CN104849456A - 一种检测脂蛋白磷脂酶a2浓度的试剂盒及其制备方法 - Google Patents

一种检测脂蛋白磷脂酶a2浓度的试剂盒及其制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明属于体外免疫检测技术领域，具体涉及一种检测脂蛋白磷脂酶A2浓度的试剂盒及其制备方法。所述试剂盒包括包被有抗脂蛋白磷脂酶A2特异性抗体的平台载体、脂蛋白磷脂酶A2浓度梯度的标准品、脂蛋白磷脂酶A2质控品、辣根过氧化物酶标记的抗脂蛋白磷脂酶A2抗体、样本缓冲液、底物A、底物B、终止液、洗液。本发明由于所用的检测仪器较为简单，均为实验室通常所用仪器，故检测成本较低，利于推广；并且该试剂盒操作简单，一般的实验室技术人员即可实现；同时试剂盒内采用高特异性、高亲和力的抗脂蛋白磷脂酶A2特异性抗体、添加独特蛋白稳定剂的标准品稀释液和样本缓冲液配方，大大提高了检测结果的可靠性和准确性，以及试剂盒的稳定性。

Description

一种检测脂蛋白磷脂酶A2浓度的试剂盒及其制备方法
技术领域
本发明属于体外免疫检测技术领域，具体涉及一种检测样本中脂蛋白磷脂酶A2(Lp-PLA2)浓度的试剂盒及其制备方法。
背景技术
Lp-PLA2属于磷脂酶A2超家族，是由441个氨基酸残基组成的一种丝氨酸脂酶，相对分子量为45kD。与磷脂酶A2家族其余成员不同的是，Lp-PLA2不需要钙离子维持其催化活性，其具有降解血小板活化因子的活性，因此也被称为血小板活化因子乙酰水解酶(platelet-activatingfactor acetylhydrolase，PAF-AH)。血液中Lp-PLA2主要由成熟的巨噬细胞和淋巴细胞合成和分泌，在动脉粥样硬化部位大量存在,并可被炎症介质调节。具有活性的Lp-PLA2能优先水解氧化磷脂sn-2位上短脂酰链中的酯键而生成两种强促炎性介质——氧化游离脂肪酸和溶血卵磷脂。这两种炎性介质可作为单核细胞趋化因子，诱导单核细胞的活化，在动脉粥样硬化的发生、发展中具有一定的作用。大量流行病学研究显示Lp-PLA2是一种可以预测与冠脉事件有关的动脉粥样硬化和脑中风危险的酶，其作为一种独立的炎性因子，具有促进动脉粥样硬化的作用。美国心脏病协会和国家胆固醇教育计划提出，Lp-PLA2可以作为目前冠心病最好的预测因子，在未来的临床决策中可能成为一个独立的检测指标。因此检测人体Lp-PLA2的浓度对于判断动脉粥样硬化炎症水平具有十分重要的参考价值，临床上可用于心脑血管炎症疾病的预测和诊断。
目前，在市面上检测Lp-PLA2浓度常用的试剂种类，检测成本高，操作繁琐，对实验操作人员的技能要求高，不利于该项目检测的大范围推广。
发明内容
针对上述技术的不足之处，本发明提供一种操作简便、便于实验人员掌握、涉及实验仪器单一、普及率高、检测成本低、检测结果准确、试剂稳定性良好，非常利于大范围推广的脂蛋白磷脂酶A2(Lp-PLA2)定量检测试剂盒。
一种检测脂蛋白磷脂酶A2浓度的试剂盒，包括包被有抗脂蛋白磷脂酶A2特异性抗体的平台载体、脂蛋白磷脂酶A2浓度梯度的标准品、脂蛋白磷脂酶A2质控品、辣根过氧化物酶标记的抗脂蛋白磷脂酶A2特异性抗体、样本缓冲液、底物A、底物B、终止液、洗液。
作为优选方案，所述平台载体为96孔聚苯乙烯微孔板；所述底物A为过氧化氢的柠檬酸盐缓冲液；所述底物B为四甲基联苯胺的柠檬酸盐缓冲液；所述终止液为硫酸溶液；所述洗液为含有表面活性剂的磷酸盐缓冲液。
作为优选方案，所述微孔板上抗脂蛋白磷脂酶A2特异性抗体的数量为0.1-10μg/孔；脂蛋白磷脂酶A2梯度标准品为6支、各0.5ml；所述脂蛋白磷脂酶A2质控品为2支各0.5ml；辣根过氧化物酶标记的抗脂蛋白磷脂酶A2特异性抗体10ml、1支；样本缓冲液10ml、1支；底物A 10ml、1支；底物B 10ml、1支；终止液10ml、1支；洗液10ml、1支。
作为优选方案，所述的抗脂蛋白磷脂酶A2特异性抗体为单克隆抗体。
作为优选方案，所述的脂蛋白磷脂酶A2浓度梯度的标准品和脂蛋白磷脂酶A2质控品都是用脂蛋白磷脂酶A2纯品与自制的标准品按照1:100-1:2000稀释液稀释而成，所述标准品不少于2个，所述质控品和所述标准品的脂蛋白磷脂酶A2的浓度不同，所述质控品的作用是在试剂盒使用过程中起到核准校对的作用，即通过质控品测值是否在质控范围内来对标准品拟合出来的曲线进行核准校对，若质控品测值合格，则可以利用标准曲线来拟合出样本中的脂蛋白磷脂酶A2浓度值。
作为优选方案，所述脂蛋白磷脂酶A2纯品是人血浆提纯的天然脂蛋白磷脂酶A2蛋白或大肠杆菌表达的重组脂蛋白磷脂酶A2蛋白。
作为优选方案，所述的标准品稀释液，其中标准品稀释液是在pH6.0-8.0、浓度为10-100mM磷酸盐缓冲液中，分别加入1％-10％质量分数的动物血清、0.01-0.5％质量分数的防腐剂、0.1-10mM金属离子络合剂、0.05-10％质量分数的表面活性剂、1-10％质量分数的抗原稳定剂混合而成。
作为优选方案，所述样本缓冲液是在PH6.0-7.0、浓度为10-100mM的磷酸盐酸缓冲液中，分别加入0.1-5mM的金属离子络合剂、1-10％质量分数的动物血清蛋白、0.01-1％质量分数的表面活性剂、0.01-0.5％质量分数的防腐剂混合而成。
优选的，所述的表面活性剂为曲达通X-100、曲达通X-705、吐温20、吐温40、吐温60、吐温80、十二烷基磺酸钠、聚乙二醇2000。
作为优选方案，所述的防腐剂为Proclin 300、硫柳汞、叠氮钠。
作为优选方案，所述的金属离子络合剂为乙二胺四乙酸二钠和乙二胺四乙酸四钠。
作为优选方案，所述的抗原稳定剂为抗坏血酸、维生素E、2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚(BHT)、还原型谷胱甘肽(GSH)。
制备如上所述的试剂盒的方法，包括以下步骤，以下步骤不分前后顺序：
包被有抗脂蛋白磷脂酶A2特异性抗体的平台载体的制备：将浓度为6-10mg/ml特异性的抗脂蛋白磷脂酶A2抗体用10-200mM磷酸盐缓冲液稀释到浓度为0.1-10μg/ml，分别加入到平台载体上，4-8℃过夜进行包被；然后用洗液将平台载体清洗至少3次；再向平台载体上加入含蛋白保护剂的封闭液进行封闭；弃去封闭液,等待平台载体至干燥后，真空袋封装，4-8℃存放；
脂蛋白磷脂酶A2浓度梯度标准品和脂蛋白磷脂酶A2质控品的制备：脂蛋白磷脂酶A2纯品与标准品稀释液按照1:200000-1:1000稀释，最后配制成标示浓度为0-1000ng/ml的脂蛋白磷脂酶A2浓度梯度标准品以及100-400ng/ml的脂蛋白磷脂酶A2质控品；其中标准品稀释液是在pH 6.0-8.0、浓度为10-100mM磷酸盐缓冲液中，分别加入1％-4％质量分数的动物血清、0.05-0.5％质量分数的防腐剂、3-5％质量分数的蛋白保护剂、0.1-0.5％质量分数的表面活性剂；将得到的脂蛋白磷脂酶A2浓度梯度标准品与脂蛋白磷脂酶A2质控品每瓶500ul分装，然后冻干成粉末状，4-8℃保存；
辣根过氧化物酶标记的抗脂蛋白磷脂酶A2抗体的制备：称取过碘酸钠加入到纯化水中配置得到终浓度为10-15mg/ml的过碘酸钠溶液；将终浓度为10-15mg/ml的过碘酸钠溶液与浓度为10-20mg/ml的辣根过氧化物酶等比例混合得到被过碘酸钠氧化过的辣根过氧化物酶；然后将抗脂蛋白磷脂酶A2抗体与碳酸盐缓冲液等体积混合稀释；将被过碘酸钠氧化好的辣根过氧化物酶与特异性的抗脂蛋白磷脂酶A2抗体混合交联；用去离子水溶解硼氢化钠成终浓度为8-12mg/ml；再透析后即得脂蛋白磷脂酶A2的酶标抗体，通过分子筛进行分离纯化；将所得酶标抗体与甘油等体积混合，-15—-20℃保存备用；
样本缓冲液的配制：所述样本缓冲液是在PH6.0-7.0、浓度为10-100mM的磷酸盐缓冲液中，分别加入0.1-3mM的金属离子络合剂、1-10％质量分数的蛋白保护剂、0.01-1％质量分数的表面活性剂、0.01-0.5％质量分数的防腐剂混合而成；
底物A：将过氧化氢纯品加入到浓度为10-100mM柠檬酸盐缓冲液中，配制成过氧化氢质量分数为20-50％的柠檬酸盐混合溶液；
底物B：将四甲基联苯胺加入到浓度为10-100mM柠檬酸盐缓冲液中，配制成四甲基联苯胺质量分数为5-20％的柠檬酸盐混合溶液；
终止液：将浓硫酸用纯化水进行稀释；
洗液：把质量分数为0.05-1％的表面活性剂加到PH6.0-7.0、浓度为10-100mM磷酸盐缓冲液中，然后混匀。
本发明由于所用的检测仪器较为简单，均为通常所用仪器，故检测成本较低，利于推广；并且该试剂盒容易操作，一般实验室技术人员即可实现；同时试剂盒内采用特异性的Lp-PLA2抗体、添加独特蛋白稳定剂的标准品稀释液和样本缓冲液配方，大大提高了检测结果的可靠性和准确性，以及试剂盒的稳定性。
附图说明
图1为实施例5标准曲线图。
图2为实施例6标准曲线图。
图3为实施例7标准曲线图。
图4为实施例8标准曲线图。
图5为实施例9标准曲线图。
图6为实施例10标准曲线图。
图7为实施例11标准曲线图。
图8为实施例12标准曲线图。
具体实施方式
下面结合附图对本发明作进一步详细说明。
实施例1、抗脂蛋白磷脂酶A2鼠单克隆抗体的制备
1杂交瘤细胞
1.1亲本细胞
1.1.1骨髓瘤细胞系
融合所用的细胞系为制备杂交瘤常规使用的Sp2/0细胞系，Sp2/0细胞在无菌条件下常规培养在含15％胎牛血清的IMDM完全培养液中，放置培养在37℃、含5％二氧化碳培养箱中。
1.1.2免疫脾脏细胞
用脂蛋白磷脂酶A2纯品蛋白免疫BALB/C小鼠，免疫剂量为30mg-60mg/每只小鼠，经皮下免疫动物。免疫前眼球取血，分离血清，保存在-20℃，作为正常对照小鼠的血清。基础免疫过程中抗原和完全佐剂等量混合，加强免疫中抗原与不完全佐剂混合，抗原与佐剂经充分乳化合格后免疫小鼠。第三次加强免疫后七天，眼球取血，用ELISA方法检测，抗血清OD值达到2.0。取阳性小鼠用浓度为50mg/ml溶于生理盐水的脂蛋白磷脂酶A2蛋白冲击免疫，免疫后3天，于无菌条件下取脾脏分离脾细胞，细胞悬浮在无血清IMDM完全培养液中以备细胞融合。
1.2细胞融合和杂交瘤的筛选
1.2.1细胞融合
取1.1.2中末次免疫冲击后，无菌条件下分离的脾细胞与Sp2/0细胞以10：1的比例混合，用无血清IMDM培养液将混合细胞充分洗涤三次，(1000转/分钟，5分钟)。将脾细胞和sp2/0细胞轻微振荡使之混匀后，将1ml 37℃预温的50％PEG缓慢地加入到细胞混悬液中，边加边轻轻地转动试管，使PEG与细胞充分混匀。静止1分钟后，再缓慢地加入37℃预热的15ml无血清培养液，边加边轻轻地转动试管，恢复渗透压。800转/分钟，离心融合细胞5分钟。用无血清培养液将融合细胞洗涤两次，再将细胞悬浮在含15％胎牛血清、10％白介素6、HAT的IMDM完全培养液中。调整细胞浓度，将细胞加入到96孔细胞培养板中，细胞数量为1X105/0.1ml/每孔。同时在其中的一孔中加入Sp2/0细胞作为HAT筛选时的对照细胞。将细胞培养板放置培养在37℃含5％二氧化碳培养箱中。
1.2.2杂交瘤细胞的筛选
培养的第五天，在无菌条件下，将培养板的培养液换成含有15％胎牛血清、10％白介素-6和HT的IMDM完全培养液，每孔200ul进行培养。在融合7天时可以见到杂交瘤的生长。待培养孔中的杂交瘤细胞生长到约占1/3孔时，在无菌条件下吸取0.lml培养液，用ELISA间接法测定杂交瘤分泌免疫球蛋白的情况。我们用ELISA间接法(1ug/ml包被脂蛋白磷脂酶A2抗原，100ul/孔4℃包被过夜；检测抗体采用辣根酶标记的羊抗鼠IgG 1:1万稀释)从分泌免疫球蛋白的杂交瘤中筛选到40株对抗原呈阳性反应的细胞株。
1.3杂交瘤细胞的克隆
采用有限稀释法分别对这些与脂蛋白磷脂酶A2呈阳性反应的杂交瘤细胞株进行了3次克隆，选取ELISA筛选阳性率达到100％的的细胞株且450nm OD值大于2.5。其中2-D5和10-C2这两株杂交瘤细胞与抗原反应有较高的灵敏度和较好的特异性，而且进一步检测表明他们识别的表位不同，选择这两株抗体进行纯化。
2抗体的制备
2.1抗体上清的收集
将上述两个细胞株进行驯化，最后培养于含有10％胎牛血清的IMDM完全培养基中进行扩增，并检测其灵敏度和特异性。然后进行大量培养，待细胞量达到90％的条件下，收集上清。
2.2抗体的分离纯化
取收集的细胞上清置于离心管中，于高速低温离心机中，12000rpm离心10min，收集上清。然后将上清直接过Protein A柱子纯化。先用结合缓冲液平衡Protein A层析柱。然后加入混合有结合缓冲液的预处理抗体原液，经结合、洗涤和洗脱收集洗脱样品后，将样品放在0.02PB,pH7.4的缓冲液透析过夜，透析液再离心12000rpm，20min。取上清即为纯化抗体，并为可以满足用于制备试剂盒的抗体。
2.3抗体的鉴定
用SDS-PAGE、WESTERN-BLOTTING和ELISA的方法对纯化好的抗体进行鉴定，结果表明抗体保留原有的特异性，纯度大于95％。
2.4抗体的保存
纯化的抗体采用低温保存，把抗体分成小包装，置于-20℃～-80℃，保存过程中避免反复冻融。经快速活性鉴定，抗体活性可以保存一年效价不变。
实施例2、本发明试剂盒的操作使用方法如下：
1.将标准品和质控品用去离子水复溶混匀，分别向微孔板中加入标准品、质控和样本各20ul/孔和样本缓冲液80ul/孔，放在振荡反应器上室温反应60min；
2.用洗板机洗板四次，拍干；
3.向微孔板中加入酶结合物100ul/孔，放在振荡反应器上室温反应60min；
4.用洗板机洗板四次，拍干；
5.底物A、底物B等体积混匀后，向微孔板中加入100ul/孔，37℃反应30min；
6.向微孔板中加入终止液100ul/孔；
7.利用酶标仪在450nm处读取各反应孔的OD值；
8.将标准品各点的浓度值和对应的OD值进行二次曲线回归拟合出标准曲线，再将样本的OD值带入标准曲线中，即可得出样本中Lp-PLA2的对应浓度值。
实施例3、通过以下方法制备该试剂盒：
包被有抗脂蛋白磷脂酶A2单克隆抗体的微孔板的制备：将浓度为6mg/ml特异性的抗脂蛋白磷脂酶A2单克隆抗体用PH值为7.4的10mM磷酸钠缓冲液稀释到浓度为0.1μg/ml，加入到96孔聚苯乙烯微孔板的凹孔中，100ul/孔，4℃包被过夜；移去包被液，然后用洗板机将微孔板洗三次；再向微孔板凹孔中加入含1％质量分数牛血清白蛋白的PH7.4的10mM磷酸钠缓冲液：300ul/孔，室温封闭6小时；甩去凹孔中的封闭液，37℃烤干4小时，真空袋封装，4℃存放；
脂蛋白磷脂酶A2浓度梯度标准品和质控品的制备：用含有0.1mM的乙二胺四乙酸二钠、0.01％质量分数的Proclin300、1％质量分数的牛血清白蛋白、0.05％质量分数的Triton X-100、1％质量分数的抗坏血酸的10mM磷酸钠缓冲溶液(PH6.0)将脂蛋白磷脂酶A2纯品配制成标示浓度为0、50、100、250、500、1000ng/ml的浓度梯度标准品以及100、400ng/ml的质控品；然后用冻干机冻干成粉末状，4℃保存；
辣根过氧化物酶标记的抗脂蛋白磷脂酶A2单克隆抗体的制备：
(1)先称取2mg辣根过氧化物酶溶解于0.2ml蒸馏水中，得到浓度为5mg/ml的辣根过氧化物酶。
(2)于上液中加入0.2ml新配的10mg/ml的NaIO4溶液，室温下避光搅拌20分钟。
(3)将步骤(2)得到溶液装入透析袋中，对10mM PH4.4的磷酸纳缓冲液透析，4℃过夜。
(4)在步骤(3)得到的溶液中等体积加入0.2M PH9.5碳酸纳缓冲液，使以上醛化好的辣根过氧化物酶PH升高到9.0～9.5，然后立即加入10mg特异性的抗脂蛋白磷脂酶A2抗体，室温避光轻轻搅拌2小时。
(5)向反应体系加入0.2ml新配的4mg/ml NaBH4溶液，置4℃混匀2小时。
(6)将上述反应体系装入透析袋中，对0.15M PH7.4PBS透析，4℃过夜。
(7)将透析袋中的酶标抗体与甘油等体积混匀，-20℃保存备用；
(8)将酶标抗体用含1％牛血清白蛋白的20mM PBS缓冲液按照1:2000的比例进行稀释待用。
样本缓冲液的制备：向10mM磷酸钠缓冲液(PH6.0)中分别添加：0.1mM EDTA二钠、1％牛血清白蛋白、0.01％Tween 20和0.01％Proclin 300，充分混匀。
底物A：向10mM柠檬酸钠缓冲液(PH4.0)中添加20％质量分数的过氧化氢，充分混匀；
底物B：向10mM柠檬酸钠缓冲液(PH4.0)中添加5％质量分数的四甲基联苯胺，充分混匀；
终止液：1M的硫酸溶液；
洗液：向10mM磷酸钠缓冲液(PH6.0)中加入0.05％质量分数吐温20，充分混匀；
实施例4、通过以下方法制备该试剂盒：
包被有抗脂蛋白磷脂酶A2单克隆抗体的微孔板的制备：将浓度为10mg/ml特异性的抗脂蛋白磷脂酶A2单克隆抗体用PH值为7.4的200mM磷酸钠缓冲液稀释到浓度为10μg/ml，加入到96孔聚苯乙烯微孔板的凹孔中，100ul/孔，4℃包被过夜；移去包被液，然后用洗板机将微孔板洗三次；再向微孔板凹孔中加入含1％质量分数的牛血清白蛋白的PH7.4的200mM磷酸钠缓冲液：300ul/孔，室温封闭6小时；甩去凹孔中的封闭液，37℃烤干4小时，真空袋封装，4℃存放；
脂蛋白磷脂酶A2浓度梯度标准品和质控品的制备：用含有10mM的乙二胺四乙酸二钠、0.5％质量分数的Proclin300、10％质量分数的牛血清白蛋白、10％质量分数的Triton X-100、10％质量分数的抗坏血酸的10mM磷酸钠缓冲溶液(PH6.0)将脂蛋白磷脂酶A2纯品配制成标示浓度为0、50、100、250、500、1000ng/ml的浓度梯度标准品以及100、400ng/ml的质控品；然后用冻干机冻干成粉末状，4℃保存；
辣根过氧化物酶标记的抗脂蛋白磷脂酶A2单克隆抗体的制备：
(1)先称取2mg辣根过氧化物酶溶解于0.2ml蒸馏水中，得到浓度为5mg/ml的辣根过氧化物酶。
(2)于上液中加入0.2ml新配的10mg/ml的NaIO4溶液，室温下避光搅拌20分钟。
(3)将步骤(2)得到溶液装入透析袋中，对10mM PH4.4的磷酸纳缓冲液透析，4℃过夜。
(4)在步骤(3)得到的溶液中等体积加入0.2M PH9.5碳酸纳缓冲液，使以上醛化好的辣根过氧化物酶PH升高到9.0～9.5，然后立即加入10mg特异性的抗脂蛋白磷脂酶A2抗体，室温避光轻轻搅拌2小时。
(5)向反应体系加入0.2ml新配的4mg/ml NaBH4溶液，置4℃混匀2小时。
(6)将上述反应体系装入透析袋中，对0.15M PH7.4PBS透析，4℃过夜。
(7)将透析袋中的酶标抗体与甘油等体积混匀，-20℃保存备用；
(8)将酶标抗体用含1％牛血清白蛋白的20mM PBS缓冲液按照1:2000的比例进行稀释待用。
样本缓冲液的制备：向100mM磷酸钠缓冲液(PH7.0)中分别添加：3mM EDTA二钠、10％质量分数的牛血清白蛋白、1％质量分数的Tween 20和0.5％质量分数的Proclin 300，充分混匀。
底物A：向100mM柠檬酸钠缓冲液(PH4.0)中添加50％质量分数的过氧化氢，充分混匀；
底物B：向100mM柠檬酸钠缓冲液(PH4.0)中添加20％质量分数的四甲基联苯胺，充分混匀；
终止液：1M的硫酸溶液；
洗液：向100mM磷酸钠缓冲液(PH6.0)中加入1％质量分数吐温20，充分混匀；
实施例5、通过以下方法制备该试剂盒：
与实施例3基本相同，不同的是：
脂蛋白磷脂酶A2浓度梯度标准品和质控品的制备：用含有1％质量分数的新生牛血清、0.05％质量分数的Proclin300、3％质量分数的牛血清白蛋白、0.1％质量分数的Triton X-100、10mM的抗坏血酸的20mM磷酸钠缓冲溶液(PH7.4)将脂蛋白磷脂酶A2纯品配制成标示浓度为0、50、100、250、500、1000ng/ml的浓度梯度标准品以及150、300ng/ml的质控品；然后用冻干机冻干成粉末状，4℃保存；
样本缓冲液的制备：向10mM柠檬酸钠缓冲液(PH6.4)中分别添加：1mM EDTA二钠、1％牛血清白蛋白、0.1％Tween 20、0.1％BRIJ-35和0.05％Proclin 300，充分混匀。
如附图1所示为本实施例的标准曲线图，表1为采用实施例2所述的方法检测本实施例质控品、样本的检测结果，其中样本1、2来源于人体血浆，从表1可以看出质控品1和质控品2的检测值在对应的靶值范围内，所以可以确定质控品可控，结果可信；而样本1、2的检测值偏差与其对应的靶值相比，偏差小于15％，说明该试剂盒检测准确率高。
表1质控品、样本检测结果
实施例6、通过以下方法制备该试剂盒：
与实施例3基本相同，不同的是：
脂蛋白磷脂酶A2浓度梯度标准品和质控品的制备：用含有2％山羊血清、0.1％叠氮钠、1％牛γ蛋白、0.1％Tween 20、5mM维生素E的20mM磷酸钠缓冲溶液(PH7.4)将脂蛋白磷脂酶A2纯品配制成标示浓度为0、50、100、250、500、1000ng/ml的一浓度梯度标准品以及150、300ng/ml的质控品；然后用冻干机冻干成粉末状，4℃保存；
样本缓冲液的制备：向20mM柠檬酸钠缓冲液(PH4.5)中分别添加：0.5mM EDTA四钠、2％牛血清白蛋白、0.05％Triton X-100、0.2％BRIJ-35和0.05％Proclin 300，充分混匀。
如附图2所示为本实施例的标准曲线图，表2为采用实施例2所述的方法检测本实施例质控品、样本的结果，其中样本1、2来源于人体血浆，从表2可以看出质控品1和质控品2的检测值在对应的靶值范围内，所以可以确定质控品可控，结果可信；而样本1、2的检测值偏差与其对应的靶值相比，偏差小于15％，说明该试剂盒检测准确率高。
表2质控品、样本检测结果
实施例7、通过以下方法制备该试剂盒：
与实施例4基本相同，不同的是：
脂蛋白磷脂酶A2浓度梯度标准品和质控品的制备：用含有1％马血清、0.1％叠氮钠、3％牛血清白蛋白、0.1％Tween 80、5mM BHT的20mM磷酸钠缓冲溶液(PH7.4)将脂蛋白磷脂酶A2纯品配制成标示浓度为0、50、100、250、500、1000ng/ml的一浓度梯度标准品以及150、300ng/ml的质控品；然后用冻干机冻干成粉末状，4℃保存；
样本缓冲液的制备：向15mM柠檬酸钠缓冲液(PH5.0)中分别添加：0.1mM EDTA二钠、1％牛γ蛋白、0.1％Triton X-100、0.15％BRIJ-35和0.1％叠氮钠，充分混匀。
如附图3所示为本实施例的标准曲线图，表3为采用实施例2所述的方法检测本实施例质控品、样本的检测结果，其中样本1、2来源于人体血浆，从表3可以看出质控品1和质控品2的检测值在对应的靶值范围内，所以可以确定质控品可控，结果可信；而样本1、2的检测值偏差与其对应的靶值相比，偏差小于15％，说明该试剂盒检测准确率高。
表3为质控品、样本检测结果
实施例8、通过以下方法制备该试剂盒：
与实施例4基本相同，不同的是：
脂蛋白磷脂酶A2浓度梯度标准品和质控品的制备：用含有1.5％猪血清、0.1％Proclin 300、1.5％牛血清白蛋白、0.1％SDS、2mM GSH的20mM磷酸钠缓冲溶液(PH7.4)将脂蛋白磷脂酶A2纯品配制成标示浓度为0、50、100、250、500、1000ng/ml的一浓度梯度标准品以及150、300ng/ml的质控品；然后用冻干机冻干成粉末状，4℃保存；
样本缓冲液的制备：向20mM柠檬酸钠缓冲液(PH4.8)中分别添加：0.2mM EDTA二钠、3％牛血清白蛋白、0.1％Tween 20、0.15％SDS和0.1％Proclin 300，充分混匀。
如附图4所示为本实施例的标准曲线图，表4为采用实施例2所述的方法检测本实施例质控品、样本的检测结果，其中样本1、2来源于人体血浆，从表4可以看出质控品1和质控品2的检测值在对应的靶值范围内，所以可以确定质控品可控，结果可信；而样本1、2的检测值偏差与其对应的靶值相比，偏差小于15％，说明该试剂盒检测准确率高。
表4为质控品、样本检测结果
实施例9、通过以下方法制备该试剂盒：
与实施例4基本相同，不同的是：
脂蛋白磷脂酶A2浓度梯度标准品和质控品的制备：用含有1.5％鼠血清、0.1％叠氮钠、3％牛血清白蛋白、0.1％Tween 60、10mM抗坏血酸的15mM磷酸钠缓冲溶液(PH7.2)将脂蛋白磷脂酶A2纯品配制成标示浓度为0、50、100、250、500、1000ng/ml的一浓度梯度标准品以及150、300ng/ml的质控品；然后用冻干机冻干成粉末状，4℃保存；
样本缓冲液的制备：向50mM柠檬酸钠缓冲液(PH4.2)中分别添加：0.5mM EDTA二钠、4.5％牛血清白蛋白、0.1％Span-20、0.15％Tween 20和0.1％Proclin 300，充分混匀。
如附图5所示为本实施例的标准曲线图，表5为采用实施例2所述的方法检测本实施例质控品、样本的检测结果，其中样本1、2来源于人体血浆，从表5可以看出质控品1和质控品2的检测值在对应的靶值范围内，所以可以确定质控品可控，结果可信；而样本1、2的检测值偏差与其对应的靶值相比，偏差小于15％，说明该试剂盒检测准确率高。
表5为质控品、样本检测结果
实施例10、通过以下方法制备该试剂盒：
与实施例3基本相同，不同的是：
脂蛋白磷脂酶A2浓度梯度标准品和质控品的制备：用含有2％山羊血清、0.1％叠氮钠、1％牛γ蛋白、0.1％Tween 20、5mM BHT的20mM/L磷酸钠缓冲溶液(PH7.4)将脂蛋白磷脂酶A2纯品配制成标示浓度为0、50、100、250、500、1000ng/ml的一浓度梯度标准品以及150、300ng/ml的质控品；然后用冻干机冻干成粉末状，4℃保存；
样本缓冲液的制备：向20mM/L柠檬酸钠缓冲液(PH4.5)中分别添加：0.5mM/L EDTA四钠、2％牛血清白蛋白、0.05％Triton X-100、0.2％BRIJ-35和0.05％Proclin 300，充分混匀。
如附图6所示为本实施例的标准曲线图，表6为采用实施例2所述的方法检测本实施例质控品、样本的检测结果，其中样本1、2来源于人体血浆，从表6可以看出质控品1和质控品2的检测值在对应的靶值范围内，所以可以确定质控品可控，结果可信；而样本1、2的检测值偏差与其对应的靶值相比，偏差小于15％，说明该试剂盒检测准确率高。
表6质控品、样本检测结果。
实施例11、通过以下方法制备该试剂盒：
与实施例3基本相同，不同的是：
脂蛋白磷脂酶A2浓度梯度标准品和质控品的制备：用含有3.5％绵羊血清、0.1％Proclin300、5％甘油、0.2％NP-4(烷基酚聚氧乙烯(4)醚)的20mM/L磷酸钠缓冲溶液(PH7.4)将脂蛋白磷脂酶A2纯品配制成标示浓度为0、50、100、250、500、1000ng/ml的一浓度梯度标准品以及150、300ng/ml的质控品；然后用冻干机冻干成粉末状，4℃保存；
样本缓冲液的制备：向15mM/L柠檬酸钠缓冲液(PH4.2)中分别添加：0.02％EDTA二钠、1％牛γ蛋白、0.1％PEG2000(聚乙二醇2000)、0.1％BRIJ-35和0.01％硫柳汞，充分混匀。
如附图7所示为本实施例的标准曲线图，表7为采用实施例2所述的方法检测本实施例质控品、样本的检测结果，其中样本1、2来源于人体血浆，从表7可以看出质控品1和质控品2的检测值在对应的靶值范围内，所以可以确定质控品可控，结果可信；而样本1、2的检测值偏差与其对应的靶值相比，偏差小于15％，说明该试剂盒检测准确率高。
表7质控品、样本检测结果
实施例12、通过以下方法制备该试剂盒：
与实施例3基本相同，不同的是：
脂蛋白磷脂酶A2浓度梯度标准品和质控品的制备：用含有5％鸡血清、0.3％硫柳汞、8％海藻糖、0.5％PEG4000(聚乙二醇4000)的20mM/L磷酸钠缓冲溶液(PH7.8)将脂蛋白磷脂酶A2纯品配制成标示浓度为0、50、100、250、500、1000ng/ml的一浓度梯度标准品以及100、500ng/ml的质控品；然后用冻干机冻干成粉末状，4℃保存；
样本缓冲液的制备：向35mM/L柠檬酸钠缓冲液(PH4.5)中分别添加：0.05％EDTA四钠、3％甘油、0.1％PEG4000(聚乙二醇4000)、0.15％BRIJ-35和0.01％硫酸庆大霉素，充分混匀。
如附图8所示为本实施例的标准曲线图，表8为采用实施例2所述的方法检测本实施例质控品、样本的检测结果，其中样本1、2来源于人体血浆，从表8可以看出质控品1和质控品2的检测值在对应的靶值范围内，所以可以确定质控品可控，结果可信；而样本1、2的检测值偏差与其对应的靶值相比，偏差小于15％，说明该试剂盒检测准确率高。
表8质控品、样本检测结果
以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种检测脂蛋白磷脂酶A2浓度的试剂盒，其特征在于：包括包被有抗脂蛋白磷脂酶A2特异性抗体的平台载体、脂蛋白磷脂酶A2浓度梯度的标准品、脂蛋白磷脂酶A2质控品、辣根过氧化物酶标记的抗脂蛋白磷脂酶A2特异性抗体、样本缓冲液、底物A、底物B、终止液、洗液。
2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述平台载体为96孔聚苯乙烯微孔板；所述底物A为过氧化氢的柠檬酸盐缓冲液；所述底物B为四甲基联苯胺的柠檬酸盐缓冲液；所述终止液为硫酸溶液；所述洗液为含有表面活性剂的磷酸盐缓冲液。
3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于：所述微孔板上抗脂蛋白磷脂酶A2特异性抗体的数量为0.1-10μg/孔；脂蛋白磷脂酶A2梯度标准品为6支、各0.5ml；所述脂蛋白磷脂酶A2质控品为2支各0.5ml；辣根过氧化物酶标记的抗脂蛋白磷脂酶A2特异性抗体10ml、1支；样本缓冲液10ml、1支；底物A 10ml、1支；底物B 10ml、1支；终止液10ml、1支；洗液10ml、1支。
4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于：所述的抗脂蛋白磷脂酶A2特异性抗体为单克隆抗体。
5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述的脂蛋白磷脂酶A2浓度梯度的标准品和脂蛋白磷脂酶A2质控品都是用脂蛋白磷脂酶A2纯品与自制的标准品稀释液按照1:100-1:2000稀释而成。
6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于：所述脂蛋白磷脂酶A2纯品是人血浆提纯的天然脂蛋白磷脂酶A2蛋白或大肠杆菌表达的重组脂蛋白磷脂酶A2蛋白。
7.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于：所述的标准品稀释液，是在PH 6.0-8.0、浓度为10-100mM磷酸盐缓冲液中，分别加入1-10％质量分数的动物血清蛋白、1-10％质量分数的抗原稳定剂、0.05-10％体积分数的表面活性剂、0.1-10mM的金属离子络合剂以及0.01-0.5％质量分数的防腐剂混合而成。
8.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述样本缓冲液是在PH6.0-7.0、浓度为10-100mM的磷酸盐酸缓冲液中，分别加入0.1-5mM的金属离子络合剂、1-10％质量分数的动物血清蛋白、0.01-1％质量分数的表面活性剂、0.01-0.5％质量分数的防腐剂混合而成。
9.根据权利要求7或8所述的试剂盒，其特征在于：所述的金属离子络合剂为乙二胺四乙酸二钠或乙二胺四乙酸四钠。
10.制备如权利要求1-9所述的试剂盒的方法，其特征在于：包括以下步骤，以下步骤不分前后顺序：
包被有抗脂蛋白磷脂酶A2特异性抗体的平台载体的制备：将浓度为6-10mg/ml特异性的抗脂蛋白磷脂酶A2抗体用10-200mM磷酸盐缓冲液稀释到浓度为0.1-10μg/ml，分别加入到平台载体上，4-8℃过夜进行包被；然后用洗液将平台载体清洗至少3次；再向平台载体上加入含蛋白保护剂的封闭液进行封闭；弃去封闭液,等待平台载体至干燥后，真空袋封装，4-8℃存放；
脂蛋白磷脂酶A2浓度梯度标准品和脂蛋白磷脂酶A2质控品的制备：脂蛋白磷脂酶A2纯品与标准品稀释液按照1:200000-1:1000稀释，最后配制成标示浓度为0-1000ng/ml的脂蛋白磷脂酶A2浓度梯度标准品以及100-400ng/ml的脂蛋白磷脂酶A2质控品；其中标准品稀释液是在pH 6.0-8.0、浓度为10-100mM磷酸盐缓冲液中，分别加入1％-10％质量分数的动物血清、0.01-0.5％质量分数的防腐剂、0.1-10mM金属离子络合剂、0.05-10％质量分数的表面活性剂、1-10％质量分数的抗原稳定剂；将得到的脂蛋白磷脂酶A2浓度梯度标准品与脂蛋白磷脂酶A2质控品每瓶0.5ml分装，然后冻干成粉末状，4-8℃保存；
辣根过氧化物酶标记的抗脂蛋白磷脂酶A2抗体的制备：称取过碘酸钠加入到纯化水中配置得到终浓度为10-15mg/ml的过碘酸钠溶液；将终浓度为10-15mg/ml的过碘酸钠溶液与浓度为10-20mg/ml的辣根过氧化物酶等体积混合得到被过碘酸钠氧化过的辣根过氧化物酶；将抗脂蛋白磷脂酶A2抗体与碳酸盐缓冲液等体积混合稀释；将被过碘酸钠氧化好的辣根过氧化物酶与特异性的抗脂蛋白磷脂酶A2抗体混合交联；将交联后的产物与硼氢化钠溶液混合置4℃还原2小时；再用磷酸钠溶液进行透析，透析后即得脂蛋白磷脂酶A2的酶标抗体；将酶标抗体与甘油等体积混匀，-20℃保存备用；
样本缓冲液的配制：在PH6.0-7.0、浓度为10-100mM的磷酸盐缓冲液中，分别加入0.1-3mM的金属离子络合剂、1-10％质量分数的蛋白保护剂、0.01-1％质量分数的表面活性剂、0.01-0.5％质量分数的防腐剂混合而成；
底物A：将过氧化氢纯品加入到浓度为10-100mM柠檬酸盐缓冲液中，配制成过氧化氢为20-50％质量分数的柠檬酸盐混合溶液；
底物B：将四甲基联苯胺加入到浓度为10-100mM柠檬酸盐缓冲液中，配制成四甲基联苯胺为5-20％质量分数的柠檬酸盐混合溶液；
终止液：将浓硫酸用纯化水稀释；
洗液：把质量分数为0.05-1％的表面活性剂加到PH6.0-7.0、浓度为10-100mM磷酸盐缓冲液中，然后混匀。
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Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105542010A (zh) * 2015-12-31 2016-05-04 武汉华美生物工程有限公司 脂蛋白相关磷脂酶a2单克隆抗体、抗体对及制备方法、用途
CN106483282A (zh) * 2016-09-29 2017-03-08 北京世纪沃德生物科技有限公司 一种抗原稳定剂及其制备方法与应用
CN117405890A (zh) * 2023-12-15 2024-01-16 北京美联泰科生物技术有限公司 胃蛋白酶原ii的化学发光检测试剂盒及方法

Citations (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20090081703A1 (en) * 2007-09-25 2009-03-26 Yale Steven H Method for detecting deep venous thrombosis
CN102121938A (zh) * 2010-01-07 2011-07-13 美国Rq生物科技有限公司 一种免疫学检测试剂盒及其制备和使用方法
CN102692507A (zh) * 2011-07-29 2012-09-26 南京诺尔曼生物技术有限公司 脂蛋白相关磷脂酶a2(lppla2)测定试剂盒(胶乳增强免疫比浊法)
CN103048457A (zh) * 2012-11-27 2013-04-17 同昕生物技术（北京）有限公司 心肌梗死预警胶体金试剂盒及其制备方法
CN103645326A (zh) * 2013-12-13 2014-03-19 同昕生物技术（北京）有限公司 检测脂蛋白相关磷脂酶a2的化学发光酶联免疫试剂盒及其制备方法
CN103698535A (zh) * 2013-12-17 2014-04-02 陆上苏 脂蛋白相关磷脂酶a2定量检测试剂盒及制备、操作方法
CN104007260A (zh) * 2014-06-13 2014-08-27 天津康尔克生物科技有限公司 一种脂蛋白相关磷脂酶a2酶联免疫检测试剂盒及制备方法
CN104280556A (zh) * 2014-10-31 2015-01-14 杨子学 一种同时测定血浆中脂蛋白磷脂酶a2与c反应蛋白含量的检测方法及试剂盒
CN104360074A (zh) * 2014-11-03 2015-02-18 杨子学 血浆脂蛋白磷脂酶a2的时间分辨荧光免疫检测方法及试剂盒

Patent Citations (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20090081703A1 (en) * 2007-09-25 2009-03-26 Yale Steven H Method for detecting deep venous thrombosis
CN102121938A (zh) * 2010-01-07 2011-07-13 美国Rq生物科技有限公司 一种免疫学检测试剂盒及其制备和使用方法
CN102692507A (zh) * 2011-07-29 2012-09-26 南京诺尔曼生物技术有限公司 脂蛋白相关磷脂酶a2(lppla2)测定试剂盒(胶乳增强免疫比浊法)
CN103048457A (zh) * 2012-11-27 2013-04-17 同昕生物技术（北京）有限公司 心肌梗死预警胶体金试剂盒及其制备方法
CN103645326A (zh) * 2013-12-13 2014-03-19 同昕生物技术（北京）有限公司 检测脂蛋白相关磷脂酶a2的化学发光酶联免疫试剂盒及其制备方法
CN103698535A (zh) * 2013-12-17 2014-04-02 陆上苏 脂蛋白相关磷脂酶a2定量检测试剂盒及制备、操作方法
CN104007260A (zh) * 2014-06-13 2014-08-27 天津康尔克生物科技有限公司 一种脂蛋白相关磷脂酶a2酶联免疫检测试剂盒及制备方法
CN104280556A (zh) * 2014-10-31 2015-01-14 杨子学 一种同时测定血浆中脂蛋白磷脂酶a2与c反应蛋白含量的检测方法及试剂盒
CN104360074A (zh) * 2014-11-03 2015-02-18 杨子学 血浆脂蛋白磷脂酶a2的时间分辨荧光免疫检测方法及试剂盒

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105542010A (zh) * 2015-12-31 2016-05-04 武汉华美生物工程有限公司 脂蛋白相关磷脂酶a2单克隆抗体、抗体对及制备方法、用途
CN105542010B (zh) * 2015-12-31 2020-11-03 武汉华美生物工程有限公司 脂蛋白相关磷脂酶a2单克隆抗体、抗体对及制备方法、用途
CN106483282A (zh) * 2016-09-29 2017-03-08 北京世纪沃德生物科技有限公司 一种抗原稳定剂及其制备方法与应用
CN117405890A (zh) * 2023-12-15 2024-01-16 北京美联泰科生物技术有限公司 胃蛋白酶原ii的化学发光检测试剂盒及方法
CN117405890B (zh) * 2023-12-15 2024-03-29 北京美联泰科生物技术有限公司 胃蛋白酶原ii的化学发光检测试剂盒及方法

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