CN111909878A - 一种具有清除展青霉素作用的干酪乳杆菌 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种具有清除展青霉素作用的干酪乳杆菌，该菌株已于2020年6月19日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC M 2020222。将干酪乳杆菌活化培养后离心获得菌体，离心后的菌体经洗涤、离心得到干酪乳杆菌生物制剂。将菌体再用保护剂重悬达到浓度1010CUF/mL，然后将悬浮液培养后冷冻干燥得到干酪乳杆菌菌粉生物制剂。本发明所提供的干酪乳杆菌（Lactobacillus casei YZU01）具有耐酸性，能够快速脱除水溶液中的展青霉素，同时干酪乳杆菌L.casei YZU01可显著降低苹果汁和梨汁中的展青霉素，用于去除食品的展青霉素，具有非常广泛的应用前景。
Description
技术领域
本发明涉及一种具有清除展青霉素作用的干酪乳杆菌，属于微生物技术领域。
背景技术
展青霉素又称为棒曲霉素，是由曲霉属、青霉属、丝衣霉属等属内多种真菌代谢产生的次级代谢产物，它对人及动物具有广泛而强烈的毒性作用。展青霉素的急性中毒症状包括肌肉战栗、痉挛、对刺激敏感、肠胃溃疡等。慢性症状为神经毒性、免疫毒性等，人体若长期摄入也会具有致癌性。
展青霉素污染广泛存在于水果及其制品之中，是世界范围内水果贮藏需要面对的一个问题。展青霉素的污染贯穿与水果生产的各个阶段，许多水果贮藏时都需要注意展青霉素污染的问题，这一问题在苹果贮藏上尤为严重。为避免展青霉素毒素中毒，许多的相关机构对食品中的展青霉素限量出台了相关标准。世界卫生组织推荐的苹果汁中的展青霉素最高限量为50 μg/kg。而根据我国相关标准规定，苹果、山楂半成品中的展青霉素最大限量为100 μg/kg，果汁、果酱、果酒、果脯和罐头的限量标准为50 μg/kg。在水果贮藏上，是苹果及其制品的贮藏，展青霉素的污染是必须要解决的问题。
目前主要通过吸附、微波处理等物理手段或添加添加剂臭氧处理等化学手段进行去除展青霉素，但效果都不是很理想，在生产实践中难以应用。鉴于传统的方法存在诸多问题，亟需研发新型的展青霉素去除手段。目前通过微生物清除展青霉素的效果普遍不高，且局限清除水溶液或培养基中的展青霉素，很少应用到食品果汁中。本发明旨在筛选出能高效清除展青霉素的微生物并将其应用于清除食品果汁中的展青霉素。
发明内容
本发明的目的就是针对上述存在的问题，提供一种具有清除展青霉素作用的干酪乳杆菌。
本发明的目的是这样实现的，一种具有清除展青霉素作用的干酪乳杆菌（Lactobacillus casei YZU01），该菌株已于2020年6 月 19 日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC M 2020222。
一种应用权利要求1所述干酪乳杆菌制备用于清除展青霉素的生物制剂的方法，其特征在于，将干酪乳杆菌活化培养后离心获得菌体，离心后的菌体经洗涤、离心得到干酪乳杆菌生物制剂。
将菌体再用保护剂重悬达到浓度1010CUF/mL，然后将悬浮液培养后冷冻干燥得到干酪乳杆菌菌粉生物制剂。
所述的保护剂为海藻糖、L-半胱氨酸、山梨醇、乙酸钠或脱脂奶粉。
一种含有权利要求1所述干酪乳杆菌的生物制剂。所述生物制剂的应用。
所述干酪乳杆菌在去除未加工苹果汁和商业化的苹果汁中的展青霉素的应用。
所述干酪乳杆菌在去除未加工梨汁和商业化的梨汁中的展青霉素的应用。
通过本发明，要解决的第一个技术问题是提供一种干酪乳杆菌（Lactobacillus casei），该菌株已于2020年6 月 19 日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCCM 2020222。
所述干酪乳杆菌（Lactobacillus casei YZU01）具有以下特性：
（1）菌落特征：在MRS培养基上生长良好，菌落大小均匀，表面凸起，颜色为微白色，表面湿润，边缘整齐，菌落呈圆形，符合乳杆菌属菌落形态特征。菌为革兰氏阳性菌，且细菌形态为杆状，无鞭毛。
（2）生长特性：该菌株以37℃的生长温度为佳，最适生长pH为5.0。如图1、图2。
（3）在含10.9 μg/mL展青霉素的培养基中，能够对展青霉素的清除率达95%以上。
（4）在含10.9μg/ mL展青霉素的未加工苹果汁和未加工梨汁中，36 h能够完全降解展青霉素。
（5）在含10.9μg/ mL展青霉素的商业化的苹果汁和商业梨汁中，48 h能够完全降解展青霉素。
在本发明中，所述干酪乳杆菌具有以下用途：（1）可直接用L. casei YZU01制成的菌剂清除苹果汁原料及梨汁原料中展青霉素；（2）可直接用L. casei YZU01制成的菌剂清除商业化苹果汁和商业化梨汁中的展青霉素。
本发明的干酪乳杆菌具有耐酸性，对展青霉素有良好的耐受能力。并且对展青霉素有较强的清除作用，能够显著降低培养基、苹果汁及梨汁中展青霉素的含量。所述的干酪乳杆菌用于去除食品中的展青霉素，具有非常广泛的应用前景。
综上，本发明所提供的干酪乳杆菌（Lactobacillus casei YZU01）具有耐酸性，能够快速脱除水溶液中的展青霉素，同时干酪乳杆菌L. casei YZU01可显著降低苹果汁和梨汁中的展青霉素，用于去除食品的展青霉素，具有非常广泛的应用前景。
附图说明
图1为不同pH对干酪乳杆菌YZU01降解展青霉素的清除效率图。
图2为不同温度对干酪乳杆菌YZU01降解展青霉素的清除效率图。
图3为不同时间干酪乳杆菌YZU01对展青霉素的清除效率图。
图4为添加L. casei YZU01后未加工苹果汁及相应商业化产品中展青霉素含量的变化图。
图5为添加L. casei YZU01后未加工梨汁及相应商业化产品中展青霉素含量的变化图。
具体实施方式
下述实施例中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法；所述试剂和生物材料如无特殊说明，均可从商业途径获得。
实施例1：不同pH对干酪乳杆菌CCTCC M 2020222降解展青霉素的清除效率图的绘制。
100μL活化的L. casei YZU01菌株接种于5 mL含有10.9μg/ mL展青霉素的新鲜MRS液体培养基（pH值为2、3、4、5、6和7）。仅含有10.9μg/ mL展青霉素的培养基用作对照。将各组样品于37°C培养箱中培养，持续24小时后取样。样品经0.22 μm滤膜过滤后，利用高效液相色谱测定展青霉素含量。每个处理设置3个重复，实验重复2次。
实施例2：不同温度对干酪乳杆菌CCTCC M 2020222降解展青霉素的清除效率图的绘制。
100μL活化的L. casei YZU01菌株接种于5 mL含有10.9μg/ mL展青霉素的新鲜MRS液体培养基。仅含有10.9μg/ mL展青霉素的培养基用作对照。将各组分别于15°C，20°C，25°C，30°C，37°C和45°C培养箱中培养，持续24小时后取样。样品经0.22 μm滤膜过滤后，利用高效液相色谱测定展青霉素含量。每个处理设置3个重复，实验重复2次。
实施例3：为不同时间干酪乳杆菌YZU01对展青霉素的清除效果。
将活化好的L. casei YZU01菌株以2%接种量分别接种至新鲜培养基中，添加展青霉素标准品至终浓度为10.9 μg/mL，放入37℃培养箱中培养。在0 h、9 h、18 h、27 h时取样，样品经0.22 μm滤膜过滤后，利用高效液相色谱测定展青霉素含量。每个处理设置3个重复，实验重复2次。
实施例4：测定干酪乳杆菌L. casei YZU01清除苹果汁中展青霉素的效果。
将100μL的L. casei YZU01（107CFU / mL）接种到5 mL新鲜MRS液体培养基中，并在37°C下培养48小时。收集超过5mL的L. casei YZU01，并以10,000 rpm离心10分钟。将细胞沉淀用生理盐水（0.9％NaCl）洗涤3次，并重新置于1mL生理盐水中。在使用前，将未加工的苹果汁和商业化的苹果汁在锥形瓶中于121°C高压灭菌15分钟。每个样品分为两组（未加工的苹果汁和商品苹果汁），第1组：5 mL苹果汁+展青霉素（10.9μg/ mL）；第2组：5 mL苹果汁+展青霉素（10.9μg/ mL）+L. casei YZU01。将样品在37℃下培养。培养后0、12、24、36和48小时检测展青霉素含量。对一种处理进行三份重复。实验进行了两次。
实施例5：测定干酪乳杆菌L. casei YZU01清除梨汁中展青霉素的效果。
将100μL的L. casei YZU01（107CFU / mL）接种到5 mL新鲜MRS液体培养基中，并在37°C下培养48小时。收集超过5mL的L. casei YZU01，并以10,000 rpm离心10分钟。将细胞沉淀用生理盐水（0.9％NaCl）洗涤3次，并重新置于1mL生理盐水中。在使用前，将未加工的梨汁和商业化的梨汁在锥形瓶中于121°C高压灭菌15分钟。每个样品分为两组（未加工的梨汁和商品梨汁），第1组：5 mL梨汁+展青霉素（10.9μg/ mL）；第2组：5 mL梨汁+展青霉素（10.9μg/ mL）+L. casei YZU01。将样品在37℃下培养。培养后0、12、24、36和48小时检测展青霉素含量。对一种处理进行三份重复。实验进行了两次。
虽然本发明已以较佳实施例公开如上，但其并非用以限定本发明，任何熟悉此技术的人，在不脱离本发明的精神和范围内，都可做各种的改动与修饰，因此本发明的保护范围应该以权利要求书所界定的为准。
Claims (8)
1. 一种具有清除展青霉素作用的干酪乳杆菌（Lactobacillus casei YZU01），该菌株已于2020年6 月 19 日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC M 2020222。
2.一种应用权利要求1所述干酪乳杆菌制备用于清除展青霉素的生物制剂的方法，其特征在于，将干酪乳杆菌活化培养后离心获得菌体，离心后的菌体经洗涤、离心得到干酪乳杆菌生物制剂。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，将菌体再用保护剂重悬达到浓度1010CUF/mL，然后将悬浮液培养后冷冻干燥得到干酪乳杆菌菌粉生物制剂。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述的保护剂为海藻糖、L-半胱氨酸、山梨醇、乙酸钠或脱脂奶粉。
5.一种含有权利要求1所述干酪乳杆菌的生物制剂。
6.权利要求5所述生物制剂的应用。
7.权利要求1所述干酪乳杆菌在去除未加工苹果汁和商业化的苹果汁中的展青霉素的应用。
8.权利要求1所述干酪乳杆菌在去除未加工梨汁和商业化的梨汁中的展青霉素的应用。
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2020
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