CN109536415A - 一种鼠李糖乳杆菌及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种鼠李糖乳杆菌，命名为鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)HCS01‑003，该菌株已于2018年08月14日保藏在“中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心”，保藏号为CGMCC No.16257。本发明还公开了该菌株作为耐消化道逆环境能力强、抑菌特性好的添加剂鼠李糖乳杆菌冻干粉在制备食品、保健食品或药物组合物中的应用。进一步还公开了该菌株作为耐消化道逆环境能力强、抑菌特性好的的食品添加剂鼠李糖乳杆菌冻干粉在制备婴幼儿食品中的应用。

Description

一种鼠李糖乳杆菌及其应用
技术领域
本发明属于生物技术领域，特别涉及一株耐消化道逆环境能力强、具有较好的抑菌特性的鼠李糖乳杆菌及其应用。
背景技术
鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)为国家卫生部认证的可用于婴幼儿食品的益生菌，其从属于乳杆菌属，是人体正常菌群之一，肠道黏着率高，定植能力强。具有调节肠道菌群、预防和治疗腹泻、排除毒素、预防龋齿、提高机体免疫力及抗癌等重要的生理保健功能。
鼠李糖乳杆菌经培养、发酵，加工制成鼠李糖乳杆菌冻干粉，可应用在食品、饲料及药品等领域。鼠李糖乳杆菌的耐消化道逆环境能力、抑菌特性是保证其能够通过人体胃肠液并发挥益生功能的关键因素。如何获得耐消化道逆环境能力强、具有较好的抑菌特性的鼠李糖乳杆菌，成为目前益生菌产品生产者亟需解决的问题。
发明内容
针对现有技术所述的鼠李糖乳杆菌活菌数不高、耐消化道逆环境能力较差、抑菌功能较差的问题，本发明的目的是提供一株耐消化道逆环境能力强、具有较好的抑菌特性的鼠李糖乳杆菌，以及该菌株在制备食品、保健食品或药物组合物中的用途。
本发明所述的鼠李糖乳杆菌，其特征在于：所述菌株命名为鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)HCS01-003，该菌株已于2018年08月14日保藏在“中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心”，保藏号为CGMCC No.16257。
上述鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)HCS01-003分离自健康母乳中，是一株耐消化道逆环境能力强、具有较好的抑菌特性的鼠李糖乳杆菌，具有鼠李糖乳杆菌的典型特征，即：革兰氏阳性，兼性厌氧，无芽孢，不运动；菌落较小且大小均一，边缘整齐；细胞呈短杆状，成堆或成链排列；其理化特征是：接触酶阴性，氧化酶阴性，上述鼠李糖乳杆菌CGMCC No.16257的细胞形态和理化实验结果详见表1。
表1鼠李糖乳杆菌CGMCC No.16257的细胞形态和理化实验结果
上述鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)HCS01-003CGMCC No.16257生长温度为36～38℃，最适生长温度为37℃。
上述鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)HCS01-003CGMCC No.16257在MRS改良培养基中37℃静置培养17小时，pH值降至3.75，检测活菌数为2.45×109CFU/mL。
上述MRS改良培养基的配方：蛋白胨10g/L，牛肉粉3g/L，酵母粉4g/L，磷酸氢二钾2g/L，柠檬酸三铵2g/L，乙酸钠5g/L，葡萄糖20g/L，七水合硫酸镁0.58g/L，四水合硫酸锰0.15g/L，吐温-80 0.6g/L，碳酸钙10g/L，中性红0.05g/L，番茄汁10mL/L，琼脂粉18g/L，调pH至6.5；115℃，30min灭菌。
通过在美国生物工程信息中心(National Center for BiotechnologyInformation，NCBI) 查阅国际相关的基因库，将本发明的鼠李糖乳杆菌(Lactobacillusrhamnosus)HCS01-003 CGMCC No.16257 16S rDNA基因序列与有关菌株16S rDNA基因序列比较，虽有相似性，但却不完全相同，说明本发明的菌株是首次分离鉴定，具有原创性。
表2鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)HCS01-003CGMCC No.16257的16SrDNA 序列与GenBank提交菌株序列相似性比较
本发明所述的鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)HCS01-003CGMCCNo.16257 在制备成食品添加剂中的应用。
将上述鼠李糖乳杆菌制备成发酵用的菌种冻存管，冻存的菌种复苏后，经过液体培养基一级、二级、三级培养，以及菌种四级发酵得到鼠李糖乳杆菌的发酵液，检测其活菌数大于 109CFU/mL，发酵液经过离心，离心后的菌泥添加冻干保护剂，经过真空冷冻干燥制成鼠李糖乳杆菌冻干粉，检测其活菌数可达5.0×1011CFU/g以上，存活率为90％。
本发明公开了一种耐消化道逆环境能力强、具有较好的抑菌特性的的鼠李糖乳杆菌，使菌体在通过含有胃酸和胆盐的消化道后依然保持较高活性，为其发挥功能特性提供了基础条件。
上述鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)HCS01-003CGMCC No.16257具有以下优点：
1.本发明的鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)HCS01-003CGMCCNo.16257分离筛选自健康母乳中，确保其来源的安全性，而且更利于定植在婴幼儿的肠道中。母乳是婴儿成长最自然、最安全、最完整的天然食物，将筛选自健康母乳中的鼠李糖乳杆菌制成婴幼儿食品较其他来源的鼠李糖乳杆菌更具有安全意义。
2.本发明的鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)HCS01-003CGMCCNo.16257具有较强的耐酸、耐胆盐、耐胃液、耐肠液的能力，可通过胃肠道的逆环境有效定植于肠道内，发挥其功能特性。
3.益生菌对致病菌的抑制特性主要表现在抑制致病菌的生长，防止细菌性腹泻，发挥益生菌功能，提高宿主免疫力，维持肠道微生态平衡。本发明的鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)HCS01-003CGMCC No.16257具有较好的抑菌特性。对胃肠道和口腔中的主要致病菌有明显抑菌作用，并且对乳双歧杆菌无抑制作用。
4.本发明的鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)HCS01-003CGMCCNo.16257制成冻干粉后活菌数可达5千亿CFU/g以上，存活率高，定植能力强，可应用于食品、饲料、药品等领域。
本发明所述的耐消化道逆环境能力强、具有较好的抑菌特性的鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)HCS01-003，其已于2018年08月14日保藏在“中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心”(地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号)，保藏号为CGMCC No.16257。
具体实施方式
实施例1鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)HCS01-003CGMCC No.16257菌株的筛选及生理生化特性
取健康母乳10mL加到40mL缓冲蛋白胨液中，摇匀，在37℃下，静置培养48h；富集培养后，取样品未经稀释，直接划线于MRS改良培养基平板上。37℃培养48h(平板放入自封袋中)；挑取具有目的菌株典型特征(观察形态、大小、色泽、及其透明度等)、菌落较大、活性较强的单菌落，于MRS改良培养基进行划线纯化培养，如此反复2～3次，直到划线平皿中菌落特征一致；每个纯化后的平皿挑取2个以上单菌落进行涂片、革兰氏染色，并且在显微镜下观察其颜色、菌体形状是否一致，从而确定该平皿中菌落是否为纯培养物。如镜下观察结果一致，则将得到的纯培养物(平皿菌落)作为疑似菌株，将对应平皿编号，待鉴定；如镜下观察结果不一致，则继续进行上述操作。最终得到的纯培养物进行糖发酵鉴定，API鉴定，16sDNA全序列测序鉴定。最终筛选得到一株鼠李糖乳杆菌，命名为鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)HCS01-003，已于2018年08月14日保藏在“中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心”，保藏号为CGMCC No.16257；其序列如SEQ ID NO:1所示。
上述鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)HCS01-003菌株为革兰氏阳性菌，兼性厌氧，无芽孢，不运动；菌落较小且大小均一，边缘整齐，表面光滑细密，白色或乳白色；菌体呈短杆状，成堆或成链排列；其生理生化特征是：接触酶阴性，氧化酶阴性，可利用D-阿拉伯糖、D-核糖、D-半乳糖、D-葡萄糖、D-果糖、D-甘露糖、L-山梨糖、L-鼠李糖、卫茅醇、甘露醇、山梨醇、α-甲基-D-葡萄糖甙、N-乙酰-葡糖胺、苦杏仁甙、熊果甙、七叶灵、水杨苷、纤维二糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖、海藻糖、松三糖、D-松二糖、D-来苏糖、 D-塔格糖、L-岩藻糖，不能利用甘油、赤藓醇、L-阿拉伯糖、D-木糖、L-木糖、阿东醇、β -甲基-D-木糖甙、肌醇、α-甲基-D-甘露糖甙、蜜二糖、菊糖、棉子糖、淀粉、糖原、木糖醇、龙胆二糖、D-岩藻糖、D-阿拉伯糖醇、L-阿拉伯糖醇、葡萄糖酸盐、2-酮基-葡萄糖酸盐。
实施例2筛选的鼠李糖乳杆菌HCS01-003耐消化道逆环境实验
益生菌耐消化道的逆环境是其能够在肠道存活、生长并发挥功效的先决条件之一。
2.1耐酸试验
将传代三次的菌液按照10％的接种量分别接种于空白对照培养基、pH2.0和pH3.0的基础MRS培养基中。37℃静置培养，于17h取样，用灭菌的生理盐水进行10倍系列稀释，分别取适宜稀释度的菌液1000μL进行混菌计数操作，每个稀释度2次重复，37℃静置培养 48h后计数。
耐酸试验数据指标：
测得空白对照的活菌数用N0表示，其他pH条件下测得的活菌数用N表示，其耐酸性活菌数对数比率计算公式如下：
受试菌株耐酸性活菌对数比率(％)＝lg CFU N/lg CFU N0×100％；
表3 HCS01-003耐酸试验数据表
由表3可知，HCS01-003菌株在pH3.0的条件下经过17h后，与空白对照相比活菌数稍有下降，但活菌对数值仍可达8.2，活菌数可达1.6×108CFU/mL，活菌对数比率高达89.6％；在pH2.0条件下，活菌数低于空白对照，但活菌对数值仍可维持在6.38，活菌数可达2.4×106CFU/mL，活菌对数比率高达69.7％。
2.2耐胆盐试验
将传代三次的菌液按照10％的接种量分别接种于未含有牛胆盐(空白对照)、含有0.1％、0.2％和0.3％牛胆盐浓度的MRS液体培养基，37℃静置培养，于17h取样，测定活菌数。
耐胆盐试验数据指标：
测得空白对照的活菌数用N0表示，其他胆盐浓度条件下测得的活菌数用N表示，其耐胆盐活菌数对数比率计算公式如下：
受试菌株耐胆盐活菌对数比率(％)＝lg CFU N/lg CFU N0×100％；
表4 HCS01-003耐胆盐试验数据表
由表4可知，0.3％胆盐浓度处理条件下，活菌对数值为2.51，即该菌株在0.3％胆盐浓度的环境中能够存活，并生长良好。
2.3模拟胃液试验
将传代三次的菌液震荡摇匀，取菌悬液10mL离心(5000×g，10min，5℃)获得菌泥，用PBS缓冲液冲洗3次，获得的菌泥重悬于10mL模拟胃液中，37℃条件下消化3h，分别于0h，3h取样测活菌数。
活化三代后的受试菌株在第三代培养液中的活菌数用N′表示，经在模拟胃液培养基中消化3h后计数测得的活菌数用N″表示，受试菌株模拟胃液试验存活率计算公式如下：
受试菌株模拟胃液试验存活率(％)＝lg CFU N″/lg CFU N′×100％；
表5 HCS01-003模拟胃液试验数据表
由表5可知，HCS01-003菌株在模拟胃液中的存活能力较强，经3h处理，活菌对数值稍有下降，但仍可达到8.8，存活率高达95％。
2.4模拟肠液试验
将传代三次的菌液震荡摇匀，取菌悬液10mL离心(5000×g，10min，5℃)获得菌泥，用PBS缓冲液冲洗2次，获得的菌泥重悬于10mL的人工肠液中，37℃条件下培养，于 0h、2h、4h分别取样测活菌数。
活化三代后的受试菌株在第三代培养液中的活菌数用N′表示，经在模拟肠液培养液中培养2h、4h后计数测得的活菌数用N″表示，受试菌株模拟肠液试验存活率计算公式如下：
受试菌株模拟肠液试验存活率(％)＝lg CFU N″/lg CFU N′×100％；
表6 HCS01-003模拟肠液试验数据表
由表6可知，HCS01-003菌株在模拟肠液中的存活能力强，随处理时间延长，活菌数基本没有下降，4h活菌对数值为9.11，存活率为98.3％。
综上，说明该菌株具有较强的耐酸耐胆盐能力，且能够有效抵抗胃肠液的影响，从而能够在通过消化道后依然维持较高活性。
实施例3菌株抑菌功能特性实验
指示菌株准备：取致病菌冻存管在37℃水浴锅中使其迅速溶化，按1％的接种量接种于适宜的液体培养基中，大肠杆菌/金黄色葡萄球菌/鼠伤寒沙门氏菌/志贺氏菌/单增李斯特菌/ 37℃恒温过夜培养；白色念珠菌培养28℃恒温摇床摇48h，转速100rpm；牙龈卟啉单胞菌厌氧/乳双歧杆菌37℃恒温过夜培养；变异链球菌厌至氧30℃恒温过夜培养。
制备固体培养基，将培养至对数期的致病菌稀释至菌液浓度为105CFU/mL，取菌悬液 100μL均匀涂布于固体培养基上，用镊子将无菌牛津杯竖于涂布有指示菌的平皿中，每个牛津杯中加入200μL受试样品。将平皿置于适宜温度的恒温培养箱中，培养适当时间后观察拍照，并用游标卡尺计量抑菌圈直径。
实验结果见表7。表7中采用牛津杯法，牛津杯内直径6mm，外直径8mm；使用受试菌株发酵液上清，分别进行3倍、5倍浓缩以及直接取原上清进行试验。
表7抑菌谱记录表
通过试验结果可以得出，HCS01-003对胃肠道中主要致病菌有明显抑菌作用，且对口腔主要致病菌(变异链球菌)同样具有抑制作用；对包括革兰氏阳性细菌和革兰氏阴性细菌，均有较强的抑制作用，但是对于真菌(白色念珠菌)没有抑菌效果，对乳双歧杆菌无抑制作用。
实施例4鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)HCS01-003CGMCC No.16257制成食品添加剂鼠李糖乳杆菌冻干粉
包括如下步骤：
1)发酵用菌种的制备
1.1)划线培养：鼠李糖乳杆菌菌粉用无菌水稀释后，于MC培养基上四区划线，划线结束后，平皿倒置，37℃培养箱恒温培养60小时；
1.2)一级纯化培养：挑取平皿上溶钙圈较大的单菌落接种至装有5ml MRS液体培养基的试管中，试管密封，37℃培养箱恒温静置培养20小时；
1.3)二级纯化培养：按3％接种量，将培养好的一级菌悬液接种至装有100mlMRS液体培养基的250ml三角瓶中，三角瓶密封，37℃培养箱恒温静置培养20小时；
1.4)菌泥制备与保存：将二级纯化培养得到的100ml菌悬液进行离心，12000rpm离心 10分钟后得到菌泥，将菌泥溶解于10ml混合液中(混合液由6ml MRS液体培养基与4ml50％甘油溶液混合均匀配制而成)中，将菌泥混合液分装在已灭菌的1ml冻存管中，封口膜密封，冻存于-80℃低温冰箱内，备用；
注：1.1)—1.4)操作均必需在无菌操作台和无菌间内执行；
2、菌种发酵
2.1)冻存菌泥复苏：取存于低温冰箱内的鼠李糖乳杆菌菌泥冻存管，立即放入37℃水浴锅内进行菌种复苏，15～30s，至冻存管内液体全部融化；
2.2)菌种一级培养：将复苏好的菌种直接接种至装有10ml基础培养基的50ml三角瓶中，三角瓶密封，37℃培养箱恒温静置培养20小时；
2.3)菌种二级培养：按照3％接种量，将一级培养结束的菌悬液接种至装有100ml基础培养基的250ml三角瓶中，三角瓶密封，37℃培养箱恒温静置培养20小时；
2.4)菌种三级培养：按照3％接种量，将二级培养结束的菌悬液接种至装有18L基础培养基的30L发酵罐中，开启发酵罐搅拌桨，转速为100rpm，通气量为0，37℃恒温培养12-14小时；
2.5)菌种四级发酵：按照5％接种量，将三级培养结束的菌悬液接种至装有300L优化培养基的500L发酵罐中，开启发酵罐搅拌桨，转速为100rpm，通气量为0，37℃恒温培养，在发酵开始3小时后，通过流加食品级NaOH溶液来维持恒定pH为6.20±0.1，培养至 10小时开始，监测到菌液OD600值至下降或呈负增长，则停止发酵；
其中，基础培养基组成及制备：葡萄糖28.0g/L、酵母蛋白胨16.0g/L、酵母浸出物20.0g/L、乳糖10.0g/L、低聚异麦芽糖6.0g/L、柠檬酸4.0g/L、L-苹果酸4.0g/L、余量为无菌水，pH值7.00；按照配方比例称量、加热溶解，用1mol/L食品级NaOH溶液调培养基pH值至7.00，115℃下灭菌30min；
优化培养基配方：酵母蛋白胨16.0g/L、葡萄糖32.0g/L、酵母浸出物28.0g/L、乳糖10.0g/L、低聚异麦芽糖6.0g/L、柠檬酸4.0g/L、L-苹果酸4.0g/L、氯化钙0.5g/L、余量为无菌水，pH值6.20；按照配方比例称量、加热溶解，用1mol/L食品级NaOH溶液调培养基pH值至6.20，115℃下灭菌30min；
注：2.1)—2.5)操作均需在10万级净化车间内进行。
3、冻干粉的制备
3.1)发酵液离心：四级发酵结束后，将发酵罐罐体温度调低，当罐内发酵液温度低于 20℃时准备离心，离心设备采用管式离心机，离心前对转鼓进行蒸汽灭菌30min，转速为12000rpm，离心结束后，收集到转鼓内的菌泥5.55L，菌泥收率为1.85％；
3.2)配制6L冻干保护剂：称取脱脂奶粉492.0g，完全溶解于2880L无菌水中，115℃灭菌30min；称取海藻糖570.0g、山梨糖醇72.0g、谷氨酸钠36.0g、乳糖21.0g、抗坏血酸钠9.0g，混合后完全溶解于1920L无菌水中，115℃灭菌30min；分别灭菌结束放置至室温后，在无菌间内将两溶液混合均匀，然后用1mol/L食品级NaOH溶液调pH值至7.00，将制得的冻干保护剂冷藏于-4℃冰箱内备用；
3.3)冷冻干燥：菌泥收集完毕后，按照菌泥：冻干保护剂＝1:2的体积比，添加冻干保护剂，并搅拌、混合均匀，分装到冻干机托盘，然后将冻干机托盘放入冻干机内进行菌粉的冻干，冷冻干燥机温度设置见表8，真空度0～1.0Pa，持续冻干54.5小时；
表8冷冻干燥机温度设置表
区段 1 2 3 4 5 6
运行时间/h 2 7 12 18 12 3.5
结束温度/℃ -40 -20 -10 10 20 30
3.4)收集冻干粉，检测活菌数为5.8×1011CFU/g；
3.5)按质量要求进行粉碎后包装。
注：3.1)—3.5)操作均需在10万级净化车间内进行。
实施例5鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)HCS01-003CGMCC No.16257调节肠道菌群功效实验
实验动物：4～5周龄清洁级昆明小鼠，18～22g，雄性，共24只。
实验内容：小鼠平衡饲养后，按体重随机对小鼠进行分组并给样。共分三组，每组8只小鼠，试验设置2个受试物剂量组和一个溶剂对照组。受试物剂量组为1g/kg、2g/kg，每天灌胃一次，灌胃体积为20ml/kg，共给予14天。
给予受试样品之前，无菌采取各组小鼠粪便0.1g，10倍系列稀释，选择合适稀释度分别接种不同培养基上。培养后，以菌落形态、革兰氏染色镜检、生化反应等鉴定、计数菌落(乳杆菌、肠杆菌、肠球菌)，计算出每克湿便中的菌数。最后一次给样后24h，与试验前同样方式取粪便，检测菌群。根据试验前后菌群变化情况反应受试物调节肠道菌群功效。
表9鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)HCS01-003调节肠道菌群功效试验结果
由表9可知，受试物在1g/kg、2g/kg剂量下给予14天，肠杆菌数量下降明显，分别为给样前的5％、9％；乳杆菌数量增长明显，分别达到给样前的191％、209％；肠球菌数量亦见增长(107％、165％)，但其增长幅度低于乳杆菌的增长幅度。此结果表明，在本方案下，鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)HCS01-003有一定的调节肠道菌群的功效。
<110> 汉臣氏（沈阳）儿童制品有限公司
<120>一种鼠李糖乳杆菌及其应用
<160> 1
<170> PatentIn Version 2.1
<210> 1
<211> 1432
<212> DNA
<213>鼠李糖乳杆菌（Lactobacillus rhamnosus）HCS01-003
<400> 1
1 ATACTGCAGT CGAACGAGTT CTGATTATTG AAAGGTGCTT GCATCTTGAT TTAATTTTGA
61 ACGAGTGGCG GACGGGTGAG TAACACGTGG GTAACCTGCC CTTAAGTGGG GGATAACATT
121 TGGAAACAGA TGCTAATACC GCATAAATCC AAGAACCGCA TGGTTCTTGG CTGAAAGATG
181 GCGTAAGCTA TCGCTTTTGG ATGGACCCGC GGCGTATTAG CTAGTTGGTG AGGTAACGGC
241 TCACCAAGGC AATGATACGT AGCCGAACTG AGAGGTTGAT CGGCCACATT GGGACTGAGA
301 CACGGCCCAA ACTCCTACGG GAGGCAGCAG TAGGGAATCT TCCACAATGG ACGCAAGTCT
361 GATGGAGCAA CGCCGCGTGA GTGAAGAAGG CTTTCGGGTC GTAAAACTCT GTTGTTGGAG
421 AAGAATGGTC GGCAGAGTAA CTGTTGTCGG CGTGACGGTA TCCAACCAGA AAGCCACGGC
481 TAACTACGTG CCAGCAGCCG CGGTAATACG TAGGTGGCAA GCGTTATCCG GATTTATTGG
541 GCGTAAAGCG AGCGCAGGCG GTTTTTTAAG TCTGATGTGA AAGCCCTCGG CTTAACCGAG
601 GAAGTGCATC GGAAACTGGG AAACTTGAGT GCAGAAGAGG ACAGTGGAAC TCCATGTGTA
661 GCGGTGAAAT GCGTAGATAT ATGGAAGAAC ACCAGTGGCG AAGGCGGCTG TCTGGTCTGT
721 AACTGACGCT GAGGCTCGAA AGCATGGGTA GCGAACAGGA TTAGATACCC TGGTAGTCCA
781 TGCCGTAAAC GATGAATGCT AGGTGTTGGA GGGTTTCCGC CCTTCAGTGC CGCAGCTAAC
841 GCATTAAGCA TTCCGCCTGG GGAGTACGAC CGCAAGGTTG AAACTCAAAG GAATTGACGG
901 GGGCCCGCAC AAGCGGTGGA GCATGTGGTT TAATTCGAAG CAACGCGAAG AACCTTACCA
961 GGTCTTGACA TCTTTTGATC ACCTGAGAGA TCAGGTTTCC CCTTCGGGGG CAAAATGACA
1021 GGTGGTGCAT GGTTGTCGTC AGCTCGTGTC GTGAGATGTT GGGTTAAGTC CCGCAACGAG
1081 CGCAACCCTT ATGACTAGTT GCCAGCATTT AGTTGGGCAC TCTAGTAAGA CTGCCGGTGA
1141 CAAACCGGAG GAAGGTGGGG ATGACGTCAA ATCATCATGC CCCTTATGAC CTGGGCTACA
1201 CACGTGCTAC AATGGATGGT ACAACGAGTT GCGAGACCGC GAGGTCAAGC TAATCTCTTA
1261 AAGCCATTCT CAGTTCGGAC TGTAGGCTGC AACTCGCCTA CACGAAGTCG GAATCGCTAG
1321 TAATCGCGGA TCAGCACGCC GCGGTGAATA CGTTCCCGGG CCTTGTACAC ACCGCCCGTC
1381 ACACCATGAG AGTTTGTAAC ACCCGAAGCC GGTGGCGTAA CCCTTTTAGG GA

Claims (5)

1.一种鼠李糖乳杆菌，其特征在于，所述鼠李糖乳杆菌命名为菌株鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)HCS01-003，该菌株已于2018年08月14日保藏在“中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心”，保藏号为CGMCC No.16257。
2.如权利要求1所述的鼠李糖乳杆菌在制备耐消化道逆环境能力强、抑菌特性好的添加剂鼠李糖乳杆菌冻干粉中的应用。
3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的鼠李糖乳杆菌冻干粉作为添加剂用于制备食品、保健食品或药物。
4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述的食品为婴幼儿食品。
5.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述鼠李糖乳杆菌(Lactobacillusrhamnosus)HCS01-003经菌种复苏、三级培养、四级发酵、离心及真空冷冻干燥，最终获得活菌数为5.8×1011CFU/g的耐消化道逆环境能力强、具有抑菌效果的食品添加剂鼠李糖乳杆菌冻干粉。
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