CN104736692B - 深棕色宛氏拟青霉gpp1101b菌株及利用其的制剂 - Google Patents

深棕色宛氏拟青霉gpp1101b菌株及利用其的制剂 Download PDF

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Abstract

本发明涉及在人参发酵过程中分离的深棕色宛氏拟青霉(Paecilo myces variotii var.brunneolus)GPP1101B(微生物保藏号KCTC11993BP)的菌株及利用其的制剂。根据本发明，投入于人参提取液或红参提取液，从而具有优秀的抗癌及免疫调节功效和突变抑制及抗菌活性功效。

Description

深棕色宛氏拟青霉GPP1101B菌株及利用其的制剂
技术领域
本发明涉及深棕色宛氏拟青霉GPP1101B菌株及利用其的制剂，更详细地涉及投入于人参提取液或红参提取液，从而具有优秀的抗癌及免疫调节功效和突变抑制及抗菌活性功效的深棕色宛氏拟青霉GPP1101B菌株及利用其的制剂。
背景技术
通常，人参以抗疲劳、抗压力、提高免疫功能及降血糖为目的，在中医中酷爱使用的药用植物，认定其功效的主要成分为皂苷。
用于在如上所述的人参的皂苷成分中更加提高其功效的人参的加工技术的研究正在活跃进行，由此，开发红参及黑参来找出在一般水参及干参中无法发现的种类的皂苷成分，由此，试图证明其功效优秀。
作为用于改善对现有的人参的功效的技术，公开于韩国登录特许公报第10-0144130号的“表示免疫增强效果的人参蛋白多糖体(“gins an”)”中，这作为含有由葡萄糖及半乳糖组成的己糖40.0～50.0％、作为酸性糖的半乳糖醛酸41.0～44.8％及由赖氨酸、组氨酸、精氨酸、天冬氨酸、苏氨酸、丝氨酸、谷氨酸、脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、蛋氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、酪氨酸、半胱氨酸及苯丙氨酸组成的蛋白质3.7～5.2％且分子量为50000～150000的物质，涉及表示免疫增强效果的人参多糖体。
并且，公开于韩国登录特许公报第10-0361187号的“造血促进作用、骨髓保护作用、癌细胞杀灭免疫细胞生成作用及放射线敏感作用的优秀的人参多糖体”中，这涉及作为利用甲醇提取人参根粉，阴干甲醇不溶性残渣之后，利用蒸馏水提取并取得的水溶性分馏物进行冷冻干燥，并向上述水溶性分馏物添加乙醇取得乙醇不溶性分馏物后，再利用纤维素透析膜透析上述乙醇不溶性分馏物，从而取得多糖体，之后，通过聚丙烯酰胺葡聚糖S-500柱色谱法取得6种分馏物，并分别通过二乙氨基乙基(DEAE)-纤维素柱色谱法对这些进行纯分离纯化而成的人参多糖体，具有造血促进作用、骨髓保护作用、癌细胞杀灭免疫细胞生成作用及放射线敏感作用的人参多糖体。
但是，就这些现有技术而言，由于其利用范围受限，其纯化效率不高，因此在发挥所需的功效方面受限。因此，需要开发利用人参且具有优秀的功效又是全新的概念的免疫活性剂。
发明内容
技术问题
为了解决如上所述的现有的问题，本发明的目的在于，将本发明投入于人参提取液或红参提取液，从而具有优秀的抗癌及免疫调节功效和突变抑制及抗菌活性功效。
本发明的其他目的能够通过以下实施例的说明容易理解。
解决问题的手段
为了达成如上所述的目的，根据本发明的一实施方式，提供在人参的发酵过程中分离的深棕色宛氏拟青霉(Paecilomyces variotii var.brunneolus)GPP1101B(微生物保藏号KCTC119938BP)的菌株。
根据本发明的再一实施方式，提供含有将深棕色宛氏拟青霉(Pae cilomycesvariotii var.brunneolus)GPP1101B(微生物保藏号KCTC119938BP)的菌株投入于人参或红参的提取液并进行培养而得的培养液的免疫活性剂。
在上述免疫活性剂中，上述培养液可以为通过过滤肥大生长的菌株而获得的培养滤液。
在上述免疫活性剂中，对上述培养液进行冷冻干燥。
根据本发明的另一实施方式，提供含有将深棕色宛氏拟青霉(Pae cilomycesvariotii var.brunneolus)GPP1101B(微生物保藏号KCTC119938BP)的菌株投入于人参或红参的提取液并进行培养而得的培养液的抗菌活性剂。
在上述抗菌活性剂中，上述培养液可以为通过过滤肥大生长的菌株而获得的培养滤液。
在上述抗菌活性剂中，对上述培养液进行冷冻干燥。
根据本发明的还一实施方式，提供含有将深棕色宛氏拟青霉(Pae cilomycesvariotii var.brunneolus)GPP1101B(微生物保藏号KCTC119938BP)的菌株投入于人参或红参的提取液并进行培养而得的培养滤液的抗癌剂。
在上述抗癌剂中，上述培养液可以为通过过滤肥大生长的菌株而获得的培养滤液。
在上述抗癌剂中，对上述培养液进行冷冻干燥。
根据本发明的又一实施方式，提供含有将深棕色宛氏拟青霉(Pae cilomycesvariotii var.brunneolus)GPP1101B(微生物保藏号KCTC119938BP)的菌株投入于人参或红参的提取液并进行培养而得的培养滤液的抗突变剂。
在上述抗突变剂中，上述培养液可以为通过过滤肥大生长的菌株而获得的培养滤液。
在上述抗突变剂中，对上述培养液进行冷冻干燥。
根据本发明的又一实施方式，提供将深棕色宛氏拟青霉(Paecilo mycesvariotii var.brunneolus)GPP1101B(微生物保藏号KCTC119938BP)的菌株投入于人参或红参的提取液并进行培养的培养液的制备方法。
在上述培养液的制备方法中，上述人参或红参的提取液可以为将人参或红参放入水中后，在60～100℃的温度下加热12～72小时，并对人参或红参进行过滤而得的溶液。
在上述培养液的制备方法中，可在15～35℃的温度下，利用培养器对投入了上述菌株的人参或红参的提取液进行培养10～60天。
在上述培养液的制备方法中，在上述培养结束之后，通过过滤肥大生长的菌株而获得培养滤液。
发明的效果
根据本发明的深棕色宛氏拟青霉GPP1101B菌株及利用其的制剂，投入于人参提取液或红参提取液，从而具有优秀的抗癌及免疫调节功效和突变抑制及抗菌活性功效。
附图说明
图1为表示利用光学显微镜来观察的本发明的菌株的分生孢子梗及分生孢子的图像。
图2为表示利用电子显微镜来观察的本发明的菌株的分生孢子的形态的图像。
图3至图6为表示本发明的制剂的抗癌特性的实验结果的图表。
图7及图8为表示本发明的制剂的免疫调节特性的实验结果的图表。
图9及图10为本发明的制剂的抗菌活性评价图像。
具体实施方式
本发明能够进行各种变更，能够具有各种实施例，将特定实施例例示在图中，并进行详细说明。但是，这并不是将本发明限定于特定的实施方式，而应理解为包括本发明的技术思想及技术范围所包括的所有变更、等同技术方案或代替技术方案的形式，并且能够变更为各种不同的方式，本发明的范围并不限定于以下实施例。
以下，参照附图，详细说明本发明的实施例，与附图标记无关地，对于相同或相对应的结构要素标注相同的附图标记，并省略与此相关的重复说明。
本发明的以表示抗菌活性及免疫活性为特征的深棕色宛氏拟青霉(Paecilomycesvariotii var.brunneolus)GPP1101B(微生物保藏号KCTC119938BP)的菌株是在人参的发酵过程中分离出的，并表示抗菌活性及免疫活性。
在人参的发酵槽中采集黄色的特殊的霉并分离的菌株在适当的培养基中进行培养之后，分离上述菌株，并测定与以往报告的其他菌的同源性，从而鉴定了分离菌株。其结果，作为分离菌株的GPP1101B确认为深棕色宛氏拟青霉菌株。
可制备为包含GPP1101B的菌株作为有效成分的食品组合物等的免疫活性剂，这种免疫活性剂可通过在人参发酵液中培养GPP1101B的菌株，提取培养滤液，并进行冷冻干燥的过程制备，这种菌株的培养可在10～30℃的有氧状态下进行。
并且，可制备含有将GPP1101B的菌株，即，深棕色宛氏拟青霉(Paecilomycesvariotii var.brunneolus)GPP1101B(微生物保藏号KCTC119938BP)的菌株投入于人参或红参的提取液并进行培养而得的培养液的免疫活性剂、抗菌活性剂、抗癌剂及抗突变剂等制剂。这种制剂不仅使GPP1101B的菌株投入于人参或红参的提取液并进行培养而得的培养液本身起到免疫活性、抗菌活性、抗癌及抗突变作用，而且能够包含一部分或全部或有效成分，不仅包含药剂，还可包含食品。在此，培养液可以为培养后通过过滤肥大生长的GPP1101B的菌株而获得的培养滤液，上述培养液也能够以冷冻干燥的方式包含于制剂中。
另一方面，包含于免疫活性剂、抗菌活性剂、抗癌剂及抗突变剂等制剂的培养液将GPP1101B的菌株投入于人参或红参的提取液并进行培养而制备，在此，人参或红参的提取液可以为将人参或红参放入水中，并在重汤机中在60～100℃的温度下加热12～72小时来过滤人参或红参的溶液，可在15～35℃的温度下，通过培养器的重汤将投入了GPP1101B的菌株的人参或红参的提取液培养10～60天。另一方面，培养液可为在培养结束之后，通过过滤肥大生长的GPP1101B的菌株而获得的培养滤液。
实施例1：菌株的分离及鉴定
从农民利用的人参发酵槽中采集黄色的特殊的霉，利用光学显微镜来进行确认，放置于添加了200ppm的链霉素的马铃薯葡萄糖琼脂(PDA，potato dextrose agar)培养基，并在25℃温度下的培养器中培养了5天。
在形成于培养基的菌落中，多形成黄色的孢子，并采用单一孢子作为GPP1101B菌株进行纯分离。
之后，在实验室中最常使用的马铃薯葡萄糖琼脂斜面培养基(马铃薯200g、琼脂15g、葡萄糖15g及蒸馏水1l)中培养分离菌株，当充分生长时，保管在冰箱中，并使用于实验中。
GPP1101B具有在任何培养基中都能生长得好的特性，因此确认为在副产物中也能够生长。并且，如图1的光学显微镜图像所示，分生孢子梗(Conidiophore)具有形状简单且不分支的特性。并且，如图2的电子显微镜图像所示，孢子为米粒形状的单细胞，且孢子的大小非常小，即数微米(μm)，并如连接环形成分生孢子。
GPP1101B在10～30℃温度的有氧状态下生长，尤其，20～26℃为菌丝生长的最佳温度，与平板培养基中相比，在液体培养基中进行振荡培养时，菌丝及孢子形成量增加得更快。优选地，在10～30℃的温度下形成孢子，尤其，在15～26℃的温度下更优秀。
GPP1101B的各种形态学特性与现有的青霉菌(Penicillium)不同，形成长长的链，并呈现快的生长率，因而在形态上鉴定为拟青霉属(Paecilomyces属)，根据仿生学技术进行通过聚合酶链反应(PCR，Polymerase Chain Reaction)的鉴定，并根据99％的类似度进行鉴定。上述拟青霉属中具有作为对各种植物非病原性的菌的有时使昆虫致病的霉。并且，在人参或红参的提取液中培养这种菌株，并提取培养滤液，冷冻干燥之后，将恒定量添加于培养基，再将绿脓杆菌(Pseudomonas aeruginosa)和金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)进行接种，其结果，形成了明显的抑菌圈(Inhibition zone)，而对大肠杆菌和沙门氏菌没有产生效果。并且，由于对这种培养滤液的试样进行高压灭菌(autoclave，121℃，15分钟)处理，以使抗菌活性消失，因而推定为如上所述的物质的耐热性差。并且，对霉和放线菌呈现低的抗菌活性。
GPP1101B以KCTC11993BP的保藏号于2011年8月4日保藏在韩国生命工学研究院微生物资源中心(KCTC)。并且，于2012年1月26日委托韩国食品研究院(KFRI，参考编号AO2012-02-01-028)，并于2012年1月26日委托分析现有的人参提取溶液(102号)和人参提取溶液的GPP1101B培养液(105号)的试样成分，其结果如下列表1。
表1
1)原人参三醇(PPT，Protopanaxatriol)2)稀有人参皂苷(K，Compound K)3)原人参二醇(PPD，Protopanaxadiol)
根据表1，可知人参提取液的GPP1101B培养液(105号)对于表示痛症抑制及脂质过氧化抑制等作用的Rf、表示实验中肝损伤抑制作用等的Rh1、表示血小板凝聚抑制、记忆力减退改善等功效的Rg2、表示糖及脂肪代谢促进、抗糖尿作用等的Rb2、表示促肾上腺皮质激素、皮质酮分泌促进作用的Rd、表示癌细胞转移抑制作用、实验中肝损伤抑制等作用的Rg3等，与现有的人参提取液(102号)相比，包含大量的成分。
实施例2：抗癌特性
对利用GPP1101B的试样的抗癌特性进行了实验。
为了测定细胞生存率，使用了噻唑蓝比色法(MTT assay)，试样为人参培养液(KJS)1～100μg/ml，确立细胞株为THP-1(人类急性单核细胞性白血病细胞株)、Molt-4(人类淋巴细胞性白血病细胞株)、U-937(人类组织细胞性白血病细胞株)及HL-60(人类急性早幼粒细胞白血病)。并且，试样为将在重汤机放入水和人参或红参并在60～100℃的温度下煮12～72小时来制备的试样溶液与GPP1101B菌株一同放入培养器，并在15～35℃的温度下培养10～60天来制备，上述方法同样适用于以后的其他实施例(实施例3至实施例5)的试样中。
实验方法如下：根据噻唑蓝比色法，将各个浓度(0.1～10μg/ml)的试样添加于THP-1等白血病细胞培养系统，并在37℃的温度下的CO2培养器(5％-CO2、95％-空气(air))内培养48小时。在培养结束4个小时前将以5mg/ml浓度稀释于DPBS-A(pH7.4)的噻唑蓝溶液20μl添加于各个孔(well)，通过溶解于0.1N HCL的10％十二烷基硫酸钠(SDS)100μl进行溶解，并利用银箔纸来遮光18小时。利用酶联免疫检测仪(ELISA reader)来在570nm条件下测定发色的各个孔(well)的吸光度，与对照组的吸光度相比，将细胞生存率换算为百分比，并示于图3至图6中。
在传代培养THP-1(人类急性单核细胞性白血病细胞株)、Molt-4(人类淋巴细胞性白血病细胞株)、U-937(人类组织细胞性白血病细胞株)及HL-60(人类急性早幼粒细胞白血病)细胞，添加各个浓度(0.1～10μg/ml)的人参培养液(KJS)，并观察白血病细胞的细胞生存率，其结果，如图3至图6所示，使用于实验的所有的白血病细胞株中，观察到依赖于浓度抑制细胞生存率的抗癌活性，尤其，在THP-1细胞和Molt-4细胞中，生存率抑制效果显著。
实施例3：免疫调节特性
对利用GPP1101B的试样的免疫调节特性进行了实验。
为了测定淋巴细胞(T、B细胞)亚群(subpopulation)，以口服方式向BALB/c类小鼠给药试样4周(250或500mg/kg B.W.)，并取出脾脏及胸腺之后，调配脾脏及胸腺细胞悬液，在1×106细胞/孔(well)上双重染色PE结合的抗小鼠(PE conjugated-anti mouse)B220抗体及FITC结合的抗小鼠(FITC conjugated-anti mouse)Thy-1抗体和PE-抗(ati)CD4/FITC-抗(anti)CD8(抗体(希格玛(Sigma))，在4℃的温度下反应30分钟，并利用流式细胞仪(flow cytometer)(激发(excitai n)：488nm，发射(emission)：525nm/FITC，575nm/PE)来测定淋巴细胞的亚群。
并且，为了测定血中的细胞因子(cytokine)(干扰素(IFN)-γ、IL-2、IL-4)，作为IFN-γ的测定，利用小鼠干扰素-γ酶联免疫预备(mouse IFN-γELISA Ready-Set-Go)(欣博盛生物科技有限公司(eBios cience)公司)试剂盒(kit)来测定血清内的IFN-γ的浓度。
在微孔板(Microplate)(96孔(well))涂敷纯化的抗小鼠(pu rified anti-mouse)IFN-γ抗体(100μl/well)，在4℃的温度下遮光(过夜(over night))并吸附。抽出(aspirate)各个孔(well)，利用洗涤缓冲液(wash buffer)(300μl/well)洗涤3次，利用检测稀释缓冲液(assay diluent buffer)稀释，并在室温下反应1小时。抽出各个孔(well)，分别向每个孔(well)添加100μl的试料及标准溶液(重组小鼠(recombinant mouse)IFN-γ，1μg/ml)，并在室温下反应2个小时，洗涤3次之后，向每个孔(well)注入100μl的利用检测稀释剂(assay dilunet)(1×)稀释的检测抗体(detection antibody)，在室温下反应1小时。利用洗涤缓冲液(wash buffer)(300μl/well)洗涤3次，向每个孔(well)放入100μl的抗生物素蛋白HRP抗体(Avidin-HRP antibody)，在室温下反应30分钟之后，洗涤3次，向每个孔(well)添加100μl的底物溶液，并在遮光条件下发色15分钟。添加50μl的停止液(stopsolution)来停止反应，并利用酶联免疫检测仪(ELISA reader)在450nm波长条件下测定吸光度。并且，IL-2和IL-4的测定按照IFN-γ的测定方法进行。
这种实验对脾脏及胸腺淋巴细胞亚群的效果如下列表2和图7所示。
表2
淋巴细胞亚群(Lymphocyte subpopulation)
*；与对照组显著不同(Significantly different from control group)(*p＜0.05)
以口服方式向BALB/c小鼠给药KJS试样4周，并测定脾脏及胸腺淋巴细胞亚群，其结果，尤其，在200mg/kg的B.W给药浓度中，B淋巴细胞及T淋巴细胞的数量(活性)显著增加。如上所述，被解释为表示人参培养液上升调节(up-regulation)免疫能力的结果。
并且，这种实验对血中淋巴因子(IFN-γ、IL-2及IL-4)的生成产生的效果如下列表3和附图8所示。
表3
以口服方式向BALB/c小鼠给药KJS试样(250mg/kg的B.W)4周，并利用酶联免疫方法来测定血中淋巴因子的生成，其结果，干扰素(interferon)-γ增加2倍以上，IL-2与对照组相比，增加约53％。上述结果如淋巴细胞亚群结果所示，是T淋巴细胞的活性增加的结果，尤其，被认为是从Th1细胞分离的IFN-γ和IL-2的淋巴因子的生成增加的结果。在以上结果中，被解释为KJS具有上升调节免疫系统活性的功效。
实施例4：抗菌活性特性
对利用GPP1101B的试样的抗菌活性特性进行了实验。
过滤(whatman No.2)试样之后实施冷冻干燥，从而取得粉末，并使取得的上述粉末溶解于无菌水，从而使用为实验用材料。
抗菌性评价步骤如下：按200μl分别将Pseudomonas aeruginosa(绿脓杆菌)、Staphylococcus aureus(金黄色葡萄球菌+)、Eschericahi a coli(大肠杆菌)、Salmonella typhimurium(沙门氏菌)、Aspergill us awamori(泡盛曲霉)及FK 918(自行分离放线菌)涂抹于生长培养基之后放置2小时。放置灭菌的纸盘(paper disk)(6mm)，分别按25μl向上述纸盘分注溶解于蒸馏水的试样0.4mg/ml、2mg/ml及4mg/ml，且在37℃的温度下培养一般细菌24小时，在30℃的温度下培养霉和放线菌48～60小时，从而测定清亮区(clear zone)。
如图9及图10所示，对于试样的抗菌活性，对作为革兰氏阳性菌的金黄色葡萄球菌、作为革兰氏阴性菌的绿脓杆菌、大肠杆菌、沙门氏菌以及霉(Asp.awamori)及放线菌(实验室分离菌株)进行实施。
如下列表4所示，试样浓度为0.1mg/25μl、0.5mg/25μl及1.0mg/25μl的情况下，清亮区(clear zone)由绿脓杆菌(P.aeruginosa)和金黄色葡萄球菌(S.aureus)形成，上述绿脓杆菌(P.aeruginosa)分别为20.79mm、23.26mm及25.41mm，上述金黄色葡萄球菌(S.aureus)分别为19.73mm、19.45mm及23.49mm，但是没有形成大肠杆菌(E.coli)和沙门氏菌(S.typhimurium)。霉(Asp.awamori)形成9.34mm、10.52mm及13.94mm的清亮区(clearzone)，放线菌(FK918)形成10.67mm、9.08mm及9.37mm的清亮区(clear zone)。
表4
1)不形成清亮区(clear zone)
2)在121℃温度下，高压灭菌15分钟
试样在抗菌活性评价中，对绿脓杆菌，金黄色葡萄球菌呈现强的抗菌活性，并对霉和放线菌呈现弱的抗菌活性。但是，在大肠杆菌和沙门氏菌中不呈现抗菌活性，可知高压灭菌(autoclave)(121℃，15分钟)试样的情况下，抗菌活性消失。对作为革兰氏阴性菌的绿脓杆菌和作为革兰氏阳性菌的金黄色葡萄球菌呈现抗菌活性，由此判断为对特定菌株特异性地呈现抗菌活性。
实施例5：抗突变性
对利用GPP1101B的试样的抗突变特性进行了实验。
过滤(whatman No.2)试样之后实施冷冻干燥，从而取得了粉末，并将上述粉末溶解于无菌水，从而使用为实验用材料。
对于试样的抗突变评价，观察了利用沙门氏菌(S.typhimurium)TA98菌株和作为突变的1-硝基芘(1-nitropyrene)、Trp-P-1及黄曲霉毒素(aflatoxin)B1的突变抑制效果。即，在灭菌试验管中，混合0.1M磷酸钠缓冲液(sodium phosphate buffer)550μl、各个不同浓度的试样50μl以及在蛋白胨营养肉汤(Oxoid nutrient broth)No.2(25g/l)中培养12小时的菌培养液(1～2×109CFU/ml)100μl，并在在37℃的温度下以210rpm振荡培养20分钟。利用1/15M磷酸盐缓冲液(phos phate buffer)(pH7.0)来稀释上述培养液，并调至5×103CFU/ml的浓度之后，向上述菌稀释液100μl添加顶层琼脂(top agar)[琼脂(ag ar)6g、NaCl 5g每升(per liter)(45℃)]2ml进行混合，涂敷于VBNM[琼脂15g、蒸馏水920ml、50×VB盐(salt)20ml、40％葡萄糖(glucose)10ml及蛋白胨营养肉汤(Oxoid nutrient broth)No.2(25g/l)50ml]平板培养基上，并在37℃的温度下培养12小时。
分别以0.1mg/plate、0.5mg/plate及1.0mg/plate浓度制备试样，来评价了抗突变性。如表5所示，将1-硝基芘(1-nitropyrene)(1-NP)作为突变原的情况下，在各个浓度呈现7％、19％及54％的突变抑制效果，将Trp-p-1作为突变原的情况下，呈现1％、5％及9％的突变抑制效果，将黄曲霉毒素(aflatoxin)B1(AFB1)作为突变原的情况下，呈现10％、16％及53％的突变抑制效果。
表5
在抗突变性评价中，对于1-NP及AFB1，在1.0mg/plate的浓度中呈现50％以上的高的抗突变性。对于抗菌活性评价，未呈现沙门氏菌的抗菌活性，由此判断为本试样对1-NP及AFB1呈现抗突变性。
如上所述，参照附图对本发明进行了说明，但能够明确的是，在不脱离本发明的技术思想的范围内能够进行各种修改及变形。因此，本发明的范围不应局限于所说明的实施例而定，应根据后述的发明要求保护范围和与这种发明要求保护范围等同的技术方案而定。

Claims (5)

1.一种深棕色宛氏拟青霉(paecilomyces variotii var.brunneolu s)GPP1101B菌株，其特征在于，上述深棕色宛氏拟青霉GPP1101B的微生物保藏号为KCTC119938BP，且上述深棕色宛氏拟青霉GPP1101B是在人参的发酵过程中分离出的。
2.一种培养液的制备方法，其特征在于，将微生物保藏号为KC TC119938BP的权利要求1所述的深棕色宛氏拟青霉GPP1101B菌株投入于人参或红参的提取液并进行培养。
3.根据权利要求2所述的培养液的制备方法，其特征在于，上述人参或红参的提取液为将人参或红参放入水中后，在60～100℃的温度下加热12～72小时，并对人参或红参进行过滤而得的溶液。
4.根据权利要求2所述的培养液的制备方法，其特征在于，在15～35℃的温度下，利用培养器对投入了上述菌株的人参或红参的提取液进行培养10～60天。
5.根据权利要求2至4中任一项所述的培养液的制备方法，其特征在于，在上述培养结束之后，通过过滤肥大生长的菌株而获得培养液。
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