CN104694441B - 一株适合制成冻干粉剂的植物乳杆菌 - Google Patents

一株适合制成冻干粉剂的植物乳杆菌 Download PDF

Info

Publication number
CN104694441B
CN104694441B CN201510131364.8A CN201510131364A CN104694441B CN 104694441 B CN104694441 B CN 104694441B CN 201510131364 A CN201510131364 A CN 201510131364A CN 104694441 B CN104694441 B CN 104694441B
Authority
CN
China
Prior art keywords
lactobacillus plantarum
dried powder
freeze
plant
freeze dried
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201510131364.8A
Other languages
English (en)
Other versions
CN104694441A (zh
Inventor
郭立姝
曹亚彬
安琦
殷博
牛彦波
吴皓琼
原韬
樊川
王笑庸
赵晓龙
耿贵
何鑫
徐丹丹
李明璐
袁明
於丽华
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Institute of Microbiology of Heilongjiang Academy of Sciences
Original Assignee
Institute of Microbiology of Heilongjiang Academy of Sciences
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Institute of Microbiology of Heilongjiang Academy of Sciences filed Critical Institute of Microbiology of Heilongjiang Academy of Sciences
Priority to CN201510131364.8A priority Critical patent/CN104694441B/zh
Publication of CN104694441A publication Critical patent/CN104694441A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN104694441B publication Critical patent/CN104694441B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/225—Lactobacillus
    • C12R2001/25—Lactobacillus plantarum
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Fodder In General (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

一株适合制成冻干粉剂的植物乳杆菌。它涉及一株植物乳杆菌。它解决了目前冻干粉剂型微生物饲料添加剂经过冻干工艺处理后菌体的数量下降明显的问题。植物乳杆菌(lactobacillus plantarum)LP‑1522冻干粉反复冻融后存活率可达74.1％，在28℃储藏105d后其有效活菌数仍可维持在1.2×1011cfu/g。

Description

一株适合制成冻干粉剂的植物乳杆菌
技术领域
本发明涉及一株植物乳杆菌。
背景技术
微生物饲料添加剂是农业部批准的饲料添加剂，通过改善动物肠道菌群生态平衡而发挥有益作用，以提高动物健康水平、提高抗病能力、提高消化能力的一类产品；可有效解决疾病泛滥、病菌耐药、免疫能力下降、成活率降低和养殖效益下降。微生物饲料添加剂可替代抗生素，用于提高畜、禽的健康水平的人工培养菌群及其代谢产物，可调整畜、禽体内的微生态失调，保持微生态平衡；是激发动物自身有益菌种繁殖增长，同时抵制有害菌系生长的微生物制品。
冻干粉剂型微生物饲料添加剂因具有易于保存和运输等优点，具有广阔的发展前景。然而经过冻干工艺处理后，活菌体的数量往往下降明显，显著影响其生物功效的发挥。
发明内容
本发明是为了解决目前冻干粉剂型微生物饲料添加剂经过冻干工艺处理后菌体的数量下降明显的问题，而提供的一株适合制成冻干粉剂的植物乳杆菌。
本发明适合制成冻干粉剂的植物乳杆菌为植物乳杆菌(lactobacillusplantarum)LP-1522，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.10516。
植物乳杆菌(lactobacillus plantarum)LP-1522，具有耐低温的特性，适合低温加工与储藏。本发明植物乳杆菌(lactobacillus plantarum)LP-1522具有优异的冻干活性，植物乳杆菌(lactobacillus plantarum)LP-1522冷冻前有效活菌数为4.36×1011cfu/g，冷冻后有效活菌数为3.23×1011cfu/g，植物乳杆菌(lactobacillus plantarum)LP-1522冻干粉在28℃储藏105d后其有效活菌数仍可维持在1.2×1011cfu/g，因此是制备冻干粉剂型微生物饲料添加剂的优质微生物菌株。
本发明植物乳杆菌(lactobacillus plantarum)LP-1522为兼性厌氧革兰氏阳性短杆菌，长为2.5～3.0微米、宽为0.7～0.9微米，无鞭毛，无芽孢，如图1所示。植物乳杆菌(lactobacillus plantarum)LP-1522菌落为白色，中央凸起，表面光滑，呈圆形，边缘整齐，如图2所示。
本发明植物乳杆菌(lactobacillus plantarum)LP-1522，接触酶实验为阴性，氧化酶实验为阴性，阿拉伯糖为阳性，甘露糖为阳性，甘露醇为阳性，葡萄糖为阳性，麦芽糖为阳性，纤维二糖为阳性，木糖为阳性，葡萄糖酸盐为阴性，明胶液化试验为阴性。
本发明植物乳杆菌(lactobacillus plantarum)LP-1522可利用葡萄糖、甘露醇、麦芽糖等多种碳源生长，可利用蛋白胨、酵母粉等为氮源生长。
本发明植物乳杆菌(lactobacillus plantarum)LP-1522的最适生长温度为30～35℃，最适合生长环境的pH值为6.5。
植物乳杆菌是乳酸菌的一种，能大量的产乳酸；具有一定的免疫调节作用；对致病菌有抑制作用；可降低血清胆固醇含量；能维持肠道内菌群平衡；促进营养物质吸收；缓解乳糖不耐症。
本发明植物乳杆菌(lactobacillus plantarum)LP-1522为植物乳杆菌，属于乳杆菌属，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期为2015年2月4日，保藏号为CGMCC No.10516。
附图说明
图1是植物乳杆菌(lactobacillus plantarum)LP-1522革兰氏染色显微镜1200倍观察图。
图2是植物乳杆菌(lactobacillus plantarum)LP-1522菌落观察图。
具体实施方式
本发明技术方案不局限于以下所列举具体实施方式，还包括各具体实施方式间的任意组合。
具体实施方式一：本实施方式适合制成冻干粉剂的植物乳杆菌为植物乳杆菌(lactobacillus plantarum)LP-1522，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.10516。
本实施方式植物乳杆菌(lactobacillus plantarum)LP-1522分离自肇东市宋站镇青贮玉米秸秆中；植物乳杆菌(lactobacillus plantarum)LP-1522的按以下步骤分离、筛选获得：
一、称取青贮玉米秸秆10g，粉碎后浸于无菌水中，进行梯度稀释并涂布于MRS平板上，37℃培养48～72h，选取生长旺盛、产酸透明圈较大的单菌落转接入斜面培养，得到初筛菌株；
二、初筛菌株接种到MRS液体培养基中，37℃培养48h后，滴定法测定酸度；平板法测定活菌体数量，选育出产酸能力强、活菌体数量大的一株乳酸菌，即得到植物乳杆菌(lactobacillus plantarum)LP-1522。
MRS培养基组成为蛋白胨10g、牛肉膏10g、酵母粉5g、K2HPO42g、柠檬酸二铵2g、乙酸钠5g、葡萄糖20g、吐温801mL、MgSO4·7H2O 0.58g、MnSO4·4H2O 0.25g、和蒸馏水1000mL；补加琼脂15g，制备固体培养基。
植物乳杆菌(lactobacillus plantarum)LP-1522透明圈直径为1.09cm，液体MRS培养基中产酸10.36g/ml。
植物乳杆菌(lactobacillus plantarum)LP-1522的16S rDNA基因测序结果与GenBank中的已有序列进行Blast比对，该序列与植物乳杆菌属16S rDNA基因序列的同源性最高，相似性为99％，通过结合菌体形态特征、生长条件、生理生化鉴定结果，参照伯杰氏细菌鉴定手册第八版中描述，确定该菌株属于植物乳杆菌，被命名为植物乳杆菌(lactobacillus plantarum)LP-1522。
实验1
将植物乳杆菌(lactobacillus plantarum)LP-1522制备克氏瓶种子，在500L的发酵罐中，配制MRS液体培养基300L，蒸汽灭菌、1.0kgf/cm2、30min，冷却至38℃分别接种植物乳杆菌(lactobacillus plantarum)LP-1522和植物乳杆菌(lactobacillus plantarum)1.557。控制环境温度为37±1.0℃，培养48h，然后离心、冷冻干燥测定菌体得率。
植物乳杆菌(lactobacillus plantarum)LP-1522干菌体的得率(干重)为0.34％。
实验2
植物乳杆菌(lactobacillus plantarum)LP-1522发酵液离心收集菌体，称取5g植物乳杆菌(lactobacillus plantarum)LP-1522加入100ml冷冻保护剂中，然后分装到10ml安瓶中，每瓶3～5ml，转入-80℃超低温冰箱中冷冻30min，取出转入40℃恒温水浴中溶解，反复冻融三次，取出安瓶以平板计数法测定活菌数量。
冷冻保护剂：浓度10％的脱脂乳。
植物乳杆菌(lactobacillus plantarum)LP-1522冷冻前有效活菌数为4.36×1011cfu/g，冷冻后有效活菌数为3.23×1011cfu/g。实验结果表明植物乳杆菌(lactobacillus plantarum)LP-1522可在冷冻保护剂的保护下耐受-80℃的低温，而且有效活菌数仍保持在较高水平，说明植物乳杆菌(lactobacillus plantarum)LP-1522具有优异的抗低温能力。
实验3
利用超速离心机对植物乳杆菌(lactobacillus plantarum)LP-1522发酵菌液10000r/min连续离心收集菌体，并向菌体中加入冷冻保护剂，振荡混匀后制成菌悬液。菌悬液分装到10ml安瓶中，每瓶3～5ml，置于4℃冰箱预冷30min后，转入-20℃预冻后再转入冻干机中，于-8℃冷冻干燥14h以上，检测水分＜2.5％结束，胶塞与铝盖封口后贮存备用。
冷冻保护剂：浓度10％的脱脂乳。
冷冻干燥后的植物乳杆菌(lactobacillus plantarum)LP-1522冻干粉安瓶放置于28℃进行保温储存试验。在贮存0d、30d、50d、66d、105d后，测定其有效活菌数，结果如表1所示。
表1
结果表明植物乳杆菌(lactobacillus plantarum)LP-1522制备的冻干粉制剂具有优异的耐贮存能力和超强的活性。
实验4
在MRS斜面上活化保存的植物乳杆菌(lactobacillus plantarum)LP-1522冻干粉，于营养琼脂斜面上分别活化大肠杆菌1.505、金黄色葡萄球菌2.5922及绿脓杆菌2.7583。将植物乳杆菌(lactobacillus plantarum)LP-1522转接至MRS液体培养基中，37℃静止培养24h。将活化的大肠杆菌1.505、金黄色葡萄球菌2.5922及绿脓杆菌2.7583接种于肉汤培养基培养24h。进行植物乳杆菌(lactobacillus plantarum)LP-1522的抑菌试验，分别将大肠杆菌1.505、金黄色葡萄球菌2.5922及绿脓杆菌2.7583均匀涂布于营养琼脂平板，在牛津杯中加入300微升植物乳杆菌(lactobacillus plantarum)LP-1522菌悬液，37℃培养18h后测量其抑菌圈直径。
表1植物乳杆菌LP-1522对不同菌株的抑制效果
观察其对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌及绿脓杆菌的抑菌效果，如表所示，植物乳杆菌(lactobacillus plantarum)LP-1522对于致病性病原菌均具有很好的抑制效果，其中对绿脓杆菌2.7583抑制效果最佳。

Claims (1)

1.一株适合制成冻干粉剂的植物乳杆菌，其为植物乳杆菌(lactobacillusplantarum)LP-1522，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.10516。
CN201510131364.8A 2015-03-25 2015-03-25 一株适合制成冻干粉剂的植物乳杆菌 Active CN104694441B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201510131364.8A CN104694441B (zh) 2015-03-25 2015-03-25 一株适合制成冻干粉剂的植物乳杆菌

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201510131364.8A CN104694441B (zh) 2015-03-25 2015-03-25 一株适合制成冻干粉剂的植物乳杆菌

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN104694441A CN104694441A (zh) 2015-06-10
CN104694441B true CN104694441B (zh) 2018-03-23

Family

ID=53342001

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201510131364.8A Active CN104694441B (zh) 2015-03-25 2015-03-25 一株适合制成冻干粉剂的植物乳杆菌

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN104694441B (zh)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110777095A (zh) * 2019-11-12 2020-02-11 黑龙江省科学院微生物研究所 一种适用于秸秆微贮的乳酸菌菌剂及其制备工艺
CN114350536B (zh) * 2021-10-20 2023-06-06 中粮营养健康研究院有限公司 植物乳杆菌、菌剂及其制备方法和它们的应用、发酵食品及其制备方法

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101548716A (zh) * 2009-04-17 2009-10-07 北京市农林科学院 一种猪源植物乳杆菌冻干制剂及其制备方法
CN102864096A (zh) * 2012-04-18 2013-01-09 北京和美科盛生物技术有限公司 一株植物乳杆菌及其高密度培养和冻干菌粉制备的方法

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101548716A (zh) * 2009-04-17 2009-10-07 北京市农林科学院 一种猪源植物乳杆菌冻干制剂及其制备方法
CN102864096A (zh) * 2012-04-18 2013-01-09 北京和美科盛生物技术有限公司 一株植物乳杆菌及其高密度培养和冻干菌粉制备的方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
植物乳杆菌增殖培养及其浓缩型冻干发酵剂的制备;吴满刚等;《食品与发酵工业》;20141231;第40卷(第1期);73-79 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN104694441A (zh) 2015-06-10

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN106011036B (zh) 一株具有益生作用的凝结芽孢杆菌hew-b379及其应用
CN101338283B (zh) 一种干酪乳杆菌及其在固态发酵中的应用
CN101333505B (zh) 一种干酪乳杆菌在抗氧化作用方面的应用
CN103981118B (zh) 一种枯草芽孢杆菌饲料添加剂及其制备方法和应用
CN109536415A (zh) 一种鼠李糖乳杆菌及其应用
CN113061543B (zh) 一种植物乳杆菌及其用途
CN104357353B (zh) 一株植物乳杆菌在发酵果蔬汁制作中的应用
CN104651268A (zh) 一种植物乳杆菌及其应用
CN102640885B (zh) 一株植物乳杆菌在全株小麦青贮中的应用
CN108707565B (zh) 一种两歧双歧杆菌及其应用
CN107267408A (zh) 一种唾液乳杆菌jm55及其应用
CN106754470A (zh) 一株人母乳来源的鼠李糖乳杆菌及其应用
CN103911327B (zh) 地衣芽孢杆菌益生菌制剂及制备
CN109439577A (zh) 一株广谱抗菌解淀粉芽孢杆菌及其应用
CN108611299A (zh) 一株产抑菌肽的植物乳杆菌及其应用
CN105400726A (zh) 一株抗胃肠道胁迫的人源性嗜酸乳杆菌及其应用
CN102283334A (zh) 可改善小型犬肠道微生态的复合益生菌微胶囊
CN110272846A (zh) 具有abts自由基和ptio自由基清除活性的植物乳杆菌及其应用
CN113040390B (zh) 一株益生、耐盐约氏乳杆菌及其在畜禽水产养殖中防治病原菌的应用
CN107177522A (zh) 一株高活性饲用植物乳杆菌及其培养方法和应用
CN106119152A (zh) 一种高产乳酸菌素的嗜酸乳杆菌及其应用
CN110777097A (zh) 一株强耐酸性乳酸杆菌菌株及其筛选、发酵工艺
CN110408577B (zh) 一株控制蔬菜细菌性软腐病的干酪乳杆菌及其应用
CN111909878A (zh) 一种具有清除展青霉素作用的干酪乳杆菌
CN113980853B (zh) 一株产乳酸的格氏乳球菌wbt0008及其应用

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
CB03 Change of inventor or designer information

Inventor after: Guo Lishu

Inventor after: Zhao Xiaolong

Inventor after: Geng Gui

Inventor after: He Xin

Inventor after: Xu Dandan

Inventor after: Li Minglu

Inventor after: Yuan Ming

Inventor after: Wu Lihua

Inventor after: Cao Yabin

Inventor after: An Qi

Inventor after: Yin Bo

Inventor after: Niu Yanbo

Inventor after: Wu Haoqiong

Inventor after: Yuan Tao

Inventor after: Fan Chuan

Inventor after: Wang Xiaoyong

Inventor before: Guo Lishu

Inventor before: Cao Yabin

Inventor before: An Qi

Inventor before: Yin Bo

Inventor before: Niu Yanbo

Inventor before: Wu Haoqiong

Inventor before: Fan Chuan

Inventor before: Wang Xiaoyong

CB03 Change of inventor or designer information
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant