CN110003325B - 杂交瘤细胞株、及其产生的单克隆抗体和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种杂交瘤细胞株、及其产生的单克隆抗体和应用。所述杂交瘤细胞株生产结合乙肝表面抗原的单克隆抗体。本发明制备的可分泌抗乙型肝炎病毒表面抗原单克隆抗体的杂交瘤细胞所分泌的单克隆抗体能与目的蛋白发生特异性的结合，该高效价、高灵敏度、高特异性、高稳定性的单克隆抗体能在胶体金平台(双抗体夹心法)快速定性检测血清或血浆或全血中的乙型肝炎病毒表面抗原。

Description

杂交瘤细胞株、及其产生的单克隆抗体和应用
技术领域
本发明涉及生物制剂领域，具体涉及一种杂交瘤细胞株、及其产生的单克隆抗体和应用。
背景技术
乙型肝炎是一种严重危害人类健康的疾病，其严重后果是直接导致急性乙型肝炎、慢性乙型肝炎、肝硬化、肝衰竭或死亡，并与某些人群的肝细胞癌(HCC)的发生密切相关，构成复杂的乙型肝炎疾病谱。乙型肝炎病毒可通过母婴传播，危害极大。大样本调查显示我国乙肝表面抗原(HBsAg)携带率约10％，慢性无症状HBV携带者(AsC)可能超过1.2亿人。因此，预防和控制乙型肝炎长期以来一直是我国卫生防疫工作的重要任务。
乙肝HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBsAg是国内医院最常用的乙型肝炎病毒(HBV)感染检测血清标志物。其中HBsAg是乙型肝炎病毒的结构成分之一，是乙型肝炎病毒感染的直接标志物，医院通常检测乙肝HBsAg来检查是否感染乙型肝炎及感染的具体情况。现有的HBsAg检测方法主要是酶联免疫吸附试验(ELISA法)、化学发光免疫分析法(CLIA法)、免疫放射法(RIA)、胶体金免疫层析法(GICA法)等。这些免疫学技术的检测对象是病人血清或血浆或全血中的HBsAg，依赖于HBsAg与单克隆抗体的结合。另外，样品中难以避免的血红蛋白、胆红素、甘油三酯等成分，往往也会干扰单克隆抗体与抗原的结合，从而对实验室或临床样品的检测造成不良的影响。因此，检测中使用的单克隆抗体的效价等特性，会对检测的特异性与灵敏度造成很大的影响。
基于单克隆抗体的检测试纸条对保存条件、操作条件要求较高。在实验室或临床实际操作中，特别是在实验/医疗条件较差的偏远地区等，保存条件以及操作人员的业务水平有时往往无法达到标准要求。例如，试剂可能会因停电或操作不当而被反复冻融，或冻存时间过长。在炎热的落后地区(如非洲)，试剂可能会被误置于高温热加速的环境中。在这种情况下，常规试纸条往往会发生性状变化，导致检测结果不够稳定可靠，这也是人们长期以来期待解决的问题。
发明内容
为解决上述问题，本发明提供一种杂交瘤细胞株，所述杂交瘤细胞株的保藏号为：CCTCC NO:C201946，其生产结合乙肝表面抗原的单克隆抗体。本发明的杂交瘤细胞株保藏于中国典型培养物保藏中心(China Center for Type Culture Collection，简称CCTCC)，分类命名为：杂交瘤细胞株81#，保藏日期是：2019年3月21日，保藏地址是：湖北省武汉市武昌区武汉大学内。
在一种实施方式中，所杂交瘤细胞株通过以下方法制备：步骤1：用天然HBsAg免疫小鼠，采血测定免疫小鼠的血清效价大于1：108后，可用于融合；步骤2：融合前，所述免疫小鼠用HBsAg溶液通过尾静脉追加免疫；步骤3：取追加免疫后的小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞Sp2/0融合并培养，并用HAT筛选得到稳定的杂交瘤细胞株；和步骤4：筛选阳性细胞株，克隆得稳定杂交瘤细胞株，从中选择得到保藏号为：CCTCC NO:C201946的杂交瘤细胞株。
在一种实施方式中，步骤1中用天然HBsAg免疫小鼠包括：先用HBsAg抗原溶液与弗氏完全佐剂混合后进行免疫；然后用HBsAg抗原溶液与弗氏不完全佐剂进行增强免疫，以后每隔一周增强免疫一次，直至所有小鼠血清效价大于1：108。
在一种实施方式中，在步骤3的融合细胞培养中加入饲养细胞，以正常的鼠腹腔巨噬细胞作饲养细胞。
在一种实施方式中，所述小鼠骨髓瘤细胞Sp2/0经8-氮鸟嘌呤筛选后，培养至对数生长期，然后悬浮、离心和培养基培养获得。
在一种实施方式中，在步骤3的细胞融合中加入PEG，优选地为PEG4000。
在一种实施方式中，所述单克隆抗体由保藏编号为CCTCC NO:C201946的杂交瘤细胞株产生。
在一种实施方式中，所述单克隆抗体还包括所述单克隆抗体的片段和其衍生物。
在一种实施方式中，本发明提供上述的单克隆抗体在制备乙型病毒性肝炎或乙肝相关疾病的病情评估的试剂或试剂盒中的应用。
本发明采用杂交瘤单克隆抗体技术，以天然的HBsA免疫Balb/C小鼠，用血清筛选后选取抗体效价较高的小鼠用于细胞融合，融合后经有限稀释法筛选出1株能稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株继而制备纯化后的抗体，经间接ELISA检测其效价，并制备成检测试剂盒检测临床样本，经过反复冻融及热加速处理后继续制备成检测试剂盒检测临床样本，证实了我们制备的可分泌抗乙型肝炎病毒表面抗原单克隆抗体的杂交瘤细胞所分泌的单克隆抗体能与目的蛋白发生特异性的结合，该高效价、高灵敏度、高特异性、高稳定性的单克隆抗体能在胶体金平台(双抗体夹心法)快速定性检测血清或血浆或全血中的乙型肝炎病毒表面抗原。
采用本发明制备的抗乙型肝炎病毒表面抗原单克隆抗体效价高、活性好、灵敏度高、特异性强、稳定性好，能在胶体金平台快速定性检测血清或血浆或全血中的乙型肝炎病毒表面抗体，且与多种传染病无交叉反应、抗干扰能力强。
另外，本发明的单克隆抗体稳定性高，在较为恶劣的环境条件下还能保持很高的稳定性与可靠性，这一点在临床以及实验室应用中均是非常宝贵的进步。本发明的单克隆抗体对于血液中常见的抗干扰物质诸如胆红素、甘油三酯等具有良好的抗干扰能力。
附图说明
为了更清楚地说明本申请实施例中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本申请中记载的一些实施例，对于本领域普通技术人员来说，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其它的附图。
图1是本发明的单克隆抗体电泳图；和
图2是本发明的单克隆抗体的抗体效价检测结果图。
具体实施方式
为了使本领域技术领域人员更好地理解本申请中的技术方案，下面将结合下面结合实施例对本发明作进一步说明，显然，所描述的实施例仅仅是本申请一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本申请中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都应当属于本申请保护的范围。
实施例1天然HBsAg免疫小鼠
本实施例中天然HBsAg购自桂康生物，批号20171211。将HBsAg用生理盐水稀释至2.0mg/ml，与弗氏完全佐剂(Sigma公司，货号SLBF-9338V)等体积混合，用1ml注射器乳化为油状乳液，直至滴入水中的油状乳液不分散方可停止乳化，将该乳液以200ul/只的剂量四肢腋窝皮下免疫BALB/c小鼠(成都达硕实验动物中心，6周龄雌性，2只)。第一次免疫21天后增强免疫，取抗原与弗氏不完全佐剂(Sigma公司，货号SLBM9367V)等体积混合后乳化，免疫剂量为100ul/只，以后每隔一周增强免疫一次，每次免疫之前采尾血，分离血清，用间接ELISA法测定效价。免疫8次后，所有小鼠血清效价大于1：108，可用于融合。融合前3天，取HBsAg用生理盐水稀释至2.0mg/ml，再与生理盐水等体积混合尾静脉追加免疫，剂量为50ul/只。
实施例2杂交瘤细胞系的制备
2-1饲养细胞的制备
以正常的12周龄BALB/c鼠腹腔巨噬细胞作饲养细胞。在融合前1天，BALB/c小鼠取眼血拉颈处死，0.1％新洁尔灭浸泡1分钟，转入75％酒精浸泡1分钟，超净台内无菌操作下用剪刀剪开腹部皮肤，暴露腹膜，用注射器腹腔注入RPMI1640基础培养液3ml，后以滴管取出，再加入10mL RPMI1640基础培养液反复冲洗，回收冲洗液，1000rpm，离心5分钟留沉淀，用已加入20％新生牛血清的RPMI1640培养液重悬，调整细胞浓度为3-6×105个/ml，加入96孔板，100μl/孔，37℃、5％CO2培养。
细胞融合后，有大量骨髓瘤细胞和皮细胞相继死亡，融合的杂交瘤细胞多半不易存活，因此通常需要添加其他活细胞使之繁殖，这种活细胞就叫饲养细胞。饲养细胞是为了促进杂交瘤细胞即融合细胞的生长；并且饲养细胞在培养10至20代后就会退化死亡，之后培养基上只剩下杂交瘤细胞。
2-2免疫脾细胞的制备
小鼠追加免疫三天后，在无菌条件下取出脾脏，置于平皿中，RPMI1640基础培养液冲洗一次，剪碎、研磨、过滤后得到分散的脾细胞，1000rpm，离心5分钟留沉淀，RPMI1640基础培养液重悬，3％乙酸稀释计数。
2-3骨髓瘤细胞的制备
小鼠骨髓瘤细胞Sp2/0(四川新材料生物科技有限公司保存)经8-氮鸟嘌呤筛选后，培养至对数生长期，取8大瓶(75cm2)制成细胞悬液，1000rpm离心5分钟留沉淀，用RPMI1640基础培养液重悬、计数，按1-3×105个/ml的细胞浓度进行分瓶培养，每1-2天更换一次15-30ml完全1640培养基。
2-4细胞融合及HAT选择培养杂交瘤
将骨髓瘤细胞与免疫脾细胞按1:5的比例混合，在50ml锥形离心管内用RPMI1640基础培养液洗1次，1000rpm离心5分钟留沉淀。将细胞混匀，缓慢加入1.5mL 50％的PEG4000融合，融合1分钟后加入50ml的RPMI1640基础培养液终止细胞融合反应。700rpm/min离心5分钟后重悬于含有1％HAT与20％新生牛血清的1640培养基中，平均滴入50套96孔细胞培养板，96孔细胞培养板内含有饲养细胞。于37℃，5％CO2培养，次日补加含有1％HAT与20％新生牛血清的1640培养基至孔满。5天后半换培养基，7天后再次半换培养基。
2-5阳性细胞株的筛选
用0.06M pH9.6碳酸缓冲溶液稀释重组HBsAg(购自菲鹏生物，批号20170926-2)至2.5ug/ml，96孔酶标板中每孔包被100μl，用于检测细胞培养上清。放置于冰箱中2-8℃过夜，第二天抛弃孔中液体，ELISA洗液洗板三次，拍干，用含0.5酪蛋白的0.01M pH7.2的PBS，150ul/孔，37℃封闭2小时，拍干，真空封装待用。脾细胞融合后第10天，取细胞上清100ul于上述96孔检测板中，37℃孵育40分钟，ELISA洗板机洗三次后加入10000倍稀释的山羊抗小鼠IgG/辣根酶标记的二抗(购自中杉金桥，批号135422)100μL，37℃孵育30分钟同上洗后，每孔加入100μL含0.1％(M/V)邻苯二胺，0.1％(V/V)双氧水，pH5.0柠檬酸磷酸缓冲液，37℃孵育10分钟，每孔再加入50μL 2M硫酸溶液终止反应，检测450nm吸收值。以融合时小鼠血清稀释100倍为阳性对照，RPMI 1640完全培养基作为阴性对照，阴性对照OD值＜0.2，阳性对照OD值＞1.8为检测系统有效，样本OD值≥2×阴性对照OD值时，为阳性，反之为阴性。分泌抗体阳性细胞孔以1个细胞/孔在96孔培养板上用有限稀释法克隆，筛选阳性孔依上法连续克隆四次，使其达到100％单克隆，转入24孔继续培养，待细胞长满80％时转入细胞瓶扩大培养后，待细胞长满细胞瓶80％时分瓶传代，传代的细胞生长至对数期时，用适量无血清RPMI-1640培养基分散细胞瓶内细胞，收集细胞悬液于锥形离心管中，记录细胞悬液体积V，取适量细胞悬液进行细胞计数，得到细胞悬液密度(个/ml)，其余1000rpm离心5min后弃上清液，根据细胞密度和离心前体积算出沉淀的细胞数，向细胞沉淀中加入适量冻存液调整细胞密度至4-8×106个/ml(取适量进行计数确认，如果细胞数未在范围内，则重新离心按照细胞计数总量，重新加入适量冻存液，最终使细胞浓度在4-8×106个/ml)，然后分装于无菌冻存管中，每只冻存管加细胞液0.5ml。细胞融合获得15株能稳定分泌鼠抗HBsAg单克隆抗体抗体的杂交瘤细胞株，见下表1。
表1 筛选得到的稳定分泌鼠抗HBsAg单克隆抗体的杂交瘤细胞株
杂交瘤细胞 杂交瘤细胞 杂交瘤细胞
20A6--E1-C C9-D8 34H3-A2-F9-D10-D1 50A10-G1-D2-C1-D5
16F6-D8-A3-B9-F2 12F2--H3-A5-D12-D9 47B10-H7-C8-H1-C7
2A3-C1-D2-C9-H1 29H9-F7-C5-F7-A1 40D1-C5-G8-B7-F1
29D3-A5-E11-F9-G10 21H10-E1-H11-F2-E5 50H9-C1-E5-B5-G9
32A1-E2-C14-E11-F9 10H11--H7-H6-D10-G5 38H5-H1-C8-B8-E9
其中，杂交瘤细胞株50H9-C1-E5-B5-G9所分泌的抗体在用于检测乙型肝炎病毒表面抗原时效果最优，此杂交瘤细胞株记作81#，于2019年3月21日保藏在中国典型培养物保藏中心(China Center for Type Culture Collection,简称CCTCC)。
实施例3单克隆抗体的制备
选6-8周健康的BALB/c小鼠，每只小鼠腹腔注射0.5mL液体石蜡(购自天津科密欧)，7天后每只小鼠腹腔注射0.5～1×106个杂交瘤细胞。接种细胞7-10天后可产生腹水，密切观察动物的健康状况与腹水征象，待腹水尽可能多，而小鼠濒死之前，处死小鼠，用滴管将腹水吸入试管中，每只小鼠可获1-5mL腹水。收集的腹水离心取上清，取小样放于-20℃冰箱保存。腹水用硫酸氨饱和沉淀后，再用蛋白A亲合层析柱纯化，SDS-PAGE检测此抗体(记作HBsAb-81)纯度大于90％，电泳结果如图1所示。
抗体分子含有四条异源性多肽链，包括两条分子量为50-75kD的重链和两条分子量为25kD的轻链。电泳结果显示，亲和柱纯化后的蛋白在50kD和25kD附近有条带，即利用该杂交瘤细胞成功制备得到单克隆抗体。
实施例4杂交瘤细胞培养上清效价检测
用0.06M pH9.6碳酸缓冲溶液稀释重组HBcAg(桂康生物)至3.0ug/ml，96孔酶标板中每孔包被100μl。放置于冰箱中2-8℃过夜，第二天抛弃孔中液体，ELISA洗板机洗三次，拍干，用含10％小牛血清的0.01M pH7.2的PBS，150ul/孔，37℃封闭2小时弃液体，拍干，用于检测杂交瘤细胞培养上清、腹水及抗体效价。杂交瘤细胞培养上清效价检测第一孔为原倍上清培养液，从第二孔至第十孔以0.01M pH7.2的PBS缓冲液连续5倍逐级稀释，第十一孔以融合时小鼠血清稀释至100倍作阳性对照，第十二孔以RPMI 1640完全培养液作阴性对照，每孔样本体积为100ul。37℃孵育40分钟，ELISA洗板机洗五次后加入10000倍稀释的山羊抗小鼠IgG/辣根酶标记的二抗(购自中杉金桥，批号135422)100μL，37℃孵育30分钟同上洗后，每孔加入100μL含0.1％(M/V)邻苯二胺，0.1％(V/V)双氧水，pH5.0柠檬酸磷酸缓冲液，37℃孵育10分钟，每孔加入50μL 2M硫酸溶液终止反应，测450nm吸收值。阴性对照OD值＜0.2，阳性对照OD值＞1.8为检测系统有效，当OD值≥2×阴性对照OD值时，为阳性，反之为阴性。检测值最低阳性孔所对应的稀释比例即为杂交瘤细胞培养上清效价，本杂交瘤细胞(81#)培养上清抗体效价大于1：3000。
表2 培养上清效价结果
Figure BDA0002013251410000081
实施例5腹水效价检测
ELISA检测方法同实施例4。稀释方法不同，具体为：第一孔为原倍腹水，以0.01MpH7.2的PBS缓冲液从第二孔至第七孔10倍逐级稀释，从第八孔至第十一孔以2倍逐级稀释。检测值最低阳性孔所对应的稀释比例即为腹水效价，本杂交瘤细胞(81#)所制备的腹水效价大于1：8×106。
表3 腹水效价
Figure BDA0002013251410000082
实施例6抗体效价检测
先将本抗体A以0.01M pH7.2的PBS缓冲液统一稀释为1mg/ml，后再稀释100倍作为初始第一孔，从第二孔开始至第十孔作5倍逐级稀释，第十一孔以融合时小鼠血清稀释至100倍作阳性对照，第十二孔以PBS作阴性对照，每孔样本体积为100ul。37℃孵育50分钟，ELISA洗板机洗五次后加入10000倍稀释的山羊抗小鼠IgG/辣根酶标记的二抗(购自中杉金桥，批号135422)100μL，37℃孵育1h同上洗后，每孔加入100μL含0.1％(M/V)邻苯二胺，0.1％(V/V)双氧水，pH5.0柠檬酸磷酸缓冲液，37℃孵育15分钟，每孔加入50μL 2M硫酸溶液终止反应，检测450nm吸收值。阴性对照OD值＜0.2，阳性对照OD值＞1.8为检测系统有效。抗体效价判定标准：以LOG(稀释度)为横坐标，以抗体OD值为纵坐标作曲线，曲线方程为y＝min+(max-min)/(1+10^((logEC50-x)×Hillslope))，通过sigmaplot数据处理软件拟合曲线，取中值效价＝10logEC50。结果显示本抗体HBsAb-81中值效价为27140。以同样方法对照检测两种商业化鼠抗HBsAg单克隆抗体B和C，通过拟合，B抗体中值效价为2308，C抗体中值效价为4405，低于本发明的杂交瘤细胞(81#)分泌的抗体。表4与图2示出了效价测定结果。
表4 抗体效价检测
酶标板孔号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
稀释度 100 500 2500 12500 62500 312500 1562500 7812500 39062500 195312500 阳性对照 阴性对照
LOG 2 2.699 3.398 4.097 4.796 5.495 6.194 6.893 7.592 8.291 / /
HB<sub>s</sub>Ab-81(OD) 4.699 4.616 4.312 3.468 1.217 0.327 0.158 0.064 0.051 0.045 2.960 0.081
B(OD) 4.070 3.619 2.052 1.199 0.392 0.184 0.126 0.108 0.092 0.091 2.583 0.067
C(OD) 3.520 3.330 2.340 1.068 0.384 0.221 0.094 0.074 0.080 0.068 2.565 0.071
实施例7乙型肝炎病毒检测试剂盒制备
应用于乙肝病毒五项联合检测卡(定性，胶体金法)，检测样本中HBsAg。原理为双抗体夹心法检测，作为包被，具体如下：HBsAg检测采用双抗体夹心法，在硝酸纤维素膜检测线和质控线上分别包被鼠抗HBsAg单克隆抗体、羊抗兔IgG多克隆抗体。检测阳性样本时，样本中的HBsAg与预包被的胶体金标记的鼠抗HBsAg单克隆抗体1结合形成复合物，随侧流层析效应在硝酸纤维素膜上移动，在检测线处形成夹心复合物而富集显色。胶体金标记的兔IgG继续向前移动，至质控线与羊抗兔IgG多克隆抗体结合，在质控线处聚集显色。阴性样本则仅质控线处显色，显色结果于15-20分钟内判定。
7-1胶体金复合物制备
确定鼠抗HBsAg单克隆抗体、兔IgG胶体金标记条件，按确定条件标记鼠抗HBsAg单克隆抗体、兔IgG。
7-2胶体金垫制备
按一定OD配制鼠抗HBsAg单克隆抗体、兔IgG胶体金复合物，按照3μl/cm喷于预处玻璃纤维膜上，42℃干燥过夜。
7-3膜包被
按一定浓度配制(C线)羊抗兔IgG多克隆抗体、(T线)HBsAb71/HBsAb81，按1μl/cm包被于CN140膜上，42℃干燥过夜。
实施例8交叉反应检测
用上述方法制备的检测试剂盒分别检测甲型肝炎病毒抗体阳性、丙型肝炎病毒抗体阳性、人类免疫缺陷病毒抗体阳性、梅毒螺旋体抗体阳性、戊型肝炎病毒抗体阳性及类风湿因子阳性的样本，均为阴性，与甲型肝炎病毒抗体阳性、丙型肝炎病毒抗体阳性、人类免疫缺陷病毒抗体阳性、梅毒螺旋体抗体阳性、戊型肝炎病毒抗体阳性及类风湿因子阳性的样本无交叉反应。如表5。
表5 交叉反应测定
样本类型 HBsAb-81
甲型肝炎病毒抗体阳性：HAV -
丙型肝炎病毒抗体阳性：HCV -
人类免疫缺陷病毒抗体阳性：HIV -
梅毒螺旋体抗体阳性：TP -
戊型肝炎病毒抗体阳性：HEV -
类风湿因子阳性：RF -
实施例9灵敏度测试
用上述方法制备的检测试剂盒分别检200例阳性样品与200例阴性样品。表6列出了本发明的单克隆抗体HBsAb-81制备的试剂盒与商业化试剂盒(厦门波生生物技术有限公司)的比较实验，检验结果表明本发明的单克隆抗体HBsAb-81制备的检测试剂盒其灵敏度及特异性均高于商业化试剂盒，在表6中列出了检测结果。
表6 阳性与阴性样本检验
Figure BDA0002013251410000101
实施例10检测本发明抗体制备的试纸条抗干扰能力
本发明设计了如下表所示的抗干扰实验条件和实验，从以下所显示的抗干扰实验结果可知，本发明的抗体对于血液中常见的抗干扰物质具有良好的抗干扰能力。
表7 抗干扰实验
Figure BDA0002013251410000102
Figure BDA0002013251410000111
实施例11稳定性检测
将本抗体A在以下条件下处理：a.-20℃反复冻融4次，b.-20℃反复冻融3次；c.-20℃反复冻融5次；d.-20℃反复冻融6次；e.-20℃反复冻融7次；f.-20℃保存3个月；g.37℃热加速7天；h.37℃热加速14天，其他条件不变，按上述方法制备成检测试剂分别检验20份阳性参考品与20份阴性参考品，符合率均为100％。表明本抗体稳定性良好，且利用本抗体制备的检测试剂精密性良好。选取效价及活性较好的商业化抗乙型肝炎病毒表面抗原单克隆抗体C，以上述同样条件处理后制备成检测试剂分别检测20份阳性参考品与20份阴性参考品，结果显示其反复冻融6至7次或热加速14天后活性下降，检验结果与参考品不完全符合。在表8中列出了检测结果。
表8 稳定性检测
Figure BDA0002013251410000112
由此可见，本发明的单克隆抗体稳定性高，在较为恶劣的环境条件下还能保持很高的稳定性与可靠性，这一点在临床以及实验室应用中均是非常宝贵的进步。
应该理解到披露的本发明不仅仅限于描述的特定的方法、方案和物质，因为这些均可变化。还应理解这里所用的术语仅仅是为了描述特定的实施方式方案的目的，而不是意欲限制本发明的范围，本发明的范围仅受限于所附的权利要求。
本领域的技术人员还将认识到，或者能够确认使用不超过常规实验，在本文中所述的本发明的具体的实施方案的许多等价物。这些等价物也包含在所附的权利要求中。

Claims (3)

1.一种杂交瘤细胞株，其特征在于，所述杂交瘤细胞株的保藏号为：CCTCC NO:C201946，其生产结合乙肝表面抗原的单克隆抗体。
2.一种结合乙肝表面抗原的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体由保藏编号为CCTCC NO:C201946的杂交瘤细胞株产生。
3.根据权利要求2所述的单克隆抗体在制备乙型病毒性肝炎或乙肝相关疾病的病情评估的试剂或试剂盒中的应用。
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