CN104825715B - 一种用于防治痛风性关节炎的中药组合物及其制备方法和应用 - Google Patents
一种用于防治痛风性关节炎的中药组合物及其制备方法和应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明提供了一种用于防治痛风性关节炎的中药组合物及其制备方法和应用。本发明的中药组合物,其有效成分由水红花子和通天草组成。动物实验显示该中药组合物可以降低昆明小鼠足趾部的关节肿胀程度,改善昆明小鼠的关节炎症反应,脾脏指数,肾脏指数,血尿酸水平、血肌酐水平以及血尿素氮水平,同时降低昆明小鼠IL‑1β、IL‑12、IL‑6蛋白的表达水平,并且对痛风性关节炎小鼠模型的体重无明显影响。以上结果表明水红花子和通天草组成的中药组合物对痛风性关节炎的治疗效果良好,本发明的提出为临床上治疗痛风性关节炎奠定了理论基础,也为进一步研发治疗痛风性关节炎的中药新药组合提供了客观依据。
Description
技术领域
本发明涉及一种中药组合物及其制备方法和应用,特别涉及一种用于防治痛风性关节炎的中药组合物、其制备方法及其应用。本发明属于中药研究技术领域。
背景技术
痛风性关节炎是尿酸钠结晶体沉积到血液循环较差的关节部位引发关节及其关节周围组织出现无菌性的炎症反应,多为急性发作,疼痛比较剧烈,疼痛多局限在关节部位,严重影响到关节的基本功能,进而影响机体的整体健康水平。
痛风性关节炎的发病机制比较复杂,主要是由于机体的嘌呤代谢出现异常、尿酸的排泄出现异常、血尿酸持续升高,从而导致机体产生大量的尿酸钠结晶。尿酸盐结晶体可以在机体的循环系统内流动,当尿酸盐循环到机体血液循环较差的部位,就会沉积下来,引起关节及其周围的组织出现异常,甚至引起关节的活动受限,影响到关节的正常功能(Murunikkara V,Rasool M.Trikatu,a herbal compound that suppresses monosodiumurate crystal-induced inflammation in rats,an experimental model for acutegouty arthritis[J].Cell Biochem Funct.2014Jan;32(1):106-14.Harrold L.Newdevelopments in gout[J].Curr Opin Rheumatol.2013May;25(3):304-9.)。
痛风性关节炎是由于尿酸盐结晶的大量积聚导致出现相应的症状和体征,因此会引发机体出现关节周围炎症指数、肿胀程度、参与机体免疫相关的器官脾脏、参与尿酸排泄的器官肾脏、相关的炎症因子水平等均出现改变。基于此,可以将这些指标设定为评价痛风性关节炎的治疗效果评价指标之一。研究者显示,尿酸盐的关节注射可以诱发机体出现典型的痛风性关节炎临床表现,包括疼痛、肿胀及其生化指标改变等(Lee HP,Lin YY,DuhCY,et al.Lemnalol attenuates mast cell activation and osteoclast activity ina gouty arthritis model[J].J Pharm Pharmacol.2015Feb;67(2):274-85.Shi L,Xu L,Yang Y,et al.Suppressive effect of modified Simiaowan on experimental goutyarthritis:an in vivo and in vitro study[J].J Ethnopharmacol.2013Dec 12;150(3):1038-44.Miao Z,Guo W,Lu S,et al.Hypothermia induced by adenosine 5'-monophosphate attenuates early stage injury in an acute gouty arthritis ratmodel[J].Rheumatol Int.2013Aug;33(8):2085-92.)。
近年来研究发现,许多的炎症介质参加了痛风性关节炎的发病机制当中,例如白介素-1(IL-1)(Dumusc A,So A.Interleukin-1as a therapeutic target ingout[J].Curr Opin Rheumatol.2015Mar;27(2):156-63.)、白介素-1β(IL-1β)(Reber LL,Marichal T,Sokolove J,et al.Contribution of mast cell-derived interleukin-1βto uric acid crystal-induced acute arthritis in mice[J].ArthritisRheumatol.2014Oct;66(10):2881-91.)、核转录因子-κB(NF-κB)(Qing YF,Zhang QB,ZhouJG,et al.Changes in toll-like receptor(TLR)4-NFκB-IL1βsignaling in male goutpatients might be involved in the pathogenesis of primary gouty arthritis[J].Rheumatol Int.2014Feb;34(2):213-20.)、白介素-10(IL-10)(Chen YH,Hsieh SC,ChenWY,et al.Spontaneous resolution of acute gouty arthritis is associated withrapid induction of the anti-inflammatory factors TGFβ1,IL-10and soluble TNFreceptors and the intracellular cytokine negative regulators CIS and SOCS3[J].Ann Rheum Dis.2011 Sep;70(9):1655-63.)、白介素-8(IL-8)(Ling X,Bochu W.Areview of phytotherapy of gout:perspective of new pharmacological treatments[J].Pharmazie.2014Apr;69(4):243-56.)等均参加了痛风性关节炎的发生发展。
炎症相关因子IL-1β是介导痛风性关节炎尤为重要的炎症因子,尿酸盐介导的痛风性炎症反应的重要机制之一是尿酸盐被单核巨噬细胞吞噬,通过一定的途径使特殊炎性体活化,激活半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1),分泌和释放成熟的炎症介质IL-1β和IL-18,活化的IL-1β被靶细胞上的IL-1β受体结合,激活靶细胞核转录因子-κB(NF-κB),继而产生和释放大量炎症介质,诱导痛风性炎症的发生发展。IL-8是中性粒细胞主要的趋化因子,参与痛风性关节炎关节内大量中性粒细胞的浸润,造成无菌性炎症反应。
另外活化T淋巴细胞产生的IL-6是炎症反应的标志之一,但是IL-6并没有直接参与痛风性关节炎的发生发展(McGeough MD,Pena CA,Mueller JL,et al.Cutting edge:IL-6is a marker of inflammation with no direct role in inflammasome-mediatedmouse models[J].J Immunol.2012Sep 15;189(6): 2707-11.)。基于痛风性关节炎是一种特殊的无菌性炎症反应,需要检测痛风性关节炎小鼠模型的IL-6蛋白水平。
痛风性关节炎除了引起机体大量炎症介质的释放之外,尿酸盐结晶还可以沉积到肾髓质和肾乳头部位,致使肾小管出现萎缩,引起机体肾脏基本结构的改变,从而影响机体肾脏的基本功能,干扰尿酸及其其他物质的排泄,严重的痛风还可以出现肾功能衰竭(Vinik O,Wechalekar MD,Falzon L,et al.Treatment of asymptomatic hyperuricemiafor the prevention of gouty arthritis,renaldisease,and cardiovascular events:a systematic literature review[J].J Rheumatol Suppl.2014Sep;92:70-4.RichetteP,Frazier A,Bardin T.Pharmacokinetics considerations for gout treatments[J].Expert Opin Drug Metab Toxicol.2014Jul;10(7):949-57.)。基于此,需要测定痛风性关节炎小鼠模型的肾脏质量,计算肾脏指数,评价痛风性关节炎小鼠模型肾脏的损伤程度。
痛风性关节炎动物模型的种类很多,其中很多研究者采用小鼠开展对痛风性关节炎的实验研究,尿酸钠建立小鼠痛风性关节炎的模型非常稳定,痛风性关节炎小鼠模型的炎症指数、肿胀度及其相关的器官脾脏和肾脏、还有大量的炎症相关因子水平出现明显改变。
基于此,本发明开展以昆明小鼠为研究对象,以尿酸盐制备痛风性关节炎动物模型,采用水红花子和通天草中药组合物开展了对痛风性关节炎的实验研究,观察水红花子和通天草中药组合物对昆明小鼠痛风性关节炎模型足趾部的肿胀程度、足趾部关节炎症反应、脾脏指数、肾脏指数、血尿酸水平、血肌酐水平、血尿素氮水平、IL-1β蛋白水平、IL-12蛋白水平、IL-6蛋白水平及其对昆明小鼠体重的影响作用,以期为临床治疗痛风性关节炎提供理论依据。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种用于防治痛风性关节炎的中药组合物及其制备方法和用途。
本发明的一种用于防治痛风性关节炎的中药组合物,其有效成分由水红花子和通天草组成。
通天草,是祖国医药莎草科植物荸荠的地上部分,也称为荸荠苗、地栗梗或者荸荠梗,一般是在夏天的时候采集,将荸荠的地上部分割下来,进行晾晒、切成小条、于干燥的地方保存,最终得到的部分就是通天草。在祖国医药典籍《饮 片新参》和苏医《中草药手册》记载到,通天草可以利尿、清热、通淋、治疗呃逆、治疗小便不利。
水红花子为蓼科植物荭蓼、酸模叶蓼或柳叶蓼的果实。现代药理学研究显示,水红花子具有抗肿瘤、免疫抑制、抗氧化、抗肝纤维化等作用。
在本发明中,优选的,所述水红花子和通天草的重量比为1-1.5:0.5-1。更优选的,所述水红花子和通天草的重量比为1.3:0.5。
进一步的,本发明还提出了一种临床上适宜的用于防治痛风性关节炎的中药制剂,其特征在于由本发明所述的中药组合物加入制剂成型所需的辅料,按照制备药物制剂的常规方法制成。
本发明制剂的制备方法属于常规制剂方法,在此无庸赘述。
在本发明中,优选的,所述的制剂为水煎剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、片剂或口服液。
更进一步的,本发明还提出了一种制备所述的中药组合物的方法,其特征在于包括以下步骤:
(1)分别称取水红花子以及通天草,切碎,所述水红花子和通天草的重量比为1-1.5:0.5-1;
(2)药材均匀后放入高颈圆底烧瓶中,加入药材重量10-15倍的蒸馏水,玻璃棒搅拌均匀,封闭环境下浸泡8-12小时,加热蒸煮1-3小时,冷却8-15分钟,采用5层纱布过滤药材组合物,纱布过滤残渣,直到药物没有药液流出,得到第一次滤液;
(3)再将药物残渣放到高颈圆底烧瓶中,加入与步骤(2)相同重量的蒸馏水,重复步骤(1)进行第二次过滤处理,得到第二次滤液,合并两次的滤液;
(4)得到的中药组合物滤液放入70℃的电热恒温鼓风干燥箱内,干燥时间为4-5d,所得到的残留物就是中药组合物干膏。
进一步的,将得到的中药组合物干膏放在粉碎机内粉碎,进行研磨,反复分子筛处理,得到中药组合物的干粉,密封放置在-80℃冰箱内长期保存。
在本发明所述的方法中,优选的,所述水红花子和通天草的重量比为1.3:0.5。
动物实验显示水红花子低剂量(1.3g·kg-1·d-1)和通天草(0.5g·kg-1·d-1)单独使用对痛风性关节炎的治疗效果较差,而将低剂量的水红花子(1.3g·kg-1·d-1)和低剂量的通天草(0.5g·kg-1·d-1)联合使用,不仅减少了大量水红花子的毒性作用,而且 治疗效果明显增加,说明水红花子和通天草具有协同作用。进一步研究结果表明本发明中药组合物可以降低昆明小鼠足趾部的关节肿胀程度,改善昆明小鼠的关节炎症反应,改善昆明小鼠的脾脏指数,改善昆明小鼠的肾脏指数,改善昆明小鼠的血尿酸水平、血肌酐水平、血尿素氮水平,降低昆明小鼠IL-1β、IL-12、IL-6蛋白的表达水平,并且对痛风性关节炎小鼠模型的体重无明显影响。以上结果表明水红花子和通天草组成的中药组合物对痛风性关节炎的治疗效果良好,这为临床上治疗痛风性关节炎奠定了理论基础,也为进一步研发治疗痛风性关节炎的中药新药组合提供了客观依据。
因此,更进一步,本发明还提出了所述的中药组合物在制备防治痛风性关节炎药物中的用途。
附图说明
图1为水红花子和通天草中药组合物对痛风性关节炎小鼠足趾关节肿胀度的影响;
图2为水红花子和通天草中药组合物对痛风性关节炎小鼠足趾关节炎症指数的影响;
图3为水红花子和通天草中药组合物对痛风性关节炎小鼠脾脏脏器指数的影响;
图4为水红花子和通天草中药组合物对痛风性关节炎小鼠肾脏脏器指数的影响;
图5为水红花子和通天草中药组合物对痛风性关节炎小鼠血尿酸的影响;
图6为水红花子和通天草中药组合物对痛风性关节炎小鼠血肌酐的影响;
图7为水红花子和通天草中药组合物对痛风性关节炎小鼠血尿素氮的影响;
图8为水红花子和通天草中药组合物对痛风性关节炎小鼠足趾关节IL-1β的影响;
图9为水红花子和通天草中药组合物对痛风性关节炎小鼠足趾关节组织IL-12蛋白的影响;
图10为水红花子和通天草中药组合物对痛风性关节炎小鼠足趾关节组织IL-6蛋白的影响;
图11为水红花子和通天草中药组合物对痛风性关节炎小鼠体重的影响。
具体实施方式
下面通过药理性及临床观察实验并结合实施例对本发明做进一步说明,应该理解的是,这些实施例仅用于例证的目的,决不限制本发明的保护范围。
实施例1一种用于防治痛风性关节炎的中药组合物的制备
本发明的药物组合物由以下重量的各原料药组成:水红花子1300g和通天草500g。
实施例2一种用于防治痛风性关节炎的中药组合物的制备
本发明的药物组合物由以下重量的各原料药组成:水红花子1200g和通天草800g。
实施例3一种用于防治痛风性关节炎的中药组合物的制备
本发明的药物组合物由以下重量的各原料药组成:水红花子1000g和通天草1000g。
实施例4一种用于防治痛风性关节炎的中药组合物(干膏)的制备
(1)分别称取水红花子1300g粉碎和通天草500g,切碎,药材均匀混合得到1800g,分成4份药材,每份450g的药材总量。
(2)将450g药材的混合物放入20000ml的高颈圆底烧瓶中,加入6000ml蒸馏水,玻璃棒搅拌均匀,封闭环境下浸泡10h,加热煎煮2h,冷却10min,采用5层纱布过滤药材组合物,纱布过滤残渣,直到药物没有药液流出,得到第一次滤液。
(3)再将药物残渣放到高颈圆底烧瓶中,加入6000ml蒸馏水,重复上面过程进行第二次过滤处理,得到第二次滤液,合并两次的滤液。
(4)70℃浓缩中药组合物滤液:将得到的中药组合物滤液放入70℃电热恒温鼓风干燥箱内,干燥时间为4-5d,所得到的残留物就是中药组合物干膏。
实际使用的药材是450g,实验得到中药组合物干膏为28.9g,中药组合物出膏率为(干膏/中药药材)×100%=6.42%。
实施例5一种用于治疗痛风性关节炎的中药组合物(粉剂)的制备
取下实施例4制备得到的中药组合物干膏,将中药组合物干膏放在粉碎机内粉碎,进行研磨,反复分子筛处理,减少损失,粉碎机内粉碎后得到中药组合物干粉27.54g,中药组合物的出粉率为干粉/中药药材×100%=6.12%。实际使用的药材是450g,得到的干粉是30.6g,因此,1g中药组合物干粉相当于原药药材16.34g。
电子天平称取中药组合物干粉5g,进行分装,密封放置在-80℃冰箱内长期保存。
实施例6本发明的中药组合物在防治痛风性关节炎中的用途
1实验材料
1.1实验动物
雄性,清洁级,昆明小鼠,64只,体重25±2g,由黑龙江中医药大学实验动物中心李宝龙副教授提供,质量合格证:SCXK(黑)2013-004。昆明小鼠饲养于黑龙江中医药大学实验动物中心封闭的环境中,由李宝龙负责饲养昆明小鼠,给予昆明小鼠无菌饲料和蒸馏水。
1.2实验药物
水红花子,批号140922,由黑龙江中医药大学中医药研究院周忠光教授购买于黑龙江中医药大学附属第一医院,由江阴天江药业有限公司生产。通天草由黑龙江中医药大学周忠光教授购自黑龙江哈尔滨市药材公司,按照1989年江苏地方标准进行鉴定,参照有关药材通天草的各项规定检查,鉴定通天草的结果均符合规定,可以用于实验研究。别嘌呤醇,批号:130601,重庆青阳药业有限公司。尿酸钠,货号:U2875-5G,Sigma公司。蒸馏水,哈尔滨市文景蒸馏水厂生产。其他试剂均为国产分析纯。
中药组合物:按照实施例5方法制备成干粉,给予小鼠灌胃治疗的时候,需要将药材干粉根据所需要的生药量换算后进行灌胃(1g中药组合物干粉相当于原药药材16.34g)。并对中药组合物进行加热至37℃,便于给予小鼠灌胃。
1.3实验仪器
SHB-IIIA型循环水式多用真空泵,郑州长城科工贸有限公司;TGL-16G型台式离心机,上海安亭科学仪器厂;RE-52A型旋转蒸发仪,上海亚荣生化仪器厂生产;PLZOZ-S型电子天平,梅特勒-托利多仪器有限公司;7170A型全自动生化仪器,日立公司生产;6100型RT-雷杜酶标仪,美国RT公司;超净工作台, 苏州博莱尔净化设备有限公司;101-0AB型电热恒温鼓风干燥箱,天津市泰斯特仪器有限公司生产;SK250LH型高频数控超声波清洗器,上海市科导超声仪器有限公司生产等。
2方法
2.1小鼠分组
实验按照随机数字表的数字排列顺序将64只昆明小鼠随机分为8组,包括对照组8只、模型组8只、别嘌呤醇组8只、水红花子高剂量组8只、水红花子中剂量组8只、水红花子低剂量组8只、水红花子和通天草组8只、通天草组8只。
2.2模型制备
各组昆明小鼠正常饲养7d后,观察一般状态良好,包括毛发颜色、毛发光滑度、活动度、排泄物、是否受伤,进食、饮水等,评估小鼠的健康水平,便于开始进行痛风性关节炎小鼠模型制备。
本次实验参考文献(周忠光,丑小月,费洪新,等.丹溪痛风方对小鼠急性痛风性关节炎的实验研究[J].中医药学报,2015,43(1):59-62.)制备痛风性关节炎模型。选择模型组、别嘌呤醇组、水红花子高剂量组、水红花子中剂量组、水红花子低剂量组、水红花子和通天草组、通天草组昆明小鼠制备痛风性关节炎模型。
模型制备过程:抓取昆明小鼠,10%水合氯醛麻醉,固定小鼠,消毒小鼠右侧下肢,无菌的注射器吸取2.5%的尿酸钠溶液,在小鼠一侧后足右侧足底皮下及其同侧后足右侧背侧足趾部注射0.05ml 2.5%尿酸钠溶液,尿酸钠注射后,小鼠足趾部明显肿胀,无液体溢出,提示痛风性关节炎小鼠模型肿胀明显,痛风性关节炎小鼠模型制备成功,可以开展后续的实验研究。同时选择对照组小鼠8只同侧、同部位给予同体积生理盐水进行处理,无液体溢出,生理盐水很快被小鼠关节周围组织吸收。
2.3给药
水红花子每天临床使用药物剂量是6-9g,最大可以给予30g口服,根据黑龙江中医药大学第一附属医院栗明医生及其黑龙江中医药大学中医药研究院周忠光教授的建议,水红花子临床患者标准体重的剂量选择20g,实验根据人与小鼠的体表面积比值是1:0.0026的换算关系,确定每20g小鼠的剂量是20×0.0026=0.052g,通过换算成kg,得到每kg标准体重小鼠的给药剂量是2.6g·kg-1·d-1,选择2.6g·kg-1·d-1为水红花子的中剂量,选择5.2g·kg-1·d-1为水红花 子的高剂量,选择1.3g·kg-1·d-1为水红花子的低剂量。
另外参考文献(杜徽,费洪新,张英博,等.通天草对阿尔茨海默病小鼠海马白介素-1β水平的影响[J].黑龙江科学,2015,6(1):14-15.)确定通天草的剂量是2.0g·kg-1·d-1、0.5g·kg-1·d-1开展对阿尔茨海默病的治疗,其中2.0g·kg-1·d-1的通天草治疗效果较好,0.5g·kg-1·d-1的通天草治疗效果较差。因此本发明开展预实验,发现0.5g·kg-1·d-1对痛风性关节炎的治疗效果也较差。
因此本次实验选择水红花子和通天草中药组合物(水红花子生药量1.3g·kg-1·d-1和通天草生药量0.5g·kg-1·d-1),开展对痛风性关节炎的实验研究。
造模后2h开始给药,对照组、模型组给予生理盐水灌胃5d;别嘌呤醇组给予0.02g·kg-1·d-1别嘌呤醇灌胃5d;水红花子高剂量组给予水红花子生药量5.2g·kg-1·d-1灌胃5d;水红花子中剂量组给予水红花子生药量2.6g·kg-1·d-1灌胃5d;水红花子低剂量组给予水红花子生药量1.3g·kg-1·d-1灌胃5d;水红花子和通天草组给予水红花子生药量1.3g·kg-1·d-1和通天草生药量0.5g·kg-1·d-1灌胃5d;通天草组给予通天草生药量0.5g·kg-1·d-1灌胃5d。
2.4评价痛风性关节炎小鼠足趾关节肿胀度
灌胃治疗结束2h后,采用乙醚麻醉小鼠,随时观察昆明小鼠的一般状态,避免麻醉过度,实验前在每只昆明小鼠的膝关节弯曲部用记号笔标记一条横线,在这条横线以下部位的小鼠足部均剪下来,放入装有生理盐水的10ml量筒中,精确观察小鼠足部容积刻度。
足趾关节肿胀度(ml)=实验后足趾部容积(ml)-实验前足趾部容积(ml)。
2.5评价痛风性关节炎小鼠的炎症指数
痛风性关节炎的评分分级是0级0分,1级2分,2级4分,3级6分。这包括0级表示小鼠足部无红肿、红斑,可见小鼠足部骨性标志,显示足趾部正常;1级表示小鼠足部轻度肿胀,关节周围皮肤红斑,可以看到小鼠足部的骨性标志;2级小鼠足部局限性肿胀、关节红肿,小鼠足部的骨性标致不清楚;3级足趾部关节以外的部位出现肿胀。
2.6测定痛风性关节炎小鼠脾脏和肾脏指数
灌胃治疗结束2h后,超净工作台上放置冰台,冰台上操作取材,抓取昆明小鼠,迅速断头处死各组小鼠,取材小鼠脾脏和肾脏,电子天平精确称取小鼠脾脏和肾脏脏器质量,计算小鼠脾脏和肾脏的脏器指数。
脏器指数(mg·g-1)=脏器质量(mg)/小鼠体重(g)
2.7测定痛风性关节炎小鼠的血尿酸含量
灌胃治疗结束2h后,各组小鼠断头,眼科镊子摘除小鼠眼球,眼球采血,静置,3000rpm·min-1离心10min,取上清液,分装,-20℃冰箱保存备用。按照试剂盒说明书的操作步骤,采用磷钨酸法测定小鼠血尿酸的含量。
2.8测定痛风性关节炎小鼠血尿素氮和肌酐的含量
灌胃治疗结束2h后,心脏采血,静置,4000rpm·min-1离心10min,取上清液,分装,-20℃保存。自动生化检测仪器测定小鼠血尿素氮和肌酐的含量。
2.9测定痛风性关节炎小鼠足趾部组织IL-1β、IL-6、IL-12的含量
灌胃治疗结束2h后,各组小鼠断头处死,迅速取小鼠的足趾部组织,去除小鼠的足部皮肤,匀浆足趾部组织,取上清液体,4℃静置,5000rpm·min-1离心10min,吸取上清液,分装,-20℃低温保存。按酶联免疫试剂盒说明书进行操作,使用6100型RT-雷杜酶标仪450nm波长处测定培养板各孔吸光度(A),根据标准曲线求得足趾部组织IL-1β、IL-6、IL-12蛋白的含量。
2.10测定痛风性关节炎小鼠的体重
灌胃治疗结束2h后,电子天平测定各组小鼠体重为实验统计数据,计算比较各组小鼠的体重差异。
2.11统计学处理
实验数据采用表示,采用SPSS19.0软件进行统计学处理,多组间采用单因素方差分析实验数据。P<0.05认为差异有统计学意义。
3结果
3.1水红花子和通天草中药组合物对痛风性关节炎小鼠足趾关节肿胀度的影响
结果表明,与对照组比较,模型组痛风性关节炎昆明小鼠的足趾部关节肿胀度明显升高(P<0.05);与模型组比较,别嘌呤醇组、水红花子高剂量组、水红花子中剂量组、水红花子和通天草组痛风性关节炎昆明小鼠的足趾部关节肿胀度明显降低(P<0.05);与模型组比较,水红花子低剂量组、通天草组痛风性关节炎昆明小鼠的足趾部关节肿胀度降低不明显(P>0.05)(见表1、图1)。
表1水红花子和通天草中药组合物对痛风性关节炎小鼠足趾关节肿胀度的影响
注:与对照组比较:1)P<0.05;与模型组比较:2)P<0.05,3)P>0.05
3.2水红花子和通天草中药组合物对痛风性关节炎小鼠足趾关节炎症指数的影响
结果表明,与对照组比较,模型组痛风性关节炎昆明小鼠的足趾部关节炎症指数明显升高(P<0.05);与模型组比较,别嘌呤醇组、水红花子高剂量组、水红花子中剂量组、水红花子和通天草组痛风性关节炎昆明小鼠的足趾部关节炎症指数明显降低(P<0.05);与模型组比较,水红花子低剂量组、通天草组痛风性关节炎昆明小鼠的足趾部关节炎症指数降低不明显(P>0.05)(见表2、图2)。
表2水红花子和通天草中药组合物对痛风性关节炎小鼠足趾关节炎症指数的影响
注:与对照组比较:1)P<0.05;与模型组比较:2)P<0.05,3)P>0.05
3.3水红花子和通天草中药组合物对痛风性关节炎小鼠脾脏脏器指数的影响
结果表明,与对照组比较,模型组痛风性关节炎昆明小鼠脾脏脏器指数明显 升高(P<0.05);与模型组比较,别嘌呤醇组、水红花子高剂量组、水红花子中剂量组、水红花子和通天草组痛风性关节炎昆明小鼠脾脏的脏器指数明显降低(P<0.05);与模型组比较,水红花子低剂量组、通天草组痛风性关节炎昆明小鼠脾脏的脏器指数降低不明显(P>0.05)(见表3、图3)。
表3水红花子和通天草中药组合物对痛风性关节炎小鼠脾脏脏器指数的影响
注:与对照组比较:1)P<0.05;与模型组比较:2)P<0.05,3)P>0.05
3.4水红花子和通天草中药组合物对痛风性关节炎小鼠肾脏脏器指数的影响
结果表明,与对照组比较,模型组痛风性关节炎昆明小鼠肾脏脏器指数明显降低(P<0.05);与模型组比较,别嘌呤醇组、水红花子高剂量组、水红花子中剂量组、水红花子和通天草组痛风性关节炎昆明小鼠肾脏脏器指数明显升高(P<0.05);与模型组比较,水红花子低剂量组、通天草组痛风性关节炎昆明小鼠肾脏的脏器指数升高不明显(P>0.05)(见表4、图4)。
表4水红花子和通天草中药组合物对痛风性关节炎小鼠肾脏脏器指数的影响
注:与对照组比较:1)P<0.05;与模型组比较:2)P<0.05,3)P>0.05
3.5水红花子和通天草中药组合物对痛风性关节炎小鼠血尿酸的影响
结果表明,与对照组比较,模型组痛风性关节炎昆明小鼠血尿酸明显升高(P<0.05);与模型组比较,别嘌呤醇组、水红花子高剂量组、水红花子中剂量组、水红花子和通天草组痛风性关节炎昆明小鼠血尿酸明显降低(P<0.05);与模型组比较,水红花子低剂量组、通天草组痛风性关节炎昆明小血鼠尿酸降低不明显(P>0.05)(见表5、图5)。
表5水红花子和通天草中药组合物对痛风性关节炎小鼠血尿酸的影响
注:与对照组比较:1)P<0.05;与模型组比较:2)P<0.05,3)P>0.05
3.6水红花子和通天草中药组合物对痛风性关节炎小鼠血肌酐的影响
结果表明,与对照组比较,模型组痛风性关节炎昆明小鼠血肌酐明显升高(P<0.05);与模型组比较,别嘌呤醇组、水红花子高剂量组、水红花子中剂量组、水红花子和通天草组痛风性关节炎昆明小鼠血肌酐明显降低(P<0.05);与模型组比较,水红花子低剂量组、通天草组痛风性关节炎昆明小鼠血肌酐降低不明显(P>0.05)(见表6、图6)。
表6水红花子和通天草中药组合物对痛风性关节炎小鼠血肌酐的影响
注:与对照组比较:1)P<0.05;与模型组比较:2)P<0.05,3)P>0.05
3.7水红花子和通天草中药组合物对痛风性关节炎小鼠血尿素氮的影响
结果表明,与对照组比较,模型组痛风性关节炎昆明小鼠血尿素氮明显升高(P<0.05);与模型组比较,别嘌呤醇组、水红花子高剂量组、水红花子中剂量组、水红花子和通天草组痛风性关节炎昆明小鼠血尿素氮明显降低(P<0.05);与模型组比较,水红花子低剂量组、通天草组痛风性关节炎昆明小鼠血尿素氮降低不明显(P>0.05)(见表7、图7)。
表7水红花子和通天草中药组合物对痛风性关节炎小鼠血尿素氮的影响
注:与对照组比较:1)P<0.05;与模型组比较:2)P<0.05,3)P>0.05
3.8水红花子和通天草中药组合物对痛风性关节炎小鼠足趾关节IL-1β蛋白的影响
结果表明,与对照组比较,模型组痛风性关节炎昆明小鼠足趾部关节周围组织IL-1β蛋白含量明显升高(P<0.05);与模型组比较,别嘌呤醇组、水红花子高剂量组、水红花子中剂量组、水红花子和通天草组痛风性关节炎昆明小鼠足趾部 关节周围组织IL-1β蛋白含量明显降低(P<0.05);与模型组比较,水红花子低剂量组、通天草组痛风性关节炎昆明小鼠足趾部关节周围组织IL-1β蛋白含量降低不明显(P>0.05)(见表8,图8)。
表8水红花子和通天草中药组合物对痛风性关节炎小鼠足趾关节IL-1β蛋白的影响
注:与对照组比较:1)P<0.05;与模型组比较:2)P<0.05,3)P>0.05
3.9水红花子和通天草中药组合物对痛风性关节炎小鼠足趾关节IL-12蛋白的影响
结果表明,与对照组比较,模型组痛风性关节炎昆明小鼠足趾部关节周围组织IL-12蛋白含量明显升高(P<0.05);与模型组比较,别嘌呤醇组、水红花子高剂量组、水红花子中剂量组、水红花子和通天草组痛风性关节炎昆明小鼠足趾部关节周围组织IL-12蛋白含量明显降低(P<0.05);与模型组比较,水红花子低剂量组、通天草组痛风性关节炎昆明小鼠足趾部关节周围组织IL-12蛋白含量降低不明显(P>0.05)(见表9,图9)。
表9水红花子和通天草中药组合物对痛风性关节炎小鼠足趾关节组织IL-12蛋白的影响
注:与对照组比较:1)P<0.05;与模型组比较:2)P<0.05,3)P>0.05
3.10水红花子和通天草中药组合物对痛风性关节炎小鼠足趾关节IL-6的影响
结果表明,与对照组比较,模型组昆明小鼠痛风性关节炎足趾部关节周围组织IL-6蛋白含量明显升高(P<0.05);与模型组比较,别嘌呤醇组、水红花子高剂量组、水红花子中剂量组、水红花子和通天草组痛风性关节炎昆明小鼠足趾部关节周围组织IL-6蛋白含量明显降低(P<0.05);与模型组比较,水红花子低剂量组、通天草组痛风性关节炎昆明小鼠足趾部关节周围组织IL-6蛋白含量降低不明显(P>0.05)(见表10,图10)。
表10水红花子和通天草中药组合物对痛风性关节炎小鼠足趾关节组织IL-6蛋白的影响
注:与对照组比较:1)P<0.05;与模型组比较:2)P<0.05,3)P>0.05
3.11水红花子和通天草中药组合物对痛风性关节炎小鼠体重的影响
结果表明,与对照组比较,模型组痛风性关节炎昆明小鼠体重增加不明显(P>0.05);与模型组比较,别嘌呤醇组痛风性关节炎昆明小鼠体重明显下降(P<0.05);与模型组比较,水红花子高剂量组、水红花子中剂量组、水红花子低剂量组、水红花子和通天草组、通天草组痛风性关节炎昆明小鼠体重改变不明显(P> 0.05)(见表11、图11)。
表11水红花子和通天草中药组合物对痛风性关节炎小鼠体重的影响
注:与对照组比较:1)P>0.05;与模型组比较,2)P<0.05,3)P>0.05
4结论
综上,本发明提供了一种用于防治痛风性关节炎的水红花子和通天草中药组合物,通过观察昆明小鼠足趾部的关节肿胀程度、关节炎症反应、脾脏指数、肾脏指数、血尿酸、血肌酐、血尿素氮、IL-1β、IL-12、IL-6蛋白的表达水平、昆明小鼠的体重几个方面进行评价,期望为临床上治疗痛风性关节炎提供新的中药组合物。
实验结束后,测定昆明小鼠的关节肿胀度。结果显示模型组与对照组比较,小鼠关节肿胀明显,提示痛风性关节炎昆明小鼠模型建立成功,可以开展后续的实验研究。经过别嘌呤醇、水红花子的不同剂量及其水红花子和通天草的中药组合物治疗后,显示别嘌呤醇、水红花子高中剂量、水红花子和通天草中药组合物的治疗效果明显,小鼠足趾部的肿胀程度明显降低,说明高中剂量的水红花子、水红花子和通天草中药组合物可以改善小鼠的关节肿胀度,减轻痛风性关节炎的症状。与模型组比较,水红花子低剂量组、通天草组痛风性关节炎昆明小鼠的足趾部关节肿胀度降低不明显(P>0.05),说明通天草及其低剂量的水红花子对痛风性关节炎的治疗效果较差。低剂量的水红花子和低剂量的通天草单独使用虽然对痛风性关节炎昆明小鼠的关节肿胀程度无明显改善作用,但是水红花子和通天草均低剂量联合使用可以明显改善痛风性关节炎昆明小鼠的关节肿胀程度。以上提示1.3g·kg-1·d-1水红花子和0.5g·kg-1·d-1通天草中药组合物可以改善小鼠足趾部 关节肿胀的程度。
实验结束后,与对照组相比较,模型组炎症指数明显升高,炎症反应明显。经过治疗后,别嘌呤醇、水红花子高中剂量、水红花子和通天草中药组合物对痛风性关节炎治疗有效,可以明显的改善痛风性关节炎的炎症指数。与模型组比较,水红花子低剂量组、通天草组痛风性关节炎昆明小鼠的足趾部关节炎症指数降低不明显(P>0.05),说明水红花子低剂量(1.3g·kg-1·d-1)、通天草低剂量(0.5g·kg-1·d-1)治疗效果较差,但是两种低剂量药物合并在一起,1.3g·kg-1·d-1水红花子和0.5g·kg-1·d-1通天草中药组合物治疗效果明显增加,说明水红花子和通天草有协同的作用。
实验测定小鼠脾脏脏器指数,结果显示与对照组比较,模型组小鼠脾脏脏器指数明显升高(P<0.05),说明模型组小鼠炎症反应明显,机体免疫力降低;与模型组比较,别嘌呤醇、水红花子高中剂量、水红花子和通天草中药组合物小鼠脾脏的脏器指数明显降低(P<0.05),说明水红花子和通天草中药组合物可以改善小鼠脾脏的质量分数。与模型组比较,水红花子低剂量组、通天草组痛风性关节炎昆明小鼠脾脏的脏器指数降低不明显(P>0.05),说明水红花子低剂量(1.3g·kg-1·d-1)和通天草(0.5g·kg-1·d-1)单独使用对痛风性关节炎的治疗效果较差。以上综合提示,高中剂量的水红花子,水红花子和通天草中药组合物可以明显改善痛风性关节炎小鼠模型的免疫力水平。
实验测定了各组小鼠的肾脏质量,计算出各组小鼠的肾脏指数。与对照组比较,模型组痛风性关节炎昆明小鼠肾脏脏器指数明显下降,说明模型组小鼠肾组织萎缩,痛风性关节炎肾组织结构损伤明显。与模型组比较,别嘌呤醇组、水红花子高剂量组、水红花子中剂量组、水红花子和通天草组痛风性关节炎昆明小鼠肾脏脏器指数明显升高(P<0.05),说明高、中剂量的水红花子及其水红花子与通天草的中药组合物可以改善痛风性关节炎昆明小鼠的肾脏指数。而与模型组比较,水红花子低剂量组、通天草组痛风性关节炎昆明小鼠肾脏的脏器指数升高不明显(P>0.05),说明低剂量的水红花子与通天草单独使用对痛风性关节炎治疗无效,进一步提示,治疗痛风性关节炎的最佳方案是低剂量的水红花子(1.3g·kg-1·d-1)和低剂量的通天草(0.5g·kg-1·d-1)联合使用,不仅减少了大量水红花子的毒性作用,而且又可以起到治疗痛风性关节炎的治疗效果。以上提示水红花子(1.3g·kg-1·d-1)和通天草(0.5g·kg-1·d-1)中药组合物配伍合理,药效明显。
实验测定了各组小鼠的血尿酸、血尿素氮和血肌酐水平。结果表明,与对照 组比较,模型组痛风性关节炎昆明小鼠血尿酸、血尿素氮和血肌酐水平明显升高(P<0.05),说明模型组小鼠的体内异常物质增加,过多的尿酸加重了痛风性关节炎的发生发展,同时超过了肾脏的排泄功能,致使血尿素氮和血肌酐增加。与模型组比较,别嘌呤醇组、水红花子高剂量组、水红花子中剂量组、水红花子和通天草组痛风性关节炎昆明小鼠血尿酸、血尿素氮和血肌酐明显降低(P<0.05),说明西药别嘌呤醇、中药水红花子、水红花子和通天草的中药组合物对痛风性关节炎的有明显的改善作用。而与模型组比较,水红花子低剂量组、通天草组痛风性关节炎昆明小鼠血尿酸、血尿素氮和血肌酐水平升高不明显(P>0.05),说明低剂量的水红花子(1.3g·kg-1·d-1)与通天草(0.5g·kg-1·d-1)单独使用对痛风性关节炎治疗无效。
实验通过酶联免疫方法测定IL-1β、IL-12和IL-6蛋白的含量,结果表明,模型组炎症反应明显,大量的炎症因子参与了痛风性关节炎的发生发展。与模型组比较,水红花子高中剂量组、水红花子和通天草组关节周围IL-1β、IL-12和IL-6蛋白含量明显降低(P<0.05),说明高、中剂量的水红花子及其水红花子与通天草的中药组合物可以明显改善小鼠关节周围组织的炎症反应。而与模型组比较,水红花子低剂量组、通天草组痛风性关节炎昆明小鼠IL-1β、IL-12和IL-6蛋白含量改变不明显,也说明低剂量的水红花子与通天草单独使用对痛风性关节炎治疗无效。以上综合提示水红花子(1.3g·kg-1·d-1)和通天草(0.5g·kg-1·d-1)中药组合物治疗痛风性关节炎的效果良好。
实验还测定了各组昆明小鼠的体重,结果表明,与对照组比较,模型组痛风性关节炎昆明小鼠体重增加不明显(P>0.05),说明痛风性关节炎对机体的体重无明显的影响。与模型组比较,别嘌呤醇组痛风性关节炎昆明小鼠体重明显下降(P<0.05),说明西药别嘌呤醇治疗痛风性关节炎有明显的治疗效果的同时对机体的体重有明显的影响,副作用明显。与模型组比较,水红花子高剂量组、水红花子中剂量组、水红花子低剂量组、水红花子和通天草组、通天草组痛风性关节炎昆明小鼠体重改变不明显(P>0.05),说明水红花子、水红花子与通天草的中药组合物、通天草对机体的体重无明显影响,提示副作用较小,进一步说明水红花子(1.3g·kg-1·d-1)和通天草(0.5g·kg-1·d-1)中药组合物的副作用较小。
综上所述,经过初步研究显示,(5.2g·kg-1·d-1)、(2.6g·kg-1·d-1)的水红花子,水红花子(1.3g·kg-1·d-1)和通天草(0.5g·kg-1·d-1)中药组合物可以改善昆明小鼠的关节炎症反应和肿胀程度,改善昆明小鼠的脾脏指数和肾脏指数,降低血尿酸、 血尿素氮和血肌酐水平,降低昆明小鼠的IL-12、IL-1β、IL-6蛋白的表达水平,并且对小鼠体重无明显影响。说明水红花子(1.3g·kg-1·d-1)和通天草(0.5g·kg-1·d-1)中药组合物对痛风性关节炎的治疗效果良好,并且副作用较小。
以上所述仅为本发明的优选实施例,对本发明而言仅是说明性的,而非限制性的;本领域普通技术人员理解,在本发明权利要求所限定的精神和范围内可对其进行许多改变,修改,甚至等效变更,但都将落入本发明的保护范围内。
Claims (8)
1.一种用于防治痛风性关节炎的中药组合物,其特征在于其有效成分由水红花子和通天草组成,所述水红花子和通天草的重量比为1-1.5:0.5-1。
2.如权利要求1所述的中药组合物,其特征在于所述水红花子和通天草的重量比为1.3:0.5。
3.一种临床上适宜的用于防治痛风性关节炎的中药组合物,其特征在于由权利要求1或2所述的中药组合物加入制剂成型所需的辅料,按照制备药物制剂的常规方法制成。
4.如权利要求3所述的中药制剂,其特征在于所述的制剂为水煎剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、片剂或口服液。
5.一种制备权利要求1所述的中药组合物的方法,其特征在于包括以下步骤:
(1)分别称取水红花子以及通天草,切碎,所述水红花子和通天草的重量比为1-1.5:0.5-1;
(2)药材均匀后放入高颈圆底烧瓶中,加入药材重量10-15倍的蒸馏水,玻璃棒搅拌均匀,封闭环境下浸泡8-12小时,加热蒸煮1-3小时,冷却8-15分钟,采用5层纱布过滤药材组合物,纱布过滤残渣,直到药物没有药液流出,得到第一次滤液;
(3)再将药物残渣放到高颈圆底烧瓶中,加入与步骤(2)相同重量的蒸馏水,重复步骤(2)进行第二次过滤处理,得到第二次滤液,合并两次的滤液;
(4)得到的中药组合物滤液放入70℃的电热恒温鼓风干燥箱内,干燥时间为4-5d,所得到的残留物就是中药组合物干膏。
6.如权利要求5所述的方法,其特征在于还包括将得到的中药组合物干膏放在粉碎机内粉碎,进行研磨,反复分子筛处理,得到中药组合物的干粉,密封放置在-80℃冰箱内长期保存。
7.如权利要求5所述的方法,其特征在于所述水红花子和通天草的重量比为1.3:0.5。
8.如权利要求1或2所述的中药组合物在制备防治痛风性关节炎药物中的用途。
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