添加到分液漏斗中，用NaCl饱和水溶液(5mL)稀释并用二氯甲烷(2×10mL)萃取。有机层经MgSO4干燥，过滤并减压浓缩。通过用含5％甲醇的氯仿洗脱的快速柱色谱法纯化，得到呈浅黄色油状的2-叔丁氧基羰基氨基-2-(2-吡咯烷-基-乙基)-6-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]-二氧杂硼戊环-2-基)-己酸乙酯(92mg，83％)。Rf 0.32(含10％甲醇的二氯甲烷)；1H NMR(CDCl3,300MHz)δ5.67(br,s,NH,1H),4.19(m,2H),2.46-2.82(m,6H),2.18(m,2H),1.88(m,3H),1.76(m,2H),1.42(s,9H),1.26–1.41(m,3H),1.28(t,J＝7.0Hz,3H),1.22(s,12H),1.06(m,1H)和0.73(t,J＝7.5Hz,2H)。
步骤7：2-氨基-6-二羟硼基-2-[2-吡咯烷-1-基)-乙基]-己酸二盐酸盐
在95℃下将(R)-2-叔丁氧基羰基氨基-2-(2-吡咯烷-1-基-乙基)-6-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]-二氧杂硼戊环-2-基)-己酸乙酯(98mg)于6N盐酸(5mL)中的溶液搅拌过夜。冷却到室温后，将反应混合物转移到分液漏斗中，用脱离子水(5mL)稀释并用二氯甲烷(3×)洗涤。水层在液氮中冷冻并冻干，得到呈无色泡沫状的2-氨基-6-二羟硼基-2-[2-吡咯烷-1-基)-乙基]-己酸二盐酸盐(36mg，53％)；1H NMR(D2O,300MHz)δ3.47(m,2H),3.24(m,1H),3.07(m,1H),2.88m,2H),2.12(t,J＝8Hz,2H),1.94(m,2H),1.60-1.82(m,4H),1.20(m,3H),1.04(m,1H)和0.59(t,J＝7Hz,2H)；C12H25BN2O4的MS(+CI):m/z：预期值272.2；实验值273.2(M+H)+。
实例17：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-[2-(4-嘧啶-2-基-哌嗪-1-基)乙基]-己酸三盐酸盐
按与实例16中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-[2-(4-嘧啶-2-基-哌嗪-1-基)乙基]-己酸三盐酸盐，但在步骤6中使用1-2-(1-哌啶基)嘧啶作为胺。最后一个步骤如下：在95℃下将(R/S)-2-叔丁氧基羰基氨基-2-[2-(4-嘧啶-2-基-哌嗪-1-基)-乙基]-6-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]-二氧杂硼戊环-2-基)-己酸乙酯(126mg)于6N盐酸(6mL)中的溶液搅拌过夜。冷却到室温后，将反应混合物转移到分液漏斗中，用脱离子水(5mL)稀释并用二氯甲烷(3×)洗涤。水层在液氮中冷冻并冻干，得到呈白色固体状的标题化合物(80mg，83％)；1H NMR(D2O,300MHz)δ8.47(d,J＝5.5Hz,2H),6.96(t,J＝5.5Hz,1H),3.48-3.76(m,4H),3.14-3.40(m,6H),2.29(t,J＝8Hz,2H),1.81(m,2H),1.28(m,3H),1.11(m,1H)和0.62(t,J＝7.5Hz,2H)。
实例18：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-((羧甲基)(甲基)氨基)乙基)己酸二盐酸盐
按与实例16中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-((羧甲基)(甲基)氨基)乙基)己酸二盐酸盐，但在步骤6中使用2-(甲基氨基)乙酸作为胺。最后一个步骤如下：在95℃下将(R/S)-2-叔丁氧基羰基氨基-2-[2-(2-乙氧基羰基甲基-甲基-氨基)-乙基]-6-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]-二氧杂硼戊环-2-基)-己酸乙酯(138mg)于6N盐酸(6mL)中的溶液搅拌过夜。冷却到室温后，将反应混合物转移到分液漏斗中，用脱离子水(5mL)稀释并用二氯甲烷(3×)洗涤。水层在液氮中冷冻并冻干，得到呈无色泡沫状的标题化合物(72mg，76％)；1H NMR(D2O,300MHz)δ3.94(s,2H),3.37(m,1H),3.20(m,1H),2.83(s,3H),2.24(t,J＝8Hz,2H),1.66-1.88(m,2H),1.27(m,3H),1.11(m,1H)和0.63(t,J＝7.5Hz,2H)。
实例19：制备(R/S)-2-氨基-2-[2-(苯甲基-乙基-氨基)-乙基]-6-二羟硼基-己酸二盐酸盐
按与实例16中所述方式类似的方式制备2-氨基-2-[2-(苯甲基-乙基-氨基)-乙基]-6-二羟硼基-己酸二盐酸盐，但在步骤6中使用乙基苯甲胺作为胺。最后一个步骤如下：在95℃下将(R/S)-2-[2-(苯甲基-乙基-氨基)-乙基]-2-叔丁氧基羰基氨基-6-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]-二氧杂硼戊环-2-基)-己酸乙酯(104mg)于6N盐酸(6mL)中的溶液搅拌过夜。冷却到室温后，将反应混合物转移到分液漏斗中，用脱离子水(5mL)稀释并用二氯甲烷(3×)洗涤。水层在液氮中冷冻并冻干，得到呈无色泡沫状的标题化合物(41mg)；1H NMR(D2O,300MHz)δ7.36(s,5H),4.31(m,1H),4.11(m,1H),2.96-3.29(m,4H),2.10(m,2H),1.68(m,1H),1.43(t,J＝8Hz,1H),1.21(t,J＝6.5Hz,3H),0.89-1.20(m,4H),)和0.59(m,2H)；C17H29BN2O4的MS(+CI):m/z：预期值336.2；实验值337.2(M+H)+,319(M+H-H2O)+。
实例20：制备2-氨基-2-{2-[苯甲基-(2-羟乙基)-氨基]-乙基}-6-二羟硼基-己酸二盐酸盐
按与实例16中所述方式类似的方式制备2-氨基-2-{2-[苯甲基-(2-羟乙基)-氨基]-乙基}-6-二羟硼基-己酸二盐酸盐，但在步骤6中使用2-(苯甲基氨基)乙醇作为胺。最后一个步骤如下：在95℃下将2-{2-[苯甲基-(2-羟乙基)-氨基]-乙基}-2-叔丁氧基羰基氨基-6-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]-二氧杂硼戊环-2-基)-己酸乙酯(111mg)于6N盐酸(6mL)中的溶液搅拌过夜。冷却到室温后，将反应混合物转移到分液漏斗中，用脱离子水(5mL)稀释并用二氯甲烷(3×)洗涤。水层在液氮中冷冻并冻干，得到呈无色泡沫状的标题化合物(48mg)；1H NMR(D2O,300MHz)δ7.35(s,5H),4.11-4.25(m,2H),3.76(s,2H),3.06-3.34(m,4H),2.18(m,2H),1.76(m,1H),1.43(m,1H),1.18(m,4H)和0.56(m,2H)；C17H29BN2O5的MS(+CI):m/z：预期值352.2；实验值371.2(M+H+H2O)+,353.2(M+H)+,335.2(M+H-H2O)+。
实例21：制备(R/S)-1-[(3-氨基-7-二羟硼基-3-羧基)-庚基)-哌啶-4-甲酸二盐酸盐
按与实例16中所述方式类似的方式制备1-[(3-氨基-7-二羟硼基-3-羧基)-庚基)-哌啶-4-甲酸二盐酸盐，但在步骤6中使用哌啶-4-甲酸乙酯作为胺。最后一个步骤如下：在95℃下将2-叔丁氧基羰基氨基-2-[2-(4-甲基氨甲酰基-哌啶-1-基)-乙基]-6-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]-二氧杂硼戊环-2-基)-己酸乙酯(106mg)于6N盐酸(6mL)中的溶液搅拌过夜。冷却到室温后，将反应混合物转移到分液漏斗中，用脱离子水(5mL)稀释并用二氯甲烷(3×)洗涤。水层在液氮中冷冻并冻干，得到呈无色泡沫状的标题化合物(34mg)；1HNMR(D2O,300MHz)δ3.50(m,1H),3.22(m,1H),2.84-3.08(m,3H),2.58(tt,J1＝12Hz,J2＝3.5Hz,1H),2.14(m,4H),1.75(m,5H),1.26(m,3H),1.10(m,1H)和0.64(t,J＝7.5Hz,2H)。
实例22：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-[2-(4-羟甲基哌啶-1-基)-乙基]-己酸二盐酸盐
按与实例16中所述方式类似的方式制备(2-氨基-6-二羟硼基-2-[2-(4-羟甲基哌啶-1-基)-乙基]-己酸二盐酸盐，但在步骤6中使用哌啶-4-基甲醇作为胺。最后一个步骤如下：在95℃下将(R)-2-叔丁氧基羰基氨基-2-[2-(4-羟甲基-哌啶-1-基)-乙基]-6-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]-二氧杂硼戊环-2-基)-己酸乙酯(78mg)于6N盐酸(5mL)中的溶液搅拌过夜。冷却到室温后，将反应混合物转移到分液漏斗中，用脱离子水(5mL)稀释并用二氯甲烷(3×)洗涤。水层在液氮中冷冻并冻干，得到呈无色泡沫状的标题化合物(20mg，53％)；1HNMR(D2O,300MHz)δ3.48(m,2H),3.33(d,J＝6Hz,2H),3.21(m,1H),3.04(m,1H),2.86(m,2H),2.19(2H,t,J＝8.5Hz),1.86(m,2H),1.60-1.78(m,3H),1.20-1.36(m,5H),1.09(m,1H)和0.64(t,J＝7.5Hz,2H,)；C12H25BN2O4的MS(+CI):m/z：预期值272.2；实验值273.2(M+H)+。
实例23：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-[2-(3-二乙基氨甲酰基-哌啶-1-基)-乙基]-己酸二盐酸盐
按与实例16中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-[2-(3-二乙基氨甲酰基-哌啶-1-基)-乙基]-己酸二盐酸盐，但在步骤6中使用N,N-二乙基哌啶-3-甲酰胺作为胺。最后一个步骤如下：在95℃下将(2R/S,3”R/S)-2-叔丁氧基羰基氨基-2-[2-(3-二乙基氨甲酰基-哌啶-1-基)-乙基]-6-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]-二氧杂硼戊环-2-基)-己酸乙酯(128mg)于6N盐酸(5mL)中的溶液搅拌过夜。冷却到室温后，将反应混合物转移到分液漏斗中，用脱离子水(5mL)稀释并用二氯甲烷(3×)洗涤。水层在液氮中冷冻并冻干，得到呈无色泡沫状的标题化合物的非对映异构体混合物(54mg)；1H NMR(D2O,300MHz)δ3.46(m,2H),3.26(m,4H),3.10(m,2H),2.94(m,4H),2.20(m,2H),1.62-1.92(6H,m),1.28(m,2H),1.10(t,J＝7.0Hz,3H),1.06(m,1H),0.93(t,J＝7.0Hz,3H)和0.64(t,J＝7.5Hz,2H)；C18H36BN3O5的MS(+CI):m/z：预期值385.3；实验值386.2(M+H)+,368.2(M+H-H2O)+。
实例24：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-吗啉-4-基)-乙基)-己酸二盐酸盐
按与实例16中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-吗啉-4-基)-乙基)-己酸二盐酸盐，但在步骤6中使用吗啉作为胺。最后一个步骤如下：在95℃下将(R)-2-叔丁氧基羰基氨基-2-(2-吗啉-4-基-乙基)-6-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]-二氧杂硼戊环-2-基)-己酸乙酯(102mg)于6N盐酸(5mL)中的溶液搅拌过夜。冷却到室温后，将反应混合物转移到分液漏斗中，用脱离子水(5mL)稀释并用二氯甲烷(3×)洗涤。水层在液氮中冷冻并冻干，得到呈无色泡沫状的标题化合物(61mg)；1H NMR(D2O,300MHz)δ3.96(d,J＝12.5Hz,2H),3.66(t,J＝12.5Hz,2H),3.40(m,2H),3.10(m,4H),2.20(m,2H),1.64-1.82(m,2H),1.26(m,3H),1.08(m,1H)和0.62(t,J＝7.0Hz,2H)；C12H25BN2O5的MS(+CI):m/z：预期值288.2；实验值289.2(M+H)+。
实例25：制备2-氨基-2-[2-(4-苯甲基哌啶-1-基)乙基]-6-二羟硼基-己酸二盐酸盐
按与实例16中所述方式类似的方式制备2-氨基-2-[2-(4-苯甲基哌啶-1-基)乙基]-6-二羟硼基-己酸二盐酸盐，但在步骤6中使用4-苯甲基哌啶作为胺。最后一个步骤如下：在95℃下将2-[2-(4-苯甲基哌啶-1-基)乙基]-2-叔丁氧基羰基氨基-6-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]-二氧杂硼戊环-2-基)-己酸乙酯(95mg)于6N盐酸(5mL)中的溶液搅拌过夜。冷却到室温后，将反应混合物转移到分液漏斗中，用脱离子水(5mL)稀释并用二氯甲烷(3×)洗涤。水层在液氮中冷冻并冻干，得到呈无色泡沫状的标题化合物(42mg)；1H NMR(D2O,300MHz)δ7.24(m,2H),7.13(m,3H),3.42(m,2H),3.18(m,1H),3.00(m,1H),2.78(m,2H),2.44(d,J＝7.0Hz,2H),2.16(t,J＝7.0Hz,2H),1.76(m,5H),1.24(m,5H),1.09(m,1H)和0.61(t,J＝7.0Hz,2H)；C20H33BN2O4的MS(+CI):m/z：预期值376.3；实验值377.2(M+H)+,359.2(M+H-H2O)+。
实例26：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-[2-(6,7-二甲氧基-3,4-二氢-1H-异喹啉-2-基)乙基]-己酸二盐酸盐
按与实例16中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-[2-(6,7-二甲氧基-3,4-二氢-1H-异喹啉-2-基)乙基]-己酸二盐酸盐，但在步骤6中使用6,7-二甲氧基-1,2,3,4-四氢异喹啉作为胺。最后一个步骤如下：在95℃下将2-叔丁氧基羰基氨基-2-[2-(6,7-二甲氧基-3,4-二氢-1H-异喹啉-2-基)乙基]-6-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]-二氧杂硼戊环-2-基)-己酸乙酯(108mg)于6N盐酸(5mL)中的溶液搅拌过夜。冷却到室温后，将反应混合物转移到分液漏斗中，用脱离子水(5mL)稀释并用二氯甲烷(3×)洗涤。水层在液氮中冷冻并冻干，得到呈无色泡沫状的标题化合物(66mg)；1H NMR(D2O,300MHz)δ6.75(s,1H),6.66(s,1H),4.39(d,J＝15Hz,1H),4.14(d,J＝15Hz,1H),3.67(s,3H),3.66(s,3H),3.18-3.46(m,4H),2.97(m,2H),2.31(t,J＝8Hz,2H),1.82(m,2H),1.27(m,3H),1.12(m,1H)和0.64(m,2H)；C19H31BN2O6的MS(+CI):m/z：预期值394.2；实验值395.5(M+H)+,377.4(M+H-H2O)+,359.4(M+H-2H2O)+。
实例27：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-((4-甲氧基苯甲基)(甲基)氨基)乙基)己酸二盐酸盐
按与实例16中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-((4-甲氧基苯甲基)(甲基)氨基)乙基)己酸二盐酸盐，但在步骤6中使用1-(4-甲氧基苯基)-N-甲基甲胺作为胺。1H NMR(d4-MeOH,300MHz)δ7.47(d,J＝8.7Hz,2H),7.03(d,J＝9.0Hz,2H),4.40(d,J＝11.2Hz,1H),4.27(d,J＝11.2Hz,1H),3.83(s,3H),2.82(s,3H),2.43-2.38(m,2H),1.95-1.81(m,2H),1.44-1.23(m,6H),0.82(t,J＝7.5Hz,2H)。C17H29B2NO5的ESI MS实验值m/z[353.6(M+H)]。
实例28：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-(4-苯基-5,6-二氢吡啶-1(2H)-基)乙基)己酸二盐酸盐
按与实例16中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-(4-苯基-5,6-二氢吡啶-1(2H)-基)乙基)己酸二盐酸盐，但在步骤6中使用4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶作为胺。1H NMR(d4-MeOH,300MHz)δ7.67-7.64(m,1H),7.50-7.45(m,2H),7.40-7.31(m,2H),6.14(s,1H),2.97-2.71(m,2H),2.49(t,J＝7.8Hz,2H),2.08-1.92(m,4H),1.59-1.19(m,8H),0.84(t,J＝7.8Hz,2H)。C19H29B1N2O4的ESI MS实验值m/z[325.5(M+1)-2H2O]。
实例29：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-(6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-5(4H)-基)乙基)己酸二盐酸盐
按与实例16中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-(6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-5(4H)-基)乙基)己酸二盐酸盐，但在步骤6中使用4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶作为胺。1H NMR(d4-MeOH,300MHz)δ7.42(d,J＝5.1Hz,1H),6.91(d,J＝5.1Hz,1H),3.60-3.53(m,2H),2.50(t,J＝8.1Hz,2H),2.08-1.88(m,2H),1.59-1.21(m,10H),0.84(t,J＝7.5Hz,2H)。C15H25B1N2O4S1的ESI MS实验值m/z[305.1(M+1)-2H2O]。
实例30：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-(3-氧代-2,3,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(4H)-基)乙基)己酸二盐酸盐
按与实例16中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-(3-氧代-2,3,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(4H)-基)乙基)己酸二盐酸盐，但在步骤6中使用4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3(2H)-酮作为胺。1H NMR(d4-MeOH,300MHz)δ7.23-7.08(m,2H),3.19(s,2H),2.54(t,J＝8.4Hz,2H),2.08-1.89(m,4H),1.50-1.28(m,8H),0.84(t,J＝6.9Hz,2H)。C14H25B1N2O5的ESI MS实验值m/z[341.3(M+1)]。
实例31：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-(4-(4-甲氧基苯基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-基)乙基)己酸二盐酸盐
按与实例16中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-(4-(4-甲氧基苯基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-基)乙基)己酸二盐酸盐，但在步骤6中使用4-(4-甲氧基苯基)-1,2,3,6-四氢吡啶作为胺。1H NMR(d4-MeOH,300MHz)δ7.42(d,J＝8.7Hz,2H),6.92(d,J＝8.7Hz,2H),6.40(s,1H),3.80(s,3H),2.88(s,2H),2.50-2.43(m,2H),2.05-1.88(m,4H),1.59-1.23(m,8H),0.84(t,J＝7.2Hz,2H)。(C20H31B1N2O5的ESI MS实验值m/z[373.5(M+1)-H2O]。
实例32：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-(哌嗪-1-基)乙基)己酸三盐酸盐
按与实例16中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-(哌嗪-1-基)乙基)己酸三盐酸盐，但在步骤6中使用哌嗪-1-甲酸叔丁基酯作为胺。分离出呈三盐酸盐形式的最终化合物。1H NMR(D2O,300MHz)δ3.55-3.30(m,9H),3.26-3.14(m,1H),2.30-2.11(m,2H),1.88-1.62(m,2H),1.31-1.14(m,3H),1.14-0.99(m,1H),0.60(t,J＝7.2Hz,2H)。C12H26BN3O4的ESI MS实验值m/z[288.2(M+1)]。
实例33：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-((S)-2-(甲氧基甲基)吡咯烷-1-基)乙基)己酸二盐酸盐
按与实例16中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-((S)-2-(甲氧基甲基)吡咯烷-1-基)乙基)己酸二盐酸盐，但在步骤6中使用(S)-2-(甲氧基甲基)吡咯烷作为胺。1H NMR(D2O,300MHz)δ3.63-3.38(m,5H),3.21(s,3H),3.07-2.95(m,2H),2.24-1.60(m,8H),1.32-1.17(m,3H),1.15-0.98(m,1H),0.60(t,J＝7.2Hz,2H)。C14H29BN2O5的ESI MS实验值m/z[317.2(M+1)]。
实例34：制备2-氨基-2-(2-(4-苯甲基-4-羟基哌啶-1-基)乙基)-6-二羟硼基己酸二盐酸盐
按与实例16中所述方式类似的方式制备2-氨基-2-(2-(4-苯甲基-4-羟基哌啶-1-基)乙基)-6-二羟硼基己酸二盐酸盐，但在步骤6中使用4-苯甲基哌啶-4-醇作为胺。分离出呈二盐酸盐形式的最终化合物。1H NMR(D2O,300MHz)δ7.20-7.01(m,5H),3.32-3.10(m,3H),3.06-2.90(m,3H),2.61(s,2H),2.16(t,J＝8.4Hz,2H),1.81-1.64(m,4H),1.57(d,J＝14.7Hz,2H),1.27-1.12(m,3H),1.09-0.95(m,1H),0.55(t,J＝7.2Hz,2H)。C20H33BN2O5的ESIMS实验值m/z[393.2(M+1)]。
实例35：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙基)己酸三盐酸盐
按与实例16中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙基)己酸三盐酸盐，但在步骤6中使用1-甲基哌嗪作为胺。分离出呈三盐酸盐形式的最终化合物。1H NMR(D2O,300MHz)δ3.90-3.12(m,9H),2.84(s,3H),2.30-2.11(m,2H),1.87-1.63(m,3H),1.33-1.14(m,3H),1.14-0.97(m,1H),0.60(t,J＝7.5Hz,2H)。C13H28BN3O4的ESIMS实验值m/z[302.2(M+1)]。
实例36：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)乙基)己酸二盐酸盐
按与实例16中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)乙基)己酸二盐酸盐，但在步骤6中使用1,2,3,4-四氢异喹啉作为胺。1HNMR(D2O,300MHz)δ7.22-7.10(m,3H),4.45(dAB,J＝15.0Hz,1H),4.21(dAB,J＝15.0Hz,1H),3.72-3.62(m,1H),3.48-3.00(m,4H),2.38-2.28(m,2H),1.92-1.69(m,3H),1.35-1.20(m,3H),1.18-1.03(m,1H),0.62(t,J＝6.9Hz,2H)。C17H27BN2O4的ESI MS实验值m/z[335.2(M+1)]。
实例37：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-(二乙基氨基)乙基)己酸二盐酸盐
按与实例16中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-(二乙基氨基)乙基)己酸二盐酸盐，但在步骤6中使用二乙胺作为胺。1H NMR(D2O,300MHz)δ3.28-3.14(m,1H),3.06(q,J＝7.2Hz,4H),3.08-2.95(m,1H),2.21-2.11(m,2H),1.89-1.68(m,2H),1.31-1.17(m,3H),1.09(t,J＝7.2Hz,6H),1.08-0.98(m,1H),0.60(t,J＝7.5Hz,2H)。C12H27BN2O4的ESI MS实验值m/z[275.2(M+1)]。
实例38：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-(4-氧代哌啶-1-基)乙基)己酸二盐酸盐
按与实例16中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-(4-氧代哌啶-1-基)乙基)己酸二盐酸盐单水合物，但在步骤6中使用哌啶-4-酮作为胺。1H NMR(D2O,500MHz)δ3.54-3.47(m,2H),3.32(dt,J＝5.0,6.0Hz,1H),3.15-3.07(m,3H),2.28-2.18(m,2H),2.01-1.84(m,5H),1.78-1.72(m,1H),1.37-1.27(m,3H),1.20-1.10(m,1H),0.70(t,J＝8.0Hz,2H)。C13H25BN2O5的ESI MS实验值m/z[283.6(M+1-18)7％,265.5(M+1-2×18)100％]。
实例39：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-(4-(三氟甲基)哌啶-1-基)乙基)己酸二盐酸盐
按与实例16中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-(4-(三氟甲基)哌啶-1-基)乙基)己酸二盐酸盐单水合物，但在步骤6中使用4-(三氟甲基)哌啶作为胺。1H NMR(D2O,500MHz)δ3.63(t,J＝12.0Hz,2H)3.31(ddd,J1＝12.0Hz,J2＝10.0Hz,J3＝6.0Hz,1H),3.11(ddd,J1＝12.0Hz,J2＝11.0Hz,J3＝6.0Hz,1H),3.03-2.94(m,2H),2.59-2.49(m,1H),2.28-2.21(m,2H),2.16-2.13(m,2H),1.89-1.84(m,1H),1.78-1.69(m,3H),1.37-1.27(m,3H),1.19-1.10(m,1H),0.70(t,J＝8.0Hz,2H)。19F NMR–73.45(s,3F)。C14H26BF3N2O4的ESI MS实验值m/z[337.6(M+1-18)13％,319.5(M+1-2×18)100％]。
实例40：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-((S)-2-(吡咯烷-1-基甲基)吡咯烷-1-基)乙基)己酸三盐酸盐
按与实例16中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-((S)-2-(吡咯烷-1-基甲基)吡咯烷-1-基)乙基)己酸三盐酸盐，但在步骤6中使用(S)-1,2'-亚甲基二吡咯烷作为胺。分离出呈三盐酸盐和单水合物形式的最终化合物。1H NMR(D2O,500MHz)δ3.89-3.81(m,1H),3.72-3.65(m,4H),3.53(dd,J1＝12.0Hz,J2＝4.0Hz,1H),3.43(dd,J1＝12.0Hz,J2＝6.0Hz,1H),2.28-2.17(m,2H),2.16-2.01(m,4H),1.94-1.83(m,4H),1.76-1.71(m,1H),1.37-1.32(m,3H),1.18-1.09(m,1H),0.69(t,J＝8.0Hz,2H)。C17H34BN3O4的ESI MS实验值m/z[338.7(M+1-18)29％,320.6(M+1-2×18)100％,336.7(M-1-18)100％]。
实例41：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-(4-甲氧基哌啶-1-基)乙基)己酸二盐酸盐
按与实例16中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-(4-甲氧基哌啶-1-基)乙基)己酸二盐酸盐单水合物，但在步骤6中使用4-甲氧基哌啶作为胺。1H NMR(D2O,500MHz)δ3.60-3.49(m,2H),[3.29(s,第一构象异构体),3.26(s,第二构象异构体),3H],3.33-3.24(m,2H),3.12-3.04(m,2H),3.02-2.93(m,1H),1.88-1.75(m,3H),1.57-1.48(m,1H),1.38-1.27(m,3H),1.19-1.09(m,1H),0.68(t,J＝8.0Hz,2H)。C14H29BN2O5的ESI MS实验值m/z[299.6(M+1-18)15％,281.5(M+1-2×18)100％,297.6(M-1-18)75％]。
实例42：制备2-氨基-2-(2-(2-(苯并呋喃-2-基)吡咯烷-1-基)乙基)-6-二羟硼基己酸二盐酸盐
按与实例16中所述方式类似的方式制备2-氨基-2-(2-(2-(苯并呋喃-2-基)吡咯烷-1-基)乙基)-6-二羟硼基己酸二盐酸盐单水合物，但在步骤6中使用2-(苯并呋喃-2-基)吡咯烷作为胺。1H NMR(D2O,500MHz)δ7.62(dd,J1＝8.0Hz,J2＝8.0Hz,1H),7.51(dd,J1＝8.0Hz,J2＝4.0Hz,1H),7.31-7.37(m,1H),7.22-7.27(m,1H),[7.12(s,第一非对映异构体),7.09(s,第二非对映异构体),1H],4.78-4.61(m,3H),3.82-3.75(m,1H),3.59-3.52(m,1H),3.40-3.31(m,1H),3.25-3.12(m,1H),2.52-2.40(m,2H),2.30-2.12(m,3H),[1.97-1.93(m,第一非对映异构体),2.05-2.00(m,第二非对映异构体),1H],1.28-1.00(m,4H),[0.55-0.43(m,第一非对映异构体),0.81-0.62(m,第二非对映异构体),2H]。C20H29BN2O5的ESI MS实验值m/z[371.6(M+1-18)16％,353.6(M+1-2×18)100％]。
实例43：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-((2-羟乙基)(甲基)氨基)乙基)己酸二盐酸盐
按与实例16中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-((2-羟乙基)(甲基)氨基)乙基)己酸二盐酸盐单水合物，但在步骤6中使用2-(甲基氨基)乙醇作为胺。1HNMR(D2O,500MHz)δ3.81(brt,J＝5.0Hz,2H),3.55-3.42(m,1H),3.36-3.13(m,3H),[2.84(s,第一旋转异构体),2.83(s,第二旋转异构体),3H],2.27(brt,J＝7.0Hz,2H),1.92-1.87(m,1H),1.81-1.75(m,1H),1.37-1.29(m,3H),1.18-1.13(m,1H),0.70(t,J＝7.0Hz,2H)。C11H25BN2O5的ESI MS实验值m/z[277.6(M+1)5％,259.6(M+1-18)25％,241.5(M+1-2×18)100％,257.6(M-1-18)100％]。
实例44制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-(3,3-二氟吡咯烷-1-基)乙基)己酸二盐酸盐
按与实例16中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-(3,3-二氟吡咯烷-1-基)乙基)己酸二盐酸盐单水合物，但在步骤6中使用3,3-二氟吡咯烷作为胺。1HNMR(D2O,500MHz)δ3.95-3.85(m,2H),3.79-3.69(m,2H),3.54(ddd,J1＝12.0Hz,J2＝10.0Hz,J3＝6.0Hz,1H),3.35(ddd,J1＝12.0,J2＝10.0,J3＝5.0Hz,1H),2.68-2.63(m,2H),2.29-2.22(m,2H),1.79(ddd,J1＝15.0,J2＝12.0,J3＝5.0Hz,1H),1.40-1.32(m,3H),1.22-1.15(m,1H),0.73(t,J＝7.0Hz,2H)。C12H23BF2N2O4的ESI MS实验值m/z[291.5(M+1-18)17％,273.5(M+1-2×18)100％,307.6(M-1)29％,289.5(M-1-18)100％]。
实例45制备2-(2-(4-乙酰基-4-苯基哌啶-1-基)乙基)-2-氨基-6-二羟硼基己酸二盐酸盐
按与实例16中所述方式类似的方式制备2-(2-(4-乙酰基-4-苯基哌啶-1-基)乙基)-2-氨基-6-二羟硼基己酸二盐酸盐单水合物，但在步骤6中使用1-(4-苯基哌啶-4-基)乙酮作为胺。1H NMR(D2O,500MHz)δ7.27-7.44(m,5H),3.64-3.60(m,1H),3.56-3.52(m,1H),3.33-3.08(m,2H),3.04-2.89(m,2H),2.85-2.82(m,2H),2.29-2.25(m,1H),2.21-2.13(m,2H),2.11-2.03(m,1H),[1.93(s,第一构象异构体),1.91(s,第二构象异构体),3H],1.88-1.69(m,2H),1.37-1.25(m,3H),1.16-1.09(m,1H),[0.69(t,J＝7.0Hz,第一构象异构体),0.67(t,J＝7.0Hz,第二构象异构体),2H]。C21H33BN2O5的ESI MS实验值m/z[387.7(M+1-18)30％,369.6(M+1-2×18)100％]。
实例46制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-((R)-2-(三氟甲基)吡咯烷-1-基)乙基)己酸二盐酸盐
按与实例16中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-((R)-2-(三氟甲基)吡咯烷-1-基)乙基)己酸二盐酸盐单水合物，但在步骤6中使用(R)-2-(三氟甲基)吡咯烷作为胺。1H NMR(D2O,500MHz)δ4.44-4.34(m,1H),3.78-3.71(m,1H),[3.54-3.47(m,第一非对映异构体),3.69-3.65(m,第二非对映异构体),1H],[3.37-3.32(m,第一非对映异构体),3.46-3.41(m,第二非对映异构体),1H],3.29-3.19(m,1H),2.44-2.35(m,1H),2.33-2.27(m,1H),2.22-2.13(m,3H),2.05-1.96(m,1H),1.92-1.86(m,1H),1.80-1.73(m,1H),1.35-1.29(m,3H),1.20-1.11(m,1H),0.69(t,J＝7.0Hz,2H)。19F NMR[–71.29(s,第一非对映异构体),–71.06(s,第二非对映异构体),3F]。C13H24BF3N2O4的ESI MS实验值m/z[323.5(M+1-18)10％,305.5(M+1–2×18)100％,321.5(M–1-18)100％]。
实例47制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-(4-氟哌啶-1-基)乙基)己酸二盐酸盐
按与实例16中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-(4-氟哌啶-1-基)乙基)己酸二盐酸盐单水合物，但在步骤6中使用4-氟哌啶作为胺。1H NMR(D2O,500MHz)δ5.00(brd,J＝47Hz,0.7H),4.85(两个七重峰,J＝47Hz 0.08H),3.65-3.58(m,0.3H),3.48-3.44(m,1.5H),3.37-3.33(m,1H),3.27-3.20(m,1.5H),3.19-3.14(m,1H),3.12-3.06(m,0.3H),2.34-2.26(m,2H),2.24-2.20(m,2H),2.05-1.88(m,3H),1.81(ddd,J＝14.0,12.0,4.0Hz,1H),1.40-1.32(m,3H),1.22-1.16(m,1H),0.73(t,J＝7.0Hz,2H)。19F NMR[–188.10-–188.05(m,第一构象异构体),–177.96-–177.87(m,第二构象异构体),1F]。
实例48制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-((4-氟-3-(三氟甲基)苯甲基)(甲基)氨基)乙基)己酸二盐酸盐
按与实例16中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-((4-氟-3-(三氟甲基)苯甲基)(甲基)氨基)乙基)己酸二盐酸盐单水合物，但在步骤6中使用1-(4-氟-3-(三氟甲基)苯基)-N-甲基甲胺作为胺。1H NMR(D2O,500MHz)δ[7.80(brs,第一旋转异构体),7.79(brs,第二旋转异构体),1H],7.75-7.69(m,1H),7.36(dd,J1＝10.0Hz,J2＝8.0Hz,1H),4.45-4.36(m,1H),4.32-4.23(m,1H),3.43-3.37(m,1H),3.13-3.05(m,1H),2.79(brs,第二旋转异构体),3H],[2.76(brs,第一旋转异构体),2.26(dt,J1＝16.0Hz,J2＝8.0Hz,1H),2.18-2.06(m,1H),1.86-1.66(m,1H),1.46-0.98(m,5H),0.69-0.57(m,2H)。19F NMR–112.29(q,J＝14.0Hz,1F),–60.85(d,J＝14.0Hz,3F)。C17H25BF4N2O4的ESI MS实验值m/z[391.5(M+1-18)33％,373.6(M+1-2×18)100％]。
实例49制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-(4-甲基-1,4-二氮杂环庚烷-1-基)乙基)己酸二盐酸盐
按与实例16中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-(4-甲基-1,4-二氮杂环庚烷-1-基)乙基)己酸二盐酸盐单水合物，但在步骤6中使用1-甲基-1,4-二氮杂环庚烷作为胺。1H NMR(D2O,500MHz)δ3.77-3.68(m,2H),3.55-3.51(m,3H),3.47-3.41(m,2H),3.28-3.23(m,1H),2.91(s,3H),2.29-2.23(m,3H),2.21-2.14(m,1H),1.88-1.83(m,1H),1.76-1.71(m,1H),1.37-1.27(m,3H),1.18-1.10(m,1H),0.70(t,J＝8.0Hz,2H)。C14H30BN3O4的ESI MS实验值m/z[298.5(M+1-18)6％,280.5(M+1–2×18)100％,268.5(M+1–3×18)5％]。
实例50：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-(4-(2-甲氧基苯基)哌嗪-1-基)乙基)己酸二盐酸盐
按与实例16中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-(4-(2-甲氧基苯基)哌嗪-1-基)乙基)己酸二盐酸盐单水合物，但在步骤6中使用1-(2-甲氧基苯基)哌嗪作为胺。1H NMR(D2O,500MHz)δ7.15(ddd,J1＝8.0Hz,J2＝8.0Hz,J3＝1.0Hz,1H),7.09(dd,J1＝8.0Hz,J2＝1.0Hz,1H),7.01(d,J＝8.0Hz,1H),6.95(dd,J1＝8.0Hz,J2＝8.0Hz,1H),3.78(s,3H),3.52-3.34(m,8H),2.34-2.24(m,2H),1.92-1.87(m,1H),1.81-1.75(m,1H),1.49-1.44(m,2H),1.37-1.29(m,3H),1.20-1.15(m,1H),0.70(t,J＝8.0Hz,2H)。C19H32BN3O5的ESIMS实验值m/z[376.6(M+1-18)10％,358.7(M+1-2×18)100％]。
实例51：制备2-氨基-2-(2-(双(2-氨基乙基)氨基)乙基)-6-二羟硼基己酸四盐酸盐
按与实例16中所述方式类似的方式制备2-氨基-2-(2-(双(2-氨基乙基)氨基)乙基)-6-二羟硼基己酸四盐酸盐，但在步骤6中使用2,2'-氮二基双(乙烷-2,1-二基)二氨基甲酸叔丁基酯作为胺。分离出呈四盐酸盐和单水合物形式的最终化合物。1H NMR(D2O,500MHz)δ3.15-3.12(m,4H),3.00-2.92(m,5H),2.77(ddd,J1＝14.0Hz,J2＝7.0Hz,J3＝6.0Hz,1H),2.07(t,J＝7.0Hz,2H),1.86(ddd,J1＝18.0Hz,J2＝14.0Hz,J3＝4.0Hz,1H),1.76(ddd,J1＝18.0Hz,J2＝14.0Hz,J3＝4.0Hz,1H),1.37-1.32(m,3H),1.17-1.09(m,1H),0.69(t,J＝7.0Hz,2H)。C12H29BN4O4的ESI MS实验值m/z[287.6(M+1-18)5％,269.5(M+1-2×18)100％,303.6(M-1)28％,285.6(M-1-18)100％]。
实例52：制备1-(3-氨基-7-二羟硼基-3-羧基庚基)哌啶-2-甲酸二盐酸盐
按与实例16中所述方式类似的方式制备1-(3-氨基-7-二羟硼基-3-羧基庚基)哌啶-2-甲酸二盐酸盐单水合物，但在步骤6中使用哌啶-2-甲酸酯作为胺。1H NMR(D2O,500MHz)δ3.98-3.88(m,第一构象异构体),1H),3.64(brd,J＝13.0Hz,1H),3.44(dt,J1＝13.0Hz,J2＝6.0Hz,第二构象异构体),3.32-3.25(m,2H),3.10(dt,J1＝13.0Hz,J2＝5.0Hz,第二构象异构体),1H],[3.03-2.96(m,第一构象异构体),2.42-2.36(m,1H),2.35-2.30(m,1H),2.24(brd,J＝14.0Hz,1H),1.94-1.88(m,2H),1.84-1.81(m,2H),1.78-1.72(m,1H),1.70-1.64(m,1H),1.55-1.50(m,1H),1.38-1.32(m,3H),1.21-1.16(m,1H),0.72(t；J＝7.0Hz,2H)。C12H29BN4O4的ESI MS实验值m/z[317.5(M+Na+-2×18)11％,313.6(M+1-18)17％,295.6(M+1–2×18)100％,329.5(M-1)6％,311.6(M–1-18)100％]。
实例53：制备1-(3-氨基-7-二羟硼基-3-羧基庚基)哌啶-2-甲酸二盐酸盐
按与实例16中所述方式类似的方式制备1-(3-氨基-7-二羟硼基-3-羧基庚基)哌啶-2-甲酸二盐酸盐单水合物，但在步骤6中使用(R)-哌啶-3-甲酸酯作为胺。1H NMR(D2O,500MHz)δ(两个非对映异构体+两个构象异构体)3.78(brt,J＝12.0Hz,0.35H),3.73(brt,J＝12.0Hz,0.65H),3.54(brt,J＝14.0Hz,0.65H),3.43(brt,J＝14.0Hz,0.35H),3.39-3.33(m,1H),3.19-3.13(m,1H),3.11-3.08(m,1H),3.05-2.80(m,2H),2.40-2.19(m,2H),2.17-2.11(m,1H),2.02(brd,J＝15.0Hz,0.65H),1.94-1.67(m,3.70H),1.55(ddd,J1＝16.0Hz,J2＝13.0Hz,J3＝4.0Hz,0.65H),1.39-1.33(m,3H),1.22-1.15(m,1H),0.74(t,J＝7.0Hz,2H)。C12H29BN4O4的ESI MS实验值m/z[317.4(M+Na+-2×18)5％,313.6(M+1-18)10％,295.6(M+1–2×18)100％,311.6(M–1-18)100％]。
实例54：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-((S)-2-(二甲基氨甲酰基)吡咯烷-1-基)乙基)己酸二盐酸盐
按与实例16中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-((S)-2-(二甲基氨甲酰基)吡咯烷-1-基)乙基)己酸二盐酸盐单水合物，但在步骤6中使用(S)-N,N-二甲基吡咯烷-2-甲酰胺作为胺。C13H26BN3O5的ESI MS实验值m/z[298.5(M+1-18)15％,280.5(M+1-2×18)55％,235.5(M+1-2×18-45)100％]。
实例55：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-(异丙基氨基)乙基)己酸二盐酸盐
按与实例16中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-(异丙基氨基)乙基)己酸二盐酸盐单水合物，但在步骤6中使用异丙胺作为胺。1H NMR(D2O,500MHz)δ3.26(七重峰,J＝6.0Hz,1H),3.10-3.0.5(m,1H),2.84-2.80(m,1H),2.12(t,J＝8.0Hz,2H),1.80-1.71(m,2H),1.34-1.27(m,3H),1.19(d,J＝6.0Hz,6H),1.11-1.07,(m,1H),0.58(t,J＝7.0Hz,2H)。C11H25BN2O4的ESI MS实验值m/z[261.6(M+1)3％,243.5(M+1-18)30％,225.5(M+1–2×18)100％,207.5(M+1–3×18)62％,501.9(2M-1-18)13％,259.6(M-1)23％,241.5(M–1-18)100％]。
实例56：制备(3S)-1-(3-氨基-7-二羟硼基-3-羧基庚基)哌啶-3-甲酸二盐酸盐
按与实例16中所述方式类似的方式制备(3S)-1-(3-氨基-7-二羟硼基-3-羧基庚基)哌啶-3-甲酸二盐酸盐单水合物，但在步骤6中使用(S)-哌啶-3-甲酸乙酯作为胺。1HNMR(D2O,500MHz)δ(两个非对映异构体+两个构象异构体)3.79(brt,J＝12.0Hz,0.35H),3.74(brt,J＝12.0Hz,0.65H),3.55(brt,J＝12.0Hz,0.65H),3.44(brt,J＝12.0Hz,0.35H),3.41-3.33(m,1H),3.21-3.15(m,1H),3.13-2.95(m,2H),2.92-2.81(m,1H),2.42-2.11(m,3H),2.03(brd,J＝14.0Hz,0.65H),1.94-1.70(m,3.80H),1.57(dq,J＝13.0,4.0Hz,0.65H),1.40-1.32(m,3H),1.24-1.15(m,1H),0.74(t,J＝7.0Hz,2H)。C14H27BN2O6的ESI MS实验值m/z[313.6(M+1-18)10％,295.5(M+1-2×18)100％,277.5(M+1-3×18)15％]。
实例57：制备1-(3-氨基-7-二羟硼基-3-羧基庚基)-4-甲基哌啶-4-甲酸
按与实例16中所述方式类似的方式制备(2-(2-(4-乙酰基-4-甲基哌啶-1-基)乙基)-2-氨基-6-二羟硼基己酸二盐酸盐单水合物，但在步骤6中使用1-(4-甲基哌啶-4-基)乙酮作为胺。1H NMR(D2O,500MHz)δ(比率为3/1的两个构象异构体)3.48-3.40(m,2H),3.34-3.21(m,1H),3.15-3.11(m,0.5H),3.08-3.02(m,1H),2.96-2.87(m,1.5H),2.28(d,J＝14.0Hz,1.5H),2.23-2.19(m,2H),2.06-2.01(m,0.5H),1.88-1.82(m,1.5H),1.77-1.71(m,1H),1.61(t,J＝14.0Hz,1.5H),1.34-1.27(m,3H),[1.25(s,第一构象异构体),1.18(s,第二构象异构体),3H],1.16-1.10(m,1H),0.69(t,J＝8.0Hz,2H)。C15H29BN2O6的ESI MS实验值m/z[327.6(M+1-18)13％,309.6(M+1–2×18)100％,291.6(M+1-3×18)10％,325.6(M–1-18)100％,307.6(M-1-2×18)37％]。
实例58：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-(2,3-二氢-1H-茚-2-基氨基)乙基)己酸二盐酸盐
按与实例16中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-(2,3-二氢-1H-茚-2-基氨基)乙基)己酸二盐酸盐单水合物，但在步骤6中使用2,3-二氢-1H-茚-2-胺作为胺。1H NMR(D2O,500MHz)δ7.26-7.24(m,2H),7.21-7.19(m,2H),4.09-4.04(m,1H),3.35(dd,J1＝17.0Hz,J2＝7.0Hz,2H),3.31-3.25(m,1H),3.12-3.07(m,1H),3.04(dd,J1＝17.0Hz,J2＝4.0Hz,2H),2.18(t,J＝8.0Hz,2H),1.91-1.86(m,1H),1.79-1.73(m,1H),1.38-1.27(m,3H),1.20-1.11(m,1H),0.71(t,J＝8.0Hz,2H)。C13H26BFN2O4的ESI MS实验值m/z[317.5(M+1-18)28％,299.6(M+1-2×18)100％,281.5(M+1–3×18)31％,333.5(M-1)28％,315.5(M–1-18)100％]。
实例59：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-(3-羟基氮杂环丁烷-1-基)乙基)己酸二盐酸盐
按与实例16中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-(3-羟基氮杂环丁烷-1-基)乙基)己酸二盐酸盐单水合物，但在步骤6中使用氮杂环丁烷-3-醇作为胺。1HNMR(D2O,500MHz)δ4.65-4.60(m,1H),4.50-4.46(m,1H),4.21-4.17(m,1H),4.10-4.08(m,1H),3.86-3.82(m,1H),3.48-3.37(m,1H),3.30-3.19(m,1H),2.09-2.04(m,2H),1.90-1.85(m,1H),1.78-1.73(m,1H),1.35-1.28(m,3H),1.19-1.10(m,1H),0.70(t,J＝7.0Hz,2H)。C11H23BN2O5的ESI MS实验值m/z[275.5(M+1)5％,257.5(M+1-18)11％,239.4(M+1-2×18)100％,273.5(M-1)10％,255.5(M–1-18)100％]。
实例60：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-(1-丁基环丙基氨基)乙基)己酸二盐酸盐
按与实例16中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-(1-丁基环丙基氨基)乙基)己酸二盐酸盐，但在步骤6中使用1-丁基环丙胺作为胺和二水合物。1H NMR(D2O,500MHz)δ3.33-3.27(m,1H),3.12-3.07(m,1H),2.15(t,J＝8.0Hz,2H),1.91-1.86(m,1H),1.79-1.73(m,1H),1.66-1.56(m,2H),1.36-1.30(m,3H),1.26(brs,4H),1.17-1.11(m,1H),0.89(s,2H),0.79-0.77(m,5H),0.70(t,J＝7.0Hz,2H)。C15H31BN2O4的ESI MS实验值m/z[297.6(M+1-18)22％,279.5(M+1-2×18)100％,261.6(M+1–3×18)17％,313.6(M-1)19％,295.6(M–1-18)100％]。C15H31BN2O4×2HCl×2H2O的分析计算值：C,42.57；H,8.81；N,6.62。实验值C,41.19；H,8.24；N,6.57。
实例61：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-(1-(4-甲氧基苯甲基)环丙基氨基)乙基)己酸
按与实例16中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-(1-(4-甲氧基苯基)环丙基氨基)乙基)己酸二盐酸盐，但在步骤6中使用1-(4-甲氧基苯基)环丙胺作为胺和二水合物。1H NMR(D2O,500MHz)δ7.26(d,J＝8.0Hz,2H),6.92(d,J＝8.0Hz,2H),3.73(s,3H),3.29-3.249(m,1H),3.11-3.05(m,1H),2.97(d,J＝16.0Hz,1H),2.93(d,J＝16.0Hz,1H),2.07-2.00(m,2H),1.78-1.73(m,1H),1.67-1.62(m,1H),1.34-1.29(m,2H),1.27-1.21(m,1H),1.12-1.07(m,1H),1.00(s,2H),0.94(s,2H),0.69(t,J＝8.0Hz,2H)。C19H31BN2O5的ESI MS实验值m/z[361.6(M+1-18)16％,343.6(M+1–2×18)100％,325.5(M+1–3×18)16％,377.7(M-1)17％,359.6(M–1-18)100％]。C19H31BN2O5×2HCl×2H2O的分析计算值：C,46.84；H,7.65；N,5.75。实验值C,46.94；H,7.58；N,5.95。
实例62：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-(4,5-二氢噻吩并[2,3-c]吡啶-6(7H)-基)乙基)己酸二盐酸盐
按与实例16中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-(4,5-二氢噻吩并[2,3-c]吡啶-6(7H)-基)乙基)己酸二盐酸盐单水合物，但在步骤6中使用4,5,6,7-四氢噻吩并[2,3-c]吡啶作为胺。1H NMR(D2O,500MHz)δ7.23(d,J＝5.0Hz,1H),6.86(d,J＝5.0Hz,1H),[4.64(d,J＝14.0Hz),4.34(d,J＝14.0Hz),2H,AB系统],3.77-3.73(m,1H),3.55-3.37(m,2H),3.34-3.26(m,1H),2.99(brs,2H),2.35-2.30(m,2H),1.88-.93(m,1H),1.76-1.82(m,1H),1.29-1.39(m,3H),1.12-1.19(m,1H),0.70(t,J＝7.0Hz,2H)。C15H25BN2O4S的ESI MS实验值m/z[341.5(M+1)1％,323.5(M+1-18)12％,305.5(M+1–2×18)100％,661.9(2M-1-18)4％,(339.5(M-1)34％,321.5(M–1-18)100％]。
实例63：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-(3-(3,4-二氟苯基)丙基氨基)乙基)己酸二盐酸盐
按与实例16中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-(3-(3,4-二氟苯基)丙基氨基)乙基)己酸二盐酸盐单水合物，但在步骤6中使用3-(3,4-二氟苯基)丙-1-胺作为胺。1H NMR(D2O,500MHz)δ7.13-7.00(m,2H),6.95-6.89(m,1H),3.20-3.05(m,1H),3.01-2.91(m,3H),2.60(t,J＝8.0Hz,2H),2.15(t,J＝8.0Hz,2H),1.96-1.73(m,4H),1.36-1.25(m,3H),1.22-1.06(m,1H),0.68(t,J＝7.0Hz,2H)。19F NMR–142.00(d,J＝22.0Hz,1F),–138.58(d,J＝22.0Hz,1F)。C17H27BF2N2O4的ESI MS实验值m/z[355.6(M+1-18)20％,337.6(M+1–2×18)90％,319.5(M+1–3×18)100％,371.6(M-1)20％,353.6(M–1-18)100％]。
实例64：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-(3-(2-氯-5-(三氟甲基)苯基)丙基氨基)乙基)己酸二盐酸盐
按与实例16中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-(3-(2-氯-5(三氟甲基)苯基)丙基氨基)乙基)己酸二盐酸盐单水合物，但在步骤6中使用3-(2-氯-5-(三氟甲基)苯基)丙-1-胺作为胺。1H NMR(D2O,500MHz)δ7.56(s,1H),7.48(d,J＝8.0Hz,1H),7.44(d,J＝8.0Hz,1H),3.19-3.13(m,1H),3.01(t,J＝8.0Hz,2H),2.99-2.95(m,1H),2.79(t,J＝8.0Hz,2H),2.13(t,J＝8.0Hz,2H),1.91(tt,J＝8.0,8.0Hz,2H),1.87-1.81(m,1H),1.75-1.69(m,1H),1.33-1.25(m,3H),1.15-1.08(m,1H),0.66(t,J＝7.0Hz,2H)。19FNMR–61.66(s,3F)。C18H27BClF3N2O4的ESI MS实验值m/z[421.6/423.6(M+1-18)38％,403.6/405.6(M+1–2×18)75％,367.6(M+1-2×18-Cl-)100％,437.6/439.7(M-1)30％,419.6/421.6(M–1-18)100％,383.6(M–1-18-Cl-)30％]。
实例65：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-(3-(3-甲氧基苯基)丙基氨基)乙基)己酸二盐酸盐
按与实例16中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-(3-(3-甲氧基苯基)丙基氨基)乙基)己酸二盐酸盐单水合物，但在步骤6中使用3-(3-甲氧基苯基)丙-1-胺作为胺。1H NMR(D2O,500MHz)δ7.16-7.13(m,1H),6.75-6.71(m,3H),3.64(s,3H),3.11-3.04(m,1H),2.93-2.83(m,3H),2.53(t,J＝8.0Hz,2H),2.06(t,J＝8.0Hz,2H),1.85-1.75(m,3H),1.68-1.60(m,1H),1.27-1.17(m,3H),1.10-1.00(m,1H),0.60(t,J＝8.0Hz,2H)。C18H31BN2O5的ESI MS实验值m/z[389.7(M+Na+)5％,331.6(M+1-2×18)70％,313.6(M+1–3×18)100％]。
实例66：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-(3-(2,4-二氯苯基)丙基氨基)乙基)己酸二盐酸盐
按与实例16中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-(3-(2,4-二氯苯基)丙基氨基)乙基)己酸二盐酸盐，但在步骤6中使用3-(2,4-二氯苯基)丙-1-胺作为胺。1H NMR(D2O,500MHz)δ7.24(m,1H),7.06(m,2H),3.12-3.06(m,1H),2.95-2.89(m,3H),2.58(t,J＝8.0Hz,2H),2.11(t,J＝8.0Hz,2H),1.84-1.74(m,3H),1.70-1.65(m,1H),1.25-1.15(m,3H),1.10-1.00(m,1H),0.56(t,J＝7.0Hz,2H)。13C NMR(D2O)δ23.24,25.07,25.10,29.00,31.30,35.05,42.84,47.52,62.48,125.78,127.14,128.84,131.25,132.65,133.84,136.37,172.94。C17H27BCl2N2O4的ESI MS实验值m/z[387.5(M+1-18)20％,369.5(M+1–2×18)100％,385.5(M–1-18)100％]。C17H27BCl2N2O4的分析计算值：C,42.67；H,6.06)；N,5.85)。实验值：C,42.53；H,6.00；N,5.68。
实例67：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-(叔丁基氨基)乙基)己酸二盐酸盐
按与实例16中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-(叔丁基氨基)乙基)己酸二盐酸盐单水合物，但在步骤6中使用叔丁基胺作为胺。1H NMR(D2O,500MHz)δ3.11-3.05(m,1H),2.89-2.83(m,1H),2.13-2.06(m,2H),1.86-1.81(m,1H),1.75-1.69(m,1H),1.28-1.22(m,3H),1.17(s,9H),1.09-1.02(m,1H),0.61(t,J＝8.0Hz,2H)。C12H27BN2O4的ESI MS实验值m/z[239.5(M+1–2×18)100％,255.5(M–1-18)90％]。
实例68：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-(环丙基氨基)乙基)己酸二盐酸盐
按与实例16中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-(环丙基氨基)乙基)己酸二盐酸盐单水合物，但在步骤6中使用环丙胺作为胺。1H NMR(D2O,500MHz)δ3.32-3.25(m,1H),3.14-3.10(m,1H),2.69-2.63(m,1H),2.25-2.16(m,2H),1.90-1.86(m,1H),1.80-1.75(m,1H),1.39-1.24(m,3H),1.15-1.08(m,1H),0.81-0.76(m,4H),0.75-0.68(m,2H)。C11H23BN2O4的ESI MS实验值m/z[223.4(M+1-2×18)30％,205.4(M+1–3×18),60％,239.5(M-1-18)100％]。
实例69：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-(4-甲氧基苯甲基氨基)乙基)己酸二盐酸盐
按与实例16中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-(4-甲氧基苯甲基氨基)乙基)己酸二盐酸盐单水合物，但在步骤6中使用(4-甲氧基苯基)甲胺作为胺。1HNMR(D2O,500MHz)δ7.28(d,J＝8.0Hz,2H),6.70(d,J＝8.0Hz,2H),4.09(d,J＝14.0Hz,1H),4.06(d,J＝14.0Hz,1H),3.69(s,3H),3.19-3.14(m,1H),3.02-2.96(m,1H),2.16(t,J＝8.0Hz,2H),1.82-1.77(m,1H),1.72-1.67(m,1H),1.30-1.18(m,3H),1.10-1.02(m,1H),0.61(t,J＝7.0Hz,2H)。C16H27BN2O5的ESI MS实验值m/z[319.6(M–1-18)100％,321.5(M+1-18)60％,303.6(M+1–2×18)100％]。
实例70：制备2-氨基-2-(2-(苯甲基氨基)乙基)-6-二羟硼基己酸二盐酸盐
按与实例16中所述方式类似的方式制备2-氨基-2-(2-(苯甲基氨基)乙基)-6-二羟硼基己酸二盐酸盐单水合物，但在步骤6中使用苯甲胺作为胺。1H NMR(D2O,500MHz)δ7.42-7.38(m,1H),7.36-7.32(m,4H),4.13(s,2H),3.23-3.17(m,1H),3.05-2.99(m,1H),2.18(t,J＝8.0Hz,2H),1.88-1.78(m,1H),1.74-1.69(m,1H),1.30-1.18(m,3H),1.10-1.06(m,1H),0.63(t,J＝7.0Hz,2H)。C15H25BN2O4的ESI MS实验值m/z[273.5(M+1–2×18)80％,255.6(M+1–3×18)100％]。
实例71：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)乙基)己酸三盐酸盐
按与实例16中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)乙基)己酸三盐酸盐，但在步骤6中使用N1,N1,N2-三甲基乙-1,2-二胺作为胺。分离出呈三盐酸盐和单水合物形式的最终化合物。1H NMR(D2O,500MHz)δ3.58-3.52(m,4H),3.45-3.39(m,1H),3.27-3.22(m,1H),2.89(s,9H),2.33-2.23(m,2H),1.92-1.86(m,1H),1.81-1.75(m,1H),1.35-1.29(m,3H),1.18-1.13(m,1H),0.70(t,J＝8.0Hz,2H)。C13H30BN3O4的ESI MS实验值m/z[268.5(M+1–2×18)100％,286.6(M+1-18)7％]。
实例72：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-(环戊基氨基)乙基)己酸二盐酸盐
按与实例16中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-(环戊基氨基)乙基)己酸二盐酸盐单水合物，但在步骤6中使用环戊胺作为胺。1H NMR(D2O,500MHz)δ3.55-3.43(m,1H),3.20-3.13(m,1H),3.03-2.92(m,1H),2.21-2.15(m,2H),2.01-1.92(m,2H),1.90-1.82(m,1H),1.81-1.71(m,1H),1.67-1.57(m,2H),1.55-1.45(m,4H),1.36-1.25(m,3H),1.18-1.08(m,1H),0.60-0.71(m,2H)。C13H27BN2O4的ESI MS实验值m/z[251.5(M+1–2×18)100％,233.5(M+1–3×18)70％]。
实例73：制备2-氨基-2-(2-((2-氨基乙基)(苯甲基)氨基)乙基)-6-二羟硼基己酸三盐酸盐
按与实例16中所述方式类似的方式制备2-氨基-2-(2-((2-氨基乙基)(苯甲基)氨基)乙基)-6-二羟硼基己酸三盐酸盐，但在步骤6中使用2-(苯甲基氨基)乙基氨基甲酸叔丁基酯作为胺。分离出呈三盐酸盐和单水合物形式的最终化合物。1H NMR(D2O,500MHz)δ7.50-7.43(m,5H),[4.52(d,J＝13.0Hz,1H),4.22(d,J＝13.0Hz,1H),AB系统],3.56-3.50(m,1H),3.46-3.37(m,4H),3.24-3.19(m,1H),2.31(dt,J1＝16.0Hz,J2＝8.0Hz,1H),2.08-1.99(m,1H),1.39-1.22(m,2H),1.14-1.04(m,3H),1.01-0.91(m,1H),0.57(t,J＝6.0Hz,2H)。C17H30BN3O4的ESI MS实验值m/z[316.5(M+1–2×18)100％,298.6(M+1–3×18)20％,332.6(M–1-18)100％]。
实例74：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-((4-异丙氧基苯甲基)(甲基)氨基)乙基)己酸二盐酸盐
按与实例16中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-((4-异丙氧基苯甲基)(甲基)氨基)乙基)己酸二盐酸盐单水合物，但在步骤6中使用1-(4-异丙氧基苯基)-N-甲基甲胺作为胺。1H NMR(D2O,500MHz)δ[7.36(d,J＝9.0Hz,第二旋转异构体),2H,7.34(d,J＝9.0Hz,第一旋转异构体)],6.99(d,J＝9.0Hz,2H),4.67-4.61(m,1H),[4.30(d,J＝13.0Hz,第一旋转异构体),4.28(d,J＝13.0Hz,第二旋转异构体),1H],[4.16(d,J＝13.0Hz,第一构象异构体),4.09(d,J＝13.0Hz,第二构象异构体),1H],3.24-3.14(m,1H),[3.05-3.11(m,第二旋转异构体),2.96-3.01(m,第一旋转异构体),1H],[2.78(s,第一旋转异构体),2.73(s,第二旋转异构体),3H],2.31-2.21(m,1H),[2.15-2.09(m,第二旋转异构体),2.04-1.96(m,第一旋转异构体),1H],1.32-1.27(m,2H),1.24(d,J＝6.0Hz,6H),1.20-1.06(m,3H),1.01-0.93(m,1H),[0.66(t,J＝8.0Hz,第一旋转异构体),0.58(t,J＝8.0Hz,第二旋转异构体),2H]。C19H33BN2O5的ESI MS实验值m/z[363.6(M+1-18)70％,345.5(M+1–2×18)100％]。
实例75：制备2-氨基-2-(2-(氮杂环丁烷-1-基)乙基)-6-二羟硼基己酸二盐酸盐
按与实例16中所述方式类似的方式制备2-氨基-2-(2-(氮杂环丁烷-1-基)乙基)-6-二羟硼基己酸二盐酸盐单水合物，但在步骤6中使用氮杂环丁烷作为胺。1H NMR(D2O,500MHz)δ4.24-4.15(m,2H),4.05-3.93(m,2H),3.39-3.32(m,1H),3.22-3.13(m,1H),2.54-2.41(m,1H),2.39-2.29(m,1H),2.00(t,J＝8.0Hz,2H),1.88-1.80(m,1H),1.77-1.67(m,1H),1.36-1.23(m,3H),1.19-1.08(m,1H),0.69(t,J＝7.0Hz,2H)。C11H23BN2O4的ESI MS实验值m/z[241.5(M+1-18)7％,223.4(M+1–2×18)100％]。
实例76：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-(4-苯基哌嗪-1-基)乙基)己酸二盐酸盐
按与实例16中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-(4-苯基哌嗪-1-基)乙基)己酸二盐酸盐单水合物，但在步骤6中使用1-苯基哌嗪作为胺。1H NMR(D2O,500MHz)δ7.31(t,J＝8.0Hz,2H),7.04(d,J＝8.0Hz,2H),7.00(t,J＝8.0Hz,1H),3.44-3.20(m,8H),3.13-3.03(m,2H),2.25-2.12(m,2H),1.88-1.79(m,1H),1.77-1.66(m,1H),1.39-1.27(m,3H),1.19-1.11(m,1H),0.71(t,J＝8.0Hz,2H)。C18H30BN3O4的ESI MS实验值m/z[344.5(M–1-18)100％,328.6(M+1–2×18)100％]。
实例77：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-(4-(2-甲氧基乙基)哌嗪-1-基)乙基)己酸三盐酸盐
按与实例16中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-(4-(2-甲氧基乙基)哌嗪-1-基)乙基)己酸三盐酸盐单水合物，但在步骤6中使用1-(2-甲氧基乙基)哌嗪作为胺。C15H32BN3O5的ESI MS实验值m/z[310.6(M+1–2×18)89％,328.6(M+1-18)3％,326.6(M–1-18)13％]。
实例78：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-((2-羟基-2-苯基乙基)(甲基)氨基)乙基)己酸二盐酸盐
按与实例16中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-((2-羟基-2-苯基乙基)(甲基)氨基)乙基)己酸二盐酸盐单水合物，但在步骤6中使用2-(甲基氨基)-1-苯基乙醇作为胺。C17H29BN2O5的ESI MS实验值m/z[317.5,(M+1–2×18)20％,299.5(M+1–3×18)100％]。
实例79：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(哌啶-1-基甲基)己酸
步骤1：2-(苯甲氧基羰基氨基)-2-(丁-3-烯基)丙二酸二乙酯
在0℃下用含经二乙基苯甲氧羰基保护的氨基丙二酸酯(6.0g，19.4mmol)的二甲基甲酰胺(30mL)处理氢化钠(510mg，21.24mmol，60％悬浮液)于二甲基甲酰胺(30mL)中的悬浮液。搅拌30分钟后，添加溴丁烯(2.89g，21.43mmol，1.92mL)并将所得溶液升温到90℃，且再搅拌4小时。反应混合物用乙酸乙酯(200mL)稀释并依序用水(2×100mL)和氯化钠饱和水溶液(1×100mL)洗涤。蒸发有机层至干后，通过快速制备色谱法(combiflash)(80g二氧化硅柱，用含15-50％乙酸乙酯的庚烷洗脱)纯化所得残余物，得到2-(苯甲氧基羰基氨基)-2-(丁-3-烯基)丙二酸二乙酯(4.8g，67％)。1H NMR(CDCl3)δ7.36(m,5H),7.26-6.93(m,1H),6.20(bs,1H),5.75(m,1H),5.11(s,2H),5.04-4.04(m,2H),4.24(m,4H),2.43(m,2H),1.96-1.93(m,2H),1.27-1.21(m,6H)。C19H25NO6的MS实验值m/z[364(M+1)]
步骤2：2-(苯甲氧基羰基氨基)-2-(乙氧基羰基)己-5-烯酸
将2-(苯甲氧基羰基氨基)-2-(丁-3-烯基)丙二酸二乙酯(4.8g，13.23mmol)于乙醇(45mL)中的溶液冷却到-30℃并用氢氧化钾水溶液(1.55g，27.76mmol于15mL水中)处理。添加完成后，使溶液升温到0℃，保持30分钟，随后升温到室温，保持1小时。当反应完成时，混合物用AcOH(1.8g)酸化并用乙酸乙酯(1×50mL)萃取。用3N盐酸将水层酸化到pH 3，并用乙酸乙酯(2×50mL)萃取。合并的有机层用氯化钠饱和水溶液(1×50mL)洗涤，经MgSO4干燥并浓缩，得到2-(苯甲氧基羰基氨基)-2-(乙氧基羰基)己-5-烯酸(3.0g，68％)。1H NMR(CDCl3)δ10.00(bs,1H),7.37(m,5H),7.26-6.93(m,1H),6.21(bs,1H),5.76(m,1H),5.94-5.22(m,4H),4.27(m,2H)2.43(m,2H),1.96-1.93(m,2H),1.27-1.21(m,3H)。C17H21NO6的MS实验值m/z[336(M+1)]。
步骤3：2-(苯甲氧基羰基氨基)-2-(羟甲基)己-5-烯酸乙酯
将2-(苯甲氧基羰基氨基)-2-(乙氧基羰基)己-5-烯酸(1.54g，4.6mmol)和三乙胺(557mg，5.52mmol，0.76mL)于四氢呋喃(10mL)中的溶液冷却到-30℃，并用氯甲酸乙酯(522mg，4.82mmol，0.46mL)处理，且搅拌30分钟。添加硼氢化钠(175mg，4.6mmol)于水(2mL)中的溶液，并搅拌混合物30分钟。一旦反应完成，就添加3N盐酸(1mL)，并将混合物用乙酸乙酯(50mL)稀释，用水(1×50mL)洗涤并用乙酸乙酯(1×50mL)萃取。浓缩合并的有机层，并使用快速制备色谱系统(2×12g硅胶柱，用含10-50％乙酸乙酯的庚烷洗脱)纯化，得到2-(苯甲氧基羰基氨基)-2-(羟甲基)己-5-烯酸乙酯(700mg，48％)。1H NMR(CDCl3)δ7.29(m,5H),5.82(bs,1H),5.68-5.62(m,1H),5.03(s,1H),4.94-4.86(m,2H),4.17(m,2H)3.76(dd,J＝11.4Hz,1H),1.97(m,2H),1.77(m,2H),1.21(t,J＝7.2Hz,3H)。C17H23NO5的MS实验值m/z[322(M+1)]。
步骤4：4-(丁-3-烯基)-2，2-二甲基噁唑烷-3，4-二甲酸3-苯甲酯4-乙酯
用2,2-二甲氧基丙烷(2mL)和4-甲苯磺酸(100mg)处理2-(苯甲氧基羰基氨基)-2-(羟甲基)己-5-烯酸乙酯4(820mg，2.55mmol)于甲苯(10mL)中的溶液。在回流下加热混合物1小时，冷却，浓缩并使用快速制备色谱系统(12g硅胶柱，用含5-50％乙酸乙酯的庚烷洗脱)纯化，得到4-(丁-3-烯基)-2,2-二甲基噁唑烷-3,4-二甲酸3-苯甲酯4-乙酯(530mg，57％)。1H NMR(CDCl3)δ7.36(m,5H),5.75(m,1H),4.51(m,4H),4.06(m,4H)2.08(m,4H),1.65(2s,6H),1.13(t,J＝7.1Hz,3H)。C20H27NO5的MS实验值m/z[332(M+1)]。
步骤5：2,2-二甲基-4-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)丁基)噁唑烷-3,4-二甲酸3-苯甲酯4-乙酯
在氩气氛围下，用频那醇硼烷(225mg，1.76mmol，0.26mL)处理氯(1,5-环辛二烯)铱(I)二聚物(15mg，0.022mmol)和1,2-双(二苯基-膦基)乙烷(18mg，0.044mmol)于二氯甲烷(5mL)中的溶液，并搅拌15分钟。向此混合物中添加4-(丁-3-烯基)-2,2-二甲基噁唑烷-3,4-二甲酸3-苯甲酯4-乙酯(530mg，1.47mmol)于二氯甲烷(5mL)中的溶液。在室温下搅拌19小时后，浓缩溶液并使用快速制备色谱系统(24g柱，用含5-50％(乙酸乙酯的庚烷洗脱)纯化，得到2,2-二甲基-4-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)丁基)噁唑烷-3,4-二甲酸3-苯甲酯4-乙酯(470mg，65％)。1H NMR(CDCl3)δ:7.22(m,5H),5.01(m,2H),3.91(m,4H),2.20-2.01(m,1H),1.75(m,1H),1.51(2s,6H),1.29(m,4H),1.16(s,12H),1.02(t,J＝7.2Hz,3H),0.69(t,2H)。C26H40BNO7的MS实验值m/z[490(M+1),522(M+Na)]。
步骤6：2-(苯甲氧基羰基氨基)-2-(羟甲基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)己酸乙酯
在氩气氛围下，将2,2-二甲基-4-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)丁基)噁唑烷-3,4-二甲酸3-苯甲酯4-乙酯(350mg，0.72mmol)于二氯甲烷(5mL)中的溶液冷却到-40℃，并小心地用三甲基硅烷基三氟甲烷磺酸酯(1.09g，4.29mmol，0.94mL)处理。搅拌30分钟后，使溶液升温到0℃，再搅拌2小时，浓缩并使用快速制备色谱系统(12g硅胶柱，用含20-100％乙酸乙酯的庚烷洗脱)纯化，得到2-(苯甲氧基羰基氨基)-2-(羟甲基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)己酸乙酯(180mg，56％)。1HNMR(CDCl3)δ7.38-7.31(m,5H),5.81(bs,1H),5.10(s,2H),4.25-4.23(m,3H),3.84(d,1H),2.84(m,1H),1.76-1.68(m,1H),1.41-1.35(m,2H),1.28(t,3H),1.23(s,12H),1.11-1.03(m,1H),1.29(m,4H),0.75(t,2H)。C23H36BNO7的MS实验值m/z[450(M+1)]。
步骤7：2-(苯甲氧基羰基氨基)-2-甲酰基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)己酸乙酯
在氩气氛围下，将草酰氯(1.56g，12.4mmol，0.98mL)于二氯甲烷(15mL)中的溶液冷却到-78℃，并用二甲亚砜(1.94g，1.8mL，24.84mmol)处理，并搅拌10分钟。向此混合物中添加含2-(苯甲氧基羰基氨基)-2-(羟甲基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)己酸乙酯(2.79g，6.21mmol)的无水二氯甲烷(15mL)，并搅拌混合物30分钟。通过在-78℃下添加三乙胺(3.76g，5.2mL，37.26mmol)并使反应混合物缓慢升温到室温来淬灭反应混合物。混合物用二氯甲烷(25mL)稀释并依序用水(2×25mL)和氯化钠饱和水溶液(25mL)洗涤。有机层经硫酸镁干燥，过滤并蒸发至干。使用快速制备色谱系统(40g柱，用含20-40％乙酸乙酯的庚烷洗脱)纯化所得残余物，得到2-(苯甲氧基羰基氨基)-2-甲酰基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)己酸乙酯(2.4g，86％)。1H NMR(CDCl3)δ:9.49(s,1H),7.28(m,5H),5.85(bs,1H),5.03(s,2H),4.17,2.17-2.09(m,2H),1.38-1.28(m,4H),1.25-1.20(m,5H),1.19(s,12H),0.68(t,J＝7.8Hz,2H)。C23H34BNO7的MS实验值m/z[471(M+Na)]。
步骤8：2-(苯甲氧基羰基氨基)-2-(哌啶-1-基甲基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)己酸乙酯
将2-(苯甲氧基羰基氨基)-2-甲酰基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)己酸乙酯(0.503g，1.13mmol)、哌啶(0.39mL，4mmol)和乙酸(0.23mL，4mmol)于1,2-二氯乙烷(20mL)中的溶液搅拌15分钟，随后用三乙酰氧基硼氢化钠(0.85g，4mmol)处理。在65℃下搅拌2小时后，将溶液冷却到室温并浓缩。使用快速制备色谱系统(12g硅胶柱，含10-100％乙酸乙酯的庚烷)纯化所得残余物，得到2-(苯甲氧基羰基氨基)-2-(哌啶-1-基甲基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)己酸乙酯(300mg，52％)。1H NMR(CDCl3)δ:7.36(m,5H),6.05(bs,1H),5.14(d,1H),5.03(d,J＝11.2Hz,1H),4.19(m,2H),3.06(d,J＝13.8Hz,1H,),2.59(d,J＝13.8Hz,1H),2.34(m,4H),2.15(m,1H),1.78-1.70(m,1H),1.45-1.25(m,12H),1.22(s,12H),1.02(m,1H),0.73(t,J＝7.8Hz,2H)。C28H45BN2O7的MS实验值m/z[517(M+1)]。
步骤9：2-氨基-6-二羟硼基-2-(哌啶-1-基甲基)己酸二盐酸盐
将2-(苯甲氧基羰基氨基)-2-(哌啶-1-基甲基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)己酸乙酯(0.26g，0.51mmol)于6N HCl(20mL)中的溶液加热到轻微回流，保持48小时。冷却到室温后，溶液用二氯甲烷(5×15mL)洗涤并浓缩(水层)。将所得残余物溶解于水(3mL)中并使其通过阳离子交换树脂道埃科斯50-200(Dowex 50-200)，用2N氨洗脱(将4g树脂装载到柱上，依序用水、1N HCl、水洗涤达到中性pH，用2N氨溶液和水洗涤达到中性pH)。浓缩含产物部分，用极少量水稀释，用6N HCl酸化，冷冻并冻干，得到2-氨基-6-二羟硼基-2-(哌啶-1-基甲基)己酸二盐酸盐。(60mg，43％)。1H NMR(D2O)δ3.64-3.53(m,1H),3.34(d,J＝13.9Hz,1H),3.05-3.03(m,2H),2.93-2.91(m,3H),1.76-1.67(m,5H),1.53-1.46(m,3H),1.31-1.30(m,3H),1.09-1.07(m,1H),0.70(t,J＝7.3Hz,2H)。C12H25BN2O4的MS实验值m/z[254(M-18+1)]。
实例80：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)己酸三盐酸盐
按与实例79中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)己酸二盐酸盐，但在步骤8中使用1-甲基哌嗪作为胺。分离出呈三盐酸盐形式的最终化合物。1HNMR(D2O)δ2.93(d,J＝14.2Hz,1H),2.64(bs 1H),2.50(d,J＝14.3Hz,1H),2.33(s,3H),1.77-1.65(m,1H),1.50-1.43(m,1H),1.33-1.30(m,3H),1.15-1.05(m,1H),0.69(t,J＝8.2Hz,2H)。C12H26BN3O4的MS实验值m/z[270(M–18+1)]。
实例81：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-((N-吗啉基)甲基)己酸二盐酸盐
按与实例79中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-((N-吗啉基)甲基)己酸二盐酸盐，但在步骤8中使用吗啉作为胺。分离出呈二盐酸盐形式的最终化合物。1HNMR(D2O)δ3.65(m,4H),2.95(d,J＝14.3Hz,1H),2.62-2.56(m,2H),2.49(d,J＝14.4Hz,1H),2.47-2.41(m,2H),1.80-1.70(m,1H),1.54-1.47(m,1H),1.34-1.32(m,3H),1.16-1.12(m,1H),0.72(t,J＝8.1Hz,2H)。C12H23BN2O5的MS实验值m/z[257.1(M–18+1)]。
实例82：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(羟甲基)己酸盐酸盐
按与实例79中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(羟甲基)己酸盐酸盐，但在步骤8中使用硼氢化钠代替三乙酰氧基硼氢化钠并且不使用胺。分离出呈盐酸盐形式的最终化合物。1HNMR(D2O)δ3.81(d,J＝12.0Hz,1H),3.55(d,J＝12.0Hz,1H),1.73-1.52(m,2H),1.39-1.06(m,4H),0.67(t,J＝7.4Hz,2H)。C7H16BNO5的MS实验值m/z[188.1(M–18+1)]。
实例83：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-((丙基氨基)甲基)己酸二盐酸盐
步骤1：2-(丁-3-烯基)-2-(叔丁氧基羰基氨基)丙二酸二乙酯
在0℃下向氢化钠(8.7g，218mmol，60％悬浮液)于二甲基甲酰胺(250mL)中的悬浮液中添加含2-(叔丁氧基羰基氨基)丙二酸二乙酯(50.0g，182mmol)的二甲基甲酰胺(250mL)。搅拌30分钟后，添加4-溴丁-1-烯(29.5g，218mmol，22.2mL)，并将混合物升温到90℃。再搅拌4小时后，将溶液冷却到室温，并通过蒸发移除溶剂。所得残余物用乙酸乙酯(1.0L)稀释，依序用水(2×250mL)、氯化钠饱和水溶液(1×200mL)洗涤，并且浓缩。使用快速制备色谱系统(330g二氧化硅柱，用含15-50％乙酸乙酯的庚烷洗脱)纯化，得到2-(丁-3-烯基)-2-(叔丁氧基羰基氨基)丙二酸二乙酯(54g，90％)。1H NMR(CDCl3)δ5.92(bs,1H),5.79-5.71(m,1H),5.03-4.93(m,2H),4.24-4.19(m,4H),2.36(m,2H),1.96-1.93(m,2H),1.42(s,9H),1.27-1.24(m,6H)。
步骤2：2-(叔丁氧基羰基氨基)-2-(乙氧基羰基)己-5-烯酸
将2-(丁-3-烯基)-2-(叔丁氧基羰基氨基)丙二酸二乙酯(10.0g，30.4mmol)于乙醇(100mL)中的溶液冷却到0℃并用氢氧化钠水溶液(1N,31mL)处理。搅拌30分钟后，移除冷却浴并且再持续搅拌19小时。通过蒸发移除溶剂且所得残余物用水(150mL)稀释并用乙酸乙酯(2×100mL)洗涤。水层用浓盐酸酸化到pH 2，并用乙酸乙酯(2×150mL)萃取。合并的有机层用氯化钠饱和水溶液(1×100mL)洗涤，经MgSO4干燥，过滤并浓缩，得到2-(叔丁氧基羰基氨基)-2-(乙氧基羰基)己-5-烯酸(8.2g，82％)。1H NMR(CDCl3)δ5.87-5.75(m,1H),5.06-5.02(m,2H),4.26(m,2H),2.34(m,2H),1.96-1.93(m,2H),1.43(s,9H),1.29(m,3H)。
步骤3：2-(叔丁氧基羰基氨基)-2-(羟甲基)己-5-烯酸乙酯
将2-(叔丁氧基羰基氨基)-2-(乙氧基羰基)己-5-烯酸(7.5g，24.9mmol)和三乙胺(3.01g，29.9mmol，4.15mL)于THF(10mL)中的溶液冷却到-40℃，并用氯甲酸乙酯(2.97g，27.4mmol，2.65mL)处理。搅拌30分钟后，通过过滤移除沉淀(三乙胺盐酸盐)并收集滤液，且将其冷却到-40℃。添加硼氢化钠(950mg，24.9mmol)于水(10mL)中的溶液并将所得溶液搅拌30分钟。用3N盐酸(5mL)淬灭反应混合物后，混合物用乙酸乙酯(150mL)稀释，用水(1×50mL)洗涤并用乙酸乙酯(1×150mL)萃取。浓缩合并的有机层，经MgSO4干燥，过滤并使用快速制备色谱系统(80g硅胶柱，用含10-50％乙酸乙酯的庚烷洗脱)纯化，得到2-(叔丁氧基羰基氨基)-2-(羟甲基)己-5-烯酸乙酯(5.6g，78％)。1H NMR(CDCl3)δ5.71-5.62(m,1H),5.52(bs,1H),4.96-4.87(m,2H),4.20-4.12(m,2H)4.07-4.03(m,2H),3.73(d,J＝12.0Hz,1H),2.22-1.62(m,4H),1.37(m,9H),1.22(t,J＝7.2Hz,3H)。
步骤4：2-(乙酰氧基甲基)-2-(叔丁氧基羰基氨基)己-5-烯酸乙酯
用乙酸酐处理2-(叔丁氧基羰基氨基)-2-(羟甲基)己-5-烯酸乙酯(10.0g，35mmol)和二甲基氨基吡啶(4.48g，35mmol)于二氯甲烷(100mL)中的溶液并在室温下搅拌过夜。浓缩溶液，并且使用快速制备色谱系统(89g柱，用含20-50％乙酸乙酯的庚烷洗脱)纯化所得残余物，得到2-(乙酰氧基甲基)-2-(叔丁氧基羰基氨基)己-5-烯酸乙酯(10g，80％)。1H NMR(CDCl3)δ5.78-5.68(m,1H),5.55(bs,1H),5.03-4.93(m,2H),4.73(d,J＝11.0Hz,1H)4.32(d,J＝11.0Hz,1H,),4.20(q,J＝7.2Hz,2H),2.36(m,1H),2.07-2.05(m,1H),2.02(s,3H),1.89-1.75(m,2H),1.43(m,9H),1.27(t,J＝7.2Hz,3H)。C16H27NO6的MS实验值m/z[330(M+1)]。
步骤5：2-(乙酰氧基甲基)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)己酸乙酯
在氩气氛围下，用频那醇硼烷(7.78g，61mmol，8.8mL)处理氯(1,5-环辛二烯)铱(I)二聚物(160mg，0.23mmol)和1,2-双(二苯基-膦基)乙烷(190mg，0.48mmol)于二氯甲烷(50mL)中的溶液，并搅拌15分钟。向此混合物中添加2-(乙酰氧基甲基)-2-(叔丁氧基羰基氨基)己-5-烯酸乙酯(10g，30.4mmol)于二氯甲烷(50mL)中的溶液。在室温下搅拌19小时后，浓缩溶液并使用快速制备色谱系统(120g柱，用含5-50％乙酸乙酯的庚烷洗脱)纯化，得到2-(乙酰氧基甲基)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)己酸乙酯(7.5g，54％)。1H NMR(CDCl3)δ5.49(bs,1H),4.72(d,1H),4.33(d,1H),4.23(q,2H),2.18(m,1H),2.01(s,3H),1.69(m,2H),1.43(s,9H),1.29(m,4H),1.23(s,12H),0.88(t,3H),0.74(t,2H)。C22H40BNO8的MS实验值m/z[480(M+Na)]。
步骤6：2-(叔丁氧基羰基氨基)-2-(羟甲基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)己酸乙酯
用固体碳酸钾(3.62g，26.3mmol)处理2-(乙酰氧基甲基)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)己酸乙酯(12.0g，26.3mmol)于乙醇(100mL)中的溶液，并搅拌2小时。过滤溶液并将滤液蒸发至干。将所得残余物溶解于乙酸乙酯(150mL)中，并依序用水(50mL)和氯化钠饱和水溶液(50mL)洗涤。浓缩有机层并使用快速制备色谱系统(120g柱，用含20-30％乙酸乙酯的庚烷洗脱)纯化，得到2-(叔丁氧基羰基氨基)-2-(羟甲基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)己酸乙酯(7.0g，78％)。1H NMR(CDCl3)δ5.25(bs,1H),4.00(m,2H),3.91(d,J＝11.3Hz,1H),3.60(d,J＝11.3Hz,1H),1.53-1.46(m,1H),1.23(s,9H),1.21-1.15(m,1H),1.06(m,7H),1.03(s,12H),0.90(m,1H),0.54(t,J＝7.8Hz,2H)。C20H38BNO7的MS实验值m/z[438(M+Na)]
步骤7：2-(叔丁氧基羰基氨基)-2-甲酰基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)己酸乙酯
在氩气氛围下，将草酰氯(1.46g，0.88mL，11.6mmol)于二氯甲烷(15mL)中的溶液冷却到-78℃，并用二甲亚砜(1.8g，1.64mL，23.2mmol)处理，并且搅拌10分钟。向此混合物中添加含2-(叔丁氧基羰基氨基)-2-(羟甲基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)己酸乙酯(2.4g，5.78mmol)的无水二氯甲烷(15mL)，并搅拌混合物30分钟。通过在-78℃下添加三乙胺(3.5g，4.8mL，34.7mmol)并使反应混合物缓慢升温到室温来淬灭反应混合物。混合物用二氯甲烷(25mL)稀释并依序用水(2×25mL)和氯化钠饱和水溶液(25mL)洗涤。有机层经硫酸镁干燥，过滤并蒸发至干。使用快速制备色谱系统(40g柱，用含20-40％乙酸乙酯的庚烷洗脱)纯化所得残余物，得到2-(叔丁氧基羰基氨基)-2-甲酰基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)己酸乙酯(1.35g，57％)。1HNMR(CDCl3)δ9.58(s,1H),5.64(bs,1H),4.25(m,2H),2.13(m,2H),1.45(m,9H),1.28(m,4H),1.24(s,12H),0.88(t,J＝6.4Hz,3H),0.77(t,J＝7.9Hz,2H)。C20H36BNO7的MS实验值m/z[436(M+Na)]。
步骤8：2-(叔丁氧基羰基氨基)-2-((丙基氨基)甲基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)己酸乙酯
用三乙酰氧基硼氢化钠(352mg，1.66mmol，4当量)处理2-(叔丁氧基羰基氨基)-2-甲酰基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)己酸乙酯(172mg，0.42mmol)和丙胺(40μL，0.49mmol，1.3当量)于1,2-二氯乙烷(3mL)中的浆液。添加乙酸(2滴，约3-5当量)，并将混合物在室温下搅拌17小时，随后在60℃下搅拌1小时。一旦反应完成，就添加碳酸氢钠饱和水溶液并用二氯甲烷萃取溶液。有机萃取物用NaCl饱和水溶液洗涤，经MgSO4干燥，过滤并浓缩。通过快速色谱法(含0-60％乙酸乙酯的己烷)纯化，得到呈油状的2-(叔丁氧基羰基氨基)-2-((丙基氨基)甲基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)己酸乙酯(66mg，34％)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ4.16(m,2H),3.5-3.3(m,2H),3.2(br m,2H),2.9(m,1H),1.8-1.6(m,4H),1.5-1.4(m,2H),1.38(s,9H),1.36-1.3(m,3H),1.22(t,J＝7.2Hz,3H),1.18(s,12H),1.05(m,1H),0.75(t,J＝7.4Hz,3H),0.68(t,J＝7.5Hz,2H)。ESI+MS：观测值m/z 457(M+H)+。
步骤9：2-氨基-6-二羟硼基-2-((丙基氨基)甲基)己酸
在100℃下将2-(叔丁氧基羰基氨基)-2-((丙基氨基)甲基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)己酸乙酯(66mg，0.14mmol)于6N HCl(5mL)和1,4-二噁烷(1mL)中的溶液加热16小时。冷却到室温后，将反应混合物转移到分液漏斗中，用脱离子水(5mL)稀释并用二氯甲烷(6×25mL)洗涤。将水层冷冻(干冰/丙酮)并冻干，得到呈二盐酸盐形式的2-氨基-6-二羟硼基-2-((丙基氨基)甲基)己酸(40mg)。1H NMR(D2O,400MHz)δ3.33(dAB,JAB＝13.7Hz,1H),3.21(dAB,JAB＝13.7Hz,1H),2.91-2.78(m,2H),1.88-1.75(m,1H),1.70-1.60(m,1H),1.54-1.38(m,2H),1.24-1.08(m,3H),1.05-0.92(m,1H),0.75-0.61(m,3H),0.55-0.45(m,2H)。ESI+MS：观测值m/z 229.1(M–18H)+,211.1(M–36+H)+,ESI-MS:227.1(M-18-1)-。
实例84：制备2-氨基-2-((苯甲基氨基)甲基)-6-二羟硼基己酸
按与实例83中所述方式类似的方式制备2-氨基-2-((苯甲基氨基)甲基)-6-二羟硼基己酸二盐酸盐，但在步骤8中使用苯甲胺作为胺。分离出呈二盐酸盐形式的最终化合物。1H NMR(D2O,400MHz)δ7.47-7.27(m,5H),3.85(dAB,JAB＝13.4Hz,1H),3.80(dAB,JAB＝13.4Hz,1H),3.05(dAB,JAB＝13.2Hz,1H),2.69(dAB,JAB＝13.2Hz,1H),1.76-1.64(m,1H),1.58-1.46(m,1H),1.37-1.18(m,3H),1.17-1.02(m,1H),0.68(t,J＝7.8Hz,2H)。ESI+MS：观测值m/z 277.1(M–18+H)+,259.1(M-36+H)+,ESI-MS:275.1(M-18-1)-。
实例85：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(((R)-2-羟基丙基氨基)甲基)己酸二盐酸盐
按与实例83中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(((R)-2-羟基丙基氨基)甲基)己酸二盐酸盐，但在步骤8中使用(R)-1-氨基丙-2-醇作为胺。分离出呈二盐酸盐形式的最终化合物。1H NMR(D2O,400MHz)δ3.89-3.80(m,1H),3.70-3.40(m,4H),3.31(dAB,JAB＝12.7Hz,1H),2.05-1.93(m,1H),1.87-1.74(m,1H),1.48-1.35(m,3H),1.33-1.18(m,3H),0.77(t,J＝7.8Hz,2H)。ESI+MS：观测值m/z 227.1(M–36+H)+,243.1(M–18-1)-。
实例86：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-((丁基氨基)甲基)己酸二盐酸盐
按与实例83中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-((丁基氨基)甲基)己酸二盐酸盐，但在步骤8中使用丁-1-胺作为胺。分离出呈二盐酸盐形式的最终化合物。1H NMR(D2O,400MHz)δ3.38(dAB,JAB＝13.8Hz,1H),3.24(dAB,JAB＝13.8Hz,1H),3.10-2.94(m,2H),1.92-1.82(m,1H),1.75-1.65(m,1H),1.65-1.53(m,2H),1.40-1.21(m,4H),1.22-1.1.08(m,1H),0.68(t,J＝7.2Hz,2H)。ESI+MS：观测值m/z 243.1(M-18+H)+,225.1(M–36+H)+,ESI-MS:241.1(M–18-1)-。
实例87：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-((四氢-2H-吡喃-4-基氨基)甲基)己酸二盐酸盐
按与实例83中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-((四氢-2H-吡喃-4-基氨基)甲基)己酸二盐酸盐，但在步骤8中使用四氢-2H-吡喃-4-胺作为胺。分离出呈二盐酸盐形式的最终化合物。1H NMR(D2O,400MHz)δ4.02-3.92(m,2H),3.48-3.28(m,5H),2.03-1.82(m,3H),1.75-1.58(m,3H),1.38-1.26(m,3H),1.20-1.10(m,1H),0.68(t,J＝7.2Hz,2H)。ESI+MS：观测值m/z 271.1(M–18+H)+,253.1(M–36+H)+,ESI-MS:269.1(M–18-1)-。
实例88：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(((S)-1-羟基-4-甲基戊-2-基氨基)甲基)己酸二盐酸盐
按与实例83中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(((S)-1-羟基-4-甲基戊-2-基氨基)甲基)己酸二盐酸盐，但在步骤8中使用(R)-2-氨基-4-甲基戊-1-醇作为胺。分离出呈二盐酸盐形式的最终化合物。1H NMR(D2O,400MHz)δ3.87-3.70(m,1H),3.65-3.48(m,1H),3.46-3.40(m,1H),3.39-3.33(m,1H),3.33-3.27(m,1H),3.24(dAB,JAB＝13.8Hz,1H),1.95-1.85(m,1H),1.77-1.65(m,1H),1.62-1.52(m,1H),1.50-1.40(m,2H),1.39-1.27(m,3H),1.20-1.08(m,1H),0.86-0.78(m,6H),0.68(t,J＝7.4Hz,2H)。ESI+MS：观测值m/z 269.1(M–36+H)+,285.1(M–18-1)-。
实例89：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(((1R,2S)-2-羟基-1,2-二苯基乙基氨基)甲基)己酸二盐酸盐.
按与实例83中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(((1R,2S)-2-羟基-1,2-二苯基乙基氨基)甲基)己酸二盐酸盐，但在步骤8中使用(1S,2R)-2-氨基-1,2-二苯基乙醇作为胺。分离出呈二盐酸盐形式的最终化合物。1H NMR(D2O,400MHz)δ7.46-7.00(m,10H),5.37-5.04(m,1H),4.57-4.46(m,1H),3.35-2.85(m,2H),1.96-1.82(m,1H),1.76-1.60(m,1H),1.56-1.44(m,1H),1.39-1.26(m,2H),1.26-0.87(m,2H),0.74-0.56(m,2H)。ESI+MS：观测值m/z 383.1(M–18+H)+,365.1(M–36+H)+,ESI-MS:381.1(M–18-1)-。
实例90：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(((S)-1-苯基乙基氨基)甲基)己酸二盐酸盐
按与实例83中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(((S)-1-苯基乙基氨基)甲基)己酸二盐酸盐，但在步骤8中使用(S)-1-苯基乙胺作为胺。分离出呈二盐酸盐形式的最终化合物。1H NMR(D2O,400MHz)δ7.48-7.32(m,5H),4.50-4.37(m,1H),3.30-3.12(m,1H),3.08-2.98(m,1H),1.92-1.70(m,1H),1.68-1.54(m,4H),1.37-1.17(m,3H),1.18-0.96(m,1H),0.73-0.55(m,2H)。ESI+MS：观测值m/z 291.1(M–18+H)+。
实例91：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(((R)-1-羟基丙-2-基氨基)甲基)己酸二盐酸盐
按与实例83中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(((R)-1-羟基丙-2-基氨基)甲基)己酸二盐酸盐，但在步骤8中使用(R)-2-氨基丙-1-醇作为胺。分离出呈二盐酸盐形式的最终化合物。1H NMR(D2O,400MHz)δ4.07-3.87(m,2H),3.80-3.71(m,1H),3.51-3.27(m,2H),3.17-3.02(m,1H),2.99-2.80(m,1H),1.95-1.81(m,1H),1.79-1.65(m,1H),1.45-1.35(m,1H),1.32-1.18(m,2H),1.15-0.90(m,3H),0.61(t,J＝7.2Hz,2H)。ESI+MS：观测值m/z 227.1(M–36+H)+。
实例92：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-(4-氯苯氧基)乙基)己酸盐酸盐
步骤1：4-(4-氯苯氧基)-2-(二苯基亚甲基氨基)丁酸叔丁基酯
在氮气氛围下，将(二苯亚甲基-氨基)-乙酸叔丁基酯(400mg，1.35mmol)于四氢呋喃(7mL)中的溶液冷却到-78℃，并用双(三甲基硅烷基)氨基钠(1.49mL，1.0M的四氢呋喃溶液，1.49mmol)以逐滴方式处理。添加完成后，持续搅拌30分钟，并将1-(2-溴乙氧基)-4-氯苯(398mg，1.69mmol)缓慢添加到反应混合物中。再持续搅拌2小时，随后缓慢升温到室温过夜。将所得溶液倾倒入水中，并用乙酸乙酯(3×)萃取。合并的有机相用氯化钠饱和水溶液洗涤，经无水硫酸镁干燥，过滤并浓缩。通过快速柱色谱法(硅胶，含0-20％乙酸乙酯的庚烷)纯化，得到呈无色油状的4-(4-氯苯氧基)-2-(二苯基亚甲基氨基)丁酸叔丁基酯(450mg.74％)；C27H28ClNO3的MS(+CI):m/z：预期值449.2；实验值450.2(M+H)+,394.2(M+H-异丁烯)+。
步骤2：2-(2-(4-氯苯氧基)乙基)-2-(二苯基亚甲基氨基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)己酸叔丁基酯
在氮气氛围下，将4-(4-氯苯氧基)-2-(二苯基亚甲基氨基)丁酸叔丁基酯(450mg，1.0mmol)于四氢呋喃(7mL)中的溶液冷却到-78℃，并用双(三甲基硅烷基)氨基钠(2.0mL，1.0M的四氢呋喃溶液，2.0mmol)以逐滴方式处理。添加完成后，持续搅拌30分钟，并将2-(4-碘丁基)-4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂硼戊环(931mg，3.0mmol)缓慢添加到反应混合物中。再持续搅拌2小时，且随后缓慢升温到室温过夜。将所得溶液倾倒入水中，并用乙酸乙酯(3×)萃取。合并的有机相用氯化钠饱和水溶液洗涤，经无水硫酸镁干燥，过滤并浓缩。通过快速柱色谱法(硅胶，含0-15％乙酸乙酯的庚烷)纯化，得到呈无色油状的2-(2-(4-氯苯氧基)乙基)-2-(二苯基亚甲基氨基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)己酸叔丁基酯(486mg，77％)；1H NMR(CDCl3,300MHz)δ7.54(d,J＝7Hz,2H),7.36(m,4H),7.18-7.32(m,6H),6.82(d,J＝9Hz,2H),4.19(m,1H),4.04(m,1H),2.39(ddd,J1＝14Hz,J2＝9.5Hz,J3＝5.0Hz,1H),2.22(ddd,J1＝13.5Hz,J2＝9.5Hz,J3＝5.0Hz,1H),1.73(m,2H),1.14-1.46(m,4H),1.34(s,9H),1.18(s,12H)和0.76(t,J＝7Hz,2H)；C37H47BClNO5的MS(+CI):m/z：预期值631.3；实验值632.3(M+H)+,576.3(M+H-异丁烯)+。
步骤3：2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-(4-氯苯氧基)乙基)己酸
使2-(二苯亚甲基-氨基)-2-[2-(4-氯苯氧基)-乙基]-6-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]-二氧杂硼戊环-2-基)-己酸叔丁基酯(486mg)于6N HCl(6ml)中的溶液升温到60℃并搅拌过夜。冷却到室温后，将反应混合物转移到分液漏斗中，用脱离子水(6ml)稀释并用二氯甲烷(3×)洗涤。水层在液氮中冷冻并冻干，得到呈无色泡沫状的2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-(4-氯苯氧基)乙基)己酸盐酸盐(125mg，85％)；1H NMR(D4-MeOH,300MHz)δ7.24(2H,d,J＝7Hz,2H),6.94(d,J＝7Hz,2H),4.18(m,2H),2.52(m,1H),2.46(m,1H),1.92(m,2H),1.22-1.52(m,4H)和0.82(t,J＝7Hz,2H,)；C14H21BClNO5的MS(+CI):m/z：预期值329.1；实验值330.2(M+H)+,312.2(M+H-H2O)+,659.4(2M+H)+,641.4(2M+H-H2O)+。
实例93：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-(4-甲氧基苯氧基)乙基)己酸盐酸盐
按与实例92中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-(4-甲氧基苯氧基)乙基)己酸盐酸盐，但在步骤1中使用1-(2-溴乙氧基)-4-甲氧基苯作为烷基化剂。1HNMR(D4-MeOH,300MHz)δ6.91(d,J＝9Hz,2H),6.85(d,J＝7Hz,2H),4.12(m,2H),3.74(s,3H),2.46(m,1H),2.34(m,1H),1.96(m,2H),1.22-1.66(m,4H)和0.84(t,J＝7Hz,2H)；C15H24BClNO5的MS(+CI):m/z：预期值325.2；实验值326.2(M+H)+,308.2(M+H-H2O)+。
实例94：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-[2-(2,4-二氯苯氧基)-乙基]-己酸盐酸盐
按与实例92中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-[2-(2,4-二氯苯氧基)-乙基]-己酸，但在步骤1中使用1-(2-溴乙氧基)-2,4-二氯苯作为烷基化剂。1H NMR(D4-MeOH,300MHz)δ7.43(d,J＝2Hz,1H),7.29(dd,J1＝9.0Hz,J2＝2.0Hz,1H),7.09(d,J＝9Hz,1H),4.30(m,1H),4.21(m,1H),2.53(ddd.J1＝15.5Hz,J2＝7.5Hz,J3＝4.5Hz,1H),2.44(ddd.J1＝15.5Hz,J2＝7.0Hz,J3＝4.5Hz,1H),2.01(m,2H),1.46(m,3H),1.32(m,1H)和0.82(t,J＝7Hz,2H)；C14H20BCl2NO5的MS(+CI):m/z：预期值363.1；实验值364.2(M+H)+,346.2(M+H-H2O)+。
实例95：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-[2-(3-三氟甲基苯氧基)-乙基]-己酸盐酸盐
按与实例92中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-[2-(3-三氟甲基苯氧基)-乙基]-己酸盐酸盐，但在步骤1中使用1-(2-溴乙氧基)-3-(三氟甲基)苯作为烷基化剂。1H NMR(D4-MeOH,300MHz)δ7.49(t,J＝8Hz,1H),7.26(m,3H),4.24(m,2H),2.52(m,1H),2.37(m,1H),1.96(m,2H),1.46(m,3H),1.32(m,1H)和0.83(t,J＝7Hz,2H)；C15H21BF3NO5的MS(+CI):m/z：预期值363.21；实验值364.2(M+H)+,346.2(M+H-H2O)+,727.4(2M+H)+,709.4(2M+H-H2O)+。
实例96：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-[3-(4-氯苯氧基)-丙基]-己酸盐酸盐
按与实例92中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-[3-(4-氯苯氧基)-丙基]-己酸盐酸盐，但在步骤1中使用1-(4-溴丙氧基)-4-氯苯作为烷基化剂。1H NMR(D4-MeOH,300MHz)δ7.24(d,J＝9Hz,2H),6.90(d,J＝9Hz,2H),3.98(m,2H),1.68-2.19(m,6H),1.44(m,3H),1.27(m,1H)和0.82(t,J＝7Hz,2H)；C15H23BClNO5的MS(+CI):m/z：预期值343.1；实验值344.2(M+H)+,326.2(M+H-H2O)+。
实例97：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-甲基己酸盐酸盐
按与实例92中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-甲基己酸盐酸盐，但在步骤1中使用碘甲烷作为烷基化剂。1H NMR(D2O,300MHz)δ1.89-1.82(m,1H),1.79-1.68(m,1H),1.48(s,3H),1.47-1.25(m,3H),1.22-1.13(m,1H),0.69(t,J＝6.6Hz,2H)。C7H16BNO4的ESI MS实验值m/z[190.1(M+1)]。
实例98：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(3-氟苯甲基)己酸盐酸盐
按与实例92中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(3-氟苯甲基)己酸盐酸盐，但在步骤1中使用1-(溴甲基)-3-氟苯作为烷基化剂。1H NMR(CD3OD,300MHz)δ7.41-7.32(m,1H),7.14-7.02(m,3H),3.33(dAB,J＝14.4Hz,1H),3.14(dAB,J＝14.4Hz,1H),2.10-1.80(m,2H),1.48-1.25(m,4H),0.79(t,J＝6.9Hz,2H)。C13H19BFNO4的ESI MS实验值m/z[284.2(M+1)]。
实例99：制备2-氨基-2-苯甲基-6-二羟硼基己酸盐酸盐
按与实例92中所述方式类似的方式制备2-氨基-2-苯甲基-6-二羟硼基己酸盐酸盐，但在步骤1中使用苯甲基溴作为烷基化剂。1H NMR(D2O,300MHz)δ7.32-7.21(m,3H),7.24-7.24(m,2H),3.27(dAB,J＝12.8Hz,1H),3.04(dAB,J＝12.8Hz,1H),2.03-1.92(m,1H),1.84-1.75(m,1H),1.40-1.08(m,4H),0.68(t,J＝7.2Hz,2H)。C13H20BNO4的ESI MS实验值m/z[266.1(M+1)]。
实例100：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(3-甲氧基丙基)己酸盐酸盐
按与实例92中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(3-甲氧基丙基)己酸盐酸盐，但在步骤1中使用1-溴-3-甲氧基丙烷作为烷基化剂。1H NMR(D2O,300MHz)δ3.29(t,J＝6.6Hz,2H),3.13(s,3H),1.90-1.62(m,4H),1.58-1.42(m,1H),1.42-1.29(m,1H),1.28-1.14(m,3H),1.11-0.97(m,1H),0.58(t,J＝7.5Hz,2H)。C10H22BNO5的ESI MS实验值m/z[248.1(M+1)]。
实例101：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(3-羟基丙基)己酸盐酸盐
按与实例92中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(3-羟基丙基)己酸盐酸盐，但在步骤1中使用2-(3-溴丙氧基)四氢-2H-吡喃作为烷基化剂。1H NMR(D2O,300MHz)δ3.42(t,J＝6.3Hz,2H),1.96-1.64(m,4H),1.55-1.41(m,1H),1.40-1.19(m,4H),1.11-0.96(m,1H),0.60(t,J＝7.5Hz,2H)。C9H20BNO5的ESI MS实验值m/z[234.1(M+1)]。
实例102：制备2-((1H-咪唑-5-基)甲基)-2-氨基-6-二羟硼基己酸二盐酸盐
将N-(二苯基亚甲基)组氨酸(1-三苯甲基)叔丁基酯(400mg，0.65mmol)于新蒸馏的THF(4mL)中的溶液冷却到-78℃(在氩气氛围下)，并用双(三甲基硅烷基)氨基锂(1.5mmol，1.5mL，1.0M的THF溶液)处理。整份添加2-(4-碘丁基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环(401mg，1.30mmol)，并使反应物升温到50℃且加热8小时。通过TLC确定完成后，将反应混合物冷却到0℃，用乙酸乙酯稀释并依序用NaHCO3饱和水溶液和NaCl饱和水溶液洗涤，经MgSO4干燥，过滤并浓缩。通过MPLC(含50％乙酸乙酯的庚烷)纯化，得到呈油状的粗产物，将其再溶解于6N HCl(10mL)中并加热到70℃，保持16小时。冷却到室温后，将反应混合物转移到分液漏斗中，用脱离子水(10mL)稀释并用二氯甲烷(5×10mL)洗涤。浓缩水层，得到呈二盐酸盐形式的灰白色固体产物(68mg，42％)。1H NMR(D2O,300MHz)δ8.51(d,J＝1.2Hz,1H),7.25(d,J＝1.2Hz,1H),3.30(dAB,J＝15.9Hz,1H),3.18(dAB,J＝15.9Hz,1H),1.92-1.78(m,1H),1.70(ddd,J＝14.7,12.0,4.2Hz,1H),1.32-1.16(m,3H),1.16-0.99(m,1H),0.59(t,J＝7.5Hz,2H)。C10H18BN3O4的ESI MS实验值m/z[256.2(M+)]。
实例103：制备2-(4-二羟硼基丁基)吡咯烷-2-甲酸盐酸盐
按与实例102中所述方式类似的方式制备2-(4-二羟硼基丁基)吡咯烷-2-甲酸盐酸盐，但在步骤1中使用吡咯烷-1,2-二甲酸二叔丁基酯作为起始的氨基酸衍生物。1H NMR(D2O,300MHz)δ3.36-3.24(m,2H),2.41-2.33(m,1H),2.08-1.70(m,5H),1.39-1.12(m,4H),0.71(t,J＝7.2Hz,2H)。C9H18BNO4的ESI MS实验值m/z[216.0(M+1)]。
实例104：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-异丁基己酸盐酸盐
按与实例102中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-异丁基己酸盐酸盐，但在步骤1中使用2-(二苯基亚甲基氨基)-4-甲基戊酸叔丁基酯作为起始的氨基酸衍生物。1H NMR(D2O,300MHz)δ1.80-1.47(m,5H),1.29-1.15(m,3H),1.08-0.94(m,1H),0.75(d,J＝6.6Hz,3H),0.70(d,J＝6.6Hz,3H),0.58(t,J＝7.8Hz,2H)。C10H22BNO4的ESI MS实验值m/z[232.1(M+1)]。
实例105：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-异丙基己酸盐酸盐
按与实例102中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-异丁基己酸盐酸盐，但在步骤1中使用2-(二苯基亚甲基氨基)-3-甲基丁酸叔丁基酯作为起始的氨基酸衍生物。1H NMR(D2O,300MHz)δ2.08(七重峰,J＝6.9Hz,1H),1.78-1.70(m,2H),1.31-1.15(m,3H),1.10-0.97(m,1H),0.84(d,J＝6.9Hz,3H),0.82(d,J＝6.9Hz,3H),0.61(t,J＝7.5Hz,2H)。C9H20BNO4的ESI MS实验值m/z[218.1(M+1)]。
实例106：制备2-氨基-2-(4-二羟硼基丁基)琥珀酸盐酸盐
按与实例102中所述方式类似的方式制备2-氨基-2-(4-二羟硼基丁基)琥珀酸盐酸盐，但在步骤1中使用2-(二苯基亚甲基氨基)琥珀酸二叔丁基酯作为起始的氨基酸衍生物。1H NMR(D2O,500MHz)δ3.10(d,J＝18.0Hz,1H),2.85(d,J＝18.0Hz,1H[AB系统],1.85-1.78(m,2H),1.37-1.32(m,3H),1.23-1.19(m,1H),0.72(t,J＝7.0Hz,2H)。C8H16BNO6的ESIMS实验值m/z[216.4,(M+1-18)100％,198.3(M+1–2×18)35％,232.4(M-1)50％,214.4(M–1-18)100％]。
实例107：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-((1-异丙基-1H-咪唑-5-基)甲基)己酸二盐酸盐
在室温下，用对甲苯磺酰甲基异腈(59mg，0.30mmol)随后异丙胺(59mg，85μL，1.00mmol)处理2-(叔丁氧基羰基氨基)-2-(2-氧代乙基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)己酸叔丁基酯(按与实例16中所述方式类似的方式制备)100mg(0.22mmol)于甲醇(1mL)中的溶液。在室温下搅拌反应混合物48小时，随后蒸发并通过色谱法(氯仿:甲醇；梯度100:1到10:1)纯化，得到35mg烷基化产物(白色固体)，将其再溶解于6N HCl(10mL)中并加热到70℃，保持16小时。冷却到室温后，将反应混合物转移到分液漏斗中，用脱离子水(10mL)稀释并用二氯甲烷(5×10mL)洗涤。浓缩水层，得到呈灰白色固体状的产物2-氨基-6-二羟硼基-2-((1-异丙基-1H-咪唑-5-基)甲基)己酸二盐酸盐(20mg，产率26％)。1HNMR(D2O,300MHz)δ8.71(d,J＝1.2Hz,1H),7.24(d,J＝1.2Hz,1H),4.45(七重峰,J＝6.3Hz,1H),3.35(dAB,J＝16.2Hz,1H),3.21(dAB,J＝16.2Hz,1H),1.98-1.86(m,1H),1.82-1.68(m,1H),1.38-1.20(m,3H),1.37(d,J＝6.3Hz,3H),1.32(d,J＝6.3Hz,3H),1.17-1.03(m,1H),0.62(t,J＝7.5Hz,2H)。C13H24BN3O4的ESI MS实验值m/z[298.2(M+1)]。
实例108：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(1-羟基丙基)己酸盐酸盐
步骤1：2-(二苯基亚甲基氨基)己-5-烯酸叔丁基酯
在氮气氛围下，在-78℃下小心地用双(三甲基硅烷基)氨基钠(18.6mL，1.0M，1.1当量)处理(二苯亚甲基-氨基)-乙酸叔丁基酯(5g，16.9mmol)于THF(80mL，0.2M)中的经搅拌溶液。搅拌30分钟后，缓慢添加4-溴-丁-1-烯(2.1mL，20.3mmol，1.2当量)。移除冷却浴并将反应混合物逐渐升温到室温，且搅拌过夜。将溶液冷却到0℃并用水淬灭。所得溶液用乙酸乙酯稀释并依序用水和NaCl饱和水溶液洗涤，经MgSO4干燥，过滤并浓缩。通过MPLC(含1-25％乙酸乙酯的庚烷)纯化，得到呈无色油状的2-(二苯亚甲基-氨基)-己-5-烯酸叔丁基酯(5.6g，15.9mmol，94％)。
步骤2：4-(丁-3-烯基)-5-乙基-2,2-二苯基噁唑烷-4-甲酸叔丁基酯
在氮气氛围下，将2-(二苯亚甲基-氨基)-己-5-烯酸叔丁基酯(350mg，1mmol)于THF(5mL，0.2M)中的经搅拌溶液冷却到-78℃，并小心地用双(三甲基硅烷基)氨基钠(2mL，1M，2当量)处理。搅拌30分钟后，添加二乙基氯化铝(2.4mL，1M，2.4当量)并且再搅拌反应混合物30分钟。将丙醛(94μl，1.25mmol，1.25eq)添加到溶液中，并移除冷却浴。搅拌过夜后，将反应混合物冷却到0℃，并用饱和NH4Cl淬灭。所得溶液用乙酸乙酯稀释并依序用水和饱和酒石酸钾钠洗涤，经MgSO4干燥，过滤并浓缩。通过MPLC(含1-40％乙酸乙酯的庚烷)纯化，得到4-丁-3-烯基-5-乙基-2,2-二苯基-噁唑烷-4-甲酸叔丁基酯(349mg，0.86mmol，86％)。
步骤3：5-乙基-2,2-二苯基-4-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)丁基)噁唑烷-4-甲酸叔丁基酯
在室温下，向4-丁-3-烯基-5-乙基-2,2-二苯基-噁唑烷-4-甲酸叔丁基酯(230mg，0.56mmol)于二氯甲烷(2mL，0.3M)中的溶液中添加氯三(三苯基膦)铑(I)(60mg，0.065mmol，10mol％)。搅拌30分钟后，将4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环(200μl，1.3mmol，2eq)添加到反应混合物中并搅拌过夜。用水(3mL)淬灭反应后，所得溶液用乙酸乙酯稀释并依序用水和NaCl饱和水溶液洗涤，经MgSO4干燥，过滤并浓缩。通过MPLC(含1-40％乙酸乙酯的庚烷)纯化，得到5-乙基-2,2-二苯基-4-[4-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂硼戊环-2-基)-丁基]-噁唑烷-4-甲酸叔丁基酯(152mg，0.28mmol，50％)。
步骤4：2-氨基-6-二羟硼基-2-(1-羟基丙基)己酸盐酸盐
在65℃下将5-乙基-2,2-二苯基-4-[4-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂硼戊环-2-基)-丁基]-噁唑烷-4-甲酸叔丁基酯(152mg，0.28mmol)于6N HCl(4ml)中的溶液搅拌1天。冷却到室温后，将反应混合物转移到分液漏斗中，用脱离子水(3ml)稀释并用二氯甲烷(3×4mL)洗涤。水层在液氮中冷冻并冻干，得到呈白色泡沫状的2-氨基-6-二羟硼基-2-(1-羟基-丙基)-己酸盐酸盐(20mg，0.074mmol，27％)。1H NMR(D2O,300MHz)δ3.80(dd,J＝11.4,1.8Hz,1H),1.88-1.50(m,2H),1.48-0.92(m,5H),0.85(t,J＝7.6Hz,3H),0.63(t,J＝7.6Hz,2H)。
实例109：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(羟基(哌啶-4-基)甲基)己酸二盐酸盐
按与实例108中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(羟基(哌啶-4-基)甲基)己酸二盐酸盐，但在步骤2中使用4-甲酰基哌啶-1-甲酸叔丁基酯作为醛。1H NMR(D2O,300MHz)δ3.80(d,J＝2.9Hz,1H),3.36-3.20(m,2H),2.94-2.75(m,2H),1.98-1.34(m,7H),1.34-0.97(m,4H),0.63(t,J＝7.6Hz,2H)。
实例110：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(羟基(哌啶-3-基)甲基)己酸二盐酸盐
按与实例108中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(羟基(哌啶-3-基)甲基)己酸二盐酸盐，但在步骤2中使用3-甲酰基哌啶-1-甲酸叔丁基酯作为醛。1H NMR(D2O,300MHz)δ4.05-3.70(m,1H),3.60-3.40(m,1H),3.00-2.70(m,3H),2.70-1.60(m,7H),1.60-1.15(m,4H),0.85(t,J＝7.1Hz,2H)。
实例111：制备2-氨基-2-(4-二羟硼基丁基)-6,6,6-三氟-3-羟基己酸盐酸盐
按与实例108中所述方式类似的方式制备2-氨基-2-(4-二羟硼基丁基)-6,6,6-三氟-3-羟基己酸盐酸盐，但在步骤2中使用4,4,4-三氟丁醛作为醛。1H NMR(D2O,300MHz)δ3.98-3.84(m,1H),2.50-2.12(m,2H),2.06-1.66(m,4H),1.47-1.12(m,4H),0.75(t,J＝7.5Hz,2H)。
实例112：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(羟基(吡啶-3-基)甲基)己酸二盐酸盐
按与实例108中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(羟基(吡啶-3-基)甲基)己酸二盐酸盐，但在步骤2中使用烟醛作为醛。1H NMR(D2O,300MHz)δ8.84(s,1H),8.75(d,J＝5.9Hz,1H),8.61(d,J＝8.2Hz,1H),8.06(dd,J＝8.2,5.9Hz,1H),5.27(s,1H),2.06-1.86(m,1H),1.84-1.67(m,1H),1.54-1.28(m,3H),1.28-1.08(m,1H),0.74(t,J＝7.8Hz,2H)。
实例113：制备2-氨基-2-(氮杂环丁烷-3-基(羟基)甲基)-6-二羟硼基己酸二盐酸盐
按与实例108中所述方式类似的方式制备2-氨基-2-(氮杂环丁烷-3-基(羟基)甲基)-6-二羟硼基己酸二盐酸盐，但在步骤2中使用3-甲酰基氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁基酯作为醛。1H NMR(D2O,300MHz)δ4.11(d,J＝6.0Hz,1H),4.07-3.78(m,4H),3.40-3.10(m,1H),1.85-1.36(m,7H),1.32-0.92(m,4H),0.60(t,J＝7.6Hz,2H)。
实例114：制备5-氨基-6-氧代-6-苯基己基硼酸盐酸盐
步骤1：2-苯甲酰基-2-(二苯基亚甲基氨基)己-5-烯酸叔丁基酯
将2-(二苯亚甲基-氨基)-己-5-烯酸叔丁基酯(350mg，1mmol)于THF(5mL，0.2M)中的溶液冷却到-78℃，并经5分钟逐滴用双(三甲基硅烷基)氨基钠(2.2mL，1.0M，2.2当量)处理，并且搅拌30分钟。添加苯甲酰氯(140μl，1.2mmol，1.2eq)后，使反应混合物升温到室温并且再搅拌1.5小时。将溶液冷却到0℃并用水(5mL)淬灭。所得溶液用乙酸乙酯稀释并依序用水和NaCl饱和水溶液洗涤，经MgSO4干燥，过滤并浓缩。通过MPLC(含1-40％乙酸乙酯的庚烷)纯化，得到2-(二苯亚甲基-氨基)-2-苯甲酰基-己-5-烯酸叔丁基酯(477mg，1mmol，100％)。
步骤2：2-苯甲酰基-2-(二苯基亚甲基氨基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)己酸叔丁基酯
在室温下，用氯-1,5-环辛二烯铱(I)二聚物(24mg，0.036mmol，3mol％)和1,2-双(二苯基膦基)乙烷(28mg，0.07mmol，6mol％)处理2-(二苯亚甲基-氨基)-己-5-烯酸叔丁基酯(530mg，1.17mmol)于二氯甲烷(3mL，0.4M)中的溶液。搅拌30分钟后，将4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环(204μl，1.4mmol，1.2eq)添加到反应混合物中并持续搅拌过夜。用水(3mL)淬灭溶液。所得溶液用乙酸乙酯稀释并依序用水和NaCl饱和水溶液洗涤，经MgSO4干燥，过滤并浓缩。通过MPLC(含1-40％乙酸乙酯的庚烷)纯化，得到2-(二苯亚甲基-氨基)-2-苯甲酰基-6-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂硼戊环-2-基)-己酸叔丁基酯(370mg，0.64mmol，54％)。
步骤3：5-氨基-6-氧代-6-苯基己基硼酸盐酸盐
在65℃下，将2-(二苯亚甲基-氨基)-2-苯甲酰基-6-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂硼戊环-2-基)-己酸叔丁基酯(186mg，0.32mmol)于6N HCl(6mL)中的溶液搅拌1天。冷却到室温后，将反应混合物转移到分液漏斗中，用脱离子水(5mL)稀释并用二氯甲烷(3×5mL)洗涤。水层在液氮中冷冻并冻干，得到2-氨基-6-二羟硼基-1-苯基-己-1-酮(76.5mg，88％)。1H NMR(D2O,300MHz)δ8.04-7.60(m,2H),7.77(tt,J＝7.6,1.2Hz,1H),7.61(d,J＝7.6Hz,2H),5.18(dd,J＝7.5,4.7Hz,1H),2.15-1.82(m,2H),1.5-1.2(m,4H),0.69(t,J＝7.2Hz,2H)。
实例115：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-((R)-吡咯烷-2-基)乙基)己酸二盐酸盐
按与下文实例87-A中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-((R)-吡咯烷-2-基)乙基)己酸二盐酸盐，但在步骤1中使用(R)-2-(1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基)乙酸作为羧酸。1H NMR(D2O,500MHz)δ3.52-3.48(m,1H),3.21-3.11(m,2H),2.35(dd,J＝16.0,6.0Hz,1H),2.19-2.12(m,2H),1.96-1.89(m,1H),1.85-1.79(m,2H)1.70(dt,J＝14.0,4.0Hz,1H),1.60-1.52(m,1H),1.29-1.21(m,3H),1.12-1.05(m,1H),0.62(t,J＝7.0Hz,2H)。C11H23BN2O4的ESI MS实验值m/z[481.9(2M+1–2×18)2％,281.6(M+Na+)5％,263.6(M+Na+-18)4％,241.5(M+1-18)23％,223.5(M+1–2×18)100％,257.5(M-1)8％,239.5(M–1-18)100％.]。
实例116：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-(吡啶-2-基)乙基)己酸二盐酸盐
步骤1：N-甲氧基-N-甲基-3-(吡啶-2-基)丙酰胺
用三乙胺(2.8mL，20.0mmol)处理3-吡啶-2-基-丙酸(1.0g，6.62mmol)、DMAP(10mg)和N,O-二甲基羟胺盐酸盐(679g，7.0mmol)和EDC(1.34g，7.0mmol)于二氯甲烷(40mL)中的溶液。在室温下搅拌过夜后，将溶液倾倒入水中，用乙酸乙酯(3×)萃取，且合并的有机相用氯化钠饱和水溶液洗涤，经无水硫酸镁干燥，过滤并浓缩。通过柱色谱法(硅胶，含30-100％乙酸乙酯的庚烷)纯化，得到呈无色油状的N-甲氧基-N-甲基-3-(吡啶-2-基)丙酰胺(1.02g，78％)。C10H14N2O2的ESI MS实验值m/z[195.1(M+1)]。
步骤2：1-(吡啶-2-基)庚-6-烯-3-酮
在氮气氛围下，将N-甲氧基-N-甲基-3-(吡啶-2-基)丙酰胺(1.00g，5.15mmol)于四氢呋喃(10mL)中的溶液冷却到0℃，并用4-丁烯基溴化镁(0.5M的THF溶液，16mL，8.0mmol)以逐滴方式处理。在0℃下搅拌溶液1小时，随后使其升温到室温，保持3小时。将所得溶液倾倒入氯化钠饱和水溶液(100mL)中并用乙酸乙酯(3×50mL)萃取。合并的有机相用氯化钠饱和水溶液洗涤，经无水硫酸镁干燥，过滤并浓缩。通过快速柱色谱法(硅胶，含0-25％乙酸乙酯的庚烷)纯化，得到呈无色油状的1-(吡啶-2-基)庚-6-烯-3-酮(828mg，85％)。C12H15NO的ESI MS实验值m/z[190.1(M+1)]。
步骤3：2-乙酰胺基-N-叔丁基-2-(2-(吡啶-2-基)乙基)己-5-烯酰胺
用叔丁基异腈(730mg，0.99mL，8.80mmol)处理1-(吡啶-2-基)庚-6-烯-3-酮(825mg，4.36mmol)和乙酸铵(1.01g，13.09mmol)于2,2,2-三氟乙醇(3mL)中的溶液。在室温下搅拌6天后，通过快速柱色谱法(将粗反应混合物装载到柱顶部上；硅胶，含0-10％甲醇的二氯甲烷)纯化反应混合物，得到呈白色固体状的2-乙酰胺基-N-叔丁基-2-(2-(吡啶-2-基)乙基)己-5-烯酰胺(1.37g，95％)。C19H29N3O2的ESI MS实验值m/z[332.2(M+1)]。
步骤6：2-乙酰胺基-N-叔丁基-2-(2-(吡啶-2-基)乙基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)己酰胺
用氯-1,5-环辛二烯铱(I)二聚物(35mg，2mol％)和1,2-双(二苯基膦基)乙烷(42mg，4mol％)处理2-乙酰胺基-N-叔丁基-2-(2-(吡啶-2-基)乙基)己-5-烯酰胺(810mg，2.45mmol)于二氯甲烷(4mL)中的溶液。在室温下搅拌溶液30分钟，且随后逐滴添加4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂硼戊环(0.76mL，5.20mmol)，接着在室温下搅拌反应过夜。将反应物倾倒入水中并用乙酸乙酯(3×)萃取。合并的有机相用氯化钠饱和水溶液洗涤，经无水硫酸镁干燥，过滤并浓缩。通过快速柱色谱法(硅胶，含0-10％甲醇的二氯甲烷)纯化，得到呈无色油状的2-乙酰胺基-N-叔丁基-2-(2-(吡啶-2-基)乙基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)己酰胺(787mg，70％)。C25H42BN3O4的ESI MS实验值m/z[460.3(M+1)]。
步骤7：2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-(吡啶-2-基)乙基)己酸
按与实例1步骤8中所述方式类似的方式水解2-乙酰胺基-N-叔丁基-2-(2-(吡啶-2-基)乙基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)己酰胺，形成2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-(吡啶-2-基)乙基)己酸。1H NMR(D2O,300MHz)δ8.50(ddd,J1＝6.0Hz,J2＝1.5Hz,J3＝0.6Hz,1H),8.37(ddd,J1＝9.6Hz,J2＝7.8Hz,J3＝1.8Hz,1H),7.81-7.74(m,2H),3.22-3.08(m,1H),3.03-2.91(m,1H),2.33-2.18(m,2H),1.97-1.72(m,2H),1.38-1.06(m,4H),0.64(t,J＝7.5Hz,2H)。C13H21BN2O4的ESI MS实验值m/z[281.2(M+1)]。
实例117：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-((1-(3,4-二氯苯甲基)氮杂环丁烷-3-基)甲基)己酸二盐酸盐
按与实例139所述方式类似的方式，由1-Cbz-3-氮杂环丁烷乙酸制备2-氨基-6-二羟硼基-2-((1-(3,4-二氯苯甲基)氮杂环丁烷-3-基)甲基)己酸二盐酸盐。1H NMR(D2O,500MHz)δ7.55-7.45(m,2H),7.29-7.17(m,1H),4.17(伪tAB,2H),4.12-4.03(m,1H),3.91-3.80(m,1H),3.14-2.90(m,2H),2.23-2.05(m,2H),2.01-1.55(m,3H),1.33-1.16(m,3H),1.09-1.01(m,1H),0.63(t,J＝7.2Hz,2H)。C17H25BCl2N2O4的ESI MS实验值m/z[385.5(M-18+1)]。
实例118：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-((1-(2,4-二氯苯乙基)氮杂环丁烷-3-基)甲基)己酸二盐酸盐
按与实例116所述方式类似的方式，由1-Cbz-3-氮杂环丁烷乙酸制备2-氨基-6-二羟硼基-2-((1-(2,4-二氯苯乙基)氮杂环丁烷-3-基)甲基)己酸二盐酸盐。1H NMR(D2O,500MHz)δ7.55-7.30(m,3H),3.55-3.45(m,1H),3.31-3.20(m,1H),3.18-2.90(m,4H),2.77(t,J＝7.6Hz,1H),2.12-2.05(m,1H),2.02-1.61(m,5H),1.32-1.17(m,3H),1.13-1.00(m,1H),0.65(t,J＝7.2Hz,2H)。C18H27BCl2N2O4的ESI MS实验值m/z[397.5(M-18+1)]。
实例119：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-(3-(3,4-二氯苯基)硫脲基)乙基)己酸盐酸盐
按与实例16中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-(3-(3,4-二氯苯基)硫脲基)乙基)己酸盐酸盐，但在步骤1中使用2-(二苯基亚甲基氨基)乙酸叔丁基酯，并将以下程序用于步骤6和7：将醛(5.92mmol)和苯甲胺(11.85mmol)于二氯乙烷中的溶液在室温下搅拌1小时，随后用NaBH(OAc)3(17.76mmol)处理。16小时后，用5％NaHCO3溶液淬灭反应并用二氯甲烷萃取。有机萃取物依序用1M HCl、氯化钠饱和水溶液洗涤，经MgSO4干燥并浓缩。通过快速色谱法纯化粗产物，将其溶解于吡啶中并用异硫氰酸3,4二氯苯基酯(1.5当量)处理。在室温下搅拌过夜后，浓缩反应物，将其溶解于二氯甲烷中，用1M HCl、氯化钠饱和水溶液洗涤，经MgSO4干燥并浓缩。通过快速色谱法纯化，得到脲，将其溶解于乙醇中并使用帕尔设备(Parr apparatus)用Pd(OH)2/C和氢气进行处理。当反应完成时，通过硅藻土垫过滤催化剂，并浓缩滤液至干。用6N HCl处理所得油状物并加热到100℃，保持6小时，冷却到室温并浓缩。通过HPLC纯化，得到氨基-6-二羟硼基-2-(2-(3-(3,4-二氯苯基)硫脲基)乙基)己酸盐酸盐。1H NMR(D2O,500MHz)δ7.39(d,J＝8.4Hz,1H),7.32(s,1H),7.01(d,J＝8.4Hz,1H),3.67-3.51(m,2H),2.28-2.17(m,1H),2.05-1.96(m,1H),1.84-1.68(m,2H),1.35-1.24(m,3H),1.14-1.04(m,1H),0.62(t,J＝7.0Hz,2H)。C15H22BCl2N3O4S的ESI MS实验值m/z[404.5(M-18+1)]。
实例120：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-异丁酰胺基乙基)己酸盐酸盐
按与实例119中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-异丁酰胺基乙基)己酸盐酸盐，但使用异丁酰氯代替异硫氰酸3,4二氯苯基酯。1H NMR(D2O,500MHz)δ3.22-3.15(m,2H),2.32(七重峰,J＝6.3Hz,1H),2.16-08(m,1H),1.91-1.83(m,1H),1.83-1.74(m,1H),1.72-1.64(m,1H),1.30-1.22(m,3H),1.12-1.03(m,1H),0.93(d,J＝6.3Hz,6H),0.65(t,J＝7.5Hz,2H)。C12H25BN2O5的ESI MS实验值m/z[271.5(M-18+1)]。
实例121：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-(4-(4-氯苯基)哌啶-1-基)乙基)己酸二盐酸盐
按与实例16中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-(4-(4-氯苯基)哌啶-1-基)乙基)己酸二盐酸盐，但在步骤6中使用4-(4-氯苯基)哌啶作为胺。1H NMR(D2O,300MHz)δ7.22(d,J＝8.4Hz,2H),7.12(d,J＝8.4Hz,2H),3.60-3.47(m,2H),3.32-3.20(m,1H),3.15-2.95(m,3H),2.82-2.70(m,1H),2.31-2.18(m,2H),2.05-1.65(m,6H),1.35-1.15(m,3H),1.15-1.01(m,1H),0.63(t,J＝7.2Hz,2H)。C19H30BClN2O4的ESI MS实验值m/z[397.3(M+1)]。
实例122：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-(4-(4-氯苯甲基)哌啶-1-基)乙基)己酸二盐酸盐
按与实例16中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-(4-(4-氯苯甲基)哌啶-1-基)乙基)己酸二盐酸盐，但在步骤6中使用4-(4-氯苯甲基)哌啶作为胺。1H NMR(D2O,500MHz)δ7.20(d,J＝8.5Hz,2H),7.05(d,J＝8.5Hz,2H),3.45-3.38(m,2H),3.21-3.15(m,1H),3.04-2.96(m,1H),2.82-2.74(m,2H),2.45-2.41(m,2H),2.20-2.14(m,2H),1.85-1.68(m,5H),1.35-1.20(m,5H),1.13-1.04(m,1H),0.64(t,J＝7.5Hz,2H)。C20H32BClN2O4的ESI MS实验值m/z[375.5(M-2×18+1)]。
实例123：制备2-氨基-2-(氮杂环丁烷-3-基甲基)-6-二羟硼基己酸二盐酸盐
按与实例116中所述方式类似的方式制备2-氨基-2-(氮杂环丁烷-3-基甲基)-6-二羟硼基己酸二盐酸盐，但在步骤1中使用2-(1-(叔丁氧基羰基)氮杂环丁烷-3-基)乙酸作为羧酸。1H NMR(D2O,300MHz)3.63–3.50(m,1H),3.08–2.90(m,3H),2.68-2.43(m,2H),2.12-1.94(m,1H),1.82-1.64(m,2H),1.32-1.00(m,4H),0.61(t,J＝7.3Hz,2H)。C10H21BN2O4的ESIMS实验值m/z[245.3(M+1)]。
实例124：制备2-氨基-2-(2-(4-苯甲基哌啶-1-基)丙基)-6-二羟硼基己酸二盐酸盐
按与实例16中所述方式类似的方式制备2-氨基-2-(2-(4-苯甲基哌啶-1-基)丙基)-6-二羟硼基己酸二盐酸盐，但在步骤2中使用3-溴-2-甲基-丙烷作为烷基卤化物，并使用4-苯甲基哌啶，使用以下程序进行步骤6：氮气下，在室温下搅拌所述酮(235mg，0.5mmol)、胺(0.088mL，0.5mmol)与异丙醇钛(IV)(0.186mL，0.63mmol)的混合物。1小时后，用无水乙醇(0.5mL)稀释粘性溶液。添加氰基硼氢化钠(21mg，0.335mL)，并将溶液搅拌1天。搅拌下添加水，并过滤所得无机沉淀，并且用乙醇洗涤。随后真空浓缩滤液。将粗产物溶解于乙酸乙酯中，过滤以移除残留无机固体，并真空浓缩。随后通过快速色谱法纯化产物。水层在液氮中冷冻并冻干，得到呈无色泡沫状的标题化合物(97mg)；1H NMR(D2O,300MHz)δ7.28-7.18(m,2H),7.18-7.09(m,3H),3.37-3.08(m,3H),3.03-2.70(m,2H),2.51-2.26(m,4H),1.90-1.57(m,6H),1.44-1.02(m,8H),0.64(t,J＝7.5Hz,2H)；C21H35BN2O4的MS(+CI):m/z：预期值390.32；实验值391.2(M+H)+,373.3(M+H-H2O)+。
实例125：制备2-氨基-2-(2-(4-苯甲基哌啶-1-基)乙基)-6-二羟硼基己酸二盐酸盐
按与实例16中所述方式类似的方式制备2-氨基-2-(2-(4-苯甲基哌啶-1-基)乙基)-6-二羟硼基己酸，但在步骤6中使用4-苯甲基哌啶作为胺。1H NMR(D2O,300MHz)δ7.28-7.18(m,2H),7.18-7.08(m,3H),3.50-3.36(m,2H),3.24-3.12(m,1H),3.08-2.91(m,1H),2.89-2.71(m,2H),2.56-2.43(m,2H),2.23-2.10(m,2H),1.89-1.64(m,5H),1.43-1.22(m,5H),1.19-1.04(m,1H),0.66(t,J＝7.2Hz,2H)。C20H33BN2O4的ESI MS实验值m/z[377.3(M+1)]。
实例126：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-(4-(4-(三氟甲基)苯甲基)哌啶-1-基)乙基)己酸二盐酸盐
按与实例16中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-(4-(4-(三氟甲基)苯甲基)哌啶-1-基)乙基)己酸二盐酸盐，但在步骤6中使用4-(4-(三氟甲基)苯甲基)哌啶作为胺。1H NMR(D2O,300MHz)δ7.53(d,J＝7.8Hz,2H),7.27(d,J＝7.8Hz,2H),3.50-3.36(m,2H),3.27-3.12(m,1H),3.07-2.91(m,1H),2.90-2.71(m,2H),2.61-2.51(m,2H),2.22-2.09(m,2H),1.90-1.62(m,5H),1.45-1.19(m,5H),1.17-1.04(m,1H),0.67(t,J＝7.2Hz,2H)。C21H32BF3N2O4的ESI MS实验值m/z[445.3(M+1)]。
实例127：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-(4-(4-氟苯甲基)哌啶-1-基)乙基)己酸二盐酸盐
按与实例16中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-(4-(4-氟苯甲基)哌啶-1-基)乙基)己酸二盐酸盐，但在步骤6中使用4-(4-氟苯甲基)哌啶作为胺。1H NMR(D2O,500MHz)δ7.09(m,2H),6.92(m,2H),3.48-3.39(m,2H),3.24-3.12(m,1H),3.06-2.94(m,1H),2.83-2.74(m,2H),2.44-2.37(m,2H),2.25-2.17(m,2H),1.88-1.78(m,1H),1.76-1.64(m,4H),1.33-1.20(m,5H),1.15-1.02(m,1H),0.64(t,J＝7.2Hz,2H)。C21H32BF3N2O4的ESI MS实验值m/z[395.4(M+1)]。
实例128：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-(4,4-二甲基哌啶-1-基)乙基)己酸二盐酸盐
按与实例16中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-(4,4-二甲基哌啶-1-基)乙基)己酸，但在步骤6中使用4,4-二甲基哌啶作为胺。1H NMR(D2O,500MHz)δ3.33-3.19(m,3H),3.12-2.94(m,3H),2.29-2.20(m,2H),1.90-1.82(m,1H),1.80-1.74(m,1H),1.53-1.48(m,4H),1.33-1.25(m,3H),1.16-1.08(m,1H),0.89(s,3H),0.85(s,3H),0.66(t,J＝7.2Hz,2H)。C15H31BN2O4的ESI MS实验值m/z[315.7(M+1)]。
实例129：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-(4-丙基哌啶-1-基)乙基)己酸二盐酸盐
按与实例16中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-(4-丙基哌啶-1-基)乙基)己酸，但在步骤6中使用4-丙基哌啶作为胺。1H NMR(D2O,500MHz)δ3.49-3.40(m,2H),3.24-3.17(m,1H),3.05-2.97(m,1H),2.88-2.79(m,2H),2.24-2.17(m,2H),1.90-1.79(m,3H),1.76-1.70(m,1H),1.53-1.42(m,1H),1.35-1.05(m,10H),0.74(t,J＝6.9Hz,2H),0.65(t,J＝7.2Hz,2H)。C16H33BN2O4的ESI MS实验值m/z[329.7(M+1)]。
实例130：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-(2-乙基-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-基)乙基)己酸二盐酸盐
步骤1：合成(E)-3-(3-乙氧基-3-氧代丙-1-烯基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酸叔丁基酯
用(乙氧基羰基亚甲基)三苯基正膦(12.8g，37.0mmol)整份处理3-甲酰基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酸叔丁基酯(8.4g，32.2mmol)于无水THF(200mL，0.16M)中的溶液。在室温下搅拌过夜后，蒸发溶剂，并将所得残余物溶解于乙醚中。添加庚烷并滤出沉淀的三苯基膦氧化物。浓缩滤液并通过快速色谱法(含5-20％乙酸乙酯的己烷)纯化，得到呈黄色油状的(E)-3-(3-乙氧基-3-氧代丙-1-烯基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酸叔丁基酯(8.7g，82％)。1H NMR(CDCl3,500MHz)δ7.21-7.14(m,2H),7.14-7.07(m,2H),6.74(dd,J1＝15.8Hz,J2＝4.8Hz,1H),5.79(dd,J1＝15.8Hz,J2＝1.3Hz,1H),4.72(d,J＝16.5Hz,1H),4.35(d,J＝16.5Hz,1H),4.11(qw,J＝14.4Hz,2H),3.18(dd,J1＝15.8Hz,J2＝6.2Hz 1H),2.84(d,J＝15.8Hz,1H),1.49(s,9H),1.23(t,J＝14.4Hz,3H)。C19H25NO4的ESI MS实验值m/z[354.4(M+23)]。
步骤2：合成3-(2-(叔丁氧基羰基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-基)丙酸
抽空(E)-3-(3-乙氧基-3-氧代丙-1-烯基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酸叔丁基酯(8.7g，26.3mmol)和Pd/C(催化剂)于乙醇(150mL，0.18M)中的溶液，以移除空气，随后经由气球用氢气处理。搅拌4小时后，添加3M氢氧化钠以将溶液调至pH 11，并搅拌混合物过夜。过滤所得溶液，浓缩，酸化到pH 2并用乙酸乙酯萃取。有机层经MgSO4干燥，过滤并浓缩，得到呈黄色固体状的3-(2-(叔丁氧基羰基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-基)丙酸(7.7g，96％)。C17H23NO4的ESI MS实验值m/z[328.4(M+23)]。粗产物不经进一步纯化即使用。
步骤3：合成3-(3-(甲氧基(甲基)氨基)-3-氧代丙基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酸叔丁基酯
在剧烈搅拌下，经10分钟用CDI(6.1g，37.8mmol)分三份处理3-(2-(叔丁氧基羰基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-基)丙酸(7.7g，25.2mmol)于二氯甲烷(200mL，0.13M)中的溶液。添加完成后，再搅拌混合物40分钟，并用N,O-二甲基羟胺盐酸盐(3.7g，37.2mmol)处理并搅拌过夜。所得溶液依序用水、1M HCl、1M NaOH、氯化钠饱和水溶液洗涤，经无水MgSO4干燥，过滤并浓缩，得到呈黄色油状的3-(3-(甲氧基(甲基)氨基)-3-氧代丙基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酸叔丁基酯(8.6g,98％)。LCMS,C19H28N2O4m/z[371.4(M+23)]。粗产物不经进一步纯化即使用。
步骤4：合成3-(3-氧代庚-6-烯基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酸叔丁基酯
在氩气氛围下，向直火烘干的圆底烧瓶中装入镁(1.5g，62.9mmol)小I2晶体和刚好足以覆盖镁的无水THF。将混合物加热到回流，直到颜色消散(约10分钟)。立即添加约10％的4-溴-1-丁烯(61.7mmol)于THF(100mL)中的溶液。在保持轻微回流的同时，逐滴添加剩余溶液。添加完成后，持续加热5分钟(直到几乎所有的Mg都已经反应)。随后将新近形成的格利雅试剂添加到3-(3-(甲氧基(甲基)氨基)-3-氧代丙基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酸叔丁基酯(8.6g，24.7mmol)于无水THF(100mL)中的冰冷溶液中。在室温下搅拌过夜后，将溶液倾倒入氯化铵饱和水溶液中并用乙醚(3×)萃取。合并的有机萃取物经MgSO4干燥，过滤并减压浓缩，得到3-(3-氧代庚-6-烯基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酸叔丁基酯(8.0g，95％)。C21H29NO3的ESI MS实验值m/z[366.5(M+23)]。粗产物不经进一步纯化即使用。
步骤5：合成3-(3-乙酰胺基-3-(叔丁基氨甲酰基)辛-7-烯基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酸叔丁基酯
在室温下，搅拌3-(3-氧代庚-6-烯基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酸叔丁基酯(2.0g，5.8mmol)、叔丁基异腈(2.7mL，23.3mmol)和乙酸铵2.7g(34.8mmol)于2,2,2-三氟乙醇(3mL，1.9M)中的溶液，直到薄层色谱法(TLC)指示起始酮被耗尽。一旦完成，反应物用乙酸乙酯稀释，用2M HCl淬灭并用乙酸乙酯萃取。有机层依序用2M HCl和氯化钠饱和水溶液洗涤，经MgSO4干燥，过滤并浓缩。通过柱色谱法(含乙酸乙酯的己烷)纯化，得到呈黄色油状的3-(3-乙酰胺基-3-(叔丁基氨甲酰基)辛-7-烯基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酸叔丁基酯(1.5g，53％)。C28H43N3O4的ESI MS实验值m/z[508.6(M+23)]。
步骤6：合成3-(3-乙酰胺基-3-(叔丁基氨甲酰基)-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)庚基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酸叔丁基酯
在氩气氛围下，将双(1,5-二环辛二烯)二氯化二铱(I)(54mg，3％mol)、二苯基膦基乙烷(64mg，6％mol)和4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环(1.5mL，10.7mmol)于无水二氯甲烷(20mL)中的溶液冷却到0℃。整份添加3-(3-乙酰胺基-3-(叔丁基氨甲酰基)辛-7-烯基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酸叔丁基酯(1.5g，2.67mmol)于无水二氯甲烷(20mL)中的第二溶液。4小时后，LCMS指示所有起始烯烃都被耗尽，并且反应物依序用水、氯化钠饱和水溶液洗涤，经MgSO4干燥，过滤并浓缩。通过快速色谱法(含20-35％乙酸乙酯的己烷)纯化，得到呈黄色油状的3-(3-乙酰胺基-3-(叔丁基氨甲酰基)-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)庚基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酸叔丁基酯(1.5g，93％)。C34H56BN3O6的ESI MS实验值m/z[614.7(M+1),633.7(M+23)]。
步骤7：合成2-乙酰胺基-N-叔丁基-2-(2-(1,2,3,4-四氢异喹啉-3-基)乙基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)己酰胺
用HCl(g)的乙酸乙酯溶液(约2M)处理3-(3-乙酰胺基-3-(叔丁基氨甲酰基)-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)庚基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酸叔丁基酯于乙酸乙酯中的溶液。搅拌30分钟后，浓缩反应物至干，且粗盐酸盐产物不经进一步纯化即使用。
步骤8：合成2-乙酰胺基-N-叔丁基-2-(2-(2-乙基-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-基)乙基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)己酰胺
在室温下将乙醛(0.06mL，1.1mmol)和2-乙酰胺基-N-叔丁基-2-(2-(1,2,3,4-四氢异喹啉-3-基)乙基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)己酰胺(0.51g，1.0mmol)于二氯甲烷中的溶液搅拌1小时，随后用三乙酰氧基硼氢化钠(0.63g，3mmol)处理。搅拌过夜后，反应物用5％NaHCO3水溶液(W/V)淬灭并用二氯甲烷萃取。有机层依序用1MHCl、氯化钠饱和水溶液洗涤，经MgSO4干燥，过滤并浓缩。通过快速色谱法(含1％甲醇的氯仿)纯化，得到呈油状的2-乙酰胺基-N-叔丁基-2-(2-(2-乙基-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-基)乙基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)己酰胺(0.45g，83％)。C31H52BN3O4的ESI MS实验值m/z[b.e.542.7(M+1)]。
步骤9：合成2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-(2-乙基-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-基)乙基)己酸
将2-乙酰胺基-N-叔丁基-2-(2-(2-乙基-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-基)乙基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)己酰胺(0.108g，0.2mmol)于6N HCl中的溶液加热到回流，保持16小时，冷却到室温并浓缩至干。通过制备型HPLC(含20％乙腈和0.1％三氟乙酸的水)纯化，得到呈白色固体状的2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-(2-乙基-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-基)乙基)己酸(90mg，83％)。1H NMR(D2O,500MHz)δ7.32-7.10(m,4H),4.51-4.38(m,1H),4.29-4.20(m,1H),3.83-3.78(m,0.5H),3.70-3.64(m,0.5H),3.33-3.08(m,3H),3.03-2.85(m,1H),2.02-1.62(m,5.5H),1.50-1.38(m,0.5H),1.35-1.20(m,6H),1.17-1.05(m,1H),0.70-0.60(m,2H)。C19H31BN2O4的ESI MS实验值m/z[345.4(M+1-18),327.4(M+1-2×18)]。
实例131：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-(1,2,3,4-四氢异喹啉-3-基)乙基)己酸二盐酸盐
按与实例130中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-(1,2,3,4-四氢异喹啉-3-基)乙基)己酸二盐酸盐，但省略步骤7和8。1H NMR(D2O,500MHz)δ7.29-7.13(m,4H),4.33(bs,2H),3.59-3.50(m,1H),3.18(dd,J1＝17.6Hz,J2＝5.3Hz,1H),2.87(dd,J1＝17.6Hz,J2＝10.6Hz,1H),2.12-1.74(m,6H),1.41-1.30(m,3H),1.22-1.13(m,1H),0.69(t,J＝7.2Hz,2H)。C17H27BN2O4的ESI MS实验值m/z[335.4(M+1),317.4(M+1-18)]。
实例132：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-(2-(4-氯苯甲基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-基)乙基)己酸二盐酸盐
按与实例130中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-(2-(4-氯苯甲基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-基)乙基)己酸二盐酸盐，但在步骤8中使用4-氯苯甲醛作为醛。1H NMR(D2O,500MHz)δ7.47-7.06(m,8H),4.45-4.11(m,4H),3.83-3.64(m,1H),3.32-3.20(m,1H),3.07-2.90(m,1H),2.05-1.40(m,6H),1.39-1.21(m,3H),1.22-1.06(m,1H),0.71-0.60(m,2H)。C24H32BClN2O4的ESI MS实验值m/z[441.4/443.5(M+1-18)]。
实例133：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-(2-异戊基-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-基)乙基)己酸二盐酸盐
按与实例130中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-(2-异戊基-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-基)乙基)己酸二盐酸盐，但在步骤8中使用异戊醛作为醛。1H NMR(D2O,500MHz)δ7.34-7.10(m,4H),4.50-4.38(m,1H),4.31-4.18(m,1H),3.82-3.75(m,0.5H),3.70-3.62(m,0.5H),3.28-2.85(m,4H),2.00-1.41(m,9H),1.35-1.20(m,3H),1.18-1.06(m,1H),0.86-0.75(m,6H),0.70-0.60(m,2H)。C22H37BN2O4的ESI MS实验值m/z[427.2(M+23),387.5(M+1-18)]。
实例134：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-(2-(环己基甲基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-基)乙基)己酸二盐酸盐
按与实例130中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-(2-(环己基甲基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-基)乙基)己酸二盐酸盐，但在步骤8中使用环己醛作为醛。1H NMR(D2O,500MHz)δ7.35-7.07(m,4H),4.50-4.10(m,2H),3.85-3.64(m,1H),3.30-3.12(m,1H),3.08-2.80(m,3H),2.05-1.42(m,12H),1.37-1.05(m,7H),1.05-0.88(m,2H),0.70-0.60(m,2H)。C24H39BN2O4的ESI MS实验值m/z[431.6(M+1),413.6(M+1-18)]。
实例135：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-(2-异丁基-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-基)乙基)己酸二盐酸盐
按与实例130中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-(2-异丁基-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-基)乙基)己酸二盐酸盐，但在步骤8中使用异丁醛作为醛。1H NMR(D2O,500MHz)δ7.36-7.05(m,4H),4.52-4.12(m,2H),3.83-3.65(m,1H),3.30-3.15(m,1H),3.08-2.81(m,3H),2.15-1.96(m,3.5H),1.90-1.70(m,3H),1.53-1.45(m,0.5H),1.35-1.27(m,3H),1.18-1.07(m,1H),1.01-0.85(m,6H),0.70-0.60(m,2H)。C21H35BN2O4的ESI MS实验值m/z[391.5(M+1),373.5(M+1-18)]。
实例136：制备6-二羟硼基-2-(3-(3,4-二氯苯甲基氨基)丙基)-2-(甲基氨基)己酸二盐酸盐
步骤1：合成4-(甲氧基(甲基)氨基)-4-氧代丁基氨基甲酸叔丁基酯
在氩气氛围下，用CDI(17.6g，0.108mol)处理4-(叔丁氧基羰基氨基)丁酸(20g，0.098mol)于二氯甲烷(280mL，0.35M)中的室温溶液。1.5小时后，添加O,N-二甲基羟胺盐酸盐(10.6g；0.108mol)，并搅拌所得溶液过夜。将混合物添加到分液漏斗中，用二氯甲烷(220mL)稀释并依序用2M HCl(2×)、1M NaOH和氯化钠饱和水溶液洗涤，经MgSO4干燥，过滤并浓缩，得到4-(甲氧基(甲基)氨基)-4-氧代丁基氨基甲酸叔丁基酯(23.8g，98％)。C11H22N2O4的ESI MS实验值m/z[269.4(M+Na+)]。
步骤2：合成4-氧代辛-7-烯基氨基甲酸叔丁基酯
在氮气氛围下，向直火烘干的圆底烧瓶中装入镁(3.95g，0.162mol)小I2晶体和刚好足以覆盖镁的无水THF。将混合物加热到回流，直到颜色消散(约10分钟)。接下来，添加4-溴-1-丁烯(16.4mL，0.162mmol)于无水THF(70mL)中的溶液，并持续加热10分钟。冷却到室温后，接着将新近形成的格利雅试剂添加到4-(甲氧基(甲基)氨基)-4-氧代丁基氨基甲酸叔丁基酯(10g，0.041mol)于无水THF(100mL)中的冰冷溶液中。在室温下搅拌过夜后，将溶液倾倒入氯化铵饱和水溶液(70mL)中并用乙醚(2×)萃取。合并有机萃取物并依序用1.0MHCl水溶液和氯化钠饱和水溶液洗涤，经MgSO4干燥，过滤并浓缩。通过快速柱色谱法(含15-30％乙酸乙酯的己烷)纯化，得到呈无色油状的4-氧代辛-7-烯基氨基甲酸叔丁基酯(6.04g，62％)。C13H23NO3的ESI MS实验值m/z[264.3(M+Na+)]。
步骤3：合成4-(叔丁基氨甲酰基)-4-(N-甲基乙酰胺基)辛-7-烯基氨基甲酸叔丁基酯
用叔丁基异腈(0.56mL，5.0mmol)处理4-氧代辛-7-烯基氨基甲酸叔丁基酯(300mg；1.24mmol)、甲基乙酸铵(680mg，7.46mmol)于2,2,2-三氟乙醇(2mL)中的溶液，并在室温下搅拌5天。添加乙酸乙酯(5mL)和2M HCl水溶液(2mL)，并且再剧烈搅拌溶液3小时。分离各相且有机相依序用水和氯化钠饱和水溶液洗涤，经MgSO4干燥，过滤并浓缩。通过快速柱色谱法(含2％甲醇的二氯甲烷)纯化粗粘性黄色油状残余物，得到4-(叔丁基氨甲酰基)-4-(N-甲基乙酰胺基)辛-7-烯基氨基甲酸叔丁基酯(130mg，26％)。1H NMR(CDCl3,500MHz)δ5.81-5.73(m,1H),5.40(s,1H),5.05-4.96(m,2H),4.62(bs,1H),3.15-3.09(m,2H),3.01(s,3H)2.17-2.12(m,2H),2.10(s,3H)2.04-1.94(m,2H),1.77-1.71(m,2H),1.43(s,9H),1.38-1.34(m,2H),1.32(s,9H)。C21H39N3O4的ESI MS实验值m/z[420.5(M+Na+),442.4(M+HCOO-),396.6(M-1)]。
步骤4：合成4-(叔丁基氨甲酰基)-4-(N-甲基乙酰胺基)-8-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)辛基氨基甲酸叔丁基酯
在氩气氛围下，将双(1,5-二环辛二烯)二氯化二铱(I)(6mg；0.009mmol)和二苯基膦基乙烷(7mg，0.018mmol)于二氯甲烷(1mL)中的溶液冷却到0℃，并用4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环(0.174mL，1.2mmol)处理。搅拌30分钟后，添加4-(叔丁基氨甲酰基)-4-(N-甲基乙酰胺基)辛-7-烯基氨基甲酸叔丁基酯(120mg，0.3mmol)于二氯甲烷(4mL)中的溶液，并且再搅拌溶液16小时。添加二氯甲烷(10mL)，且溶液依序用水和氯化钠饱和水溶液洗涤，经MgSO4干燥，过滤并浓缩。通过柱色谱法(含3％甲醇的二氯甲烷)纯化，得到4-(叔丁基氨甲酰基)-4-(N-甲基乙酰胺基)-8-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)辛基氨基甲酸叔丁基酯(142mg，90％)。C27H52BN3O6的ESI MS实验值m/z[548.7(M+Na+),526.7(M+1),570.8(M+HCOO-),524.6(M-1)]。
步骤5：合成2-(3-氨基丙基)-2-(N-甲基乙酰胺基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)己酸乙酯盐酸盐.
用无水HCl(2N的乙酸乙酯溶液，10mL)处理4-(叔丁基氨甲酰基)-4-(N-甲基乙酰胺基)-8-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)辛基氨基甲酸叔丁基酯(140mg，0.266mmol)于乙酸乙酯(2mL)中的溶液，并在室温下搅拌。30分钟后，浓缩溶液，得到呈白色固体状的粗2-(3-氨基丙基)-2-(N-甲基乙酰胺基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)己酸乙酯盐酸盐(130mg)。C20H39BN2O5的ESI MS实验值m/z[399.5(M+1)]。此物质不经进一步纯化即使用。
步骤6：合成2-(3-(3,4-二氯苯甲基氨基)丙基)-2-(N-甲基乙酰胺基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)己酸乙酯盐酸盐.
在室温下，搅拌3,4-二氯苯甲醛(55mg，0.31mmol)和2-(3-氨基丙基)-2-(N-甲基乙酰胺基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)己酸乙酯盐酸盐(120mg，0.26mmol)于二氯甲烷(3mL)中的溶液。30分钟后，整份添加三乙酰氧基硼氢化钠(138mg，0.65mmol)，并持续搅拌过夜。一旦完成，溶液就用二氯甲烷(10mL)稀释，用5％NaHCO3水溶液(W/V，5mL)淬灭，并剧烈搅拌30分钟。分离各层且有机相用水和氯化钠饱和水溶液洗涤，经MgSO4干燥，过滤并浓缩。通过快速柱色谱法(含2-20％甲醇的二氯甲烷)纯化，得到2-(3-(3,4-二氯苯甲基氨基)丙基)-2-(N-甲基乙酰胺基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)己酸乙酯(78mg)。C27H43BCl2N2O5的ESI MS实验值m/z[557.6/559.6(M+1)]。
步骤7：合成6-二羟硼基-2-(3-(3,4-二氯苯甲基氨基)丙基)-2-(甲基氨基)己酸二盐酸盐.
将2-(3-(3,4-二氯苯甲基氨基)丙基)-2-(N-甲基乙酰胺基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)己酸乙酯(76mg)于6M HCl水溶液中的溶液加热到回流，保持16小时，浓缩至干并通过制备型HPLC纯化。将所得残余物再溶解于2N HCl中并蒸发，得到6-二羟硼基-2-(3-(3,4-二氯苯甲基氨基)丙基)-2-(甲基氨基)己酸二盐酸盐(19mg，12％-3个步骤)。1H NMR(D2O,500MHz)δ7.55(bs,1H),7.51(d,J＝7.5Hz,1H),7.28(d,J＝7.5Hz,1H),4.12(s,2H),3.02(t,J＝7.2Hz,2H),2.55(s,3H),1.91-1.68(m,5H),1.60-1.49(m,1H),1.38-1.29(m,2H),1.28-1.19(m,1H),1.14-1.04(m,1H),0.70(t,J＝7.2Hz,2H)。C17H27BCl2N2O4的ESI MS实验值m/z[405.4/407.4(M+1)]。
实例137：制备6-二羟硼基-2-(甲基氨基)-2-(3-(吡咯烷-1-基)丙基)己酸二盐酸盐
步骤1：制备2-(二苯基亚甲基氨基)己-5-烯酸叔丁基酯
在氩气氛围下，将N-(二苯基亚甲基)甘氨酸叔丁基酯(6.30g，21.33mmol)和4-溴-丁烯(3.45g，25.56mmol)于新蒸馏的THF(50mL)中的溶液冷却到-78℃，并用双(三甲基硅烷基)氨基钠(23.4mL，1.0M的THF溶液)处理。一旦添加完成，就使反应物升温到室温并搅拌16小时，冷却到0℃，用乙醚稀释并依序用NaHCO3饱和水溶液和NaCl饱和水溶液洗涤，经MgSO4干燥，过滤并浓缩。通过MPLC(含1-25％乙酸乙酯的庚烷，历经8CV)迅速纯化，得到呈无色油状的产物2-(二苯基亚甲基氨基)己-5-烯酸叔丁基酯(7.00g，94％)。Rf 0.50(含30％乙酸乙酯的庚烷)。
步骤2：制备2-(二苯基亚甲基氨基)-2-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)丁基)己-5-烯酸叔丁基酯
在氩气氛围下，将2-(二苯基亚甲基氨基)己-5-烯酸叔丁基酯(7.00g，20.06mmol)于新蒸馏的(THF 50mL)中的溶液冷却到-78℃，并用双(三甲基硅烷基)氨基钠(60mL，1.0M的THF溶液)处理。搅拌10分钟后，添加2-(4-碘丁基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环(12.4g，40.0mmol)，并使反应物升温到室温，且搅拌16小时。接下来，将反应混合物冷却到0℃，用乙醚稀释并依序用NaHCO3饱和水溶液和NaCl饱和水溶液洗涤，经MgSO4干燥，过滤并浓缩。通过MPLC(含1-20％乙酸乙酯和0.5％三乙胺的庚烷，历经6CV)纯化，得到呈无色油状的2-(二苯基亚甲基氨基)-2-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)丁基)己-5-烯酸叔丁基酯(8.50g，80％)。Rf 0.55(含30％乙酸乙酯的庚烷)。C33H46BNO4的ESI MS实验值m/z[532.5(M+1)]。
步骤3：制备2-(叔丁氧基羰基氨基)-2-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)丁基)己-5-烯酸叔丁基酯
用1N HCl(25mL)处理2-(二苯基亚甲基氨基)-2-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)丁基)己-5-烯酸叔丁基酯(5.31g，10.0mmol)于乙醚(25mL)中的溶液。搅拌4小时后，依序添加碳酸氢钠(8.4g，0.1mol)和碳酸二叔丁基酯(2.40g，11.0mmol)。16小时后，分离各层且水层用乙酸乙酯萃取。合并的有机层用NaCl饱和水溶液洗涤，经MgSO4干燥，过滤并浓缩。通过MPLC(含0-20％乙酸乙酯的庚烷，历经8CV)纯化，得到呈无色油状的2-(叔丁氧基羰基氨基)-2-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)丁基)己-5-烯酸叔丁基酯(3.64g，78％)。Rf 0.55(含30％乙酸乙酯的庚烷)；C25H46BNO6的ESI MS实验值m/z[468.3(M+1)]。
步骤5：制备2-(叔丁氧基羰基(甲基)氨基)-2-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)丁基)己-5-烯酸叔丁基酯
在氩气氛围下，将2-(叔丁氧基羰基氨基)-2-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)丁基)己-5-烯酸叔丁基酯(1.35g，2.89mmol)于新蒸馏的(THF 5mL)中的溶液冷却到0℃，并在氩气下用双(三甲基硅烷基)氨基钠(6mL，1.0M的THF溶液)处理。搅拌10分钟后，添加碘甲烷(2.04g，14.4mmol)并使反应物升温到室温且搅拌16小时。通过TLC确定完成后，将反应混合物冷却到0℃，用乙醚稀释并用NaCl饱和水溶液洗涤，经MgSO4干燥，过滤并浓缩。通过MPLC(含1-20％乙酸乙酯和0.5％三乙胺的庚烷，历经8CV)纯化，得到呈无色油状的2-(叔丁氧基羰基(甲基)氨基)-2-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)丁基)己-5-烯酸叔丁基酯(1.27g，91％)。Rf 0.35(含20％乙酸乙酯的庚烷)。C26H48BNO6的ESI MS实验值m/z[482.3(M+1)]。
步骤6：制备2-(叔丁氧基羰基(甲基)氨基)-2-(3-氧代丙基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)己酸叔丁基酯
将2-(叔丁氧基羰基(甲基)氨基)-2-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)丁基)己-5-烯酸叔丁基酯(1.10g，2.29mmol)于二氯甲烷(30mL)中的溶液冷却到-78℃，并用臭氧处理，直到出现浅蓝灰色。TLC指示不存在起始物质后，用氮气代替臭氧进口管并使氮气鼓泡通过溶液，持续20分钟，以移除任何过量的臭氧。整份添加三苯基膦(1.50g，5.72mmol，2.5当量)，移除冷却浴并搅拌混合物4小时。浓缩溶液并通过MPLC(含0-40％乙酸乙酯的庚烷)纯化，得到呈无色油状的2-(叔丁氧基羰基(甲基)氨基)-2-(3-氧代丙基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)己酸叔丁基酯(780mg，70％)。Rf 0.40(含30％乙酸乙酯的庚烷)。C25H46BNO7的ESI MS实验值m/z[484.3(M+1)]。
步骤6：制备2-(叔丁氧基羰基(甲基)氨基)-2-(3-(吡咯烷-1-基)丙基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)己酸叔丁基酯
用三乙酰氧基硼氢化钠(168mg，0.80mmol)整份处理2-(叔丁氧基羰基(甲基)氨基)-2-(3-氧代丙基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)己酸叔丁基酯(193mg，0.40mmol，1.0当量)和吡咯烷(43mg，0.60mmol，1.5当量)于1,2-二氯乙烷(2mL)中的溶液。在室温下搅拌过夜后，反应混合物用NaHCO3饱和水溶液(1mL)淬灭并再搅拌5分钟。将所得混合物添加到分液漏斗中，用NaCl饱和水溶液(5mL)稀释并用二氯甲烷(2×10mL)萃取。有机层经MgSO4干燥，过滤并减压浓缩。通过用含1-10％甲醇的氯仿梯度洗脱的快速柱色谱法纯化，得到呈油状的2-(叔丁氧基羰基(甲基)氨基)-2-(3-(吡咯烷-1-基)丙基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)己酸叔丁基酯(186mg，88％)。Rf0.35(含10％甲醇的二氯甲烷)。C29H55BN2O6的ESI MS实验值m/z[539.4(M+1)]。
步骤7：制备6-二羟硼基-2-(甲基氨基)-2-(3-(吡咯烷-1-基)丙基)己酸二盐酸盐
在95℃下，将2-(叔丁氧基羰基(甲基)氨基)-2-(3-(吡咯烷-1-基)丙基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)己酸叔丁基酯(183mg，0.33mmol)于6N盐酸(5mL)中的溶液搅拌过夜。冷却到室温后，将反应混合物转移到分液漏斗中，用脱离子水(5mL)稀释并用二氯甲烷(3×)洗涤。水层在液氮中冷冻并冻干，得到呈无色泡沫状的6-二羟硼基-2-(甲基氨基)-2-(3-(吡咯烷-1-基)丙基)己酸二盐酸盐(81mg，80％)。1H NMR(D2O,300MHz)δ3.55-3.45(m,2H),3.14-3.05(m,2H),2.98-2.87(m,2H),2.53(s,3H),2.03-1.92(m,2H),1.92-1.76(m,6H),1.76-1.64(m,1H),1.62-1.48(m,1H),1.36-1.14(m,3H),1.14-0.98(m,1H),0.64(t,J＝7.2Hz,2H)。C14H29BN2O4的ESI MS实验值m/z[301.2(M+1)]。
实例138：制备6-二羟硼基-2-(3-(2,3-二氢-1H-茚-2-基氨基)丙基)-2-(甲基氨基)己酸二盐酸盐
按与实例137中所述方式类似的方式制备6-二羟硼基-2-(3-(2,3-二氢-1H-茚-2-基氨基)丙基)-2-(甲基氨基)己酸二盐酸盐，但在步骤6中使用2,3-二氢-1H-茚-2-胺作为胺。1H NMR(D2O,300MHz)δ7.15-7.04(m,4H),3.94-3.82(m,1H),3.25-3.16(m,2H),3.11-2.80(m,4H),2.47(s,3H),1.89-1.40(m,6H),1.27-1.07(m,3H),1.07-0.92(m,1H),0.58(t,J＝7.5Hz,2H)。C19H31BN2O4的ESI MS实验值m/z[363.3(M+1)]。
实例139：制备6-二羟硼基-2-(3-(4-氯苯甲基氨基)丙基)-2-(甲基氨基)己酸二盐酸盐
按与实例137中所述方式类似的方式制备6-二羟硼基-2-(3-(4-氯苯甲基氨基)丙基)-2-(甲基氨基)己酸二盐酸盐，但在步骤6中使用4-氯苯甲胺作为胺。1H NMR(D2O,300MHz)δ7.32-7.18(m,4H),4.01(s,2H),2.90(t,J＝7.2Hz,2H),2.46(s,3H),1.84-1.38(m,6H),1.28-1.04(m,3H),1.04-0.92(m,1H),0.56(t,J＝7.5Hz,2H)。C17H28BClN2O4的ESIMS实验值m/z[371.2(M+1)]。
实例140：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(3-(2,4-二氯苯乙基氨基)丙基)己酸二盐酸盐
步骤1：合成4-乙酰胺基-4-(叔丁基氨甲酰基)辛-7-烯基氨基甲酸叔丁基酯
用叔丁基异腈(4.1mL，35.9mmol)处理4-氧代辛-7-烯基氨基甲酸叔丁基酯(实例159，2.17g，8.99mmol)和乙酸铵(4.16g，53.9mmol)于2,2,2-三氟乙醇(7mL)中的溶液，并在室温下搅拌3天。添加乙酸乙酯(15mL)和2M HCl水溶液(10mL)且再剧烈搅拌溶液3小时。分离各相且有机相依序用水和氯化钠饱和水溶液洗涤，经MgSO4干燥，过滤并浓缩。通过快速柱色谱法(含5-50％乙酸乙酯的己烷)纯化粗粘性黄色残余物，得到4-乙酰胺基-4-(叔丁基氨甲酰基)辛-7-烯基氨基甲酸叔丁基酯(2.27g，66％)。1H NMR(CDCl3,500MHz)δ6.97(s,1H),5.79-5.70(m,1H),5.56(s,1H),4.99-4.92(m,2H),4.55(bs,1H),3.08-3.06(m,2H),2.78-2.67(m,2H),2.03-1.93(m,1H),1.99(s,3H),1.84-1.76(m,1H),1.42(s,9H),1.38-1.34(m,2H),1.36(s,9H),1.29-1.24(m,2H)，C20H37N3O4的ESI MS实验值m/z[406.5(M+Na+),384.6(M+1),382.5(M-1)]。
步骤2：合成4-乙酰胺基-4-(叔丁基氨甲酰基)辛-7-烯基氨基甲酸叔丁基酯
在氩气氛围下，将双(1,5-二环辛二烯)二氯化二铱(I)(26.2mg；0.039mmol)和二苯基膦基乙烷(31mg，0.078mmol)于二氯甲烷(3mL)中的溶液冷却到0℃，并用4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环(0.76mL，5.2mmol)处理。搅拌30分钟后，添加4-乙酰胺基-4-(叔丁基氨甲酰基)辛-7-烯基氨基甲酸叔丁基酯(500mg，1.3mmol)于二氯甲烷(15mL)中的溶液并且再搅拌溶液16小时。添加二氯甲烷(20mL)，且溶液依序用水和氯化钠饱和水溶液洗涤，经MgSO4干燥，过滤并浓缩。通过柱色谱法(含3％甲醇的二氯甲烷)纯化，得到4-乙酰胺基-4-(叔丁基氨甲酰基)辛-7-烯基氨基甲酸叔丁基酯(530mg，80％)。C26H50BN3O6的ESI MS实验值m/z[534.6(M+Na+),512.6(M+1),510.5(M-1)]。
步骤3：合成2-乙酰胺基-2-(3-氨基丙基)-N-叔丁基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)己酰胺
用无水HCl(2N的乙酸乙酯溶液15mL)处理4-乙酰胺基-4-(叔丁基氨甲酰基)辛-7-烯基氨基甲酸叔丁基酯(530mg，1.04mmol)于乙酸乙酯(5mL)中的溶液并在室温下搅拌。30分钟后，浓缩溶液，得到呈白色固体状的粗2-乙酰胺基-2-(3-氨基丙基)-N-叔丁基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)己酰胺盐酸盐(459mg，99％)。C21H42BN3O4的ESIMS实验值m/z[434.6(M+Na+),412.6(M+1),410.5(M-1)]。此物质不经进一步纯化即使用。
步骤4：合成2-乙酰胺基-N-叔丁基-2-(3-(2,4-二氯苯乙基氨基)丙基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)己酰胺
在室温下搅拌(2,4-二氯苯基)乙醛(0.8mmol)和2-乙酰胺基-2-(3-氨基丙基)-N-叔丁基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)己酰胺盐酸盐(260mg，0.58mmol)于二氯甲烷(5mL)中的溶液。30分钟后，整份添加三乙酰氧基硼氢化钠(310mg，1.45mmol)并持续搅拌过夜。一旦完成，溶液就用二氯甲烷(10mL)稀释，用5％NaHCO3水溶液(W/V，5mL)淬灭并剧烈搅拌30分钟。分离各层且有机相用水和氯化钠饱和水溶液洗涤，经MgSO4干燥，过滤并浓缩。通过快速柱色谱法(含1-20％甲醇的二氯甲烷)纯化，得到2-乙酰胺基-N-叔丁基-2-(3-(2,4-二氯苯乙基氨基)丙基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)己酰胺(140mg，47％)。C29H48BCl2N3O4的ESI MS实验值m/z[584.6/586.6(M+1)]。
步骤5：合成2-氨基-6-二羟硼基-2-(3-(2,4-二氯苯乙基氨基)丙基)己酸
将2-乙酰胺基-N-叔丁基-2-(3-(2,4-二氯苯乙基氨基)丙基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)己酰胺(140mg)于6M HCl水溶液中的溶液加热到回流，保持16小时，浓缩至干并通过制备型HPLC纯化。将残余物再溶解于2N HCl中并蒸发，得到2-氨基-6-二羟硼基-2-(3-(2,4-二氯苯乙基氨基)丙基)己酸二盐酸盐(110mg，98％)。1H NMR(D2O,500MHz)δ7.45(bs,1H),7.23(bs,2H),3.19(t,J＝7.5Hz,2H),3.06-2.95(m,4H),1.91-1.71(m,5H),1.60-1.49(m,1H),1.34-1.25(m,3H),1.17-1.08(m,1H),0.69(t,J＝7.2Hz,2H)。C17H27BCl2N2O4的ESI MS实验值m/z[387.5/389.4(M+1-18)]。
实例141：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(3-(3,4-二氯苯甲基氨基)丙基)己酸二盐酸盐
按与实例140中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(3-(3,4-二氯苯甲基氨基)丙基)己酸二盐酸盐，但在步骤4中使用3,4-二氯苯甲醛作为醛。1H NMR(D2O,500MHz)δ7.57-7.48(m,2H),7.30-7.26(m,1H),4.11(s,2H),3.00(t,J＝7.5Hz,2H),1.90-1.68(m,5H),1.63-1.51(m,1H),1.35-1.25(m,3H),1.17-1.09(m,1H),0.69(t,J＝7.2Hz,2H)。C16H25BCl2N2O4的ESI MS实验值m/z[391.4/393.4(M+1)]。
实例142：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-(4-(4-氯苯甲基)哌啶-1-基)乙基)己酸二盐酸盐
按与实例16中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-(4-(4-氯苯甲基)哌啶-1-基)乙基)己酸二盐酸盐，但在步骤6中使用4-(4-氯苯甲基)哌啶作为醛。1H NMR(D2O,500MHz)δ7.20(d,J＝8.5Hz,2H),7.05(d,J＝8.5Hz,2H),3.45-3.38(m,2H),3.21-3.15(m,1H),3.04-2.96(m,1H),2.82-2.74(m,2H),2.45-2.41(m,2H),2.20-2.14(m,2H),1.85-1.68(m,5H),1.35-1.20(m,5H),1.13-1.04(m,1H),0.64(t,J＝7.5Hz,2H)。C20H32BClN2O4的ESI MS实验值m/z[375.5(M-2×18+1)]。
实例143：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-((S)-吡咯烷-2-基)乙基)己酸二盐酸盐
按与实例130中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(2-((S)-吡咯烷-2-基)乙基)己酸二盐酸盐，但在步骤1中使用1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-甲酸作为羧酸。1H NMR(D2O,300MHz)δ3.48-3.36(m,1H),3.23-3.10(m,2H),2.19-2.04(m,1H),2.00-1.45(m,9H),1.37-1.21(m,3H),1.19-1.03(m,1H),0.64(t,J＝7.5Hz,2H)。C12H25BN2O4的ESIMS实验值m/z[273.2(M+1),255.2(M+1-18)]。
实例144：制备6-二羟硼基-2-(甲基氨基)-2-(2-((S)-吡咯烷-2-基)乙基)己酸二盐酸盐
按与实例130中所述方式类似的方式制备6-二羟硼基-2-(甲基氨基)-2-(2-((S)-吡咯烷-2-基)乙基)己酸二盐酸盐，但在步骤1中使用1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-甲酸作为羧基，并且在步骤5中使用甲基乙酸铵代替乙酸铵。1H NMR(D2O,300MHz)δ3.48-3.34(m,1H),3.23-3.10(m,2H),2.52(bs,3H),2.18-2.04(m,1H),2.00-1.70(m,6H),1.70-1.40(m,3H),1.37-1.16(m,3H),1.14-0.97(m,1H),0.63(t,J＝7.2Hz,2H)。C13H27BN2O4的ESI MS实验值m/z[287.3(M+1),269.3(M+1-18)]。
实例145：制备6-二羟硼基-2-(4-氯苯甲基氨基)己酸盐酸盐
步骤1：制备2-(4-氯苯甲基氨基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)己酸乙酯
用4-氯苯甲醛(89mg，0.63mmol)处理2-氨基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)己酸乙酯(119mg，0.42mmol)于1,2-二氯乙烷(1mL)中的溶液。搅拌10分钟后，添加三乙酰氧基硼氢化钠(230mg，1.05mmol)并持续搅拌18小时。反应物用乙酸乙酯稀释，用碳酸氢钠饱和水溶液和氯化钠饱和水溶液洗涤，经MgSO4干燥并浓缩。通过柱色谱法(含4-32％乙酸乙酯的庚烷纯化，得到2-(4-氯苯甲基氨基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)己酸乙酯(59mg，34％)。Rf 0.28(含20％乙酸乙酯的庚烷)。1H NMR(CDCl3,300MHz)δ7.29-7.25(m,4H),4.21(q,J＝7.7Hz,2H),3.78,3.58(ABq,JAB＝13.2Hz,2H),3.20(t,J＝7.0Hz,1H),1.80-1.57(m,2H),1.42-1.34(m,4H),1.30-1.21(m,15H),0.77(t,J＝7.0Hz,2H)。C21H33B1Cl1N1O4的ESI MS实验值m/z[410.1(M+1)]。
步骤2：制备6-二羟硼基-2-(4-氯苯甲基氨基)己酸盐酸盐
将2-(4-氯苯甲基氨基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)己酸乙酯(59mg)于6M HCl水溶液中的溶液加热到回流，保持16小时，浓缩至干并通过制备型HPLC纯化。将残余物再溶解于2N HCl中并蒸发，得到6-二羟硼基-2-(4-氯苯甲基氨基)己酸盐酸盐(36mg，83％)。1H NMR(CD3OD,300MHz)δ7.56-7.46(m,4H),4.23(s,2H),4.09-3.98(m,1H),2.02-1.91(m,2H),1.52-1.37(m,4H),0.81(t,J＝7.0Hz,2H)。C13H19B1Cl1N1O4的ESI MS实验值m/z[300.2(M+1)]。
实例146：制备6-二羟硼基-2-(甲基氨基)己酸盐酸盐
步骤1：制备2-(叔丁氧基羰基(甲基)氨基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)己酸乙酯
将2-(叔丁氧基羰基氨基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)己酸乙酯(104mg，0.27mmol)于THF(2.7mL)中的溶液冷却到0℃并用碘甲烷(0.084mL，1.35mmol)和NaHMDS(0.41mL，1M的THF溶液，0.41mmol)处理。在室温下搅拌16小时后，再添加碘甲烷(0.042mL，0.77mmol)并使混合物升温到35℃，保持6小时。反应物用饱和NH4Cl溶液(2mL)淬灭，用乙酸乙酯稀释，用碳酸氢钠饱和水溶液、氯化钠饱和水溶液洗涤，经MgSO4干燥并浓缩。通过柱色谱法(含5-40％乙酸乙酯的庚烷)纯化，得到2-(叔丁氧基羰基(甲基)氨基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)己酸乙酯(59mg，55％)。Rf 0.34(含20％乙酸乙酯的庚烷)。1H NMR(CDCl3,300MHz)δ4.72-4.68,4.43-4.38(m,1H,旋转异构体),4.15(q,J＝7.3Hz,2H),2.81,2.77(s,3H,旋转异构体),1.87-1.61(m,2H),1.53-1.23(m,28H),0.78(t,J＝7.3Hz,2H)。C20H38B1N1O6的ESI MS实验值m/z[400.5(M+1)]。
步骤2：制备6-二羟硼基-2-(甲基氨基)己酸
将2-(叔丁氧基羰基(甲基)氨基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)己酸乙酯(59mg)于6M HCl水溶液中的溶液加热到回流，保持16小时，浓缩至干并通过制备型HPLC纯化。将残余物再溶解于2N HCl中并蒸发，得到呈白色固体状的6-二羟硼基-2-(甲基氨基)己酸(24mg，72％)。1H NMR(CD3OD,300MHz)δ3.94(t,J＝5.9Hz),2.72(s,3H),1.45-1.34(m,4H),0.81(t,J＝7.0Hz,2H)。C7H16B1N1O4的ESI MS实验值m/z[190.0(M+1)]。
实例147：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(3-(哌啶-1-基)丙基)己酸二盐酸盐
按与实例137中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(3-(哌啶-1-基)丙基)己酸二盐酸盐，但省略步骤5并在步骤6中使用哌啶作为胺。1H NMR(CD3OD,300MHz)δ3.60-3.49(m,2H),3.24-2.93(m,4H),1.99-1.79(m,10H),1.45-1.29(m,6H),0.83(t,J＝6.6Hz,2H)。C14H29B1N2O4的ESI MS实验值m/z[301.10(M+1)]。
实例148：制备6-二羟硼基-2-(甲基氨基)-2-(3-(哌啶-1-基)丙基)己酸二盐酸盐
按与实例137中所述方式类似的方式制备6-二羟硼基-2-(甲基氨基)-2-(3-(哌啶-1-基)丙基)己酸二盐酸盐，但在步骤6中使用哌啶作为胺。1H NMR(D2O,300MHz)δ3.37(d,J＝13.2Hz,2H),2.98(t,J＝6.6Hz,2H),2.79(t,J＝12.5Hz.2H),2.49(s,3H),1.83-1.39(m,10H).1.35-1.01(m,6H),0.67(t,J＝7.7Hz,2H)。C15H31B1N2O4的ESI MS实验值m/z[315.4(M+1)]。
实例149：制备6-二羟硼基-2-(甲基氨基)-2-(2-(哌啶-1-基)乙基)己酸二盐酸盐
按与实例137中所述方式类似的方式制备6-二羟硼基-2-(甲基氨基)-2-(2-(哌啶-1-基)乙基)己酸二盐酸盐，但在步骤1中使用烯丙基碘作为烷基化剂，并在步骤6中使用哌啶作为胺。1H NMR(D2O,300MHz)δ3.48(br t,J＝12.1Hz),3.22-3.11(m,1H),3.03-2.76(m,3H),2.52(s,3H),2.23-2.03(m,2H),1.85-1.51(m,8H),1.40-1.03(m,6H),0.67(t,J＝7.7Hz,2H)。C14H29B1N2O4的ESI MS实验值m/z[301.4(M+1)]。
II.合成式II化合物
除大体上适用于本文所述所有化合物的前述方法外，本发明还提供更具体地针对式II化合物的方法。因此，在一个实施例中，使用乌吉反应(杜恩林A.,化学评论,2006,106,17-89来合成式II化合物。此方法在方案A-I中予以说明。因此，用例如异氰酸叔丁酯等异氰酸酯和如乙酸铵等胺源处理酮或醛(A-3)，得到氨基酸衍生物，其中羧酸被保护成叔丁酰胺的形式，并且α-胺基被保护成乙酰胺形式。因此，通过使用不同的异氰酸酯和胺作为起始物质，可获得一系列的氨基酸前体，其中胺和羧酸基团经正交保护。如果需要光学活性产物，那么可使用手性光学纯异氰酸酯和/或胺源。使用这些试剂的反应可为对映选择性的，或至少提供产物的非对映异构体混合物，所述非对映异构体混合物可使用化学领域中已知的分析性分离技术拆分。
方案A-I
可使用数种方法合成方案A-1中所示的关键中间物A-3。一种所述方法利用了活化的羧酸A-1和甲氧基甲胺来形成韦恩雷伯酰胺A-2。或者，使用例如EDC、DCC或PyBOP等多种偶合试剂使羧酸与胺偶合，或直接使用A-1的酰氯实现。随后通过使韦恩雷伯酰胺与适宜的格利雅试剂反应，将其转化成所需的酮，得到所需的中间物A-3，使其与适宜的异氰酸酯在例如乙酸铵等胺存在下反应，得到A-4。
A-4的末端烯烃与例如频那醇硼烷等硼烷源反应，得到经保护的硼酸衍生物(A-5)，脱除保护基后，得到目标化合物，即α-二羟硼基氨基酸A-6。
有机合成领域技术人员将认识到，存在数种用于不对称合成经取代氨基酸的方法。参见例如沃格特H.(Vogt,H.)和布拉斯S.(Brase,S.),有机化学与生物分子化学(Organic&Biomolecular Chemistry)2007,5,406-430。
在另一实施例中，使用方案B-I中说明的通用方案来合成式II化合物。因此，酮中间物B-1(使用方案A-I中略述的方法制备)与手性助剂(例如(R)或(S)-N-叔丁烷亚磺酰胺(B-2))在路易斯酸(Lewis acid)(如Ti(OEt)4)存在下反应，形成相应的叔丁烷亚磺酰亚胺B-3。参见埃尔曼J.A.(Ellman,J.A.)；奥文T.D.(Owens,T.D.)和唐T.P.(Tang,T.P.),化学研究述评(Acc.Chem.Res.)2002,35,984-995。
通过使叔丁烷亚磺酰亚胺B-3与Et2AlCN反应，以立体选择性方式引入氰化物。如果获得的相应氨基腈产物B-4为两种异构体的混合物形式，就使用色谱法拆分异构体混合物。随后使用多种硼烷试剂，例如频那醇硼烷在铱催化剂存在下对末端双键进行硼氢化，得到相应的频那醇硼烷中间物B-6。使用如6N HCl等强酸水解中间物B-6，将氰基转化成羧酸基团，并脱除二氧杂硼烷部分的保护，得到目标化合物B-7。
方案B-I
所属领域技术人员将认识到，起始物质和反应条件可变化，反应次序可改变，且可采用其它步骤来合成根据式II的化合物，如以下实例中所述。如上文所述，在一些情形中，可能有必要保护某些反应性官能团以实现上述某些转化。一般说来，有机合成领域技术人员将显而易见对于所述保护基的需求以及连接和移除所述基团的必要条件。
本申请案中提到的所有文章和参考文献(包括专利)的揭示内容都以引用的方式并入本文中。本发明化合物的制备将通过以下实例进一步说明，这些实例不应视为将本发明的范围或精神局限于其中描述的具体程序和化合物。
示范性式II化合物
实例1-A：2-氨基-6-二羟硼基-2-(5'-三氟甲基-3,4,5,6-四氢-2H-[1,2']联吡啶-4-基)-己酸盐酸盐
按与实例116类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(5'-三氟甲基-3,4,5,6-四氢-2H-[1,2']联吡啶-4-基)-己酸，但在步骤1中使用5-三氟甲基-3,4,5,6-四氢-2H-[1,2']联吡啶-4-甲酸。分离出呈白色固体状的产物。1H NMR(D2O,300MHz)δ8.12,(s,1H),7.98(d,J＝9.5Hz,1H),7.28(dd,J1＝9.5Hz,J2＝1Hz,H),4.15(m,2H),3.20(m,2H),2.22(m,1H),1.99(d,J＝12.5Hz,1H),1.72-1.88(m,3H),1.61(qd,J1＝12.5Hz,J2＝3.5Hz,1H),1.22-1.39(m,4H),1.09(m,1H)和0.65(t,J＝7Hz,2H)；C17H25BF3N3O4的MS(+CI):m/z：预期值403.2；实验值404.2(M+H)+,386.3(M+H-H2O)+,367.9(M+H-2H2O)+。
实例2-A：2-氨基-6-二羟硼基-2-[(4-三氟甲基-嘧啶-2基)-哌啶-4-基)-己酸盐酸盐
按与实例116类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-[(4-三氟甲基-嘧啶-2-基)-哌啶-4-基]-己酸，但在步骤1中使用1-(4-三氟甲基-嘧啶-2-基)-哌啶-4-甲酸。分离出白色固体状的呈盐酸盐形式的产物。1H NMR(D2O,300MHz)δ8.38,(d,J＝5.5Hz,1H),6.97(d,J＝5.5Hz,1H),4.53(m,2H),2.97(m,2H),2.18(m,1H),1.79-1.92(m,3H),1.66,(m,1H),1.47(qd,J1＝13Hz,J2＝4Hz,1H),1.17-1.34(m,4H),1.09(m,1H)和0.65(t,J＝7.5Hz,2H)；C16H24BF3N4O4的MS(+CI):m/z：预期值404.2；实验值405.2(M+H)+,387.2(M+H-H2O)+,369.1(M+H-2H2O)+。
实例3-A：2-氨基-6-二羟硼基-2-[(2-三氟甲基-喹啉-4-基)-哌啶-4-基)-己酸盐酸盐
按与实例116类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-[(2-三氟甲基-喹啉-4-基)-哌啶-4-基]-己酸，但在步骤1中使用1-(2-三氟甲基-喹啉-4-基)-哌啶-4-甲酸。分离出浅黄色固体状的呈盐酸盐形式的产物。1H NMR(D2O,300MHz)δ7.99,(d,J＝7.5Hz,1H),7.74-7.85(m,2H),7.55(ddd,J1＝8.5Hz,J2＝6.5Hz,J3＝2.5Hz,1H),7.28(s,1H),4.35(m,2H),3.46(m,2H),2.29(m,1H,),2.01(m,1H),1.75-1.89(m,3H),1.49,(m,1H),1.22-1.36(m,4H),1.12(m,1H)和0.67(t,J＝7.5Hz,2H)；C21H27BF3N3O4的MS(+CI):m/z：预期值453.2；实验值454.4(M+H)+,436.4(M+H-H2O)+,418.0(M+H-2H2O)+。
实例4-A：2-氨基-6-二羟硼基-2-[(6-氯苯并噁唑-2-基)-哌啶-4-基)-己酸盐酸盐.
步骤1：4-[甲氧基(甲基)氨甲酰基]哌啶-1-甲酸叔丁基酯
将EDC(6.29g，32.8mmol)分数份添加到哌啶-1,4-二甲酸单叔丁基酯(5.0g，21.8mmol)、DMAP(10mg)和N,O-二甲基羟胺盐酸盐(3.21g，32.8mmol)于二氯甲烷(100mL)中的搅拌溶液中。向所得溶液中逐滴添加三乙胺(9.4mL，65.6mmol)，且反应混合物在室温下搅拌过夜。次日，将反应混合物倾倒入水中，并使用乙酸乙酯(3×)萃取水层。合并的有机相用氯化钠饱和水溶液洗涤，经无水硫酸镁干燥，过滤并真空浓缩，得到无色油状物。通过柱色谱法(硅胶，含0-40％乙酸乙酯的庚烷)纯化，得到呈无色油状的4-[甲氧基(甲基)-氨甲酰基]-哌啶-1-甲酸叔丁基酯(5.04g，85％)；1H NMR(CDCl3,300MHz)δ4.16(m,2H),3.70(s,3H),3.17(s,3H),2.72-2.86(m,3H),1.62-1.75(m,4H)和1.44(s,9H)。
步骤2：4-戊-4-烯酰基-哌啶-1-甲酸叔丁基酯
将维持在氮气氛围下的4-[甲氧基(甲基)-氨甲酰基]-哌啶-1-甲酸叔丁基酯(5.04g，18.53mmol)于四氢呋喃(50mL)中的溶液冷却到0℃。向此冷溶液中以逐滴方式添加4-丁烯基溴化镁的THF溶液(0.5M的THF溶液，45mL，22.5mmol)。在0℃下搅拌溶液1小时，随后使其升温到室温过夜。将所得溶液倾倒入水中，用1N盐酸酸化到pH 3-4，并用乙酸乙酯(3×)萃取。合并的有机相用氯化钠饱和水溶液洗涤，经无水硫酸镁干燥，过滤并真空浓缩。通过快速柱色谱法(硅胶，含0-25％乙酸乙酯的庚烷)纯化，得到呈无色油状的4-戊-4-烯酰基哌啶-1-甲酸叔丁基酯(4.37g，88％)；1H NMR(CDCl3,300MHz)δ5.79(m,1H),4.98(m,2H),4.10(m,2H),2.76(t,J＝11.5Hz,2H),2.54(m,2H),2.46(tt,J1＝11.5Hz,J2＝3.5Hz,1H),2.32(m,2H),1.78(m,2H),1.48-1.58(m,2H)和1.45(s,9H)。
步骤3：4-(1-乙酰基氨基)-1-叔丁基氨甲酰基-戊-4-烯基)-哌啶-1-甲酸叔丁基酯.
用叔丁基异腈(2.72g，3.70mL，32.75mmol)处理4-戊-4-烯酰基哌啶-1-甲酸叔丁基酯(4.37g，16.36mmol)和乙酸铵(5.11g，65.5mmol)于2,2,2-三氟乙醇(4mL)中的溶液。在室温下搅拌8天后，将反应混合物添加到分液漏斗中，用水(100mL)稀释并用乙酸乙酯(2×100mL)萃取。有机层用氯化钠饱和水溶液洗涤，经MgSO4干燥，过滤并浓缩。通过快速柱色谱法(硅胶，含10-60％乙酸乙酯的庚烷)纯化，得到呈白色固体状的4-(1乙酰基氨基)-1-叔丁基氨甲酰基-戊-4-烯基)哌啶-1-甲酸叔丁基酯(5.4g，81％)。1H NMR(CDCl3,300MHz)δ6.99(s,NH,1H),5.78(m,1H),5.49(s,NH,1H),4.97(m,2H),4.12(m,2H),2.96(ddd,J1＝16.5Hz,J2＝11.5Hz,J3＝5.5Hz,1H),2.62(m,2H),2.35(tt,J1＝12.5Hz J2＝3Hz,1H),2.10-1.96(m,1H),2.00(s,3H),1.64-1.86(m,3H),1.48(m,1H),1.43(s,9H),1.36(s,9H),1.20–1.28(m,1H),1.10(m,1H)。
步骤4：2-乙酰基氨基-2-哌啶-4-基-己-5-烯酸叔丁酰胺盐酸盐.
将4N盐酸的二噁烷溶液(13.2mL，52.7mmol)添加到4-(1乙酰基氨基)-1-叔丁基氨甲酰基-戊-4-烯基)哌啶-1-甲酸叔丁基酯(5.4g，13.2mmol)的经搅拌二噁烷(30mL)溶液中。在室温下搅拌反应混合物2小时，且随后真空浓缩，得到呈白色固体状的标题化合物，不经进一步纯化即使用(4.5g，99％)。1H NMR(CDCl3,300MHz)δ9.51(br s,2×NH,2H),7.26(s,NH,1H),5.74(m,乙烯基CH+NH,2H),4.97(m,2H),3.50(m,2H),2.86(m,3H),2.62(m,1H),2.05(s,3H),1.62–2.02(m,6H),1.51(m,1H),1.41(s,9H),1.21-1.36(m,1H)。
步骤5：2-乙酰胺基-N-叔丁基-2-(1-(6-氯苯并[d]噁唑-2-基)哌啶-4-基)己-5-烯酰胺.
将休尼格碱(Hunigs base)(2.5mL)添加到2-乙酰基氨基-2-哌啶-4-基-己-5-烯酸叔丁酰胺盐酸盐(250mg，0.73mmol)和2,6-二氯苯并噁唑(172mg，0.91mmol)于无水二甲基乙酰胺(5mL)中的经搅拌悬浮液中。在氮气氛围下，在95℃下搅拌反应过夜。加热过夜后，将反应混合物冷却到室温，且随后用乙醚稀释。有机层用氯化钠饱和水溶液(3×)洗涤，经MgSO4干燥，过滤并浓缩。通过快速柱色谱法(硅胶，含20-80％乙酸乙酯的庚烷)纯化粗产物，得到呈灰白色固体状的2-乙酰胺基-N-叔丁基-2-(1-(6-氯苯并[d]噁唑-2-基)哌啶-4-基)己-5-烯酰胺(240mg，72％)。1H NMR(CDCl3,300MHz)δ7.24(d,J＝2Hz,1H),7.21(d,J＝8.5Hz,1H),7.12(dd,J1＝8.5Hz,J2＝2Hz,1H),7.02(s,NH,1H),5.79(m,1H),5.50(s,NH,1H),4.98(m,2H),4.34(m,2H),3.00(m,3H),2.49(tt,J1＝12.5Hz,J2＝3Hz,1H),2.10-1.96(m,1H),2.03(s,3H),1.74-1.93(m,3H),1.49(m,1H),1.33(s,9H),1.18–1.28(m,2H)。
步骤6：2-乙酰胺基-N-叔丁基-2-(1-(6-氯苯并[d]噁唑-2-基)哌啶-4-基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)己酰胺.
用氯-1,5-环辛二烯铱(I)二聚物(10.4mg，3mol％)和1,2-双(二苯基膦基)乙烷(12.2mg，6mol％)处理2-乙酰胺基-N-叔丁基-2-(1-(6-氯苯并[d]噁唑-2-基)哌啶-4-基)己-5-烯酰胺(240mg，0.52mmol)于二氯甲烷(4mL)中的溶液。在室温下搅拌溶液30分钟，且随后逐滴添加4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂硼戊环(0.152mL，1.04mmol)，并在室温下搅拌反应过夜。次日，将反应混合物倾倒入水中并用乙酸乙酯(3×)萃取。合并的有机相用氯化钠饱和水溶液洗涤，经无水硫酸镁干燥，过滤并真空浓缩。通过快速柱色谱法(硅胶，含30-100％乙酸乙酯的庚烷)纯化粗产物，得到呈无色油状的2-乙酰胺基-N-叔丁基-2-(1-(6-氯苯并[d]噁唑-2-基)哌啶-4-基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)己酰胺(212mg，69％)。1H NMR(CDCl3,300MHz)δ7.24(d,J＝2Hz,1H),7.20(d,J＝8.5Hz,1H),7.12(dd,J1＝8.5Hz,J2＝2Hz,1H),6.97(s,NH,1H),5.48(s,NH,1H),4.32(m,2H),3.02(m,2H),2.84(m,1H),2.47(tt,J1＝12.5Hz,J2＝3Hz,1H),2.01(s,3H),1.86(m,2H),1.30-1.55(m,6H),1.34(s,9H),1.24(s,12H),1.02-1.22(m,1H),0.75(t,J＝7.5Hz,2H)。
步骤7：2-氨基-6-二羟硼基-2-(1-(6-氯苯并[d]噁唑-2-基)哌啶-4-基)己酸.
在90℃下，将2-乙酰胺基-N-叔丁基-2-(1-(6-氯苯并[d]噁唑-2-基)哌啶-4-基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)己酰胺(212mg)于6N HCl(15mL)中的溶液搅拌1天。冷却到室温后，将反应混合物转移到分液漏斗中，用脱离子水(10mL)稀释并用二氯甲烷(3×)洗涤。浓缩水溶液并通过RP-HPLC(含10-100％乙腈的水)纯化，得到白色固体状的呈二盐酸盐形式的产物2-氨基-6-二羟硼基-2-(1-(6-氯苯并[d]噁唑-2-基)哌啶-4-基)己酸(55mg)。1H NMR(D2O,300MHz)δ7.40(d,J＝2Hz,1H),7.24(dd,J1＝8.5Hz,J2＝2Hz,1H),7.14(d,J＝8.5Hz,1H),4.14(m,2H),3.30(t,J＝13Hz,2H),2.21(m,1H),1.98(m,1H),1.80(m,3H),1.64(m,1H),1.38(m,1H),1.20-1.32(m,3H),1.06(m,1H),0.61(t,J＝7.5Hz,2H)；C18H25BClN3O5的MS(+CI):m/z：预期值409.2；实验值431.7(M+Na)+,410.3(M+H)+,392.0(M+H-H2O)+,374.4(M+H-2H2O)+。
实例5-A：2-氨基-6-二羟硼基-2-(1-(5-氟-3,8-二甲基喹啉-2-基)哌啶-4-基)己酸二盐酸盐
按与实例4-A类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(1-(5-氟-3,8-二甲基喹啉-2-基)哌啶-4-基)己酸，但在步骤5中使用2-氯-5-氟-3,8-二甲基喹啉作为杂芳基偶合搭配物。分离出白色固体状的呈二盐酸盐形式的标题化合物(54mg)。1H NMR(D2O,300MHz)δ8.27(s,1H),7.44(dd,J1＝9Hz,J2＝5.5Hz,1H),7.05(t,J＝9Hz,1H),4.10(m,2H),3.36(m,2H),2.41(s,3H),2.38(s,3H),2.36-2.51(m,1H),2.03(m,1H),1.74-1.93(m,4H),1.49(m,1H),1.20-1.38(m,3H),1.11(m,1H)和0.68(t,J＝7Hz,2H)；C22H31BFN3O4的MS(+CI):m/z：预期值431.2；实验值432.4(M+H)+,414.4(M+H-H2O)+,396.0(M+H-2H2O)+。
实例6-A：2-氨基-6-二羟硼基-2-[2-(4-三氟甲基-喹啉-2-基)-哌啶-4-基]-己酸二盐酸盐
按与实例4-A类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-[2-(4-三氟甲基-喹啉-2-基)-哌啶-4-基]-己酸，但在步骤5中使用2-氯-4-三氟甲基-喹啉作为杂芳基偶合搭配物。分离出白色固体状的呈二盐酸盐形式的标题化合物(90mg)。1H NMR(D2O,300MHz)δ7.90(d,J＝7.5Hz,1H),7.73(m,2H),7.64(s,1H),7.47(ddd,J1＝8.5Hz,J2＝6.5Hz J3＝2Hz,1H),4.44(m,2H),3.34(m,2H),2.27(m,1H),2.05(m,1H),1.83(m,3H),1.66(m,1H),1.24-1.43(m,4H),1.11(m,1H)和0.67(t,J＝7Hz,2H)；C21H27BF3N3O4的MS(+CI):m/z：预期值453.2；实验值454.5(M+H)+,436.5(M+H-H2O)+,418.0(M+H-2H2O)+。
实例7-A：2-氨基-6-二羟硼基-2-[2-(6-甲基-4-三氟甲基-吡啶-2-基)-哌啶-4-基]-己酸.
按与实例4-A类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-[2-(6-甲基-4-三氟甲基-吡啶-2-基)-哌啶-4-基]-己酸，但在步骤5中使用2-氯-6-甲基-4-三氟甲基-吡啶作为杂芳基偶合搭配物。分离出白色固体状的呈二盐酸盐形式的标题化合物(118mg)。1H NMR(D2O,300MHz)δ7.30(s,1H),6.82(s,1H),4.18(m,2H),3.18(m,2H),2.42(s,3H),2.23(m,1H),1.96(m,1H),1.83(m,3H),1.72(m,1H),1.59(td,J1＝13Hz,J2＝4Hz,1H),1.23-1.38(m,3H),1.10(m,1H)和0.66(t,J＝7.5Hz,2H)；C18H27BF3N3O4的MS(+CI):m/z：预期值417.2；实验值418.0(M+H)+,400.1(M+H-H2O)+,382.2(M+H-2H2O)+。
实例8-A：2-氨基-6-二羟硼基-2-[2-(6-甲基-4-三氟甲基-吡啶-2-基)-哌啶-4-基]-己酸二盐酸盐
按与实例4-A类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-[2-(3,5-二氯-吡啶-2-基)-哌啶-4-基]-己酸，但在步骤5中使用2,3,5-三氯-吡啶作为杂芳基偶合搭配物。分离出白色固体状的呈二盐酸盐形式的标题化合物(63mg)。1H NMR(D2O,300MHz)δ8.04(d,J＝2.5Hz,1H),8.01(dd,J1＝3Hz,J2＝2.5Hz,1H),3.85(m,2H),3.04(m,2H),2.14(m,1H),1.92(m,1H),1.82(m,2H),1.70(m,2H),1.46(m,1H),1.28(m,3H),1.08(m,1H)和0.64(t,J＝7.5Hz,2H)；C16H24BCl2N3O4的MS(+CI):m/z：预期值403.1；实验值404.2(M+H)+,386.3(M+H-H2O)+,368.1(M+H-2H2O)+。
实例9-A：2-氨基-6-二羟硼基-2-[2-(4-三氟甲基-吡啶-2-基)-哌啶-4-基]-己酸二盐酸盐
按与实例4-A类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-[2-(4-三氟甲基吡啶-2-基)-哌啶-4-基]-己酸，但在步骤5中使用2-氯-4-三氟甲基吡啶作为杂芳基偶合搭配物。分离出白色固体状的呈二盐酸盐形式的标题化合物(58mg)。1H NMR(D2O,300MHz)δ7.87(d,J＝7Hz,1H),7.53,(s,1H),6.97(dd,J1＝7Hz,J2＝1.5Hz,1H),4.17(m,2H),3.22(m,2H),2.21(m,1H),1.98(m,1H),1.72-1.86(m,3H),1.59(m,1H),1.25-1.40(m,4H),1.10(m,1H)和0.68(t,J＝7.5Hz,2H)；C17H25BF3N3O4的MS(+CI):m/z：预期值403.2；实验值404.4(M+H)+,386.2(M+H-H2O)+,368.3(M+H-2H2O)+。
实例10-A：2-氨基-6-二羟硼基-2-(1-(3-氯-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)哌啶-4-基)己酸二盐酸盐
按与实例4-A类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(1-(3-氯-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)哌啶-4-基)己酸，但在步骤5中使用2,3-二氯-5-三氟甲基吡啶作为杂芳基偶合搭配物。分离出白色固体状的呈二盐酸盐形式的标题化合物(93mg)。1H NMR(D2O,300MHz)δ8.27(dd,J1＝2Hz,J2＝1Hz,1H),8.06,(d,J＝2Hz,1H),3.94(m,2H),2.87(m,2H),2.09(m,1H),1.78-1.93(m,3H),1.57-1.69(m,2H),1.25-1.42(m,4H),1.10(m,1H)和0.66(t,J＝7Hz,2H)；C17H24BClF3N3O4的MS(+CI):m/z：预期值437.15；实验值438.5(M+H)+,420.1(M+H-H2O)+,402.1(M+H-2H2O)+。
实例11-A：2-氨基-6-二羟硼基-2-[(6-氯苯并噻唑-2-基)-哌啶-4-基)-己酸二盐酸盐
按与实例4-A类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-[(6-氯苯并噻唑-2-基)-哌啶-4-基)-己酸，但在步骤5中使用2,6-二氯苯并噻唑作为杂芳基偶合搭配物。分离出白色固体状的呈二盐酸盐形式的标题化合物(117mg)。1H NMR(D2O,300MHz)δ7.62(d,J＝2Hz,1H),7.35(dd,J1＝8.5Hz,J2＝2Hz,1H),7.27(d,J＝8.5Hz,1H),3.96(m,2H),3.40(t,J＝13Hz,2H),2.20(m,1H),2.02(m,1H),1.80(m,3H),1.68(m,1H),1.42(m,1H),1.24-1.32(m,3H),1.09(m,1H),0.66(t,J＝7.5Hz,2H)；C18H25BClN3O4S的MS(+CI):m/z：预期值425.1；实验值426.0(M+H)+,408.2(M+H-H2O)+,390.1(M+H-2H2O)+。
实例12-A：(R)-2-氨基-6-二羟硼基-2-((S)-1-(4-氯苯基)吡咯烷-3-基)己酸盐酸盐
步骤1：1-(4-氯苯基)-吡咯烷-3-甲酸,甲氧基-甲酰胺
将EDC(1.70g，8.86mmol)逐份添加到1-(4-氯-苯基)-吡咯烷-3-甲酸(1.0g，4.43mmol)、DMAP(5mg)和N,O-二甲基羟胺盐酸盐(865mg，8.86mmol)于二氯甲烷(20mL)中的经搅拌溶液中。向此溶液中逐滴添加三乙胺(1.79g，2.47mL，17.7mmol)并在室温下搅拌反应混合物过夜。在搅拌结束时，将反应混合物倾倒入水中并用乙酸乙酯(3×)萃取。合并的有机相用氯化钠饱和水溶液洗涤，经无水硫酸镁干燥，过滤并真空浓缩，得到呈白色固体状的标题化合物(1.10g.98％)；1H NMR(CDCl3,300MHz)δ7.14(d,J＝8Hz,2H),6.46(d,J＝8Hz,2H),3.74(s,3H),3.50-3.56(m,2H),3.40-3.47(m,2H),3.33(m,1H),3.23(s,3H),2.20-2.36(m,2H)。
步骤2：1-[1-(4-氯苯基)-吡咯烷-3-基]-戊-4-烯-1-酮
将1-(4-氯苯基)-吡咯烷-3-甲酸和甲氧基-甲酰胺(1.1g，4.1mmol)于四氢呋喃(20mL)中的溶液冷却到0℃，同时将溶液维持在氮气氛围下。向此冷溶液中以逐滴方式添加4-丁烯基溴化镁的THF溶液(0.5M的THF溶液，16.4mL，8.2mmol)。搅拌1小时后，移除浸浴并持续搅拌过夜。将所得溶液倾倒入水中，用1N盐酸酸化到pH 3-4且用乙酸乙酯(3×)萃取。合并的有机相用氯化钠饱和水溶液洗涤，经无水硫酸镁干燥，过滤并浓缩。通过快速柱色谱法(硅胶，含0-25％乙酸乙酯的庚烷)纯化粗品，得到呈无色油状的标题化合物(940mg，87％)；1H NMR(CDCl3,300MHz)δ7.15(d,J＝9Hz,2H),6.46(d,J＝9Hz,2H),5.81(m,1H),5.12(m,2H),3.54(m,2H),3.26-3.39(m,3H),2.62(m,2H),2.36(m,2H)和2.12-2.26(m,2H)。
步骤3：(2S,3'S)-2-乙酰基氨基-2-[1-(4-氯苯基)-吡咯烷-3-基]-己-5-烯酸叔丁酰胺.
用叔丁基异腈(594mg，810μL，7.15mmol)处理1-[1-(4-氯苯基)-吡咯烷-3-基]-戊-4-烯-1-酮(940mg，3.57mmol)和乙酸铵(1.381g，17.85mmol)于2,2,2-三氟乙醇(2mL)中的溶液。在室温下搅拌8天后，将反应混合物添加到分液漏斗中，用水(20mL)稀释并用乙酸乙酯(2×30mL)萃取。有机层用氯化钠饱和水溶液洗涤，经MgSO4干燥，过滤并浓缩。通过快速柱色谱法(硅胶，含20-70％乙酸乙酯的庚烷)纯化粗品，得到呈无色油状的(2S,3'S)-2-乙酰基氨基-2-[1-(4-氯苯基)-吡咯烷-3-基]-己-5-烯酸叔丁酰胺(602mg，42％)和呈无色油状的(2R,3'S)-2-乙酰基氨基-2-[1-(4-氯苯基)-吡咯烷-3-基]-己-5-烯酸叔丁酰胺(500mg，35％)。(2S,3'S)-2-乙酰基氨基-2-[1-(4-氯苯基)-吡咯烷-3-基]-己-5-烯酸叔丁酰胺的1H NMR频率如下：1H NMR(CDCl3,300MHz)δ7.12(d,J＝9Hz,2H),6.98(s,NH,1H),6.44(d,J＝9Hz,2H),5.73-5.86(m,NH,1H),5.79(s,1H),5.00(m,2H),3.02-3.38(m,6H),1.80-2.10(m,4H),2.01(s,3H),1.55(m,1H),1.37(s,9H)。
步骤4：(2S,3'S)-2-乙酰基氨基-2-[1-(4-氯苯基)-吡咯烷-3-基]-6-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]-二氧杂硼戊环-2-基)己酸叔丁酰胺
用氯-1,5-环辛二烯铱(I)二聚物(30mg，3mol％)和1,2-双(二苯基膦基)乙烷(36mg，6mol％)处理(2S,3'S)-2-乙酰基氨基-2-[1-(4-氯苯基)-吡咯烷-3-基]-己-5-烯酸叔丁酰胺(600mg，1.48mmol)于二氯甲烷(10mL)中的溶液。在室温下搅拌溶液30分钟，且随后逐滴添加4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂硼戊环(0.43mL，2.96mmol)，并且接着在室温下搅拌反应过夜。将反应物倾倒入水中并用乙酸乙酯(3×)萃取。合并的有机相用氯化钠饱和水溶液洗涤，经无水硫酸镁干燥，过滤并真空浓缩。通过快速柱色谱法(硅胶，含30-100％乙酸乙酯的庚烷)纯化粗产物，得到呈无色油状的(2S,3'S)-2-乙酰基氨基-2-[1-(4-氯苯基)-吡咯烷-3-基]-6-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]-二氧杂硼戊环-2-基)己酸叔丁酰胺(568mg，72％)。1H NMR(CDCl3,300MHz)δ7.11(d,J＝8.5Hz,2H),6.93(s,NH,1H),6.43(d,J＝9Hz,2H),5.77(s,NH,1H),3.16-3.38(m,4H),2.94-3.06(m,2H),1.92-2.06(m,2H),1.99(s,3H),1.84(m,1H),1.16-1.52(m,4H),1.35(s,9H),1.23(s,12H)和0.76(t,J＝7.5Hz，2H)。
步骤5：(2S,3'S)-2-氨基-6-二羟硼基-2-[1-(4-氯苯基)-吡咯烷-3-基]-己酸
在90℃下，将(2S,3'S)-2-乙酰基氨基-2-[1-(4-氯苯基)-吡咯烷-3-基]-6-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]-二氧杂硼戊环-2-基)-己酸叔丁酰胺(560mg)于6N HCl(15mL)中的溶液搅拌1天。冷却到室温后，将反应混合物转移到分液漏斗中，用脱离子水(10mL)稀释并用二氯甲烷(3×)洗涤。真空浓缩水溶液。通过RP-HPLC(含10-100％乙腈的水)纯化，得到白色固体状的呈二盐酸盐形式的所需产物(2S,3'S)-2-氨基-6-二羟硼基-2-[1-(4-氯苯基)-吡咯烷-3-基]-己酸(92mg)。1H NMR(D2O,300MHz)δ7.36(d,J＝8.5Hz,2H),7.12(d,J＝9Hz,2H),3.74(dd,J1＝11Hz,J2＝9Hz,1H),3.42-3.62(m,3H),3.01(五重峰,J＝9Hz,1H),2.20(m,2H),1.96(m,1H),1.79(m,1H),1.26-1.40m,(3H),1.12(m,1H),0.67(t,J＝7.5Hz,2H)；C16H24BClN2O4的MS(+CI):m/z：预期值354.15；实验值355.1(M+H)+,319.4(M+H-2H2O)+。
实例13-A：(2R,3'S)-2-氨基-6-二羟硼基-2-[1-(4-氯苯基)-吡咯烷-3-基]-己酸二盐酸盐
按与实例12-A类似的方式制备(2R,3'S)-2-氨基-6-二羟硼基-2-[1-(4-氯苯基)-吡咯烷-3-基]-己酸，但从步骤3开始使用第二异构体。在RP-HPLC纯化(含10-100％乙腈的水)后，分离出呈白色固体状的产物(92mg)。1H NMR(D2O,300MHz)δ7.35(2H,d,J＝8.5Hz,2H),7.14(d,J＝8Hz,2H),3.82(dd,J1＝11Hz,J2＝9.5Hz,1H),3.67(dd,J1＝11Hz,J2＝8.5Hz,1H),3.58(dd,J1＝8.5Hz,J2＝6Hz,2H),2.94(五重峰,J＝9Hz,1H),2.31(m,1H),1.70-1.91(m,3H),1.24-1.36(m,3H),1.12(m,1H),0.63(t,J＝7.5Hz,2H-)；C16H24BClN2O4的MS(+CI):m/z：预期值354.15；实验值355.1(M+H)+,337.5(M+H-H2O)+,319.2(M+H-2H2O)+。
实例14-A：2-氨基-6-二羟硼基-2-[1-(4-氯苯基)-5-氧代-吡咯烷-3-基]-己酸盐酸盐
按与实例12-A类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-[1-(4-氯苯基)-5-氧代-吡咯烷-3-基]-己酸，但在步骤1中使用1-(4-氯苯基)-5-氧代-吡咯烷-3-甲酸作为羧酸。在RP-HPLC纯化(含10-100％乙腈的水)后，分离出呈白色固体状的标题化合物(19mg)。1H NMR(D2O,300MHz)δ7.29(d,J＝9Hz,2H),7.26(d,J＝9Hz,2H),3.84-3.98(m,2H),3.05(五重峰,J＝8.5Hz,1H),2.74(dd,J1＝17.5Hz,J2＝9Hz,1H),2.46(dd,J1＝17.5Hz,J2＝9Hz,1H),1.70-1.96(m,2H),1.24-1.46(m,3H),1.15(m,1H),0.65(t,J＝7.5Hz,2H)；C16H22BClN2O5的MS(+CI):m/z：预期值368.1；实验值369.0(M+H)+,351.0(M+H-H2O)+,331.1(M+H-2H2O)+。
实例15-A：(R)-2-氨基-2-((1S,3R)-3-氨基环戊基)-6-二羟硼基己酸二盐酸盐
按与实例116中所述方式类似的方式制备(R)-2-氨基-2-((1S,3R)-3-氨基环戊基)-6-二羟硼基己酸二盐酸盐，但在步骤1中使用(1S,3R)-3-(叔丁氧基羰基氨基)环戊烷甲酸作为酸。1H NMR(D2O,300MHz)δ3.7-3.5(m,1H),2.63-1.38(m,9H),1.38-1.20(m,3H),1.15–1.0(m,1H),0.67(t,J＝7.6Hz,2H)。C11H23BN2O4的ESI MS实验值m/z[259.4(M+1)]。
实例16-A：(R)-2-氨基-2-((1S,3S)-3-氨基环戊基)-6-二羟硼基己酸二盐酸盐
按与实例116中所述方式类似的方式制备(R)-2-氨基-2-((1S,3S)-3-氨基环戊基)-6-二羟硼基己酸二盐酸盐，但在步骤1中使用(1S,3S)-3-(叔丁氧基羰基氨基)环戊烷甲酸作为酸。1H NMR(D2O,300MHz)δ3.63-3.49(m,1H),2.60-1.34(m,9H),1.34-1.14(m,3H),1.13-0.96(m,1H),0.64(t,J＝7.6Hz,2H)。C11H23BN2O4的ESI MS实验值m/z[241.7(M+1-H2O)]。
实例17-A：(S)-2-氨基-2-((1R,3S)-3-氨基环戊基)-6-二羟硼基己酸二盐酸盐
按与实例116中所述方式类似的方式制备(S)-2-氨基-2-((1R,3S)-3-氨基环戊基)-6-二羟硼基己酸二盐酸盐，但在步骤1中使用(1R,3S)-3-(叔丁氧基羰基氨基)环戊烷甲酸作为酸。1H NMR(D2O,300MHz)δ3.65-3.47(m,1H),2.62-1.36(m,9H),1.34-1.14(m,3H),1.13-0.96(m,1H),0.63(t,J＝7.6Hz,2H)。C11H23BN2O4的ESI MS实验值m/z[259.1(M+1)]。
实例18-A：2-氨基-2-(氮杂环丁烷-3-基)-6-二羟硼基己酸二盐酸盐
按与实例116中所述方式类似的方式制备2-氨基-2-(氮杂环丁烷-3-基)-6-二羟硼基己酸二盐酸盐，但在步骤1中使用1-(叔丁氧基羰基)氮杂环丁烷-3-甲酸作为酸。1HNMR(D2O,300MHz)δ4.74-4.57(m,1H),4.45-4.2(m,1H),3.47–2.99(m,3H),1.98–1.67(m,2H),1.42-1.20(m,4H),0.73-0.62(m,2H)。C9H19BN2O4的ESI MS实验值m/z[253.4(M+Na)]。
实例19-A：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(吗啉-2-基)己酸二盐酸盐
按与实例116中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(吗啉-2-基)己酸二盐酸盐，但在步骤1中使用4-(叔丁氧基羰基)吗啉-2-甲酸作为酸。1H NMR(CD3OD,300MHz)δ4.26-4.13(m,2H),3.96(td,J＝12.3,2.7Hz,1H),3.60-3.40(m,2H),3.40-3.28(m,1H),3.17(td,J＝12.6,4.2Hz,1H),2.02-1.86(m,2H),1.5-1.36(m,3H),1.34-1.18(m,1H),0.83(t,J＝7.5Hz,2H)。C10H21BN2O5的ESI MS实验值m/z[243.1(M+1-H2O)]。
实例20-A：制备2-氨基-2-(4-氨基环己基)-6-二羟硼基己酸二盐酸盐
按与实例116中所述方式类似的方式制备2-氨基-2-(4-氨基环己基)-6-二羟硼基己酸二盐酸盐，但在步骤1中使用4-(叔丁氧基羰基氨基)环己烷甲酸作为酸。1H NMR(D2O,300MHz)δ3.15-2.92(m,1H),2.05-1.42(m,3H),1.40-0.92(m,7H),0.62(t,J＝7.4Hz,2H)。C12H25BN2O4的ESI MS实验值m/z[273.2(M+1)]。
实例21-A：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-[顺-4-(4-氯-苯甲基氨基)-环己基]己酸二盐酸盐
步骤1：顺-4-(甲氧基(甲基)氨甲酰基)环己基氨基甲酸苯甲基酯
将EDC(6.9g，36mmol)分数份添加到顺-4-苯甲氧基羰基氨基-环己烷甲酸(5.0g，18mmol)、DMAP(10mg)、HOBt(10mg)和N,O-二甲基羟胺盐酸盐(3.5g，36mmol)于二氯甲烷(100mL)中的经搅拌溶液中。向此溶液中逐滴添加三乙胺(10mL，72.0mmol)，并在室温下搅拌反应混合物过夜。搅拌完成后，将反应混合物倾倒入水中且水层用乙酸乙酯(3×)萃取。合并的有机相用氯化钠饱和水溶液洗涤，经无水硫酸镁干燥，过滤并真空浓缩，得到呈无色油状的顺-4-(甲氧基(甲基)氨甲酰基)环己基氨基甲酸苯甲基酯(5.48g，17.1mmol，95％)。1H NMR(CDCl3,300MHz)δ7.38-7.28(m,5H),5.09(bs,2H),5.02(m,1H),3.92-3.82(m,1H),3.69(s,3H),3.17(s,3H),2.81-2.68(m,1H),1.91–1.78(m,2H),1.74-1.6(m,6H)。
步骤2：4-氯苯甲基(顺-4-(甲氧基(甲基)氨甲酰基)环己基)氨基甲酸苯甲基酯
在氮气氛围下，将顺-4-(甲氧基(甲基)氨甲酰基)环己基氨基甲酸苯甲基酯的DMF溶液(12mL)冷却到0℃，随后用氢化钠(150mg的60wt％NaH于油中，3.75mmol)处理。在室温下搅拌30分钟后，将反应混合物冷却到0℃并装入4-氯苯甲基溴(793g，3.75mmol)中。使所得溶液缓慢升温到室温并且再搅拌16小时，之后使溶液在NaHCO3饱和水溶液与乙酸乙酯之间分配。再用乙酸乙酯进一步萃取水层。分离有机层后，合并的有机层用氯化钠饱和水溶液洗涤，使用MgSO4干燥，过滤并浓缩，得到呈无色油状的4-氯苯甲基(顺-4-(甲氧基(甲基)氨甲酰基)环己基)氨基甲酸苯甲基酯(1.19g，2.67mmol，86.0％)。1H NMR(CDCl3,300MHz)δ7.45-7.05(m,9H),5.09(bs,2H),4.41(bs,2H),4.30-4.04(m,1H),3.65(s,3H),3.14(s,3H),2.91(m,1H),2.02–1.84(m,4H),1.70-1.47(m,4H)。
步骤3：4-氯苯甲基(顺-4-戊-4-烯酰基环己基)氨基甲酸1-苯甲基酯
将维持在氮气的惰性氛围下的4-氯苯甲基(顺-4-(甲氧基(甲基)氨甲酰基)环己基)氨基甲酸苯甲基酯(1.19g，2.69mmol)于四氢呋喃(15mL)中的溶液冷却到0℃，之后使其与以THF溶液形式逐滴添加的4-丁烯基溴化镁(0.5M的THF溶液，13.4mL，6.7mmol)反应。在0℃下搅拌1小时后，使反应混合物升温到室温过夜，倾倒入水中，用1N盐酸酸化到pH 3-4，并用乙酸乙酯(3×)萃取。合并的有机相用氯化钠饱和水溶液洗涤，经无水硫酸镁干燥，过滤并真空浓缩。通过快速柱色谱法纯化，得到呈无色油状的4-氯苯甲基(顺-4-戊-4-烯酰基环己基)氨基甲酸1-苯甲基酯(0.98g，2.22mmol，83％)。1H NMR(CDCl3,300MHz)δ7.44-7.02(m,9H),5.84-5.68(m,1H),5.13(bs,2H),5.05-4.92(m,2H),4.34(bs,2H),4.20-4.00(m,1H),2.58(m,3H),2.33-2.),2.24(m,2H 19-2.07(m,2H),1.7-1.4(m,6H)。
步骤4：(1R,4s)-4-((S)-2-乙酰胺基-1-(叔丁基氨基)-1-氧代己-5-烯-2-基)环己基(4-氯苯甲基)氨基甲酸苯甲基酯
将叔丁基异腈(0.627mL，5.55mmol)添加到4-氯苯甲基(顺-4-戊-4-烯酰基环己基)氨基甲酸1-苯甲基酯(978mg，2.22mmol)和乙酸铵(856mg，11.1mmol)于2,2,2-三氟乙醇(2mL)中的经搅拌浆液中。在室温下搅拌8天后，将反应混合物倾倒入水中并用乙酸乙酯(3×)萃取。合并的有机相用氯化钠饱和水溶液洗涤，经无水硫酸镁干燥，过滤并真空浓缩。通过快速柱色谱法纯化粗反应物，得到呈无色油状的(1R,4s)-4-((S)-2-乙酰胺基-1-(叔丁基氨基)-1-氧代己-5-烯-2-基)环己基(4-氯苯甲基)氨基甲酸苯甲基酯(850mg，1.5mmol,68％)；1H NMR(CDCl3,300MHz)δ7.39-6.9(m,9H),5.84-5.68(m,1H),5.54(bs,1H),5.24-5.04(m,2H),5.02-4.91(m,2H),4.44-4.28(bs,2H),4.1-3.9(m,1H),2.97-2.82(m,1H),2.23-1.93(m,5H),1.90-1.65(m,5H),1.51–0.96(m,14H)。
步骤5：(1R,4s)-4-((S)-2-乙酰胺基-1-(叔丁基氨基)-1-氧代-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)己-2-基)环己基(4-氯苯甲基)氨基甲酸苯甲基酯
用氯-1,5-环辛二烯铱(I)二聚物(30mg，3mol％)和1,2-双(二苯基膦基)乙烷(36mg，6mol％)处理(1R,4s)-4-((S)-2-乙酰胺基-1-(叔丁基氨基)-1-氧代己-5-烯-2-基)环己基(4-氯苯甲基)氨基甲酸苯甲基酯(850mg，1.5mmol)于二氯甲烷(4mL)中的溶液。搅拌30分钟后，逐滴添加4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂硼戊环(0.44mL，3mmol)并持续搅拌过夜。将反应物倾倒入水中并用乙酸乙酯(3×)萃取。合并的有机相用氯化钠饱和水溶液洗涤，经无水硫酸镁干燥，过滤并真空浓缩。通过快速柱色谱法纯化，得到呈无色油状的(1R,4s)-4-((S)-2-乙酰胺基-1-(叔丁基氨基)-1-氧代-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)己-2-基)环己基(4-氯苯甲基)氨基甲酸苯甲基酯(770mg，1.10mmol，74％)；1HNMR(CDCl3,300MHz)δ7.4-6.85(m,9H),5.43(br s,1H),5.25-5.0(m,2H),4.44-4.28(m,2H),4.08-3.72(m,2H),2.80-2.64(m,1H),2.22-2.04(m,1H),1.98-1.90(m,4H),1.90-1.62(m,4H),1.46-0.93(m,29H),0.725(t,J＝7.6Hz,2H)。
步骤6：(S)-2-乙酰胺基-N-叔丁基-2-((1s,4R)-4-(4-氯苯甲基氨基)环己基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)己酰胺
在已经用氩气氛围饱和的100mL圆底烧瓶中，使用氩气使(1R,4s)-4-((S)-2-乙酰胺基-1-(叔丁基氨基)-1-氧代-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)己-2-基)环己基(4-氯苯甲基)氨基甲酸苯甲基酯的甲醇溶液(770mg，1.1mmol，10mL甲醇)脱气。向此溶液中添加钯(25mg，10wt％于活性碳上，潮湿，德固赛型(Degussa type)E101NE/W)。使氩气鼓泡通过此溶液10分钟后，用缓慢的氮气流代替氩气。1.5小时后，反应完成，并用氩气吹扫溶液，通过硅藻土545(Celite 545)过滤并用甲醇洗涤滤饼。浓缩甲醇溶液，得到并收集蒸发掉溶剂，得到粗(S)-2-乙酰胺基-N-叔丁基-2-((1s,4R)-4-(4-氯苯甲基氨基)环己基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)己酰胺(660mg 100％)，不经进一步纯化即使用。
步骤7：(S)-2-氨基-6-二羟硼基-2-((1s,4R)-4-(4-氯苯甲基氨基)环己基)己酸二盐酸盐
在95℃下将(S)-2-乙酰胺基-N-叔丁基-2-((1s,4R)-4-(4-氯苯甲基氨基)环己基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)己酰胺(195mg)于6N HCl(6mL)中的溶液搅拌24小时。冷却到室温后，将反应混合物转移到分液漏斗中，用脱离子水(10mL)稀释并用二氯甲烷(3×)洗涤。水层在液氮中冷冻并冻干，得到(S)-2-氨基-6-二羟硼基-2-((1s,4R)-4-(4-氯苯甲基氨基)环己基)己酸二盐酸盐(105mg)，1H NMR(D2O,300MHz)δ7.40–7.24(m,4),4.10(s,2H),3.50–2.94(m,1H),2.22–2.06(m,2H),1.98–1.84(m,1H),1.78–1.52(m,4H),1.44-1.10(m,6H),1.10-0.88(m,2H),0.63(t,J＝7.6Hz,2H)；C19H30BClN2O4的MS(+CI):m/z：实验值379.6(M+1–H2O)+。
实例22-A：制备(S)-2-氨基-6-二羟硼基-2-((1r,4S)-4-(4-氯苯甲基氨基)环己基)己酸二盐酸盐
按与实例21-A中所述方式类似的方式制备(S)-2-氨基-6-二羟硼基-2-((1r,4S)-4-(4-氯苯甲基氨基)环己基)己酸二盐酸盐，但在步骤1中使用反-4-叔丁氧基羰基氨基-环己烷甲酸作为酸。1H NMR(D2O,300MHz)δ7.33(d,J＝7.8Hz,2H),7.27(d,J＝8.4Hz,2H),4.09(s,2H),3.08–2.96(m,1H),2.20–2.07(m,2H),1.98–1.85(m,1H),1.78–1.56(m,4H),1.43-1.10(m,6H),1.10-0.90(m,2H),0.63(t,J＝7.6Hz,2H)；C19H30BClN2O4的MS(+CI):m/z：实验值397.4(M+1)+。
实例23-A：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(1-环己基哌啶-4-基)己酸二盐酸盐
按与实例118中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(1-环己基哌啶-4-基)己酸二盐酸盐，但在步骤6中使用环己酮代替苯甲醛，并且反应时间为18小时。1H NMR(MeOH-d6,400MHz)δ3.61(m,2H),3.16(m,3H),2.32-2.05(m,5H),1.97(m,5H),1.78(m,2H),1.55-1.35(m,7H),1.33(m,2H),0.86(bt,J＝7.2Hz,2H)。C17H33BN2O4的ESI+MS实验值m/z323.4(M–18+H)；ESI-MS m/z 339.5(M–H),321.4(M–18–H)。
实例24-A：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(1-环戊基哌啶-4-基)己酸二盐酸盐
按与实例118中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(1-环戊基哌啶-4-基)己酸二盐酸盐，但在步骤6中使用环戊酮代替苯甲醛，并且反应时间>18小时。1H NMR(D2O,400MHz)δ3.61(m,2H),3.39(m,1H),2.90(m,2H),2.04(m,3H),1.88-1.20(m,15H),1.10(m,1H),0.69(bt,J＝7.6Hz,2H)。C16H31BN2O4的ESI+MS实验值m/z 309.4(M–18+H)；ESI-MS m/z 325.4(M–H),307.4(M–18–H)。
实例25-A：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-[1-(4,4-二甲基环己基)哌啶-4-基]己酸二盐酸盐
按与实例118中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-[1-(4,4-二甲基环己基)哌啶-4-基]己酸二盐酸盐，但在步骤6中使用4,4-二甲基环己酮代替苯甲醛，并且反应时间为24小时。1H NMR(D2O,400MHz)δ3.53(m,2H),3.00(m,3H),2.10(m,2H),1.90-1.70(m,6H),1.65-1.40(m,5H),1.35-1.05(m,6H),0.80(s,6H),0.69(bt,J＝7.6Hz,2H)。C19H37BN2O4的ESI+MS实验值m/z 351.5(M–18+H)；ESI-MS m/z 367.5(M–H),349.5(M–18–H)。
实例26-A：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-[1-(4-氯苯甲酰基)哌啶-4-基]己酸盐酸盐
步骤1：2-氨基-6-二羟硼基-2-(哌啶-4-基)己酸二盐酸盐
在回流下，将4-[1-(叔丁基氨基)-1-氧代-2-乙酰胺基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)己-2-基]哌啶-1-甲酸苯甲基酯(实例118，步骤4，9.00g，15.7mmol)于6N HCl(157mL)中的溶液加热18小时。冷却到室温后，用二氯甲烷(2×50mL)洗涤反应混合物。减压浓缩水层，并使胶粘的残余物与甲苯共沸两次，且在高真空下干燥，得到呈灰白色泡沫状的2-氨基-6-二羟硼基-2-(哌啶-4-基)己酸二盐酸盐(6.84g，产率>99％，混杂有约1当量反应中形成的叔丁基胺盐酸盐)，不经进一步纯化即使用。C11H23BN2O4的ESI+MS实验值m/z 241.3(M–18+H)；ESI-MS m/z 357.3(M–H),239.3(M–18–H)。
步骤2：2-氨基-6-二羟硼基-2-[1-(4-氯苯甲酰基)哌啶-4-基]己酸盐酸盐
在氮气下，向粗2-氨基-6-二羟硼基-2-(哌啶-4-基)己酸二盐酸盐(150mg，0.371mmol)于无水DMF(7.4mL)中的搅拌溶液中添加三乙胺(0.31mL，2.23mmol)，得到白色浆液。将4-氯苯甲酰氯(0.106mL，0.835mmol)逐滴添加所述浆液中，并在室温下搅拌反应混合物过夜。混合物用水(15mL)稀释并用乙酸乙酯(2×20mL)萃取，有机相用1N HCl(15mL)反萃取。丢弃有机层并合并所有水层，并且用乙酸乙酯(2×15mL)洗涤。减压浓缩水层，得到粗产物，将其通过反相HPLC[菲诺蒙斯(Phenomenex)鲁纳(Luna)250×30.00mm，10微米柱，40mL/min流速，梯度：溶剂A为含0.07％TFA的乙腈；溶剂B为含0.10％TFA的水；5％到50％A，历经24分钟，随后50％到100％A，历经1分钟]纯化。汇集产物部分，并浓缩，并且将残余物溶解于0.5N HCl(3mL)/乙腈(6mL)中并浓缩。再次用0.5N HCl(3mL)/乙腈(6mL)处理残余物，并浓缩且在高真空下干燥过夜，得到呈暗黄色固体状的2-氨基-6-二羟硼基-2-[1-(4-氯苯甲酰基)哌啶-4-基]己酸盐酸盐(75mg，47％)。1H NMR(MeOH-d6,400MHz)δ7.51(d,J＝8.4Hz,2H),7.42(d,J＝8.4Hz,2H),4.77(m,1H),3.82(m,1H),3.19(m,1H),2.85(m,1H),2.25(m,1H),2.10-1.40(m,8H),1.28(m,2H),0.85(bt,J＝7.2Hz,2H)。C18H26BClN2O5的ESI+MS实验值m/z 379.3(M–18+H)；ESI-MS m/z 395.4(M–H),377.4(M–18–H)。
实例27-A：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-[1-乙酰基哌啶-4-基]己酸盐酸盐
在氮气下，向粗2-氨基-6-二羟硼基-2-(哌啶-4-基)己酸二盐酸盐(实例26-A，步骤1，250mg，0.618mmol)于无水DMF(13mL)中的搅拌溶液中添加三乙胺(0.69mL，4.95mmol)，得到白色浆液。所得浆液用逐滴添加的乙酸酐(0.131mL，1.39mmol)处理，并在室温下搅拌反应混合物2.5小时。随后混合物用冰水(10mL)和3N HCl(5mL)稀释，之后用乙酸乙酯(2×25mL)萃取。减压浓缩水层，得到粗产物，将其通过反相HPLC[菲诺蒙斯鲁纳250×30.00mm，10微米柱，40mL/min流速，梯度：溶剂A为含0.07％TFA的乙腈；溶剂B为含0.10％TFA的水；2％A，保持2分钟，2％到20％A，历经23分钟，随后20％到100％A，历经1分钟]纯化。汇集产物部分并浓缩，并将残余物溶解于0.25N HCl(3mL)/乙腈(8mL)中并浓缩。再次用0.25N HCl(3mL)/乙腈(8mL)处理残余物并浓缩，且在高真空下干燥过夜，得到呈白色固体状的2-氨基-6-二羟硼基-2-[1-乙酰基哌啶-4-基]己酸盐酸盐(110mg，53％)。1H NMR(D2O,400MHz)δ4.38(bt,J＝12Hz,1H),3.92(bt,J＝12Hz,1H),3.03(m,1H),2.55(m,1H),2.11(m,1H),2.00(s,3H),1.87-1.78(m,3H),1.55(m,1H),1.50-1.00(m,6H),0.68(t,J＝7.2Hz,2H)。C13H25BN2O5的ESI+MS实验值m/z 583.3(2M–18+H),565.6(2M–2×18+H),283.4(M–18+H),265.3(M–2×18+H)；ESI-MS m/z 581.6(2M–18–H),299.4(M–H),281.4(M–18–H)。
实例28-A：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-{1-[(4-氟苯基)乙酰基]-哌啶-4-基}己酸盐酸盐
在氮气氛围下，将4-氟苯乙酸(126mg，0.816mmol)、N-(3-二甲基氨基丙基)-N'-乙基碳化二亚胺盐酸盐(156mg，0.816mmol)和1-羟基苯并三唑水合物(125mg，0.816mmol)于无水DMF(4mL)中的溶液搅拌30分钟。向所述搅拌溶液中整份添加粗2-氨基-6-二羟硼基-2-(哌啶-4-基)己酸二盐酸盐(实例26-A，步骤1，150mg，0.371mmol)于无水DMF(4mL)中的溶液。添加三乙胺(0.31mL，2.23mmol)并在室温下搅拌所得不透明的混合物1.75小时。在反应结束时，溶液用1N HCl稀释并用乙酸乙酯(2×)洗涤，之后浓缩合并的有机层。通过反相HPLC[菲诺蒙斯鲁纳250×30.00mm，10微米柱，40mL/min流速，梯度：溶剂A为含0.07％TFA的乙腈；溶剂B为含0.10％TFA的水。第1轮--5％到50％A，历经24分钟，随后50％到100％A，历经1分钟。第2轮--5％到40％A，经24分钟，随后40％到100％A，历经1分钟。第3轮--5％到30％A，历经24分钟，随后30％到100％A，历经1分钟]纯化粗产物。汇集产物部分并浓缩，并将残余物溶解于0.5N HCl(4mL)/乙腈(6mL)中并浓缩。再次用0.5N HCl(4mL)/乙腈(6mL)处理残余物并浓缩，且在高真空下干燥过夜，得到呈白色固体状的2-氨基-6-二羟硼基-2-{1-[(4-氟苯基)乙酰基]哌啶-4-基}己酸盐酸盐(56mg，35％)。1H NMR(MeOH-d6,400MHz)δ7.28(m,2H),7.07(m,2H),4.69(m,1H),4.15(m,1H),3.78(m,2H),3.08(m,1H),2.63(m,1H),2.14(m,1H),1.89(m,3H),1.64(m,1H),1.45(m,4H),1.30-0.95(m,2H),0.84(bt,J＝6.8Hz,2H)。C19H28BFN2O5的ESI+MS实验值m/z 377.3(M–18+H),359.4(M–2×18+H)；ESI-MS m/z 393.4(M–H),375.4(M–18–H)。
实例29-A：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-{1-[(4-氯苯基)乙酰基]-哌啶-4-基}己酸盐酸盐
按与实例28-A中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-{1-[(4-氯苯基)乙酰基]-哌啶-4-基}己酸盐酸盐，但使用4-氯苯基乙酸代替4-氟苯乙酸。1H NMR(MeOH-d6,400MHz)δ7.34(m,2H),7.25(m,2H),4.70(bd,J＝13.2Hz,1H),4.14(bd,J＝12.8Hz,1H),3.79(m,2H),3.08(m,1H),2.63(m,1H),2.14(m,1H),1.89(m,3H),1.64(m,1H),1.45(m,4H),1.30-0.95(m,2H),0.84(bt,J＝6.8Hz,2H)。C19H28BClN2O5的ESI+MS实验值m/z 393.3(M–18+H),375.3(M–2×18+H)；ESI-MS m/z 409.4(M–H),391.4(M–18–H)。
实例30-A：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-[1-苯甲酰基哌啶-4-基]己酸盐酸盐
按与实例28-A中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-[1-苯甲酰基哌啶-4-基]己酸盐酸盐，但使用苯甲酸代替4-氟苯乙酸。1H NMR(D2O,400MHz)δ7.41(m,3H),7.30(m,2H),4.53(bt,J＝12Hz,1H),3.72(bt,J＝12Hz,1H),3.05(m,1H),2.80(m,1H),2.16(bt,J＝13Hz,1H),1.95(m,1H),1.83(m,2H),1.71(m,1H),1.55-1.05(m,6H),0.68(bt,J＝7.2Hz,2H)。C18H27BN2O5的ESI+MS实验值m/z 345.4(M–18+H),327.4(M–2×18+H)；ESI-MS m/z361.4(M–H),343.4(M–18–H)。
实例31-A：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-{1-[(4-氯苯甲基)氨甲酰基]-哌啶-4-基}己酸盐酸盐
在氮气下，用三乙胺(0.662mL，4.75mmol)处理粗2-氨基-6-二羟硼基-2-(哌啶-4-基)己酸二盐酸盐(实例26-A，步骤1，0.240g，0.594mmol)于无水DMF(12mL)中的经搅拌溶液，得到白色浆液。逐滴添加1-氯-4-(异氰酸基甲基)苯(0.177mL，1.34mmol)，并在室温下搅拌所得不透明的混合物1小时。混合物用1N HCl(15mL)稀释并用乙酸乙酯(2×20mL)洗涤，并且减压浓缩水层，得到粗产物，将其通过反相HPLC[菲诺蒙斯鲁纳250×30.00mm，10微米柱，40mL/min流速，梯度：溶剂A为含0.07％TFA的乙腈；溶剂B为含0.10％TFA的水。5％到50％A，历经24分钟，随后50％到100％A，历经1分钟]纯化。汇集产物部分并浓缩，并将残余物溶解于0.5N HCl(5mL)/乙腈(8mL)中并浓缩。再次用0.5N HCl(5mL)/乙腈(8mL)处理残余物并浓缩，并且在高真空下干燥过夜，得到呈灰白色固体状的2-氨基-6-二羟硼基-2-{1-[(4-氯苯甲基)氨甲酰基]-哌啶-4-基}己酸盐酸盐(92mg，34％)。1H NMR(D2O,400MHz)δ7.26(m,2H),7.15(m,2H),4.19(s,2H),3.95(bt,J＝14.6Hz,2H),2.75(bt,J＝12.8Hz,2H),2.06(bt,J＝12.4Hz,1H),1.81(m,3H),1.53(bd,J＝12.8Hz,1H),1.32(m,4H),1.11(m,2H),0.69(t,J＝7.6Hz,2H)。C19H29BClN3O5的ESI+MS实验值m/z 408.4(M–18+H)；ESI-MS m/z 424.4(M–H),406.4(M–18–H)。
实例32-A：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-{1-[(4-氯苯基)-氨甲酰基]哌啶-4-基}己酸盐酸盐
按与实例31-A中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-{1-[(4-氯苯基)氨甲酰基]哌啶-4-基}己酸盐酸盐，但使用1-氯-4-异氰酸基苯代替1-氯-4-(异氰酸基甲基)苯。1H NMR(D2O,400MHz)δ7.25(d,J＝8Hz,2H),7.09(d,J＝8Hz,2H),4.07(bt,J＝14.4Hz,2H),2.83(bt,J＝12.6Hz,2H),2.08(bt,J＝12Hz,1H),1.82(m,3H),1.56(bd,J＝12.4Hz,1H),1.50-1.05(m,6H),0.69(t,J＝7.6Hz,2H)。C18H27BClN3O5的ESI+MS实验值m/z394.3(M–18+H),376.3(M–2×18+H)；ESI-MS m/z 410.4(M–H),392.4(M–18–H)。
实例33-A：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(1-{[2-(4-氟苯基)乙基]-氨甲酰基}哌啶-4-基)己酸盐酸盐
按与实例31-A中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(1-{[2-(4-氟苯基)乙基]氨甲酰基}哌啶-4-基)己酸盐酸盐，但使用异氰酸4-氟苯乙基酯代替1-氯-4-(异氰酸基甲基)-苯。1H NMR(D2O,400MHz)δ7.12(dd,J1＝8Hz,J2＝5.6Hz,2H),6.97(t,J＝8.8Hz,2H),3.80(bt,J＝12.8Hz,2H),3.27(t,J＝6.8Hz,2H),2.65(m,4H),1.99(bt,J＝12.8Hz,1H),1.81(m,2H),1.73(bd,J＝12.8Hz,1H),1.49(bd,J＝12.4Hz,1H),1.40-1.23(m,4H),1.20-0.95(m,2H),0.70(t,J＝7.6Hz,2H)。C20H31BFN3O5的ESI+MS实验值m/z 406.4(M–18+H),388.3(M–2×18+H)；ESI-MS m/z 422.5(M–H),404.5(M–18–H)。
实例34-A：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(1-{[(4-氯苯基)氨基]碳硫酰基}哌啶-4-基)己酸盐酸盐
按与实例31-A中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(1-{[(4-氯苯基)氨基]碳硫酰基}哌啶-4-基)己酸盐酸盐，但使用异硫氰酸4-氯苯基酯代替1-氯-4-(异氰酸基甲基)-苯，并按以下方式处理通过HPLC纯化分离的纯净产物部分。在35℃下减压浓缩汇集的部分以移除乙腈并冷冻，之后冻干以移除水。将残余物溶解于约1N HCl(10mL)中，并且冷冻并冻干。再次将残余物溶解于约1N HCl(10mL)中，并且冷冻并冻干，得到标题化合物。1H NMR(D2O,400MHz)δ7.31(d,J＝8.9Hz,2H),7.08(d,J＝8.8Hz,2H),4.70(m,2H),3.08(bt,J＝13.2Hz,2H),2.20(bt,J＝12.4Hz,1H),1.87(m,3H),1.65(bd,J＝13.2Hz,1H),1.53(qd,J1＝12.8Hz,J2＝3.6Hz,1H),1.33(m,4H),1.14(m,1H),0.70(t,J＝7.6Hz,2H)。C18H27BClN3O4S的ESI+MS实验值m/z 410.4(M–18+H)；ESI-MS m/z 426.5(M–H),408.4(M–18–H)。
实例35-A：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-((S)-1-(4-氯苯基硫代氨甲酰基)-吡咯烷-3-基)己酸盐酸盐
步骤1：(3R)-3-[甲氧基(甲基)氨甲酰基]吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯
在500mL圆底烧瓶中，在氮气正压力下，添加(R)-N-Boc-吡咯烷-3-甲酸(7.00g，0.0325mol)的二氯甲烷(125mL)溶液。使用冰/水浴将此溶液冷却到0℃并依序用N-(3-二甲基氨基丙基)-N'-乙基碳化二亚胺盐酸盐(7.48g，0.0390mol)和1-羟基苯并三唑(5.29g，0.0391mol)以整份处理。添加偶合剂后，反应混合物变浑浊，但进一步搅拌后，获得澄清溶液。在0℃下搅拌反应混合物20分钟，随后装入N,O-二甲基羟胺盐酸盐(4.78g，0.0490mol)和三乙胺(13.5mL，0.0968mol)。移除冷却浴并在搅拌下，经1小时的时间使反应混合物升温到室温。所得溶液用二氯甲烷(600mL)和1N HCl(1000mL)稀释，充分混合并分离。有机层用碳酸氢钠饱和水溶液(300mL)和氯化钠饱和水溶液(300mL)洗涤，随后经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到呈无色油状的(3R)-3-[甲氧基(甲基)氨甲酰基]吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(7.00g；83％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ3.73(s,3H),3.60-3.37(m,4H),3.21(s,3H),2.35-2.09(m,3H)1.47(s,9H)；C12H22N2O4的ESI MS实验值m/z[159.1(M+1-Boc)]
步骤2：(3R)-3-己-5-烯酰基吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯
在500mL单颈圆底烧瓶中，将(3R)-3-[甲氧基(甲基)氨甲酰基]吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(7.00g，27.1mmol)于四氢呋喃(100mL)中的溶液冷却到0℃，并经20分钟时间用3-丁烯基溴化镁的0.5M THF溶液(130mL，65mmol)经由压力平衡滴液漏斗进行处理。一旦添加完成，就移除冷却浴并使混合物升温到室温，并且再搅拌4小时。小心地用1N HCl(300mL)淬灭反应混合物并且再搅拌20分钟。水层用乙酸乙酯(3×200mL)萃取且合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到黄色油状物。通过快速柱色谱法(硅胶，含10％乙酸乙酯的己烷)纯化粗产物，得到呈淡黄色油状的(3R)-3-己-5-烯酰基吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(6.62g；96％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ5.73-5.69(m,1H),4.99-4.91(m,2H),3.61-3.42(m,2H),3.13-3.05(m,1H),2.50(t,J＝7.2Hz,2H),2.26(q,J＝7.2Hz,2H),2.11–1.90(m,3H),1.38(s,9H)；C14H23NO3的ESI MS实验值m/z[154.1(M+1-Boc)]。
步骤3：2-乙酰胺基-N-叔丁基-2-[(3R)-1-叔丁基羧基吡咯烷-3-基]己-5-烯酰胺
将(3R)-3-己-5-烯酰基吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(1.00g，3.95mmol)、乙酸铵(761mg，9.87mmol)和叔丁基异腈(2mL，30mmol)于2,2,2-三氟乙醇(2mL)中的溶液密封于10mL微波小瓶中。在CEM微波中于85℃下照射反应混合物1.5小时。冷却到室温后，溶液用乙酸乙酯(75mL)稀释并用碳酸氢钠饱和水溶液(30mL)、水(30ml)和氯化钠饱和水溶液(30ml)洗涤。有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过快速柱色谱法(硅胶，用含20％乙酸乙酯的己烷洗脱)纯化，得到回收的起始物质(0.265g，27％)和呈非对映异构体混合物形式的2-乙酰胺基-N-叔丁基-2-[(3R)-1-叔丁基羧基吡咯烷-3-基]己-5-烯酰胺(1.06g，68％)；C21H37N3O4的ESI MS实验值m/z。
步骤4：(3R)-3-[1-乙酰胺基-1-(叔丁基氨甲酰基)-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)戊基]吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯
在50mL圆底烧瓶中，将双(1,5-环辛二烯)二氯化二铱(I)(92mg，0.14mmol)和1,2-双(二苯基膦基)乙烷(117mg，0.294mmol)于四氢呋喃(12mL)中的溶液搅拌5分钟，之后使用冰/水浴冷却到0℃。15分钟后，经由注射器以整份添加4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环(600μL，4mmol)。在0℃下再保持5分钟后，使溶液升温到室温并且再搅拌15分钟。随后再次在冰/水浴中冷却反应物并搅拌10分钟。经由注射器将2-乙酰胺基-N-叔丁基-2-[(3R)-1-叔丁基羧基吡咯烷-3-基]己-5-烯酰胺(1.06g，2.68mmol)于四氢呋喃(4mL)中的THF溶液(4mL)从独立烧瓶转移到反应混合物中，同时在0℃下将其持续搅拌10分钟。随后使冷反应混合物升温到室温并且再搅拌4小时，之后通过将其倾倒入碳酸氢钠饱和水溶液(20mL)和乙酸乙酯(20mL)的溶液中来淬灭反应。萃取后，分离有机层并使用乙酸乙酯(2×20mL)进一步萃取水层。合并的有机萃取物经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到呈油状的(3R)-3-[1-乙酰胺基-1-(叔丁基氨甲酰基)-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)戊基]吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(1.46g)，不经额外纯化即使用。C27H50BN3O6的ESI MS实验值m/z 524.5(M+H)+；522.7(M-H)-。
步骤5：(R)-2-氨基-6-二羟硼基-2-((R)-吡咯烷-3-基)己酸
在50ML圆底烧瓶中，将(3R)-3-[1-乙酰胺基-1-(叔丁基氨甲酰基)-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)戊基]吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(1.41g，2.69mmol)溶解于1,4-二噁烷(10mL)中。向此溶液中以整份添加氯化氢的6M水溶液(10mL)，并在回流条件下加热反应18小时。在18小时结束时，将反应混合物冷却到室温，随后用水(10mL)稀释。水层用乙酸乙酯(20mL)洗涤并真空浓缩，之后冻干，得到呈非对映异构体混合物形式的(R)-2-氨基-6-二羟硼基-2-((R)-吡咯烷-3-基)己酸二盐酸盐(0.657g)。粗泡沫状物不经纯化即用于下一步骤中。C10H21BN2O4的ESI MS实验值m/z 227.2(M+H-水)+。
步骤6：2-氨基-6-二羟硼基-2-((S)-1-(4-氯苯基硫代氨甲酰基)吡咯烷-3-基)己酸盐酸盐
用异硫氰酸4-氯苯基酯(300mg，1.8mmol)以整份处理(R)-2-氨基-6-二羟硼基-2-((R)-吡咯烷-3-基)己酸(200mg，0.8mmol)和三乙胺(700mg，6mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(4mL，50mmol)中的溶液。在室温下搅拌30分钟后，反应物用1N HCl(20mL)稀释并用乙酸乙酯(20mL)洗涤。浓缩水溶液并通过HPLC纯化，得到2-氨基-6-二羟硼基-2-((S)-1-(4-氯苯基硫代氨甲酰基)吡咯烷-3-基)己酸盐酸盐(81mg，20％)。1H NMR(400MHz,D2O,非对映异构体混合物)δ7.40-7.23(m,4H),4.29-3.46(m,4H),2.95-2.81(m,1H),2.41-1.76(m,4H),1.58-1.40(br.m,2H),1.36-1.20(br,m,1H),0.90-0.80(br.m,2H)；C17H25BClN3O4S的MS ESI实验值m/z(M-水+H)+396.2；MS(ESI-)m/z(M-H)-412.3,(M-水-H)-394.3
实例36-A：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-((S)-1-(4-氯苯基氨甲酰基)吡咯烷-3-基)己酸盐酸盐
用异氰酸4-氯苯酯(280mg，1.8mmol)以整份处理(R)-2-氨基-6-二羟硼基-2-((R)-吡咯烷-3-基)己酸(实例35-A，步骤5，200mg，0.8mmol)和三乙胺(900μL，6mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(4mL，50mmol)中的溶液。在室温下搅拌30分钟后，反应物用1N HCl(20mL)稀释并用乙酸乙酯(20mL)洗涤。浓缩水溶液并通过HPLC纯化，得到2-氨基-6-二羟硼基-2-((S)-1-(4-氯苯基氨甲酰基)吡咯烷-3-基)己酸(0.021g，6％)。1H NMR(400MHz,D2O,非对映异构体混合物)δ7.26(d,J＝8.1Hz,2H),7.14(d,J＝8.1Hz,2H),3.70-3.48(br,m,2H),3.99-3.08(br,m,2H),2.79-2.65(br,m,1H),2.30-1.75(br.m,4H),1.54-1.44(br.m,2H),1.35-1.27(br.m,1H),0.87(t,J＝6.5Hz,2H)；C17H25ClBN3O5的MS(ESI+)实验值m/z(M-水+H)+380.2；MS；(M-水+Na)+403.3
实例37-A：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-((S)-1-(4-氟苯甲基)吡咯烷-3-基)己酸二盐酸盐
步骤1：2-乙酰胺基-N-叔丁基-2-((R)-吡咯烷-3-基)己-5-烯酰胺
经由注射器向含有2-乙酰胺基-N-叔丁基-2-[(3R)-1-叔丁基羧基吡咯烷-3-基]己-5-烯酰胺(实例35-A，步骤3，1.42g，3.59mmol)于二氯甲烷(20mL，300mmol)中的溶液的100mL圆底烧瓶中以整份添加三氟乙酸(2.4mL，31mmol)。搅拌4小时后，将溶液倾倒入碳酸氢钠饱和水溶液(100mL)中且水层用含10％TFE的DCM(2×50mL)萃取。合并的有机萃取物经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到呈淡黄色油状的2-乙酰胺基-N-叔丁基-2-[(3R)-吡咯烷-3-基]己-5-烯酰胺(0.95g，90％)。不经进一步纯化即用于随后的步骤中。1H NMR(400MHz,CDCl3,非对映异构体混合物)δ7.80(br.s,0.5H),7.60(br.s,0.5H),7.45(br.s,0.5H),1.96-165(br.s,0.5H),1.80-1.55(m,4H),1.36-1.34(2×s,9H)，C16H29N3O2的ESI MS实验值m/z 296.3(M+H)+。
步骤2：2-乙酰胺基-N-叔丁基-2-((R)-1-(4-氟苯甲基)吡咯烷-3-基)己-5-烯酰胺
将2-乙酰胺基-N-叔丁基-2-[(3R)-吡咯烷-3-基]己-5-烯酰胺(315mg，1.07mmol)、4-氟苯甲醛(140μL，1.3mmol)和乙酸(60μL，1mmol)于二氯甲烷(10mL，200mmol)中的溶液搅拌10分钟，之后以整份添加三乙酰氧基硼氢化钠(377mg，1.78mmol)。在室温下搅拌过夜后，用1N NaOH(10mL)淬灭反应。分离由此获得的有机层且水层进一步用DCM(3×10mL)萃取。合并的有机萃取物经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到呈油状的2-乙酰胺基-N-叔丁基-2-((R)-1-(4-氟苯甲基)吡咯烷-3-基)己-5-烯酰胺(0.387g，89.9％)。所述油状物不经纯化即用于下一步骤中。C23H34FN3O2的ESI MS实验值m/z 404.3(M+H)+。
步骤3：2-乙酰胺基-N-叔丁基-2-((R)-1-(4-氟苯甲基)吡咯烷-3-基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)己酰胺
将双(1,5-环辛二烯)二氯化二铱(I)(35.0mg，0.0520mmol)和1,2-双(二苯基膦基)-乙烷(44mg，0.11mmol)于四氢呋喃(5mL，60mmol)中的溶液冷却到0℃。搅拌10分钟后，经由注射器以整份添加4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环(120μL，0.83mmol)并且在0℃下搅拌反应混合物5分钟，之后升温到室温且再搅拌15分钟。将反应混合物再冷却到0℃并用含2-乙酰胺基-N-叔丁基-2-[(3R)-1-(4-氟苯甲基)吡咯烷-3-基]己-5-烯酰胺(210mg，0.52mmol)的四氢呋喃(3mL，40mmol)以整份处理。在0℃下搅拌10分钟后，使反应物升温到室温并且再搅拌4小时。混合物用碳酸氢钠水溶液稀释，用DCM(3×50mL)萃取，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到呈淡橙色油状的2-乙酰胺基-N-叔丁基-2-((R)-1-(4-氟苯甲基)吡咯烷-3-基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)己酰胺，不经进一步纯化即使用。C29H47BFN3O4的ESI MS实验值m/z 532.3(M+H)+
步骤4：2-氨基-6-二羟硼基-2-((R)-1-(4-氟苯甲基)吡咯烷-3-基)己酸二盐酸盐
在回流下，将2-乙酰胺基-N-叔丁基-2-((R)-1-(4-氟苯甲基)吡咯烷-3-基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)己酰胺(0.280g，0.527mmol)于6M氯化氢(10mL，60mmol)中的水溶液加热过夜。将反应物冷却到室温，用20mL水稀释，并用乙酸乙酯(20mL)洗涤。通过使用含5-20％乙腈的水的HPLC(3次注射)纯化水层。将对应于所需产物的部分浓缩并冻干，得到呈白色粉末状的2-氨基-6-二羟硼基-2-((R)-1-(4-氟苯甲基)吡咯烷-3-基)己酸二盐酸盐，暴露于空气时变成油状(吸湿性)。(0.003g，2％)。1H NMR(400MHz,CDCl3,非对映异构体混合物)δ7.41(dd,J1＝8.1Hz,J2＝6.5Hz,2H),7.12(t,J＝8.1Hz,2H),4.35-4.25(br,m,2H),3.77-3.09(br.m,3H),2.99-2.60(br.m,1H),2.39-1.57(br.m,4H),1.34-1.18(br.m,2H),1.15-1.03(br.m,1H),0.70-0.61(m,2H)；C17H26BFN2O4的ESI MS实验值m/z 335.3(M+H-水)+；351.4(M-H)-；333.4(M-H-水)-。
实例38-A：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-((R)-1-(4-(三氟甲基)苯甲基)吡咯烷-3-基)己酸二盐酸盐
按与实例37-A中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-((R)-1-(4-(三氟甲基)苯甲基)吡咯烷-3-基)己酸，但在步骤2中使用4-三氟甲基苯甲醛。1H NMR(400MHz,D2O,非对映异构体混合物)δ7.73(d,J＝8.1Hz,2H),7.58(d,J＝8.1Hz,2H),4.41(s,2H),2.82-3.63(m,4H),2.42-1.58(m,4H),1.38-1.20(m,2H),1.18-1.03(m,1H),0.72-0.63(m,2H)；C18H26BF3N2O4的ESI MS实验值m/z 385.3(M+H-水)+；401.4(M-H)-；383.4(M-H-水)-。
实例39-A：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-((R)-1-(4-甲基苯甲基)吡咯烷-3-基)己酸二盐酸盐.
按与实例37-A中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-((R)-1-(4-甲基苯甲基)吡咯烷-3-基)己酸二盐酸盐，但在步骤2中使用4-甲基苯甲醛。1H NMR(400MHz,D2O,非对映异构体混合物)δ7.22(d,J＝8.1Hz,2H),7.18(d,J＝8.1Hz,2H),4.30-4.11(m,2H),3.69-3.28(m,3H),3.24-2.66(m,2H),2.33-2.02(m,4H),1.92-1.55(m,3H),1.34-1.17(m,2H),1.15-1.00(m,1H),0.67-0.57(m,2H)；C18H29BN2O4的ESI MS实验值m/z 349.5(M+H)+；331.4(M+H-水)+；347.5(M-H)-；329.4(M-H-水)-。
实例40-A：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-((R)-1-(2-硝基苯磺酰基)吡咯烷-3-基)己酸
步骤1：(R)-1-(1-(2-硝基苯磺酰基)吡咯烷-3-基)戊-4-烯-1-酮
向(R)-3-戊-4-烯酰基吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(300mg，1mmol)于二氯甲烷(5mL，80mmol)中的溶液中添加三氟乙酸(2mL，20mmol)，并在室温下搅拌所得混合物1小时。随后浓缩粗反应混合物，获得粗油状物，将其再溶解于二氯甲烷(5mL，80mmol)中，之后添加三乙胺(1mL，7mmol)。将此溶液冷却到0℃，之后以整份添加2-硝基苯磺酰氯(450mg，2.0mmol)。反应混合物立即变为蓝色，在室温下搅拌过夜。反应结束时，用碳酸氢钠饱和水溶液(50mL)稀释溶液，得到分离的两层。水层进一步用二氯甲烷(2×20mL)萃取且合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到蓝色油状物，通过快速柱色谱法(硅胶，用含0-100％乙酸乙酯的己烷洗脱)纯化，得到(R)-1-(1-(2-硝基苯磺酰基)吡咯烷-3-基)戊-4-烯-1-酮(305mg，80％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.07-8.03(m,1H),7.76-7.70(m,2H),7.66-7.62(m,1H),5.78(ddt,J1＝17.0Hz,J2＝10.4Hz,J3＝6.5Hz,1H),5.07-4.97(m,2H),3.70(dd,J1＝12.0Hz,J2＝8.0Hz,1H)3.61(dd,J1＝12.0Hz,J2＝8.1Hz,1H),3.52(t,J＝8.1Hz,2H),3.24(p,J＝8.0Hz,1H),2.59(td,J1＝7.3Hz,J2＝3.6Hz,2H),2.32(q,J＝6.8Hz,2H),2.24-2.16(m,1H),2.14-2.05(m,1H),1.28(ddd,J1＝17.8Hz,J2＝10.6Hz,J3＝7.3Hz,1H)；C15H18N2O5S的ESI MS实验值m/z339.3(M+H)+。
步骤2：2-乙酰胺基-N-叔丁基-2-((R)-1-(2-硝基苯磺酰基)吡咯烷-3-基)己-5-烯酰胺
用叔丁基异腈(1.5mL，24mmol)处理(R)-1-(1-(2-硝基苯磺酰基)吡咯烷-3-基)戊-4-烯-1-酮(1.03g，3.04mmol)和乙酸铵(0.548g，7.11mmol)于2,2,2-三氟乙醇(1.5mL，2.0mmol)中的溶液，随后在室温下搅拌。8小时后，再添加0.5mL异氰酸酯，并将反应温度增加到40℃。在40℃下搅拌过夜后，使粗反应物在乙酸乙酯与饱和碳酸氢钠水溶液之间分配。分离有机层，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，之后通过快速柱色谱法(硅胶，使用含0-100％乙酸乙酯的己烷)纯化粗油状物，得到呈褐色泡沫状的2-乙酰胺基-N-叔丁基-2-((R)-1-(2-硝基苯磺酰基)吡咯烷-3-基)己-5-烯酰胺(1.00g，68.4％)。1H NMR(400MHz,CDCl3,非对映异构体混合物)δ8.07-8.02(m,1H),7.81-7.71(m,2H),7.64-7.59(m,1H),6.85(2x s,1H),5.98-5.63(br,m,2H),5.06-4.95(m,2H),3.61-2.90(m,6H),2.02-2.00(2×s,3H),1.95-1.41(m,5H),1.38-1.36(2×s,9H)；C22H32N4O6S的ESI MS实验值m/z 481.2(M+H)+；479.3(M-H)-。
步骤3：2-乙酰胺基-N-叔丁基-2-((R)-1-(2-硝基苯磺酰基)吡咯烷-3-基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)己酰胺
在50mL圆底烧瓶中，将双(1,5-环辛二烯)二氯化二铱(I)(72mg，0.11mmol)和1,2-双(二苯基膦基)-乙烷(84mg，0.21mmol)于四氢呋喃(10mL，100mmol)中的溶液冷却到0℃，搅拌15分钟并用4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环(450μL，3.1mmol)处理。再搅拌5分钟后，移除冷却浴并使反应混合物升温到室温，同时搅拌15分钟时间。随后将反应混合物再冷却到0℃，并用经由注射器以逐滴方式添加的2-乙酰胺基-N-叔丁基-2-((R)-1-(2-硝基苯磺酰基)吡咯烷-3-基)己-5-烯酰胺(1.00g，2.08mmol)于四氢呋喃(2mL，20mmol)中的溶液处理。在0℃下搅拌5分钟后，使反应物升温到室温并搅拌，直到以良好产率获得所需产物。通过将粗品倾倒入饱和碳酸氢钠水溶液(50mL)中来淬灭反应混合物。水层使用乙酸乙酯(3×30mL)萃取，且合并的有机层用氯化钠饱和水溶液(20mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到呈泡沫状的2-乙酰胺基-N-叔丁基-2-((R)-1-(2-硝基苯磺酰基)吡咯烷-3-基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)己酰胺(1.20g，94.8％)。标题化合物不经进一步纯化即使用。C28H45N4O8BS的ESI MS实验值m/z 609.5(M+H)+；607.5(M-H)-。
步骤4：2-氨基-6-二羟硼基-2-((R)-1-(2-硝基苯磺酰基)吡咯烷-3-基)己酸
用氯化氢的6M水溶液(6mL，40mmol)处理2-乙酰胺基-N-叔丁基-2-((R)-1-(2-硝基苯磺酰基)吡咯烷-3-基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)己酰胺(500mg，0.8mmol)于1,4-二噁烷(3mL，40mmol)中的溶液，随后加热到100℃，保持24小时。在24小时的时间段结束时，用水稀释反应混合物并过滤。通过使用含5％-50％乙腈的水的HPLC经30分钟纯化所得到的滤液。浓缩含产物部分，随后将其溶解于1N HCl中并冷冻，随后冻干，得到呈白色泡沫状的2-氨基-6-二羟硼基-2-((R)-1-(2-硝基苯磺酰基)吡咯烷-3-基)己酸(79mg，20％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6,非对映异构体混合物)δ8.55-8.35(2H),8.05–7.98(m,2H),7.96-7.85(m,2H),5.83(t,J＝6.5Hz,2H),3.70-3.14(m,4H),2.78-2.65(m,1H),2.19-1.60(m,4H),1.47-1.23(m,3H),1.14-1.00(m,1H)；C16H24BN3O8S的ESI MS实验值m/z 412.1[M-OH)+；410.2(M-H2O)-。
实例41-A：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(1-苯乙基哌啶-4-基)己酸
按与实例118中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(1-苯乙基哌啶-4-基)己酸，但在步骤6中使用3-苯基乙醛作为醛。1H NMR(D2O,300MHz)δ7.35-7.28(m,2H),7.30-7.20(m,3H),3.71-3.62(m,2H),3.35-3.25(m,2H),3.04-2.90(m,4H),2.2-2.05(m,2H),1.93-1.75(m,4H),1.55-1.45(m,1H),1.38-1.22(m,3H),1.18-1.05(m,1H),0.69(t,J＝7.2Hz,2H)。C19H31BN2O4的ESI MS实验值m/z[363.2(M+1)]。
实例42-A：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(1-(3,4-二氯苯基氨甲酰基)哌啶-4-基)己酸
按与实例31-A中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(1-(3,4-二氯苯基氨甲酰基)哌啶-4-基)己酸，但使用1,2-二氯-4-异氰酸基苯作为异氰酸酯。1H NMR(D2O,500MHz)δ7.33-7.25(m,2H),7.01-6.96(m,1H),4.01(t,J＝11.4Hz,2H),2.80(t,J＝11.1Hz,2H),2.08-2.01(m,1H),1.83-1.77(m,3H),1.58-1.51(m,1H),1.47-1.32(m,1H),1.33-1.18(m,3H),1.18-1.04(m,2H),0.65(t,J＝7.2Hz,2H)。C18H27BCl2N3O5的ESI MS实验值m/z[428.5(M-18+1)]。
实例43-A：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(1-(4-氯苯甲基硫代氨甲酰基)哌啶-4-基)己酸
按与实例31-A中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(1-(4-氯苯甲基硫代氨甲酰基)哌啶-4-基)己酸，但使用1-氯-4-(异硫氰酸基甲基)苯作为异氰酸酯。1HNMR(D2O,300MHz)δ7.21(d,J＝8.4Hz,2H),7.09(d,J＝8.4Hz,2H),4.62(bs,2H),4.59(m,2H),2.95(bt,J＝11.4Hz,2H),2.14(bt,J＝11.4Hz,1H),1.85-1.70(m,3H),1.62-1.51(m,1H),1.48-1.00(m,6H),0.63(t,J＝7.5Hz,2H)。C19H29BClN3O4S的ESI MS实验值m/z[442.6(M+1)]。
实例44-A：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(1-(3-氯-4-甲基苯基硫代氨甲酰基)哌啶-4-基)己酸
按与实例32-A中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(1-(3-氯-4-甲基苯基硫代氨甲酰基)哌啶-4-基)己酸，但使用2-氯-4-异硫氰酸基-1-甲基苯作为异氰酸酯。
实例45-A：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(1-(萘-1-基硫代氨甲酰基)哌啶-4-基)己酸
按与实例32-A中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(1-(萘-1-基硫代氨甲酰基)哌啶-4-基)己酸，但使用1-异硫氰酸基萘作为异氰酸酯。1H NMR(D2O,300MHz)δ7.87-7.78(m,2H),7.70-7.64(m,1H),7.46-7.37(m,3H),7.22-7.17(m,1H),4.60-4.55(m,2H),3.06(bt,J＝11.4Hz,2H),2.20(bt,J＝11.4Hz,1H),1.92-1.76(m,3H),1.70-1.50(m,2H),1.40-1.20(m,4H),1.18-1.03(m,1H),0.67(t,J＝7.2Hz,2H)。C22H30BN3O4S的ESI MS实验值m/z[444.6(M+1)]。
实例46-A：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(1-(3-(4-氯苯基)丙基)哌啶-4-基)己酸
按与实例118中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(1-(3-(4-氯苯基)丙基)哌啶-4-基)己酸，但在步骤6中使用3-(4-氯苯基)丙醛作为醛。1H NMR(D2O,300MHz)δ7.16(d,J＝8.4Hz,2H),7.04(d,J＝8.4Hz,2H),3.54-3.45(m,2H),2.97-2.88(m,2H),2.87-2.72(m,2H),2.58-2.50(m,2H),2.10-1.95(m,1H),1.96-1.85(m,1H),1.88-1.62(m,6H),1.48-1.32(m,1H),1.30-1.15(m,3H),1.09-0.98(m,1H),0.60(t,J＝7.2Hz,2H)。C20H32BClN2O4的ESI MS实验值m/z[393.6(M-18+1)]。
实例47-A：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(1-(2,4-二氯苯乙基)哌啶-4-基)己酸
按与实例118中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(1-(2,4-二氯苯乙基)哌啶-4-基)己酸，但在步骤6中使用2-(2,4-二氯苯基)乙醛作为醛。1H NMR(D2O,500MHz)δ7.41(s,1H),7.20(bs,2H),3.26-3.17(m,2H),3.09-3.01(m,2H),3.00-2.89(m,2H),2.11-2.02(m,2H),1.88-1.70(m,4H),1.51-1.42(m,1H),1.34-1.20(m,3H),1.12-1.02(m,1H),0.67(t,J＝7.2Hz,2H)。C19H29BCl2N2O4的ESI MS实验值m/z[413.6(M-18+1)]。
实例48-A：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(1-(3,4-二氟苯甲基)哌啶-4-基)己酸
按与实例118中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(1-(3,4-二氟苯甲基)哌啶-4-基)己酸，但在步骤6中使用3,4-二氟苯甲醛作为醛。1H NMR(D2O,300MHz)δ7.35-7.05(m,3H),4.14(s,2H),3.50-3.36(m,2H),2.94-2.84(m,2H),2.16-1.95(m,2H),1.86-1.54(m,4H),1.50-1.35(m,1H),1.36-1.14(m,3H),1.14-0.97(m,1H),0.65(t,J＝7.2Hz,2H)。C18H27BF2N2O4的ESI MS实验值m/z[385.1(M+1)]。
实例49-A：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(1-(4-氯-3-氟苯甲基)哌啶-4-基)己酸
按与实例118中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(1-(4-氯-3-氟苯甲基)哌啶-4-基)己酸，但在步骤6中使用4-氯-3-氟苯甲醛作为醛。1H NMR(D2O,300MHz)δ7.51-7.43(m,1H),7.32-7.23(m,1H),7.22-7.10(m,1H),4.13(s,2H),3.51-3.38(m,2H),2.98-2.82(m,2H),2.18-1.94(m,2H),1.88-1.61(m,4H),1.50-1.32(m,1H),1.33-1.14(m,3H),1.13-0.96(m,1H),0.61(t,J＝7.2Hz,2H)。C18H27BClFN2O4的ESI MS实验值m/z[401.2(M+1)]。
实例50-A：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(1-(3-(3-氯-5-氟苯基)丙基)哌啶-4-基)己酸
按与实例118中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(1-(3-(3-氯-5-氟苯基)丙基)哌啶-4-基)己酸，但在步骤6中使用3-(3-氯-5-氟苯基)丙醛作为醛。1H NMR(D2O,300MHz)δ7.01-6.91(m,2H),6.86-6.78(m,1H),3.55-3.45(m,2H),2.97-2.85(m,2H),2.86-2.74(m,2H),2.60-2.49(m,2H),2.09-1.60(m,8H),1.48-1.35(m,1H),1.35-1.15(m,3H),1.10-0.97(m,1H),0.62(t,J＝7.5Hz,2H)。C20H31BClFN2O4的ESI MS实验值m/z[429.5(M+1)]。
实例51-A：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(1-((4-氟萘-1-基)甲基)哌啶-4-基)己酸
按与实例118中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(1-((4-氟萘-1-基)甲基)哌啶-4-基)己酸，但在步骤6中使用4-氟-1-萘甲醛作为醛。1H NMR(D2O,300MHz)δ8.03(d,J＝8.4Hz,1H),7.95(d,J＝8.4Hz,1H),7.64-7.44(m,3H),7.10(t,J＝8.4Hz,1H),4.60(bs,2H),3.51-3.40(m,2H),3.11-2.97(m,2H),2.20-2.04(m,1H),2.00-1.85(m,1H),1.80-1.60(m,4H),1.46-1.31(m,1H),1.30-1.10(m,3H),1.10-0.95(m,1H),0.59(t,J＝7.2Hz,2H)。C22H30BFN2O4的ESI MS实验值m/z[417.1(M+1)]。
实例52-A：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(1-(3-(2,4-二氟苯基)丙基)哌啶-4-基)己酸二盐酸盐
按与实例118中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(1-(3-(2,4-二氟苯基)丙基)哌啶-4-基)己酸二盐酸盐，但在步骤6中使用3-(2,4-二氟苯基)丙醛作为醛。1H NMR(D2O,500MHz)δ7.22-7.15(m,1),6.88-6.70(m,2H),3.60-3.49(m,2H),3.05-3.94(m,2H),2.93-2.83(m,2H),2.66-2.58(m,2H),2.15-2.02(m,2H),1.98-1.70(m,6H),1.50-1.41(m,1H),1.39-1.25(m,3H),1.15-1.05(m,1H),0.70(t,J＝7.2Hz,2H)。C20H31BF2N2O4的ESI MS实验值m/z[395.7(M+1-18)]。
实例53-A：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(1-(2-(三氟甲基)苯甲基)哌啶-4-基)己酸二盐酸盐
按与实例118中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(1-(2-(三氟甲基)苯甲基)哌啶-4-基)己酸，但在步骤6中使用2-(三氟甲基)苯甲醛作为醛。1H NMR(D2O,300MHz)δ7.79-7.74(m,1H),7.67-7.52(m,3H),4.39(s,2H),3.62-3.48(m,2H),3.14-3.00(m,2H),2.15-1.95(m,2H),1.87-1.65(m,4H),1.55-1.38(m,1H),1.35-1.20(m,3H),1.15-0.96(m,1H),0.65(t,J＝7.5Hz,2H)。C19H28BF3N2O4的ESI MS实验值m/z[417.2(M+1)]。
实例54-A：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(1-(2-(N-吗啉基)苯甲基)哌啶-4-基)己酸二盐酸盐
按与实例118中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(1-(2-(N-吗啉基)苯甲基)哌啶-4-基)己酸，但在步骤6中使用2-(N-吗啉基)苯甲醛作为醛。1H NMR(D2O,300MHz)δ7.43(dd,J1＝8.7Hz,J2＝1.5Hz,1H),7.36-7.30(m,2H),7.18(dd,J1＝8.4Hz,J2＝1.2Hz,1H),4.32(s,2H),3.82-3.75(m,4H),3.55-3.45(m,2H),3.10-2.95(m,2H),3.90-3.82(m,4H),2.18-1.98(m,2H),1.89-1.70(m,4H),1.50-1.35(m,1H),1.35-1.20(m,3H),1.15-0.99(m,1H),0.64(t,J＝7.2Hz,2H)。C22H36BN3O5的ESI MS实验值m/z[434.1(M+1)]。
实例55-A：制备2-氨基-2-(1-(联苯-2-基甲基)哌啶-4-基)-6-二羟硼基己酸二盐酸盐
按与实例118中所述方式类似的方式制备2-氨基-2-(1-(联苯-2-基甲基)哌啶-4-基)-6-二羟硼基己酸，但在步骤6中使用联苯-2-甲醛作为醛。1H NMR(D2O,300MHz)δ7.53-7.24(m,9H),4.29(s,2H),3.32-3.18(m,2H),2.58-2.42(m,2H),1.90-1.75(m,2H),1.73-1.52(m,4H),1.52-1.48(m,1H),1.35-1.10(m,3H),1.10-0.95(m,1H),0.62(t,J＝7.2Hz,2H)。C24H33BN2O4的ESI MS实验值m/z[425.2(M+1)]。
实例56-A：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(1-(喹啉-8-基甲基)哌啶-4-基)己酸二盐酸盐
按与实例118中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(1-(喹啉-8-基甲基)哌啶-4-基)己酸，但在步骤6中使用喹啉-8-甲醛作为醛。1H NMR(D2O,300MHz)δ8.98(bd,J＝4.3Hz,1H),8.82(d,J＝8.2Hz,1H),8.21(d,J＝8.4Hz,1H),8.04(d,J＝8.0Hz,1H),7.89-7.75(m,4H),4.85(s,2H),3.65-3.50(m,2H),3.20-3.03(m,2H),2.22-2.08(m,1H),2.10-1.96(m,1H),1.88-1.65(m,4H),1.54-1.38(m,1H),1.38-1.17(m,3H),1.15-0.99(m,1H),0.67(t,J＝7.5Hz,2H)。C21H30BN3O4的ESI MS实验值m/z[400.5(M+1)]。
实例57-A：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(1-(2-(吡啶-3-基)苯甲基)哌啶-4-基)己酸二盐酸盐
按与实例118中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(1-(2-(吡啶-3-基)苯甲基)哌啶-4-基)己酸，但在步骤6中使用2-(吡啶-3-基)苯甲醛作为醛。1H NMR(D2O,300MHz)δ8.82-8.75(m,2H),8.56-8.50(m,1H),8.12-8.05(m,1H),7.65-7.53(m,3H),7.38-7.34(m,1H),4.25(s,2H),3.44-3.35(m,2H),2.68-2.51(m,2H),1.96-1.80(m,2H),1.70-1.52(m,4H),1.52-1.48(m,1H),1.35-1.10(m,3H),1.10-0.95(m,1H),0.66(t,J＝7.5Hz,2H)。C23H32BN3O4的ESI MS实验值m/z[426.3(M+1)]。
实例58-A：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(1-((3'-甲氧基联苯-2-基)甲基)哌啶-4-基)己酸二盐酸盐
按与实例118中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(1-((3'-甲氧基联苯-2-基)甲基)哌啶-4-基)己酸，但在步骤6中使用3'-甲氧基联苯-2-甲醛作为醛。1HNMR(D2O,300MHz)δ7.52-7.28(m,5H),7.00-6.83(m,3H),4.28(s,2H),3.73(s,3H),3.32-3.22(m,2H),2.60-2.45(m,2H),1.90-1.75(m,2H),1.70-1.50(m,4H),1.38-1.10(m,4H),1.10-0.94(m,1H),0.62(t,J＝7.5Hz,2H)。C25H35BN2O5的ESI MS实验值m/z[455.4(M+1)]。
实例59-A：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(1-(3,4-二氟苯乙基)哌啶-4-基)己酸二盐酸盐
按与实例118中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(1-(3,4-二氟苯乙基)哌啶-4-基)己酸，但在步骤6中使用2-(3,4-二氟苯基)乙醛作为醛。1H NMR(D2O,300MHz)δ7.15-7.03(m,2H),6.97-6.90(m,1H),3.63-3.51(m,2H),3.28-3.15(m,2H),2.99-2.80(m,4H),2.10-1.97(m,2H),1.87-1.63(m,4H),1.52-1.35(m,1H),1.35-1.15(m,3H),1.14-0.98(m,1H),0.65(t,J＝7.2Hz,2H)。C19H29BF2N2O4的ESI MS实验值m/z[399.2(M+1)]。
实例60-A：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(1-(色满-8-基甲基)哌啶-4-基)己酸二盐酸盐
按与实例118中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(1-(色满-8-基甲基)哌啶-4-基)己酸，但在步骤6中使用色满-8-甲醛作为醛。1H NMR(D2O,300MHz)δ7.12(d,J＝8.2Hz,1H),7.06(d,J＝8.2Hz,1H),6.80(dd,J1＝8.2Hz,J2＝8.2Hz,1H),4.17-4.09(m,4H),3.52-3.42(m,2H),3.00-2.86(m,2H),2.71-2.64(m,2H),2.09-1.95(m,2H),1.91-1.64(m,6H),1.49-1.34(m,1H),1.35-1.18(m,3H),1.16-0.99(m,1H),0.64(t,J＝7.5Hz,2H)。C21H33BN2O5的ESI MS实验值m/z[405.3(M+1)]。
实例61-A：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(1-(吲哚啉-7-基甲基)哌啶-4-基)己酸二盐酸盐
按与实例118中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(1-(吲哚啉-7-基甲基)哌啶-4-基)己酸，但在步骤6中使用吲哚啉-7-甲醛作为醛。1H NMR(D2O,300MHz)δ7.54-7.36(m,3H),4.30(s,2H),3.80(t,J＝7.8Hz,2H),3.60-3.45(m,2H),3.25(t,J＝7.8Hz,2H),3.11-2.95(m,2H),2.13-1.98(m,2H),1.90-1.65(m,4H),1.50-1.35(m,1H),1.38-1.14(m,3H),1.16-0.99(m,1H),0.66(t,J＝7.2Hz,2H)。C20H32BN3O4的ESI MS实验值m/z[390.3(M+1)]。
实例62-A：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(1-((1,3-二甲基-1H-吡唑-5-基)甲基)哌啶-4-基)己酸二盐酸盐
按与实例118中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(1-((1,3-二甲基-1H-吡唑-5-基)甲基)哌啶-4-基)己酸，但在步骤6中使用1,3-二甲基-1H-吡唑-5-甲醛作为醛。1H NMR(D2O,300MHz)δ6.30(s,1H),4.32(s,2H),3.73(s,3H),3.58-3.47(m,2H),3.07-2.94(m,2H),2.12(s,3H),2.11-2.00(m,2H),1.90-1.68(m,4H),1.51-1.4(m,1H),1.36-1.22(m,3H),1.18-1.04(m,1H),0.66(t,J＝7.2Hz,2H)。C17H31BN4O4的ESI MS实验值m/z[367.4(M+1)]。
实例63-A：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(1-(3-(4-(三氟甲基)苯基)丙基)哌啶-4-基)己酸二盐酸盐
按与实例118中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(1-(3-(4-(三氟甲基)苯基)丙基)哌啶-4-基)己酸，但在步骤6中使用3-(4-(三氟甲基)苯基)丙醛作为醛。1H NMR(D2O,300MHz)δ7.56(d,J＝8.6Hz,1H),7.32(d,J＝8.6Hz,1H),3.60-3.47(m,2H),3.03-2.92(m,2H),2.92-2.75(m,2H),2.72-2.61(m,2H),2.11-1.88(m,4H),1.90-1.64(m,4H),1.52-1.35(m,1H),1.35-1.15(m,3H),1.16-0.99(m,1H),0.65(t,J＝7.2Hz,2H)。C21H32BF3N2O4的ESI MS实验值m/z[445.2(M+1)]。
实例64-A：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(1-(4-(3,4-二氯苯氧基)苯甲基)哌啶-4-基)己酸二盐酸盐
按与实例118中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(1-(4-(3,4-二氯苯氧基)苯甲基)哌啶-4-基)己酸，但在步骤6中使用4-(3,4-二氯苯氧基)苯甲醛作为醛。1H NMR(D2O,300MHz)δ7.44-7.36(m,2H),7.20-7.03(m,4H),6.89(dd,J1＝8.8Hz,J2＝3.0Hz,1H),4.14(s,2H),3.54-3.48(m,2H),2.98-2.84(m,2H),2.10-1.95(m,2H),1.85-1.64(m,4H),1.50-1.32(m,1H),1.35-1.18(m,3H),1.16-1.01(m,1H),0.66(t,J＝7.5Hz,2H)。C24H31BCl2N2O5的ESI MS实验值m/z[509.3(M+1),511.3(M+1)]。
实例65-A：制备2-(1-(3-((1H-吡唑-1-基)甲基)苯甲基)哌啶-4-基)-2-氨基-6-二羟硼基己酸二盐酸盐
按与实例118中所述方式类似的方式制备2-(1-(3-((1H-吡唑-1-基)甲基)苯甲基)哌啶-4-基)-2-氨基-6-二羟硼基己酸，但在步骤6中使用3-((1H-吡唑-1-基)甲基)苯甲醛作为醛。1H NMR(D2O,300MHz)δ7.82(d,J＝2.6Hz,1H),δ7.66(d,J＝2.6Hz,1H),7.41-7.18(m,4H),6.41(dd,J1＝2.6Hz,J2＝2.6Hz,1H),5.39(s,2H),4.15(s,2H),3.50-3.38(m,2H),2.97-2.82(m,2H),2.15-1.92(m,2H),1.87-1.62(m,4H),1.49-1.32(m,1H),1.35-1.18(m,3H),1.16-0.99(m,1H),0.64(t,J＝7.5Hz,2H)。C22H33BN2O4的ESI MS实验值m/z[429.3(M+1)]。
实例66-A：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(1-(3-(2,4-二氯苯基)丙基)哌啶-4-基)己酸二盐酸盐
按与实例118中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(1-(3-(2,4-二氯苯基)丙基)哌啶-4-基)己酸，但在步骤6中使用3-(2,4-二氯苯基)丙醛作为醛。1H NMR(D2O,500MHz)δ7.42(s,1H),7.22(bs,2H),3.65-3.55(m,2H),3.14-3.05(m,2H),3.00-2.97(m,2H),2.75-2.67(m,2H),2.29-2.19(m,1H),2.17-2.08(m,1H),2.02-1.79(m,6H),1.62-1.50(m,1H),1.45-1.29(m,3H),1.21-1.10(m,1H),0.63(t,J＝7.2Hz,2H)。C20H31BCl2N2O4的ESI MS实验值m/z[427.7(M+1-18)]。
实例67-A：制备2-氨基-2-((R)-1-苯甲基吡咯烷-3-基)-6-二羟硼基己酸二盐酸盐
按与实例118中所述方式类似的方式制备2-氨基-2-((R)-1-苯甲基吡咯烷-3-基)-6-二羟硼基己酸二盐酸盐，但在步骤1中使用(R)-1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-3-甲酸作为羧酸。C17H27BN2O4的ESI MS实验值m/z[335.2(M+1)]。
实例68-A：制备2-氨基-2-((S)-1-苯甲基吡咯烷-3-基)-6-二羟硼基己酸二盐酸盐
按与实例118中所述方式类似的方式制备2-氨基-2-((S)-1-苯甲基吡咯烷-3-基)-6-二羟硼基己酸二盐酸盐，但在步骤1中使用(S)-1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-3-甲酸作为羧酸。C17H27BN2O4的ESI MS实验值m/z[335.1(M+1)]。
实例69-A：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-((S)-1-(3,4-二氯苯甲基)哌啶-3-基)己酸二盐酸盐
按与实例118中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-((S)-1-(3,4-二氯苯甲基)哌啶-3-基)己酸二盐酸盐，但在步骤1中使用(S)-1-(叔丁氧基羰基)哌啶-3-甲酸作为羧酸并且在步骤6中使用3,4-二氯苯甲醛作为醛。C18H27BCl2N2O4的ESI MS实验值m/z[417.4(M+1)]。
实例71-A：制备(R)-2-氨基-2-(1-苯甲基哌啶-4-基)-6-二羟硼基己酸
步骤1：1-苯甲基-N-甲氧基-N-甲基哌啶-4-甲酰胺
将1-苯甲基哌啶-4-甲酸乙酯(10.0g，40.4mmol)和N,O-二甲基羟胺盐酸盐(6.12g，62.6mmol)于THF(80mL)中的溶液冷却到0℃，之后逐滴添加i-PrMgCl(121.2mmol，60.6mL，2M的THF溶液)。搅拌反应1小时，随后通过添加氯化铵饱和水溶液(90mL)淬灭。分离水层与有机层。用乙酸乙酯进一步萃取分离的水相。合并的有机层用氯化钠饱和水溶液洗涤，经MgSO4干燥，并真空浓缩。在硅胶上对残余物进行色谱分离(含2-18％甲醇的二氯甲烷)，得到所需产物(8.88g，84％)。Rf 0.45(10％MeOH/CH2Cl2)。1H NMR(CDCl3,300MHz)δ7.40-7.20(m,5H),3.69(s,3H),3.51(s,2H),3.17(s,3H),2.94(d,2H,J＝11.4Hz),2.63-2.66(m,1H),2.01(td,J＝11.7,2.9Hz,2H),1.83(qd,J＝12.8,3.7Hz,2H),1.72-1.67(m,2H)。C15H22N2O2的ESI MS实验值m/z[263.3(M+1)]。
步骤2：1-(1-苯甲基哌啶-4-基)戊-4-烯-1-酮
将1-苯甲基-N-甲氧基-N-甲基哌啶-4-甲酰胺(8.88g，33.0mmol)于THF(40mL，0.8M)中的溶液冷却到0℃并用3-丁烯基溴化镁的0.5M溶液(51mmol，102mL)以逐滴方式处理。搅拌4小时后，用1N HCl(24mL)淬灭反应，用5％碳酸氢钠水溶液中和并用乙酸乙酯稀释。分离各层且水相用乙酸乙酯萃取。合并的有机层用氯化钠饱和水溶液洗涤，经MgSO4干燥，并真空浓缩。在二氧化硅上对残余物进行色谱分离(含2-20％甲醇的二氯甲烷)，得到所需产物(4.95g，57％)。Rf 0.22(10％MeOH/CH2Cl2)。1H NMR(CDCl3,300MHz)δ7.38-7.21(m,5H),5.82-5.76(m,1H),5.15-4.95(m,2H),3.50(s,2H),2.91(d,J＝11.2Hz,2H),2.54(t,J＝7.3Hz,2H),2.39-2.23(m,3H),2.06-1.97(m,2H),1.82-1.61(m,4H)。C17H23NO的ESI MS实验值m/z[258.2(M+1)]。
步骤3：(R,Z)-N-(1-(1-苯甲基哌啶-4-基)亚戊-4-烯基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺
用乙醇钛(IV)(12.6g，55.3mmol)处理1-(1-苯甲基哌啶-4-基)戊-4-烯-1-酮(6.11g，21.3mmol)和(R)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(3.62g，27.6mmol)于THF(71mL，0.3M)中的溶液并加热到70℃过夜。由于反应不完全，故再添加数份(R)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(1.81g，13.8mmol)和乙醇钛(IV)(6.3g，27.7mmol)，并且再将混合物加热到75℃，保持6小时。通过将其缓慢倾倒入快速搅拌的氯化钠饱和水溶液(100mL)中并通过硅藻土过滤来淬灭反应。用乙酸乙酯(3×)洗涤硅藻土垫并用氯化钠饱和水溶液洗涤合并的有机物，经MgSO4干燥，并真空浓缩。在硅胶上对残余物进行色谱分离(含60％乙酸乙酯的庚烷)，得到所需产物(3.24g，42％)。Rf 0.44(EtOAc)。1H NMR(CDCl3,300MHz)δ7.34-7.19(m,5H),5.88-5.75(m,1H),5.09-4.94(m,2H),3.50(d,J＝5.5Hz,2H),2.97-2.83(m,2H),2.74-2.70(m,1H),2.55-2.23(m,4H),2.00(t,J＝8.8Hz,2H),1.77-1.63(m,4H),1.23(s,9H)。C21H32N2OS的ESI MS实验值m/z[361.4(M+1)]。
步骤4：(R)-N-((R)-1-(1-苯甲基哌啶-4-基)-1-氰基戊-4-烯基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺
将(R,Z)-N-(1-(1-苯甲基哌啶-4-基)亚戊-4-烯基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(2.74g，7.6mmol)于THF(130mL，0.06M)中的溶液冷却到-78℃。单独地将Et2AlCN的1M溶液(11.4mmol，11.4mL)溶解于THF(20mL)中并冷却到-78℃。逐滴添加iPrOH(0.64mL，8.26mmol)并使溶液经20分钟升温到室温，随后逐滴添加到亚磺酰胺溶液中。使反应物逐渐升温到室温，并搅拌过夜。用氯化铵饱和水溶液(50mL)淬灭反应，并通过硅藻土过滤。用乙酸乙酯(3×)洗涤硅藻土垫，且合并的有机物用氯化钠饱和水溶液洗涤，经MgSO4干燥，并真空浓缩。在硅胶上对残余物进行色谱分离(含1-9％甲醇的二氯甲烷并再次用含2-5％甲醇的乙酸乙酯)，得到所需产物(1.99g，67％)以及其非所需的非对映异构体(0.46g，15％)。Rf0.26(10％MeOH/CH2Cl2)。1H NMR(CDCl3,300MHz)δ7.31-7.25(m,5H),5.83-5.78(m,1H),5.13-5.03(m,2H),3.51(d,J＝1.5Hz,2H),3.41(s,1H),3.00(d,J＝11.0Hz,2H),2.34-2.29(m,2H),2.05-1.83(m,6H),1.60-1.44(m,3H),1.25(s,9H)。C22H33N3OS的ESI MS实验值m/z[388.4(M+1)]。
步骤5：(R)-N-((R)-1-(1-苯甲基哌啶-4-基)-1-氰基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)戊基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺
将(R)-N-((R)-1-(1-苯甲基哌啶-4-基)-1-氰基戊-4-烯基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(364mg，0.94mmol)、[Ir(COD)Cl]2(31mg，0.047mmol)和dppe(37mg，0.094mmol)于二氯甲烷(9.4mL)中的溶液搅拌20分钟，随后用频那醇硼烷(180mg，1.41mmol)处理。在室温下搅拌过夜后，反应物用乙酸乙酯稀释，用氯化钠饱和水溶液洗涤，经MgSO4干燥并浓缩。通过快速柱色谱法(硅胶，用含1-10％甲醇的二氯甲烷洗脱)纯化所得残余物，得到所需产物(170mg，35％)。Rf 0.43(10％MeOH/CH2Cl2)。1H NMR(CDCl3,300MHz)δ7.34-7.24(m,5H),3.50(s,2H),3.34(s,1H),2.98(d,J＝11.4Hz,2H),2.03-1.94(m,2H),1.87-1.71(m,3H),1.60-1.40(m,8H),1.26(s,9H),1.24(s,12H),0.81(t,J＝7.3Hz,2H)。C28H46BN3O3S的ESI MS实验值m/z[515.9(M+1)]。
步骤6：(R)-2-氨基-2-(1-苯甲基哌啶-4-基)-6-二羟硼基己酸
用6N HCl(3.3mL)处理(R)-N-((R)-1-(1-苯甲基哌啶-4-基)-1-氰基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)戊基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(170mg，0.33mmol)并加热到105℃。搅拌过夜后，反应物用水稀释，用二氯甲烷洗涤并浓缩。使所得残余物与甲苯共沸，在高真空下干燥并通过HPLC(10-100％乙腈/H2O)纯化，得到所需产物(39mg，34％)。1H NMR(CD3OD,300MHz)δ7.56-7.43(m,5H),4.29(s,2H),3.47(br,2H),3.06(br,2H),2.76(br,1H),2.54(t,J＝7.0Hz,2H),2.11(d,J＝13.9Hz,2H),1.77(br,2H),1.59-1.44(m,2H),1.40-1.29(m,2H),0.78(t,J＝8.1Hz,2H)。C18H29BN2O4的ESI MS实验值m/z[331.2(M+1)-H2O]。
实例72-A：制备2-氨基-2-(氮杂环庚烷-4-基)-6-二羟硼基己酸二盐酸盐
按与实例118中所述方式类似的方式制备2-氨基-2-(氮杂环庚烷-4-基)-6-二羟硼基己酸二盐酸盐，但在步骤1中使用1-(苯甲氧基羰基)氮杂环庚烷-4-甲酸作为酸并省略步骤5和6。1H NMR(D2O,300MHz)δ3.39-3.26(m,1H),3.26-3.15(m,1H),3.12-2.97(m,2H),2.20-1.40(m,9H),1.35-1.13(m,3H),1.13-0.99(m,1H),0.65(t,J＝7.2Hz,2H)。C12H25BN2O4的ESI MS实验值m/z[272.2(M+1),255.0(M+1-18)]。
实例73-A：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(1-(3,4-二氯苯甲基)氮杂环庚烷-4-基)己酸二盐酸盐
按与实例118中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(1-(3,4-二氯苯甲基)氮杂环庚烷-4-基)己酸二盐酸盐，但在步骤1中使用1-(苯甲氧基羰基)氮杂环庚烷-4-甲酸作为酸并在步骤6中使用3,4-二氯苯甲醛作为醛。1H NMR(D2O,300MHz)δ7.54(bs,1H),7.48(d,J＝7.8Hz,1H),7.26(bd,J＝7.8Hz,1H),4.20(bs,2H),3.52-2.90(m,4H),2.31-2.10(m,1H),2.11-1.44(m,8H),1.35-1.14(m,3H),1.16-0.98(m,1H),0.64(t,J＝7.5Hz,2H)。C19H29BCl2N2O4的ESI MS实验值m/z[431.2&433.2(M+1),413.1&315.1(M+1-18)]。
实例74-A：制备顺-2-氨基-2-(3-(苯甲基氨基)环丁基)-6-二羟硼基己酸二盐酸盐
步骤1：合成3-(苯甲基(叔丁氧基羰基)氨基)环丁烷甲酸
在室温下，将3-氧代-1环丁烷甲酸(4g，35mmol，1eq)、苯甲胺(19mL，175mmol，5eq)和乙酸(2.1mL，35mmol，1eq)于1,2-二氯乙烷中的溶液搅拌1小时。添加三乙酰氧基硼氢化钠(11.1g，52.5mmol，1.5eq)并持续搅拌2天，溶液用NaOH水溶液(1N)碱化到pH 13并用二氯甲烷洗涤。向水层装入二碳酸二叔丁基酯(45g，210mmol，6eq)并搅拌过夜。酸化到pH 5后，用乙酸乙酯萃取反应混合物，用氯化钠饱和水溶液洗涤，经MgSO4干燥，过滤并浓缩。通过快速色谱法(含1-20％甲醇的二氯甲烷)纯化，得到呈白色固体状的3-(苯甲基(叔丁氧基羰基)氨基)环丁烷甲酸(7.96g，24.3mmol，69％)。C17H23BNO4的ESI MS实验值m/z[304(M-1)]。
步骤2：合成苯甲基(3-(甲氧基(甲基)氨甲酰基)环丁基)氨基甲酸叔丁基酯
用EDC(5.8g，30.3mmol，2eq)、N,O-二甲基羟胺盐酸盐(3.0g，30.3mmol，2eq)和三乙胺(8.5mL，60.7mmol，4eq)处理3-(苯甲基(叔丁氧基羰基)氨基)环丁烷甲酸(4.96g，15.2mmol)于二氯甲烷(80mL，0.19M)中的溶液并搅拌16小时。所得溶液依序用水、1M HCl、氯化钠饱和水溶液洗涤，经无水MgSO4干燥，过滤并浓缩。通过快速色谱法(含1-20％甲醇的二氯甲烷)纯化，得到呈灰白色固体状的苯甲基(3-(甲氧基(甲基)氨甲酰基)环丁基)氨基甲酸叔丁基酯(4.04g，72％)。1H NMR(CD3OD,300MHz)δ7.40–7.16(m,5H),4.60–4.20(m,1H),4.52(brs,2H),3.77(s,3H),3.22–3.00(brs,4H),2.60–2.20(m,4H),1.58-1.08(brs,9H),LCMS,C19H28N2O4m/z[349(M+1),371.3(M+23)]。
步骤3：合成苯甲基(3-戊-4-烯酰基环丁基)氨基甲酸叔丁基酯
在氮气氛围下，将苯甲基(3-(甲氧基(甲基)氨甲酰基)环丁基)氨基甲酸叔丁基酯(8.68g，23.5mmol，1eq)于四氢呋喃(100mL)中的溶液冷却到0℃并逐滴用4-丁烯基溴化镁(0.5M的THF溶液，70.4mL，35.2mmol，1.5eq)处理。在0℃下搅拌0.5小时后，使反应混合物升温到室温，再保持3小时。一旦完成，就将反应混合物倾倒入水中，用1N盐酸酸化到pH 3-4并用乙酸乙酯(3×)萃取。合并的有机层用氯化钠饱和水溶液洗涤，经无水硫酸镁干燥，过滤并浓缩。通过快速柱色谱法(硅胶，含0-40％乙酸乙酯的庚烷)纯化，得到呈无色油状的苯甲基(3-戊-4-烯酰基环丁基)氨基甲酸叔丁基酯(7.7g，21.1mmol，90％)。1H NMR(CDCl3,300MHz)δ7.33–7.11(m,5H),5.84–5.67(m,1H),5.04–4.92(m,2H),4.45(brs,3H),2.89–2.70(m,1H),2.48-2.15(m,8H),1.5-1.08(brs,9H)，C21H29NO3的ESI MS实验值m/z[366.2(M+23)]。
步骤4：合成3-(2-乙酰胺基-1-(叔丁基氨基)-1-氧代己-5-烯-2-基)环丁基(苯甲基)氨基甲酸叔丁基酯
在室温下，将苯甲基(3-戊-4-烯酰基环丁基)氨基甲酸叔丁基酯(7.7g，21.1mmol，5eq)、叔丁基异腈(12mL，106mmol，10eq)和乙酸铵(16.3g，212mmol)于2,2,2-三氟乙醇(24mL，0.9M)中的溶液搅拌3天。反应混合物用乙酸乙酯稀释，用2M HCl淬灭并用乙酸乙酯萃取。有机层依序用2M HCl和氯化钠饱和水溶液洗涤，经MgSO4干燥，过滤并浓缩。通过柱色谱法(含乙酸乙酯的己烷)纯化，得到呈黄色固体状的顺-3-(2-乙酰胺基-1-(叔丁基氨基)-1-氧代己-5-烯-2-基)环丁基(苯甲基)氨基甲酸叔丁基酯(8.9g，17.5mmol，83％)。1H NMR(CDCl3,300MHz)δ7.32–7.10(m,6H),6.08(brs,1H),5.80–5.64(m,1H),5.01–4.87(m,2H),4.42(brs,2H),4.41–4.08(m,1H),2.79–2.58(m,1H),2.40–1.99(m,8H),1.98–1.80(m,3H),1.56-1.08(m,18H)，C28H43N3O4的ESI MS实验值m/z[508.2(M+23)]；和呈白色泡沫状的反-3-(2-乙酰胺基-1-(叔丁基氨基)-1-氧代己-5-烯-2-基)环丁基(苯甲基)氨基甲酸叔丁基酯(1.1g，2.2mmol，10％)。1H NMR(CDCl3,300MHz)δ7.32–7.11(m,5H),6.79(brs,1H),5.83–5.68(m,1H),5.56(brs,1H),5.02–4.88(m,2H),4.54-4.37(m,2H),4.35-4.16(m,1H),2.94–2.75(m,2H),2.51-2.39(m,1H),2.38–2.19(m,2H),2.18-1.90(m,5H),1.86–1.70(m,1H),1.67–1.58(m,1H),1.47-1.22(m,18H)，C28H43N3O4的ESI MS实验值m/z[486.5(M+1),508.0(M+23)]。
步骤5：合成顺-3-(2-乙酰胺基-1-(叔丁基氨基)-1-氧代-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)己-2-基)环丁基(苯甲基)氨基甲酸叔丁基酯
搅拌30分钟后，将顺-3-(2-乙酰胺基-1-(叔丁基氨基)-1-氧代己-5-烯-2-基)环丁基(苯甲基)氨基甲酸叔丁基酯(5.34g，10.5mmol)、氯-1,5-环辛二烯铱(I)二聚物(212mg，0.32mmol，3mol％)和1,2-双(二苯基膦基)乙烷(252mg，0.63mmol，6mol％)于二氯甲烷(50mL)中的溶液冷却到0℃并经5分钟小心地用4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂硼戊环(3.1mL，21.1mmol，2eq)处理。缓慢升温到室温并搅拌过夜后，将反应物倾倒入水中并用乙酸乙酯(3×)萃取。合并的有机相用氯化钠饱和水溶液洗涤，经无水硫酸镁干燥，过滤并浓缩。通过快速柱色谱法(硅胶，含10-40％乙酸乙酯的庚烷)纯化，得到顺-3-(2-乙酰胺基-1-(叔丁基氨基)-1-氧代-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)己-2-基)环丁基(苯甲基)氨基甲酸叔丁基酯(4.8g，7.83mmol，74％)。C34H56BN3O6的ESI MS实验值m/z[614.2(M+1),636.2(M+23)]。
步骤6：顺-2-氨基-2-(3-(苯甲基氨基)环丁基)-6-二羟硼基己酸二盐酸盐
将顺-3-(2-乙酰胺基-1-(叔丁基氨基)-1-氧代-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)己-2-基)环丁基(苯甲基)氨基甲酸叔丁基酯(200mg，0.33mmol)于6N HCl中的溶液加热到回流，保持16小时，冷却到室温并浓缩至干。通过制备型HPLC(含20％乙腈和0.1％三氟乙酸的水)随后用HCl水溶液处理并蒸发进行纯化，得到呈白色固体状的顺-2-氨基-6-二羟硼基-2-(3-苯甲基氨基-环丁基)-己酸二盐酸盐(73.6mg，0.23mmol，70％)。1HNMR(D2O)δ7.42–7.29(m,5H),4.03(s,2H),3.63-3.50(m,1H),2.58-2.43(m,1H),2.43-2.12(m,3H),1.97–1.72(m,2H),1.68–1.52(m,1H),1.36–0.96(m,4H),0.65(t,J＝7.5Hz,2H)。C17H27BN2O4的MS实验值m/z[317(M-18+1)]。
实例75-A：制备反-2-氨基-2-(3-(苯甲基氨基)环丁基)-6-二羟硼基己酸二盐酸盐
按与实例74-A中所述方式类似的方式制备反-2-氨基-2-(3-(苯甲基氨基)环丁基)-6-二羟硼基己酸二盐酸盐，但在步骤4中使用反-3-(2-乙酰胺基-1-(叔丁基氨基)-1-氧代己-5-烯-2-基)环丁基(苯甲基)氨基甲酸叔丁基酯作为烯烃。1H NMR(D2O)δ7.42–7.27(m,5H),4.02(s,2H),3.72-3.57(m,1H),3.01–2.84(m,1H),2.64-2.48(m,1H),2.40-2.20(m,3H),1.93–1.76(m,1H),1.68–1.55(m,1H),1.35–0.96(m,4H),0.64(t,J＝7.5Hz,2H)。C17H27BN2O4的MS实验值m/z[317(M-18+1)]。
实例76-A：制备顺-2-氨基-6-二羟硼基-2-(3-(4-(三氟甲氧基)苯甲基氨基)环丁基)己酸二盐酸盐
按与实例74-A中所述方式类似的方式制备顺-2-氨基-6-二羟硼基-2-(3-(4-(三氟甲氧基)苯甲基氨基)环丁基)己酸二盐酸盐，但在步骤1中使用4'-三氟甲氧基苯甲胺作为胺。1H NMR(CD3OD)δ7.66(dt,J＝8.7,2.4Hz,2H),7.37(dd,J＝8.7,0.9Hz,2H),4.18(s,2H),3.81-3.67(m,1H),2.75–2.58(m,1H),2.57-2.34(m,3H),2.33-2.19(m,1H),2.06–1.90(m,1H),1.86-1.72(m,1H),1.54-1.36(m,3H),1.34–1.13(m,1H),0.83(t,J＝7.4Hz,2H)。C18H26BF3N2O5的MS实验值m/z[419(M+1)]。
实例77-A：制备顺-2-氨基-2-(3-(联苯-4-基甲基氨基)环丁基)-6-二羟硼基己酸二盐酸盐
按与实例74-A中所述方式类似的方式制备顺-2-氨基-2-(3-(联苯-4-基甲基氨基)环丁基)-6-二羟硼基己酸二盐酸盐，但在步骤1中使用联苯-4-基甲胺作为胺。1H NMR(CD3OD)δ7.75–7.69(m,2H),7.67–7.57(m,4H),7.49–7.42(m,2H),7.41-7.13(m,1H),4.19(s,2H),3.82-3.65(m,1H),2.75–2.60(m,1H),2.58-2.34(m,3H),2.32-2.18(m,1H),2.06–1.92(m,1H),1.86-1.72(m,1H),1.54-1.36(m,3H),1.32–1.15(m,1H),0.83(t,J＝7.5Hz,2H)。C23H31BN2O4的MS实验值m/z[411(M+1)]。
实例78-A：制备顺-2-氨基-6-二羟硼基-2-(3-((6-氯苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基)甲基氨基)环丁基)己酸二盐酸盐
按与实例74-A中所述方式类似的方式制备顺-2-氨基-6-二羟硼基-2-(3-((6-氯苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基)甲基氨基)环丁基)己酸二盐酸盐，但在步骤1中使用(6-氯苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基)甲胺作为胺。1H NMR(CD3OD)δ7.13(s,1H),7.03(s,1H),6.06(s,2H),4.20(s,2H),3.82-3.70(m,1H),2.76–2.61(m,1H),2.60-2.36(m,3H),2.32-2.18(m,1H),2.06–1.90(m,1H),1.88-1.72(m,1H),1.54-1.34(m,3H),1.32–1.14(m,1H),0.83(t,J＝7.2Hz,2H)。C18H26BClN2O6的MS实验值m/z[413.0(M+1)]。
实例79-A：制备顺-2-氨基-6-二羟硼基-2-(3-(喹啉-8-基甲基氨基)环丁基)己酸二盐酸盐
按与实例74-A中所述方式类似的方式制备顺-2-氨基-6-二羟硼基-2-(3-(喹啉-8-基甲基氨基)环丁基)己酸二盐酸盐，但在步骤1中使用喹啉-8-基甲胺作为胺。1H NMR(CD3OD)δ9.20(dd,J＝5.1,1.5Hz,1H),9.00(dd,J＝8.7,1.5Hz,1H),8.33(dd,J＝8.4,1.2Hz,1H),8.29(dd,J＝7.2,1.2Hz,1H),8.01(dd,J＝8.4,5.1Hz,1H),7.92(dd,J＝8.4,7.2Hz,1H),4.84(s,2H),4.08–3.92(m,1H),2.80–2.32(m,5H),2.08–1.92(m,1H),1.89–1.74(m,1H),1.54-1.36(m,3H),1.34-1.15(m,1H),0.83(t,J＝7.5Hz,2H)。C20H28BN3O4的MS实验值m/z[386(M+1)]。
实例80-A：制备顺-2-氨基-6-二羟硼基-2-(3-(萘-1-基甲基氨基)环丁基)己酸二盐酸盐
按与实例74-A中所述方式类似的方式制备顺-2-氨基-6-二羟硼基-2-(3-(萘-1-基甲基氨基)环丁基)己酸二盐酸盐，但在步骤1中使用萘-1-基甲胺作为胺。1H NMR(CD3OD)δ8.20–8.14(m,1H),8.03–7.96(m,2H),7.76–7.66(m,2H),7.64–7.53(m,2H),4.66(s,2H),3.96–3.77(m,1H),2.76–2.62(m,1H),2.60-2.36(m,.3H),2.35–2.21(m,1H),2.05–1.89(m,1H),1.88–1.72(m,1H),1.53-1.35(m,3H),1.34-1.13(m,1H),0.82(t,J＝7.5Hz,2H)。C21H29BN2O4的MS实验值m/z[385(M+1)]。
实例81-A：制备顺-2-氨基-2-(3-氨基环丁基)-6-二羟硼基己酸二盐酸盐
按与实例118中所述方式类似的方式制备2-氨基-2-(3-氨基环丁基)-6-二羟硼基己酸二盐酸盐，但在步骤1中使用(1s,3s)-3-(叔丁氧基羰基氨基)环丁烷甲酸作为酸并省略步骤5和6。1H NMR(D2O,300MHz)δ3.62-3.52(m,1H),2.58-2.31(m,3H),2.21(q,J＝10.3Hz,1H),1.92-1.78(m,2H),1.65-1.55(m,1H),1.36-1.20(m,3H),1.18-1.01(m,1H),0.66(t,J＝7.7Hz,2H)。C10H21B1N2O4的ESI MS实验值m/z[245.1(M+1)]。
实例82-A：制备顺-2-氨基-6-二羟硼基-2-(3-(4-氯苯甲基氨基)环丁基)己酸二盐酸盐
按与实例118中所述方式类似的方式制备顺-2-氨基-6-二羟硼基-2-(3-(4-氯苯甲基氨基)环丁基)己酸二盐酸盐，但在步骤1中使用(1s,3s)-3-(叔丁氧基羰基氨基)环丁烷甲酸作为酸并在步骤6中使用4-氯苯甲醛作为醛。1H NMR(D2O,300MHz)δ7.38(d,J＝8.4Hz,2H),7.30(d,J＝8.4Hz,2H),4.02(s,3H),3.61-3.53(m,1H),2.45-2.20(m,4H),1.94-1.69(m,2H),1.56-1.45(m,1H),1.32-1.03(m,4H),0.66(t,J＝7.7Hz,2H)。C17H26B1Cl1N2O4的ESI MS实验值m/z[369.3(M+1)]。
实例83-A：制备顺-2-氨基-6-二羟硼基-2-(3-(异丁基氨基)环丁基)己酸二盐酸盐
按与实例118中所述方式类似的方式制备顺-2-氨基-6-二羟硼基-2-(3-(异丁基氨基)环丁基)己酸二盐酸盐，但在步骤1中使用(1s,3s)-3-(叔丁氧基羰基氨基)环丁烷甲酸作为酸并在步骤6中使用异丁醛作为醛。C14H29B1N2O4的ESI MS实验值m/z[301.1(M+1)]。
实例84-A：制备顺-2-氨基-6-二羟硼基-2-[4-(4-氯苯甲酰基)-环己基]己酸盐酸盐
步骤1：顺-4-(4-氯苯甲酰基)-环己烷甲酸,甲氧基-甲酰胺
将EDC(2.87g，15.0mmol)逐份添加到顺-4-(4-氯苯甲酰基)-环己烷甲酸(2.0g，7.5mmol)、DMAP(5mg)、HOBt(5mg)和N,O-二甲基羟胺盐酸盐(1.46g，15mmol)于二氯甲烷(40mL)中的经搅拌溶液中。逐滴添加三乙胺(2.28g，3.14mL，22.5mmol)并在室温下搅拌反应混合物过夜。将所得溶液倾倒入水中并用乙酸乙酯(3×)萃取。合并的有机相用氯化钠饱和水溶液洗涤，经无水硫酸镁干燥，过滤并真空浓缩，得到呈无色油状的顺-4-(4-氯苯甲酰基)-环己烷甲酸,甲氧基-甲酰胺(1.6g.69％)；1H NMR(CDCl3,300MHz)δ7.82(d,J＝8.5Hz,2H,),7.41(d,J＝8.5Hz,2H),3.69(s,3H),3.35(quin,J＝5Hz,1H),3.16(s,3H),2.80(sept,J＝4Hz,1H),2.15(m,2H),1.89(m,2H),1.72(m,4H)。
步骤2：顺-4-[2-(4-氯苯基)-[1,3]-二氧杂戊环-2-基]-环己烷甲酸,甲氧基-甲酰胺
在60℃下将顺-4-(4-氯苯甲酰基)-环己烷甲酸,甲氧基-甲酰胺(1.6g，5.17mmol)、原甲酸三乙酯(843mg，0.95mL，5.7mmol)、乙二醇(1.6g，1.45mL，25.9mmol)和甲苯磺酸单水合物(50mg)于甲苯(50mL)中的溶液搅拌过夜，且随后冷却到室温，并在真空中浓缩至干。将反应混合物再溶解于乙酸乙酯中，用氯化钠饱和水溶液洗涤，经无水硫酸镁干燥，过滤并真空浓缩。通过快速柱色谱法(硅胶，含0-30％乙酸乙酯的庚烷)纯化，得到呈无色油状的顺-4-[2-(4-氯苯基)-[1,3]-二氧杂戊环-2-基]-环己烷甲酸,甲氧基-甲酰胺(1.36g，74％)；1H NMR(CDCl3,300MHz)δ7.33(d,J＝8.5Hz,),7.27(d,J＝8.5Hz,2H),3.96(m,2H),3.68(m,2H),3.64(s,3H),3.14(s,3H),2.83(m,1H),1.96(m,2H),1.76(m,1H),1.67(m,3H)和1.47(m,4H)；C18H24ClNO4的MS(+CI):m/z：预期值353.1；实验值354.2(M+H)+。
步骤3：顺-1-{4-[2-(4-氯苯基)-[1,3]-二氧杂戊环-2-基]-环己基}戊-4-烯-1-酮
在氮气氛围下，将顺-4-[2-(4-氯苯基)-[1,3]-二氧杂戊环-2-基]-环己烷甲酸,甲氧基-甲酰胺(1.36g，3.85mmol)于四氢呋喃(10mL)中的溶液冷却到0℃，并用4-丁烯基溴化镁(0.5M的THF溶液，19.24mL，9.62mmol)以逐滴方式处理。在0℃下搅拌溶液1小时，随后使其升温到室温过夜。将所得溶液倾倒入水中，用1N盐酸酸化到pH 3-4，并用乙酸乙酯(3×)萃取。合并的有机相用氯化钠饱和水溶液洗涤，经无水硫酸镁干燥，过滤并真空浓缩。通过快速柱色谱法(硅胶，含0-25％乙酸乙酯的庚烷)纯化，得到呈无色油状的顺-1-{4-[2-(4-氯苯基)-[1,3]-二氧杂戊环-2-基]-环己基}戊-4-烯-1-酮(1.13g，84％)；1H NMR(CDCl3,300MHz)δ7.31(d,J＝7.5Hz,2H),7.27(d,J＝7.5Hz,2H),5.78(m,1H),4.96(m,2H),3.94(m,2H),3.68(m,2H),2.50(m,3H),2.30(m,2H),2.15(dd,J＝13,3Hz,2H),1.76(tt,J＝11,3Hz,1H),1.36-1.56(m,4H)和1.25(td,J＝13,3Hz,2H)；C20H25ClO3的MS(+CI):m/z：预期值348.2；实验值349.2(M+H)+。
步骤4：顺-2-乙酰基氨基-2-{4-[2-(4-氯苯基)-[1,3]-二氧杂戊环-2-基]-环己基}己-5-烯酸,叔丁酰胺
将叔丁基异腈(404mg，0.55mL，4.86mmol)添加到顺-1-{4-[2-(4-氯苯基)-[1,3]-二氧杂戊环-2-基]-环己基}戊-4-烯-1-酮(1.13g，3.24mmol)和乙酸铵(999mg，12.96mmol)于2,2,2-三氟乙醇(0.5mL)中的经搅拌浆液中，并在室温下搅拌所得浆液。8天后，将反应物倾倒入水中并用乙酸乙酯(3×)萃取。合并的有机相用氯化钠饱和水溶液洗涤，经无水硫酸镁干燥，过滤并真空浓缩。通过快速柱色谱法(硅胶，含10-50％乙酸乙酯的庚烷)纯化，得到呈无色油状的顺-2-乙酰基氨基-2-{4-[2-(4-氯苯基)-[1,3]-二氧杂戊环-2-基]-环己基}己-5-烯酸,叔丁酰胺(1.16g，71％)；1H NMR(CDCl3,300MHz)δ7.29(m,4H),6.96(br s,1HNH),5.76(m,1H),5.44(br s,NH,1H),4.94(m,2H),3.94(m,2H),3.68(m,2H),2.93(ddd,J1＝16.5hz,J2＝11.5Hz,J3＝5.0Hz,1H),1.90-2.08(m,2H),1.96(s,3H),1.60-1.86(m,(6H),1.42(m,1H),1.34(s,9H),1.06(m,3H)和0.86(m,1H)。
步骤5：顺-2-乙酰基氨基-2-{4-[2-(4-氯苯基)-[1,3]-二氧杂戊环-2-基]-环己基}-6-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]-二氧杂硼戊环-2-基)-己-5-烯酸,叔丁酰胺
用氯-1,5-环辛二烯铱(I)二聚物(46mg，3mol％)和1,2-双(二苯基膦基)乙烷(55mg，6mol％)处理顺-2-乙酰基氨基-2-{4-[2-(4-氯苯基)-[1,3]-二氧杂戊环-2-基]-环己基}-己-5-烯酸,叔丁酰胺(1.13g，2.3mmol)于二氯甲烷(10mL)中的溶液。在室温下搅拌溶液30分钟，且随后逐滴添加4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂硼戊环(588mg，0.67mL，4.6mmol)，且随后在室温下搅拌反应过夜。将反应物倾倒入水中并用乙酸乙酯(3×)萃取。合并的有机相用氯化钠饱和水溶液洗涤，经无水硫酸镁干燥，过滤并真空浓缩。通过快速柱色谱法(硅胶，含10-40％乙酸乙酯的庚烷)纯化，得到呈无色油状的顺-2-乙酰基氨基-2-{4-[2-(4-氯苯基)-[1,3]-二氧杂戊环-2-基]-环己基}-6-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]-二氧杂硼戊环-2-基)-己-5-烯酸,叔丁酰胺(970mg，68％)；1H NMR(CDCl3,300MHz)δ7.28(m,4H),6.92(br s,NH,1H),5.41(br s,NH,1H),3.94(m,2H),3.67(m,2H),2.76(m,1H),1.90-2.08(m,2H),1.94(s,3H),1.60-1.86(m,4H),1.18-1.42(m,5H),1.32(s,9H),1.23(s,12H),0.90-1.10(m,4H)和0.72(t,J＝7.5Hz,2H)；C33H52BClN2O6的MS(+CI):m/z：预期值618.4；实验值619.3(M+H)+,641.4(M+Na)+。
步骤6：(R)-2-氨基-6-二羟硼基-2-((1s,4S)-4-(4-氯苯甲酰基)环己基)己酸
在90℃下，将顺-2-乙酰基氨基-2-{4-[2-(4-氯苯基)-[1,3]-二氧杂戊环-2-基]-环己基}-6-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]-二氧杂硼戊环-2-基)-己-5-烯酸,叔丁酰胺(970mg)于6N HCl(15mL)中的溶液搅拌1天。冷却到室温后，将反应混合物转移到分液漏斗中，用脱离子水(10mL)稀释并用二氯甲烷(3×)洗涤。水层在液氮中冷冻并冻干，得到标题化合物(545mg，88％)。1H NMR(D2O,300MHz)δ7.77(d,J＝7.0Hz,2H),7.38(dd,J＝7.0Hz,2H),3.24(m,1H),1.76(m,6H),1.54(m,1H),1.24(m,6H),1.06(m,2H)和0.64(t,J＝6.5Hz,2H)；C19H27BClNO5的MS(+CI):m/z：预期值395.2；实验值396.2(M+H)+,378.2(M+H-H2O)+。
实例85-A：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(1-(5-氯吡啶-2-基)哌啶-4-基)己酸盐酸盐
步骤1：5'-氯-3,4,5,6-四氢-2H-[1,2']联吡啶-4-甲酸,甲氧基-甲基-酰胺
将EDC(1.61g，8.4mmol)逐份添加到5'-氯-3,4,5,6-四氢-2H-[1,2']联吡啶-4-甲酸盐酸盐(1.16g，4.19mmol)、DMAP(5mg)、HOBt(5mg)和N,O-二甲基羟胺盐酸盐(818mg，8.4mmol)于二氯甲烷(20mL)中的经搅拌溶液中。逐滴添加三乙胺(1.69g，2.33mL，16.8mmol)，并在室温下搅拌反应混合物过夜。将所得溶液倾倒入水中并用乙酸乙酯(3×)萃取。合并的有机相用氯化钠饱和水溶液洗涤，经无水硫酸镁干燥，过滤并真空浓缩，得到呈白色固体状的5'-氯-3,4,5,6-四氢-2H-[1,2']联吡啶-4-甲酸,甲氧基-甲基-酰胺(1.05g，86％)；1H NMR(CDCl3,300MHz)δ8.05(d,J＝2.5Hz,1H),7.36(dd,J1＝9.0Hz,J2＝2.5Hz,1H),6.57(d,J＝9.0Hz,1H),4.25(dt,J1＝13.0Hz,J2＝3.0Hz,1H),3.69(s,3H),3.16(s,3H),2.88(m,3H)和1.78(m,4H)；C13H18ClN3O2的MS(+CI):m/z：预期值283.1；实验值284.2(M+H)+。
步骤2：1-(5'-氯-3,4,5,6-四氢-2H-[1,2']联吡啶-4-基)-戊-4-烯-1-酮
在氮气氛围下，将5'-氯-3,4,5,6-四氢-2H-[1,2']联吡啶-4-甲酸,甲氧基-甲基-酰胺(1.0g，3.5mmol)于四氢呋喃(10mL)中的溶液冷却到0℃，并逐滴用4-丁烯基溴化镁(0.5M的THF溶液，17.6mL，8.8mmol)处理。在0℃下搅拌1小时并在室温下搅拌过夜后，将反应混合物倾倒入水中，用1N盐酸酸化到pH 3-4并用乙酸乙酯(3×)萃取。合并的有机相用氯化钠饱和水溶液洗涤，经无水硫酸镁干燥，过滤并真空浓缩。通过快速柱色谱法(硅胶，含0-25％乙酸乙酯的庚烷)纯化，得到呈无色油状的1-(5'-氯-3,4,5,6-四氢-2H-[1,2']联吡啶-4-基)-戊-4-烯-1-酮(904mg，93％)；1H NMR(CDCl3,300MHz)δ8.05(d,J＝2.5Hz,1H),7.42(dd,J1＝9.0Hz,J2＝2.5Hz,1H),6.62(d,J＝9.0Hz,1H),5.80(m,1H),5.04(m,2H),4.23(m,2H),2.92(m,2H),2.59(m,3H),2.36(m,2H),1.98(m,2H)和1.70(m,2H)；C15H19ClN2O的MS(+CI):m/z：预期值278.1；实验值279.2(M+H)+。
步骤3：2-乙酰基氨基-2-(5'-氯-3,4,5,6-四氢-2H-[1,2']联吡啶-4-基)-己-5-烯酸,叔丁酰胺
将叔丁基异腈(538mg，0.73mL，6.48mmol)添加到1-(5'-氯-3,4,5,6-四氢-2H-[1,2']联吡啶-4-基)-戊-4-烯-1-酮(900mg，3.24mmol)和乙酸铵(1.0g，12.96mmol)于2,2,2-三氟乙醇(0.5mL)中的经搅拌浆液中。在室温下搅拌5天后，将反应混合物倾倒入水中并用乙酸乙酯(3×)萃取。合并的有机相用氯化钠饱和水溶液洗涤，经无水硫酸镁干燥，过滤并真空浓缩。通过快速柱色谱法(硅胶，含10-40％乙酸乙酯的庚烷)纯化，得到呈白色固体状的标题化合物(1.02g，74％)；1H NMR(CDCl3,300MHz)δ8.06(dd,J1＝2.5Hz,J2＝0.5Hz,1H),7.37(dd,J1＝9Hz,J2＝2.5Hz,1H),7.01(br s,NH,1H),6.55(dd,J1＝9.0Hz,J2＝0.5Hz,1H),5.78(m,1H),5.50(br s,NH,1H),4.97(m,2H),4.38(m,1H),4.14(m,1H),3.00(ddd,J1＝14.5Hz,J2＝11.5Hz,J3＝5.0Hz,1H),2.72(td,J1＝13Hz,J2＝2.5Hz,2H),2.44(tt,J1＝2.5Hz,J2＝3Hz,1H),1.97-2.08(m,1H),2.00(s,3H),1.80(m,3H),1.20-1.52(m,3H)和1.30(s,9H)。
步骤4：2-乙酰基氨基-2-(5'-氯-3,4,5,6-四氢-2H-[1,2']联吡啶-4-基)-6-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]-二氧杂硼戊环-2-基)己酸,叔丁酰胺
在氮气氛围下，用氯-1,5-环辛二烯铱(I)二聚物(48mg，3mol％)和1,2-双(二苯基膦基)乙烷(57mg，6mol％)处理2-乙酰基氨基-2-(5'-氯-3,4,5,6-四氢-2H-[1,2']联吡啶-4-基)-己-5-烯酸,叔丁酰胺(1.0g，2.38mmol)于二氯甲烷(10mL)中的溶液。在室温下搅拌溶液30分钟，且随后逐滴添加4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂硼戊环(609mg，0.69mL，4.76mmol)，且随后在室温下搅拌反应过夜。将反应物倾倒入水中并用乙酸乙酯(3×)萃取。合并的有机相用氯化钠饱和水溶液洗涤，经无水硫酸镁干燥，过滤并真空浓缩。通过快速柱色谱法(硅胶，含10-40％乙酸乙酯的庚烷)纯化，得到呈白色固体状的标题化合物(1.07g，82％)；1H NMR(CDCl3,300MHz)δ8.05(d,J＝2Hz,1H),7.35(dd,J1＝9.0Hz,J2＝2.5Hz,1H),6.96(br s,NH,1H),6.53(d,J＝9.0Hz,1H),5.78(m,1H),5.46(br s,NH,1H),4.36(d,J＝13Hz,1H),4.12(d,J＝13Hz,1H),2.83(td,J1＝13.5Hz,J2＝5Hz,1H),2.72(td,J1＝12.5Hz,J2＝2Hz,2H),2.42(tt,J1＝12Hz,J2＝3Hz,1H),1.97(s,3H),1.77(m,2H),1.32-1.48(m,4H),1.28(s,9H),1.20(s,12H),1.03-1.25(m,2H)和0.72(t,J＝7.5Hz,2H)；C28H46BClN4O4的MS(+CI):m/z：预期值548.3；实验值549.3(M+H)+,571.3(M+Na)+。
步骤5：2-氨基-6-二羟硼基-2-(1-(5-氯吡啶-2-基)哌啶-4-基)己酸
在90℃下，将2-乙酰基氨基-2-(5'-氯-3,4,5,6-四氢-2H-[1,2']联吡啶-4-基)-6-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]-二氧杂硼戊环-2-基)己酸,叔丁酰胺(1.07g)于6N HCl(20mL)中的溶液搅拌1天。冷却到室温后，将反应混合物转移到分液漏斗中，用脱离子水(10mL)稀释并用二氯甲烷(3×)洗涤。水层在液氮中冷冻并冻干，得到呈白色固体状的标题化合物(590mg，82％)；1H NMR(D2O,300MHz)δ8.00(d,J＝2.5Hz,1H),7.47(dd,J1＝9.0Hz,J2＝2.5Hz,1H),6.79(d,J＝9Hz,1H),4.42(d,J＝13.5Hz,1H),4.32(d,J＝13Hz,1H),2.79(t,J＝12Hz,2H),2.06(m,1H),1.78-1.94(m,3H),1.55-1.70(m,2H),1.43(m,4H),1.30(m,1H)和0.82(t,J＝7Hz,2H)；C16H25BClN3O4的MS(+CI):m/z：预期值369.2；实验值370.2(M+H)+,352.23(M+H-H2O)+。
实例86-A：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(4-(4-氯苯基)环己基)己酸盐酸盐
步骤1：4-(4-氯苯基)-环己烷甲酸,甲氧基-甲酰胺
将EDC(3.21g，16.8mmol)逐份添加到4-(4-氯苯基)-环己烷甲酸(2.0g，8.4mmol)、DMAP(5mg)、HOBt(5mg)和N,O-二甲基羟胺盐酸盐(1.63g，16.8mmol)于二氯甲烷(40mL)中的经搅拌溶液中。逐滴添加三乙胺(3.4g，4.7mL，33.5mmol)，并在室温下搅拌反应混合物。搅拌过夜后，将反应混合物倾倒入水中并用乙酸乙酯(3×)萃取。合并的有机相用氯化钠饱和水溶液洗涤，经无水硫酸镁干燥，过滤并真空浓缩，得到呈无色油状的4-(4-氯苯基)-环己烷甲酸,甲氧基-甲酰胺(1.85g.78％)；C15H20ClNO2的MS(+CI):m/z：预期值281.1；实验值282.2(M+H)+。
步骤2：1-[4-(4-氯苯基)-环己基]戊-4-烯-1-酮
在氮气氛围下，将4-(4-氯苯基)-环己烷甲酸,甲氧基-甲酰胺(1.8g，6.39mmol)于四氢呋喃(10mL)中的溶液冷却到0℃，并逐滴用4-丁烯基溴化镁(0.5M的THF溶液，31.95mL，15.98mmol)处理。在0℃下搅拌1小时后，使反应混合物升温到室温过夜，倾倒入水中，用1N盐酸酸化到pH 3-4并用乙酸乙酯(3×)萃取。合并的有机相用氯化钠饱和水溶液洗涤，经无水硫酸镁干燥，过滤并真空浓缩。通过快速柱色谱法(硅胶，含0-20％乙酸乙酯的庚烷)纯化，得到呈无色油状的1-[4-(4-氯苯基)-环己基]戊-4-烯-1-酮(1.62g，92％)；1H NMR(CDCl3,300MHz)δ7.26(m,2H),7.12(d,J＝8Hz,2H),5.81(m,1H),5.02(m,2H),2.58(t,J＝7Hz,2H),2.44(m,2H),2.34(m,2H),1.99(m,4H)和1.47(m,4H)。
步骤3：2-乙酰胺基-N-叔丁基-2-(4-(4-氯苯基)环己基)己-5-烯酰胺
将叔丁基异腈(301mg，0.41mL，3.6mmol)添加到1-[4-(4-氯苯基)-环己基]戊-4-烯-1-酮(800mg，2.9mmol)和乙酸铵(671mg，8.7mmol)于2,2,2-三氟乙醇(0.4mL)中的经搅拌浆液中。在室温下搅拌8天后，将反应混合物倾倒入水中并用乙酸乙酯(3×)萃取。合并的有机相用氯化钠饱和水溶液洗涤，经无水硫酸镁干燥，过滤并真空浓缩。通过快速柱色谱法(硅胶，含10-50％乙酸乙酯的庚烷)纯化，得到呈无色油状的2-乙酰胺基-N-叔丁基-2-(4-(4-氯苯基)环己基)己-5-烯酰胺(940mg，77％)；1H NMR(CDCl3,300MHz)δ7.24(m,2H),7.15(m,2H),7.04(br s,NH,1H),5.80(m,1H),5.544(br s,NH,1H),4.97(m,2H),3.04(ddd,J1＝14Hz,J2＝11.5Hz,J3＝5.0Hz,1H),2.38(tt,J1＝12Hz,J2＝2Hz,1H),2.28(tt,J1＝12Hz,J2＝2Hz,1H),2.03(s,3H),1.68-1.95(m,5H),1.42-1.61(m,4H),1.41(s,9H),1.26(m,1H)和1.12(m,1H)；C24H35ClN2O2的MS(+CI):m/z：预期值418.2；实验值419.2(M+H)+。
步骤4.2-乙酰胺基-N-叔丁基-2-(4-(4-氯苯基)环己基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)己酰胺
用氯-1,5-环辛二烯铱(I)二聚物(45mg，3mol％)和1,2-双(二苯基膦基)乙烷(54mg，6mol％)处理2-乙酰基氨基-2-[4-(4-氯苯基)-环己基]己-5-烯酸叔丁酰胺(940mg，2.25mmol)于二氯甲烷(9mL)中的溶液。搅拌30分钟后，逐滴添加4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂硼戊环(576mg，0.65mL，4.5mmol)并持续搅拌过夜。将反应物倾倒入水中并用乙酸乙酯(3×)萃取。合并的有机相用氯化钠饱和水溶液洗涤，经无水硫酸镁干燥，过滤并真空浓缩。通过快速柱色谱法(硅胶，含10-40％乙酸乙酯的庚烷)纯化，得到呈无色油状的2-乙酰胺基-N-叔丁基-2-(4-(4-氯苯基)环己基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)己酰胺(985mg，80％)；1H NMR(CDCl3,300MHz)δ7.25(d,J＝7.5Hz,2H),7.08(d,J＝7.5Hz,2H),6.99(br s,NH,1H),5.52(br s,NH,1H),2.84(td,J1＝13Hz,J2＝3.0Hz,1H),2.37(t,J＝12Hz,1H),2.24(t,J＝12Hz,1H),2.00(s,3H),1.90(m,4H),1.20-1.48(m,7H),1.38(s,9H),1.22(s,12H),1.06(m,2H)和0.75(t,J＝7.5Hz,2H)；C30H48BClN2O4的MS(+CI):m/z：预期值546.3；实验值547.3(M+H)+,569.3(M+Na)+。
步骤5：2-氨基-6-二羟硼基-2-(4-(4-氯苯基)环己基)己酸
在90℃下，将2-乙酰基氨基-2-[4-(4-氯苯基)-环己基]-6-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]-二氧杂硼戊环-2-基)己酸叔丁酰胺(980mg)于6N HCl(15mL)中的溶液搅拌1天。冷却到室温后，将反应混合物转移到分液漏斗中，用脱离子水(10mL)稀释并用二氯甲烷(3×)洗涤。水层在液氮中冷冻并冻干，得到2-氨基-6-二羟硼基-2-(4-(4-氯苯基)环己基)己酸(535mg，81％)。1H NMR(D4-MeOH,300MHz)δ7.24(d,J＝8.5Hz,2H),7.19(dd,J＝8.5Hz,2H),2.50(m,1H),1.78-2.06(m,7H),1.38-1.56(m,7H),1.21(m,1H)和0.82(t,J＝6.5Hz,2H)；C18H27BClNO4的MS(+CI):m/z：预期值367.2；实验值368.2(M+H)+,350.2(M+H-H2O)+。
实例87-A：制备2-氨基-2-(1-苯甲基哌啶-4-基)-6-二羟硼基己酸二盐酸盐
步骤1：4-(甲氧基(甲基)氨甲酰基)哌啶-1-甲酸苯甲基酯
在1L圆底烧瓶中，在室温下搅拌1-(苯甲氧基羰基)哌啶-4-甲酸(21.0g，80mmol)于无水二氯甲烷(250mL)中的溶液，直到完全溶解。变澄清后，将反应混合物冷却到0℃并依序用N,O-二甲基羟胺盐酸盐(9.74g，100mmol)、EDC(19.2g，100mmol)和三乙胺(30.4g，41.81mL，300mmol)处理。添加完成后，在室温下搅拌反应混合物过夜。添加1N HCl(250mL)并且再搅拌5分钟后，分离有机相，用1N HCl(100mL)、NaHCO3饱和水溶液(150mL)洗涤，经MgSO4干燥，过滤并浓缩。通过MPLC(100g柱，含50-100％乙酸乙酯的庚烷)纯化，得到呈无色油状的4-(甲氧基(甲基)氨甲酰基)哌啶-1-甲酸苯甲基酯(22.23g，91％)。1H NMR(CDCl3,300MHz)δ7.42-7.29(m,5H),5.21(s,2H),4.32-4.16(m,2H),3.70(s,3H),3.18(s,3H),2.96-2.78(m,3H),1.80-1.64(m,4H)。C16H22N2O4的ESI MS实验值m/z[307.1(M+1),329.2(M+23)]。
步骤2：4-戊-4-烯酰基哌啶-1-甲酸苯甲基酯
在氩气氛围下，将4-(甲氧基(甲基)氨甲酰基)哌啶-1-甲酸苯甲基酯(15.0g，49.0mmol)于THF(100mL)中的溶液冷却到-78℃(干冰/丙酮浴)并经由套管用3-丁烯基溴化镁(250mL，0.5M的THF溶液，125mmol，阿尔德里奇公司(Aldrich))处理。添加完成后，移除冷却浴，使溶液缓慢升温到室温。搅拌过夜后(16小时)，反应混合物用0.1N HCl(200mL)淬灭并用乙酸乙酯(300mL)稀释。再搅拌5分钟后，分离有机相，用饱和碳酸氢钠(200mL)洗涤，经MgSO4干燥，过滤并浓缩。通过MPLC(100g柱，含20-50％乙酸乙酯的庚烷)纯化，得到呈无色油状的4-戊-4-烯酰基哌啶-1-甲酸苯甲基酯(14.5,98％)。1H NMR(CDCl3,300MHz)δ7.38-7.32(m,5H),5.79(dddd,J1＝17.1Hz,J2＝10.2Hz,J3＝6.9Hz,J4＝6.6Hz,1H),5.12(s,2H),5.02(dd,J1＝17.1Hz,J2＝1.5Hz,1H),4.97(dd,J1＝10.2Hz,J2＝1.5Hz,1H),4.28-4.10(m,2H),2.86(br t,J＝12Hz,2H),2.58-2.43(m,3H),2.35-2.28(m,2H),1.9-1.74(m,2H),1.62-1.48(m,2H)。C18H23NO3的ESI MS实验值m/z[302.3(M+1),324.1(M+23)]。
步骤34-(2-乙酰胺基-1-(叔丁基氨基)-1-氧代己-5-烯-2-基)哌啶-1-甲酸苯甲基酯
用叔丁基异腈(2.57g，3.50mL，31mmol)处理4-戊-4-烯酰基哌啶-1-甲酸苯甲基酯(10.0g，33.2mmol)和乙酸铵(6.16g，80mmol)于2,2,2-三氟乙醇(10mL)中的溶液。在室温下搅拌14天后，将反应混合物添加到分液漏斗中，用水(100mL)稀释并用乙酸乙酯(2×100mL)萃取。有机层用氯化钠饱和水溶液洗涤，经MgSO4干燥，过滤并浓缩。MPLC纯化(100g柱，含50-100％乙酸乙酯的庚烷)，得到呈无色油状的4-(2-乙酰胺基-1-(叔丁基氨基)-1-氧代己-5-烯-2-基)哌啶-1-甲酸苯甲基酯(8.2g，56％)。1H NMR(CDCl3,300MHz)δ7.36-7.31(m,5H),6.98(bs,1H),5.85-5.71(m,1H),5.49(bs,1H),5.11(s,2H),5.00(dd,J1＝16.8Hz,J2＝1.5Hz,1H),4.95(dd,J1＝9.9Hz,J2＝1.5Hz,1H),4.36-4.12(m,2H),2.96(ddd,J1＝14.1Hz,J2＝11.7Hz,J3＝5.4Hz,1H),2.78-2.61(m,2H),2.37(ddd,J1＝12.0Hz,J2＝11.7Hz,J3＝0.9Hz,1H),2.10-1.96(m,1H),2.00(s,3H),1.84-1.64(m,3H),1.56-1.39(m,1H),1.39-1.21(m,1H),1.34(s,9H),1.20-1.03(m,1H)。C25H37N3O4的ESI MS实验值m/z[444.3(M+1),466.1(M+23)]。
步骤4：4-(2-乙酰胺基-1-(叔丁基氨基)-1-氧代-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)己-2-基)哌啶-1-甲酸苯甲基酯
在氩气氛围下，用4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环(1.48g，1.67mL，11.6mmol)整份处理1,2-双(二苯基膦基)乙烷(306mg，0.77mmol)和氯-1,5-环辛二烯铱(I)二聚物(258mg，0.39mmol)于无水THF(30mL)中的溶液。搅拌15分钟后，将溶液冷却到5℃(冰-水浴)并用4-(2-乙酰胺基-1-(叔丁基氨基)-1-氧代己-5-烯-2-基)哌啶-1-甲酸苯甲基酯(3.42g，7.70mmol)整份处理。添加完成后，移除冷却浴并使反应混合物升温到室温。搅拌2小时后，用碳酸氢钠饱和水溶液(50mL)淬灭反应并使用乙酸乙酯(2×150mL)萃取。有机层经MgSO4干燥，过滤并浓缩。MPLC纯化(100g柱，含40-80％乙酸乙酯的庚烷)，得到呈无色油状的4-(2-乙酰胺基-1-(叔丁基氨基)-1-氧代-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)己-2-基)哌啶-1-甲酸苯甲基酯(3.10g，产率71％)。1H NMR(CDCl3,300MHz)δ7.36-7.30(m,5H),6.94(bs,1H),5.46(s,1H),5.10(s,2H),4.36-4.10(m,2H),2.86-2.60(m,3H),2.40-2.28(bt,J＝12.3Hz,1H),1.98(s,3H),1.78-1.61(m,2H),1.49-1.17(m,5H),1.33(s,9H),1.20(s,8H),1.12-0.94(m,2H),0.73(t,J＝7.8Hz,2H)。
步骤5：2-乙酰胺基-N-叔丁基-2-(哌啶-4-基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)己酰胺
在100mL圆底烧瓶中，在氩气氛围下，用氩气使含4-(2-乙酰胺基-1-(叔丁基氨基)-1-氧代-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)己-2-基)哌啶-1-甲酸苯甲基酯(3.0g，5.25mmol)的甲醇(40mL)脱气(鼓泡通过溶液)，且随后用钯(25mg，10wt％在活性碳上，潮湿，德固赛型E101NE/W)处理。持续鼓泡10分钟后，用缓慢的氢气流代替氩气。1.5小时后，反应完成(通过TLC监测反应中起始物质消失(含50％乙酸乙酯的庚烷，Rf 0.3)，并用氩气吹扫溶液，通过硅藻土545过滤，并用甲醇洗涤滤饼。浓缩甲醇溶液，并收集蒸发的溶剂，，得到粗2-乙酰胺基-N-叔丁基-2-(哌啶-4-基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)己酰胺(2.20g，96％)，不经进一步纯化即使用(含有约10％产物，并失去硼酸保护基)。1H NMR(CDCl3,300MHz)δ6.95(s,1H),5.53(s,1H),3.09(bt,J＝11.1Hz,2H),2.80(ddd,J1＝14.1Hz,J2＝13.5Hz,J3＝4.5Hz,1H),2.65-2.48(m,2H),2.26(dddd,J1＝12.0Hz,J2＝12.0Hz,J3＝3.0Hz,J4＝2.7Hz,1H),2.00-1.90(m,1H),1.98(s,3H),1.78-1.63(m,2H),1.45-1.00(m,5H),1.36(s,9H),1.21(s,8H),0.73(t,J＝7.5Hz,2H)。
步骤6：2-乙酰胺基-2-(1-苯甲基哌啶-4-基)-N-叔丁基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)己酰胺
将2-乙酰胺基-N-叔丁基-2-(哌啶-4-基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)己酰胺(480mg，1.10mmol)和苯甲醛(138mg，131μL，1.30mmol)于1,2-二氯乙烷(1mL)中的溶液搅拌20分钟，随后用三乙酰氧基硼氢化钠(420mg，2.20mmol)处理。5小时后，反应混合物用碳酸氢钠饱和水溶液(10mL)淬灭，用氯化钠饱和水溶液(50mL)稀释并用二氯甲烷(3×40mL)萃取。收集有机层，经MgSO4干燥，过滤并浓缩。MPLC纯化(25g柱，含1-10％甲醇的二氯甲烷)，得到呈无色油状的2-乙酰胺基-2-(1-苯甲基哌啶-4-基)-N-叔丁基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)己酰胺(538mg，93％)，立即用于随后的步骤中(约10％产物脱除硼酸保护基)。
步骤7：2-氨基-2-(1-苯甲基哌啶-4-基)-6-二羟硼基己酸
将2-乙酰胺基-2-(1-苯甲基哌啶-4-基)-N-叔丁基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)己酰胺(510mg，0.97mmol)于6N HCl(15mL)中的溶液加热到轻微回流，保持16小时。冷却到室温后，将反应混合物转移到分液漏斗中，用脱离子水(15mL)稀释并用二氯甲烷(3×25mL)洗涤。浓缩水层，得到灰白色固体，将其通过HPLC(含5-95％乙腈的水)纯化。浓缩含产物部分，将其再溶解于脱离子水(15mL)中，在液氮中冷冻并冻干，得到呈二盐酸盐和三水合物形式的2-氨基-2-(1-苯甲基哌啶-4-基)-6-二羟硼基己酸(210mg，62％)。1H NMR(D2O,500MHz)δ7.37-7.43(m,5H),4.21(s,2H),3.51(brt,J＝10Hz,2H),2.92-2.99(m,2H),2.02-2.10(m,2H),1.66-1.84(m,4H),1.41(dq,J1＝13.0Hz,J1＝4.0Hz,1H),1.29-1.35(m,2H),1.23-1.28(m,1H),1.08-1.12(m,1H),0.68(t；J＝8.0Hz,2H)。C18H29BFN2O4的ESI MS实验值m/z[331.6(M+1-18)13％,313.6(M+1–2×18)100％,329.6(M-1-18)100％]。C18H29BN2O4×2HCl×3H2O的分析计算值：C,45.49；H,7.85；N,5.89。实验值C,45.60；H,7.10；N,5.55。
实例88-A：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(哌啶-4-基)己酸二盐酸盐
使用实例87-A中所述的合成法制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(哌啶-4-基)己酸二盐酸盐，但如步骤7中所述直接脱除来自步骤5的中间物(2-乙酰胺基-N-叔丁基-2-(哌啶-4-基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)己酰胺)的保护基。1H NMR(D2O,300MHz)δ3.45(brd,J＝12.0Hz,2H),2.92-2.98(m,2H),2.15(brt,J＝12.0Hz,1H),2.04(brd,J＝14.0Hz,1H),1.79-1.86(m,3H),1.71(dq,J1＝13.0Hz,J2＝3.0Hz,1H),1.43(dq,J1＝13.0Hz,J2＝3.0Hz,1H),1.27-1.38(m,3H),1.09-1.17(m,1H),0.71(t,J＝8.0Hz,2H)。C11H23BN2O4的ESI MS实验值m/z[281.5(M+Na+)3％,263.5(M+Na+-18)5％,241.5(M+1-18)15％,223.4(M+1-2×18)100％]。
实例89-A：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(1-(4-氯苯甲基)哌啶-4-基)己酸二盐酸盐
按与实例87-A中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(1-(4-氯苯甲基)哌啶-4-基)己酸二盐酸盐，但在步骤6中使用4-氯苯甲醛作为醛。1H NMR(D2O,300MHz)δ7.31(dAB,J＝8.4Hz,2H),7.25(dAB,J＝8.4Hz,2H),4.11(s,2H),3.47-3.35(m,2H),2.93-2.80(m,2H),2.09(bt,J＝12.3Hz,1H),1.92(d,J＝13.8Hz,1H),1.84-1.60(m,4H),1.45-1.31(m,1H),1.30-1.13(m,3H),1.10-0.95(m,1H),0.59(t,J＝7.2Hz,2H)。C18H28BClN2O4的ESI MS实验值m/z[383.2(M+1)]。
实例90-A：制备2-氨基-2-(1-(苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基甲基)哌啶-4-基)-6-二羟硼基己酸二盐酸盐
按与实例87-A中所述方式类似的方式制备2-氨基-2-(1-(苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基甲基)哌啶-4-基)-6-二羟硼基己酸二盐酸盐，但在步骤6中使用苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-甲醛作为醛。1H NMR(D2O,300MHz)δ6.87-6.74(m,3H),5.85(s,2H),4.05(s,2H),3.50-3.32(m,2H),2.95-2.75(m,2H),2.04-1.90(m,2H),1.80-1.60(m,4H),1.50-0.95(m,5H),0.62(t,J＝7.2Hz,2H)。C19H29BN2O6的ESI MS实验值m/z[393.2(M+1)]。
实例91-A：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(1-((6-氯苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基)甲基)哌啶-4-基)己酸二盐酸盐
按与实例87-A中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(1-((6-氯苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基)甲基)哌啶-4-基)己酸二盐酸盐，但在步骤6中使用6-氯苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-甲醛作为醛。1H NMR(D2O,500MHz)δ6.98,(s,1H),6.94,(s,1H),5.97(s,2H),4.29(s,2H),3.58(t,J＝11.6Hz,2H),3.11-3.05(m,2H),2.15-2.04(m,2H),1.50-1.42(m,1H),1.36-1.25(m,3H),1.14-1.07(m,1H),0.69(t,J＝7.6Hz,2H)。C19H28BClN2O6的ESI MS实验值m/z[409.6/411.6(M+1-18)10％,391.5/393.5(M+1–2×18)63％,425.5/427.5(M-1)27％,407.6/409.6(M–1-18)100％]。
实例92-A：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(1-异戊基哌啶-4-基)己酸二盐酸盐
按与实例87-A中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(1-异戊基哌啶-4-基)己酸二盐酸盐，但在步骤6中使用异戊醛(3-甲基丁醛)作为醛。1H NMR(D2O,500MHz)δ3.55(t,J＝11.7Hz,2H),3.00-2.97(m,2H),2.88-2.82(m,2H),2.11-2.01(m,2H),1.84-1.70(m,4H),1.52-1.38(m,4H),1.33-1.21(m,3H),1.10-1.03(m,1H),0.77(d,J＝5.5Hz,6H),0.66(t,J＝7.6Hz,2H)。C16H33BN2O4的ESI MS实验值m/z[329.7(M+1)2％,311.6(M+1-18)20％,293.6(M+1–2×18)100％,327.7(M-1)10％,309.6(M–1-18)100％]。
实例93-A：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(1-(4-(三氟甲基)苯甲基)哌啶-4-基)己酸
按与实例87-A中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(1-(4-(三氟甲基)苯甲基)哌啶-4-基)己酸，但在步骤6中使用4-(三氟甲基)苯甲醛作为醛。1H NMR(D2O,400MHz)δ7.76-7.70(m,2H),7.65-7.54(m,2H),4.25(s,2H),3.60-3.37(m,2H),3.07-2.84(m,2H),2.07-1.95(m,2H),1.82(s,3H),1.81-1.63(m,4H),1.47-1.16(m,4H),1.14-1.00(m,1H),0.67(t,J＝8.29Hz,2H)，C19H28BF3N2O4的MS实验值m/z[399.1,(M–18+1),381.1(M–36+1)]。
实例94-A：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(1-(4-氟苯甲基)哌啶-4-基)己酸二盐酸盐
按与实例87-A中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(1-(4-氟苯甲基)哌啶-4-基)己酸二盐酸盐，但在步骤6中使用4-氟苯甲醛作为醛。1H NMR(D2O,400MHz)δ7.42-7.35(m,2H),7.16-7.07(m,2H),4.19(s,2H),3.60-3.35(m,2H),3.06-2.81(m,2H),2.07-1.94(m,2H),1.86(s,3H),1.84-1.60(m,4H),1.45-1.16(m,4H),1.14-0.99(m,1H),0.68(t,J＝8.3Hz,2H)。C18H28BFN2O4的MS实验值m/z[349.1,(M-18+1),331.1(M–36+1)]。
实例95-A：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(1-(3,4-二氯苯甲基)哌啶-4-基)己酸二盐酸盐
按与实例118中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(1-(3,4-二氯苯甲基)哌啶-4-基)己酸二盐酸盐，但在步骤6中使用3,4-二氯苯甲醛作为醛。1H NMR(D2O,400MHz)δ7.56-7.50(m,2H),7.29-7.24(m,1H),4.16(s,2H),3.57-3.32(m,2H),3.01-2.76(m,2H),2.05-1.95(m,2H),1.80(s,3H),1.79-1.63(m,4H),1.45-1.15(m,4H),1.14-0.99(m,1H),0.68(t,J＝8.29Hz,2H)；C18H27BCl2N2O4的MS实验值m/z[399.2,(M–18+1),381.2(M–36+1)]。
实例96-A：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(1-(2-氟-4,5-二甲氧基苯甲基)哌啶-4-基)己酸二盐酸盐
按与实例87-A中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(1-(2-氟-4,5-二甲氧基苯甲基)哌啶-4-基)己酸二盐酸盐，但在步骤6中使用2-氟-4,5-二甲氧基苯甲醛作为醛。1H NMR(D2O,400MHz)δ6.97(d,J＝7.1Hz,1H),6.89(d,J＝7.1Hz,1H),4.02(s,2H),3.82(s,3H),3.79(s,3H),3.47-3.34(m,2H),2.85-2.69(m,2H),2.05-1.90(m,2H),1.85(s,3H),1.81-1.61(m,4H),1.45-1.22(m,4H),1.20-1.08(m,1H),0.72(t,J＝8.3Hz,2H)。C20H32BFN2O6的MS实验值m/z[409.2,(M–18+1),391.2(M–36+1)]。
实例97-A：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(1-(2,4-二氯苯甲基)哌啶-4-基)己酸二盐酸盐
按与实例87-A中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(1-(2,4-二氯苯甲基)哌啶-4-基)己酸二盐酸盐，但在步骤6中使用2,4-二氯苯甲醛作为醛。1H NMR(D2O,400MHz)δ7.66(d,J＝2.0Hz,1H),7.53(s,1H),7.47(d,J＝2.1Hz,1H),4.46(s,2H),3.71-3.61(m,2H),3.26-3.12(m,2H),2.18-2.07(m,2H),1.90-1.76(m,3H),1.61-1.47(m,1H),1.46-1.19(m,3H),1.25-1.11(m,1H),0.77(t,J＝7.4Hz,2H)。ESI+/ESI-MS：观测值m/z400.1(M–18+H)+,381.1(M–36+H)+,399.1(M–18-1)-,381.1(M-36-1)-。
实例98-A：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(1-(萘-1-基甲基)哌啶-4-基)己酸二盐酸盐
按与实例87-A中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(1-(萘-1-基甲基)哌啶-4-基)己酸二盐酸盐，但在步骤6中使用1-萘甲醛作为醛。1H NMR(D2O,400MHz)δ8.15(d,J＝8.4Hz,1H),8.09(d,J＝8.4Hz,1H),8.05(d,J＝8.4Hz,1H),7.74-7.58(m,4H),4.81(s,2H),3.71-3.56(m,2H),3.27-3.11(m,2H),2.19-2.03(m,2H),1.90-1.70(m,4H),1.57-1.27(m,4H),1.25-1.09(m,1H),0.77(t,J＝7.6Hz,2H)。ESI+/ESI-MS：观测值m/z381.1(M–18+H)+,363.1(M–36+H)+,379.1(M–18-1)-。
实例99-A：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(1-(萘-2-基甲基)哌啶-4-基)己酸二盐酸盐
按与实例87-A中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(1-(萘-2-基甲基)哌啶-4-基)己酸二盐酸盐，但在步骤6中使用2-萘甲醛作为醛。1H NMR(D2O,400MHz)δ8.04-7.96(m,4H),7.67-7.57(m,2H),7.55(d,J＝8.4Hz,1H),4.41(s,2H),3.65-3.52(m,2H),3.11-2.95(m,2H),2.16-2.04(m,2H),1.87-1.70(m,4H),1.57-1.27(m,4H),1.25-1.11(m,1H),0.77(t,J＝7.6Hz,2H)。ESI+/ESI-MS：观测值m/z 381.1(M–18+H)+,363.1(M–36+H)+,379.1(M–18-1)-。
实例100-A：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(1-(4-(三氟甲氧基)苯甲基)哌啶-4-基)己酸二盐酸盐
按与实例87-A中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(1-(4-(三氟甲氧基)苯甲基)哌啶-4-基)己酸二盐酸盐，但在步骤6中使用4-(三氟甲氧基)苯甲醛作为醛。1H NMR(D2O,400MHz)δ7.55(d,J＝8.8Hz,2H),7.41(d,J＝8.8Hz,2H),4.28(s,2H),3.60-3.50(m,2H),3.06-2.92(m,2H),2.14-2.04(m,2H),1.88-1.73(m,4H),1.56-1.28(m,4H),1.25-1.11(m,1H),0.77(t,J＝7.6Hz,2H)。19F NMR(D2O,400MHz)δ-57.9(s,3F)。ESI+/ESI-MS：观测值m/z 415.2(M–18+1)+,397.2(M–36+1)+,413.2(M–18-1)-。
实例101-A：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(1-丙基哌啶-4-基)己酸二盐酸盐
按与实例87-A中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(1-丙基哌啶-4-基)己酸二盐酸盐，但在步骤6中使用丙醛作为醛。1H NMR(D2O,500MHz)δ3.51(t,J＝11.0Hz,2H),2.91-2.88(m,2H),2.86-2.81(m,2H),2.10(t,J＝12.4Hz,1H),2.00(d,J＝13.7Hz,1H),1.83-1.67(m,4H),1.59-1.52(m,2H),1.46-1.37(m,1H),1.30-1.20(m,3H),1.07-1.00(m,1H),0.77(t,J＝7.6Hz,3H),0.62(t,J＝7.6Hz,2H)。C14H29BN2O4的ESI MS实验值m/z[301.5(M+1)1％,283.5(M+1-18)17％,265.5(M+1–2×18)100％,581.9(2M–1-18)13％,299.6(M-1)25％,281.5(M–1-18)100％]。
实例102-A：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(1-(3-苯基丙基)哌啶-4-基)己酸二盐酸盐
按与实例87-A中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(1-(3-苯基丙基)哌啶-4-基)己酸二盐酸盐，但在步骤6中使用3-苯基丙醛作为醛。1H NMR(D2O,500MHz)δ7.30(d,J＝7.6Hz,1H),7.29(d,J＝7.6Hz,1H),7.21-7.20(m,3H),3.56(t,J＝11.6Hz,2H),3.02-2.99(m,2H),2.90-2.83(m,2H),2.62(t,J＝7.6Hz,2H),2.12-2.04(m,2H),1.99-1.93(m,2H),1.86-1.74(m,4H),1.49-1.41(m,1H),1.37-1.24(m,3H),1.14-1.08(m,1H),0.70(t,J＝7.6Hz,2H)。C20H33BN2O4的ESI MS实验值m/z[359.6(M+1-18)15％,341.6(M+1–2×18)100％,734.0(2M–1-18)15％,375.6(M-1)11％,357.6(M–1-18)100％]。C20H33BN2O4×2HCl×2H2O的分析计算值：C,49.50；H,8.10；N,5.77。实验值C,49.50；H,8.49；N,5.86。
实例103-A：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(1-(3-(三氟甲氧基)苯甲基)哌啶-4-基)己酸二盐酸盐
按与实例87-A中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(1-(3-(三氟甲氧基)苯甲基)哌啶-4-基)己酸二盐酸盐，但在步骤6中使用3-(三氟甲氧基)苯甲醛作为醛。1H NMR(D2O,400MHz)δ7.54(t,J＝7.8Hz,1H),7.45-7.38(m,3H),4.14(s,2H),3.51-3.37(m,2H),2.92-2.76(m,2H),2.11-1.98(m,2H),1.86-1.65(m,4H),1.50-1.28(m,4H),1.24-1.10(m,1H),0.77(t,J＝7.6Hz,2H)。19F NMR(D2O,400MHz)δ-57.9(s,3F)，ESI+/ESI-MS：观测值m/z 415.1(M–18+H)+,397.1(M–36+H)+,413.1(M–18-1)-。
实例104-A：制备2-氨基-2-(1-(苯并[b]噻吩-3-基甲基)哌啶-4-基)-6-二羟硼基己酸二盐酸盐
按与实例87-A中所述方式类似的方式制备2-氨基-2-(1-(苯并[b]噻吩-3-基甲基)哌啶-4-基)-6-二羟硼基己酸二盐酸盐，但在步骤6中使用苯并[b]噻吩-3-甲醛作为醛。1H NMR(D2O,400MHz)δ8.05(d,J＝7.7Hz,1H),7.95-7.92(m,2H),7.58-7.47(m,2H),4.61(s,2H),3.70-3.60(m,2H),3.21-3.08(m,2H),2.16-2.05(m,2H),1.92-1.74(m,4H),1.58-1.26(m,4H),1.23-1.10(m,1H),0.77(t,J＝7.6Hz,2H)。ESI+/ESI-MS：观测值m/z 387.1(M–18+H)+,369.1(M–36+H)+,385.1(M–18-1)-。
实例105-A：制备3-((4-(1-氨基-5-二羟硼基-1-羧基戊基)哌啶-1-基)甲基)苯甲酸二盐酸盐
按与实例87-A中所述方式类似的方式制备3-((4-(1-氨基-5-二羟硼基-1-羧基戊基)哌啶-1-基)甲基)苯甲酸二盐酸盐，但在步骤6中使用3-甲酰基苯甲酸叔丁基酯作为醛。1H NMR(D2O,400MHz)δ7.84(d,J＝8.7Hz,1H),7.79(s,1H),7.52-7.42(m,2H),4.25(s,2H),3.55-3.43(m,2H),3.05-2.89(m,2H),2.09-1.79(m,2H),1.83(s,3H),1.80-1.65(m,6H),1.49-1.35(m,1H),1.35-1.71(m,1H),1.14-0.99(m,1H),0.67(t,J＝8.3Hz,2H)。C19H29BN2O6的MS实验值m/z[375.1,(M–18+1),357.1(M–36+1)]。
实例106-A：制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(1-(3-氰基苯甲基)哌啶-4-基)己酸二盐酸盐
按与实例87-A中所述方式类似的方式制备2-氨基-6-二羟硼基-2-(1-(3-氰基苯甲基)哌啶-4-基)己酸二盐酸盐，但在步骤6中使用3-甲酰基苯甲腈作为醛。1H NMR(D2O,400MHz)δ7.82-7.76(m,2H),7.69(d,J＝7.4Hz,1H),7.56(t,J＝8.0Hz,1H),4.19(s,2H),3.49-3.36(m,2H),2.91-2.78(m,2H),2.06-1.94(m,2H),1.81(s,3H),1.80-1.62(m,4H),1.46-1.19(m,4H),1.16-1.03(m,1H),0.69(t,J＝8.29Hz,2H)。C19H28BN3O4的MS实验值m/z[356.2(M–18+1),338.2(M–36+1)]。
方法和用途
本发明的式I和式II化合物可用于抑制精氨酸酶I、精氨酸酶II或这些酶的组合的表达或活性。精氨酸酶家族的酶在调控L-精氨酸(信号传导分子一氧化氮(一氧化氮(NO))的前体)的生理水平方面以及调控L-鸟氨酸(作为重要的生理信号转导子的某些多胺的前体)的水平方面起到重要作用。
更具体说来，本发明提供用于抑制细胞中的精氨酸酶I、精氨酸酶II或其组合的方法和用途，包含使所述细胞与至少一种根据式I或式II的化合物或其组合物(如本文所述)接触。在一些实施例中，本发明提供一种用于治疗或预防个体的与精氨酸酶I、精氨酸酶II或其组合的表达或活性有关的疾病或病况的方法。
举例来说，所述疾病或病况选自由以下组成的群组：心脏病、高血压、性功能障碍、胃部病症、自体免疫病症、寄生虫感染、肺部病症、平滑肌松弛障碍和溶血病症。
更具体说来，高血压包括系统性高血压、肺动脉高压(PAH)和高原肺动脉高压。
示范性的性功能障碍是选自由佩洛尼氏病(Peyronie's Disease)和勃起功能障碍(ED)组成的群组的疾病或病况。
在一个实施例中，根据本发明的精氨酸酶抑制剂适于治疗选自由以下组成的群组的肺部病症：化学诱导的肺纤维化、特发性肺纤维化、囊性纤维化、慢性阻塞性肺病(COPD)。
根据本发明的化合物也可用于治疗胃肠病症，例如选自由以下组成的群组的疾病或病况：胃肠动力障碍、胃癌、肝血流减少病症、发炎性肠病、克罗恩氏病(Crohn'sdisease)、溃疡性结肠炎和胃溃疡。
器官输送会增加缺血再灌注(IR)损伤(例如肝IR、肾IR和心肌IR)的风险。根据本发明的式I或式II化合物可用于在器官输送期间保护器官。
在另一实施例中，使用根据本发明的精氨酸酶抑制剂来治疗选自由以下组成的群组的溶血病症：阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH)、镰状细胞病、地中海型贫血、遗传性球形红细胞增多症和口形细胞增多症、微血管病性溶血性贫血、丙酮酸激酶缺乏症、ABO血型不配输血反应、阵发性冷性血红蛋白尿症、重度特发性自体免疫性溶血性贫血、感染诱发的贫血、心肺转流、机械心脏瓣膜诱发的贫血和化学品诱发的贫血。此外，本文所述的化合物还可用于治疗疟疾。
本发明化合物可用于治疗自体免疫疾病，所述自体免疫疾病选自由以下组成的群组：脑脊髓炎、多发性硬化、抗磷脂综合症1、自体免疫性溶血性贫血、慢性发炎性脱髓鞘多发性神经病变、疱疹样皮炎、皮肌炎、重症肌无力症、天疱疮、类风湿性关节炎、僵人综合症、1型糖尿病和强直性脊柱炎。在另一实施例中，式I或II化合物可用于治疗免疫病症，所述免疫病症选自由以下组成的群组：免疫应答；T细胞功能障碍，例如髓源性抑制细胞(MDSC)介导的T细胞功能障碍；人免疫缺陷病毒(HIV)，和自体免疫性脑脊髓炎。
本文所述化合物作为候选治疗剂的其它示范性疾病病况为非洲昏睡病、查加斯氏病(Chagas'diseas)，平滑肌松弛障碍，例如选自由以下组成的群组的平滑肌的病症：胃肠平滑肌、肛门括约肌平滑肌、食管括约肌、海绵体、Oddi括约肌、动脉平滑肌、心脏平滑肌、肺平滑肌、肾平滑肌、子宫平滑肌、阴道平滑肌、子宫颈平滑肌、胎盘平滑肌和眼平滑肌病症。
在某些癌症患者体内精氨酸酶的水平增加涉及本发明的精氨酸酶抑制剂在治疗某些癌症方面的治疗作用，例如肾细胞癌、前列腺癌、结肠直肠癌、乳癌、皮肤癌、肺癌、卵巢癌、胃癌。
有利的是，本发明化合物尤其可用于治疗选自由以下组成的群组的病况或病症：关节炎、心肌梗塞和动脉粥样硬化、肾病、哮喘、炎症、牛皮癣、利什曼病、镰状细胞病(SCD)、神经退行性疾病、创伤愈合(例如感染性和非感染性创伤愈合)、B型肝炎病毒(HBV)、幽门螺杆菌感染、纤维化疾病(例如囊性纤维化)、念珠菌病、牙周病、瘢痕瘤、腺样体扁桃体疾病(adenotonsilar disease)、脑血管痉挛和古德帕斯特综合症(Goodpasture's syndrome)。
在一些实施例中，接受治疗的个体为哺乳动物。举例来说，本文所述的方法和用途适于人类的医疗应用。另外，所述方法和用途也适于兽医用环境，其中所述个体包括(但不限于)狗、猫、马、母牛、绵羊、小羊和爬行动物。
关于疾病和病况的更具体的说明见下文。
勃起功能障碍
精氨酸酶在年轻小鼠与年老小鼠的阴茎中存在活性差异的观察结果得出一个结论，即，精氨酸酶可在勃起功能障碍(ED)中起到作用。在这一情形中，查平(Champion)等人,(美国生理学杂志：心脏与循环生理学(Am.J.Physiol.Heart Circ.Physiol.)292:340-351,(2006)，和生物化学与生物物理学研究通讯(Biochem.and Biophys.ResearchCommunications),283:923-27,(2001))观察到在年老小鼠中mRNA表达水平和精氨酸酶蛋白质增加，并且观察到组成型活性NOS的活性降低。
一氧化氮涉及于非肾上腺素能、非胆碱能神经传递中，其引起海绵体中平滑肌松弛，从而能够阴茎勃起(新英格兰医学杂志(New England Journal of Medicine),326,(1992))，因此，勃起功能障碍常常可以通过提高阴茎组织一氧化氮(NO)的水平进行治疗。所述组织一氧化氮(NO)水平的提高可通过抑制年老个体的阴茎组织中的精氨酸酶活性来实现。换句话说，据推测，精氨酸酶耗尽细胞中NOS可用的游离L-精氨酸池，从而导致一氧化氮(NO)水平降低和勃起功能障碍。参见克里斯特安森(Christianson)等人,(化学研究述评,38:191-201,(2005)),和(自然结构生物学(Nature Structural Biol.),6(11):1043-1047,(1999))。因此，精氨酸酶抑制剂可在治疗勃起功能障碍方面起作用。
肺高压
已经提出，精氨酸代谢的改变涉及肺高压的发病(徐(Xu)等人,美国生物实验学学会联合会会刊(FASEB J.),18:1746-48,2004)。这一提议部分基于以下发现：精氨酸酶II的表达和精氨酸酶的活性在从I类肺高压患者的肺外植体得到的肺动脉内皮细胞中显著升高。
此外，继发性肺高压是作为引起罹患溶血性贫血(例如地中海型贫血和镰状细胞病)的患者死亡和发病的主导原因之一而出现。引起继发性肺高压的潜在原因是因溶血后精氨酸酶释放使得一氧化氮(NO)合成所需的游离精氨酸池减少而引起的一氧化氮生物利用率减弱。因此，抑制精氨酸酶活性可提供治疗肺高压的潜在治疗途径。
高血压
徐W.(Xu,W.)等人的美国生物实验学学会联合会会刊,2004,14,1746-8中提出了精氨酸酶II在血压调控方面的基本作用。在这一情形中，血管精氨酸酶水平高与高血压动物中血管一氧化氮(NO)的伴随减少相关。举例来说，在有高血压遗传倾向的大鼠(即，自发高血压的大鼠)中，精氨酸酶活性上调先于血压升高出现，但投予抗高血压剂肼酞嗪(hydralazine)降低血压，且降低血管精氨酸酶的表达水平，由此表明了精氨酸酶活性与血压之间的强相关性(博思罗特(Berthelot)等人,生命科学(Life Sciences),80:1128-34,(2008)。在自发高血压的动物中，类似地投予已知的精氨酸酶抑制剂Nω-羟基-去甲-L-精氨酸(nor-NOHA)降低血压，并且改进阻力血管对血流和压力的血管应答，由此突显出精氨酸酶抑制剂可作为治疗高血压的候选治疗剂(德莫格特(Demougeot)等人,(高血压杂志(J.Hypertension),26:1110-18,(2008)。
精氨酸酶还通过降低一氧化氮(NO)的细胞水平而在反射皮肤高血压中起作用。一氧化氮引起血管舒张，并且一氧化氮(NO)水平通常升高或降低以将血压维持在生理学可接受的水平。肯尼(Kenny)等人,(生理学杂志(J.of Physiology)581(2007)863-872)假设，高血压个体的反射性血管舒张可削弱精氨酸酶抑制，由此暗示了精氨酸酶抑制剂用于治疗高血压的作用。
哮喘
精氨酸酶活性也与哮喘中的气道高反应性相关。举例来说，在人类哮喘患者以及罹患急性和慢性哮喘的小鼠中，精氨酸酶I上调，而精氨酸酶II和NOS同功异型物的水平保持不变(斯科特(Scott)等人,美国生理学杂志：肺细胞和分子生理学(Am.J.Physiol.LungCell Mol.Physiol.)296:911-920(2009))。此外，在投予精氨酸酶抑制剂S-(2-二羟硼基乙基)-L-半胱氨酸后，鼠类慢性模型中由醋甲胆碱(methacholine)诱导的中央气道反应性削弱。患有慢性哮喘的人类与小鼠中ARG I的表达型态之间的类似性表明，能够抑制精氨酸酶活性的化合物是治疗哮喘的候选治疗剂。
其它多条证据进一步揭露了哮喘患者肺组织中精氨酸酶活性增加与疾病发展之间的相关性，例如与阳离子型氨基酸代谢有关的基因上调，包括患有哮喘的小鼠中的精氨酸酶I和II(罗森博格(Rothenberg)等人,(临床研究杂志(J.Clin.Invest.),111:1863-74(2003),和米尔斯(Meurs)等人,(研究药物专家评论(Expert Opin.Investig Drugs),14(10:12211231,(2005))。
此外，在哮喘患者的血浆中所有氨基酸的水平都降低，但与正常个体相比较，血浆中精氨酸水平显著较低(莫里斯(Morris)等人,(美国呼吸与重症监护医学杂志(Am.J.Respir.Crit Care Med.),170:148-154,(2004))。因此，在来自哮喘患者的血浆中精氨酸酶活性显著增加，其中精氨酸酶活性水平升高可有助于降低血浆精氨酸的生物利用率，从而引起一氧化氮(NO)缺乏，而NO缺乏负责促进哮喘患者的气道高反应性。
炎症
精氨酸酶活性也与自体免疫性炎症相关(陈(Chen)等人,免疫学(Immunology),110:141-148,(2003)。作者鉴别出在来自经历实验性自体免疫性脑脊髓炎(EAE)的动物的鼠类脊髓细胞中ARG I基因的表达水平上调。然而，投予精氨酸酶抑制剂氨基-6-二羟硼基己酸(ABH)导致动物发生比对照动物轻得多的EAE形式。这些结果暗示了精氨酸酶抑制剂用于治疗自体免疫性脑脊髓炎的治疗作用。
此外，霍洛维兹(Horowitz)等人,(美国生理学杂志：胃肠与肝脏生理学(AmericanJ.Physiol Gastrointestinal Liver Physiol.),292:G1323-36,(2007))提出精氨酸酶在血管病理生理学中的作用。举例来说，这些作者指出在罹患肠易激疾病(IBD)、克罗恩氏病和溃疡性结肠炎的患者的慢性发炎的肠血管中一氧化氮(NO)的产生丧失。一氧化氮(NO)产生的丧失与精氨酸酶表达和活性上调相关，精氨酸酶表达和活性上调使精氨酸水平降低，阻止一氧化氮合成酶(NOS)合成一氧化氮(NO)。因此，精氨酸酶活性抑制剂可为治疗血管病理生理学的候选治疗剂。
缺血再灌注
也提出精氨酸酶抑制在缺血再灌注期间起到心脏保护作用。更具体说来，抑制精氨酸酶通过一个可能取决于NOS活性和随之发生的一氧化氮(NO)生物利用率的机制来防止心肌梗塞(佩恩奥(Pernow)等人,(心血管研究(Cardiovascular Research),85:147-154(2010)。
心肌梗塞和动脉粥样硬化
精氨酸酶I多态性与心肌梗塞以及发生颈总动脉内膜中层厚度的增加风险相关，所述颈总动脉内膜中层厚度被认为是动脉粥样硬化以及其它冠状动脉疾病的可靠指示剂(布鲁西奥(Brousseau)等人,(医学遗传学杂志(J.Med Genetics),44:526-531,(2007))。精氨酸酶活性增加使鸟氨酸水平升高，而鸟氨酸水平在生物化学上涉及促进动脉粥样硬化斑块的基质和细胞组分的形成。同上。因此，精氨酸酶抑制剂可用作治疗动脉粥样硬化的候选治疗剂。博克沃兹(Berkowitz)等人,(循环研究(Circulation Res.)102,(2008))暗示了ARGII在斑块和动脉粥样硬化形成中所起的作用。LDLP的氧化伴随斑块形成将在内皮细胞中增加精氨酸酶活性并降低一氧化氮(NO)水平。具体说来，在动脉粥样硬化小鼠中ARGII水平升高，表明精氨酸酶抑制剂作为治疗动脉粥样硬化的候选治疗剂的作用。
此外，明(Ming)等人,(高血压症最新报告(Current Hypertension Reports.),54:54-59,(2006))所作的研究指出，精氨酸酶上调而非内皮一氧化氮(NO)功能障碍在包括动脉粥样硬化在内的心血管病症中起到重要作用。精氨酸酶涉及于心血管疾病中进一步得到了以下观察结果的支持：ARGI和ARGII活性在心肌细胞中上调，而此活性上调又不利地影响NOS活性和心肌收缩性。(参见玛古雷斯(Margulies)等人,美国生理学杂志：心脏与循环生理学,290:1756-62,(2006))。
免疫应答
精氨酸/一氧化氮(NO)路径也可在免疫应答(例如在器官移植后)中起到作用。举例来说，据推测，原位肝移植的移植物的再灌注因移植物中精氨酸酶活性上调而引起鸟氨酸水平的显著增加(蒂斯卡斯(Tsikas)等人,(一氧化氮(Nitric oxide),20:61-67,(2009))。移植物中水解酶和蛋白水解酶的水平升高可为移植的器官带来不太有利的后果。因此，抑制精氨酸酶可为改进移植成果的替代性治疗途径。
牛皮癣
精氨酸酶已涉及在牛皮癣的发病中起到作用。举例来说，ARG I在过度增殖性牛皮癣中高度表达，并且事实上，如D.布鲁奇-捷哈兹(D.Bruch-Gerharz)等人,美国病理学杂志(American Journal of Pathology)162(1)(2003)203-211所推测，其通过竞争共用底物L-精氨酸而引起一氧化氮(NO)(一种细胞增殖抑制剂)下调。近来阿比亚克斯(Abeyakirthi)等人,(英国皮肤病学杂志(British J.Dermatology),(2010)),和博克沃兹等人,(WO/2007/005620)所作的研究支持了在牛皮癣性角质细胞中一氧化氮(NO)水平较低的发现。阿比亚克斯等人发现，牛皮癣性角质细胞分化不良并具有过度增殖性。据推测，分化不良是由一氧化氮(NO)水平低所致，不是因为NOS表达不良，而是因为与NOS竞争底物L-精氨酸的精氨酸酶过度表达。因此，抑制精氨酸酶可提供对牛皮癣的治疗性缓解作用。
创伤愈合
在正常生理条件下，一氧化氮(NO)在促进创伤愈合方面起到重要作用。举例来说，胡斯特(Hulst)等人,(一氧化氮,21:175-183,(2009))研究了ARGI和ARG II在创伤愈合方面的作用。损伤后，需要立即提高组织的一氧化氮(NO)水平，以促进血管生成和细胞增殖，这对于愈合相当重要。因此，精氨酸酶抑制剂可用作治疗剂来治疗创伤，因为这些化合物将提高组织的一氧化氮(NO)水平。索斯(South)等人(实验皮肤病学(ExperimentalDermatology),29:664-668(2004))提供了对于使用精氨酸酶抑制剂作为治疗创伤的候选治疗剂进一步支持，其发现在例如皮肤糜烂和起水泡等慢性创伤中精氨酸酶I增加5倍。
囊性纤维化
囊性纤维化(CF)是由囊性纤维化跨膜转运调控子(CFTR)基因突变引起的多系统病症。CF的常见症状是持久的肺部感染、呼吸困难、胰腺机能不全和汗液氯化物水平升高。如果不加治疗，那么由于粘液积累和粘膜纤毛清除率降低而伴随发生肺病(此为发病和死亡的主导原因)，CF可致命。
已经表明，囊性纤维化(CF)患者的血浆和唾液精氨酸酶活性增加，同时伴随血浆l-精氨酸水平的降低(H.格拉斯曼(H.Grasemann)等人,美国呼吸道与危重症监护医学杂志(Am.J.Respir.Crit.Care Med.)172(12)(2005)1523-1528。然而，在罹患囊性纤维化(CF)的患者中精氨酸酶活性增加导致一氧化氮(NO)的生理水平降低，此可引起气道阻塞，降低肺功能。
如M.马安纳(M.Mhanna)等人,美国呼吸系统细胞和分子生物学杂志(Am.J.Respir.Cell Mol.Biol.)24(5)(200)1621-626所提出的，在小鼠CF模型的气道中电场诱导的平滑肌松弛刺激削弱以及投予l-精氨酸和NO使这一效应逆转。格拉斯曼等人发现，肺功能与呼出的NO和CF患者唾液中的NO代谢物浓度之间存在正相关性(格拉斯曼H；米希尔E(Michler,E)；沃洛特M(Wallot,M)；雷特杰F.(Ratjen,F.),儿科肺学(PediatrPulmonol.)1997,24,173-7)。
总起来说，这些结果表明，CF中精氨酸酶活性增加通过限制NOS对l-精氨酸的利用而引起NO缺乏和肺阻塞。因此，精氨酸酶活性的抑制剂是治疗囊性纤维化(CF)的候选治疗剂。
器官保护
根据本发明的化合物的另一治疗途径是在器官从供体输送到其将移植入接受者体内的部位期间保护器官。在进行移植手术的患者中，常常因移植器官暴露一段热缺血(从供体直到用保存介质冲洗的时间)和冷缺血(低温保存)时间而观察到缺血再灌注损伤(IR)。缺血再灌注损伤(IR)和伴随发生的原发性移植物功能失常和/或急性或慢性排斥都归因于L-精氨酸/NO路径中细胞活性改变。
已提出，精氨酸酶1和精氨酸酶2是在从体内移出器官的头24小时内由凋亡的内皮细胞和肾细胞释放。为了中和释放的精氨酸酶，将L-精氨酸添加到保存介质中。利用狗肾移植物得到的结果表明，添加L-精氨酸减少缺血的发生率和严重程度，在移植后1小时引起MDA水平降低，并且在头72小时期间引起BUN和血清肌酸酐水平降低。参见艾克萨普S(Erkasap,S)；艾特斯E.(Ates,E.),肾脏病与透析肾移植(Nephrol Dial Transplant.)2000,15,1224-7。
当在补充有L-精氨酸的威斯康星大学(University of Wisconsin)溶液中保存肺时，在24小时的时间段内对于狗肺移植物观察到类似结果。颜(Yen)等人观察到，当与在不含L-精氨酸的介质中保存的对照物相比较时，将L-精氨酸添加到保存介质中增加肺内皮保护作用并降低缺血的发生率(楚Y(Chu,Y)；吴Y.C.(Wu,Y.C.)；周Y.C.(Chou,Y.C.)；阙H.Y(Chueh,H.Y),刘HP(Liu HP),楚JJ(Chu JJ),林PJ.(Lin PJ.),心肺移植杂志(J HeartLung Transplant.)2004,23,592-8)。
克奇(Koch)等人提出，当将心脏保存于具有L-精氨酸和N-α-乙酰基-组氨酸的HTK溶液中时，改进移植后大鼠心肌的心肌收缩性和松弛(克奇A,罗多维特T(Radovits T),罗格纳罕S(Loganathan S),萨克FU(Sack FU),卡克M(Karck M),泽博GB.(SzabóGB.),移植学会会报(Transplant Proc.)2009,41,2592-4)。
因此，添加精氨酸酶抑制剂可作为候选治疗，通过协同增加保存介质的器官保护作用来防止和/或降低缺血再灌注损伤的发生率和风险。已知少数可用器官适于移植并且器官因缺血的发生而损失和损伤，故根据本发明的精氨酸酶抑制剂可用作治疗剂，通过降低器官输送期间缺血再灌注损伤的量来保存器官，增加器官的利用率。
利什曼病
利什曼病是由原生动物引起，并且表现为皮肤型利什曼病(即，引起色素减退斑的皮肤感染)和内脏型利什曼病(更严重地影响内部器官)。据推测，由于寄生虫依赖于精氨酸酶来合成细胞聚胺(其对于发病至关重要)，故精氨酸酶在疾病发展中起到作用。因此，抑制精氨酸酶将降低细胞寄生虫负担并促进一氧化氮(NO)水平增加，增大寄生虫清除率。参见莱芜(Liew FY)等人,欧洲免疫学杂志(Eur J Immunol)21(1991)2489,因尼斯塔V(IniestaV)等人,寄生虫免疫学(Parasite Immunol.)24(2002)113–118,和凯恩MM(Kane MM)等人,免疫学杂志(J.Immunol.)166(2001)1141-1147。因此，根据式I或式II的化合物可用作治疗利什曼病的治疗剂。
髓源性抑制细胞(MDSC)
MDSC是一种有效的免疫调节剂，其通过数种路径限制免疫应答，例如经由精氨酸酶1耗尽释放到微环境中的L-精氨酸(罗德谷兹(Rodriguez)2009,癌症研究(CancerRes))、MHC限制性抑制(龙S(Nagaraj S),古帕塔K(Gupta K),皮萨雷V(Pisarev V),肯纳斯基L(Kinarsky L),夏尔曼S(Sherman S),康L(Kang L),赫伯DL(Herber DL),斯奇奈克J(Schneck J),加拨洛维奇DI.(Gabrilovich DI.),自然—医学(Nat Med.)2007,13,828-35)、诱导T调控细胞(瑟拉菲尼P(Serafini P),玛格布鲁夫S(Mgebroff S),诺楠K(NoonanK),伯雷洛I.(Borrello I.),癌症研究(Cancer Res.)2008,68,5439-49)和产生IL10(罗德格JC(Rodrigues JC),冈萨雷斯GC(Gonzalez GC),张L(Zhang L),艾布莱姆G(Ibrahim G),凯利JJ(Kelly JJ),古斯塔松MP(Gustafson MP),林Y(Lin Y),代特兹AB(Dietz AB),福赛斯PA(Forsyth PA),杨VW(Yong VW),帕尼IF.(Parney IF.),神经肿瘤学(Neuro Oncol.)2010,12,351-65)(辛哈P(Sinha P),克莱蒙特VK(Clements VK),班特SK(Bunt SK),奥贝达SM(Albelda SM),奥斯安德-罗森博格S.(Ostrand-Rosenberg S.),免疫学杂志(JImmunol.)2007,179,977-83)。
据推测，肿瘤的发生伴随周围以及肿瘤内浸润的MDSC数量的增加。参见奥曼德B(Almand B),克拉克JI(Clark JI),尼奇蒂娜E(Nikitina E),范贝伦J(van Beynen J),英格丽西NR(English NR),奈特SC(Knight SC),卡波恩DP(Carbone DP),盖布洛维奇DI.(Gabrilovich DI.),免疫学杂志(J Immunol.)2001,166,678-89，和盖布洛维奇D.,自然综述：免疫学(Nat Rev Immunol.)2004,4,941-52。用例如吉西他滨(gemcitabine)和5-氟尿嘧啶等确定的化学治疗剂治疗带有肿瘤的小鼠可消除MDSC的免疫抑制并延缓肿瘤生长。分别参见李HK(Le HK),格拉汗L(Graham L),查E(Cha E),莫拉雷斯JK(Morales JK),曼吉利MH(Manjili MH),贝尔HD.(Bear HD.),国际免疫药理学(Int Immunopharmacol.)2009,9,900-9，和维森特J(Vincent J),米格诺特G(Mignot G),查理民F(Chalmin F),拉多埃S(Ladoire S),布鲁查德M(Bruchard M),彻维奥斯A(Chevriaux A),马丁F(Martin F),阿普托L(Apetoh L),雷波C(RébéC),格林海利F.(Ghiringhelli F.),癌症研究,2010,70,3052-61。此外，抑制精氨酸酶1通过降低MDSC功能来增强抗肿瘤免疫性。因此，精氨酸酶抑制剂，例如根据本发明的化合物减少或延缓肿瘤生长，并且可与确定的抗癌剂组合使用以治疗癌症。
幽门螺杆菌(H.pylori)
幽门螺杆菌(H.pylori)是一种定殖于人类胃黏膜的革兰氏阴性细菌(Gram-negative bacterium)。细菌定殖可导致急性或慢性胃炎，并且与消化性溃疡疾病和胃癌高度相关。添加L-精氨酸来共培养幽门螺杆菌和巨噬细胞使一氧化氮(NO)介导的幽门螺杆菌杀灭增加的观察结果(查特维迪R(Chaturvedi R),艾斯姆M(Asim M),里维斯ND(LewisND),奥古德HM(Algood HM),科威尔TL(Cover TL),金PY(Kim PY),韦尔森KT.(WilsonKT.),感染与免疫(Infect Immun.)2007,75,4305-15)支持了以下假说：细菌精氨酸酶与巨噬细胞精氨酸酶竞争游离精氨酸，而游离精氨酸是一氧化氮(NO)合成所需的。参见古波特AP(Gobert AP),麦克吉DJ(McGee DJ),艾克塔M(Akhtar M),门德兹GL(Mendz GL),牛顿JC(Newton JC),程Y(Cheng Y),莫布雷HL(Mobley HL),韦尔森KT.(Wilson KT.),美国国家科学院院刊(Proc Natl Acad Sci U S A.)2001,98,13844-9。L-精氨酸是T细胞活化以及受感染细胞中细菌的迅速清除所需的。通过耗尽体内的游离L-精氨酸池，幽门螺杆菌降低T细胞上精氨酸诱导的CD3ζ表达，并防止T细胞活化和增殖。参见扎伯勒塔J(Zabaleta J),麦克吉DJ(McGee DJ),泽阿AH(Zea AH),赫恩德兹CP(Hernández CP),罗德谷兹PC(RodriguezPC),夏尔拉RA(Sierra RA),克瑞拉P(Correa P),奥乔亚AC.(Ochoa AC.),免疫学杂志(JImmunol.)2004,173,586-93。
然而，使用已知的抑制剂NOHA抑制细菌精氨酸酶重新建立T细胞和上的CD3表达(扎伯勒塔J 2004)，并增进巨噬细胞的NO产生，由此促进巨噬细胞介导的细菌从受感染细胞清除。参见查特维迪R,艾斯姆M,里维斯ND,奥古德HM,卡文TL(Cover TL),金PY,韦尔森KT.,感染与免疫,2007,75,4305-15。
此外，里维斯等人已提出精氨酸酶II在幽门螺杆菌感染中的作用。举例来说，这些作者指出，argII-/-原代巨噬细胞与幽门螺杆菌提取物一起培育显示出增强的NO产生，以及相应地NO介导的细菌细胞杀灭作用增加(约15％)(里维斯ND,艾斯姆M,巴利DP(BarryDP),辛格K(Singh K),德萨博雷特T(de Sablet T),鲍彻JL(Boucher JL),古波特AP,查特维迪R,韦尔森KT.,免疫学杂志(J Immunol.)2010,184,2572-82)。因此，精氨酸酶活性抑制剂可为治疗血管病理生理学的候选治疗剂。因此，精氨酸酶活性抑制剂可作为治疗幽门螺杆菌感染以及治疗胃溃疡、消化性溃疡和癌症的候选治疗剂。
镰状细胞病(SCD)
镰状细胞病(SCD)或镰状细胞贫血或镰形细胞病(drepanocytosis)是一种遗传性血液病症，以红细胞呈现异常、刚性、镰刀形状为特征。镰状化降低细胞的柔性，并增加并发症的风险。循环中活性氧物质(ROS)的浓度增加引起血液细胞粘附和NO消耗，从而引起不良血管舒张或血管不能进行血管舒张。SCD中不能进行血管舒张以及血液细胞粘附增加引起血管阻塞性危象和疼痛。
在SCD患者中通常检测到低水平的血浆L-精氨酸(莫里斯CR,卡托GJ(Kato GJ),普加科维克M(Poljakovic M),王X(Wang X),布莱克韦德WC(Blackwelder WC),萨奇德维V(Sachdev V),哈泽SL(Hazen SL),维奇斯基EP(Vichinsky EP),莫里斯SM Jr,格拉德维MT(Gladwin MT.),JAMA.2005,294,81-90)根据这些作者，罹患SCD的患者中红细胞(RBC)溶解引起精氨酸酶释放，且随后发生生理L-精氨酸水平降低。这一系列生物事件降低了一氧化氮(NO)(在血管舒张中起作用的信号传导分子)的生理浓度。其它生物事件也限制NO的生物利用率。这些生物事件包括例如一氧化氮合成酶(NOS)的解偶合，和随后的生理NO水平降低，以及超氧化物(O-2)活性氧物质与NO反应以ONOO-形式螯合NO。
根据这些观察结果，本发明人提出精氨酸酶抑制剂，尤其精氨酸酶I抑制剂作为镰状细胞病患者的候选治疗剂。如上文所述，SCD因L-精氨酸的生理水平低而引起eNOS解偶合。然而，抑制血液循环中存在的精氨酸酶可通过增加L-精氨酸(内皮一氧化氮合成酶(eNOS)的底物)的生理水平来解决这一问题。重要的是，本发明人提出这一系列事件可增强内皮功能并缓解与SCD相关的血管收缩。
人免疫缺陷病毒(HIV)
HIV是由感染CD4+辅助T细胞的病毒引起，并且引起重度淋巴细胞减少，使受感染的个体易于发生机会性感染。尽管广泛使用抗反转录病毒疗法(ART)来抵抗HIV感染，但抗反转录病毒药物的广泛使用已导致产生HIV抗性株。
罹患HIV的患者中的精氨酸酶活性与HIV疾病的严重程度之间存在相关性。精氨酸酶活性增加已与HIV患者中病毒滴度增加相关。这些患者还显示出血清精氨酸水平降低以及CD4+/CD8+细胞水平降低。
总起来说，这些观察结果表明了精氨酸酶抑制剂(例如根据式I或II的化合物)作为治疗HIV感染的候选治疗剂的作用。
慢性B型肝炎病毒(HBV)
慢性B型肝炎感染是通过与受感染体液接触来传播的病毒性疾病。慢性HBV感染以肝脏炎症和黄疸为特征，并且如果不加治疗，就可引起肝硬化，而肝硬化可发展形成肝细胞癌。然而，当前使用的抗病毒药物对于慢性HBV感染具有较低功效。慢性HBV感染患者的血清和肝匀浆显示出降低水平的精氨酸以及增加的精氨酸酶活性。此外，对于受感染患者来说，精氨酸酶活性增加与细胞毒性T淋巴细胞(CTL)应答削弱以及IL-2产生和CD3z表达减少相关。
然而，补充血清精氨酸达到生理学上可接受的水平使CD3z和IL-2的表达恢复，表明了精氨酸酶抑制剂作为治疗慢性HBV感染的潜在治疗剂的作用。
投药途径和给药方案
尽管大量证据证明精氨酸酶抑制与各种疾病和病况的疗法相关，但仅仅已知有限数量的化合物能够抑制精氨酸酶活性。因此，本发明提供可用于治疗罹患如上文大体上陈述的疾病或病况的个体的化合物和其医药组合物。
本发明化合物或组合物可如上文所述进行调配，并且适于按许多方式以治疗有效量投予个体。式I或式II化合物的治疗有效量可取决于所用赋形剂的量和类型、剂型中活性成分的量和具体类型以及将化合物投予患者的途径。然而，本发明的典型剂型包含化合物，或其医药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、异构体或前药。
式I或式II化合物的典型剂量水平一般在每天每公斤患者的体重约0.001到约100mg范围内，可以单次剂量或多次剂量投予。示范性剂量为每天约0.01到约25mg/kg，或每天约0.05到约10mg/kg。在其它实施例中，剂量水平为每天约0.01到约25mg/kg、每天约0.05到约10mg/kg或每天约0.1到约5mg/kg。
剂量范围通常为每天约0.1mg到约2000mg，按每天一次单次剂量或者在一天内以分次剂量给与，任选与食物同用。在一个实施例中，一天两次按相同的分次剂量投予日剂量。日剂量范围可为每天约5mg到约500mg，例如介于每天约10mg与约300mg之间。在管理患者时，疗法可以较低剂量(可能约1mg到约25mg)起始，并且必要时，取决于患者的整体反应，增加达到按单次剂量或分次剂量每天约200mg到约2000mg。
取决于待治疗的疾病和个体的状况，根据式I或式II的化合物可通过经口、不经肠(例如肌肉内、腹膜内、静脉内、ICV、脑池内注射或输注、皮下注射或植入)、吸入、鼻、阴道、直肠、舌下或表面(例如透皮、局部)投药途径投予。这些化合物可单独或一起调配成适合的剂量单位调配物，其含有适于每一投药途径的常规无毒医药学上可接受的载剂、佐剂和媒剂，如上文所述。本发明也涵盖以储集型调配物形式投予本发明化合物，其中活性成分经指定时间段释放。
精氨酸酶的抑制
如由公开方案(巴吉奥(Baggio)等人,药理学与实验治疗学杂志(J.Pharmacol.Exp.Ther.)1999,290,1409-1416)所述的离体分析所证实，本发明化合物抑制人类精氨酸酶I(ARG I)和精氨酸酶II(ARG II)。所述分析确定了使精氨酸酶活性降低50％所需的抑制剂浓度(IC50)。
分析方案
在530nm下通过分光光度法跟踪式I和式II化合物对精氨酸酶I(ARG I)和精氨酸酶II(ARG II)的抑制。在比色皿中，将待测试的化合物溶解于DMSO中，初始浓度是其最终浓度的50倍。在90μl分析缓冲液中对10μl储备液进行稀释，所述分析缓冲液包含0.1M磷酸钠缓冲液，其含有130mM NaCl(pH 7.4)，其中添加有浓度为1mg/ml的卵清蛋白(OVA)。在含有1mg/ml OVA的100mM磷酸钠缓冲液(pH 7.4)中制备精氨酸酶I和II的溶液，得到最终浓度为100ng/ml的精氨酸酶储备液。
向96孔微量滴定盘的每一孔中添加40μl酶、10μl本发明化合物和10μl酶底物(L-精氨酸+硫酸锰)。对于用作正对照的孔，仅仅添加酶和其底物，而用作负对照的孔则仅含硫酸锰。
在37℃下培育微量滴定盘60分钟之后，将通过组合等比例(1:1)的试剂A和B所得到的150μl尿素试剂添加到微量滴定盘每一孔中，以停止反应。尿素试剂是在即将使用前，通过将试剂A(含10mM邻苯二甲醛和0.4％聚氧乙烯(23)月桂基醚(w/v)的1.8M硫酸)与试剂B(含1.3mM二磷酸伯氨喹、0.4％聚氧乙烯(23)月桂基醚(w/v)、130mM硼酸的3.6M硫酸)组合来制备。淬灭反应混合物之后，再使微量滴定盘在室温下静置10分钟以显色。通过测量在530nm下反应混合物的光学密度(OD)并将OD值相对于在对照物中观察到的抑制百分比正规化，来计算精氨酸酶的抑制。随后使用经正规化的OD，通过用经正规化的OD值针对log[浓度]作图并使用回归分析计算IC50值来产生剂量-反应曲线。
下表2依据从1到5的量表对式I化合物的效力分等，也就是说，最有效的化合物指定为1，并且效力最低的化合物指定为5。表2-A中说明针对式II化合物的类似效力分析。因此，效力值1是指IC50值在0.1nM到250nM范围内的本发明化合物；效力值2是指IC50值在251nM到1000nM范围内的本发明化合物；效力值为3的化合物展现在1001nM到2000nM范围内的IC50值；IC50值在2001nM到5000nM范围内的本发明化合物被赋值为效力值4，并且IC50值高于5001nM的化合物被赋值为效力值5。
表2
a效力顺序(最高–最低)：1＝0.1nM→250nM；2＝251nM→1000nM；3＝1001nM→2000nM；4＝2001nM→5000nM；且5＝5001nM→更高。
下表2-A将示范性式II化合物对精氨酸酶I(ARG I)和精氨酸酶II(ARG II)的抑制效力分等。
表2-A
a效力顺序：1＝0.1nM-250nM；2＝251nM-1000nM；3＝1001nM-2000nM；4＝2001nM-5000nM；且5＝5001nM或更高。
功效模型
如上文所述，根据本发明的化合物可用于治疗和预防受部分通过精氨酸酶调控的一氧化氮(NO)水平影响的多种病症和病况。通过这些化合物在标准化体内测试中的性能来评估其在所述治疗和预防中的功效。为此，开发出如下文所述的用于此目的的体内模型来评估功效。
勃起功能障碍(ED)
如根据维嘉德C(Wingard C),富顿J(Fulton J)和胡塞恩S(Husain S),性医学杂志(J Sex Med)4:348–363,2007所述的方案，通过测量阴茎勃起反应所评估，本发明化合物是治疗ED的候选治疗剂。下表3提供了勃起反应：
表3
*在2.5V刺激下反应相对于基线增加；
本实例证实，实例13可有效在体内引起勃起反应，而实例13的对映异构体则不能。
前述实例打算说明本发明某些实施例，而本发明完全由上文的权利要求书界定。此外，本文引用的所有出版物都以引用的方式并入，如同在本文中完整陈述一般。

Claims (22)

1.一种根据式II的化合物，
其中
R6为ORa；
Ra为氢；
R7为H；
X选自由(C4-C6)亚环烷基和(C4-C7)亚杂环烷基组成的群组，
Y选自由以下组成的群组：H、(C1-C14)烷基、-NR'R"、(C3-C14)环烷基、(C3-C14)芳基、(C3-C14)芳基-(C1-C6)亚烷基、(C3-C14)杂环烷基、(C3-C14)杂芳基和(C3-C14)杂芳基-(C1-C6)亚烷基；
M选自由以下组成的群组：键结、(C1-C6)亚烷基-、-C(O)NH-、-C(O)-、-C(S)NH-、-S(O)2-和-NR'-；
R8和R9独立地选自氢和C(O)-R'；
D为–CH2CH2CH2CH2–；
R'和R"独立地选自由以下组成的群组：H和(C1-C8)烷基；且
其中任何芳基或杂芳基任选经一个或一个以上选自由以下组成的群组的成员取代：卤素、-COOH、-CN、-NO2、(C1-C6)烷基、(C1-C6)卤烷基、(C1-C6)卤烷氧基、(C1-C6)烷氧基、(C3-C14)芳基、(C3-C14)杂芳基、(C3-C14)杂环烷基、(C3-C14)杂芳基-(C1-C6)亚烷基和(C3-C14)芳氧基；
或其医药学上可接受的盐。
2.根据权利要求1所述的化合物，其中
X为(C4-C6)亚环烷基，且
M选自由以下组成的群组：键结、-(C1-C6)亚烷基-、-C(O)NH-、-C(S)NH-、-S(O)2-和-NR'-；并且
Y为-NR'R"。
3.根据权利要求1所述的化合物，其中
X为(C4-C7)亚杂环烷基；
M选自由以下组成的群组：键结、-(C1-C6)亚烷基-、-C(O)NH-、-C(S)NH-、-S(O)2-和-NR'-，且
Y选自由以下组成的群组：(C3-C14)环烷基、(C3-C14)芳基、(C3-C14)芳基-(C1-C6)亚烷基、(C3-C14)杂芳基和(C3-C14)杂芳基-(C1-C6)亚烷基。
4.一种化合物，其选自下表：
或其医药学上可接受的盐。
5.根据权利要求4所述的化合物，其选自由以下组成的群组：
或其医药学上可接受的盐。
6.一种医药组合物，其包含至少一种根据权利要求1到5中任一权利要求所述的化合物或其医药学上可接受的盐；和医药学上可接受的载剂。
7.一种根据权利要求1到5中任一权利要求所述的化合物或其医药学上可接受的盐的用途，其用于制造供治疗或预防与精氨酸酶I、精氨酸酶II或其组合的表达或活性有关的疾病或病况的药物。
8.根据权利要求7所述的用途，其中所述疾病或病况选自由以下组成的群组：心血管病症、胃肠病症、自体免疫病症、免疫病症、感染、肺部病症和溶血病症。
9.根据权利要求8所述的用途，其中所述疾病或病况是心血管病症，其选自由以下组成的群组：系统性高血压、肺动脉高压PAH、高原肺动脉高压、缺血再灌注IR损伤、心肌梗塞、动脉粥样硬化、佩洛尼氏病(Peyronie's Disease)、勃起功能障碍、肝血流减少病症和脑血管痉挛。
10.根据权利要求8所述的用途，其中所述疾病或病况是肺部病症。
11.根据权利要求9所述的用途，其中所述疾病或病况是肺动脉高压。
12.根据权利要求9所述的用途，其中所述疾病或病况是勃起功能障碍。
13.根据权利要求10所述的用途，其中所述疾病或病况选自由化学诱导的肺纤维化、特发性肺纤维化、囊性纤维化、慢性阻塞性肺病COPD和哮喘组成的群组。
14.根据权利要求8所述的用途，其中所述疾病或病况是自体免疫病症，其选自由以下组成的群组：脑脊髓炎、多发性硬化、抗磷脂综合症1、自体免疫性溶血性贫血、慢性发炎性脱髓鞘多发性神经病变、疱疹样皮炎、皮肌炎、重症肌无力症、天疱疮、类风湿性关节炎、僵人综合症、1型糖尿病、强直性脊柱炎、阵发性睡眠性血红蛋白尿症PNH、阵发性冷性血红蛋白尿症、重度特发性自体免疫性溶血性贫血和古德帕斯特综合症(Goodpasture'ssyndrome)。
15.根据权利要求8所述的用途，其中所述疾病或病况是免疫病症，其选自由以下组成的群组：髓源性抑制细胞MDSC介导的T细胞功能障碍、人免疫缺陷病毒HIV、自体免疫性脑脊髓炎和ABO血型不配输血反应。
16.根据权利要求8所述的用途，其中所述疾病或病况是溶血病症，其选自由以下组成的群组：镰状细胞病、地中海型贫血、遗传性球形红细胞增多症、口形细胞增多症、微血管病性溶血性贫血、丙酮酸激酶缺乏症、感染诱发的贫血、心肺转流以及机械心脏瓣膜诱发的贫血和化学品诱发的贫血。
17.根据权利要求8所述的用途，其中所述疾病或病况是胃肠病症，其选自由以下组成的群组：胃肠动力障碍、胃癌、发炎性肠病、克罗恩氏病、溃疡性结肠炎和胃溃疡。
18.根据权利要求8所述的用途，其中所述疾病或病况选自由以下组成的群组：肾病、炎症、牛皮癣、利什曼病(leishmaniasis)、神经退行性疾病、创伤愈合、B型肝炎病毒HBV、幽门螺杆菌(H.pylori)感染、纤维化疾病、关节炎、念珠菌病、牙周病、瘢痕瘤、腺样体扁桃体疾病、非洲昏睡病和查加斯氏病(Chagas'disease)。
19.根据权利要求8所述的用途，其中所述疾病或病况选自由感染性和非感染性创伤愈合组成的群组。
20.根据权利要求1到5中任一权利要求所述的化合物或其医药学上可接受的盐，其用于治疗或预防个体的与精氨酸酶I、精氨酸酶II或其组合的表达或活性有关的疾病或病况。
21.根据权利要求7所述的用途，其中所述疾病或病况为癌症。
22.根据权利要求21所述的用途，其中所述癌症为肾细胞癌、前列腺癌、结肠直肠癌、乳癌、皮肤癌、肺癌、卵巢癌或胃癌。
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