CN104823919A - 黔东南小香鸡隐性白羽新品系的培育方法及应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种黔东南小香鸡隐性白羽新品系的培育方法及应用，该方法按以下步骤进行：（1）用从黔东南小香鸡分离出的白羽鸡自交繁殖F1代；（2）根据分子标记辅助选择，从F1代中筛选出ii的隐性纯合等位基因型的个体；（3）用三黄鸡纯系或其他有色羽鸡纯系与F1进行测交，剔除F1中分离出的显性白羽个体和有色羽个体，结合步骤（2）的检测结果选育出隐性纯合的个体公母鸡，然后自繁生产B；（4）按照步骤（3）的方法，对步骤（3）中的W进行反复测交、选育，不断剔除分离出显性白羽个体和有色羽个体；将留选的隐性白羽个体进行自繁扩群，组建家系，培育出隐性白羽新品系。
Description
技术领域
本发明涉及一种黔东南小香鸡隐性白羽新品系的培育方法及应用，属养殖技术领域。
背景技术
黔东南小香鸡是贵州地方优良家禽品种资源之一，主产于贵州省从江、榕江和黎平县及邻近地区，以“小、土、香”著称。在多年的品种选育和种质创新过程中发现了白羽个体，约占总鸡群3～5%，该群体品种特征明显，全身覆盖纯白色羽毛，多为平头单冠，喙、胫为黑褐色，肉色为白或黑色，少数个体具有胫羽，俗称裤裙鸡；该鸡具有耐粗饲，抗病力强的优点，且肉质细嫩，口感鲜美，营养丰富。更为难得的是白羽鸡抱性较低，年平均产蛋量较同品种的有色羽鸡群高出40～50%，其缺点是体型小、生长慢、产蛋量低、蛋重小。
发明内容
本发明的目的在于：提供一种提高准确性、缩短世代间隔、加快育种进程的黔东南小香鸡隐性白羽新品系的培育方法及应用，以克服现有技术的不足。
本发明的技术方案：一种黔东南小香鸡隐性白羽新品系的培育方法，包括以下步骤：
（1）用从黔东南小香鸡分离出的白羽鸡自交繁殖产生F1代；
（2）从F1代中筛选出鸡PMELl7基因ii的隐性纯合等位基因型的个体：
① 样品采集
采集黔东南小香鸡白羽鸡的血液，并加EDTA－Na2抗凝，－20℃保存备用；
② 基因组DNA提取与引物设计
利用TIANamp Blood DNA Kit试剂盒提取目的DNA，根据NCBI公布的鸡PMEL17 基因(登录号为:GenBank Accession No.AY636129)的第10外显子序列，采用Primer5.0软件自行设计引物，目的片段扩增长度528bp；
F 5' GCACAGCGCAGATGCAGAC 3'
R 5' CAGCAGCAAACGCAGGGTAG 3'
③25 uLPCR反应体系为
DNA模板1 uL，上下游引物各2 uL，2xTaq PCR MasterMix 试剂12.5 uL，加ddH2O至7.5 uL；PCR反应参数(30循环)：94℃预变性5 min；94℃变性30 s，57℃退火45 s，72℃延伸90 s；最后72℃延伸10 min，4℃保存；其中，2xTaq PCR MasterMix购自天根生化科技有限公司；
④PCR扩增产物的检测及结果判定
取10 uL PCR扩增产物，用1%琼脂糖凝胶电泳检测(电泳电压：120V，电泳时间：30 min)，凝胶成像系统检测是否为目的条带，再切胶回收PCR扩增产物，进行直接测序检测黔东南小香鸡白羽鸡PMEL17基因多态性；结果显示样本的PMELl7基因序列第10外显子49位点起有9-bp缺失变异(-CTGGGCACC-)，均为ii基因型，且对应三个氨基酸的缺失，即色氨酸，丙氨酸和脯氨酸。
⑤待检个体的选择与淘汰
根据检测结果，培育纯合隐性白羽鸡群体的选留ii基因型，将所有纯合隐性白羽个体留种进行扩繁，将形成一个纯合群体，用于育种；
（3）用三黄鸡纯系或其他有色羽鸡纯系与F1进行测交，剔除F1中分离出的显性白羽个体和有色羽个体，结合步骤(2)的检测结果选育出隐性纯合的个体公母鸡，然后自繁生产W；
（4）按照步骤(3)的方法，对步骤(3)中的W进行反复测交、选育，不断剔除分离出显性白羽个体和有色羽个体；将留选的隐性白羽个体进行自繁扩群，组建家系，培育出隐性白羽新品系。
本发明还提供了一种采用上述方法培育出的隐性白羽新品系用于提高贵州地方鸡种的产蛋率的方法，该方法是用隐性白羽鸡作父本，中型高产蛋鸡作母本，生产出F1代鸡；用F1代鸡作母本，贵州地方鸡作父本，生产出F2代鸡。培育出F2代鸡保持了贵州地方鸡种原有的体型外貌和优良的肉质风味，因含有外来高产蛋鸡25%的血缘，会在一定程度上提高生长速度，增加产蛋量和蛋重，适合规模化生态养殖。
本发明还提供了一种采用上述方法培育出的隐性白羽新品系用于改善外来鸡种的肉质风味的方法，该方法用隐性白羽鸡作父本，速生型肉鸡作母本，生产出F1代鸡。培育出F1代鸡含有隐性白羽鸡血缘50%，可显著改善肉质风味，增强抗病力。
与现有技术相比，本发明的优点在于：本发明利用同质选配和近交繁育，结合分子标记辅助选育，提高了黔东南小香鸡白羽鸡基因纯合度以及遗传稳定性。同时，由于系间遗传结构差异较大，采用本发明的方法进行杂交时会产生明显的杂种优势，因此将该隐性白羽鸡应用于二系或三系配套杂交，既加速种群的遗传进展和现有品种的改良，又能培育出符合市场需求的品种。而且培育出遗传性能稳定的地方隐性白羽新品系参与到配套应用中，具有以下优点：一是抗病力强，无引进疫病风险；二是在提高产蛋率的同时保持了小体型，降低耗料比，适合规模化养殖；三是保持了地方鸡种的优良肉质风味。
附图说明
图1为本发明中PMELl7基因ii的隐性纯合等位基因型的测序图。
图2为本发明实施例1的技术路线图。
图3为本发明实施例2的技术路线图。
具体实施方式
为了使本发明目的、技术方案和优点更加清楚，下面结合附图及实施例对本发明作进一步的详细说明。
本发明一种黔东南小香鸡隐性白羽新品系的培育方法，包括以下步骤：
（1）用从黔东南小香鸡分离出的白羽鸡自交繁殖F1代。
（2）从F1代中筛选出鸡PMELl7基因ii的隐性纯合等位基因型的个体。
① 样品采集
采集黔东南小香鸡白羽鸡36只。翅下静脉采血1～1.5mL，加EDTA－Na2抗凝，－20℃保存备用。
② 基因组DNA提取与引物设计
利用TIANamp Blood DNA Kit试剂盒提取目的DNA。根据NCBI公布的鸡PMEL17 基因(登录号为:GenBank Accession No.AY636129)的第10外显子序列，采用Primer5.0软件自行设计引物，目的片段扩增长度528bp。
F 5' GCACAGCGCAGATGCAGAC 3'
R 5' CAGCAGCAAACGCAGGGTAG 3'
③25 uLPCR反应体系为
DNA模板1 uL，上下游引物各2 uL，2xTaq PCR MasterMix 试剂12.5 uL，加ddH2O至7.5 uL。PCR反应参数(30循环)：94℃预变性5 min；94℃变性30 s，57℃退火45 s，72℃延伸90 s；最后72℃延伸10 min，4℃保存。其中，2xTaq PCR MasterMix购自天根生化科技有限公司。
④PCR扩增产物的检测及结果判定
取10 uL PCR扩增产物，用1%琼脂糖凝胶电泳检测(电泳电压：120V，电泳时间：30 min)，凝胶成像系统检测是否为目的条带，再切胶回收PCR扩增产物，进行直接测序检测黔东南小香鸡白羽鸡PMEL17基因多态性。结果显示36个样本的PMELl7基因序列第10外显子49位点起有9-bp缺失变异(-CTGGGCACC-)，均为ii基因型，且对应三个氨基酸的缺失，即色氨酸，丙氨酸和脯氨酸。测序图如图1所示。
⑤待检个体的选择与淘汰
根据检测结果，培育纯合隐性白羽鸡群体的选留ii基因型，将所有纯合隐性白羽个体留种进行扩繁，将形成一个纯合群体，用于育种。
（3）用三黄鸡纯系或其他有色羽鸡纯系与F1进行测交，剔除F1中分离出的显性白羽个体和有色羽个体，结合步骤（2）的检测结果选育出隐性纯合的个体公母鸡，然后自繁生产W。
（4）按照步骤（3）的方法，对步骤（3）中的W进行多次测交、选育，不断剔除分离出显性白羽个体和有色羽个体；将留选的隐性白羽个体进行自繁扩群，组建家系，培育出隐性白羽新品系。
实施例1
本发明一种采用上述方法培育出的隐性白羽新品系用于提高贵州地方鸡种的产蛋率的方法，该方法的实施步骤参见图2，即：
（1）F1代鸡的培育：选用隐性白羽鸡作父本，其特点是遗传性能稳定，品种特征明显体型外貌整齐，生长性能良好，7月龄公鸡体重达1.2 Kg。
中型高产蛋鸡作母本（一般产褐壳蛋），其特点是遗传基础较纯，产蛋性能良好，72周龄产蛋量可达270枚以上，平均蛋重55 g以上。
采用人工授精技术，将上述的亲本进行二系配套，生产出F1代鸡。
（2）F2代鸡的培育：选择体型外貌整齐的F1代鸡作母本。
选择贵州地方鸡(如威宁鸡、瑶山鸡)作父本，其优点是耐粗饲、肉质好、体型较大，生长发育快，毛色绚丽，全身以黄或红羽为主，翅边缘和尾羽有少量黑色羽，红冠，胫、趾黑或青色。
采用人工授精技术，将上述的亲本进行三系配套，生产出F2代鸡。
培育出F2代鸡保持了贵州地方鸡种原有的体型外貌和优良的肉质风味，因含有外来高产蛋鸡25%的血缘，会在一定程度上提高生长速度，增加产蛋量和蛋重，适合规模化生态养殖。
实施例2
本发明一种采用上述方法培育出的隐性白羽新品系用于改善外来鸡种的肉质风味的方法，该方法的实施步骤参见图3，即：
（1）选用隐性白羽鸡作父本，其特点是遗传性能稳定，品种特征明显体型外貌整齐，生长性能良好，7月龄公鸡体重达1.2 Kg。
速生型肉鸡作母本，其特点是遗传基础较纯，生长速度快，但肉质较差、口感粗糙。
（2）采用人工授精技术，将上述的亲本进行二系配套，生产出F1代鸡。
培育出F1代鸡含有隐性白羽鸡血缘50%，可显著改善肉质风味，增强抗病力；在育种中可通过多次杂交选育，获得血缘含量不同的新品系。
Claims (3)
1.一种黔东南小香鸡隐性白羽新品系的培育方法，其特征在于包括以下步骤：
（1）用从黔东南小香鸡分离出的白羽鸡自交繁殖产生F1代；
（2）从F1代中筛选出鸡PMELl7基因ii的隐性纯合等位基因型的个体：
① 样品采集
采集黔东南小香鸡白羽鸡的血液，并加EDTA－Na2抗凝，－20℃保存备用；
② 基因组DNA提取与引物设计
利用TIANamp Blood DNA Kit试剂盒提取目的DNA，根据NCBI公布的鸡PMEL17 基因(登录号为:GenBank Accession No.AY636129)的第10外显子序列，采用Primer5.0软件自行设计引物，目的片段扩增长度528bp；
F 5' GCACAGCGCAGATGCAGAC 3'
R 5' CAGCAGCAAACGCAGGGTAG 3'
③25 uLPCR反应体系为
DNA模板1 uL，上下游引物各2 uL，2xTaq PCR MasterMix 试剂12.5 uL，加ddH2O至7.5 uL；PCR反应参数(30循环)：94℃预变性5 min；94℃变性30 s，57℃退火45 s，72℃延伸90 s；最后72℃延伸10 min，4℃保存；其中，2xTaq PCR MasterMix购自天根生化科技有限公司；
④PCR扩增产物的检测及结果判定
取10 uL PCR扩增产物，用1%琼脂糖凝胶电泳检测(电泳电压：120V，电泳时间：30 min)，凝胶成像系统检测是否为目的条带，再切胶回收PCR扩增产物，进行直接测序检测黔东南小香鸡白羽鸡PMEL17基因多态性；结果显示样本的PMELl7基因序列第10外显子49位点起有9-bp缺失变异(-CTGGGCACC-)，均为ii基因型，且对应三个氨基酸的缺失，即色氨酸，丙氨酸和脯氨酸；
⑤待检个体的选择与淘汰
根据检测结果，培育纯合隐性白羽鸡群体的选留ii基因型，将所有纯合隐性白羽个体留种进行扩繁，将形成一个纯合群体，用于育种；
（3）用三黄鸡纯系或其他有色羽鸡纯系与F1进行测交，剔除F1中分离出的显性白羽个体和有色羽个体，结合步骤(2)的检测结果选育出隐性纯合的个体公母鸡，然后自繁生产W；
（4）按照步骤(3)的方法，对步骤(3)中的W进行反复测交、选育，不断剔除分离出显性白羽个体和有色羽个体；将留选的隐性白羽个体进行自繁扩群，组建家系，培育出隐性白羽新品系。
2.一种采用权利要求1所述的方法培育出的隐性白羽新品系用于提高贵州地方鸡种的产蛋率的方法，其特征在于：用隐性白羽鸡作父本，中型高产蛋鸡作母本，生产出F1代鸡；用F1代鸡作母本，贵州地方鸡作父本，生产出F2代鸡。
3.一种采用权利要求1所述的方法培育出的隐性白羽新品系用于改善外来鸡种的肉质风味的方法，其特征在于：用隐性白羽鸡作父本，速生型肉鸡作母本，生产出F1代鸡。
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