CN104757112A

CN104757112A - 一种特色风味功能性酸奶及其制备方法

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Publication number: CN104757112A
Application number: CN201510137934.4A
Authority: CN
Inventors: 潘道东; 郭宇星; 李桦; 黄璐; 李晓
Original assignee: Nanjing Normal University
Current assignee: Nanjing Normal University
Priority date: 2015-03-26
Filing date: 2015-03-26
Publication date: 2015-07-08
Anticipated expiration: 2035-03-26
Also published as: CN104757112B

Abstract

本发明涉及一种酸奶，尤其是涉及一种特色风味功能性酸奶及其制备方法。该酸奶是将红豆磨成乳状液，再添加桂花和松花，经超声波处理、纤维素酶、风味蛋白酶和α-淀粉酶及糖化酶酶解，得红豆乳及松花与桂花混合酶解液，再按一定比例添加脱脂乳粉、白糖，经搅拌混合均匀、杀菌、冷却、添加发酵剂、混匀、灌装、发酵、冷却等工艺，得到一种具有抗氧化及免疫调节功能并对ACE活性具有抑制作用的特色风味酸奶制品。本发明制备得到的特色风味功能性酸奶，不仅风味独特，营养丰富，而且具有抗氧化、抗ACE和免疫调节功能。

Description

一种特色风味功能性酸奶及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种酸奶，尤其是涉及一种特色风味功能性酸奶及其制备方法。

背景技术

松花粉又名松花、松黄,泛指马尾松、油松、红松、华山松和樟子松等松属植物雄蕊所产生的干燥花粉，是我国传统的食药用佳品。迄今一些传统食物如松花糕、松花团子、松花酒等都添加松花粉。松花粉作为生命的遗传物质，是迄今为止所发现的天然食品中营养成分最全面的物质之一，不仅具有低脂肪、高蛋白的特点,而且含有人体生存所需的多种营养物质,能够全部补充、均衡人体所需营养。松花粉除含蛋白质、脂肪、糖类等一般营养物质外,还含有多种维生素、微量元素、黄酮、酶及辅酶等200余种营养成分及生物活性物质,有“微型营养库”之称。松花粉具有抗氧化、抗衰老、抗疲劳、调节免疫力、促进生长发育、调整机体代谢等功效,其保健和治疗作用已得到国内外广泛的认可和应用。

桂花有温中散寒、暖胃止痛、化痰散瘀的作用，对食欲不振、咳嗽多痰、风湿麻木、痔疮、痢疾、经闭腹痛有一定疗效。研究表明，桂花含有黄酮类化合物，具有抗炎、抗氧化、抗肿瘤、抑菌等作用。桂花黄酮清除氧自由基能力是天然抗氧化剂Vc的1-2倍，是工业抗氧化剂BHT的2-3倍，在食品及医疗保健等方面更是有广阔的发展前景。桂花中还含有丰富的钾、钙、镁、钠、铁、锌等微量元素及维生素B1、B2、B6、D、E、K，叶酸、生物素、乙酸胆碱等物质，具有补血活血、生长、促进胸腺发育、增强免疫力、抗病菌、减少心血管疾病、降低血压和促进糖代谢等作用，是一种理想的保健品。现代食品工业中，桂花还常作为食品、茶、酒和其他饮料的配料使用，如人们用糖或盐腌制桂花后加工成桂花元宵、桂花蜜饯等糕点，这些都是具有地方特色的食品，是人们餐桌上的美味佳肴。

红豆含有丰富的营养物质，其中淀粉含量41.83～59.89％，蛋白质含量16.33～29.2％，还含有一定量的钙、磷、铁元素及硫胺素等B族维生素。它具有很高的药用价值和良好的保健作用，它有清热解毒、健脾益胃、利尿消肿、通气除烦的作用，可治疗小便不利、脾虚水肿、脚气等症。《神农本草经》中称红豆是“食物药，属中品”，可以“通小肠，利小便，消肿排脓，消热解毒，治泻痢脚气，止渴解酒，通乳下胎”。

血管紧张素转化酶(angiotensin-converting enzyme,简称ACE)在人体血压调节过程中起重要作用，它存在于各组织的血管内皮细胞或上皮细胞及血浆等体液中。它在人体肾素-血管紧张素系统和激肽悉放酶-激肽系统中，对血压调节起到重要作用，可同时作用于血管紧张素Ⅰ(Asp-Arg-Val-Tyr-Ile-His Leu-Val-Ile-His)和舒缓激肽，使血管紧张素Ⅰ转换成血管紧张素Ⅱ(Asp-Arg-Val-Tyr-Ile-His-Pro-Phe),同时水解舒缓激肽，使其失活，从而导致血压上升。抗ACE肽是指一类具有抑制ACE活性的多肽物质，它们通过抑制ACE的活性使血管紧张素Ⅱ的产生和舒缓激肽的失活均减少，从而达到降低血压的目的。

本发明利用松花粉、桂花和红豆等功能性食品原料及脱脂奶粉白糖等食品原料，通过乳酸菌发酵等工艺，开发出一种具有抗氧化及免疫调节功能并对ACE活性具有抑制作用的特色风味功能性酸奶及其制备方法，丰富酸奶制品的种类，提高酸奶制品的功能价值。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种不仅风味独特，而且具有抗氧化及免疫调节功能并对ACE活性具有抑制作用的特色风味功能性酸奶及其制备方法。

本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为：一种特色风味功能性酸奶，是将红豆磨成乳状液，再添加桂花和松花，经超声波处理、纤维素酶、风味蛋白酶和α-淀粉酶酶解及糖化酶，得红豆乳及松花与桂花混合酶解液，再按一定比例添加脱脂乳粉、白糖，经搅拌混合均匀、杀菌、冷却、添加发酵剂、混匀、灌装、发酵、冷却等工艺，得到一种具有抗氧化及免疫调节功能并对ACE活性具有抑制作用的特色风味酸奶制品。

一种特色风味功能性酸奶的制备方法，包括以下步骤：

(1)菌株活化：在无菌操作条件下，将嗜热链球菌、保加利亚乳杆菌(或瑞士乳杆菌)及嗜酸乳杆菌分别接种于MRS液体培养基中，分别在37-43℃的培养箱中培养20-36小时；

(2)发酵剂的制备：将活化后的嗜热链球菌、保加利亚乳杆菌(或瑞士乳杆菌)及嗜酸乳杆菌菌株在无菌操作条件下，分别接种在经巴氏杀菌后冷却至37-40℃的10-13.0％(w/w)脱脂乳培养基中，在37-43℃保温箱中培养3-8小时，使其活菌数达到10^6-8cfu/mL左右；

(3)红豆乳的制备：取红豆，用水清洗干净后，用0.10％的碳酸氢钠溶液在8-30℃下浸泡6-36小时后，用筛子捞出浸泡好的红豆，按红豆与水1:(8-12)的质量比加入水，然后用豆浆机磨成乳状液体，即得红豆乳；

(4)红豆乳及松花与桂花混合酶解液的制备：按质量比在上述红豆乳中加入1.0-3.50％的松花粉、1.0-15.0％的桂花，混合均匀后，再用胶体磨循环处理2-10分钟后，加热至70-100℃保温杀菌5-20分钟，冷却至45-55℃左右，再按质量比加入0.10-0.15％的中性纤维素酶(活力2000-4000U/g)、0.01-0.03％活力为30-50U/mg的风味蛋白酶和0.002-0.04％活力为5000-10000U/g的α-淀粉酶和糖化酶，混合均匀，在45-55℃左右保温酶解3-8小时，冷却得红豆乳及松花与桂花混合酶解物；

(5)混合料配制：按质量比在上述红豆乳及松花与桂花混合酶解液中加入5-10％的脱脂乳粉，4-6％的白糖，混合均匀后，加热到75-95℃，保温10-20分钟后，冷却至43℃，在无菌操作的条件下，按质量比加入1.0-2.0％的嗜酸乳杆菌发酵剂，1.0-2.0％的保加利亚乳杆菌(或瑞士乳杆菌)发酵剂，2.0-3.0％的嗜热链球菌发酵剂，搅拌混合均匀；

(6)罐装、发酵：用罐装机罐装至酸奶瓶或塑料杯，封口后，装入塑料框，移入发酵室，在37-43℃保温发酵3-8小时；

(7)冷却、后熟：将上述发酵结束后的酸奶移入0-4℃的冷库内冷却、后熟即得成品。

上述步骤(1)中MRS液体培养基，其组成和制备方法如下：蛋白胨l0g，牛肉膏l0g，酵母提取物5g，K₂HPO₄2g，柠檬酸二铵2g，乙酸钠5g，葡萄糖20g，吐温-80lmL，MgSO4·7H₂O0.5g，MnSO₄0.25g，蒸馏水1000mL，pH6.2～6.4，121℃灭菌20min。

与现有技术相比，本发明的优点在于：本发明首次公开了一种特色风味功能性酸奶及其制备方法，包括发酵剂的制备，红豆乳的制备，红豆乳及松花与桂花混合酶解液的制备，经混合料配制、灌装、发酵、冷却、后熟等工艺过程，得到一种含黄酮、多肽等活性因子，具有抗氧化和免疫调节功能并对ACE活性具有抑制作用的特色风味酸奶制品。该酸奶制品中添加酶解松花粉、酶解桂花及酶解红豆乳等功能性配料，松花粉及桂花及红豆乳酶解物中的黄酮类物质、多肽具有降血脂、降血压、抗氧化、提高免疫力、防癌等多种保健功能。通过胶体磨处理及纤维素酶酶解的协同作用，促进松花及桂花细胞细胞壁的破碎，释放出黄酮类物质，提高了其利用价值和生物活性，通过风味蛋白酶的酶解以及嗜热链球菌、保加利亚乳杆菌(或瑞士乳杆菌)及嗜酸乳杆菌的发酵，在它们的协同作用下，促进原料中松花蛋白、红豆蛋白、乳蛋白的分解产生更多的游离氨基酸及多肽，与单一的乳酸菌发酵或酶解相比，产品中氨基酸与多肽的含量提高了20-25％，抗氧化及抗ACE活性分别提高了25-27％和20-23％，提高了产品的风味和营养价值，增加了其功能特性；添加α-淀粉酶和糖化酶，将红豆乳中的淀粉分解成葡萄糖，有利于乳酸菌的发酵。本发明制备得到的特色风味功能性酸奶，不仅风味独特，营养丰富，而且具有抗氧化、抗ACE和免疫调节功能。

具体实施方式

以下结合实施例对本发明作进一步详细描述。

一、实验测定方法

1、总黄酮类化合物含量的测定

(1)标准曲线的绘制：精密称取芦丁对照品200mg，加70％(v/v)乙醇溶解后，定容至100mL。精密吸取10mL，用蒸馏水定容至100mL，得到0.2mg/mL的标准溶液。精密吸取标准溶液0、0.4、0.8、1.2、1.6、2.0、2.4mL，分别置于10mL量瓶中，加蒸馏水至2.4mL，加入5％亚硝酸钠溶液0.4mL，混匀，放置6min，加入10％硝酸铝0.40mL，摇匀，放置6min，加入4.3％氢氧化钠4.0mL，再加蒸馏水至刻度，摇匀，放置15min，以试剂空白为对照。在500nm波长处测定吸收度A，以吸光度A为纵坐标、浓度C为横坐标，绘制芦丁浓度-吸收度标准曲线，作线性回归，得方程：C＝78.52A-0.7302(r＝0.9991)。

(2)黄酮类化合物含量测定：准确称取一定量的香肚,放入烧杯中，加入一定量70％的乙醇，用玻璃棒搅成浆糊状，放入500ml带塞的烧杯中,用70％乙醇清洗烧杯和玻璃棒，洗液也倒入烧杯中，再加70％乙醇至250mL，然后用超声处理20分钟，过滤，然后用移液管吸取10mL滤液,用70％乙醇定容到100mL，按上述方法测定吸光度值,用标注曲线计算出黄酮类化合物的含量。

2、多肽含量测定

(1)标准曲线的制作：取十个10ml的容量瓶用5％的TCA依次配制0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6和1.8mg/ml的Gly-Gly-Tyr-Arg四肽标准溶液然后分别取6.0ml标准溶液加入4.0ml双缩脲试剂于漩涡混合仪上混合均匀静置10min 2000r/min离心10min取上清液于540nm下测定OD值(以第一管做空白对照)以肽的浓度为横坐标X(mg/ml)OD值为纵坐标Y制作标准曲线，得到回归方程y＝0.3681x+0.0013(R²＝1)

(2)多肽含量的测定：取2.5ml鲜奶酪乳浆加入2.5ml 10％(W/V)的三氯乙酸(TCA)水溶液于漩涡混合仪上混合均匀静置10min然后在4000r/min下离心15min将上清液全部转移到50ml容量瓶中并用5％的TCA定容至刻度摇匀然后取6.0ml上述溶液置另一试管中加入双缩脲试剂4.0ml(样液:双缩脲试剂＝3:2)(V/V)于漩涡混合仪上混合均匀静置10min，2000r/min离心10min，取上清液于540nm下测定OD值对照标准曲线求得样品溶液中的多肽浓度C(mg/ml)进而可求得样品中多肽含量。

3、抗氧化能力指标测定

(1)总抗氧化能力的测定：在氧化反应体系中添加香肚粗提物，利用Fenton反应体系产生羟自由基，以抗坏血酸作为阳性对照，反应结束后于510nm处测定吸光值；总抗氧化能力按下面的公式计算：

(2)超氧阴离子自由基的测定：在反应系统中，每升样品在37℃反应40min所抑制的超氧阴离子自由基相当于1mg的维生素C所抑制的超氧阴离子自由基的变化值为一个活力单位。

OD₁：对照管的吸光度；OD₂：测定管的吸光度；OD₃：标准管的吸光度。

(3)羟自由基的测定：Fenton反应是最常见的产生羟自由基的化学反应，H₂O₂的量和Fenton反应产生羟自由基成正比，当给予电子受体后，用gress试剂显色，形成红色物质，其呈色与羟自由基的多少成正比关系。

标准管浓度为8.824mmol/L；取样量为1mL；OD₁：对照管的吸光度；OD₂：测定管的吸光度；OD₃：标准管的吸光度；OD₄：空白管的吸光度

4、免疫指标测定

(1)实验动物分组及灌胃

60只小鼠随机分成3组，每组20只。分别为正常对照组、环磷酰胺(CY)对照组、CY+香肚粗提物组(实验组)。在小鼠适应一周后，开始灌胃，正常对照组和CY对照组每天灌胃生理盐水0.10ml/10g体重，实验组每天灌胃香肚粗提0.10ml/10g体重，连续30天。在灌胃的前5天，除正常对照组外，环磷酰胺(CY)对照组每日腹腔注射等容积的环磷酰胺100mg/kg体重。

(2)脏器指数计算公式

各组小鼠在末次给药24h后称重，尾静脉取血，脱颈椎处死小鼠后，剖取肝脏、脾脏和胸腺。用滤纸吸干在电子天平上称重计算脾指数和胸腺指数。

(3)吞噬指数测定

K：未经校正吞噬的指数；OD₁：2分钟时血标本OD值；OD₂：20分钟时血标本OD值)

5、ACE抑制活性测定

用含有0.3mol/L NaCl的0.1mol/L硼酸盐缓冲液(pH8.3)将马尿酸-组氨酸-亮氨酸(Hip-His-Leu)配成5.0mmol/L的溶液。在10mL试管中加入200μL的5.0mmol/LHip-His-Leu溶液和80μL的乳清蛋白源抗ACE肽，于37℃下保温3分钟后，再加入20μLACE溶液(溶解于蒸馏水中，活力为0.1U/mL)，混匀后在37℃下保温30分钟，再加入250μL的1.0mol/L的盐酸溶液以终止反应，再加入1.7mL醋酸乙酯，经15秒种振荡混匀后，静置5分钟，用移液管吸取1.0mL的醋酸乙酯层，冷冻干燥后，加入1.0mL蒸馏水，混匀后在228nm处测定吸光度。

ACE抑制率＝[(B-A)/B]]×100％

IC₅₀为抑制50％的ACE活性所需抑制剂的浓度。

其中A为添加ACE抑制肽时，ACE和Hip-His-Leu反应的吸光度；B为不添加ACE抑制肽时，ACE和Hip-His-Leu反应的吸光度。

具体实施例

实施例1：

一种特色风味功能性酸乳的制备方法，包括以下步骤：

(1)菌株活化：在无菌操作条件下，将嗜热链球菌、保加利亚乳杆菌及嗜酸乳杆菌分别接种于MRS液体培养基中，分别在43℃、38℃、37℃的培养箱中培养20-24小时；

(2)发酵剂的制备：将活化后的嗜热链球菌、保加利亚乳杆菌及嗜酸乳杆菌菌株在无菌操作条件下，分别接种在经巴氏杀菌后冷却至43℃、38℃、37℃的10-12.0％脱脂乳培养基中，在43℃、38℃、37℃保温箱中培养3-4小时，使其活菌数达到10⁷cfu/mL左右；

(3)红豆乳的制备：取红豆，用水清洗干净后，用0.10％的碳酸氢钠溶液在8-10℃下浸泡30-36小时后，用筛子捞出浸泡好的红豆，按红豆与水1:8的质量比加入水，然后用豆浆机磨成乳状液体，即得红豆乳；

(4)红豆乳及松花与桂花混合酶解液的制备：按质量比在上述红豆乳中加入1.0-1.50％的松花粉、1.0-1.50％的干桂花，混合均匀后，再用胶体磨处理2-3分钟后，加热至70-75℃保温杀菌15-20分钟，冷却至53-55℃左右，再按质量比加入0.10％的中性纤维素酶(活力3500-4000U/g)、0.01％活力为45-50U/mg的风味蛋白酶和0.002-0.003％活力为5000-5500U/g的α-淀粉酶和糖化酶，混合均匀，在53-55℃左右保温酶解7-8小时，冷却得红豆乳及松花与桂花混合酶解物；

(5)混合料配制：按质量比在上述红豆乳及松花与桂花混合酶解液中加入5.0-6.0％的脱脂乳粉，4.0％的白糖，混合均匀后，加热到75℃，保温20分钟后，冷却至43℃，在无菌操作的条件下，按质量比加入1.0％的嗜酸乳杆菌发酵剂，1.0％的保加利亚乳杆菌发酵剂，2.0％的嗜热链球菌发酵剂，搅拌混合均匀；

(6)罐装、发酵：用罐装机罐装至酸奶瓶，封口后，装入塑料框，移入发酵室，在42-43℃保温发酵3-4小时；

实施例2：

同实施例1，其区别点如下：

步骤(3)红豆乳的制备：取红豆，用水清洗干净后，用0.10％的碳酸氢钠溶液在10-12℃下浸泡26-30小时后，用筛子捞出浸泡好的红豆，按红豆与水1:10的质量比加入水，然后用豆浆机磨成乳状液体，即得酶解红豆乳；

步骤(4)红豆乳及松花与桂花混合酶解液的制备：按质量比在上述红豆乳中加入1.6-2.0％的松花粉、1.60-2.0％的干桂花，混合均匀后，再用胶体磨循环处理4-5分钟后，加热至76-80℃保温杀菌13-14分钟，冷却至50-52℃左右，再按质量比加入0.11-0.12％的中性纤维素酶(活力3000-3500U/g)、0.010-0.015％活力为40-45U/mg的风味蛋白酶和0.003-0.004％活力为5500-6000U/g的α-淀粉酶和糖化酶，混合均匀，在50-52℃左右保温酶解6-7小时，冷却得红豆乳及松花与桂花混合酶解物；

(5)混合料配制：按质量比在上述红豆乳及松花与桂花混合酶解液中加入6.0-6.50％的脱脂乳粉，5.0％的白糖，混合均匀后，加热到80℃，保温15分钟后，冷却至42℃，在无菌操作的条件下，按质量比加入1.0％的嗜酸乳杆菌发酵剂，1.0％的保加利亚乳杆菌发酵剂，2.0％的嗜热链球菌发酵剂，搅拌混合均匀；

实施例3：

同实施例1，其区别点如下：

步骤(3)红豆乳的制备：取红豆，用水清洗干净后，用0.10％的碳酸氢钠溶液在12-15℃下浸泡22-25小时后，用筛子捞出浸泡好的红豆，按红豆与水1:12的质量比加入水，然后用豆浆机磨成乳状液体，即得红豆乳；

(4)红豆乳及松花与桂花混合酶解液的制备：按质量比在上述红豆乳中加入2.10-2.50％的松花粉、2.10-2.50％的桂花，混合均匀后，再用胶体磨循环处理5-6分钟后，加热至81-85℃保温杀菌12分钟，冷却至48-49℃左右，再按质量比加入0.13-0.14％的中性纤维素酶(活力2800-3000U/g)、0.015-0.02％活力为35-40U/mg的风味蛋白酶和0.004-0.005％活力为6000-6500U/g的α-淀粉酶和糖化酶，混合均匀，在48-49℃左右保温酶解4-5小时，冷却得红豆乳及松花与桂花混合酶解物；

实施例4：

同实施例1，其区别点如下：

步骤(4)红豆乳及松花与桂花混合酶解液的制备：按质量比在上述红豆乳中加入2.60-3.0％的松花粉、2.60-3.0％的干桂花，混合均匀后，再用胶体磨循环处理7-8分钟后，加热至86-90℃保温杀菌10-12分钟，冷却至47-48℃左右，再按质量比加入0.15％的中性纤维素酶(活力3100-3500U/g)、0.02-0.025％活力为33-35U/mg的风味蛋白酶和0.006-0.010％活力为6500-7000U/g的α-淀粉酶和糖化酶，混合均匀，在47-48℃左右保温酶解4-5小时，冷却得红豆乳及松花与桂花混合酶解物；

步骤(5)混合料配制：按质量比在上述红豆乳及松花与桂花混合酶解液中加入6.5-7.5％的脱脂乳粉，6％的白糖，混合均匀后，加热到85-90℃，保温10-15分钟后，冷却至37-38℃，在无菌操作的条件下，按质量比加入2.0％的嗜酸乳杆菌发酵剂，2.0％的保加利亚乳杆菌发酵剂，3.0％的嗜热链球菌发酵剂，搅拌混合均匀；

步骤(6)罐装、发酵：用罐装机罐装至酸奶瓶，封口后，装入塑料框，移入发酵室，在37-38℃保温发酵7-8小时；

实施例5：

同实施例1，其区别点如下：

步骤(1)及步骤(2)用瑞士乳杆菌替代保加利亚乳杆菌；

步骤(4)红豆乳及松花与桂花混合酶解液的制备：按质量比在上述红豆乳中加入3.0-3.50％的松花粉、3.0-3.50％的干桂花，混合均匀后，再用胶体磨循环处理9-10分钟后，加热至90-95℃保温杀菌8-10分钟，冷却至45-46℃左右，再按质量比加入0.15％的中性纤维素酶(活力3500-4000U/g)、0.03％活力为30-32U/mg的风味蛋白酶和0.008-0.015％活力为7500-8000U/g的α-淀粉酶和糖化酶，混合均匀，在45-46℃左右保温酶解4-5小时，冷却得红豆乳及松花与桂花混合酶解物；

步骤(5)混合料配制：按质量比在上述红豆乳及松花与桂花混合酶解液中加入8.0-9.0％的脱脂乳粉，6％的白糖，混合均匀后，加热到90-95℃，保温8-10分钟后，冷却至40-42℃，在无菌操作的条件下，按质量比加入2.0％的嗜酸乳杆菌发酵剂，1.50％的瑞士乳杆菌发酵剂，3.0％的嗜热链球菌发酵剂，搅拌混合均匀。

Claims

1.一种特色风味功能性酸奶，其特征在于通过下方法制得：是将红豆磨成乳状液，再添加桂花和松花，经超声波处理、纤维素酶、风味蛋白酶和α-淀粉酶及糖化酶酶解，得红豆乳及松花与桂花混合酶解液，再按一定比例添加脱脂乳粉、白糖，经搅拌混合均匀、杀菌、冷却、添加发酵剂、混匀、灌装、发酵、冷却等工艺，得到一种具有抗氧化及免疫调节功能并对ACE活性具有抑制作用的特色风味酸奶制品。

2.一种制备如权利要求1所述的特色风味功能性酸奶的方法，其特征在于：具体包括以下步骤：

(1)菌株活化：在无菌操作条件下，将嗜热链球菌、保加利亚乳杆菌或瑞士乳杆菌、及嗜酸乳杆菌分别接种于MRS液体培养基中，分别在37-43℃的培养箱中培养20-36小时；

(2)发酵剂的制备：将活化后的嗜热链球菌、保加利亚乳杆菌或瑞士乳杆菌、及嗜酸乳杆菌菌株在无菌操作条件下，分别接种在经巴氏杀菌后冷却至37-40℃的10-13.0％(w/w)脱脂乳培养基中，在37-43℃保温箱中培养3-8小时，使其活菌数达到10^6-8cfu/mL；

(4)红豆乳及松花与桂花混合酶解液的制备：按质量比在上述红豆乳中加入1.0-3.50％的松花粉、1.0-15.0％的桂花，混合均匀后，再用胶体磨循环处理2-10分钟后，加热至70-100℃保温杀菌5-20分钟，冷却至45-55℃左右，再按质量比加入0.10-0.15％活力2000-4000U/g的中性纤维素酶、0.01-0.03％活力为30-50U/mg的风味蛋白酶和0.002-0.04％活力为5000-10000U/g的α-淀粉酶和糖化酶，混合均匀，在45-55℃左右保温酶解3-8小时，冷却得红豆乳及松花与桂花混合酶解物；

(5)混合料配制：按质量比在上述红豆乳及松花与桂花混合酶解液中加入5-10％的脱脂乳粉，4-6％的白糖，混合均匀后，加热到75-95℃，保温10-20分钟后，冷却至43℃，在无菌操作的条件下，按质量比加入1.0-2.0％的嗜酸乳杆菌发酵剂，1.0-2.0％的保加利亚乳杆菌或瑞士乳杆菌发酵剂，2.0-3.0％的嗜热链球菌发酵剂，搅拌混合均匀；

3.根据权利要求2所述的一种特色风味功能性酸奶及其制备方法，其特征在于：所述的MRS液体培养基，其组成和制备方法如下：蛋白胨10g，牛肉膏10g，酵母提取物5g，K₂HPO₄2g，柠檬酸二铵2g，乙酸钠5g，葡萄糖20g，吐温-80lmL，MgSO4·7H₂O0.5g，MnSO₄0.25g，蒸馏水1000mL，pH6.2～6.4，121℃灭菌20min。