CN104730258B - 一种便携式血型系统检测试纸及其检测方法 - Google Patents

一种便携式血型系统检测试纸及其检测方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种便携式血型系统检测试纸，该试纸由以下部件组成，固相载体，固相载体上设置有检测通道，检测通道上加样垫、抗体垫或抗原垫、泳动垫、反应垫、吸水垫依次搭接，抗体垫预包被血型检测剂，反应垫上固定有显色试剂。本发明试纸可快速、准确检测ABO、Rh、MNS、Kell、Kidd等多种血型系统，可根据POCT检测需要进行项目选择，以适合医院、家庭以及野外紧急等多种情况。

Description

一种便携式血型系统检测试纸及其检测方法
技术领域
本发明涉及医疗血型检测领域，特别涉及一种便携式血型系统检测试纸，可快速、准确检测ABO、Rh、MNS、Kell、Kidd等多种血型系统，可根据POCT检测需要进行项目选择，以适合医院、家庭以及野外紧急等多种情况。
背景技术
血型是对血液分类的方法，通常是指红细胞(RBC)的分型，其依据是RBC表面是否存在某些可遗传的抗原物质。已经发现并为国际输血协会承认的血型系统有32种，与人类输血关系最密切的是ABO血型系统，其次是Rh血型系统，还有MNS、Kell等系统也与某些疾病息息相关。血型鉴定是指对血液成分中细胞表面抗原进行鉴定的技术。快速、准确的血型鉴定技术对遗传学、法医学、临床医学等学科都有广泛的实用价值，因此具有重要的理论和实践意义。血型鉴定对输血至关重要，尤其在医学创伤性大出血、脏器移植、新生儿溶血等时，以不相容的血型输血可能导致溶血反应的发生，造成溶血性贫血、肾衰竭、休克以至死亡。因此，快速、准确、简单的筛查血型可为抢救危急病人，应对突发事件提供保障。
目前血型筛查方法主要分为凝集法和基因法两大类。凝集法的原理为检测受检者血液中RBC表面抗原，只要RBC表面存在相应抗原，即可与相应的抗体发生凝集反应。包括传统的玻片法、纸片法、试管法，后续发展起来的微柱法和卡式法。其优点是速度较快，但受抗体保存条件限制，不适用于野外紧急条件使用。第二类为基因法，主要通过特异性引物对RBC基因进行分型，以此对各种血型进行鉴定，尤其适合于复杂血型的鉴定。然而，其检测速度慢，成本高，不适合于临床常规检测。所以上述方法，都不能避免检测速度慢、操作不便、成本高等问题。因此，研发操作简便、快速准确的新型血型鉴定方法，能够在第一时间获得血型信息，从而为抢救赢得时间，挽救宝贵生命，这对于提高紧急情况下的医疗救治水平具有重要意义。
为了操作简便、提高血型检测速度，人们进行了如下探索：
中国专利[200820179524.1](公开号为201302573)公开了一种用于ABO，Rh-D的血型鉴定卡。该卡以塑料或胶质纸作为基板，在基板上的血清凹槽内包被干燥的标准抗A、抗B、抗D血清，以此进行血型鉴定。该鉴定卡易携带，适用性好，易保存，可弥补传统玻片法发生冷凝集现象的不足。但该方法仅为正定型方法，但缺少质控，容易出现假阴性和假阳性。
中国专利[200920041078.2](公开号为201382943)公开了一种采用迁移层析法检测人ABO和RhD血型定型的试剂卡，在反应膜上设抗A检测线、抗B检测线、抗RhD检测线、质控线。检测线为对应的单克隆抗体，质控线为多克隆抗体。以检测线和质控线显示红色进行相应的结果判断。该方法检测成本较低。但在质控线处抗原抗体需二次反应，增加检测时间。同时因血液颜色为红色，检测线和质控线依据显示红色进行结果判读，误差较大，特异性有待提高。
Noiphung等报道了一种可同时检测的ABO(A/B/AB/O)血型和Rh(D)的血型检测试纸条；但其因采用红细胞与血浆层析距离比进行结果鉴定，要求血液样本的红细胞比容(HCT)低于42％，且需1∶2稀释后方可进行检测，其操作不简便。同时，正常人群HCT一般范围约为37％～50％，其检测的样本范围较小，不能满足普通人血型检测需求。单纯依靠红细胞与血浆层析距离比进行结果验证，缺乏质控对照，导致其结果特异性较差。
所有上述方法均缺乏对血型检测装置的质控，存在一定的假阴性和假阳性，且检测时间较长，无法真正实现POCT检测以及满足紧急情况下的使用，极大限制了其应用价值。
发明内容
为解决上述现有技术存在的问题，本发明的目的在于提供一种便携式血型系统检测试纸，该试纸是利用血液抗原抗体反应以及蛋白质显色反应原理，在试纸基质上预包被血型抗体或抗原，在反应垫上固定蛋白质显色试剂，以此进行快速血型鉴定。本发明的便携式血型检测装置检测区主要包含正定型检测区和反定型检测区。正定型检测区为在每一通道的试纸基质上预包被血型抗体，反应垫预固定显色试剂。从加样孔滴加血液样品后，血液中的RBC表面抗原可与通道中预包被的血型抗体结合反应。反定型检测为在试纸基质上包被红细胞，从加样孔滴加全血后，通过分离垫自动分离血浆和红细胞，使血浆与通道中预包被的红细胞发生反应，从而快速进行正反定型血型鉴定。
为达到上述目的，本发明的技术方案为：
一种便携式血型系统检测试纸，该试纸由以下部件组成，固相载体，固相载体上设置有检测通道，检测通道上加样垫、抗体垫或抗原垫、泳动垫、反应垫、吸水垫依次搭接，抗体垫预包被血型检测剂，反应垫上固定有显色试剂。
进一步的，所述抗原垫与加样垫间还搭接有用于分离血浆和红细胞的分离垫。
进一步的，所述抗体垫为一个或相连的多个，其预包被的血型抗体为ABO、Rh血型抗体；采用IgM、IgG、IgM-IgG混合抗体；所述抗原垫预包被抗原为ABO血型抗原。
进一步的，所述ABO血型抗体为抗A、抗B；Rh血型抗体为抗D、抗C、抗c、抗E、抗e抗体；所述ABO抗原为A型红细胞和B型红细胞；其预包被方法为物理吸附、竞争性结合、磁珠固定法。
进一步的，所述试纸包括加样垫、抗体垫及泳动垫的基质为棉浆纸、印花纸、吸墨纸，所述分离垫其基质为全血滤膜、硝酸纤维素膜、醋酸纤维素膜；所述反应垫为棉浆垫、玻璃纤维垫；所述吸水垫为滤纸、纤维素纤维、纸巾纸。
进一步的，所述试纸由固相载体及载体上的五个独立检测通道构成，所述检测通道的各检测通道的加样垫连通或者不连通，设置抗原垫的两检测通道上，加样垫、分离垫、抗原垫、泳动垫、反应垫、吸水垫依次搭接；两抗原垫上分别包被A型红细胞和B型红细胞；设置抗体垫的三个检测通道上，加样垫、抗原垫、泳动垫、反应垫、吸水垫依次搭接；三个抗体垫上分别包被抗A抗体、抗B抗体及Rh血型的抗D抗体。
进一步的，所述检测通道采用蜡染、蜡浸、微流控或芯片法制备。
进一步的，所述显色试剂为：溴甲酚绿混合试剂、溴甲酚紫混合试剂、考马斯亮蓝试剂；其配合的辅助试剂为十二烷基聚乙二醇醚或吐温20，添加柠檬酸及柠檬酸钠试剂，调PH值至4.2±0.5，配成的蛋白质显色混合试剂。
进一步的，所述固相载体为有机玻璃、聚乙烯(PE)、ABS塑料、聚氯乙烯材料(PVC)或聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)。
进一步的，所述加样垫，泳动垫，抗体垫采用棉浆纸、印花纸、吸墨纸或硝酸纤维素膜；分离垫采用全血滤膜、硝酸纤维素膜或醋酸纤维素膜；反应垫采用棉浆垫或玻璃纤维垫。
进一步的，所述试纸可以有外壳或无外壳。外壳可为有机玻璃(PMMA)、聚苯乙烯(PS)、聚碳酸酯(PC)等透明或不透明的塑料；其外观可为圆形、椭圆形、正方形、长方形等设计；可根据需求进行外壳更换，外壳可按需设加样区，观察区，信息粘贴区，握持区等，加样区、观察区形状可为方形、圆形，或其他任一形状设计。
一种利用上述试纸检测血型的方法，包括如下步骤：
将待检测血样由加样垫加入，血样中的RBC表面抗原与抗体垫预包被的抗体结合反应，经过抗体垫选择性结合后剩余的血样物质继续运动经泳动垫分离，并滴加冲洗液使未凝集的血样物质与反应垫的显色试剂反应显色，依据不同颜色判断相应血型及血样是否有效层析至反应垫；血液中带有的抗体的血浆经加样垫及分离垫与血液中的RBC分离，与抗原垫预包被的RBC反应凝集，未凝集的血样物质经冲洗液冲洗后与反应垫的显色剂反应显色，依据不同颜色判断相应血型及血样是否有效层析至反应垫；吸水垫在检测通道末端吸取多余液体，提高液体由前向后运动速度，缩短检测时间。
进一步的，该方法包括正定型检测及反定型检测，正定型检测为在每一通道的抗体垫上预包被血型抗体，从加样孔滴加血液样本后，血液样本中的RBC表面抗原可与抗体垫中预包被的抗体结合反应；反定型检测为在抗原垫上包被红细胞，从加样孔滴加全血后，通过分离垫自动分离血浆和RBC，使血浆与通道中预包被的RBC发生反应，若RBC凝集；待滴加冲洗液后，已经凝集的RBC无法移动，而血液中未凝集的血浆可以通过层析作用与反应垫的显色试剂反应形成蓝绿色复合物；若RBC未发生凝集，则未凝集的RBC和血浆可通过层析与反应垫的显色试剂反应，形成灰褐色复合物，从而快速进行正反定型血型鉴定。
进一步的，所述冲洗液为：柠檬酸-柠檬酸钠冲洗液、柠檬酸-氢氧化钠-盐酸缓冲液、邻苯二甲酸-盐酸缓冲液、磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液、乙酸-乙酸钠缓冲液、邻苯二甲酸氢钾-氢氧化钠缓冲液、甘氨酸-盐酸缓冲液、苯二甲酸氢盐，冲洗液PH值为4.2±0.5，用量为5-100μl。
进一步的，滴加样本后，所检测的环境温度可为4-60℃，所采取加速样本在检测条上层析速度的方式可通过离心方式或添加全血辅助液缩短检测时间。
进一步的，所采取的结果判读方法可为肉眼观察或结合常规光谱检测仪器自动得出结果。
相对于现有技术，本发明的有益效果为：
1.根据本发明装置，所述固相载体、试纸基质、反应垫、吸水垫等，其基质均为常见耗材，易保存，成本低，可获得性高。
2.根据本发明的装置，本发明所采用试纸基质可为棉浆纸、印花纸等纸张或薄膜，其层析效果佳，促进抗原抗体反应，可极大减少血液层析所需时间。
3.根据本发明的装置，所述反定型RBC与血浆分离层其基质可为全血滤膜、硝酸纤维素膜、醋酸纤维素膜，或者其他可有效分离RBC与血浆的高分子材料。分离层使全血样本无需离心，自动分离血浆与红细胞，简化操作步骤，缩短准备时间。
4.所采用的反应垫可以是棉浆垫、玻璃纤维垫，或者多孔高分子材料制成的纤维垫或试纸等，其高分子材料性能可促进检测试剂与样本反应，缩短血型检测时间，1min内快速进行血型结果判读，实现POCT血型检测。
5.所述吸水垫可为滤纸、纤维素纤维，或者其他的可高效吸收液体的其他材料，其致密的材料结果可有效吸取多余液体，便于立即观察反应结果，进行血型判断。
6.根据本发明装置，所采用的显色试剂选自溴甲酚绿、溴甲酚紫或其他可与血液内容物如蛋白质等发生特异显色反应的物质，其特异的物理化学性能，可排除因样本导致的假阴性和假阳性。利用显色试剂混合液中所选取的减少对蛋白质之间原有的相互作用的物质，其物质可为吐温、十二烷基聚乙二醇醚或其他不破坏蛋白质结构的保护试剂，最大程度保持蛋白质性状，提高检测准确性。
7.根据本发明装置，所提供的质控线，与检测线合二为一，可判断所加样本是否为血液及是否有效层析到反应垫，以此特异的辨别试纸条是否有效，降低血型差错发生率。
8.根据本发明装置，所用的待检血液样本为5-100μl的人新鲜全血，检测所需血量少，节约样本量，缩短检测时间。全血样本可为正常表达RBC抗原，也可为抗原表达较正常弱的亚型，可提高血型检测的灵敏度。
9.根据本发明装置，试纸所包被分子可为血型抗体或抗原。所包被的抗体采用IgM、IgG、IgM-IgG混合抗体或其他可与RBC抗原发生反应的抗体。可采用单克隆、基因工程或其他制备方法，种属来源可为鼠、兔或其他可用于抗原抗体反应的来源。其固定方式可为物理吸附、竞争性结合、磁珠固定法或其他不改变抗体/抗原特性的固定方法。其抗体活性物质可为聚乙烯吡咯烷酮、右旋糖酐、甘油，或者其他可长期保持抗体活性不受温度等条件影响的物质。经过固定后的抗体，保存温度在4℃-60℃，可保持稳定的抗体效价，受户外条件限制小。
10.根据本发明装置，所选用的冲洗液可为柠檬酸-柠檬酸钠冲洗液、苯二甲酸氢盐、磷酸盐缓冲液、生理盐水等，或其他可促进血液内容物与试剂反应的冲洗液。
11.根据本发明装置，所采取的试纸条可为单通道、双通道、多通道等，或其可便于样本与检测试剂反应的通道样式。通道可为固定或可更换式，可根据需求增加通道，极大满足检测需求。试纸通道制造工艺可利用为蜡染技术、蜡浸技术、微流控技术、芯片技术或不影响样本与试剂反应的其他技术，其样本层析方式可为单侧向另一侧泳动，中间向两端/四周泳动或由四周/两端向中间泳动等便于血型检测的形式。可简化操作流程，实现一次加样，同步检测。
12.根据本发明装置，可以有外壳或无外壳。其外壳可为有机玻璃(PMMA)、聚苯乙烯(PS)、聚碳酸酯(PC)等透明或不透明的塑料。检测盘外壳可为圆形、椭圆形、正方形、长方形等设计，优选长方形。可根据需求进行外壳更换，外壳可设加样区，观察区，信息粘贴区，握持区等，外观小巧，可户外携带，最大限度的满足使用者的需求，简化检测流程。
13.所检测的环境温度可为4-60℃，可以通过离心方式或添加全血辅助液加速血液和冲洗液在检测条中的泳动，从而缩短检测时间。
14.结果判定可以采用肉眼进行人工判读，同时也可以结合常规光谱检测进行自动判断。人工判读时，阳性结果与阴性结果颜色差异明显，可快速准确判断。结合常规光谱检测时，可实现血型的批量化检测，以满足大量血型检测需求。
15.根据本发明的装置，以凝胶卡式法作为金标法，其血型检测灵敏度、特异性均可达100％，假阴性与假阳性率低。
16.根据本发明的方法，可根据需要检测ABO、Rh、Kell、Kidd等已经发现并被国际输血协会承认的血型系统。
附图说明
图1、2、3为本发明的结构示意图
图4、5、6为本发明的肉眼所示检测结果图示意图
其中，1-加样垫、2/3/4-抗体垫、5-泳动垫、6/7/8/12/13-反应垫、9-吸水垫、10/11-抗原垫、14-固相载体、15-分离垫、16-外壳
具体实施方式
为了加深对本发明的理解，下面将结合附图及具体实施方式对本发明做进一步详述，该实例仅用于解释本发明，并不构成对本发明保护范围的限定。
实施例1：人ABO血型正反定型检测及Rh(D)血型检测装置的制备和使用
1)固相载体筛选：从(聚氯乙烯材料)PVC、聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)等材料中选择PVC作为固相载体底板。
2)试纸基质筛选：从棉浆纸、印花纸、吸墨纸、硝酸纤维素膜等基质中优选棉浆纸作为正定型加样垫及其他泳动垫、抗体垫的试纸材料。
3)反定型血液分离基质筛选：从全血滤膜、硝酸纤维素膜、醋酸纤维素膜等材料中优选全血滤膜作为分离RBC和血浆的基质。
3)反应垫基质筛选：从棉浆垫、玻璃纤维垫等基质中优选棉浆垫作为反应垫材料。
4)抗体效价及固定：抗体可根据检测需要变更，可为抗A、抗B、抗D、抗C、抗c、抗E、抗e或其他血型抗体，本实施例优选常用几类检测抗体抗A、抗B、抗D。如图1在装置中1为加样孔，在2-抗体垫包被抗A抗体、3-抗体垫包被抗B抗体、4-抗体垫包被抗D抗体。抗体可为IgM、IgG单独或混合抗体，优选IgM单克隆抗体。抗体效价大于64，以抗体效价256为例，抗体包被量大于5μl，优选8μl。固定方法为物理吸附或其他对抗体生物活性影响不大的其他方法，优选竞争性结合。其抗体活性物质可为聚乙烯吡咯烷酮、右旋糖酐、甘油，或者其他可长期保持抗体活性不受温度等条件影响的物质，本实施例对比多种物质后，优选6％左旋糖苷与抗体混合，增强抗体活性。
5)显色试剂配制及固定：配制溴甲酚绿、溴甲酚紫混合制剂或其他可与蛋白质发生显色反应的试剂。以溴甲酚绿试剂为例，配制浓度为0.1-0.5mmol/L的溴甲酚绿溶液(0.05为梯度)，以及相应浓度的非离子去垢剂作为蛋白质保护剂，优选十二烷基聚乙二醇醚(Brij-35)，添加柠檬酸及柠檬酸钠试剂，调PH值至4.2±0.5，配成溴甲酚绿混合试剂。经过反复实验，得出浓度为0.35mmol/L的溴甲酚绿混合试剂与蛋白质显色反应最佳。将溴甲酚绿混合试剂干燥固定到6/7/8/12/13-反应垫上，固定方法为物理吸附或其他可增大蛋白质与试剂反应显色的方法。
6)冲洗液配制及用量：配制可促进蛋白质反应的冲洗液。以柠檬酸-柠檬酸钠冲洗液为例，12.3ml0.1mol/L的柠檬酸溶液与7.7ml柠檬酸钠溶液混合均匀后，配成PH值为4.2的冲洗液用量为10-100μl，优选40μl。
7)检测条件：血液用量可为5-100μl，经过实验优选20μl进行加样。检测温度可为4-60℃，以室温25℃为例。反应时间可为0.5-5min，本实施例优选1min进行观察。
7)检测卡组装：具体操作中按照附图的结构模式优选采用蜡染及蜡浸技术，将通道设计为图中任一结构，本实施例以图3所示为例。也可结合微流控技术、芯片技术等其他方式。将已包被2-抗A、3-抗B抗体、4-抗D抗体宽为5-15cm的长方形棉浆纸粘贴到PVC背衬板上，其后固定5-泳动垫，将包被溴甲酚绿混合试剂的6/7/8-反应垫固定到5-泳动垫末端，最后固定9-吸水垫，将试纸切割成1-5mm宽度的试纸条，作为正定型试纸条保存备用。同时，将10/11-抗原垫贴于PVC背衬板上，其后固定5-泳动垫，将包被溴甲酚绿混合试剂的12/13-反应垫固定到泳动垫末端，最后固定9-吸水垫，将试纸切割成1-5mm宽度的试纸条，作为反定型试纸条保存备用。本实施优选宽2mm，长2.5cm的试纸条作为通道检测试纸。正定型加样垫材料为棉桨纸，反定型为全血滤膜，本实施例优选宽1.4cm，长0.5cm尺寸作为加样垫。正反定型检测所在方向可根据需要调整，本实施例优选左侧为正定型，右侧为反定型。本实施例6/7反应垫为正定型检测垫，8-反应垫为Rh(D)检测垫，12/13反应垫为反定型检测垫。将正反定型加样垫和检测试纸条粘贴于各对应通道中，作为检测内置区。本装置外壳优选长方形，宽1.8cm，长6.5cm，外壳两端设置加祥口，在反应垫处设结果观察窗口，将检测内置区装载到外壳中。
8)样品检测：在左右两侧1-加样垫滴加20μl A型全血，然后在10-抗原垫处滴加A型红细胞，11-抗原垫处滴加B型红细胞，30s后分别在左右滴加40μl冲洗液，观察红细胞与抗体或血浆是否发生凝集反应，滴加冲洗液后室温条件下1min可观察6/7/8/12/13-反应垫得出检测结果
9)肉眼结果判断：
如图4、5、6所示，所有反应垫出现蓝绿色或者灰褐色本次检测方为有效。若6、8、13反应垫出现蓝绿色，7、12出现灰褐色该血型为A+；若6、13反应垫出现蓝绿色，7、8、12出现灰褐色该血型为A-；若7、8、12反应垫出现蓝绿色，6、13出现灰褐色该血型为B+；若7、12反应垫出现蓝绿色，6、8、13出现灰褐色该血型为B-；若6、7、8反应垫出现蓝绿色，12、13出现灰褐色该血型为AB+；若6、7反应垫出现蓝绿色，8、12、13出现灰褐色该血型为AB-；若8、12、13反应垫出现蓝绿色，6、7出现灰褐色该血型为O+；若12、13反应垫出现蓝绿色，6、7、8出现灰褐色该血型为O-；检测结果如下一览表(表一)所示，其中Y-蓝绿色，N-灰褐色。
实施例2：人ABO血型正反定型检测及Rh(C)血型检测装置的制备和使用
固相载体及试纸基质及反应垫筛选、显色试剂配制及固定、冲洗液配制及用量、抗体效价及固定方式、检测条件等按照例1所述实施。
1)检测卡组装：具体操作中按照附图的结构模式优选采用蜡染及蜡浸技术，将通道设计为图中任一结构，本实施例以图4所示为例。也可结合微流控技术、芯片技术等其他方式。根据检测需要，本实施例将Rh(D)通道替换为Rh(C)进行检测，也可更换为任意其他抗体。首先将已包被2-抗A、3-抗B抗体、4-抗C抗体宽为5-15cm的长方形棉浆纸粘贴到PVC背衬板上，其后固定5-泳动垫，将包被溴甲酚绿混合试剂的6/7/8-反应垫固定到5-泳动垫末端，最后固定9-吸水垫，将试纸切割成1-5mm宽度的试纸条，作为正定型试纸条保存备用。同时，将10/11-抗原垫贴于PVC背衬板上，其后固定5-泳动垫，将包被溴甲酚绿混合试剂的12/13-反应垫固定到泳动垫末端，最后固定9-吸水垫，将试纸切割成1-5mm宽度的试纸条，作为反定型试纸条保存备用。本实施优选宽2mm，长2.5cm的试纸条作为通道检测试纸。正定型加样垫材料为棉桨纸，反定型为全血滤膜，本实施例优选宽1.4cm，长0.5cm尺寸作为加样垫。正反定型检测所在方向可根据需要调整，本实施例优选左侧为正定型，右侧为反定型。本实施例6/7反应垫为正定型检测垫，8-反应垫为Rh(C)检测垫，12/13反应垫为反定型检测垫。如图4所示，以中间为加样孔，将正反定型加样垫和检测试纸条粘贴于各对应通道中，作为检测内置区。本装置外壳优选长方形，宽1.8cm，长6.5cm，外壳中间设置加样口，在反应垫处设结果观察窗口，将检测内置区装载到外壳中。
8)样品检测：在左右两侧1-加样垫滴加20μl A型全血，然后在10-抗原垫处滴加A型红细胞，11-抗原垫处滴加B型红细胞，30s后分别在左右滴加40μl冲洗液，观察红细胞与抗体或血浆是否发生凝集反应，滴加冲洗液后室温条件下1min可观察6/7/8/12/13-反应垫得出检测结果。
9)肉眼结果判断：
所有反应垫出现蓝绿色或者灰褐色本次检测方为有效。若6、8、13反应垫出现蓝绿色，7、12出现灰褐色该血型为A型存在Rh(C)抗体；若6、13反应垫出现蓝绿色，7、8、12出现灰褐色该血型为A型不存在Rh(C)抗体；若7、8、12反应垫出现蓝绿色，6、13出现灰褐色该血型为B型存在Rh(C)抗体；若7、12反应垫出现蓝绿色，6、8、13出现灰褐色该血型为B型不存在Rh(C)抗体；若6、7、8反应垫出现蓝绿色，12、13出现灰褐色该血型为AB型存在Rh(C)抗体；若6、7反应垫出现蓝绿色，8、12、13出现灰褐色该血型为AB型不存在Rh(C)抗体；若8、12、13反应垫出现蓝绿色，6、7出现灰褐色该血型为O型存在Rh(C)抗体；若12、13反应垫出现蓝绿色，6、7、8出现灰褐色该血型为O型不存在Rh(C)抗体；
实施例3：人ABO血型正反定型检测及Rh(E)血型检测装置的制备和使用
固相载体及试纸基质及反应垫筛选、显色试剂配制及固定、冲洗液配制及用量、检测条件等按照例1所述实施。
1)检测卡组装：具体操作中按照附图的结构模式优选采用蜡染及蜡浸技术，将通道设计为图中任一结构，本实施例以图5所示为例。也可结合微流控技术、芯片技术等其他方式。根据检测需要，本实施例将Rh(D)通道替换为Rh(E)进行检测，也可更换为任意其他抗体。首先将已包被2-抗A、3-抗B抗体、4-抗E抗体宽为5-15cm的长方形棉浆纸粘贴到PVC背衬板上，其后固定5-泳动垫，将包被溴甲酚绿混合试剂的6/7/8-反应垫固定到5-泳动垫末端，最后固定9-吸水垫，将试纸切割成1-5mm宽度的试纸条，作为正定型试纸条保存备用。同时，将10/11-抗原垫贴于PVC背衬板上，其后固定5-泳动垫，将包被溴甲酚绿混合试剂的12/13-反应垫固定到泳动垫末端，最后固定9-吸水垫，将试纸切割成1-5mm宽度的试纸条，作为反定型试纸条保存备用。本实施优选宽2mm，长2.5cm的试纸条作为通道检测试纸。正定型加样垫材料为棉桨纸，反定型为全血滤膜，本实施例优选宽1.4cm，长0.5cm尺寸作为加样垫。本实施例6/7反应垫为正定型检测垫，8-反应垫为Rh(E)检测垫，12/13反应垫为反定型检测垫。如图5所示，以左侧为加样孔，将正反定型加样垫和检测试纸条粘贴于各对应通道中，作为检测内置区。本装置外壳优选长方形，宽1.8cm，长6.5cm，外壳左端设置加样口，在反应垫处设结果观察窗口，将检测内置区装载到外壳中。
8)样品检测：在左右两侧1-加样垫滴加20μl A型全血，然后在10-抗原垫处滴加A型红细胞，11-抗原垫处滴加B型红细胞，30s后分别在左右滴加40μl冲洗液，观察红细胞与抗体或血浆是否发生凝集反应，滴加冲洗液后室温条件下1min可观察6/7/8/12/13-反应垫得出检测结果。
9)肉眼结果判断：
如图1或2所示，所有反应垫出现蓝绿色或者灰褐色本次检测方为有效。若6、8、13反应垫出现蓝绿色，7、12出现灰褐色该血型为A型存在Rh(E)抗体；若6、13反应垫出现蓝绿色，7、8、12出现灰褐色该血型为A型不存在Rh(E)抗体；若7、8、12反应垫出现蓝绿色，6、13出现灰褐色该血型为B型存在Rh(E)抗体；若7、12反应垫出现蓝绿色，6、8、13出现灰褐色该血型为B型不存在Rh(E)抗体；若6、7、8反应垫出现蓝绿色，12、13出现灰褐色该血型为AB型存在Rh(E)抗体；若6、7反应垫出现蓝绿色，8、12、13出现灰褐色该血型为AB型不存在Rh(E)抗体；若8、12、13反应垫出现蓝绿色，6、7出现灰褐色该血型为O型存在Rh(E)抗体；若12、13反应垫出现蓝绿色，6、7、8出现灰褐色该血型为O型不存在Rh(E)抗体；检测结果如下一览表(表一)所示，其中Y-蓝绿色，N-灰褐色。
以上所述，仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何不经过创造性劳动想到的变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应该以权利要求书所限定的保护范围为准。

Claims (13)

1.一种便携式血型系统检测试纸，其特征在于，该试纸由以下部件组成，固相载体，固相载体上设置有检测通道，检测通道上加样垫、抗体垫或抗原垫、泳动垫、反应垫、吸水垫依次搭接，抗体垫预包被血型检测剂，反应垫上固定有显色试剂；所述抗原垫与加样垫间还搭接有用于分离血浆和红细胞的分离垫；所述显色试剂为：溴甲酚绿混合试剂、溴甲酚紫混合试剂、考马斯亮蓝试剂；混合试剂的辅助试剂为十二烷基聚乙二醇醚或吐温20，添加柠檬酸及柠檬酸钠试剂，调pH 值至4.2±0.5，配成的蛋白质的显色试剂。
2.根据权利要求1所述的试纸，其特征在于，所述抗体垫为一个或相连的多个，其预包被的血型抗体为ABO、Rh 血型抗体；采用IgM、IgG、IgM-IgG 混合抗体；所述抗原垫预包被抗原为ABO 血型抗原。
3.根据权利要求2所述的试纸，其特征在于，所述ABO 血型抗体为抗A、抗B ；Rh 血型抗体为抗D、抗C、抗c、抗E、抗e 抗体；所述ABO 抗原为A 型红细胞和B 型红细胞；其预包被方法为物理吸附、竞争性结合、磁珠固定法。
4.根据权利要求3所述的试纸，其特征在于，所述试纸中，加样垫、抗体垫及泳动垫采用棉浆纸、印花纸、吸墨纸，所述分离垫为全血滤膜、硝酸纤维素膜、醋酸纤维素膜；所述反应垫为棉浆垫、玻璃纤维垫；所述吸水垫为滤纸、纤维素纤维、纸巾纸。
5.根据权利要求4所述的试纸，其特征在于，所述试纸由固相载体及载体上的五个独立检测通道构成，所述检测通道的各检测通道的加样垫连通或者不连通，设置抗原垫的两检测通道上，加样垫、分离垫、抗原垫、泳动垫、反应垫、吸水垫依次搭接；两抗原垫上分别包被A 型红细胞和B 型红细胞；设置抗体垫的三个检测通道上，加样垫、抗原垫、泳动垫、反应垫、吸水垫依次搭接；三个抗体垫上分别包被抗A 抗体、抗B 抗体及Rh 血型的抗D 抗体。
6.根据权利要求1-5任一所述的试纸，其特征在于，所述检测通道采用蜡染、蜡浸、微流控或芯片法制备。
7.根据权利要求1所述的试纸，其特征在于，所述固相载体为有机玻璃、聚乙烯、ABS 塑料、聚氯乙烯材料或聚对苯二甲酸乙二醇酯。
8.根据权利要求1所述的试纸，其特征在于，所述试纸有外壳或无外壳，外壳为有机玻璃、聚苯乙烯、聚碳酸酯类透明或不透明的塑料；其外观为圆形、椭圆形、正方形或长方形；外壳按需设有加样区，观察区，信息粘贴区，握持区；加样区、观察区形状为方形、圆形。
9.一种利用权利要求1-8任一项所述试纸检测血型的方法，其特征在于，包括如下步骤：
将待检测血样由加样垫加入，血样中的RBC 表面抗原与抗体垫预包被的抗体结合反应，经过抗体垫选择性结合后剩余的血样物质继续运动经泳动垫分离，并滴加冲洗液使未凝集的血样物质与反应垫的显色试剂反应显色，依据不同颜色判断相应血型及血样是否有效层析至反应垫；血液中带有的抗体的血浆经加样垫及分离垫与血液中的RBC 分离，与抗原垫预包被的RBC 反应凝集，未凝集的血样物质经冲洗液冲洗后与反应垫的显色剂反应显色，依据不同颜色判断相应血型及血样是否有效层析至反应垫；吸水垫在检测通道末端吸取多余液体，提高液体由前向后运动速度，缩短检测时间。
10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，该方法包括正定型检测及反定型检测，正定型检测为在每一通道的抗体垫上预包被血型抗体，从加样孔滴加血液样本后，血液样本中的RBC 表面抗原与抗体垫中预包被的抗体结合反应；反定型检测为在抗原垫上包被红细胞，从加样孔滴加全血后，通过分离垫自动分离血浆和RBC，使血浆与通道中预包被的RBC发生反应，若RBC 凝集；待滴加冲洗液后，已经凝集的RBC 无法移动，而血液中未凝集的血浆通过层析作用与反应垫的显色试剂反应形成蓝绿色复合物；若RBC 未发生凝集，则未凝集的RBC 和血浆通过层析与反应垫的显色试剂反应，形成灰褐色复合物，从而快速进行正反定型血型鉴定。
11.根据权利要求9或10所述的方法，其特征在于，所述冲洗液为：柠檬酸- 柠檬酸钠冲洗液、柠檬酸- 氢氧化钠- 盐酸缓冲液、邻苯二甲酸- 盐酸缓冲液、磷酸氢二钠- 柠檬酸缓冲液、乙酸- 乙酸钠缓冲液、邻苯二甲酸氢钾- 氢氧化钠缓冲液、甘氨酸- 盐酸缓冲液、苯二甲酸氢盐中的任一种，冲洗液pH 值为4.2±0.5，用量为5-100μl。
12.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，滴加样本后，检测的环境温度为4-60℃，通过离心方式或添加全血辅助液加速样本在检测条上层析速度的方式缩短检测时间。
13.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，结果判读方法为肉眼观察或结合常规光谱检测仪器自动得出。
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Families Citing this family (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105550507A (zh) * 2015-12-09 2016-05-04 上海斐讯数据通信技术有限公司 测量血型的智能终端及测量方法
CN107367620A (zh) * 2017-09-21 2017-11-21 苏州新波生物技术有限公司 一种检测血液中降钙素原的试剂盒及降钙素原的检测方法
CN108918865A (zh) * 2018-05-21 2018-11-30 德康润生物科技（北京）有限公司 荧光免疫层析试纸条及试剂卡
CN109917141B (zh) * 2019-03-19 2022-05-10 迪佰(厦门)生物科技有限公司 一种检测人abo血型试纸条、制备方法、检测方法及应用
CN210626494U (zh) * 2019-07-23 2020-05-26 英科新创(厦门)科技股份有限公司 一种血型抗原检测组件
CN111443211B (zh) * 2020-03-04 2024-01-26 重庆大学 一种多血型系统自动检测卡及检测方法
CN112578129A (zh) * 2020-12-05 2021-03-30 西安良升生物科技有限公司 一种ABO正反定型/RhD血型检测微盘
CN113634295B (zh) * 2021-09-14 2022-11-04 南京岚煜生物科技有限公司 一种微流控血型检测芯片
CN114660305A (zh) * 2022-03-31 2022-06-24 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 一种快速检测血型抗体滴度的试剂、制备方法、试纸条及应用
CN114563583B (zh) * 2022-04-24 2022-07-22 天津德祥生物技术有限公司 一种高通量微反应血型正定检测装置
CN115598356B (zh) * 2022-09-30 2023-07-11 杭州瑞测生物技术有限公司 一种猫血型快速检测卡及其检测方法
CN115541895B (zh) * 2022-11-29 2023-05-19 天津德祥生物技术股份有限公司 一种提高微流控反定检测卡灵敏度的配方液及应用
CN116298347B (zh) * 2023-05-12 2023-07-25 北京未神生物科技有限公司 一种离心式微流控的全自动血型检测卡及其检测方法
CN117065816B (zh) * 2023-09-22 2024-01-30 北京芯迈微生物技术有限公司 一种微流控芯片及其检测方法

Family Cites Families (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE3686474T2 (de) * 1985-10-11 1993-02-11 Abbott Lab Diagnostische probe.
AU8328287A (en) * 1986-11-13 1988-06-01 Genelabs Incorporated Blood affinity diagnostic method
WO2006080438A1 (ja) * 2005-01-28 2006-08-03 Mochida Pharmaceutical Co., Ltd. イムノクロマト用試験具およびこれを用いた半定量方法
CN1904618A (zh) * 2006-07-31 2007-01-31 潘干华 在血细胞分析仪上进行红细胞血型抗原检测的方法
CN201053966Y (zh) * 2007-05-21 2008-04-30 四川省迈克科技有限责任公司 血型及输血配型快速检测试剂盒
CN102466731A (zh) * 2010-11-19 2012-05-23 南京神州英诺华医疗科技有限公司 一种新型的血型和配血试验检测方法
WO2012083361A1 (en) * 2010-12-24 2012-06-28 Monash University Method and system for detection of blood types
CA2846247A1 (en) * 2011-09-16 2013-03-21 Credo Biomedical Pte Ltd Molecular diagnostic assay device and method of use
CA2855363C (en) * 2011-11-10 2019-02-12 The Administrators Of The Tulane Educational Fund Paper based diagnostic test
CN103884849A (zh) * 2014-04-06 2014-06-25 邵超鹏 一种血型和血型抗体测定结果的显示方式和制作方法

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