CN104800471A - 一种用于治疗痛风性关节炎的中药组合物及其制备方法和用途 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种用于治疗痛风性关节炎的中药组合物及其制备方法和用途。本发明的中药组合物，其有效成分由车前子和通天草组成。优选所述中药组合物是按照车前子与通天草重量比为1-1.5：0.5-1，更优选为1:1的比例混合而成。研究表明，车前子和通天草组成的中药组合物可以改善痛风性关节炎昆明小鼠模型的关节炎症反应，降低小鼠模型足趾部的肿胀程度，改善小鼠模型的脾脏指数，同时降低小鼠模型的IL-12、IL-1β、IL-6蛋白的表达水平，并且对小鼠模型的体重无明显影响。以上结果表明车前子和通天草中药组合物对痛风性关节炎的治疗效果良好，在痛风性关节炎治疗领域将具有广阔的应用前景。

Description

一种用于治疗痛风性关节炎的中药组合物及其制备方法和用途

技术领域

本发明涉及一种中药组合物及其制备方法和用途，特别涉及一种用于治疗痛风性关节炎的中药组合物及其制备方法和用途，本发明属于中药研究技术领域。

背景技术

痛风性关节炎是一种危害机体健康的常见疾病之一，主要表现为关节部位出现无细菌感染性质的疼痛，机体关节部位疼痛往往比较剧烈，疼痛的部位比较局限。近年来，随着饮食结构的改变，人们生活水平的提高，痛风性关节炎的发病率明显增加，而且出现了年轻化的趋势，从而严重影响着机体的健康。

痛风性关节炎的发病机制比较复杂，主要是由于机体的饮食结构出现异常，引起机体的嘌呤代谢出现异常，造成尿酸在体内的产生过多或者是机体排泄尿酸的功能下降，引起尿酸在机体内部的大量积聚，尿酸的积聚可以形成大量的尿酸盐，尿酸盐可以在机体的循环系统内流动，当尿酸盐循环到机体血液循环较差的部位，例如机体的关节及其关节的周围组织，就可以引起尿酸盐结晶在体内关节及其关节的周围组织积聚，形成无菌性的炎症反应，造成机体的疼痛，反复发作，病情迁延不愈，引起关节的活动受限，影响到关节的正常功能。

研究表明，痛风性关节炎的发病机制和机体的炎症因子有明显的关系，其中IL-1β是介导痛风性关节炎的重要炎症因子，尿酸盐介导的痛风性炎症反应机制是尿酸盐被巨噬细胞吞噬，通过一定途径使特殊炎性体活化，激活Caspase-1，分泌和释放成熟的IL-1β，活化的IL-1β被靶细胞上的IL-1β受体结合，激活炎症转录因子核转录因子-κB(NF-κB)，产生和释放大量炎症介质，诱导痛风性炎症反应的发生发展(Martinon F.Mechanisms of uric acid crystal mediated auto in flamm ation[J].Immunol Rev，2010，233:218-232.Rosengren S，Hoffman HM，BugbeeW，et al.Expression and regulation of cryopyrin and related proteins in rheumatoid arthritis synovium[J].AnnRheum Dis，2005，64(5):708-714.Strober W，Murray PJ，Kitan i A，et al.Signalling pathw ays and molecular in teractions of NOD1and NOD2[J].NatRev Immunol，2006，6(1):9-20.Tschopp J，Martinon F，BurnsK.NALPs:a novel protein fam  ily involved in inflamm ation[J].NatRev MolCell Biol，2003，4(2):95-104.Yu HB，Finlay BB.The caspase-1inflammasome:a pilot of innate immune responses[J].Cell Host Microbe，2008，4:198-208.)。

由于痛风性关节炎是由于尿酸盐结晶的大量积聚导致机体出现相应的症状和体征，引发机体出现痛风性关节炎的炎症指数、肿胀程度、相关的炎症因子出现改变。研究者显示，尿酸盐的关节注射可以诱发机体出现典型的痛风性关节炎临床表现(Lee HP，Lin YY，Duh CY，et al.Lemnalol attenuates mast cell activation and osteoclast activity in a gouty arthritis model[J].J Pharm Pharmacol.2015Feb；67(2):274-85.Shi L，Xu L，Yang Y，et al.Suppressive effect of modified Simiaowan onexperimental gouty arthritis:an in vivo and in vitro study[J].J Ethnopharmacol.2013Dec12；150(3):1038-44.Miao Z，Guo W，Lu S，Hypothermia induced by adenosine5'-monophosphate attenuates early stage injury in an acute gouty arthritis rat model[J].Rheumatol Int.2013Aug；33(8):2085-92.)。

因此，本发明以昆明小鼠为研究对象，采用尿酸盐制备痛风性关节炎的模型，采用车前子和通天草中药组合物开展了对痛风性关节炎的实验研究，以便观察车前子和通天草中药组合物对昆明小鼠痛风性关节炎模型的足趾部关节炎症反应，足趾部的肿胀程度，脾脏指数，IL-12、IL-1β、IL-6蛋白的表达水平及其对昆明小鼠体重的影响作用，以期为临床治疗痛风性关节炎提供理论依据。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种用于治疗痛风性关节炎的中药组合物及其制备方法和用途。

本发明的一种用于治疗痛风性关节炎的中药组合物，其有效成分由车前子和通天草组成。

通天草，是祖国医药莎草科植物荸荠的地上部分，也称为荸荠苗、地栗梗或者荸荠梗，一般是在夏天的时候采集，将荸荠的地上部分割下来，进行晾晒、切成小条、于干燥的地方保存，最终得到的部分就是通天草。在祖国医药典籍《饮片新参》和苏医《中草药手册》记载到，通天草可以利尿、清热、通淋、治疗呃逆、治疗小便不利。

车前子具有明显的清热、利尿、祛湿、祛痰等诸多功效，对高尿酸血症的痛风有明显的治疗效果。现代药理学研究显示，车前子具有明显的利尿、免疫调节、降 血糖、降血脂、抗炎、抗氧化等作用。

在本发明中，优选的，所述车前子和通天草的重量比为1-1.5：0.5-1。更优选的，所述车前子和通天草的重量比为1：1。

进一步的，本发明还提出了一种临床上适宜的用于治疗痛风性关节炎的中药制剂，其特征在于由本发明所述的中药组合物加入制剂成型所需的辅料，按照制备药物制剂的常规方法制成。

本发明制剂的制备方法属于常规制剂方法，在此无庸赘述。

在本发明中，优选的，所述的制剂为水煎剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、片剂或口服液。

更进一步的，本发明还提出了一种制备所述的中药组合物的方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)精密电子天平分别称取通天草和车前子，所述车前子和通天草的重量比为1-1.5：0.5-1，放入高颈圆底烧瓶中，加入药物重量5-10倍的蒸馏水，用玻璃棒搅拌均匀，瓶口放上圆形中间有孔的活塞，在活塞上放上冷凝管，用铁架子固定好冷凝管，冷凝管的出水口和入水口连接塑料管，入水口在下方连接水龙头，出水口在上方，通过塑料管直接放在水池内；

(2)打开冷凝管下方的入水口，出水口放在水池中，水流适当，车前子和通天草的组合物在这样的环境下浸泡1-2h，煎煮1-2h，等待5-10min，将高颈圆底烧瓶内的液体倒入覆盖有6层白色干净纱布的双筒蒸锅中，再将高颈圆底烧瓶垂直倒立，直到没有任何液体流出，得到含有车前子和通天草成分的滤液；

(3)将烧瓶中剩余的车前子和通天草中药组合物的药液用干净纱布过滤、拧干，直到所有车前子和通天草中药组合物残渣都进行纱布滤过，将滤液倒入步骤(2)的双筒蒸锅中，得到的含有车前子和通天草中药组合物的第一次滤液；

(4)剩余的车前子和通天草的滤渣重复步骤(1)-(3)进行第二次煎煮以及过滤处理，得到第二次滤液，合并滤液；

(5)设定另外的电热恒温水浴锅温度为70℃，将步骤(4)得到的滤液放入电热恒温水浴锅中，打开门窗及其室内抽气机，直到干燥物较硬的时候再将托盘放在电热恒温鼓风干燥箱内，设定电热恒温鼓风干燥箱温度为70℃，4-5d，直到干燥物用镊子触及无松软感觉，所得到的残留物就是车前子和通天草中药组合物的干膏。

将得到的干膏放在粉碎机内粉碎，直到可以用分子筛筛过为止，还可得到车前子和通天草中药组合物的干粉。

在本发明所述的方法中，优选的，所述车前子和通天草的重量比为1：1。

研究表明，车前子(1g·kg^-1·d^-1)和通天草(1g·kg^-1·d^-1)按照1：1中药组合物治疗痛风性关节炎有效。单独的车前子(2g·kg^-1·d^-1)对于治疗痛风性关节炎有效，但是剂量较组合物加倍。单独的通天草(1g·kg^-1·d^-1)治疗痛风性关节炎无效。因此，该结果表明：通天草可以增强车前子的治疗效果，从而减少车前子的用药剂量；此外，车前子和通天草的中药组合物可以改善昆明小鼠的关节炎症反应，降低昆明小鼠足趾部的肿胀程度，改善昆明小鼠的脾脏指数，降低昆明小鼠的IL-12、IL-1β、IL-6蛋白的表达水平，并且对小鼠体重无明显影响，说明车前子和通天草中药组合物对痛风性关节炎的治疗效果良好。

因此，更进一步，本发明还提出了所述的中药组合物在制备治疗痛风性关节炎药物中的用途。

附图说明

图1车前子和通天草中药组合物对痛风性关节炎小鼠足趾关节肿胀度的影响；

图2车前子和通天草中药组合物对痛风性关节炎小鼠足趾关节炎症指数的影响；

图3车前子和通天草中药组合物对痛风性关节炎小鼠脾脏脏器指数的影响；

图4车前子和通天草中药组合物对痛风性关节炎小鼠足趾关节组织IL-6蛋白表达的影响；

图5车前子和通天草中药组合物对痛风性关节炎小鼠足趾关节组织IL-12蛋白表达的影响；

图6车前子和通天草中药组合物对痛风性关节炎小鼠足趾关节组织IL-1β蛋白表达的影响；

图7车前子和通天草中药组合物对痛风性关节炎小鼠体重的影响。

具体实施方式

下面通过实验并结合实施例对本发明做进一步说明，应该理解的是，这些实施例仅用于例证的目的，决不限制本发明的保护范围。

实施例1一种用于治疗痛风性关节炎的中药组合物的制备

本发明的药物组合物由以下重量的各原料药组成：车前子400g和通天草400g。

实施例2一种用于治疗痛风性关节炎的中药组合物的制备

本发明的药物组合物由以下重量的各原料药组成：车前子600g和通天草400g。

实施例3一种用于治疗痛风性关节炎的中药组合物的制备

本发明的药物组合物由以下重量的各原料药组成：车前子600g和通天草200g。

实施例4一种用于治疗痛风性关节炎的中药组合物的制备

1、车前子和通天草中药组合物的粗提取

精密电子天平称取通天草400g和车前子400g放入20000ml高颈圆底烧瓶中，加入6000ml蒸馏水，用一米长玻璃棒搅拌均匀，瓶口放上圆形中间有孔的活塞，在活塞上放上一米长冷凝管，用铁架子固定好冷凝管，冷凝管的出水口和入水口连接塑料管，入水口在下方连接水龙头，出水口在上方，通过塑料管直接放在水池内。打开冷凝管下方的入水口，出水口放在水池中，水流适当，车前子和通天草的组合物在这样的环境下浸泡2h，煎煮2h，等待10min，将高颈圆底烧瓶内的液体倒入覆盖有6层白色干净纱布的双筒蒸锅中，再将高颈圆底烧瓶垂直倒立3min，直到没有任何液体流出，得到含有车前子和通天草成分的滤液，然后将烧瓶中剩余的车前子和通天草中药组合物的药液用干净纱布过滤、拧干，直到所有车前子和通天草中药组合物残渣都进行纱布滤过，将滤液倒入双筒蒸锅中。在双筒蒸锅中得到的就是含有车前子和通天草中药组合物的第一次滤液，剩余的车前子和通天草的组合物的滤渣重复上面过程进行第二次煎煮以及过滤处理，得到第二次滤液，合并滤液。设定另外的电热恒温水浴锅温度为70℃，将上述得到的滤液放入电热恒温水浴锅中，打开门窗及其室内抽气机，直到干燥物较硬的时候再将托盘放在电热恒温鼓风干燥箱内，设定电热恒温鼓风干燥箱温度为70℃，4-5d，直到干燥物用镊子触及无松软感觉，所得到的残留物就是车前子和通天草中药组合物的干膏。

2、车前子和通天草中药组合物的出膏率计算

车前子和通天草中药组合物提取工艺过程中干膏的出膏率较低，得到干膏202.8g，车前子和通天草的生药量是800g，出膏率为干膏/车前子和通天草混合物×100％＝25.35％。

3、车前子和通天草中药组合物的干粉

带上手套，用有柄的铲子轻轻的将车前子和通天草中药组合物干膏刮下来，放在电热恒温鼓风干燥箱内保存，重复上面的过程，直到收集到车前子和通天草中药 组合物干膏，在将干膏放在粉碎机内粉碎，直到可以用分子筛筛过为止，并且要将粉碎机及其分子筛的残留的干粉都刮下来，在进行研磨，反复分子筛处理，减少损失。粉碎机内粉碎后得到车前子和通天草中药组合物干粉200.4g，车前子和通天草的生药量是800g，出粉率为干粉/车前子和通天草混合物×100％＝25.05％，即获得1g车前子和通天草干粉需要原药材3.99g。

4、车前子和通天草中药组合物的保存

精密电子天平放好白色包装纸，调零后称取车前子和通天草中药组合物干粉10g，放在白色的包装纸内包好，车前子和通天草中药组合物干粉分装后，外面用保鲜膜包好，在装于保鲜袋内，密封放置在-20℃冰箱内保存，保质期1-2年，药品成分不会发生改变。

实施例5本发明的中药组合物在治疗痛风性关节炎中的用途

1 材料

1.1 动物

雄性，昆明小鼠，清洁级，60只，25±2g，黑龙江中医药大学实验动物中心李宝龙提供，质量合格证书号码：SCXK(黑)2013-004。昆明小鼠饲养在常温、常湿的适宜屏障动物实验设施环境中，给予昆明小鼠无菌的饲料和蒸馏水，昆明小鼠自由摄取食物、分笼饲养。

1.2 药物

实验药材通天草由黑龙江中医药大学周忠光教授购自黑龙江哈尔滨市药材公司，按照1989年江苏地方标准进行鉴定，参照有关药材通天草的各项规定检查，鉴定通天草的结果均符合规定，可以用于实验研究。车前子，批号1403130，购于江阴天江药业有限公司。车前子和通天草中药组合物的提取由黑龙江中医药大学实验中心田明教授负责；别嘌呤醇，重庆青阳药业有限公司，批号：130601；尿酸钠，Sigma公司，货号：U2875-5G；蒸馏水，哈尔滨市文景蒸馏水厂；其他试剂均为国产分析纯。

1.3 仪器

RE-52A旋转蒸发仪，上海亚荣生化仪器厂生产；PLZOZ-S电子天平，梅特勒-托利多仪器有限公司；TGL-16G台式离心机，上海安亭科学仪器厂；SIMF124制冰机，日本三洋公司；6100型RT-雷杜酶标仪，美国RT公司；超净工作台，苏州博莱尔净化设备有限公司；101-0AB型电热恒温鼓风干燥箱，天津市泰斯特仪器有 限公司生产；SK250LH型高频数控超声波清洗器，上海市科导超声仪器有限公司生产；SHB-IIIA型循环水式多用真空泵，郑州长城科工贸有限公司；酒精计，河北省河间市玻璃厂等。

2 方法

2.1 小鼠分组

实验按照随机数字表的数字排列顺序将60只昆明小鼠随机分为6组，包括对照组10只、模型组10只、治疗组10只、车前子组10只、车前子和通天草组10只、通天草组10只。每组昆明小鼠采用黄色苦味酸溶液对小鼠进行9位法进行常规的标号，观察小鼠的一般状态，包括毛发颜色、活动度、排泄物、是否受伤，食物和饮水是否正常等等。

2.2 痛风性关节炎模型制备及其评价

昆明小鼠正常饲养1周后，观察一般状态良好，开始进行痛风性关节炎模型制备。参考文献(费洪新，韩玉生，廖婷，等.车前子对小鼠急性痛风性关节炎的影响[J].黑龙江科学，2014，5(5):9-11.[蒋芳萍，傅旭春，白海波.豨莶草的小鼠急性毒性及抗小鼠急性痛风性关节炎作用[J].中国现代应用药学，2013，30(12)：1289-1291.)制备痛风性关节炎模型。选择模型组、治疗组、车前子组、车前子和通天草组、通天草组小鼠共50只制备痛风性关节炎模型。需要首先配制2.5％的尿酸钠溶液，消毒昆明小鼠足趾部，在小鼠一侧后足右侧足底皮下及其同侧后足右侧背侧足趾部注射0.05ml 2.5％尿酸钠溶液。痛风性关节炎造模后，出现小鼠足趾部出现明显肿胀，无液体溢出，提示造模成功。另外同时对照组小鼠10只同侧足趾部相同部位给予相同体积生理盐水进行处理。

2.3 给药

造模后2h开始给药，对照组10只小鼠给予生理盐水0.4ml灌胃5天；模型组10只给予生理盐水0.4ml灌胃5天；治疗组10只给予0.02g·kg^-1·d^-1别嘌呤片0.4ml灌胃5天；车前子组10只给予车前子生药量2g·kg^-1·d^-1的0.4ml灌胃5天；车前子和通天草组10只给予车前子和通天草中药组合物(车前子和通天草1:1混合)生药量2g·kg^-1·d^-1的0.4ml灌胃5天；通天草组10只给予通天草生药量1g·kg^-1·d^-1的0.4ml灌胃5天。

2.4 判定足趾关节肿胀度

实验结束后2h，昆明小鼠在末次给药后，采用乙醚在密闭的玻璃容器中麻醉小鼠，随时观察昆明小鼠的一般状态，避免麻醉过度，实验前在每只昆明小鼠的膝关 节弯曲部用记号笔标记一条横线，在这条横线以下部位的小鼠足部均剪下来，放入装有生理盐水的10ml量筒中，精确观察小鼠足部容积刻度，记录下来进行分析。

计算公式：足趾部肿胀度(ml)＝实验后小鼠足趾部容积(ml)－实验前小鼠足趾部容积(ml)。

2.5 痛风性关节炎的炎症指数

痛风性关节炎的炎症指数分级包括4级，这种痛风性关节炎的评分分级是0级0分，1级2分，2级4分，3级6分。痛风性关节炎的炎症指数的评价标准是0级表示小鼠足部无红肿、红斑、肿胀，足部的骨性标志清晰可见，显示足趾部正常；1级表示小鼠足部轻度肿胀，关节周围皮肤出现红斑，可以看到小鼠足部的骨性标志；2级小鼠足部出现局限性肿胀、关节红肿，小鼠足部的骨性标致看不到；3级足趾部关节以外的部位出现肿胀，例如膝关节出现轻度或者重度肿胀等。

2.6 痛风性关节炎的脾脏指数

实验结束2h后，超净工作台上放置冰台，冰台上操作取材，迅速断头处死各组小鼠，取材小鼠脾脏，电子天平精确称取小鼠脾脏脏器质量，计算小鼠脾脏的脏器指数。

小鼠脾脏的脏器指数计算公式：脾脏的脏器指数(mg·g^-1)＝脾脏脏器质量(mg)/小鼠体重(g)

2.7 痛风性关节炎足趾部组织的IL-6、IL-12和IL-1β蛋白的含量测定

实验结束2h后，各组小鼠断头处死，超净工作台上放置冰台，冰台上操作取材，迅速取小鼠的足趾部组织，去除小鼠的足部皮肤，加入1.5ml生理盐水，匀浆器匀浆小鼠的足趾部组织，取上清液体，在加入1.5ml的生理盐水，反复匀浆小鼠足趾部组织，吸取上清液，合并两次的滤液，4℃冰箱静置，5000rpm·min^-1离心10min，吸取足趾部组织上清液，分装，-20℃低温保存。按酶联免疫试剂盒说明书进行操作，使用6100型RT-雷杜酶标仪450nm波长处测定各孔吸光度(A)，根据标准曲线求得足趾部组织IL-6、IL-12和IL-1β蛋白的含量。

2.8 小鼠各组体重测定

实验前昆明小鼠正常饲养，小鼠饲养一周期的稳定期间需要采用电子天平每2天测定小鼠体重，小鼠灌胃时每天测定小鼠体重，实验结束前最后测定小鼠体重，以最后测的小鼠体重为实验统计数据，计算比较各组小鼠的体重差异。

2.9 统计学处理 

实验数据采用SPSS19.0软件进行统计学处理，实验数据采用表示，多组间 采用单因素方差分析实验数据。P<0.05认为差异有统计学意义。

3 结果

3.1 车前子和通天草中药组合物对痛风性关节炎小鼠足趾关节肿胀度的影响

实验结束后，与对照组相比较，模型组昆明小鼠痛风性关节炎的足趾部关节肿胀度明显升高(P＜0.05)；与模型组比较，治疗组、车前子组、车前子和通天草组昆明小鼠痛风性关节炎的足趾部关节肿胀度明显降低(P＜0.05)；与模型组比较，通天草组昆明小鼠痛风性关节炎的足趾部关节肿胀度降低不明显(P＞0.05)(见表1、图1)。

表1 车前子和通天草中药组合物对痛风性关节炎小鼠足趾关节肿胀度的影响

注：与对照组比较：¹⁾P＜0.05；与模型组比较：²⁾P＜0.05，³⁾P＞0.05

3.2 车前子和通天草中药组合物对痛风性关节炎小鼠足趾关节炎症指数的影响

实验结束后，与对照组相比较，模型组昆明小鼠痛风性关节炎的足趾部关节炎症指数明显升高(P＜0.05)；经过治疗后，与模型组比较，治疗组、车前子组、车前子和通天草组昆明小鼠痛风性关节炎的足趾部关节炎症指数明显降低(P＜0.05)；经过治疗后，与模型组比较，通天草组昆明小鼠痛风性关节炎的足趾部关节炎症指数降低不明显(P＞0.05)(见表2、图2)。

表2 车前子和通天草中药组合物对痛风性关节炎小鼠足趾关节炎症指数的影响 

注：与对照组比较：¹⁾P＜0.05；与模型组比较：²⁾P＜0.05，³⁾P＞0.05

3.3 车前子和通天草中药组合物对痛风性关节炎小鼠脾脏脏器指数的影响

由表3分析可见，与对照组比较，模型组昆明小鼠痛风性关节炎脾脏脏器指数明显升高(P＜0.05)，与模型组比较，治疗组、车前子组、车前子和通天草组昆明小鼠痛风性关节炎脾脏的脏器指数明显降低(P＜0.05)；与模型组比较，通天草组昆明小鼠痛风性关节炎脾脏的脏器指数降低不明显(P＞0.05)(见表3、图3)。

表3 车前子和通天草中药组合物对痛风性关节炎小鼠脾脏脏器指数的影响

注：与对照组比较：¹⁾P＜0.05；与模型组比较：²⁾P＜0.05，³⁾P＞0.05

3.4 车前子和通天草中药组合物对痛风性关节炎小鼠足趾关节组织IL-6、IL-12和IL-1β蛋白表达的影响

由表4可见，与对照组比较，模型组昆明小鼠痛风性关节炎足趾部关节周围组织IL-6、IL-12和IL-1β蛋白含量明显升高(P＜0.05)；与模型组比较，治疗组、车前子组、车前子和通天草组昆明小鼠痛风性关节炎足趾部关节周围组织IL-6、IL-12和IL-1β蛋白含量明显降低(P＜0.05)；与模型组比较，通天草组昆明小鼠痛风性关节炎足趾部关节周围组织IL-6、IL-12和IL-1β蛋白含量降低不明显(P＞0.05)(见表4，图4、5、6)。

表4 车前子和通天草中药组合物对痛风性关节炎小鼠足趾关节组织IL-6、IL-12和IL-1β蛋白表达的影响

注：与对照组比较：¹⁾P＜0.05；与模型组比较：²⁾P＜0.05，³⁾P＞0.05

3.5 车前子和通天草中药组合物对痛风性关节炎小鼠体重的影响

实验结束后，与对照组比较，模型组昆明小鼠痛风性关节炎体重增加不明显(P＞0.05)；与模型组比较，治疗组昆明小鼠痛风性关节炎体重明显下降(P＜0.05)；与模型组比较，车前子组、车前子组和通天草组、通天草组昆明小鼠痛风性关节炎体重改变不明显(P＞0.05)(见表5、图7)。

表5 车前子和通天草中药组合物对痛风性关节炎小鼠体重的影响

注：与对照组比较：¹⁾P＞0.05；与模型组比较：²⁾P＜0.05，³⁾P＞0.05

4 结论

实验结束后，与对照组相比较，模型组昆明小鼠痛风性关节炎的足趾部关节肿胀度明显升高(P＜0.05)，说明痛风性关节炎模型建立成功，模型稳定，适宜开展实验研究；与模型组比较，治疗组、车前子和通天草组昆明小鼠痛风性关节炎的足趾部关节肿胀度明显降低(P＜0.05)，说明别嘌呤醇、车前子、车前子和通天草中药组合物的治疗，小鼠足趾部的肿胀程度在降低；与模型组比较，通天草组昆明小鼠痛风性关节炎的足趾部关节肿胀度降低不明显(P＞0.05)，说明通天草对痛风性关节炎的治疗效果较差。以上综合提示，车前子和通天草中药组合物可以改善小鼠足趾部关节肿胀的程度。

实验结束后，与对照组相比较，模型组昆明小鼠痛风性关节炎的足趾部关节炎症指数明显升高(P＜0.05)，说明模型组炎症反应显著；经过治疗后，与模型组比较，治疗组、车前子组、车前子和通天草组昆明小鼠痛风性关节炎的足趾部关节炎症指数明显降低(P＜0.05)，说明别嘌呤醇、车前子和通天草中药组合物对痛风性关节炎治疗有效；经过治疗后，与模型组比较，通天草组昆明小鼠痛风性关节炎的足趾部关节炎症指数降低不明显(P＞0.05)，差异无统计学意义，说明通天草治疗效果较差。

实验测定小鼠脾脏脏器指数显示，与对照组比较，模型组小鼠脾脏的脏器指数明显升高(P＜0.05)，说明模型组小鼠炎症反应明显；与模型组比较，别嘌呤醇、车前子、车前子和通天草中药组合物小鼠脾脏的脏器指数明显降低(P＜0.05)，说明车前子和通天草中药组合物可以改善小鼠的脾脏的质量分数。

免疫炎症反应因子参加了痛风性关节炎的发病机制当中，例如包括IL-6、IL-12、IL-1蛋白等均参加了痛风性关节炎的发病过程。实验通过酶联免疫方法测定IL-6、IL-12和IL-1β蛋白的含量，结果表明，与对照组比较，模型组小鼠关节周围组织IL-6、IL-12和IL-1β蛋白含量明显升高(P＜0.05)，说明模型组炎症反应明显，大量的炎症因子参与了痛风性关节炎的发生发展；与模型组比较，治疗组、车前子组、车前子和通天草组关节周围IL-6、IL-12和IL-1β蛋白含量明显降低(P＜0.05)，说明车前子和通天草中药组合物可以明显改善小鼠关节周围组织的炎症反应。

实验结束后，与对照组比较，模型组昆明小鼠痛风性关节炎体重增加不明显(P＞0.05)；与模型组比较，治疗组昆明小鼠痛风性关节炎体重明显下降(P＜0.05)，提示别嘌呤醇治疗痛风性关节炎的时候对小鼠体重有一定的影响；与模型组比较，车前子组、车前子和通天草组、通天草组昆明小鼠痛风性关节炎体重改变不明显(P＞0.05)，说明车前子和通天草治疗痛风性关节炎的同时不会改变昆明小鼠的体重，表明车前子和通天草的组合物副作用较小。

综上所述，经过初步研究显示车前子和通天草中药组合物可以改善昆明小鼠的关节炎症反应，降低昆明小鼠足趾部的肿胀程度，改善昆明小鼠的脾脏指数，降低昆明小鼠的IL-12、IL-1β、IL-6蛋白的表达水平，并且对小鼠体重无明显影响，同时车前子和通天草中药组合物中车前子的剂量较单独使用车前子剂量减半。综合表明车前子和通天草中药组合物对痛风性关节炎的治疗效果良好。

以上所述仅为本发明的优选实施例，对本发明而言仅是说明性的，而非限制性 的；本领域普通技术人员理解，在本发明权利要求所限定的精神和范围内可对其进行许多改变，修改，甚至等效变更，但都将落入本发明的保护范围内。

Claims (9)

1.一种用于治疗痛风性关节炎的中药组合物，其特征在于其有效成分由车前子和通天草组成。

2.如权利要求1所述的中药组合物，其特征在于所述车前子和通天草的重量比为1-1.5：0.5-1。

3.如权利要求2所述的中药组合物，其特征在于所述车前子和通天草的重量比为1：1。

4.一种临床上适宜的用于治疗痛风性关节炎的中药制剂，其特征在于由权利要求1-3任一项所述的中药组合物加入制剂成型所需的辅料，按照制备药物制剂的常规方法制成。

5.如权利要求4所述的中药制剂，其特征在于所述的制剂为水煎剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、片剂或口服液。

6.一种制备权利要求1所述的中药组合物的方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)精密电子天平分别称取通天草和车前子，所述车前子和通天草的重量比为1-1.5：0.5-1，放入高颈圆底烧瓶中，加入药物重量5-10倍的蒸馏水，用玻璃棒搅拌均匀，瓶口放上圆形中间有孔的活塞，在活塞上放上冷凝管，用铁架子固定好冷凝管，冷凝管的出水口和入水口连接塑料管，入水口在下方连接水龙头，出水口在上方，通过塑料管直接放在水池内；

(2)打开冷凝管下方的入水口，出水口放在水池中，水流适当，车前子和通天草的组合物在这样的环境下浸泡1-2h，煎煮1-2h，等待5-10min，将高颈圆底烧瓶内的液体倒入覆盖有6层白色干净纱布的双筒蒸锅中，再将高颈圆底烧瓶垂直倒立，直到没有任何液体流出，得到含有车前子和通天草成分的滤液；

(3)将烧瓶中剩余的车前子和通天草中药组合物的药液用干净纱布过滤、拧干，直到所有车前子和通天草中药组合物残渣都进行纱布滤过，将滤液倒入步骤(2)的双筒蒸锅中，得到的含有车前子和通天草中药组合物的第一次滤液；

(4)剩余的车前子和通天草的滤渣重复步骤(1)-(3)进行第二次煎煮以及过滤处理，得到第二次滤液，合并滤液；

(5)设定另外的电热恒温水浴锅温度为70℃，将步骤(4)得到的滤液放入电热恒温水浴锅中，打开门窗及其室内抽气机，直到干燥物较硬的时候再将托盘放在电热恒温鼓风干燥箱内，设定电热恒温鼓风干燥箱温度为70℃，4-5d，直到干燥物用镊子触及无松软感觉，所得到的残留物就是车前子和通天草中药组合物的干膏。

7.如权利要求6所述的方法，其特征在于将得到的干膏放在粉碎机内粉碎，直到可以用分子筛筛过为止，得到车前子和通天草中药组合物的干粉。

8.如权利要求6所述的方法，其特征在于所述车前子和通天草的重量比为1：1。

9.如权利要求1-3任一项所述的中药组合物在制备治疗痛风性关节炎药物中的用途。